Současný stav stanovení vitaminu D v séru
J. Vávrová, B. Friedecký, J. Maláková Ústav klinické biochemie a diagnostiky Fakultní nemocnice Hradec Králové
FONS 2012 Pardubice
Vysoká poptávka po stanovení vitaminu D ►
Zvýšená nabídka nových diagnostik ze strany výrobců
►
Dominují imunoanalytické metody imunochemické analyzátory technicky snadno zvládnutelné v rutinních podmínkách imunochemiluminiscence / imunoelektroluminiscence
►
systémy měření
DiaSorin Siemens Roche Abbott …
Preanalytika ► Lewis
(CC 54, 2008, 1931)
11-násobné zmražení – žádný vliv Wielders (CC 55, 2009, 1584)
„solid as a rock“
Předmět měření Posouzení nutričního stavu ► 25-OH vitamín D (celkový) ► 25-OH D3 (cholekalciferol) ► 25-OH D2 (ergokalciferol) Posouzení hydroxylace v ledvinách ► 1,25-(OH)2 vitamín D (kalcitriol) Jednotky: nmol/l, ng/ml (µg/l) Přepočet výsledků na jednotky SI: ► ng/ml × 2,5 = nmol/l
Referenční metody ► ►
Princip: ID-LC-MS/MS Publikace: www.bimp.org/jctlm Potlačena interference 3-epi-25-OH D3
NIST SRM 972
Metoda 1 (Ghent)
Metoda 2 (NIST)
2–3
1-2
Uc
3,4 – 3,9
-
b%
1,1 – 1,3
-
-
99 – 101
CV%
recovery %
Vitamin D a publikace ►
databáze Pubmed heslo „vitamin D“
56 436
►
“analytical performance“
147
►
“reagent kits“
21
Práce, věnované analytickým problémům tvoří jen nepatrný zlomek z celkového vysokého počtu publikovaných
k 12.9.2012
NIST SRM 972 ► ►
certifikovaný referenční materiál možnost standardizace, pravdivosti a srovnatelnosti mezi metodami
Parametry požadované analytické kvality ► Stöckl
(2009)
preciznost CV% ≤ 10 systematická chyba b% ≤ 5 ► Viljoen
(2011)
zohledněny hodnoty biologických variací CV% ≤ 5 bias b%≤10 Stöckl D, Sluss PM, Thienpont LM. Specification for trueness and precision of a reference measurement system for serum/plasma 25-hydroxyvitamin D assays. Clin Chim Acta 2009, 408:8-3. Viljoen A, Singh DK, Farrington K, Twoney PJ. Anylytical quality goals for 25-vitamin D based on biological variation. J Clin Lab Anal 2011, 25:130-133.
Klinická interpretace ► referenční
intervaly a rozhodovací limity ► Všichni
► Deficit ► Nedostatek ► Dostatek
výrobci se shodují (zdroj DiaSorin RIA)
< 25 nmol/l 25 - 75 nmol/l 75 -250 nmol/l Odhaduje se, že cca 50 % populace může mít deficit nebo nedostatek vitaminu D
Kriteria NHANES ►
25-hydroxyvitamin D (nmol/l)
Stav
25-hydroxyvitamin D (nmol/l)
nedostatek
< 30
neadekvátní
30 - 50
dostačující
50 - 125
riziko hypervitaminosy
> 125
NHANES-National Healthy and Nutrition Examination Surveys
Looker A, Johnson MPA, Lacher DA et al. Vitamin D Status: United States, 2001-2006. Clinical Laboratory News, May 2011
25-OH vitamin D: komplikovaný analyt ►
Hydrofobní povaha
►
Koexistence několika odlišných forem
►
Role vit. D vazebného proteinu VDBP slabší vazba k 25OHD2 než k 25OHD3
►
Clinical Chemistry, Březen 2012 Dva podrobné články o imunoanalytickém měření vitaminu D
►
170 vybraných pacientů
2 metody LC-MS/MS RIA (DiaSorin) Abbott (Architect) DiaSorin (Liaison) IDS (iSYS) Roche (Elecsys) Siemens (Centaur)
►
Imunoanalýza stanovení 25OH D závisí na metodě neřeší 3-epi-25OH D3 crossreaktivita
Kolem 20 nmol/l nastává problém
Srovnání imunochemických metod a LC-MS/MS
► ► ► ► ► ► ►
Abbott (Architect) DiaSorin (Liaison) IDS (iSYS) Roche (Elecsys) Siemens (Centaur) RIA (DiaSorin) ID-XLC-MS/MS
51 ► 52 ► 50 ► 50 ►
►
zdravých těhotných hemodialyzovaných v intenzívní péči
Sledován také VDBP (ELISA)
► ►
►
Signifikantní rozdíly ve skupinách pacientů Signifikantní rozdíly k ID-XLC-MS/MS
VDBP vzhledem ke zdravým > u těhotných < v intenzívní péči
Heijboer A.C. et al. Accuracy of 6 Routine 25-Hydroxyvitamin D Assays Influence of Vitamin D Binding Protein Concentration. Clin Chem 2012; 58:543-548.
Srovnatelnost a interpretace výsledků ► Jsou
výsledky Roche, DiaSorin a Abbott
zaměnitelné a dostatečně klinicky srovnatelné?
příklad z praxe
Deficit vitaminu ►
výrobci deklarují měření analytu celkový (total) 25-hydroxy vitamin D Výsledky <30 nmol/l (%) (n=134)
Abbott
21
DiaSorin
16
Roche
34
> 125 nmol/l Dospělí (n=75) 18 – 70 let
Dlouhověcí (n=59) 80 – 91 let
Abbott
0
2
DiaSorin
1
2
Roche
0
4
►
cut off rizika předávkování - výrobci
250 nmol/l ►
IOM (americký Institute of Medicine) hranice možného rizika
125 nmol/l
DEQAS
Charakteristika ► Čtvrtletně
5 vzorků nativních sér (komutabilní) Elektronická komunikace (web) ► akreditováno
u CAP ► 48 zemí v r. 2012 ČR: 4 v lednu 2012, 0 v lednu 2010 1315 registrovaných účastníků
Vývoj metodologie v čase HPLC
RIA automatizace LC-MS/MS změna Roche
Imunoanalýza změna Roche 1/10 1/12
Počet účastníků DEQAS leden 2006- leden 2012 ►
6x vzestup počtu účastníků Koresponduje se zvýšeným zájmem o vyšetření
►
Účastníci využívají plný počet nabízených cyklů
DEQAS review 2012
Vývoj reprodukovatelnosti v čase (1995 – 2011)
Dvojnásobné zlepšení reprodukovatelnosti (z 30 na 15 %) ► Od r. 2009 je vidět pozitivní vliv SRM 972 (používán od 2008) ►
Před 2009 vliv vylepšení technologií
DEQAS review 2012
Vlastní příklad účasti DEQAS
Vzorek byl vyřazen Vysoká koncentrace
Stále nedořešeno mezilaboratorní porovnání : <20 nmol/l, > 125 nmol/l
Bias proti průměru všech účastníků v průběhu jednoho roku
3-epi D3, 25OHD2 Nedůsledná standardizace kalibrace
DEQAS review 2012
DEQAS July 2012
-
25OHD Method Means (+/- 1SD) for Major Method Groups
100.0
25-Hydroxyvitamin D
nmol/L
120.0
80.0
60.0
40.0
20.0
0.0
Sample 416
Sample 417
Sample 418 (excluded)
Sample 419
Sample 420
Abbott Architect (n=61)
47.9
43.4
27.4
15.9
75.7
DiaSorin Liaison (n=351)
45.5
43.4
25.3
13.0
67.4
DiaSorin RIA (n=23)
53.3
47.7
31.9
14.9
75.2
IDS auto EIA (n=83)
52.2
48.9
33.7
18.7
78.3
IDS EIA (n=103)
50.8
48.1
32.8
17.6
75.4
IDS iSYS (n=143)
56.5
52.2
43.6
14.5
82.1
IDS RIA (n=9)
58.7
52.0
31.8
20.3
81.0
Roche Total (n=94)
68.2
48.2
26.2
13.9
86.5
Siemens (n=56)
37.0
37.1
32.6
16.6
67.2
HPLC (n=31)
58.6
54.5
34.1
14.8
84.8
LC-MS/MS (n=131)
57.1
52.1
32.1
12.4
82.2
ALTM (n=1099)
51.7
47.1
30.1
14.6
75.6
Celkem = 1099, LC-MS/MS = 131
(12 %),
LC = 31
(3 %)
DiaSorin = 351
(32 %)
DEQAS review 2012
CV% SEKK (BM)
EHK 2012
účastníků
20
RfB (VT)
17,2
DEQAS (duben/2012)
13,6
Roche
DiaSorin
HPLC
LC-MS/MS
SEKK (BM)
36
6
<5
0
RfB (VT)
46
48
10
0
4/12
67
279
15
85
7/12
94
351
31
131
DEQAS
LC- MS/MS
Závěr ► preanalytické
problémy
nejsou závažné ► analytika
LC-MS/MS+ SRM 972 + IS ► postanalytika
vědět, co vlastně měříme poskytnout informace (ne jen data) ► standardizace
začíná být cílená ► problém eliminace matrix efektů (např. VDBP) bude vyžadovat stálou pozornost a vytrvalý dialog s výrobci
