Lampiran 1.Flowsheet Pembuatan Media Lactose Broth Double Ditimbang seksama media Lactose Broth Double sebanyak 52 gr. Dimasukkan ke dalam beaker gelas. Dilarutkan dalam 1 liter aquadest. Dimasukkan magnetic stirrer. Dipanaskan di atas hot plate sampai larut. Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham masing-masing 5 mL dalam 5 tabung. Disterilkan di dalam oven dengan tekanan atm pada suhu 121oC selama 15 menit. Setelah dingin disimpan di tempat yang bersih dan kering. Hasil
24
Universitas Sumatera Utara
Pembuatan Media Lactose Broth Single Ditimbang seksama media Lactose Broth Single sebanyak 13 gr. Dimasukkan ke dalam beaker gelas. Dilarutkan dalam 1 liter aquadest. Dimasukkan magnetic stirrer. Dipanaskan di atas hot plate sampai larut. Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham masing-masing 10 mL dalam 10 tabung. Disterilkan di dalam oven dengan tekanan atm pada suhu 121oC selama 15 menit. Setelah dingin disimpan di tempat yang bersih dan kering. Hasil
25
Universitas Sumatera Utara
Pembuatan Media Brilliant Green Lactose Broth Ditimbang seksama media
Brilliant Green Lactose Broth
sebanyak 40 gr. Dimasukkan ke dalam beaker gelas. Dilarutkan dalam 1 liter aquadest. Dimasukkan magnetic stirrer. Dipanaskan di atas hot plate sampai larut. Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham masing-masing 10 mL. Disterilkan di dalam oven dengan tekanan atm pada suhu 121oC selama 15 menit. Setelah dingin disimpan di tempat yang bersih dan kering. Hasil
26
Universitas Sumatera Utara
Uji Penduga (Presumtif Test) Pada tes penduga digunakan media Lactose Broth. Tes penduga dilakukan dengan 2 cara, yaitu single dan double. Single: 13 gr Lactose Broth dalam 1 liter aquadest. Caranya: Siapkan 10 buah tabung reaksi yang telah diisi dengan tabung durham dengan posisi terbalik. 10 tabung diisi dengan masing-masing 10 mL media. Double: 52 gr Lactose Broth dalam 1 liter aquadest. Caranya: Siapkan 5 buah tabung reaksi yang telah
diisi dengan
tabung durham dengan posisi terbalik. 5 tabung diisi dengan masing-masing 10 mL media. Hasil
27
Universitas Sumatera Utara
Sampel Masukkan sampel yang sudah dihomogenkan secara aseptik ke dalam masing-masing tabung media Lactose Broth, lalu goyang rak tabung supaya sampel air dan media bercampur rata. Inkubasikan pada inkubator pada suhu 35oC selama 24 jam, jika positif akan terbentuk gas atau asam. Inkubasikan dilanjutkan sampai 48 jam bila tidak ada reaksi gas atau asam. Bila tetap tidak terbentuk gas dalam waktu 48 jam, maka uji penduga dinyatakan negatif. Tabung-tabung yang positif dilanjutkan ke uji penegasan. Hasil
28
Universitas Sumatera Utara
Uji Penegasan (Confirmed Test) Setiap tabung yang positif pada uji penduga dikocok agar merata. Kemudian dipindahkan dengan jarum ose ke dalam media Brilliant Green Lactose Broth (BGLB). Inkubasi pada inkubator pada suhu 35oC selama 24 jam. Reaksi dinyatakan positif bila terbentuk gas atau asam dalam tabung. Inkubasi dilanjutkan sampai 48 jam bila tidak ada reaksi gas. Bila tetap tidak terbentuk gas dalam waktu 48 jam, maka uji penegasan dinyatakan negatif. Hitung MPN total koliform dengan menggunakan tabel MPN dari jumlah tabung Brilliant Green Lactose Broth (BGLB) yang positif. Hasil
29
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Tabel nilai MPN Nilai jumlah perkiraan terdekat (MPN) koliform untuk kombinasi bila digunakan 5 buah tabung dari 10 mL, 5 buah tabung dari 1 mL, dan 5 buah tabung dari 0,1 mL dengan 95% batas kepercayaan. Jumlah tabung yang positif 5 tabung 5 tabung 5 tabung 10 mL 1 mL 0,1 mL
MPN / 100 mL
95%Batas kepercayaan Lebih rendah Lebih tinggi
0 0 0 0 1 1
0 0 1 2 0 0
0 1 0 0 0 1
<1,8 2 2 4 2 4
0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
6,8 7 7 11 7 11
1 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 5 5
1 1 2 0 0 1 1 2 3 0 0 1 1 2 2 3 0 0 1 1 1 2 2 3 3 4 0 0
0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 1 0 0 1 0 1 2 0 1 0 1 0 0 1
4 6 6 5 7 7 9 9 12 8 11 11 14 14 17 17 13 17 17 21 26 22 26 27 33 34 23 31
0,5 0,5 0,5 0,5 1 1 2 2 3 1 2 2 4 4 5 5 3 5 5 7 9 7 9 9 11 12 7 11
11 16 15 13 17 17 21 21 28 19 26 25 35 34 46 46 31 46 46 63 78 67 78 80 93 96 70 89
30
Universitas Sumatera Utara
5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
0 1 1 1 2 2 2 3 3 3 3 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5
2 0 1 2 0 1 2 0 1 2 3 0 1 2 3 4 0 1 2 3 4 5
43 33 46 63 49 70 94 79 109 141 176 130 172 221 278 345 240 348 542 918 1609 >1600
31
15 11 16 21 17 23 28 25 31 37 44 35 43 57 90 117 68 118 180 303 635 700
114 93 120 154 126 168 219 187 263 343 503 302 486 698 849 999 754 1005 1405 3222 5805 -
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Tabel Baku Mutu Mikrobiologi Air Nomor: 416/MENKES/PER/IX/1990 Tanggal: 3 September 1990 No
Jenis
Satuan
parameter 1.
Kadar maksimal
Keterangan
yang diperbolehkan
Total
Jumlah per 100
koliform
mL sampel
50
Bukan Air Perpipaan
10
32
Air Perpipaan
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Alat Percobaan
Timbangan Analitik
Hot Plate
Inkubator
Oven
33
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Media Percobaan
Media BGLB
Media LB
Media Lactose Borth (double strength – single strength) yang telah diencerkan
34
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Hasil Uji Bakteri Koliform
Hasil Uji Pendugaan
Hasil Uji Penegasan dan Media BGLB
35
Universitas Sumatera Utara
