Semmelweis Egyetem Élettani Intézet Budapest 2003
Témavezető: Dr. Hunyady László egyetemi docens
Szaszák Márta
Doktori (Ph.D.) értekezés tézisei
A dinamin szerepe az AT1-angiotenzinreceptor internalizációjában
Celluláris és Molekuláris Élettan Doktori Program
valószínűleg inkább a molekula működésének szabályozásában játszik szerepet.
folyamat során a dinamin prolingazdag doménje a fehérje lokalizációjában, míg PH doménje
formái esetében leírták a szinaptikus vezikulák újrafelvétele során. Megállapítottuk, hogy e
endocitózisa során hasonló szerepet játszik, mint ahogyan azt ezen fehérjék neuronális
endofilin nem neuronális formája a G-fehérjéhez kapcsolt receptorok dinamin-függő
endocitózisában. A kísérleti eredményeink arra utalnak, hogy a dinamin, amfifizin és
fehérjéknek a dinaminon keresztüli kapcsolódása szerepet játszik az AT1-receptor
gátlást a dinamin expresszálása felfüggesztett, ami arra utal, hogy az amfifizin és endofilin
expresszáltuk a receptorral. Ezen SH3 domének a receptorinternalizációt is gátolták, amely
hasonló módon megakadályozta, amikor az amfifizin és endofilin SH3 doménjét
megszűntette a dinamin2 plazmamembrán-lokalizációját is. A dinamin lokalizációját
és konfokális mikroszkópos vizsgálatokkal megállapítottuk, a prolingazdag domén deléciója
eltávolítása, gátolták a receptor internalizációját. Ezen felül azonban, amint azt funkcionális
az SH3 domént tartalmazó fehérjékhez kapcsolódni képes, prolingazdag doménjének az
A dinamin2 foszfolipdeket kötő, PH doménjében létrehozott pontmutáció, valamint
lipid, illetve fehérje-fehérje kölcsönhatások.
emlős sejtekben ubikviteren előforduló dinamin2 GTP-áz fehérje által létrehozott fehérje-
választ, hogyan szabályozzák az angiotenzinreceptor klatrin-mediált internalizációjat az
valamint a receptorszám hosszútávú szabályozásában. Kísérleteinkben arra kerestük a
befolyásolja a receptor jelátvitelét, illetve szerepet játszik a receptor érzékenységének,
folyamatának megértése céljából alapvető fontosságú. Az angiotenzinreceptor endocitózisa
és -agonista vegyületek alkalmazásának szempontjából, valamint az endocitózis általános
receptor molekuláris szabályozási mechanizmusának tanulmányozása a receptorantagonista
fehérjéhez kapcsolt, hét transzmembrán domén szerkezetű receptorok családjába tartozik. A
szerepe van a népbetegségnek számító magasvérnyomás kezelésében. Az AT1-receptor a G-
szerepet játszik. Az AT1-angiotenzinreceptort szelektíven gátló gyógyszereknek fontos
A renin-angiotenzin rendszer számos kardiovaszkuláris betegség kialakulásában
ÖSSZEFOGLALÁS
the PH domain most probably regulates its function.
we concluded that the proline-rich domain of dynamin has a role in its localization, whereas
described by their neuronal isoforms in the recycling of the synaptic vesicles. In addition,
amphipiysin and endophilin has a similar role during receptor endocytosis as it was
AT1 receptor. Our experiments show that the non-neuronal isoform of dynamin,
dynamin with these SH3 domain containing proteins has a role in the endocytosis of the
overcome by the coexpression of dynamin suggesting that the specific interaction of
way. These SH3 domains also inhibited the internalization of the receptor, which was
domain of amphiphysin and endophilin impeded the localization of dynamin in a similar
dynamin as it was confirmed by confocal microscopic studies. Coexpression of the SH3
deletion of the proline-rich region has inhibited the plasmamembrane localization of
proline-rich region that can interact with SH3 domain containing proteins. In addition the
in the PH domain of dynamin, which can bind to phospholipids and by deletion of the
The internalization of the AT1 receptor was inhibitied by generating a pointmutation
and several proteins.
ase protein that is ubiquitously expressed in mammalian cells and can interact with lipids
dynamin2 in the clathrin-mediated internalization of the AT1 receptor. Dynamin2 is a GTP-
regulation of the number of receptors. The aim of our study was to examine the role of
causes resensitization of the receptor after its desensitisation and has a role in the long-term
endocytosis. Endocytosis of the angiotensin II receptor influences the signal transduction,
antagonist and agonist compounds and for the understanding of the mechanism of
control the receptor function has a high importance in regard to the use of receptor
which contain seven transmembrane regions. Elucidation of the molecular mechanisms that
of hypertension. AT1 receptor belongs to the superfamily of G-protein-coupled receptors,
diseases. Drugs that selectively block the AT1 receptor have important roles in the treatment
The renin-angiotensin system has a role in the pathogenesis of several cardiovascular
SUMMARY
családon
keresztül,
amely
inozitol-triszfoszfát
választ
és
diacil-glicerol
régióján kersztül, SH3 domént tartalmazó fehérjékhez fokozza a GTP-áz aktivitást és az
nagymértékben megnövelhetik. In vitro a dinamin kötődése, a C-terminális prolin gazdag
körülmények amelyek stimulálják a dinamin oligomerizációját, a GTP-áz aktivitást
középen egy PH domén található, C-terminálisan pedig egy prolin-gazdag domén. Azok a
Molekuláris szerkezetéről ismert, hogy N-terminálisan egy GTP-áz domént tartalmaz
kialakítani, a lefűződő klatrin burkos vezikula nyaka körül, amelyet in vivo is kimutattak.
tetramerek képesek még tovább polimerizálódni és egy gyűrű, illetve spirál alakú struktúrát
kimutatott dinamin3. A dinamin a citoplazmában tetramer formában van jelen, amely
neuronális dinamin1, az ubikviteren előforduló dinamin2 és az elsősorban tüdőben
A dinaminok 100kDa molekulasúlyú GTP-ázok, melyeknek 3 izoformája ismert, a
neuronális szövetekben azonban sokkal kevesebb adat áll rendelkezésre.
vezikula levágódéséban van szerepük. Ezen fehérjék szerepével kapacsolatban nem-
leírták, amelyeknek a vezikula képződés során a membrén görbület kialakításában, illetve a
járulékos fehérje, mint például az amfifizin, endofilin, dinamin, szinaptojanin szerepét
az aktivált receptor endocitózisra kerül. A szinaptikus vezikukák újrafelvételében számos
az AP2, adaptor komplexhez való kapcsolódáson keresztül, a klatrinburokhoz irányítják, és
szétkapcsolják a G-fehérjétől, ezáltal deszenzitizálják. A β-arresztinek a receptort emellett,
foszforilálódik, ami elősegíti a β-arresztin kötődését a receptorhoz, amely fehérjék
AT1-receptor az agonistakötést követően a jelátviteli útvonalak elindulása után, először
útvonalat, az Akt/PKB enzimet, valamint kis G-fehérjéket, köztük a Ras-t és a Rho-t. Az
szerepét felvetették. Az AT1-receptor aktiválja a foszfolipáz Cγ-1 enzimet, a JAK-STAT
Angiotenzin II ezen növekedési hatásainak létrehozásában számos jelátviteli folyamat
Angiotenzin II kezelés során a legtöbb célszervben a sejtek hipertrófiája mutatható ki. Az
arachidonsav felszabadulást okoznak, ami a prosztaglandinok prekurzora. Tartós
eredményez. Ezen kívül aktiválja a foszfolipáz A2 és foszfolipáz D enzimeket, amelyek
felszabadulást, valamint ennek következtében kalcium jelet és protein-kináz C aktiválást
fehérje
Az AT1-receptor fő jelátviteli útvonala, foszfolipáz Cβ-1 enzim aktiválása a Gq/11-
IRODALMI HÁTTÉR
rendelkezésre.
endocitózisban betöltött szerepének pontos mechanizmusával kapcsolatban kevés adat áll
kötés hiányos mutáns dinaminnal széles körben vizsgálták, azonban a dinamin
endocitózisban betöltött szerepét a G-fehérjés receptorok internalizációja során a GTP –
dinaminok, elsősorban a dinamin2, a jelátvitelben is szerepet hátszó fehérje. A dinamin
neurális izoformája is létezik, amely az endocitózisban betöltött általános szerepükre utal. A
legtöbb endocitózisban szereplő fehérjének a neuronális izoformája mellett azonban a nem
tartalmazó fehérjék közötti kapcsolatról a neuronális dinamin1 izoformát használják. A
szerepével lehet összefüggésben. A legtöbb adat amely a dinamin és az SH3 domént
távolítják el és enzimaktivitása ép marad, ami a molekula fehérjekomplexeket kialakító
képződése során. Viszont azon endofilin is gátolja az endocitózist, amelynek SH3 doménjét
rendelkezik, amelynek a membrángörbület kialakításában tulajdonítanak szerepet a vezikula
plazmamembránon. Az endofilin lizofoszfatidsav-acil-transzferáz enzim aktivitással is
az amfifizin szerepelhet a dinamin lefűződő vezikula nyaka köré történő kapcsolódásban a
preszinaptikus membrán mentén. A dinamin amfifizinnel történő kapcsolata arra utal, hogy
endocitózisát gátolja, valamint a szinaptikus vezikulák akkumulálódásához vezet a
adaptinhoz, szinaptojaninhoz. Az amfifizin SH3 doménje a szinaptikus vezikula
amfifizin, endofilin, interszektin. Az amfifizin a dinaminon kívül kötődik a klatrinhoz, α-
melyek a dinamin lehetséges partnereiként szerepelhetnek az endocitozis során: például az
kapcsolat a dinamin GTP-áz aktivitását fokozza. Ilyen SH3 domént tartalmazó fehérjék,
Ez a régió in vitro számos fehérje SH3 doménjével képes kölcsönhatásba lépni, amely
A C-terminálisan elhelyezkedő prolin gazdag domén több mint 30% prolint tartalmaz.
szerepet a dinamin membránlokalizációjában, amely kötődés a GTP-áz aktivitást is fokozza.
biszfoszfáthoz kötődik a legnagyobb affinitással, és ezért ennek a kapcsolatnak feltételeznek
kötődhetnek. A dinamin PH doménjéről kimutatták, hogy a foszfatidilinozitol-(4,5)-
fehérjék PH doménjei a különböző foszfoinozitidekhez különböző preferenciával
A PH domén több száz fehérjében megtalálható struktúrális elem. A különböző
stimulálják a GTP-áz aktivitást, illetve az oligomerizációt.
oligomerizációt. Anionos foszfolipidek melyek pedig a PH doménhez kötődnek szintén
AT1-receptor internalizációja során?
5. Hogyan befolyásolja az endofilin és az amfifizin SH3 doménje a dinamin lokalizációját az
szövetben?
amfifizin szerepet játszhat-e az AT1-receptor internalizációjában is, nem-neuronális
4. A szinaptikus vezikulák endocitózisában bizonyítottan szerepet játszó endofilin és
történő kapcsolódásában az internalizáció során?
fehérje-fehérje kölcsönhatások játszanak szerepet a dinamin klatrinburkos struktúrákhoz
3. A dinamin PH doménjének lipidkötése, vagy a prolingazdag domén által kialakított
jelentősége az AT1-receptor internalizációjában?
2. Mi a dinamin prolingazdag doménje által kialakított fehérje-fehérje interakciók
endocitózisában?
1. Szerepet játszik-e a dinamin PH doménjének foszfolipid kötése az AT1-receptor
szövetekben. Kísérleteinkben összefoglalva a következő kérdésekre kerestük a választ:
AT1-receptor internalizációja során is hasonló szerepet tölthetnek-e be nem neuronális
fehérjék, mint amilyen az endofilin és az amfifizin, egy G-fehérjéhez kapcsolt receptor, az
Nem volt arra sem adat, hogy a szinaptikus vezikula újrafelvételében szerepet jatszó adapter
dinamin plazmamembránhoz történő kapcsolódásában az AT1-receptor endocitózisa során.
más fehérjék SH3 doménjéhez kapcsolódni képes prolingazdag doménje játszik szerepet a
voltak az irodalomban azzal kapcsolatban, hogy a dinamin foszfolipidet kötő PH, vagy a
klatrinburkos vezikulákban. Kísérleteink megkezdésekor azonban ellentmondó adatok
alacsony angiotenzin koncentrációnál β-arresztin és dinamin-függő módon történik,
szerepet. Munkacsoportunk vizsgálatai igazolták, hogy az AT1-receptor internalizációja
fehérje, a dinamin GTP-áz, amelynek a lefűződött vezikula levágódásában tulajdonítanak
a mai napig ismeretlen. Az egyik legtöbbet vizsgált és kulcsfontosságú szerepet játszó
képesek, de a vezikula létrejöttének finoman szabályozott lépéseinek pontos mechanizmusa
szerepét felvetették, amelyek különböző fehérje-lipid és fehérje-fehérje kölcsönhatásokra
kellenek a klatrinburok és a vezikula kialakulásához. A folyamatban nagyon sok fehérje
ubikvitinkonjugáló enzimek, lipidmódosító enzimek, és az aktin citoszkeleton egyaránt
finoman összehangolt interakcióját követeli meg. GTP-ázok, kinázok, foszfatázok,
A klatrin-mediált endocitózis egy több lépéses folyamat, amely számos fehérje
CÉLKITŰZÉSEK
mérése:
A
receptorinternalizáció
kinetikájának
I-Ang II-vel inkubáltuk 37 °C-on az ábrákon feltüntetett
125
prolin aminosavat kódoló bázishármas stopkodonra történő kicserélésével vizsgáltuk. Az így nyert dinaminban az összes lehetséges SH3 domént kötő régiót delécióval eltávolítottuk Ezen dinamint az AT1-receptorral koexpresszálva, az AT1-receptor endocitózisára domináns negatív gátló hatással volt. Ez a domináns negatív gátló hatása szokatlan abból a
sejteket 4%-os paraformaldehidet tarlamazó oldatban fixáltuk majd permeabilizáltuk.
Először HA-epitóp ellenes elsődleges antitesttel, majd rodaminnal konjugált kecskéből
származó egér elleni másodlagos antitestet inkubáltuk a sejteket. A felvételeket Zeiss LSM
510-es pásztázó lézer konfokális mikroszkóppal készítettük.
Azonban a dinaminról bebizonyították, hogy a citoszolban tetramer, illetve oligomer formában van jelen a klatrinburokba történő beépülés előtt, és valószínű módon a mutáns és endogén fehérjék vegyesen alkotnak oligomereket, amely azt okozza, hogy az endogén fehérje funkciója gátlódik
inhibitorokat tartalmazó Laemmli pufferben vettük fel. A fehérjéket 8%-os denaturáló
poliakrilamid gélen választottuk el, majd nedves blotolással nitrocellulóz membránra
transzferáltuk. Ezt követően, a blotokat a megfelelő elsődleges antitesttel és torma-
peroxidázzal konjugált megfelelő másodlagos antitesttel festettük A Western blot reakciók
detektálása SuperSignal West Pico Kit segitségével történt.
lokalizációját okozzák, nem gátolják az endogén fehérjét a funkciójának betöltésében.
Western blot analízis: Immundetektáláshoz az expresszált proteineket proteáz
szempontból, hogy azok a mutációk általában, amelyek a fehérje más helyre történő
szerepét az AT1-receptor endocitózisa során, a prolingazdag domén kezdetén lévő 746-os
amely fehérje-fehérje interakciók kialakítására képes. A dinamin2 prolingazdag régiójának a
A másik lehetséges lokalizálásban szereplő régió a dinaminban a prolingazdag domén,
A dinamin2 prolingazdag régiójának szerepe az AT1-receptor internalizációjában
lipidkötése szerepet játszik az AT1-receptor endocitózisában.
Konfokális mikroszkópos vizsgálatok: A konfokális mikroszkópos vizsgálatokhoz, a
kötés és a teljes (extracelluláris + intracelluláris) kötés hányadosaként adtuk meg.
különítettük el. Az internalizációt az egyes időpontokban mért intracelluláris specifikus
ideig. A sejt felszínén kötött és az intracelluláris ligandot a kötés pH érzékenysége alapján
meghatározásához a sejteket
receptorinternalizáció
dinamin-K535A mutánst az AT1-receptorral koexpresszálva a receptorendocitózist
megfelelően, Lipofectamin, illetve FuGENE transzfekciós reagenst használva.
A
doménen belül, pozitív töltése révén a foszfoinozitidek koordinálásában van szerepe A
típusú vagy mutáns dinaminok, illetve az SH3 domének cDNS-ével, az adott kísérleteknek
domináns negatív módon gátolta. Ez az adat arra utal, hogy a dinamin PH doménjének
amelyben az 535-ös lizin aminosavat cseréltük ki alaninra Az 535-ös lizinnek, a PH
Ennek vizsgálatához a dinamin PH doménjében egy olyan pontmutációt hoztunk létre,
közvetített fehérje-lipid kölcsönhatások szerepet játszanak-e a receptorinternalizáció során.
Kísérleteink egyik fő célja annak meghatározása volt, hogy a dinamin PH doménje által
A dinamin2 PH doménjének a szerepe az AT1-receptor internalizációjában
EREDMÉNYEK ÉS MEGBESZÉLÉS
Transzfekció: CHO-sejteket tranziensen transzfektáltunk az AT1-receptor és a vad
mutánsokban a dinamin K44A cDNS-ét használtuk templátként a mutációk létrehozására.
deléciója, illetve a többi mutáció létrehozása is ugyanezzel a módszerrel történt. A dupla
Stratagene cég QuickChange Kit-jének segítségével történt. A prolingazdag domén
aminosavának alaninra való cserélése, a dinamin2 cDNS-ében irányított mutagenezissel, a
A mutációk létrehozása a dinamin molekulában: A dinamin2 535-ös lizin
MÓDSZEREK
hordozó dinamin2 hasonló, részleges kolokalizációt mutatott a β2-adaptinnal. A prolingazdag domén deléciós mutáns esetében, és a K44A/∆PRD esetében a kolokalizáció egyátalán nem volt megfigyelhető a β2-adaptinnal, ami arra utal, hogy ezek a fehérjék
ezért olyan dupla mutáns dinamin fehérjéket hozztunk létre, amelyben a prolingazdag
domén deléciója, illetve a PH domén pontmutációja mellett a K44A pontmutációt is jelen
CHO sejtekben. A GFP-hez kapcsolt SH3 domének expressziós szintjét GFP ellenes
eltávolítása megakadályozza a dinamin klatrinburkos gödröcskékhez való lokalizációját.
alegysége és bizonyítottan a plazmamembránhoz, illetve a klatrinburkos gödröcskékhez
adaptinnal történő kolokalizációval bizonyítottuk, amely az AP2, adapter fehérje egyik
Az egyes dinamin fehérjék plazmamembránhoz való lokalizációját a GFP-β2-
gödröcskékben
A dinamin mutánsok kolokalizációja β2-adaptinnal a klatrinburkos
GFP-hez kapcsolt amfifizin es endofilin SH3 doménjét koexpresszáltunk az AT1-receptorral
adat arra utal, hogy a prolingazdag domén a dinamin lokalizációjában szerepel, és ennek
kölcsönhatása szerepet játszik az AT1-receptor internalizációja során.
doménjének gátló hatása azt bizonyítja, hogy ezeknek a fehérjéknek a dinaminnal való
kötődik a dinaminhoz, nem gátolta a receptor endocitózisát Az endofilin es az amfifizin SH3
alkalmazott GFP önmagaban, illetve az Nck N-terminális SH3 doménje, ami in vitro nem
endocitózisára domináns negatív gátló hatást gyakorolt. Ezzel szemben, a kontrollként
antitesttel, Western-blottal ellenőriztük. Mindkét SH3 domén koexpressziója a receptor
Ahhoz, hogy tanulmányozzuk ezen fehérjék hatását a receptorinternalizació kinetikájára a
hatása önmagában, vagyis felfüggesztette a K44A mutáció által okozott gátló hatást. Ez az
internalizációjára
kapcsolatba tudnak lépni és ezáltal szerepelhetnek a dinamin membránlokalizációjában.
dinamin
tartalmazta önmagában Ez a gátló hatás viszont kisebb, mint a K44A pontmutáns dinamin
a
az amfifizin és az endofilin, amelyek a dinaminon kívül számos más fehérjével is
szerepet
bizonyult, mint annak a dinaminnak a hatása, amely a prolingazdag domén delécióját
játszik
partnereknek a szerepét vizsgáltuk az AT1-receptor internalizációja során. Két ilyen fehérje
mégsem
hatását. A K44A/∆PRD kettős mutációt tartalmazó fehérje hatása viszont hasonlónak
kötődni,
kötődni. Következő kísérleteinkben ezeknek, a prolingazdag régióhoz kötődő lehetséges
lipidekhez
lipidkötés megszűntetése nem képes felfüggeszteni a K44A mutációt hordozó dinamin gátló
képes
A dinamin a prolingazdag régióján keresztül számos fehérje SH3 doménjéhez képes
hogy
Az amfifizin és az endofilin SH3 doménjének hatása az AT1-receptor
gödröcskékhez történő kapcsolódásában az AT1-receptor internalizációja során.
prolingazdag régiója, és nem a PH domén az, ami szerepet játszik a dinamin klatrinburkos
adatai igazolják a funkcionális vizsgálatok alapján levont következtetéseket, hogy a dinamin
plazmamembránhoz való lokalizációjában az AT1-receptor endocitózisa során, hiszen a
ellenére,
K44A mutáció hatásához volt hasonló Ez az adat arra utal, hogy a PH domén, annak
dinamin hatását nem függeszti fel. A K535A és a K44A mutációk kombinációjának hatása a
hatását felfüggeszti. Míg ha a mutáció nem a lokalizációt befolyásolja akkor a K44A
plazmamembránhoz való lokalizációját gátolja, az a K44A mutáció domináns negatív
GTP-áz aktivitása Hipotézisünk az volt, hogy az a mutáció, amelyik a molekula
legszélesebb körben használt dinamin mutáns, melynek csökkent a GTP-kötése és csökkent
egyátalán nem kapcsolódnak a klatrinburkos gödröcskékhez A mikroszkópos vizsgálatok
megtalálható volt, ellentétben a vad típusú dinamin2-vel. A K44A/K535A dupla mutációt
endocitózisa során, viszont nem adtak információt arra nézve, hogy melyik domén játszik
szerepet a dinamin klatrinnal borított struktúrákhoz történő lokalizálásában. A továbbiakban
volt. A K44A mutációt tartalmazó dinamin, a klatrin-mediált endocitózis gátlására
a klatrintól független struktúrákban is jelen volt, és nagyobb intracelluláris vezikulákban is
gödröcskéket jelölő β2-adaptinnal. A K44A dinamin szintén kolokalizált a β2-adaptinnal, de
K535A mutációt tartalmazó dinamin2 nagyfokú kolokalizációt mutatott a klatrinburkos
lokalizál, ezért mint a klatrinburkos gödröcskéket jelölő fehérje használható. A vad típusú és
A fenti adatok arra utaltak, hogy mindkét doménnek szerepe van az AT1-receptor
lokalizációjában kettős mutánsok segítségével
A PH domén és a prolingazdag domén szerepének vizsgálata a dinamin
pettyezettséget mutatott, és kolokalizált az endofilin SH3 doménjével.
a dinamin festődése, hasonlóan a prolingazdag domén delécióját tartalmazó dinaminhoz,
dinamin egyenletes citplazmatikus eloszlásának megszűnését is okozta. Ezekben a sejtekben
kapcsolt endofilin SH3 doménje a plazmamembrán-lokalizáció megszűnése mellett a
Ezekben a sejtekben a dinamin plazmamembrán-lokalizációja megszűnt. A GFP-hez
dinamin2-vel, azokhoz a sejtekhez képest amelyben csak a dinamin2 expresszálódott.
sejtekben, ahol az amfifizin illeteve az endofilin SH3 doménje koexpresszálódott a
A dinamin2 sejten belüli elhelyezkedése nagy mértékben megváltozott azokban a
tartalmazó sejtekben
A dinamin2 lokalizációja az amfifizin, illetve az endofilin SH3 doménjét
internalizációjában.
AT1 receptor internalizációja során, és felveti e fehérjék lehetséges szerepét az AT1-receptor
amfifizinhez szerepet játszhat a dinamin klatrinburkos gödröcskékhez való irányításában az
arra utalnak, hogy a dinamin prolingazdag regiójának kapcsolódása az endofilinhez és
doménjével részben, illetve teljesen kivédte az SH3 domének gátló hatását . Ezek az adatok
internalizációjára. A dinamin2 koexpresszálása az amfifizin, illetve az endofilin SH3
fiziológiás kapcsolatait, a dinamin2 koexpresszálásának hatását vizsgáltuk a receptor
specifikusan a dinamin prolingazdag régiójához kapcsolódva gátolták az endogén dinamin
Annak igazolására, hogy az amfifizin, illetve az endofilin SH3 doménje valóban
fehérje-lipid és fehérje-fehérje kölcsönhatások szerepének megértéséhez.
Kísérleteink új adatokat szolgáltattak az endocitózis mechanizmusában szereplő
internalizációjában nem-neuronális szövetben.
endocitózisára felveti ezen fehérjék szerepét a G-fehérjéhez kapcsolt receptorok
Az amfifizin és az endofilin SH3 doménjének gátló hatása az AT1- receptor
áz aktivitásának szabályozásában játszik szerepet.
A foszfolipidet kötő PH domén valószinűleg inkább a dinamin funkciójának, pl. GTP-
lokalizációjához.
lipid kötése szükséges a dinamin2 klatrinburkos gödröcsékhez történő megfelelő
keresztül létrejövö kapcsolat az SH3 domént tartalmazó fehérjékkel, és nem a PH domén
kapcsolatos konfokális vizsgálatok azt mutatják, hogy a dinamin2 prolingazdag doménjén
A mutáns és vad típusú dinaminok, illetve az SH3 domének lokalizációjával
AT1-receptor endocitózisára.
Az amfifizin, illetve az endofilin SH3 doménje domináns negatív gátló hatást fejt ki a
és prolingazdag doménje is szerepet játszik az AT1-receptor internalizációjában.
Összefoglalva a kísérleti eredményeket, megállapítottuk, hogy a dinamin2 PH doménje
EREDMÉNYEK ÖSSZEFOGLALÁSA
Biochem Pharmacol. 2003 Apr 15;65(8):1329-38. I.F.: 3,34
and nonpeptide antagonist interaction with constitutively active human AT(1) receptors.
4. Le MT, Vanderheyden PM, Szaszák M, Hunyady L, Kersemans V, Vauquelin G. Peptide
dependent mechanism. Endocr Res. 2002 Nov;28(4):281-9. I.F.: 0,535
adrenocorticotropin receptor internalizes via a clathrin-mediated G protein receptor kinase
3. Baig AH, Swords FM, Szaszák M, King PJ, Hunyady L, Clark AJ. Agonist activated
12,915
of the internalized AT1 angiotensin receptor. J Cell Biol. 2002 Jun 24;157(7):1211-22. I.F.:
Catt KJ, Balla T. Differential PI 3-kinase dependence of early and late phases of recycling
2. Hunyady L, Baukal AJ, Gáborik Z, Olivares-Reyes JA, Bor M, Szaszák M, Lodge R,
28;277(26):23107-10. I.F.: 7,258
terminal residues of angiotensin II during AT1 receptor activation. J Biol Chem. 2002 Jun
potent agonist for constitutive active human AT1 receptors.Distinct roles of the N-and C-
1. Le MT, Vanderheyden PM, Szaszák M, Hunyady L, Vauquelin G. Angiotensin IV is a
Egyéb közlemények:
Pharmacol. 2001 Feb;59(2):239-47. I.F.: 5,297
Beta-arrestin- and dynamin-dependent endocytosis of the AT1 angiotensin receptor. Mol
2. Gáborik Z, Szaszák M, Szidonya L, Balla B, Paku S, Catt KJ, Clark AJ, Hunyady L.
14;277(24):21650-6. I.F.: 7,258
during endocytosis of the AT1 angiotensin receptor. J Biol Chem. 2002 Jun
the proline-rich domain of dynamin-2 and its interactions with Src homology 3 domains
1. Szaszák M, Gáborik Z, Turu G, McPherson PS, Clark AJ, Catt KJ, Hunyady L.Role of
Az értekezés alapjául szolgáló közlemények:
SAJÁT KÖZLEMÉNYEK JEGYZÉKE
