POLOPROVOZ
POLOPROVOZNÍ PARAMETRY TECHNOLOGIE PRODUKCE ENZYMU LAKÁZY POMOCÍ BIOKATALYZÁTORU LENTIKATS
KOLEKTIV AUTORŮ
LentiKatˊs, a.s. 2014
POLOPROVOZ
AUTOŘI:
Ing. Radek Stloukal, Ph.D.1 RNDr. Hana Sychrová, DrCs.2 Ing. Jarmila Watzková, Ph.D.1 Ing. Barbora Gregušová1 Ing. Klára Richterová2 Ing. Jiří Dostál, Ph.D. 3 Ing. Iva Pichová, CSc.3
1
LentiKatˊs a.s.
Pod Vinicí 83, 471 27 Stráž pod Ralskem Tel.: +420 255 710 680, Fax: +420 255 710 699 E-mail:
[email protected], Web: www.lentikats.eu 2
Fyziologický ústav AV ČR, v.v.i.
Vídeňská 1083, Praha 4, 142 20 Tel.: +420 241 061 111, Fax: +420 241 062 488 E-mail:
[email protected], Web: www.biomed.cas.cz/fgu/cz 3
Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v.v.i.
Flemingovo nám. 542/2, 166 10 Praha 6 Tel.: +420 220 183 333, Fax: +420 220 183 578 E-mail:
[email protected], Web: www.uochb.cz
DEDIKACE: Tento výsledek vznikl za finanční podpory projektu “Využití imobilizovaných kvasinek v biotechnologiích: vývoj nových aplikací pro výrobní procesy” (č. projektu TA01011461) z prostředků státního rozpočtu prostřednictvím Technologické agentury České republiky (TA ČR).
2
POLOPROVOZ
VYDAVATEL:
LentiKatˊs, a.s. (Praha)
VYDÁNO V ROCE:
2014
ZVEŘEJNĚNO:
www.lentikats.eu
ČÍSLO VÝSLEDKU:
LENTIKVAS-2014-02
GARANT VÝSLEDKU:
Ing. Radek Stloukal, Ph.D.
JAZYK VÝSLEDKU:
CZE – čeština
HLAVNÍ OBOR:
EI – Biovědy / Biotechnologie a bionika
VLASTNÍK VÝSLEDKU:
LentiKatˊs a.s. Pod Vinicí 83, 471 27 Stráž pod Ralskem Tel.: +420 255 710 680, Fax: +420 255 710 699 E-mail:
[email protected], Web: www.lentikats.eu
IČ VLASTNÍKA VÝSLEDKU:
27447618
DIČ VLASTNÍKA VÝSLEDKU:
CZ27447618
STÁT:
CZ – Česká republika
VYUŽITÍ VÝSLEDKU JINÝM SUBJEKTEM: N: využití výsledku jiným subjektem je možné bez nabytí licence LICENČNÍ POPLATKY: N: poskytovatel licence na výsledek nepožaduje licenční poplatek KATEGORIE VÝSLEDKU PODLE NÁKLADŮ NA JEHO DOSAŽENÍ: A: výše vyčerpané části z celk. uznatelných nákladů na dosažení výsledku je do 5 mil. Kč
TECHNICKÉ PARAMETRY: Technické parametry poloprovozní technologie byly ověřeny na dvou modelech. U modelu přípravy imobilizované lakázy v Biokatalyzátoru lentikats TtL bylo dosaženo aktivity 47,8 U/kg Biokatalyzátoru lentikats TtL a 29,33 U/kg Biokatalyzátoru lentikats TtL (před a po deaktivaci nativních kvasinek). U modelu přípravy volné lakázy v kapalném médiu systémem opakovaných vsádkových konverzí bylo dosaženo aktivity 45,1 U/kg Biokatalyzátoru lentikats TtL, resp. 18,9 U/l média s naprodukovanou lakázou.
EKONOMICKÉ PARAMETRY: Ekonomické parametry poloprovozní technologie byly vyčísleny pro oba sledované modely. Výše celkových nákladů na výrobu 1kg Biokatalyzátoru lentikats TtL dosahuje 29400 Kč/kg. Náklady na výrobu 1 U volné lakázy v 1 cyklu pak byly vyčísleny na 118 Kč/U.
3
POLOPROVOZ
NÁZEV VÝSLEDKU V ČESKÉM JAZYCE: Poloprovozní parametry technologie produkce enzymu lakázy pomocí Biokatalyzátoru lentikats POPIS VÝSLEDKU V ČESKÉM JAZYCE: Systém produkující enzym lakáza pomocí imobilizovaných nativních rekombinantních kvasinek ve formě Biokatalyzátoru lentikats je složen ze tří nerezových reaktorů, přičemž první reaktor slouží k produkci enzymu (ve formě imobilizované či volné), druhý reaktor slouží na deaktivaci nativních volných kvasinek a třetí reaktor slouží, jako zásobní nádrž naprodukovaného enzymu, již bez přítomnosti nativních volných kvasinek. Médium s naprodukovanou lakázou, z třetího reaktoru, může být následně použito k další purifikaci enzymu nebo již přímo do reakce. U produkčního systému byly stanoveny provozní parametry a definovány základní materiálové bilanční ukazatele charakterizující poloprovozní jednotku. Parametry systému byly ověřeny v režimu opakovaných vsádkových konverzí a získané výsledky byly vyhodnoceny z produkčně-ekonomického hlediska. KLÍČIVÁ SLOVA V ČESKÉM JAZYCE: Produkční systém, lakáza, provozní charakteristiky, Biokatalyzátor lentikats
NÁZEV VÝSLEDKU V ANGLICKÉM JAZYCE: Operation parameters of a pilot plant for the production of the enzyme laccase using the Lentikats Biocatalyst POPIS VÝSLEDKU V ANGLICKÉM JAZYCE: Operation parameters of a pilot plant for the production of the laccase enzyme in the immobilized and free form were determined. The production system uses native recombinant yeasts immobilized in PVA matrix called Lentikats Biocatalyst. The system consists of three stainless steel reactors, wherein the first is intended for production of the enzyme, the second for deactivation of native cells in liquid media and the third as enzyme reservoir. From the enzyme reservoir, the medium can be used for the following downstream purification process or directly into reaction. Operating parameters and basic material balances of the system were verified in a repeated batch conversion operation mode. The obtained results were evaluated from production and economic aspects. KLÍČOVÁ SLOVA V ANGLICKÉM JAZYCE: Production system, laccase, operational characteristics, Lentikats Biocatalyst
4
POLOPROVOZ
OBSAH
Obsah .......................................................................................................................................... 5 1
Enzym lakáza ..................................................................................................................... 6
2
Produkční systém ............................................................................................................... 7
3
Uspořádání poloprovozu .................................................................................................... 8
4
3.1
Náběh technologie ...................................................................................................... 8
3.2
Provoz technologie ..................................................................................................... 9
Charakteristiky poloprovozu ............................................................................................ 10 4.1
Technické parametry ................................................................................................ 11
4.1.1 Příprava selektivního kultivačního média ............................................................ 11 4.1.2 Provozní podmínky vsádkových kultivací ........................................................... 11 4.2
Ekonomické parametry ............................................................................................ 15
4.3
Podmínky nakládání s biokatalyzátorem.................................................................. 15
5
POLOPROVOZ
1 ENZYM LAKÁZA Enzymu lakáza je v posledních letech věnována značná pozornost, především pro jeho možný potenciál využití v řadě průmyslových odvětví. Tento enzym patří mezi skupinu polyfenol oxidáz, které obsahují měďnatý iont v aktivním místě enzymu. Významná je především jeho oxidační vlastnost. V současné době je známo několik zdrojů organismů produkujících tento enzym, ať už jimi jsou bakterie, houby či rostliny. Uplatnění lakáza nachází především v oblasti textilního, papírenského, celulózového či petrochemického průmyslu, ve kterém je likvidace odpadů a jejich vliv na životní prostředí značným problémem. Lakáza v těchto případech nabízí možnost detoxikace odpadů, kdy za využití kyslíku dochází k produkci vody, jako vedlejšího produktu. Lakáza může degradovat několik sloučenin. Tento enzym má schopnost detoxikovat řadu látek, které znečišťují životní prostředí a napomáhat tak k ochraně životního prostředí. Další uplatnění enzymu lakáza lze nalézt také v mnoha dalších odvětvích průmyslu (Obr. 1).
Obr. 1 Průmyslová odvětví uplatňující lakázu
6
POLOPROVOZ
2 PRODUKČNÍ SYSTÉM Systém na produkci enzymu lakáza je tvořen imobilizovanými rekombinantními kvasinkami Saccharomyces cerevisiae BW31a/pVT-100U_TtLCC1 (gen TtLCC1 z Trametes trogii, vektor pVT-100U; označení TtL) ve formě Biokatalyzátoru lentikats (zk. Biokatalyzátor lentikats TtL). V tomto případě se jedná o patentově chráněnou imobilizační techniku společnosti LentiKatˊs a.s., která využívá polyvinyl alkohol (PVA) k výrobě hydrogelu, do kterého jsou kvasinky imobilizovány (WO1999/067320, WO2007/1042680). Vyrobený Biokatalyzátor lentikats TtL je následně použit koncovým uživatelem, jako produkční systém enzymu, během (a) přípravy imobilizované lakázy v Biokatalyzátoru lentikats TtL nebo (b) přípravy volné lakázy v kapalném médiu v systému opakovaných vsádkových konverzí, s využitím systému tří nerezových reaktorů (Obr. 2).
Obr. 2 Schéma produkčního systému
7
POLOPROVOZ
3 USPOŘÁDÁNÍ POLOPROVOZU 3.1 NÁBĚH TECHNOLOGIE Biokatalyzátor lentikats TtL je jednorázově nadávkován do produkčního reaktoru (R1) současně se skladovacím médiem (Obr. 3). Skladovací médium je následně odtaženo a do reaktoru R1 je nadávkováno produkční médium. Po naplnění reaktoru R1 dochází ke kultivaci biomasy imobilizované v PVA matrici, Biokatalyzátoru lentikats TtL, za současné produkce volných buněk, resp. volného enzymu lakáza. Enzym lakáza je tedy produkován nejen v PVA matrici, Biokatalyzátoru lentikats TtL, ale také do okolního prostředí, tedy do produkčního média. Kultivace biomasy, resp. produkce lakázy, probíhá v opakovaných batch konverzích až do dosažení maximální koncentrace biomasy v PVA matrici, Biokatalyzátoru lentikats TtL, resp. do dosažení maximální aktivity enzymu v produkčním médiu. Po dosažení ustáleného stavu, kdy je Biokatalyzátor lentikats TtL plně aktivní, se lakázová aktivita vyjádřená v U na litr kapalného média pohybuje kolem hodnoty 47,5 ±3,5 U/l. Mezi jednotlivými kultivačními cykly
je
médium
odčerpáváno
do
deaktivačního
reaktoru
(R2),
kde
dochází
k deaktivaci/usmrcení nativních kvasinek. Do reaktoru R1 je následně dávkováno čerstvé kultivační/produkční médium. V reaktoru R2 s médiem s naprodukovanou lakázou, dochází k deaktivaci volných nativních kvasinek, které se vyloučily z Biokatalyzátoru lentikats TtL během jeho kultivace, pomocí přídavku 96% etanolu do výsledné koncentrace 20 %. Médium s obsahem naprodukované lakázy a deaktivovaných kvasinek je pak následně odčerpáno a shromažďováno v zásobní nádrži (R3). Plně aktivní Biokatalyzátor lentikats TtL je možné použít po deaktivaci nativních buněk v PVA
matrici,
Biokatalyzátoru
lentikats
TtL,
přímo
na
opakované
konverze
s imobilizovaným enzymem lakázou nebo, bez deaktivace, dále na produkci volného enzymu lakázy. Na deaktivaci nativních buněk uvnitř PVA matrice, Biokatalyzátoru lentikats TtL, se do reaktoru R1, po vypuštění produkčního média, přidá 96% etanol do výsledné koncentrace 20 %. Po uplynutí deaktivační doby (24 h) se roztok etanolu vypustí a do reaktoru R1 se napustí skladovací medium. Biokatalyzátor lentikats TtL je následně plněn do skladovacích nádob a poté skladován při 4 °C.
8
POLOPROVOZ
Obr. 3 Schéma uspořádání (R1 – produkční reaktor, R2 – deaktivační reaktor, R3 – zásobní nádrž; 1 – přítok produkčního média, 2 – odtok/přítok média s naprodukovanou lakázou, 3 – přítok roztoku etanolu, 4 – odtok/přítok média s deaktivovanými volnými kvasinkami a naprodukovanou lakázou, 5 – odtok nashromážděného média s deaktivovanými volnými kvasinkami a naprodukovanou lakázou)
3.2 PROVOZ TECHNOLOGIE Plně aktivní Biokatalyzátor lentikats TtL je používán v opakovaných konverzních cyklech na produkci volného enzymu lakázy. V každém cyklu je produkční reaktor (R1) plněn produkčním médiem a během cyklu dochází k produkci volného enzymu lakáza. Mezi jednotlivými cykly je médium odčerpáno do deaktivačního reaktoru (R2), kde dochází k deaktivaci/usmrcení nativních kvasinek. Do reaktoru R1 je následně dávkováno čerstvé produkční médium. V reaktoru R2 s médiem s naprodukovanou lakázou dochází k deaktivaci volných nativních kvasinek, které se vyloučily z Biokatalyzátoru lentikats TtL pomocí přídavku 96% etanolu do výsledné koncentrace 20 %. Médium s obsahem naprodukované
9
POLOPROVOZ lakázy a deaktivovaných kvasinek je pak následně odčerpáno a shromažďováno v zásobní nádrži (R3). Po naplnění zásobní nádrže R3 je možné kapalný roztok enzymu lakázy použít přímo na reakci nebo dále purifikovat vhodnými downstream procesy. V ustáleném stavu je systém schopen dosahovat maximální aktivity enzymu v produkčním médiu na výstupu z technologie v rozmezí 28-32 U/l. Produkční systém lze obecně využít na přípravu: a) imobilizované lakázy v Biokatalyzátoru lentikats TtL v produkčním reaktoru (R1), za současné deaktivace kvasinek imobilizovaných v Biokatalyzátoru lentikats TtL (Obr. 3A). Biokatalyzátor lentikats TtL je možné po promytí v adekvátním množství sterilní vody následně skladovat při 4 °C, po dobu min. 6 měsíců a opakovaně používat. b) volné lakázy v kapalném médiu systémem opakovaných vsádkových konverzí s využitím kaskády reaktorů R1-R3, za podmínek neustálých výměn média s naprodukovanou lakázou za nové produkční médium, kdy dochází k opakované produkci lakázy, za stálého používání plně aktivního Biokatalyzátoru lentikats TtL. V tomto případě je zajištěna maximální produktivita imobilizovaného systému na jednotku Biokatalyzátoru lentikats TtL. Systém lze používat opakovaně po dobu min. 6 měsíců (Obr. 3B). Médium s naprodukovanou lakázou je možné v některých průmyslových odvětvích aplikovat přímo nebo je lze zakoncentrovat či purifikovat. Případná potřeba dalšího zpracování naprodukované lakázy před její aplikací se pak odvíjí od potřeb a možností daného průmyslového odvětví, resp. koncového uživatele.
4 CHARAKTERISTIKY POLOPROVOZU Provozní parametry pilotního zařízení/poloprovozu na produkci enzymu lakáza pomocí Biokatalyzátoru lentikats TtL byly stanoveny s využitím systému jednoho reaktoru (produkce lakázy v Biokatalyzátoru lentikats TtL) nebo kaskády tří reaktorů (produkce volné lakázy v kapalném médiu systémem opakovaných vsádkových konverzí), jejichž technický popis je součástí podané přihlášky užitného vzoru, ze dne 7.11.2014, pod názvem „Zařízení pro produkci lakázy pomocí rekombinantních kvasinek imobilizovaných v hydrogelu“ (PUV
10
POLOPROVOZ 2014-30228). Navržené zařízení bylo v poloprovozních podmínkách ověřeno, byly stanoveny provozní parametry zařízení a základní materiálové bilance technologie.
4.1 TECHNICKÉ PARAMETRY K produkci enzymu lakáza pomocí imobilizovaných rekombinantních kvasinek ve formě Biokatalyzátoru lentikats TtL je nutné použít selektivní kultivační médium, za současného dodržení níže definovaných provozních podmínek pro modely (a) přípravy imobilizované lakázy v Biokatalyzátoru lentikats TtL i (b) přípravy volné lakázy v kapalném médiu systémem opakovaných vsádkových konverzí, s využitím systému tří nerezových reaktorů.
4.1.1 PŘÍPRAVA SELEKTIVNÍHO KULTIVAČNÍHO MÉDIA Médium se připraví smícháním: 6,7 g/l „Yeast Nitrogen Base“ bez aminokyselin YNB w/o AA (Y0626, SigmaAldrich, CZ) 1,535 g/l „Brent Supplemet Mixture“ směsi auxotrofních doplňků bez uracilu BSMUra (DBSN042, Formedium, UK) 8 g/l L-alaninu (A7627, Signa-Aldrich, CZ) 20 g/l D-glukózy (40055-AP0, Lach-Ner, CZ) Následně je nutné médium upravit na pH 6 (pomocí 1M NaOH (10006-AP2, Lach-Ner, CZ)/HCl (10033-A35, Lach-Ner, CZ)) a vysterilovat parním sterilizátorem (autoklávem, 121 °C/15 min). Do takto připraveného sterilního média se přidá 0,1 ml/l sterilního roztoku 1 M síranu měďnatého(30181-AP0, Lach-Ner, CZ), směs se promíchá a použije ke kultivaci imobilizovaných kvasinek exprimujících lakázu.
4.1.2 PROVOZNÍ PODMÍNKY VSÁDKOVÝCH KULTIVACÍ FÁZE I: NÁBĚH TECHNOLOGIE 1/ V době náběhu provozu technologie je kultivace a současná produkce lakázy pomocí imobilizovaných rekombinantních kvasinek prováděna v produkčním reaktoru (R1), za níže definovaných podmínek: Výška reaktoru:
58,5 cm
Průměr reaktoru:
40 cm
Objem reaktoru:
5L
11
POLOPROVOZ Provozní objem:
3,5 L
Provozní teplota:
30 °C
Provozní doba:
48 hod.
Provozní pH:
6
Intenzita míchání:
150 ot./min.
Plnění biokatalyzátorem:
5% (tj. 175 g Biokatalyzátoru lentikats TtL)
2/ Po odčerpání média s naprodukovanou lakázou dochází dále v deaktivačním v reaktoru (R2) k deaktivaci volných kvasinek v médiu pomocí přídavku 96% etanolu (20025-A96, Lach-Ner, CZ), za podmínek: Výška reaktoru:
48 cm
Průměr reaktoru:
40 cm
Objem reaktoru:
6L
Provozní objem:
5L
Provozní teplota:
30 °C
Provozní doba:
24 hod.
Provozní pH:
6
Intenzita míchání:
150 ot./min.
Obsah 96% etanolu:
do výsledné koncentrace 20 %
3/ Médium s naprodukovanou lakázou je po deaktivaci volných kvasinek přídavkem 96% etanolu následně odčerpáno a shromažďováno v zásobní nádrži (R3): Výška reaktoru:
95,5 cm
Průměr reaktoru:
50 cm
Objem reaktoru:
15 L
Provozní objem:
14 L
Provozní teplota:
25 °C
Provozní pH:
6
FÁZE II: PRODUKCE LAKÁZY a) Produkce imobilizované lakázy v Biokatalyzátoru lentikats TtL Produkční reaktor (R1) v tomto provozním modu plní i funkci deaktivačního reaktoru (R2), ve kterém dochází k deaktivaci volných i imobilizovaných kvasinek pomocí přídavku 96% etanolu (20025-A96, Lach-Ner, CZ), za podmínek:
12
POLOPROVOZ Výška reaktoru:
58,5 cm
Průměr reaktoru:
40 cm
Provozní teplota:
30 °C
Provozní doba:
24 hod.
Provozní pH:
6
Intenzita míchání:
150 ot./min.
Obsah 96% etanolu:
do výsledné koncentrace 20 %
Na základě provedených opakovaných kultivačních konverzí, využívajících 5% plnění Biokatalyzátorem lentikats TtL, dle výše uvedených podmínek, byly vypočteny hlavní ukazatele charakterizující tento systém:
Parametr
Jednotky
Hodnota
3-4
U/kg Biokatalyzátoru lentikats TtL
47,8
U/kg Biokatalyzátoru lentikats TtL
29,33
Počet kultivačních cyklů na dosažení max. aktivity Aktivita imobilizovaného enzymu před deaktivací Aktivita imobilizovaného enzymu po deaktivaci Provozní stabilita
Počet cyklů
Závisí na finálním použití Biokatalyzátoru lentikats TtL
b) Produkce volné lakázy systémem opakovaných vsádkových konverzí 1/
Produkce
lakázy
pomocí
imobilizovaných
rekombinantních
kvasinek
probíhá
v produkčním reaktoru (R1), za těchto podmínek: Výška reaktoru:
58,5 cm
Průměr reaktoru:
40 cm
Objem reaktoru:
5L
Provozní objem:
4L
Provozní teplota:
30 °C
Provozní doba:
48 hod.
Provozní pH:
6
Intenzita míchání:
150 ot./min.
13
POLOPROVOZ Plnění biokatalyzátorem:
5% (tj. 200 g Biokatalyzátoru lentikats TtL)
2/ Po odčerpání média s naprodukovanou lakázou dochází dále v deaktivačním v reaktoru (R2) k deaktivaci volných kvasinek v médiu pomocí přídavku 96% etanolu (20025-A96, Lach-Ner, CZ), za podmínek: Výška reaktoru:
48 cm
Průměr reaktoru:
40 cm
Objem reaktoru:
6L
Provozní objem:
5L
Provozní teplota:
30 °C
Provozní doba:
24 hod.
Provozní pH:
6
Intenzita míchání:
150 ot./min.
Obsah 96% etanolu:
do výsledné koncentrace 20 %
3/ Médium s naprodukovanou lakázou je po deaktivaci volných kvasinek přídavkem 96% etanolu následně odčerpáno a shromažďováno v zásobní nádrži (R3): Výška reaktoru:
95,5 cm
Průměr reaktoru:
50 cm
Objem reaktoru:
15 L
Provozní objem:
14 L
Provozní teplota:
25 °C
Provozní pH:
6
Na základě provedených opakovaných vsádkových konverzí, využívajících 5% plnění Biokatalyzátorem lentikats TtL, dle výše uvedených podmínek, byly vypočteny hlavní ukazatele charakterizující tento systém:
Parametr Produktivita Aktivita enzymu Provozní stabilita
Jednotky
Hodnota
U lakázy/hod
1,4
U/kg Biokatalyzátoru lentikats TtL
45,1
U/l média s naprodukovanou lakázou
18,9
měsíc
min. 6
14
POLOPROVOZ U výše uvedených hodnot je však nutné zohlednit i další faktory, které povedou ke zvýšení sledovaných parametrů, jakými jsou: objemová produktivita zařízení U/hod, ale také U/l, pomocí vyššího objemového plnění Biokatalyzátorem lentikats TtL ( 20 %).
4.2 EKONOMICKÉ PARAMETRY Ekonomické parametry systémů jsou vyčísleny na základě následujících předpokladů: a) imobilizovaná lakáza v Biokatalyzátoru lentikats TtL k dosažení max. aktivity jsou nutné 4 opakované konverze, následná deaktivace 96% etanolu do výsledné koncentrace 20 % a uskladnění ve sterilní vodě při 4 °C. b) volná lakáza produkovaná plně aktivním systémem s maximální aktivitou v Biokatalyzátoru lentikats TtL systém produkuje před deaktivací 30 ±2,5 U/l, po deaktivaci (96% etanolem do výsledné koncentrace 20 %) pak 20 ±1,8 U/l.
Imobilizovaná lakáza Položka
Náklady na výrobu 1kg Biokatalyzátoru lentikats TtL (Kč/kg)
PVA matrice Chemikálie
Volná lakáza Náklady na výrobu 1 U v 1 cyklu (Kč/U)
500
27 200
18 Náklady na přípravu plně aktivního
Biokatalyzátor lentikats TtL
Biokatalyzátoru lentikats TtL budou zahrnuty do nákladů na výrobu celkového počtu U
Ostatní provozní náklady CELKEM
1400
100
29 400a)
118b)
a) Ekonomika používání imobilizované lakázy je závislá na počtu cyklů opakovaného používání. V průmyslových technologiích se uvádí náklad na biokatalyzátor na 1kg finálního produktu v intervalu 100-500 Euro/kg produktu; b) Počítáno na pracovní objem produkčního reaktoru (R1) poloprovozní jednotky (R1-3,8l)
4.3 PODMÍNKY NAKLÁDÁNÍ S BIOKATALYZÁTOREM Na základě aktuálních legislativních požadavků vztahujících se k problematice geneticky modifikovaných organismů a faktu, že Biokatalyzátor lentikats TtL využívá k produkci
15
POLOPROVOZ enzymu lakáza nativní rekombinantní kvasinky, je v současné době určen výhradně pro ta pracoviště,
kterým
bylo
vydáno
povolení
k uzavřenému
nakládání
s geneticky
modifikovanými organismy pro I. kategorii rizika. Jelikož se však při nakládání s Biokatalyzátor lentikats TtL jedná o I. kategorii rizika, výhledově lze očekávat možnost rozšíření i mimo specializovaná pracoviště.
Pozn.: Dle Zákona č. 78/2004 Sb. ze dne 22. ledna 2014, o nakládání s geneticky modifikovanými organismy a genetickými produkty (příloha 3) „I. kategorie představuje činnosti bez rizika nebo se zanedbatelným rizikem škodlivého působení na zdraví a životní prostředí; tj. činnosti, při nichž k tomu, aby bylo ochráněno draví člověka a zvířat, životní prostředí nebo biologická rozmanitost, postačí úroveň uzavření a ochranná opatření stanovená tímto zákonem pro první kategorii rizika“. V případě obou výše zmiňovaných modelů dochází k deaktivaci rekombinantních kvasinek, ať už ve volné či imobilizované formě, po přídavku 96% etanolu tak, aby jeho výsledná koncentrace byla 20 %, za současného vystavení těmto stresovým podmínkám po dobu 24 hod při 30 °C. V případě vzniku havárie je nutné provést okamžitou deaktivaci materiálu, nejlépe pomocí kombinace dvou koncentrovaných desinfekčních prostředků (např.: SAVO Originál, Ajatin PLUS roztok 10%, Persteril 36%), v poměru 4:1 (deaktivovaný materiál:desinfekční prostředek). Na základě provedené deaktivace, ať už volných či imobilizovaných kvasinek, lze materiál následně zlikvidovat, jako odpad typu 18 01 03 „Odpady, na jejichž sběr a odstraňování, jsou kladeny zvláštní požadavky s ohledem na prevenci infekce“ (kategorie odpadu N).
16
