PERUBAHAN PROPORSI JUMLAH Streptococcus mutans TERHADAP TOTAL BAKTERI PLAK GIGI MAHASISWA SETELAH MENGKONSUMSI CAJUPUTS CANDY

PERUBAHAN PROPORSI JUMLAH Streptococcus mutans TERHADAP TOTAL BAKTERI PLAK GIGI MAHASISWA SETELAH MENGKONSUMSI CAJUPUTS CANDY

AGUSTA PUTRI BALQIS LINDA SOEHARSO

DEPARTEMEN ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2014

ii

PERNYATAAN MENGENAI SKRIPSI DAN SUMBER INFORMASI SERTA PELIMPAHAN HAK CIPTA* Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi berjudul Perubahan Proporsi Jumlah Streptococcus mutans terhadap Total Bakteri Plak Gigi Mahasiswa Setelah Mengkonsumsi Cajuputs Candy adalah benar karya saya dengan arahan dari dosen pembimbing dan belum diajukan dalam bentuk apa pun kepada perguruan tinggi mana pun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir skripsi ini. Dengan ini saya melimpahkan hak cipta dari karya tulis saya kepada Institut Pertanian Bogor.

Bogor, Desember 2014 Agusta Putri Balqis Linda Soeharso NIM F24100020

ii

ABSTRAK AGUSTA PUTRI BALQIS LINDA SOEHARSO. Perubahan Proporsi Jumlah Streptococcus mutans terhadap Total Bakteri Plak Gigi Mahasiswa Setelah Mengkonsumsi Cajuputs Candy. Dibimbing oleh C.HANNY WIJAYA dan BOY M. BACHTIAR. Pembentukan plak yang merupakan biofilm pemicu proses karies sangat dipengaruhi oleh keberadaan Streptococcus mutans (S. mutans) dan proporsinya terhadap total bakteri pada plak gigi. Salah satu metode menghambat aktivitas S.mutans adalah dengan cara mengontrol potensi bakteri ini untuk membentuk koloni dan tumbuh sebagai bagian dari massa biofilm pada permukaan gigi (plak gigi). Upaya ini dapat dilakukan dengan memanfaatkan pangan fungsional Cajuputs Candy yang memiliki komponen bioaktif bersifat antimikroba. Penelitian ini bertujuan menganalisis potensi Cajuputs Candy yang terdiri dari Cajuputs Candy Sucrose (CCS) dan Cajuputs Candy Non Sucrose (CCNS) terhadap penurunan jumlah S.mutans dan proporsinya terhadap total bakteri pada plak gigi menggunakan teknik Real Time Polymerase Chain Reaction ( qPCR). Perlakuan berupa konsumsi 1 butir Cajuputs Candy Sucrose (CCS) atau Cajuputs Candy Non Sucrose (CCNS) masing-masing satu dan dua kali sehari. Hasil yang diperoleh menunjukkan CCS dan CCNS berpotensi menurunkan kuantitas S. mutans dan proporsinya terhadap total bakteri pada plak gigi, serta menurunkan jumlah bakteri non-kariogenik lain di dalam plak gigi. Penurunan jumlah S. mutans dan proporsinya terhadap total bakteri oleh CCS lebih rendah dibandingkan dengan efek CCNS. Penggunaan bahan baku non sukrosa pada Cajuputs Candy dapat meningkatkan efektifitas permen dalam menurunkan kuantitas S. mutans di dalam plak gigi. Konsumsi 1 butir CCNS 2 kali sehari mampu memberikan efek optimum dalam menurunkan kuantitas dan proporsi S. mutans terhadap total bakteri pada plak gigi. Kata kunci : S.mutans, total bakteri, plak gigi, CCS, CCNS, qPCR

ABSTRACT AGUSTA PUTRI BALQIS LINDA SOEHARSO. Proportion Changes of the Amount of Streptococcus mutans to the Total Amount of Bacteria in Student’s Dental Plaque after Consuming Cajuputs Candy. Supervised by C.HANNY WIJAYA and BOY M. BACHTIAR. The formation of plaque which causes caries process is substantialy influenced by the presence of Streptococcus mutans (S. mutans) and its proportion to the total amount of bacteria in dental plaque. One of methods for caries preventing is by controlling the potential of these bacteria to form colonies and grow as part of the mass of biofilm on the surface of the tooth (dental plaque). This effort can be done by consuming Cajuputs Candy, a functional food in the form of candy which has antibacterial bioactive compounds. This reserch was aimed to analayze the potential of two type of Cajuputs Candy ,i.e. Cajuputs Candy Sucrose (CCS) and Cajuputs Candy Non Sucrose (CCNS) in decreasing the amount of S. mutans and its proportion upon the total amount of bacteria in dental plaque by Quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction (qPCR) technique. The treatments studied were one grain of CCS and CCNS consumption respectively once and twice a day. The results showed that both CCS and CCNS potentially reduced the quantity of S. mutans, its proportion to the total amount of bacteria, and the number of non- cariogenic bacteria in dental plaque. Non sucrose ingredient usage in Cajuputs Candy could increase the effectiveness in reducing the quantity of S. mutans in dental plaque. Consuming a CCNS twice per day has the optimum effect in reducing the quantity of S. mutans and its proportion to the total amount bacteria. Keywords: S. mutans, total bacteria, dental plaque, CCS, CCNS, qPCR

iv

PERUBAHAN PROPORSI JUMLAH Streptococcus mutans TERHADAP TOTAL BAKTERI PLAK GIGI MAHASISWA SETELAH MENGKONSUMSI CAJUPUTS CANDY

AGUSTA PUTRI BALQIS LINDA SOEHARSO

Skripsi sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Teknologi Pertanian pada Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan

DEPARTEMEN ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2014

vi

PRAKATA Alhamdulillahirabbil’alamin atas segala nikmat iman, Islam, kesempatan, serta kekuatan yang telah diberikan Allah Subhanahuwata’ala sehingga penulis dapat menyelesaikan karya ilmiah yang berjudul ―Perubahan Proporsi Jumlah Streptococcus mutans terhadap Total Bakteri Plak Gigi Mahasiswa Setelah Mengkonsumsi Cajuputs Candy‖ berhasil diselesaikan. Penulis mengucapkan terima kasih kepada: 1. Prof. Dr. Ir. C. Hanny Wijaya dan Prof. drg. Boy M. Bachtiar, MS Ph.D selaku dosen pembimbing yang telah memberi ilmu, saran, dan doa dalam penyelesaian karya ilmiah ini. Terima kasih kepada Ibu Hanny dan Bapak Boy atas kesabaran dan bimbingan etika, moral, serta pengetahuan yang diberikan. Prof. Dr. Ir. H. Rizal Sjarief Sjaiful N. DESS sebagai dosen penguji yang 2. telah memberikan banyak masukan dalam penyelesaian penulisan skripsi ini. 3. Bapak Zairin Soeharso, Ibu Herlinda, dan Vikri Ramadhani Soeharso sebagai orang tua dan saudara yang selalu mendukung, membimbing, menasihati, dan mendoakan hingga saat ini. 4. Mbak Dessy Sulistya Ashari dan Mbak Maysyaroh yang selalu membantu dan mendampingi selama penelitian dilakukan. Bachtiar, Norman, Tasya, Dini, Nyitnyit, Hamdani, dan Thaher yang telah 5. bersedia membantu kelancaran penelitian ini. 6. Retno Wulandari, Arya Suryadilaga, Triatmaja Pramudhita Wisnu Kusuma, dan Mbak Prastitilaras Nugraheni atas semangat, persahabatan, kesabaran, dan bantuannya selama proses penelitian. Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.

Bogor, Desember 2014

Agusta Putri Balqis Linda Soeharso

DAFTAR ISI DAFTAR TABEL DAFTAR GAMBAR DAFTAR LAMPIRAN PENDAHULUAN

ix ix ix 1

Latar Belakang

1

Tujuan

3

METODOLOGI

3

Subjek Penelitian

3

Alat

3

Bahan

4

Metode Penelitian

4

Pengambilan Sampel Plak Gigi

5

Ekstraksi DNA

6

Standardisasi Konsentrasi DNA

6

Kuantifikasi S. mutans dan Total Bakteri dengan qPCR

7

Perhitungan Jumlah dan Proporsi Bakteri

7

Analisis Statistik

9

HASIL DAN PEMBAHASAN

10

SIMPULAN DAN SARAN

17

Simpulan

17

Saran

18

DAFTAR PUSTAKA

18

LAMPIRAN

21

RIWAYAT HIDUP

35

viii

DAFTAR TABEL

1 2 3 4

Komponen volatil pada Cajuputs Candy Primers S. mutans dan 16sRNA universal total bakteri Pengukuran konsentrasi DNA dan perhitungan kebutuhan standardisasi Pengaruh konsumsi CCS dan CCNS terhadap jumlah bakteri plak gigi

2 4 10 16

DAFTAR GAMBAR Ilustrasi perlakuan dan sampling plak gigi Letak gigi dan letak sumber plak gigi yang digunakan sebagai sampel Ilustrasi tahapan kuantifikasi dengan qPCR Kurva standar S. mutans dan total bakteri Diagram penurunan proporsi S. mutans dan persentase penurunannya setelah konsumsi CCS dan CCNS 6 Diagram Proporsi S. mutans sebelum dan sesudah mengkonsumsi CCS dan CCNS

1 2 3 4 5

5 6 8 9 12 14

DAFTAR LAMPIRAN 1 Surat keterangan lolos komite etik FKG UI 2 Lembar informasi dan surat permohonan kesediaan berpartisipasi dalam penelitian 3 Hasil pengukuran konsentrasi DNA sampel dan perhitungan kebutuhan standardisasi 4 Data berat plak 5 Hasil Data nilai CT S. mutans dan total bakteri 6 Hasil uji sidik ragam dan uji lanjut Dunnett terhadap perubahan proporsi jumlah S. mutans plak gigi 7 Hasil kuantifikasi proporsi S. mutans dan hasil uji sidik ragam PairdeSample T Test.

21 22 27 29 30 32 33

1

PENDAHULUAN Latar Belakang Mulut merupakan alat pencerna makanan pertama yang tidak hanya berperan sebagai pintu masuknya makanan dan minuman. Fungsi mulut besar kaitannya dengan status kesehatan dan kesejahteraan seseorang. Pemeliharaan kebersihan gigi dan mulut merupakan salah satu upaya menjaga dan meningkatkan kesehatan. Salah satu masalah kesehatan rongga mulut dan gigi adalah karies gigi. Karies merupakan kerusakan jaringan keras gigi akibat aktivitas fermentasi karbohidrat oleh mikroorganisme mulut ( Kidd dan Bechal 2004). Menurut Kidd dan Bechal (2004), karies gigi ditandai dengan peristiwa demineralisasi jaringan keras gigi. Proses demineralisasi jaringan keras gigi berkaitan dengan aktivitas metabolisme oleh Streptococcus mutans (S .mutans). S. mutans adalah bakteri gram positif dengan sifat anaerob fakultatif, dapat menghasilkan asam asidurik (Samaranayake 2002), dan mampu memanfaatkan karbohidrat berupa sukrosa sebagai sumber karbon (Marsh et al. 2009). Bakteri ini memiliki enzim glucocyltransferase dan fructosyltransferase yang bersifat spesifik terhadap substrat sukrosa. Enzim-enzim ini mengubah sukrosa menjadi polisakarida glukan dan fruktan (Dennison dan Radolph, 1981). Glukan merupakan sumber makanan utama bakteri, sedangkan fruktan membantu adhesi dan agregasi baketri dalam pembentukan plak (Roeslan 2002). Fenomena pembentukan plak gigi akibat aktivitas S. mutans dapat terjadi di sela-sela sempit antar gigi atau antara gigi dan gusi. Prosedur pembersihan secara mekanis terhadap plak secara total dirasa belum efektif untuk mengatasi masalahan kesehatan mulut akibat plak gigi (Bahar 2011). Salah satu metode menghambat aktivitas S. mutans adalah dengan cara mengontrol potensinya untuk membentuk koloni dan tumbuh sebagai bagian dari massa biofilm pada permukaan gigi (plak gigi). Upaya ini dapat dilakukan dengan memanfaatkan bahan alami sebagai asupan makanan, antara lain minyak kayu putih dan minyak peppermint. Pemanfaatan minyak kayu putih dan minyak pepeermint sebagai salah satu bahan pembuat permen - Cajuputs Candy sebelumnya telah diteliti oleh Wijaya et al. (2002). Cajuputs candy merupakan permen keras dengan kandungan minyak kayu putih dan minyak peppermint sebagai bagian dari komposisinya. Saat ini, terdapat dua jenis Cajuputs Candy, yaitu Cajuputs Candy Sucrose dan Cajuputs Candy Non Sucrose (Wijaya et al. 2013). Cajuputs Candy Sucrose atau CCS adalah permen keras dengan bahan dasar sukrosa dan sirup glukosa, sedangkan Cajuputs Candy Non Sucrose atau CCNS adalah permen keras dengan bahan dasar isomalt dan acesulfame-k tanpa sukrosa. Penggunaan minyak kayu putih dan minyak peppermint menjadikan Cajuputs Candy berpotensi menjaga kesehatan rongga mulut (Wijaya et al 2011). Minyak kayu putih dan minyak peppermint telah diteliti sebelumnya mengandung senyawa volatil bersifat antimikroba. Dilaporkan sebelumnya oleh Sari et al. (2013) bahwa komponen volatil bioaktif dari minyak kayu putih dan peppermint yang terkandung dalam CCS dan CCNS diduga memiliki sifat antimikroba (Tabel

2

1). Komponen volatil yang teridentifikasi merupakan senyawa-senyawa yang dapat digolongkan atas monoterpen, ester aromatik, dan seskuiterpen. Golongan monoterper teroksigenasi merupakan golongan yang paling banyak teridentifikasi (Iftari et al. 2013). Menurut Hart et al. (2000), golongan monoterpen teroksigenasi pada ekstrak minyak kayu putih Melaleuca alternifolia lebih bersifat antimikroba dibandingkan monoterpen hidrokarbon. Tabel 1 Komponen volatil pada Cajuputs Candy No Nama Senyawa Golongan Pustaka Sifat Antimikroba 1 β-pinene Monoterpen hidrokarbon Maggi et al. 2009 2 D-limonene Monoterpen hidrokarbon Inouye et al. 2001 3 1,8-cineole Monoterpen teroksigenasi Inouye et al. 2001; Maggi et al. 2009 4 γ-terpinene Monoterpen hidrokarbon Inouye et al. 2001 5 Linalool Monoterpen teroksigenasi Dwivedi et al. 2012; Maggi et al. 2009 6 Menthone Monoterpen teroksigenasi Inouye et al. 2001 7 Terpinen-4-ol Monoterpen teroksigenasi Jedlickova et al. 2001; Maggi et al. 2009 8 α-terpineol Monoterpen teroksigenasi Inouye et al. 2001; Dwivedi et al. 2012 9 β-caryophyllene Seskuiterpen hidrokarbon Heleno et al. 2011 10 Viridiflorol Seskuiterpen teroksigenasi Maggi et al. 2009 Sumber : Iftari et al. (2013)

Senyawa volatil seperti 1,8-sineol, lilalool, terpineol dan terpinen-4-ol yang diisolasi dari minyak kayu putih Vietnam dilaporkan memiliki kemampuan menghambat pertumbuhan Streptococcus spp. (Jedlickova 1994). Sementara itu, menurut Inouye et al. (2001) kemampuan antimikroba minyak peppermint ditentukan oleh keberadaan senyawa volatil mentol dan menton. Hal ini memperkuat hasil penelitian Wijaya et al. (2013) yang menunjukkan efektifitas minyak kayu putih sebagai komponen penyusun formula CCS dan CCNS dalam menekan pembentukan biofilim oleh S. mutans. Meskipun CCS dan CCNS cukup efektif menghambat pertumbuhan S. mutans, namun karena penelitian sebelumnya dilakukan terhadap S.mutans strain laboratorium, sehingga masih diperlukan informasi yang mengungkapkan efektifitas CCS dan CCNS terhadap pertumbuhan S. mutans secera in vivo. Dengan demikian, perlu dilakukan pengujian potensi Cajuputs Candy terhadap pertumbuhan S. mutans pada plak gigi. Ditambah lagi, beberapa studi terakhir menunjukkan bahwa jenis makanan yang diasup mempengaruhi kesehatan rongga mulut seseorang (Bahar 2011). Oleh karena itu asupan pangan fungsional seperti Cajuputs Candy diharapkan dapat mendukung pemeliharaan kesehatan rongga mulut melalui penghambatan pertumbuhan S. mutans pada plak gigi.

3

Tujuan Tujuan penelitian ini adalah untuk menguji potensi Cajuputs Candy, yang terdiri dari Cajuputs Candy Sucrose dan Cajuputs Candy Non Sucrose, dalam menurunkan kuantitas S. mutans pada plak gigi menggunakan teknik qPCR. Hasil penelitian ini diharapkan dapat menambah informasi ilmiah mengenai potensi Cajuputs Candy sebagai asupan pangan fungsional dalam mengontrol pertumbuhan S. mutans, yang merupakan bakteri dominan di dalam plak gigi penyebab karies.

METODOLOGI Subjek Penelitian Penelitian dilakukan setelah mendapatkan persetujuan dari komite etik penelitian yang diperoleh dari komite etik riset FKGUI (Nomor : 46/ Ethical Clearance/ FKGUI/ VI/ 2014). Surat persetujuan oleh komite etik terlampir pada Lampiran 1. Subjek penelitian adalah mahasiswa/i Institut Pertanian Bogor yang telah menandatangani informed consent dan telah menyetujui semua peraturan selama penelitian (Lampiran 2). Usia subjek berkisar 20 sampai 22 tahun. Kategori inklusi berupa subjek tidak merokok, tidak menggunakan kawat gigi, dan tidak dalam keadaan hamil. Kriteria subjek penelitian seperti yang disebutkan, dimaksudkan untuk meminimalkan kemungkinan ragam yang tinggi. Pengetahuan subjek mengenai kebersihan mulut dan gigi diasumsikan sama (homogen) apabila subjek penelitian memiliki tingkat pendidikan yang setara mahasiswa/i. Pada penelitian ini subjek terdiri dari 6 orang. Masing-masing subjek akan diberikan 4 perlakuan. Perilaku subjek terhadap pola makan tidak ditetapkan karena hasil penelitian ini diharapkan mampu menggambarkan potensi Cajuputs Candy Sucrose dan Cajuputs Candy Non Sucrose yang dapat dimanfaatkan tanpa dipengaruhi oleh pola makan.

Alat Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini adalah tabung Eppendorf 1,5 ml (RNAse and DNAse free, ExtraGene Inc.), cotton bud (didapat secara komersial), kapas (didapat secara komersial di apotik), kain kasa (didapat secara komersial di apotik), semprotan angin, pipet mikro (Eppendorf, Rainin, Biorad), tip mikropipet (RNAse and DNAse free, ExtraGene Inc.), api bunsen, timbangan analitik (Ohauss), centrifuge (SORVALL® Legend RT), freezer -20 ˚C (GEA), vortex (Biorad BR-2000), Spektrofotometer (UV/Vis Ultraspace 4300 Pro), FG Fast tube (MicroAmp® 48 Tubes, Applied Biosystems), Optical caps tube (MicroAmp® 8-Cap Strip, Applied Biosystems), kotak pendingin, dan mesin qPCR (StepOne AB Applied Biosystems).

4

Bahan Cajuputs Candy yang digunakan dalam penelitian ini adalah Cajuputs Candy Sucrose (CCS) dan Cajuputs Candy Non Sucrose (CCNS) komersial sebagai bahan yang diuji. Bahan yang digunakan pada tahap pengambilan sampel plak gigi adalah Phosphate Buffer Salin (PBS, pH 7,2) steril (didapat secara komersial dari stockroom IPB). Bahan yang digunakan dalam tahap kuantifikasi adalah akuabides steril (didapat secara komersial di toko kimia), alkohol 70% (didapat secara komersial di toko kimia), es batu, 16sRNA universal primers (forward primer dan reverse primer, dibeli di PT. Genetika Science Indonesia), S. mtans primers (forward primers dan reverse primer dibeli di PT. Genetika Science Indonesia), not- DEPC water (Applied Biosystems), dan SYBR® Select Master Mix (Applied Biosystems). Urutan basa primers S. mutans dan 16sRNA bakteri disajikan pada Tabel 2. Tabel 2 Primer S. mutans dan 16sRNA universal total bakteri Primer S. mutans fwd S. mutans rvs 16s RNA fwd 16s RNA rvs

Sekuens Primer (5'-3') GGTTTAACGTCAAAATTAGCTGTATTAGC CTCAACCAACCGCCACTGTT TTAAACTCAAAGGGATTGACGG CTCACGACACGAGCTGACGAC

Sumber : Shemesh et al. (2007)

Metode Penelitian Pada penelitian ini dilakukan analisis potensi Cajuputs Candy Sucrose (CCS) dan Cajuputs Candy Non Sucrose (CCNS) terhadap kuantitas S. mutans pada plak gigi menggunakan teknik Real Time-PCR atau disebut juga qPCR. Teknik ini merupakan teknik kuantifikasi biomolekuler yang bekerja berdasarkan prinsip amplifikasi DNA (Yuwono 2006). Pemilihan teknik ini didasari oleh keuntungan utama dari penggunaan teknik ini dibandingkan dengan metode kultur konvensional, yaitu sensitifitas yang tinggi, lebih spesifik, dan cepat (Yano 2002). Penelitian ini diawali dengan sampling (pengumpulan) plak gigi sebelum diberi perlakuan (mengkonsumsi 1 butir CCS atau CCSN), selanjutnya kepada subjek diberikan CCS dan CCNS yang dikonsumsi dengan cara dikulum hingga permen habis (tidak dikunyah). Pengambilam sampel plak gigi dilakukan kembali setelah mengkonsumsi CCS atau CCNS. Sampling awal dilakukan di kediaman setiap subjek, sedangkan sampling akhir dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Pangan Institut Pertanian Bogor. Perlakuan (P) yang dilakukan terhadap subjek penelitian berupa : K : Tanpa pemberian bahan uji (CCS atau CCNS). P1 : Konsumsi 1 butir CCS 2 kali dalam sehari (1 jam dan 6 jam setelah menyikat gigi pada pagi hari). P2 : Konsumsi 1 butir CCS 1 kali dalam sehari (6 jam setelah menyikat gigi pada pagi hari).

5

P3 : Konsumsi 1 butir CCNS 2 kali dalam sehari (1 jam dan 6 jam setelah menyikat gigi pada pagi hari). P4 : Konsumsi 1 butir CCNS 1 kali dalam sehari (6 jam setelah menyikat gigi pada pagi hari). Pengambilan sampel plak gigi dilakukan dalam 2 waktu untuk setiap kelompok kontrol dan perlakuan. Plak gigi akan diambil pada jam 06.00 WIB (segera setelah sikat gigi) dan jam 14.00 WIB. Pengambilan sampel plak pada kelompok kontrol diakukan segera setelah menyikat gigi dan 8 jam setelah menyikat gigi. Perlakuan dan pengambilan sampel plak gigi diilustrasikan melalui Gambar 1. Jam (WIB)

06.00

06.00

Sampling Perlakuan

07.00

09.00

12.00

Sampling

Sampling Konsumsi CCS atauCCNS

Menyikat gigi

14.00

Sarapan

Konsumsi CCS atau CCNS dan makan siang.

(a) Jam (WIB) Sampling Perlakuan

06.00

06.00

09.00

12.00

Sampling Menyikat gigi

12.00

14.00

Sampling Makan siang

Sarapan

Konsumsi CCS atau CCNS dan makan siang.

(b) Gambar 1 Ilustrasi perlakuan dan pengambilan sampel plak gigi. (a) Kelompok perlakuan mengkonsumsi CCS atau CCNS 2 kali sehari. (b) Kelompok perlakuan mengkonsumsi CCS atau CCNS 1 kali sehari. Pengambilan Sampel Plak Gigi (Pearson dan Hutton 2002) Pengambilan sampel plak gigi dilakukan dengan metode swab pada permukaan bukal keempat gigi molar pertama rahang atas dan bawah (M1). Bila pada M1 telah dilakukan pengambilan plak gigi maka plak gigi dikumpulkan dari permukaan bukal gigi premolar 2 (P2). Menurut Reloy et al. (2009), gigi molar pertama dan premolar yang berfungsi untuk mengunyah makanan, memiliki bentuk permukaan yang memudahkan retensi sisa makanan sehingga sangat ideal untuk pertumbuhan bakteri penyebab karies. Kidd dan Bechal (2004) melaporkan gigi molar bersifat sangat rentan terhadap penyakit karies dan dapat meluas hingga ke bagian gigi premolar. Pemilihan letak pengambilan plak gigi pada penelitian ini didasari pada teori tersebut. Letak gigi yang dikoleksi plaknya ditunjukkan pada Gambar 2. Metode swab dilakukan dengan mengusapkan cotton bud steril pada permukaan bukal gigi. Pengambilan plak gigi dilakukan dengan terlebih dahulu mengeringkan permukaan gigi dari saliva. Pengeringan dilakukan dengan cara

6

diangin-anginkan menggunakan semprotan angin. Pembendungan terhadap aliran saliva juga dilakukan dengan mengganjalkan kapas pada sela-sela pipi dan gigi. Plak gigi kemudian dikoleksi dan dimasukkan ke tabung Eppendorf yang telah diisi dengan Phosphat Buffer Salin (PBS pH 7,2) steril. Setiap sampel selanjutnya disimpan dalam lemari pendingin (-20oC) sampai digunakan pada tahapan selanjutnya. Gigi Premolar Kedua Gigi Molar Pertama

Gambar 2 Letak gigi dan sumber plak gigi yang digunakan sebagai sampel (Anonim 2012). Ekstraksi DNA (Jara et al. 2008) Ekstraksi DNA adalah tahap awal dalam proses analisis dengan metode qPCR. Ekstraksi DNA dilakukan dengan tahapan sebagai berikut: sampel plak dalam tabung Eppendorf divorteks lalu disentrifugasi dengan kecepatan 10.000 ×g selama 1 menit. Supernatan dibuang dan pelet yang tertinggal ditambahkan 1 ml larutan PBS steril untuk dilakukan tindakan washing pada sampel, kemudian divortex selama 10 detik. Sampel dalam tabung disentrifugasi kembali dengan kecepatan 10.000 ×g selama 1 menit. Hasil sentrifugasi akan memisahkan kembali supernatan dan pelet di dalam tabung. Supernatan yang terbentuk selanjutnya dibuang dan ke dalam tabung Eppendorf ditambahkan akuabides sebanyak 100 µL. Sampel kemudian diinkubasi pada suhu 100˚C selama 20 menit dalam waterbath, tabung sampel dikeluarkan dan segera dibenamkan ke dalam kotak berisi pecahan es selama 10 menit. Sampel selanjutnya dihomogenisasi dengan vortex selama 10 detik kemudian disentrifugasi kembali selama 2 menit dengan kecepatan 10.000 ×g. Sampel membentuk bagian pelet dan supernatan, bagian supernatan diambil dan dipindahkan ke dalam tabung Eppendorf yang baru sebagai sampel yang digunakan. Pada penelitian ini, DNA yang diekstraksi dari S. mutans ATCC 25175 digunakan sebagai kontrol positif pada setiap kali dilakukan amplikasi PCR. Standardisasi Konsentrasi DNA (Li et al. 2003) Tahap standardisasi diawali dengan mengukur konsentrasi hasil ekstraksi DNA dengan metode spektrofotometri pada panjang gelombang 260 nm. Pengukuran konsentrasi DNA dilakukan sebagai berikut: akuabides dimasukkan sebanyak 500 µl ke dalam kuvet pertama sebagai blanko. Akuabides dimasukkan ke dalam kuvet-kuvet berikutnya sebanyak 495 µl dan DNA hasil ekstraksi dari sampel plak gigi ditambahkan ke dalam kuvet sebanyak 5 µl. Kuvet dimasukkan ke dalam alat spektrofotometer dan konsentrasinya diukur pada panjang

7

gelombang 260 nm (λ=260 nm). Konsentrasi DNA pada setiap dihitung dengan rumus: Faktor pengali 50 pada rumus di atas adalah penyetara dengan 50 µg/ml untai ganda DNA (Thermo Scientific 2013). Sampel DNA yang sudah diketahui konsentrasinya lalu distandardisasi sehingga semua mempunyai konsentrasi sebesar 100µg/ml dengan rumus: Keterangan: V1 : Volume awal sampel M1 : Konsentrasi DNA sampel yang terukur V2 : Volume yang dibutuhkan untuk melakukan percobaan M2 : Konsentrasi DNA standar (100 µg/ml) Kuantifikasi S. mutans dan Total Bakteri dengan qPCR ( Herold et al. 2004) Kuantifikasi dilakukan dengan membuat campuran pereaksi sebanyak 10µL terlebih dahulu. Campuran pereaksi terdiri dari 5 μl SYBR Green, 0,5 μl forward primer gen (10mM), 0,5 μl reverse primer gen (10mM), 3 µl sampel DNA (100µg/ml), dan 1 μl not-DEPC water. Campuran pereaksi kemudian disentrifugasi dengan kecepatan 1500 rpm selama 1 menit. Primers yang digunakan untuk menganalisis DNA sampel dengan menggunakan qPCR disajikan pada Tabel 1 . Selama proses amplifikasi dengan qPCR berlangsung, dilakukan pengamatan terhadap nilai CT. Secara singkat tahap preparasi hingga kuantifikasi diilustrasikan pada Gambar 3. Perhitungan Jumlah dan Proporsi Bakteri (Livak dan Schmittgen 2008) Jumlah S. mutans dan total bakteri didapat berdasarkan korelasi nilai CT dan log cfu/ml pada kurva standar bakteri target. Kurva standar didapat dari kuantifikasi DNA standar S. mutans dan 16sRNA total bakteri untuk menentukan kuantitas S. mutans dan total bakteri dari sampel yang tidak diketahui melalui interpolasi. Hasil korelasi nilai CT dan log cfu/ml masing-masing target dapat dilihat pada Gambar 4. Perhitungan proporsi S. mutans dilakukan secara relatif terhadap total bakteri menggunakan metode kuantitatif relatif. Perhitungan jumlah relatif DNA total (N) pada setiap perlakuan dinyatakan sebagai persentase S. mutans terhadap jumlah bakteri total disetiap pengkuran. Berikut ini adalah cara perhitungan proporsi jumlah relatif DNA total (N) :

Tingkat perubahan proporsi S. mutans terhadap total bakteri antara sebelum dan sesudah mengkonsumsi CCS atau CCNS dan pada kondisi segera setelah menyikt gigi dan 8 jam setelah menyikat gigi pada kelompok kontrol dihitung melalui persamaan berikut:

8

Pengambilan sampel plak gigi. Plak gigi Ekstraksi DNA Sentrifugasi 10.000 ×g selama 1 menit, buang supernatan.

Washing dengan larutan PBS steril 1 mL.

Sentrifugasi 10.000 ×g selama 1 menit, buang supernatan.

Penambahan larutan dd(H2O) 100 µL. Pemanasan dengan waterbath 100 ˚C, 20 menit.

Pendinginan dengan es batu, 10 menit.

Pemindahan supernatan ke dalam tabung baru.

Pengukuran dan standardisasi konsentrasi DNA bakteri

Penyimpanan DNA di suhu beku. 500 µl dd(H2O) dimasukkan dalam kuvet (blanko).

495 µl dd(H2O) + 5 µl DNA sampel dimasukkan dalam kuvet sebagai sampel.

Diukur konsentrasinya pada panjang gelombang 260 nm. Standardisasi dengan metode pengenceran Deteksi dan kuantifikasi bakteri dengan qPCR Hasil

DNA bakteri + Campuran pereaksi qPCR.

Kuantifikasi dengan alat qPCR.

Gambar 3 Ilustrasi tahapan kuantifikasi dengan qPCR

9

Log cfu/ml

10 8 6 y = -0.4512x + 14.925 R² = 0.9703

4 2 0 10

15

20

CT

25

30

35

(a) 10 Log cfu/ml

8 6 4

y = -0.3796x + 12.732 R² = 0.9435

2 0 10

15

20

25

30

CT

(b) Gambar 4 Kurva standar S. mutans (a) dan total bakteri (b)

Sumbu X menunjukkan nilai CT yang didapat dari amplifikasi dan sumbu Y menunjukkan jumlah bakteri (cfu/ml) yang diubah ke dalam bentuk log cfu/ml . Nilai R2 = 0,9703 pada kurva standar S. mutans menunjukkan sebesar 97, 03 % kuantitas S. mutans (log cfu/ml) dapat diperoleh melalui model persamaan tersebut. Nilai R2 = 0,9435 pada kurva standar total bakteri menunjukkan sebesar 94,35 % kuantitas total bakteri (log cfu/ml) dapat diperoleh melalui model persamaan tersebut.

Analisis Statistik Pada penelitian ini, perubahan proporsi S. mutans terhadap total bakteri dilakukan dengan menggunakan persamaan 2-ΔΔCT (Livak dan Schmittgen 2008). Perbedaan perubahan proporsi tiap perlakuan selanjutnya dibandingkan dan diuji dengan uji sidik ragam dengan membandingkan rata-rata nilai hasil perhitungan jumlah S. mutans dan proporsinya terhadap total bakteri menggunakan PairedSample T Test dan uji lanjut Dunnett. Analisis statistik dilakukan pada taraf kepercayaan 95% (α = 0,05) menggunakan program SPSS Inc. 20.

10

HASIL DAN PEMBAHASAN Salah satu metode menghambat aktivitas S. mutans adalah dengan cara mengontrol potensi mikroba tersebut untuk membentuk koloni dan tumbuh sebagai bagian dari massa biofilm pada permukaan gigi (Kidd dan Bechal 2004). Pada penelitian ini, dilakukan pengujian potensi Cajuputs Candy Sucrose (CCS) dan Cajuputs Candy Non Sucrose (CCNS) dalam menghambat jumlah S. mutans dan proporsi terhadap total bakteri pada plak gigi. Perbedaan perlakuan yang diujikan terletak pada jenis permen dan frekuensi konsumsi permen tersebut. Perbedaan frekuensi konsumsi ini didasari pada teori pembentukan plak. Metode kuantifikasi yang dilakukan dalam penelitian ini adalah teknik qPCR. Teknik ini merupakan teknik kuantifikasi biomolekuler yang bekerja berdasarkan prinsip amplifikasi DNA (Yuwono 2006). Kebutuhan sampel untuk teknik ini berupa untaian DNA yang telah terpisah dari komponen lain penyusun sel (Rudiretna dan Handoyo 2000). Tahapan ekstraksi DNA yang dilakukan bertujuan memperoleh untaian DNA, dilakukan dengan metode thermal shock. Pengukuran konsentrasi DNA dilakukan setelah ekstraksi DNA, bertujuan untuk mengetahui keberadaan DNA dan kuantitas DNA (Yuwono 2006). Keberadaan dan kuantitas DNA diketahui sebagai hasil pengukuran konsentrasi DNA. Pengukuran konsentrasi DNA dilakukan dengan teknik spektrofotometri (Yuwono 2006). Hasil pengukuran konsentrasi DNA ditunjukkan pada Tabel 3 (Data lengkap terlampir pada Lampiran 3). Konsentrasi DNA yang terukur tampak beragam, dapat dikarenakan oleh banyaknya plak yang terambil (dalam gram) tidak sama. Data berat plak yang terambil terlampir pada Lampiran 4. Konsentrasi DNA standar yang dibutuhkan untuk kuantifikasi adalah 100 ng/µl. Konsentrasi sampel DNA yang terukur belum memenuhi standar yang dibutuhkan sehingga diperlukan standardisasi dengan metode pengenceran dengan akuabides steril. Sampel yang telah distandardisasi kemudian dilakukan kuantifikasi menggunakan teknik qPCR. Tabel 3 Hasil pengukuran konsentrasi DNA dan perhitungan kebutuhan standardisadi konsentrasi DNA Vol. Vol. Vol. Vol. [DNA]* [DNA]** Sampel sampel dd(H2O) sampel dd(H2O) ng/µl ng/µl (µl) (µl) (µl) (µl) 275 36,4 63,6 335 29,9 70,1 310 32,3 67,7 290 34,5 65,5 420 23,8 76,2 340 29,4 70,6 K 430 23,3 76,7 110 90,9 9,1 235 42,6 57,4 255 39,2 60,8 245 40,8 59,2 315 31,7 68,3 Ket: * = Sebelum mengkonsumsi CCS atau CCNS dan 1 jam setelah menyikat gigi untuk kelompok kontrol. ** = Sesudah mengkonsumsi CCS atau CCNS dan 8 jam setelah menyikat gigi pada kelompok kontrol.

11

Tabel 3 (lanjutan) Sampel

CCS 2x

CCS 1x

CCNS 2x

CCNS 1x

[DNA]* ng/µl 285 290 320 305 335 360 375 195 340 250 250 355 330 150 360 220 330 245 133 255 125 365 315 210

Vol. sampel (µl) 35,1 34,5 31,3 32,8 29,9 27,8 26,7 51,3 29,4 40 40 28,2 30,3 66,7 27,8 45,5 30,3 40,8 75,2 39,2 80 27,4 31,7 47,6

Vol. dd(H2O) (µl) 64,9 65,5 68,8 67,2 70,1 72,2 73,3 48,7 70,6 60 60 71,8 69,7 33,3 72,2 54,5 69,7 59,2 24,8 60,8 20 72,6 68,3 52,4

[DNA]** ng/µl 115 250 205 355 365 400 345 265 365 320 345 230 235 355 240 235 250 120 310 360 115 125 320 250

Vol. sampel (µl) 87 40 48,8 28,2 27,4 25 29 37,7 27,4 31,3 29 43,5 42,6 28,2 41,7 42,6 40 83,3 32,3 27,8 87 80 31,3 40

Vol. dd(H2O) (µl) 13 60 51,2 71,8 72,6 75 71 62,3 72,6 68,8 71 56,5 57,4 71,8 58,3 57,4 60 16,7 67,7 72,2 13 20 68,8 60

Ket: * = Sebelum mengkonsumsi CCS atau CCNS dan 1 jam setelah menyikat gigi untuk kelompok kontrol. ** = Sesudah mengkonsumsi CCS atau CCNS dan 8 jam setelah menyikat gigi pada kelompok kontrol.

Kuantifikasi terhadap S. mutans dilakukan dengan cara mengamati nilai CT yang merupakan data output dari teknik qPCR. Nilai CT ditentukan sebagai siklus saat perpendaran mulai terdeteksi diatas background dan secara proporsional berbanding terbalik dengan logaritma jumlah molekul DNA awal (Shemesh et al. 2007). Jika terdapat jumlah DNA yang besar maka nilai CT yang terukur berangka kecil, sebaliknya untuk jumlah DNA yang sedikit akan memiliki nilai CT yang besar (Handbook Life Technologies Realtime PCR 2012). Data nilai CT setiap sampel terlampir pada Lampiran 5. Hasil perhitungan proporsi S. mutans merupakan perhitungan kondisi relatif terhadap keadaan sebelum konsumsi CCS atau CCNS. Hasil perhitungan terhadap proporsi S. mutans setelah konsumsi CCS atau CCNS digambarkan melalui Gambar 5.

12

Menurut Livak dan Schmittgen (2008), perubahan berupa penurunan proporsi suatu gen target ditunjukkan dengan nilai kelipatan relatif (N) dibawah 1 (N < 1). Pada Gambar 5 dapat dilihat bahwa proporsi S. mutans mengalami penurunan setelah mengkonsumsi CCS atau CCNS. Kondisi ini berbeda nyata (α < 0,05) dengan kelompok kontrol (hasil analisis statistik terlampir pada Lampiran 6). Besarnya penurunan proporsi S. mutans akibat mengkonsumsi CCS atau CCNS dinyatakan sebagai persentase penurunan proporsi yang diperoleh dengan membandingkan nilai proporsi S. mutans setiap kelompok perlakuan dengan kelompok kontrol. Konsumsi CCS atau CCNS 1 kali sehari dilakukan pada waktu 1 jam setelah menyikat gigi. Waktu 1 jam sesudah menyikat gigi dipilih karena 0-4 jam pertama bakteri streptococci tunggal sebagai koloni awal (fase adaptasi), membentuk koloni pada pelikel yang terbentuk pada permukaan gigi (Kidd dan Bechal 2004). Konsumsi CCS atau CCNS 2 kali sehari dikalukan pada waktu 1 dan 6 jam setelah menyikat gigi. Waktu 1 jam dipilih karena alasan yang sama dengan alasan pada perlakuan konsumsi CCS atau CCNS 1 kali sehari, sedangkan waktu 6 jam setelah menyikat gigi dipilih karena 2-8 jam pertama streptococci yang menempel menjenuhkan tempat perlekatannya (Sujana 2012). Perbedaan ini dimaksudkan sebagai bentuk peningkatan paparan kandungan bioaktif antimikroba dari CCS atau CCNS pada konsumsi 2 kali sehari. 2.50

Proporsi S. mutans

2,343 ± 0,159

% Relatif Terhadap Kontrol

2.00 60, 14 %

62, 56 % 80, 48 %

1.50 0,934 ± 0,430

1.00

89, 32 %

0,8771± 0,297 0,457 ± 0,228

0.50

0,2501± 0,126

0.00 K

CCS 2x

CCNS 1x

CCS 1x

CCNS 2x

Kelompok Perlakuan

Gambar 5. Proporsi S. mutans dan persentase penurunannya setelah konsumsi CCS dan CCNS. K = tanpa perlakuan pemberian CCS dan CCNS. Proporsi pada gambar merupakan hasil perhitungan menggunakan persamaan 2 –(∆∆CT). Persentase penurunan diperoleh dengan membandingkan proporsi S. mutans setelah mengkonsumsi CCS atau CCNS dengan proporsi S. mutans pada kelompok kontrol. Persentase penurunan proporsi S. mutans setelah mengkonsumsi CCS atau CCNS tampak memiliki nilai yang beragam. Hasil perhitungan menunjukkan persentase penurunan proporsi S. mutans terbesar merupakan perlakuan setelah

13

mengkonsumsi CCNS 2 kali sehari (89,32 %), kemudian akibat mengkonsumsi CCS 1 kali sehari (80, 48 %), selanjutnya akibat mengkonsumsi CCNS 1 kali sehari (62,56 %), dan persentase penurunan terendah akibat mengkonsumsi CCS 2 kali sehari (60,14 %). Keberagaman nilai ini diduga sebagai dampak perbedaan perlakuan yang diberikan kepada subjek. Hasil perhitungan ini mengindikasikan bahwa CCS atau CCNS berpotensi menurunkan proporsi S. mutans. Penurunan kuantitas S. mutans diduga merupakan akibat adanya komponen bioaktif yang bersifat antimikroba pada CCS dan CCNS yang telah dilaporkan oleh Sari et al. (2013). Dilaporkan sebelumnya oleh Reichling et al. (2009), komponen 1,8-cineole dari minyak kayu putih, menthol, dan menthone dari minyak peppermint yang juga terkandung pada CCS maupun CCNS memiliki sifat hidrofobik yang mampu meningkatkan permeabilitas membran sitoplasma, menghambat respirasi sel, mengganggu pembentukan protein pengikat membran dan mengganggu proses transportasi ion yang akhirnya dapat menyebabkan kematian sel. Menurut Oyedemi et al. (2009), mekanisme bakterisidal komponen αterpineol dan γ-terpinen terhadap bakteri gram positif adalah dengan menyebabkan kebocoran membran luar bakteri yang akhirnya menyebabkan kematian. Diketahui bahwa S. mutans adalah bakteri gram positif (Samaranayake 2002), diduga mekanisme tersebut yang menyebabkan penurunan kuantitas S. mutans setelah mendapat paparan komponen bioaktif antimikroba dari CCS dan CCNS. Menurut Jedlickova (1994), komponen α-terpineol dan terpinen-4-ol dari kandungan minyak kayu putih adalah senyawa yang efektif menurunkan pertumbuhan Streptococcus spp. Galvao et al. (2012) melaporkan bahwa ekstrak peppermint memiliki sifat antimikroba terhadap S. mutans. Kandungan 1,8cineole dan β-caryophyllene dari ekstrak Curcuma longa L. dari India juga dilaporkan mampu menurunkan pertumbuhan dan produksi asam oleh S. mutans, kemampuan melekat serta pembentukan biofilm oleh bakteri tersebut ( Lee et al. 2011). Penjelasan yang sama juga dilaporkan oleh Heleno et al. (2010) bahwa βcaryophyllene dari bagian bunga Tithonia diversifolia dapat menghambat pertumbuhan S. mutans. Komponen terpen yang bersifat lipofilik dari minyak esensial Melaleuca alternifolia, tanaman khas Australia, bekerja terhadap lapisan phospholipid membran sel dan dapat mengganggu struktur dan fungsi membran sel, termasuk di dalamnya adalah komponen terpinen-4-ol (Allaker and Douglas 2009). Aktivitas komponen-komponen tersebut yang juga terdapat dalam CCS dan CCNS diduga dapat merusak komponen dinding sel S. mutans sehingga diduga berakibat pada penurunan kuantitas bakteri tersebut, seperti yang terlihat pada hasil penelitian ini. Gambar 6 menunjukkan proporsi S. mutans sebelum dan sesudah mengkonsumsi CCS atau CCNS. Terlihat bahwa proporsi awal kelompok kontrol dan setiap kelompok perlakuan berbeda-beda. Proporsi S. mutans sebelum mengkonsumsi permen yang tertinggi adalah pada kelompok perlakuan sebelum mengkonsumsi CCNS 2 kali sehari dan terendah adalah pada kelompok kontrol. Pengaruh mengkonsumsi CCS dan CCNS terukur sebagai perubahan proporsi S. mutans.

14

Perubahan proporsi S. mutans terbesar adalah akibat mengkonsumsi CCNS 2 kali sehari sedangkan perubahan proporsi terendah adalah akibat mengkonsumsi CCS 2 kali sehari. Hasil uji sidik ragam dan Paired Sample T-Test menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan (α < 0.05) antara proporsi S. mutans sebelum dan sesudah mengkonsumsi CCNS 2 kali sehari.

0.140

Proporsi S. mutans

0.120

1 jam setelah menyikat gigi

Sebelum

8 jam setelah menyikat gigi

Sesudah

0.100 0.080 0.060 0.040 0.020 0.000 K

CCS CCS2x2

CCS CCS 1x 1

CCNS 2x 2 CCNS

CCNS11x CCNS

Gambar 6 Proporsi S. mutans sebelum dan sesudah mengkonsumsi CCS dan CCNS. Proporsi S. mutans sebelum dan sesudah mengkonsumsi CCS atau CCNS, serta proporsi S. mutans 1 jam dan 8 jam setelah menykat gigi pada kelompok kontrol, masing-masing dihitung dengan persamaan 2 –(∆CT). * = hasil uji sidik ragam dan paired –sample t test terhadap perubahan proporsi S. mutans akibat konsumsi CCNS 2 kali sehari menunjukkan perbedaan yang signifikan atara proporsi sebelum dan sesudah mengkonsumsi CCNS (α < 0,05). Fenomena ini dapat dijelaskan dari variabel pembeda pada perlakuan, yaitu jenis dan frekunsi Cajuputs Candy yang dikonsumsi. CCS mengandung sukrosa sebagai pemanis sedangkan CCNS mengandung isomalt dan acesulfame-k sebagai pemanis. Sukrosa dikenal juga sebagai gula pasir mempunyai potensi kariogenik yang tinggi (Touger dan Loveren 2003). Sukrosa terdiri dari monosakarida glukosa dan fruktosa. Komponen ini dapat dengan cepat dimetabolisme oleh S. mutans menjadi energi dan polisakarida ekstraseluler yang berperan dalam proses pembentukan plak (Dennison and Radolph, 1981). Mengkonsumsi makanan yang mengandung gula terutama sukrosa, dapat menyebabkan pembentukan glikoprotein yang lengket pada gigi (Bahar 2011). Peran enzim glucosyltransferase (GTF) dan fructosyltransferase (FTF) yang diproduksi S. mutans bersifat spesifik terhadap substrat sukrosa (Dennison dan Radolph, 1981). Enzim-enzim ini mengubah sukrosa menjadi polisakarida glukan (dekstran) dan fruktan (levan). Glukan merupakan sumber makanan utama bakteri, sedangkan fruktan membantu adhesi dan agregasi baketri dalam pembentukan plak (Roeslan 2002). Keberadaan sukrosa sebagai komponen pemanis pada CCS diduga masih mampu dimetabolisme oleh S. mutans. Dugaan ini terlihat dari

15

porporsi S. mutans yang mengalami penurunan namun dalam persentase yang rendah setelah mengkonsumsi CCS. Penurunan proporsi S. mutans setelah mengkonsumsi CCS 2 kali sehari lebih rendah dibandingkan dengan konsumsi CCS 1 kali sehari. Dilihat dari perlakuan yang diberikan, perbedaan terletak pada frekuensi mengkonsumsi Cajuputs Candy dan waktu konsumsi. Konsumsi CCS 1 kali sehari dilakukan pada waktu 1 jam sebelum makan siang, sedangkan CCS 2 kali sehari dilakukan 1 jam dan 6 jam setelah menggosok gigi . Bahar (2011) menyebutkan bahwa faktor frekuensi asupan makanan yang mengandung pemanis sukrosa lebih beresiko meningkatkan pembentukan plak dibandingkan dengan besarnya konsentrasi pemanis yang diasup itu sendiri. Hasil penelitian mengindikasikan adanya pengaruh frekuensi asupan sukrosa dari CCS. Perbedaan frekuensi mengkonsumsi CCS diduga berdampak pada penurunan proporsi S. mutans yang berbeda, dimana proporsi S. mutans setelah mengkonsumsi CCS 1 kali sehari lebih rendah dibandingkan CCS 2 kali sehari. Perbedaan ini diduga akibat kemampuan S. mutans dalam manfaatkan sukrosa untuk menjadi massa dalam plak (Samaranayake 2002). Hasil sebaliknya terlihat akibat konsumsi CCNS 1 dan 2 kali sehari. Peningkatan frekuensi konsumsi CCNS menyebabkan penurunan proporsi S. mutans yang semakin besar. Isomalt adalah pemanis yang sulit dimetabolisme oleh mikroorganisme (Mayo and Ritchie 2009). Hasil penelitian ini mengindikasikan penggunaan bahan selain sukrosa pada CCNS memberikan efek penurunan proporsi S. mutans yang lebih tinggi dabiandingkan dengan pemakaian bahan berupa sukrosa pada CCS. Dilaporkan sebelumnya oleh Iftari et al. (2013) bahwa penghambatan pembentukan massa biofilm akibat pemberian CCNS paling optimum adalah hingga 4 jam waktu inkubasi, dan potensi CCNS melemah setelah waktu 4 jam. Menurut Beckers dan Hoeven (1982), aktivitas pembentukan biofilm oleh S. mutans pada waktu 2 jam pertama masih sangat lemah dikarenakan pada waktu 2 jam pertumbuhan bakteri ini memasuki awal fase log. Fenomena ini diduga yang menjadi penyebab konsumsi CCNS 2 kali sehari pada waktu 1 dan 6 jam setelah menyikat gigi memiliki potensi penurunan proporsi S. mutans yang lebih optimum dibandingkan dengan konsumsi CCNS 1 kali sehari pada waktu 6 jam setelah menyikat gigi. Frekuensi paparan komponen bioaktif antimikroba pada perlakuan konsumsi CCNS 2 kali sehari diduga memperkuat efek antimikroba pada permen tersebut. Pada perlakuan mengkonsumsi CCNS 1 kali sehari pada waktu 6 jam setelah menyikat gigi memiliki potensi penurunan proporsi S. mutans yang lebih rendah dibandingkan dengan konsumsi permen tersebut sebanyak 2 kali sehari. Diduga hasil ini desebabkan oleh pembentukan plak oleh S. mutans telah memasuki tahap pematangan sehingga sulit untuk menghambat aktivitas pertumbuhan bakteri tersebut dalam plak gigi. Hal ini diperkuat dengan penelitian yang telah dilakukan sebelumnya oleh Mikx dan Svanberg (1978), dimana pada akhir fase log, biofilm melekat lebih kuat dan mulai memasuki tahap pematangan. Isomalt merupakan poliol atau gula alkohol. Poliol dikenal sebagai pemanis yang bersifat ―tooth-friendly‖ (Touger dan Loveren 2003). Isomalt adalah pemanis bebas gula dengan tingkat kemanisan 0,45 hingga 0,6 kali sukrosa dan dilaporkan tidak bersifat kariogenik (Imfeld 1999), dan berdasarkan pendekatan studi telemetri terhadap pH-plak, gula alkohol tidak bersifat menurunkan pH

16

dengan cepat karena difermentasi dalam waktu yang cukup lama. Menurut Imfeld (1999), biofilm yang dihasilkan akibat paparan gula alkohol mempunyai densitas yang lebih rendah dan lebih lama terbentuk dibandingkan dengan paparan sukrosa. Sifat Isomalt yang sulit dimetabolisme oleh S. mutans diduga menjadi peyebab penurunan proporsi S. mutans yang semakin tinggi dengan meningkatnya frekuensi konsumsi CCNS yaitu 2 kali sehari, seperti yang ditunjukkan dari hasil penelitian ini. Tabel 4 Pengaruh konsumsi CCS dan CCNS terhadap jumlah bakteri Perlakuan

Total Bakteri (cfu/ml)*

S. mutans (cfu/ml)*

K CCS 2x CCS 1x CCNS 2x CCNS 1x

-34534,949 -29722,109 17826,654 -9472,632 -244229,456

121,081 -897,871 -179,722 -3724,737 -19830,310

Ket: * = Nilai negatif menunjukkan adanya penurunan jumlah.

Keberadaan bakteri lain yang bersama S. mutans membentuk plak pada permukaan gigi juga mempengaruhi dinamika jumlah S. mutans. Data yang disajikan pada Tabel 4 menunjukkan bahwa pengaruh konsumsi CCS dan CCNS tidak hanya mengakibatkan penurunan kuantitas S. mutans namun juga penurunan kuantitas total bakteri pada plak. Pada kelompok kontrol, jumlah S. mutans mengalami kenaikan sedangkan jumlah total bakteri mengalami penurunan jumlah (dalam cfu/ml). Ketiga kelompok perlakuan pemberian CCS dan CCNS terlihat mengalami penurunan jumlah S. mutans dan bakteri lainnya pada plak. Hasil ini menunjukkan bahwa CCS maupun CCNS memiliki potensi antibakteri yang tidak spesifik terhadap S. mutans. Berbeda dengan kelompok perlakuan konsumsi 1 butir CCS 1 kali sehari dimana terjadi kenaikan jumlah total bakteri disaat jumlah S. mutans mengalami penurunan jumlah. Perbedaan ini mengindikasikan bahwa terdapat spesis lain, bakteri non-kariogenik pada plak gigi yang mungkin lebih adaptif terhadap pemberian CCS 1 kali sehari. Diperlukan penelitian lanjut untuk mampu menjelaskan hipotesis ini. Penelitian ini dilakukan secara in vivo dimana perilaku individu terhadap pola makan, frekuensi mengkonsumsi makanan atau minuman, serta jenis asupan yang dimakan merupakan faktor confounding (tidak diatur sebagai perlakuan), sehingga hasil yang telah dijelaskan sebelumnya juga dipengaruhi oleh faktor ini. Beberapa kemungkinan seperti jenis, bentuk, dan durasi kontak makanan dengan permukaan gigi sangat mempengaruhi proporsi S. mutans pada plak (Bahar 2011). Pada penelitian ini tidak dilakukan pendataan terhadap jenis makanan yang dikonsumsi subjek sehingga tidak dapat ditentukan dengan pasti faktor lain selain konsumsi CCS dan CCNS yang telah mempengaruhi proporsi S. mutans pada plak setiap subjek penelitian. Menurut Touger dan Loveren (2003), bentuk asupan terutama pemanis juga mempengaruhi daya pembentukan plak, hal ini terkait dengan durasi paparan pada

17

permukaan gigi oleh pemanis pada makanan yang dikonsumsi. Panjangnya durasi kontak pemanis dengan permukaan gigi dapat menjebatani pembentukan plak gigi yang bersifat kariogenik (Touger dan Loveren 2003). Beberapa jenis makanan telah diketahui mempunyai faktor protektif terhadap pelekatan bakteri pada permukaan gigi. Adanya lemak dalam makanan yang dimakan seseorang dapat menurunkan kemampuan melekat suatu bakteri, kecuali produk susu seperti keju dan beberapa jenis kacang (Bahar 2011). Makanan yang membutuhkan frekuensi kunyah lebih banyak dapat meningkatkan aliran saliva. Peningkatan aliran saliva merupakan salah satu mekanisme protektif terhadap resiko pembentukan plak (Bahar 2011). Pengaruh dari faktor confounding seperti beberapa diantaranya telah disampaikan tersebut, diduga ikut berperan dalam hasil ananilis terhadap potensi CCS atau CCNS pada penelitian ini. Mengatur pola konsumsi merupakan salah saran yang dapat dilakukan untuk mengontrol keberadaan bakteri karogenik pada plak. (Bahar 2011) termasuk asupan pangan fungsional CCS atau CCNS. Prosedur pembersihan plak secara mekanis seperti menggososk gigi dengan benar tetap harus dilakukan untuk menjaga kebersihan rongga mulut (Kidd dan Bechal 2004). Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa CCS maupun CCNS memiliki potensi antibakteri tidak hanya terhadap S. mutans namun juga terhadap bakteri lain dalam komunitas bakteri yang membentuk biofilm pada permukaan gigi (plak gigi). Efek antimikroba CCS dan CCNS berdampak pada penurunan jumlah bakteri non-karigenik penyusun plak. Penurunan jumlah dan proporsi akibat mengkonsumsi 1 butir CCNS 2 kali sehari memberikan hasil yang lebih baik dibandingkan ketiga kelompok perlakuan lainnya. Hasil ini juga dipengaruhi oleh perilaku seseorang, sehingga untuk mendapatkan hasil yang lebih optimum dalam menurunkan kuantitas S. mutans dan pencegahan proses karies gigi, pola konsumsi makanan non kariogenik harus tetap diperhatikan.

SIMPULAN DAN SARAN Simpulan Cajuputs Candy Sucrose (CCS) dan Cajuputs Candy Non Sucrose (CCNS) berpotensi menurunkan kuantitas S. mutans dan proporsinya terhadap total bakteri pada plak gigi, serta dapat menurunkan jumlah bakteri non-kariogenik lain di dalam plak gigi. Penurunan jumlah S. mutans dan proporsinya terhadap total bakteri pada plak gigi setelah mengkonsumsi CCS lebih rendah dibandingkan dengan setelah mengkonsumsi CCNS. Pengunaan bahan baku non sukrosa pada Cajuputs Candy dapat meningkatkan efektifitas permen dalam menurunkan kuantitas S. mutans di dalam plak gigi. Konsumsi 1 butir CCNS 2 kali sehari mampu memberikan efek optimum dalam menurunkan kuantitas dan proporsi S. mutans pada plak gigi.

18

Saran Mengingat pada penelitian ini faktor confounding yang tidak tercatat juga mempengaruhi potensi CCS atau CCNS, baik untuk dilakukan penelitian lanjut mengenai potensi CCS atau CCNS dalam menurunkan kuantitas S. mutans pada plak gigi dengan menyertakan pencatatan terhadap faktor confounding. Perlu juga dilakukan penelitian lanjutan mengenai korelasi antara kuantitas S. mutans plak gigi dengan fungsi protektif saliva terhadap bakteri tersebut sebagai dampak dari asupan CCS atau CCNS.

DAFTAR PUSTAKA Allaker R, Douglas CWI. 2009. Novel anti-microbial therapies for dental plaquerelated diseases. Inter J Microbial. 33: 8-13. doi: 1 0.1016/j.ijantimicag.2008.07.014. Anonim. 2012. Detail isi mulut kita. [Internet] http://onomenulis.wordpress.com/2012/01/11/detail-isi-rongga-mulut-kita/ (1 mei 2014).. Bahar Armasastra. 2011. Paradigma Baru Pencegahan Karies Gigi. Jakarta: Lembaga Penerbitan Fakultas Ekonomi Universitas Indonesia. Beckers HJA, van der Hoeven JS. 1982. Growth rates of Actinomyces viscosus and Streptococcus mutans during early colonization of tooth surfaces in Gnotobiotic rats. J Infection and Immunity. 38 (1): 8-13. Herold S, Kuechler A, Liehr T, Laccone F. 2004. Rapid detection of subtelomeric deletion/duplication by novel real-time quantitative PCR using SYBR-green dye. Human Mutation. 23(4): 368-378. doi: 10.1002/humu.20011. Hart PH, Brand C, Crson CF, Riley TV, Prager RH, Finlay-Jones JJ. 2000. Terpinen-4-ol, the main component of the essential oil of Melaleuca alternifolia (tea tree oil), suppresses inflammatory mediator production by activated human monocytes. J Inflamm Res. 49(11):619-26. doi: 10.1007/s000110050639. Dennison I, Radolph. 1981. Diet Nutrition and Dentistry. Amazon. United Kingdom. Dwivedi D, Khandelwal G, Patidar RK, Singh V. 2012. Antimicrobial activity of Mentha arvensis against clinical isolates of human cariogenic pathogens- an in vitro study. Int J Pharmaceutic Sci & Res. 3(5):1355-1360. ISSN: 09758232. Eka SBR, Wijaya CH, Bachtiar BM. 2013. Potency of Cajuputs Candy in Maintening the Competitive Capacity of Streptococcus sanguinis Upon Streptococcus mutans. J Essential Oil Res, forthcoming. Handoyo D, Rudiretna A. 2000. Prinsip umum dan pelaksanaan polymerase chain reaction (PCR). Vol 9(1): 17-29. Heleno VC, Martins CG, Morais GO, da Silva EH, Wakabayashi K, Carvalho C, Critti AM. 2011. Antimicrobial activity of the essential oils and non-polar extracts from leaves and flowers of Tithonia diversifolia against cariogenic bacteria [Abstrak]. Planta Medica. 77-PE47. doi: 10.1055/s-0031-1282378.

19

Iftari W, Fardiaz D, Bachtiar BM, Wijaya CH, The potency of non-sucrose cajuputs candy in inhibiting the formation of biofilm by Streptococcus mutans serotype c, 13th Asean Food Conference September 9-11, Singapore, 2013. Imfeld T. 1999. Chewing Gum—Fact an Fiction: a Review of gum chewing and oral health. Crit Rev Oral Biol Med. 10:405-419, doi: 10.1177/10454411990100030901. Inouye S, Takizawa T, Yamaguchi H. 2001. Antibacterial activity of essential oils and their major constituents against respiratory tract pathogens by gaseous contact. J Antimicrob Chemoter. 47(5):565-573. doi:10.1093/jac/47.5.565. Jara C, Mateo E, Guillamon JM, Torija MJ, Mas A. 2008. Analysis of several methods for the extraction of high quality DNA from acetic acid bacteria in wine and vinegar for characterization by PCR-based methods. Int J Microbiol. 128: 336-341. doi:10.1016/j.ijfoodmicro.2008.09.008 Jedlickova Z, Ery V, Motto O, Nguyen DC. 1994. Antibacterial properties of cajuput oil. Medicaments et Aliments: L’Approche Ethnopharmacologique. 293. ISBN 2-7099-1320-8. Kidd EAM. Essentials of Dental Caries 3rd edition. New York: Oxford University Press; 2004. Lee KH et al. 2011. Essential oil of Curcuma longa inhibits Streptococcus mutans biofilm formation. J of Food Science. 76 (9): 226-230. doi: 10.1111/j.17503841.2011.02427.x. [LTC] Life Technologies Corporation. 2012. Handbook of Realtime PCR Handbook. P: 3-7. Livak KJ, Schmittgen TD. 2008. Analyzing real-time PCR data by the comparative CT method. Nature Publlishing Group. 3(6): 1101-1108. doi: 10.1038/nprot.2008.73. Maggi F et al. 2009. Composition and biological activity of essential oil of Achillea ligustica All. (Asteraceae) naturalized in central Italy: ideal candidate for anti-cariogenic formulations. Fitoterapia. 80(6):313-9. doi: 10.1016/j.fitote.2009.04.004. Marsh PD. 2006. Dental plaque as a biofilm and a microbial communityimplications for health and disease. Proceedings. BMC Oral Health, 6:S14. Mikx FHM, Svanberg, M. 1978. Considerations about microbial interactions in relation to modification of the microflora of dental plaque. Di dalam: Bibby B, Shera R, editor. Methods of Caries Prediction Spec. Suppl. Microbiol. Washington DC (US): Information Retrieval Inc. Oyedemi SO, Okoh AI, Mabinya LV, Pirochenva G, Afolayan AJ. 2009. The proposed mechanism of bactericidal action of eugenol, α-terpineol and γterpinene against Listeria monocytogenes, Streptococcus pyogenes, Proteus vulgaris and Escherichia coli. Afican J Biotechnol, 8(7):1280-1286. ISSN: 1684-5315. Pearson LS, Hutton JL. 2002. A controlled trial to compare the ability of foam swabs and toothbrushes to remove dental plaque. J Advanced Nursing. 39(5): 480-489. doi: doi 10.1046_j.1365-2648.2002.02313.x. Reichling J, Schnitzler P, Suschke U, Sailer R. 2009. Essential oils of aromatic plants with antibacterial, antifungal, antiviral, and cytotoxic properties - an

20

overview. Forschende Komplementarmedizin. 16(2): 79-90. doi: 10.1159/000207196. Reloy R, Martens LC, Vaobbergen J, Bogaerts K, Declrck D. 2009. Caries experience and gingivitis levels of permanent first molars in relation to timing of emergence. OHDMBS. 8(3): 33-42. Roeslan BO. 2002. Imunologi Oral – Kelainan dalam Rongga Mulut. Jakarta (ID): UI - Press. Samaranayake LP. 2002. Essential Microbiology for Dentistry 2nd Edition. Churchill Livingstone, Edinburgh. Shemesh M, Ashyalom T, Steinberg D. 2007. Expression of biofilm-associated genes of Streptococcus mutans in response to glucose and sucrose. J Medical Micobiol. 56:1528-1535. doi:10.1099/jmm.0.47146-0. Sujana K, et al. 2012. Collection, isolation, characterization of helicobacter pylori from dental plaque and antibacterial activity of novel drug 1-phenyl-3(4’aminophenyl)-5-(2’’,4’’-dichlorophenyl)-2-pyrazoline. IJPCBS. 2(4):552574. [TFS] Thermo scientific. 2013. Technical Bulletin Nanodrop Spectrophothometers: Assesment of Nucleic Acid Purity. Wilmington (US): Thermo Fisher Scientific. Touger R, Loveren CV. 2003. Sugars and dental caries. Am J clin nutr. 78(4): 8815-8825. ISSN: 1938-3207. Wijaya CH, Halimah, Kindly, Taqi F, penemu: Institut Pertanian Bogor. 2002 nov 13.Komposisi permen cajuputs untuk pelega tenggorokan.Paten Indonesia ID 0 000 385 S. Wijaya CH. 2011. Candy flavors [ulasan]. Food Review Indonesia. 6:26-30. Wijaya CH, penemu: Institut Pertanian Bogor. 2013 Mei 30. Komposisi permen cajuputs yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba penyebab karies gigi dan proses pembuatannya. Paten Indonesia 2013/01638 A. Yano A, Kaneko N, Ida H, Yamaguchi T, Hanada N. 2002. Real-time PCR for quantification of Streptococcus mutans. FEMS Microbiology Letter. 217:2330. Yuwono T. 2006. Teori dan Aplikasi Polymerase Chain Reaction. Yogyakarta: Andi Yogyakarta.

21

Lampiran 1

Surat Keterangan Lolos Etik Penelitian

22

Lampiran 2

Lembar informasi dan surat permohonan kesediaan berpartisipasi dalam penelitian

INFORMASI DAN SURAT PERMOHONAN KESEDIAAN BERPARTISIPASI DALAM PENELITIAN

Kepada Yth. Calon Subjek Penelitian Di IPB Bogor Dengan Hormat, Yang bertanda tangan di bawah ini mahasiswa Program Ilmu dan Teknologi Pangan Fakultas Teknologi Pertanian Institut Pertanian Bogor: Nama : Agusta Putri Balqis Linda Soeharso NRP : F24100020 Akan mengadakan penelitian dengan judul ―Perubahan Proporsi Jumlah Streptococcus mutans terhadap Total Bakteri Plak Gigi Mahasiswa Setelah Mengkonsumsi Cajuputs Candy”. Penelitian ini dilaksanakan sebagai salah satu kegiatan dalam menyelesaikan tugas akhir di Program Studi Ilmu dan Teknologi Pangan Fakultas Teknologi Pertanian Intitut Pertanian Bogor. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menganalisis potensi cajuputs candy terhadap kuantitas S.mutans dan proporsinya terhadap total bakteri pada sampel plak gigi dengan menggunakan teknik Real Time Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). Plak gigi yang akan digunakan dikoleksi dari mahasiswa Institut Pertanian Bogor sedangkan bahan uji adalah cajuputs candy sucrose (CCS) dan cajuputs candy non sucrose (CCNS). Hasil penelitian ini diharapkan dapat menambah informasi ilmiah mengenai potensi CCS dan CCNS dalam mengontrol pertumbuhan S.mutans yang telah diketahui sebagai mikroflora mulut dominan di dalam plak gigi penyebab karies. Sebagai gambaran penelitian ini : 1. Latar belakang penelitian : Penelitian sebelumnya yang terkait dengan potensi CCS dan CCNS dilakukan terhadap S. mutans strain laboratorium. Kondisi tersebut berbeda dengan kondisi S. mutans plak gigi sehingga hasil penelitian belum sepenuhnya mengungkapkan efektifitas Cajuputs Candy terhadap S.mutans isolat mulut, yang secara alami terlibat dalam proses terjadinya karies gigi. Dengan demikian, dirasakan perlu dilakukan pengujian terhadap potensi Cajuputs Candy terhadap pertumbuhan S.mutans pada plak gigi pada oral panelis. Hasil pengujian ini diharapkan mampu memberikan gambaran yang lebih nyata mengenai potensi penghambatan CCS dan CCNS terhadap S. mutans. 2. Lama Sampling dan jumlah subjek penelitian : Sampling plak dilakukan selama 5 hari dengan jumlah subjek 6 orang. 3. Perlakuan terhadap subjek : Subjek diharapkan mematuhi ketentuan-ketentuan sebagai berikut:  Bukan perokok dan tidak merokok selama penelitian

23

Lampiran 2

(lanjutan)

 Subjek diinstruksikan membersihkan gigi dan mulut (menggosok gigi) pagi pada jam 06.00 WIB.  Jam 06.00 WIB, segera setelah menggosok gigi,dilakukan pengambilan sampel plak gigi dengan cara diusap.  Jam 07.00 WIB subjek diinstruksikan untuk mengkonsumsi CCS atau CCNS.  Jam 09.00 WIB subjek diinstruksikan untuk sarapan.  Jam 12.00 subjek diinstruksikan untuk mengkonsumsi CCS atau CCNS kembali.  Jam 14.00 WIB kembali dilakukan pengambilan sampel plak gigi subjek. Pemberian perlakuan dan jadwal pengambilan sampel plak gigi diilustrasikan pada Gambar 1. 4. Kemungkinan risiko kesehatan : Permen Cajuputs Candy sejauh ini sudah banyak dikonsumsi dan tidak memberikan efek samping yang berarti. Permen ini telah diproduksi dan dipasarkan. Hingga saat ini belum ada komplain dari lembaga konsumen atau perorangan mengenai efek samping dari mengkonsumsi Cajuputs Candy, artinya permen ini bukan obat tapi makanan yg akan diuji efeknya terhadap Streptococcus mutans karena belum dikethui efeknya terhadap mikroflora mulut. Pengambilan sampel plak gigi akan dilakukan dengan metode swabbing, yaitu dengan mengusapkan cotton bud steril pada permukaan bukal gigi sehingga tidak menimbulkan rasa sakit dan tidak berefek samping. 5. Penjelasan kompensasi bagi subjek : Saudara/i akan mendapatkan kompensasi pengganti penghasilan atau waktu yang hilang akibat berpartisipasi dalam penelitian ini. Penjelasan terjaminnya subjek : 6. Semua informasi yang berkaitan dengan identitas subyek penelitian akan dirahasiakan dan hanya akan diketahui oleh peneliti. Hasil penelitian akan dipublikasikan tanpa identitas subyek penelitian. Partisipasi dalam penelitian bersifat bebas untuk ikut atau tanpa paksaan apapun. Bila telah menjadi subjek peneltian dan terjadi hal-hal yang memungkinkan untuk mengundurkan diri, subjek penelitian berhak untuk mengundurkan diri sebagai subjek penelitian. Apabila Saudara/i memahami dan menyetujui maka saya mohon kesediaannya untuk menandatangani persetujuan dan bersedia untuk ikut dalam kegiatan selanjutnya ( rangkain penelitian).

24

Lampiran 2

Jam (WIB)

(lanjutan)

06.00

06.00

07.00

09.00

12.00

14.00

Sampling Sampling

Sampling

Perlakuan Menggosok gigi

CCS atau CCNS

Sarapan

CCS atau CCNS dan makan siang.

12.00

12.00

(a)

Jam (WIB)

06.00

06.00

09.00

14.00

Sampling Sampling

Sampling

Perlakuan Menggosok gigi

Makan siang

Sarapan

CCS atau Diberi CCNS dan perlakuan. makan siang.

(b) P1 P2 P3 P4

: : : :

Konsumsi 1 butir CCS 2 kali dalam. Konsumsi 1 butir CCS 1 kali dalam sehari. Konsumsi 1 butir CCNS 2 kali dalam sehari. Konsumsi 1 butir CCNS 1 kali dalam sehari.

Gambar 1. Ilustrasi Perlakuan dan Pengambilan Sampel Plak Gigi. (a) P1 dan P3. (b) P2 dan P4.

25

Lampiran 2

(lanjutan)

Disamarkan

Disamarkan

Disamarkan

Disamarkan

Disamarkan

26

Lampiran 2

(lanjutan)

Disamarkan

27

Lampiran 3

Sampel (sebelum konsumsi)

Hasil pengukuran konsentrasi DNA sampel dan perhitungan kebutuhan standardisasi DNA

Abs. Λ= 260 nm

Abs. Λ= 280 nm

[DNA] µg/ml

DNA pure

Stock Solution (µg/ml)

Working Solution (ml)

dd(H2O) (ml)

0,0550

0,0490

2,7500

1,1220

275

36,4

63,6

0,0620

0,0560

3,1000

1,1070

310

32,3

67,7

0,0840

0,0780

4,2000

1,0770

420

23,8

76,2

0,0860

0,0800

4,3000

1,0750

430

23,3

76,7

0,0470

0,0430

2,3500

1,0930

235

42,6

57,4

0,0490

0,0440

2,4500

1,1140

245

40,8

59,2

0,0570

0,0520

2,8500

1,0960

285

35,1

64,9

0,0580

0,0510

2,9000

1,1370

290

34,5

65,5

0,0640

0,0580

3,2000

1,1030

320

31,3

68,8

0,0610

0,0570

3,0500

1,0700

305

32,8

67,2

0,0670

0,0650

3,3500

1,0310

335

29,9

70,1

0,0720

0,0680

3,6000

1,0590

360

27,8

72,2

0,0750

0,0690

3,7500

1,0870

375

26,7

73,3

0,0390

0,0370

1,9500

1,0540

195

51,3

48,7

0,0680

0,0620

3,4000

1,0970

340

29,4

70,6

0,0500

0,0450

2,5000

1,1110

250

40,0

60,0

0,0500

0,0450

2,5000

1,1110

250

40,0

60,0

0,0710

0,0660

3,5500

1,0760

355

28,2

71,8

0,0660

0,0580

3,3000

1,1380

330

30,3

69,7

0,0300

0,0270

1,5000

1,1110

150

66,7

33,3

0,0720

0,0670

3,6000

1,0750

360

27,8

72,2

0,0440

0,0380

2,2000

1,1580

220

45,5

54,5

0,0660

0,0590

3,3000

1,1190

330

30,3

69,7

0,0490

0,0450

2,4500

1,0890

245

40,8

59,2

0,0260

0,0250

1,3300

1,0400

133

75,2

24,8

0,0510

0,0490

2,5500

1,0410

255

39,2

60,8

0,0250

0,0210

1,2500

1,1900

125

80,0

20,0

0,0730

0,0650

3,6500

1,1230

365

27,4

72,6

0,0630

0,0580

3,1500

1,0860

315

31,7

68,3

0,0420

0,0400

2,1000

1,0500

210

47,6

52,4

K

CCS 2x

CCS 1x

CCNS 2x

CCNS 1x

Ket : K = Tanpa mengkonsumsi CCS dan CCNS, CCS 2x= Konsumsi 1 butir CCS 2 kali sehari, CCS 1x = Konsumsi 1 butir CCS 1 kali sehari, CCNS 2x = Konsumsi 1 butir CCNS 2 kali sehari, CCNS 1x = Konsumsi 1 butir CCNS 1 kali sehari.

28

Lampiran 3

Sampel (setelah konsumsi)

K

CCS 2x

CCS 1x

CCNS 2x

CCNS 1x

(lanjutan)

Abs. Λ= 260 nm

Abs. Λ= 280 nm

[DNA] µg/ml

DNA pure

Stock Solution (µg/ml)

Working Solution (ml)

dd(H2O) (ml)

0,0670

0,0580

3,3500

1,1550

335

29,9

70,1

0,0580

0,0530

2,9000

1,0940

290

34,5

65,5

0,6800

0,0600

3,4000

1,1330

340

29,4

70,6

0,0220

0,0200

1,1000

1,1000

110

90,9

9,1

0,0510

0,0549

2,5500

1,0410

255

39,2

60,8

0,0630

0,0570

3,1500

1,1050

315

31,7

68,3

0,0230

0,0200

1,1500

1,1500

115

87,0

13,0

0,0500

0,0450

2,5000

1,1110

250

40,0

60,0

0,0410

0,0360

2,0500

1,1390

205

48,8

51,2

0,0710

0,0650

3,5500

1,0920

355

28,2

71,8

0,0730

0,0670

3,6500

1,0900

365

27,4

72,6

0,0800

0,0720

4,0000

1,1110

400

25,0

75,0

0,0690

0,0620

3,4500

1,1130

345

29,0

71,0

0,0530

0,0480

2,6500

1,1040

265

37,7

62,3

0,0730

0,0670

3,6500

1,0900

365

27,4

72,6

0,0640

0,0580

3,2000

1,1030

320

31,3

68,8

0,0690

0,0640

3,4500

1,0780

345

29,0

71,0

0,0460

0,0440

2,3000

1,0450

230

43,5

56,5

0,0470

0,0440

2,3500

1,0680

235

42,6

57,4

0,0710

0,0660

3,5500

1,0760

355

28,2

71,8

0,0480

0,0420

2,4000

1,1160

240

41,7

58,3

0,0470

0,0430

2,3500

1,0930

235

42,6

57,4

0,0500

0,0450

2,5000

1,1110

250

40,0

60,0

0,0240

0,0220

1,2000

1,0910

120

83,3

16,7

0,0620

0,0560

3,1000

1,1070

310

32,3

67,7

0,0720

0,0640

3,6000

1,1250

360

27,8

72,2

0,0230

0,0190

1,1500

1,2110

115

87,0

13,0

0,0250

0,0220

1,2500

1,1360

125

80,0

20,0

0,0640

0,0540

3,2000

1,1850

320

31,3

68,8

0,0500

0,0460

2,5000

1,0870

250

40,0

60,0


29

Lampiran 4

Data berat plak gigi yang terambil

Eppendorf+Cotton bud+Plak+PBS 1,5 mL (mg)

Klp. Perlakuan

K

CCS 2x

CCS 1x

CCNS 2x

CCNS 1x

*

**

1

2153,67

2196,60

2

2260,80

3

Eppendorf + Cotton bud steril + PBS steril 1,5 mL (mg)

Berat Plak (mg) *

**

1268,80

884,87

927,80

2153,30

1268,80

992,00

884,50

2290,10

2104,80

1268,80

1021,30

836,00

4

2188,10

2198,00

1268,80

919,30

929,20

5

1633,71

2281,80

1268,80

364,91

1013,00

6

2276,50

2168,90

1268,80

1007,70

900,10

1

2227,50

2276,00

1268,80

20,36

1007,20

2

2232,40

2207,10

1268,80

963,60

938,30

3

2138,50

2267,30

1268,80

869,70

998,50

4

2269,30

2310,90

1268,80

1000,50

1042,10

5

2270,80

2320,00

1268,80

1002,00

1051,20

6

2230,10

2248,90

1268,80

961,30

980,10

1

2270,60

2250,30

1268,80

1001,80

981,50

2

2362,20

2353,10

1268,80

1093,40

1084,30

3

2031,70

2374,40

1268,80

762,90

1105,60

4

2299,30

2193,50

1268,80

1030,50

924,70

5

2300,80

2249,80

1268,80

1032,00

981,00

6

2282,40

2336,20

1268,80

1013,60

1067,40

1

2248,10

2231,60

1268,80

979,30

962,80

2

2310,60

2188,20

1268,80

1041,80

919,40

3

2290,20

2225,60

1268,80

1021,40

956,80

4

2239,20

2222,70

1268,80

24,40

953,90

5

2224,20

2383,40

1268,80

955,40

1114,60

6

2235,20

2352,90

1268,80

966,40

1084,10

1

2238,50

2161,60

1268,80

969,70

892,80

2

2176,80

2369,80

1268,80

908,00

1101,00

3

2226,80

2180,70

1268,80

958,00

911,90

4

2300,60

2277,70

1268,80

1031,80

1008,90

5

2346,80

2241,50

1268,80

1078,00

972,70

6

2269,00

2298,70

1268,80

2269,00

1029,90

Ket : K = Tanpa mengkonsumsi CCS dan CCNS, CCS 2x= Konsumsi 1 butir CCS 2 kali sehari, CCS 1x = Konsumsi 1 butir CCS 1 kali sehari, CCNS 2x = Konsumsi 1 butir CCNS 2 kali sehari, CCNS 1x = Konsumsi 1 butir CCNS 1 kali sehari. * = Sebelum mengkonsumsi CCS atau CCNS, dan segera setelah menyikat gigi untuk kelompok kontrol. ** = Sesudah mengkonsumsi CCS atau CCNS, dan 8 jam setelah menyikat gigi untuk kelompok kontrol.

30

Lampiran 5 Hasil nilai CT S. mutans dan total bakteri

S. mutans Perlakuan CT Sebelum

CT Sesudah

U1

U2

U1

U2

1

21,5367

26,4348

28,5665

27,088

2

30,9786

29,8868

28,8492

28,8152

3

27,2945

27,4349

23,489

23,7487

4

29,4391

29,336

26,932

26,7006

5

16,3371

23,871

25,3036

25,8906

6

26,8437

26,8306

29,6428

30,3167

1

25,3368

25,2968

27,5805

20,3589

2

24,64

24,4381

27,2531

27,225

3

26,8237

27,2436

29,5456

29,7657

4

26,9727

26,472

27,6415

27,6606

5

26,6906

27,9246

28,9694

28,2662

6

25,7057

25,9175

26,9456

26,9938

1

27,5989

27,952

28,6403

28,8386

2

26,7397

27,0755

26,8588

26,9395

3

27,601

27,5511

30,2775

29,15

4

25,6203

26,9274

25,7104

25,7431

5

28,8054

28,6039

31,115

31,042

6

28,7071

28,4853

29,486

29,1857

1

25,4527

25,5042

26,7232

27,2081

2

23,9969

23,9348

29,93

30,1015

3

24,6067

24,9469

28,1895

28,2543

4

24,0669

24,1469

28,1805

28,4215

5

27,1721

27,2638

27,9441

27,5806

6

25,2457

25,0245

26,2273

27,0128

1

20,2377

20,269

25,7648

25,9461

2

24,2763

20,0987

28,9751

29,3926

3

20,3098

20,4699

29,6089

29,8068

4

30,3276

30,5105

27,5781

27,4277

5

20,3727

20,0296

25,4678

25,1649

6

28,009

28,2044

27,3147

27,0364

K

CCS 2x

CCS 1x

CCNS 2x

CCNS 1x


31

Lampiran 5

(lanjutan)

Total Bakteri Perlakuan CT Sebelum

CT Sesudah

U1

U2

U1

U2

1

21,5367

21,3157

23,2365

24,0056

2

25,453

undetermined

23,4375

23,3406

3

23,0842

22,836

19,7474

19,5251

4

24,8791

23,9462

27,6103

26,3111

5

16,3371

undetermined

19,2241

18,313

6

15,6249

14,8839

19,3616

18,6858

1

18,439

18,1969

undetermined

20,3589

2

21,6558

21,4168

21,6118

21,7794

3

19,4453

18,9022

24,7403

undetermined

4

24,4947

21,9186

23,6873

23,9076

5

23,4962

24,7275

24,5013

23,873

6

20,4525

20,5719

18,5811

18,88

1

23,0592

22,9914

16,3276

16,3851

2

22,9159

22,832

22,4102

23,3077

3

18,4858

19,35

19,0719

22,5674

4

23,5364

23,6933

23,2025

24,0619

5

24,5967

24,6472

22,9687

23,864

6

13,7711

15,2026

18,8751

18,6716

1

23,7938

24,4947

23,4166

22,4196

2

18,8647

19,8783

23,6378

23,4138

3

21,6077

21,3347

23,3888

22,4624

4

21,3077

21,4412

undetermined

22,2644

5

23,7821

24,0213

23,0937

22,3397

6

23,3978

undetermined

23,1646

22,4619

1

16,6157

16,8512

22,6546

22,8708

2

21,4438

21,6845

22,7932

23,0997

3

19,2623

19,1202

27,0933

27,2215

4

17,4769

18,5467

17,3786

18,8556

5

16,1765

16,1825

22,4656

22,0878

6

23,9504

24,3958

24,4412

24,3322

K

CCS 2x

CCS 1x

CCNS 2x

CCNS 1x


32

Lampiran 6

Hasil uji sidik ragam dan uji lanjut Dunnett terhadap perubahan proporsi jumlah S. mutans plak gigi

Univariate Analysis of Variance

Perlakuan

Between-Subjects Factors Value Label 0 K 1 P1 2 P2 3 P3 4 P4

N 2 2 2 2 2

Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Proporsi Source Type III Sum of df Squares Corrected Model 5,351a Intercept 9,452 Perlakuan 5,351 Error ,366 Total 15,169 Corrected Total 5,717 a. R Squared = ,936 (Adjusted R Squared = ,885)

Mean Square 4 1 4 5 10 9

1,338 9,452 1,338 ,073

F 18,266 129,059 18,266

Post Hoc Tests

Perlakuan Multiple Comparisons Dependent Variable: Proporsi Dunnett t (2-sided) (I) (J) Mean Perlakuan Perlakuan Difference (IJ)

Std. Error

Sig.

95% Confidence Interval Lower Upper Bound Bound -2,349619 -,468281 -2,826069 -,944731 -3,033369 -1,152031 -2,406269 -,524931

P1 K -1,408950* ,2706266 ,010 P2 K -1,885400* ,2706266 ,003 P3 K -2,092700* ,2706266 ,002 P4 K -1,465600* ,2706266 ,009 Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = ,073. *. The mean difference is significant at the 0,05 level. a. Dunnett t-tests treat one group as a control, and compare all other groups against it.

Sig. ,003 ,000 ,003

33

Lampiran 7

Hasil kuantifikasi proporsi S. mutans dan hasil uji sidik ragam Paired-Sample T Test

Tabel hasil kuantifikasi terhadap proporsi S. mutans Perlakuan

CCS 2x

CCS 1x

No.

Proporsi Sebelum

Proporsi Sesudah

No.

Proporsi Sebelum

Proporsi Sesudah

1

0,0078

0,0819

1

0,3966

0,0605

2

0,1248

0,0214

2

0,0414

0,0111

3

0,0043

0,0331

3

0,1011

0,0254

4

0,0874

0,0692

4

0,1505

0,0152

5

0,1091

0,0464

5

0,1004

0,0303

6

0,0254

0,0033

6

0,2999

0,0715

1

0,0372

0,0002

1

0,0872

0,1172

2

0,0611

0,0608

2

0,6492

0,0133

3

0,0025

0,0021

3

0,4357

0,1707

4

0,1583

0,2341

4

0,0002

0,0015

5

0,0590

0,0049

5

0,0616

0,1216

6

0,0001

0,0007

6

0,0654

0,1447

Perlakuan

CCNS 2x

CCNS 1x


T-Test Paired Samples Statistics Mean

N

Std. Deviation

Std. Error Mean

Perlakuan1_0

,059800

6

,0536374

,0218974

Perlakuan1_1

,042550

6

,0294980

,0120425

Perlakuan2_0

,053033

6

,0579448

,0236559

Perlakuan2_1

,050467

6

,0930023

,0379680

Perlakuan3_0

,181650

6

,1370524

,0559514

Perlakuan3_1

,035667

6

,0247279

,0100951

Perlakuan4_0

,216550

6

,2629096

,1073324

Perlakuan4_1

,094833

6

,0704528

,0287622

Pair 1

Pair 2

Pair 3

Pair 4

34

Lampiran 7 (lanjutan)

Paired Samples Correlations N

Correlation

Sig.

Pair 1

Perlakuan1_0 & Perlakuan1_1

6

-,078

,883

Pair 2


6

,928

,008

Pair 3


6

,881

,021

Pair 4


6

-,141

,790

Lampiran 7

(lanjutan)

Paired Samples Test Paired Differences Mean

Std. Deviation

Pair 2

Pair 3

Pair 4

Perlakuan1_0 Perlakuan1_1 Perlakuan2_0 Perlakuan2_1 Perlakuan3_0 Perlakuan3_1 Perlakuan4_0 Perlakuan4_1

df

Mean

Sig. (2-

Std. Error 95% Confidence Interval

tailed

of the Difference Lower

Pair 1

t

)

Upper

,0172500 ,0632098 ,0258053

-,0490846

,0835846

,668

5

,533

,0025667 ,0447270 ,0182597

-,0443715

,0495048

,141

5

,894

,1459833 ,1158720 ,0473046

,0243831

,2675836 3,086

5

,027

,1217167 ,2816005 ,1149629

-,1738050

,4172383 1,059

5

,338

35

RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan di Banyuwangi, 30 Agustus 1992 dari ayah Zairin Soeharso dan ibu Herlinda. Penulis adalah anak kedua dari dua bersaudara. Penulis memulai pendidikan formal pada tahun 1996-1998 TK Aisyiyah Negara- Bali. Pendidikan SD ditempuh pada tahun 1998-2004 di SDN 1 Lelateng, Negara-Bali dan SMP pada tahun 2004-2007 di SMPN 1 Negara-Bali. Pendidikan SMA ditempuh di SMAN 1 Negara-Bali pada tahun 2007-2010. Pada tahun 2010, penulis diterima di Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan Institut Pertanian Bogor melalui jalur USMI. Selama menempuh pendidikan di IPB, penulis terlibat pada beberapa kegiatan kepanitian antara lain BAUR (2012), ACCES (2012), dan Orde Keramat (2013). Selain itu penulis juga terpilih enjadi asisten praktikum Teknologi Pengolahan Pangan tahun ajaran 2014. Sebagai tugas akhir, penulis melakukan kegiatan penelitian selama dua bulan yang hasilnya kemudan disusun dalam bentuk skripsi dengan judul ―Perubahan Proporsi Jumlah Streptococcus mutans terhadap Total Bakteri Plak Gigi Mahasiswa Setelah Mengkonsumsi Cajuputs Candy‖ sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Teknologi Pertanian dibawah bimbingan Prof. Dr. Ir. C. Hanny Wijaya, M. Agr dan Prof. drg. Boy M. Bachtiar, MS Ph. D.

PERUBAHAN PROPORSI JUMLAH Streptococcus mutans TERHADAP TOTAL BAKTERI PLAK GIGI MAHASISWA SETELAH MENGKONSUMSI CAJUPUTS CANDY

Recommend Documents