PENGARUH PEMBERIAN KLOROFIL DARI TUMBUHAN ALFALFA (Medicago sativa L.) TERHADAP KADAR KOLESTEROL LDL TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus)

perpustakaan.uns.ac.id

digilib.uns.ac.id

PENGARUH PEMBERIAN KLOROFIL DARI TUMBUHAN ALFALFA (Medicago sativa L.) TERHADAP KADAR KOLESTEROL LDL TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus)

SKRIPSI Untuk Memenuhi Persyaratan Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran

MEYNITA PUTRI RAMADHANY G.0007212

FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS SEBELAS MARET Surakarta 2010 commit to user i


digilib.uns.ac.id

commit to user ii


digilib.uns.ac.id

PERSETUJUAN Skripsi dengan judul : Pengaruh Pemberian Klorofil dari Tumbuhan Alfalfa (Medicago sativa L.) terhadap Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih (Rattus norvegicus) Meynita Putri Ramadhany, G.0007212, Tahun 2010 Telah disetujui untuk dipertahankan di hadapan Tim Ujian Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta Pada Hari ................, Tanggal................. 2010 Pembimbing Utama

Penguji Utama

Suhanantyo, drg., MSi. Med.

Widardo, Drs., MSc.

NIP : 1951 0606 198601 1 001

NIP : 1963 1216 199003 1 002

Pembimbing Pendamping

Anggota Penguji

Mujosemedi, Drs., MSc.

Tri N. Susilawati, dr., M.Med

NIP : 1960 0530 1989 031

NIP : 1980 1130 200604 2 001 Tim Skripsi

Muthmainah, dr., MKes. NIP : 1966 0702 199802 2 001

commit to user iii


digilib.uns.ac.id

PERNYATAAN Dengan ini menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu perguruan tinggi, dan sepanjang pengetahuan penulis juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah dan disebutkan dalam daftar pustaka.

Surakarta,.......................2010

Nama. Meynita Putri Ramadhany NIM. G.0007212

commit to user iv


digilib.uns.ac.id

ABSTRAK Meynita Putri Ramadhany, G0007212, Tahun 2010. Pengaruh Pemberian Klorofil dari Tumbuhan Alfalfa (Medicago sativa L.) terhadap Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih (Rattus norvegicus), Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret, Surakarta. Tujuan Penelitian : Peningkatan kadar kolesterol LDL mempunyai peranan penting dalam pembentukan atherosklerosis. Salah satu pengobatan alternatif yang tidak menimbulkan efek samping adalah dengan memanfaatkan klorofil yang berasal dari tumbuhan Alfalfa. Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh klorofil dari tumbuhan Alfalfa (Medicago sativa L.) terhadap penurunan kadar kolesterol LDL darah tikus putih (Rattus norvegicus). Metode Penelitian : Penelitian ini bersifat eksperimental laboratorik dengan pretest and posttest control group design. Subjek adalah tikus putih jantan (Rattus norvegicus) strain Wistar, umur 3 bulan, berat badan ± 200 gram, sebanyak 32 ekor, dibagi menjadi empat kelompok. Semua kelompok diberi induksi pakan hiperkolesterolemik selama 7 hari, kemudian diperiksa kadar kolesterol LDL darahnya sebagai data pretest. Kelompok I sebagai kontrol hanya diberi pakan hiperkolesterolemik; sedangkan kelompok II, III dan IV sebagai kelompok perlakuan, selain diberi pakan hiperkolesterolemik secara berturut-turut juga diberi klorofil dosis 1,8 mg; 2,7 mg; dan 3,6 mg per 200 gr BB. Perlakuan ini diberikan selama 21 hari. Setelah masa perlakuan, semua kelompok diperiksa kadar kolesterol LDL darahnya sebagai data posttest. Data kadar kolesterol LDL darah tikus dianalisis menggunakan uji Kruskal-Wallis, dilanjutkan uji MannWhitney. Hasil Penelitian : Hasil uji Kruskal-Wallis menunjukkan perbedaan bermakna dengan nilai p = 0,001. Hasil uji Mann-Whitney menunjukkan adanya perbedaan bermakna antara kelompok I (kontrol) dengan kelompok II, III dan IV serta kelompok II terhadap kelompok III dan IV dengan nilai p <0,05. Sebaliknya, tidak terdapat perbedaan yang bermakna pada kelompok III terhadap kelompok IV dengan nilai p = 0,916. Simpulan Penelitian : Klorofil dari tumbuhan Alfalfa dapat menurunkan kadar kolesterol LDL darah tikus putih jantan yang dibuat hiperkolesterolemik. Kata Kunci : klorofil, Alfalfa, kadar kolesterol LDL darah

commit to user v


digilib.uns.ac.id

ABSTRACT Meynita Putri Ramadhany, G 0007212, Year 2010. The Effect of Chlorophyll of Alfalfa Plants (Medicago sativa L.) on Serum LDL Cholesterol Level of White Rats (Rattus norvegicus), Medical Faculty of Sebelas Maret University, Surakarta. Objective : Increased a level of LDL cholesterol plays an important role in the formation of atherosklerosis which is a cause of coronary heart desease. One of the alternative therapy is utilized chlorophyll of Alfalfa plants. This experiment was aimed to determine the effect of chlorophyll of Alfalfa plants (Medicago sativa L.) on serum LDL cholesterol level of white rats (Rattus norvegicus). Methods : This research was an experimental laboratoric research with pretest and posttest control group design. Subject was 28 male white rats, Wistar strain, 3 months old, with 200 gr body weight each. Rats were divided into 4 groups. All groups were induced by hypercholesterolemic food within 7 days, then LDL cholesterol level of all rats was measured for pretest. Treatment was conducted within 21 days: Group I as control was only treated with hypercholesterolemic food; group II, III and IV as treated groups, in addition to be fed with hypercholesterolemic food, they were continued treated with chlorophyll 1,8 mg; 2,7 mg; and 3,6 mg/200 gr body weight. LDL cholesterol level of all rats was measured once more after treatment period. The data of LDL cholesterol level were analyzed with Kruskal-Wallis test, continued with Mann-Whitney test. Result : The result of Kruskal-Wallis test showed that there were significance difference with p = 0,001. Mann-Whitney test showed significance difference between group I (control), II, III and IV; and between group II, III and IV p <0,05. While between group III and IV showed that no significance difference with p = 0,916. Conclusion : Chlorophyll of Alfalfa plants there were decreseased the serum LDL cholesterol level of male white rats induced hiperkolesterolemic food. Keywords : chlorophyll, Alfalfa, serum LDL cholesterol level

commit to user vi


digilib.uns.ac.id

PRAKATA Alhamdulillah, segala puji bagi Allah yang Maha Esa, yang telah melimpahkan segenap karunia dan rahmat-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Pengaruh Pemberian Klorofil Dari Tumbuhan Alfalfa (Medicago sativa) Terhadap Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih (Rattus norvegicus)”. Penyusunan skripsi ini dimaksudkan untuk memenuhi persyaratan dalam memperoleh gelar Sarjana Kedokteran di Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret, Surakarta. Dalam proses penyusunan skripsi ini, penulis mendapat bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak. Untuk itu, perkenankanlah penulis menyampaikan rasa terimakasih kepada : 1. Prof. Dr. A. A. Subijanto, dr., MS. selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta. 2. Muthmainah, dr., MKes. selaku Ketua Tim Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta. 3. Suhanantyo, drg., M.Si,. Med. Selaku Pembimbing Utama yang telah memberikan bimbingan dan motivasi dalam penyelesaian skripsi ini. 4. Mudjosemedi, drs., M.Sc. selaku Pembimbing Pendamping yang telah memberikan bimbingan dan motivasi dalam penyelesaian skripsi ini. 5. Widardo, Drs., MSc. selaku Penguji Utama yang telah memberikan saran dan melengkapi kekurangan dalam penyusunan skripsi ini. 6. Tri N. Susilawati, dr., M.Med. selaku Penguji Pendamping yang telah memberikan saran dan melengkapi kekurangan dalam penyusunan skripsi ini. 7. Budiyanti Wiboworini, dr., MKes, SpGK. yang telah memberikan saran dan melengkapi kekurangan dalam penyusunan skripsi ini. 8. Kepada kedua orangtuaku tercinta (Koes H. Santosa dan Muchrida), kedua adikku (Bowo dan Enggar) serta segenap keluarga tercinta atas doa serta motivasi yang telah diberikan oleh mereka; 9. Teman-teman tercinta (Indria, Yudo, Anggra, Rahma, Tofan, Nanda, Shinta dan teman-teman lain yang tidak bisa disebutkan satu persatu)

commit to user vii


digilib.uns.ac.id

tanpa dorongan serta motivasi dari kalian semua mungkin skripsi ini belum tentu selesai. 10. Segenap pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu Penulis menyadari penulisan skripsi ini masih sangat jauh dari kesempurnaan. Oleh karena itu, penulis sangat mengharapkan kritik serta saran yang membangun demi kesempurnaan karya ini. Akhir kata, penulis berharap semoga karya ini bermanfaat bagi banyak pihak terutama ilmu kedokteran pada umumnya dan bagi pembaca pada khususnya.

Surakarta, 2010 Meynita Putri Ramadhany

commit to user viii


digilib.uns.ac.id

DAFTAR ISI Halaman PRAKATA ..................................................................................

vi

DAFTAR ISI ...............................................................................

vii

DAFTAR GAMBAR ..................................................................

ix

DAFTAR TABEL .......................................................................

ix

DAFTAR LAMPIRAN ...............................................................

x

BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Masalah ............................................

1

B. Perumusan Masalah ..................................................

3

C. Tujuan Penelitian ......................................................

3

D. Manfaat Penelitian ....................................................

3

BAB II LANDASAN TEORI A. Tinjauan Pustaka .......................................................

4

B. Kerangka Pemikiran ..................................................

18

C. Hipotesis....................................................................

18

BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis Penelitian ..........................................................

19

B. Lokasi Penelitian .......................................................

19

C. Subyek Penelitian ......................................................

19

D. Teknik Sampling .......................................................

19

E. Identifikasi Variabel Penelitian .................................

20

F. Definisi Operasional Variabel Penelitian ..................

21

G. Rancangan Penelitian ................................................

26

H. Alat dan Bahan Penelitian .........................................

27

I. Cara Kerja .................................................................

28

J. Teknik Analisis Data .................................................

29

commit to user ix


digilib.uns.ac.id

BAB IV HASIL PENELITIAN ..................................................

31

BAB V PEMBAHASAN ............................................................

36

BAB VI SIMPULAN DAN SARAN A. Simpulan ...................................................................

39

B. Saran .........................................................................

39

DAFTAR PUSTAKA .................................................................

40

LAMPIRAN

commit to user x


digilib.uns.ac.id

DAFTAR GAMBAR

Halaman Gambar 1. Tanaman Alfalfa ..................................................................

10

Gambar 2. Struktur Kimia Klorofil dan Hemoglobin ...........................

13

Gambar 3. Histogram Rerata Kadar Kolesterol LDL Darah Tikus Putih ....................................................................................

commit to user xi

32


digilib.uns.ac.id

DAFTAR TABEL

Halaman Tabel 1. Jumlah Mineral dan Vitamin dalam Satu Tanaman Alfalfa ...

11

Tabel 2. Tabel Rerata Berat Badan Tikus Putih (Rattus norvegicus ......

31

Tabel 3. Tabel Rerata Kadar Kolesterol LDL Darah Tikus Putih (pretest dan posttest ............................................................................ Tabel 4. Hasil Ringkas Uji Mann-Whitney

commit to user xii

........................

32 35


digilib.uns.ac.id

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran A. Tabel Konversi Dosis untuk Manusia dan Hewan Lampiran B. Tabel Volume Maksimum Larutan Obat yang Dapat Diberikan

pada Berbagai Hewan

Lampiran C. Komposisi Pakan Lampiran D. Surat Hasil Data Perhitungan Kadar Kolesterol LDL Darah Tikus Putih (pretest dan posttest) Lampiran E. Tabel Hasil Kadar Kolesterol LDL Darah Tikus Putih (pretest, posttest, dan selisih) Lampiran F.

Uji Statistik Kadar Kolesterol LDL Darah Tikus Putih

Lampiran G. Dokumentasi Penelitian Lampiran H. Surat Ijin Penelitian Lampiran I.

Surat Bukti Penelitian

commit to user xiii


digilib.uns.ac.id

BAB I PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Masalah Gaya hidup yang berubah dalam ritme yang semakin cepat, menyebabkan kebanyakan orang cenderung mengkonsumsi makanan cepat saji yang umumnya kaya lemak (Wajizah, 2004). Cara hidup yang modern seperti makanan yang kurang serat, kurang melakukan olahraga, merokok dan lain-lain membawa akibat timbulnya faktor-faktor risiko aterosklerosis, yang manifestasinya terutama ialah Penyakit Jantung Koroner (PJK) dan penyakit pembuluh darah otak (Pratanu, 1995). Hasil Survei Kesehatan Nasional tahun 2001 menunjukkan tiga dari 1.000 penduduk Indonesia menderita Penyakit Jantung Koroner (PJK) (Priyana, 2007). Atherosklerosis merupakan gangguan pembuluh darah koroner akibat penimbunan plak lipid di dinding arteri (Tsalissavrina et al., 2006). Pembentukan ini sangat dipengaruhi oleh tingginya kadar kolesterol total, Low Density Lipoprotein (LDL) dan tekanan sistolik (Sargowo dan Retty, 2002). Penurunan kadar kolesterol total, kolesterol LDL, dan trigliserida dapat dilakukan dengan diet, olahraga, maupun dengan obat-obatan hipolipidemia.

Mahalnya

harga

obat-obatan

hipolipidemia

membuat

pencarian obat hipolipidemia yang berasal dari alam semakin giat dilakukan.

commit to user 1


digilib.uns.ac.id 2

Obat-obatan dari alam ini selain murah dan mudah didapat, juga relatif aman jika dibandingkan dengan obat-obatan kimiawi (Dachriyanus et al., 2007). Berbagai penelitian masa kini sudah membuktikan bahwa mereka yang lebih banyak mengkonsumsi makanan tinggi klorofil memiliki kualitas kesehatan yang lebih baik (Elizabeth, 2005). Ketersediaannya yang tinggi di alam serta khasiat biologis yang dimilikinya menjadikan klorofil berpeluang besar untuk dikembangkan sebagai bahan suplemen makanan atau pangan fungsional (Endang, 2007). Daun Alfalfa merupakan salah satu sumber klorofil yang kadarnya empat kali lebih tinggi daripada sayuran biasa (Elizabeth, 2005). Telah dilaporkan bahwa ekstrak klorofil Alfalfa (Medicago sativa L.) digunakan sebagai zat pembersih, pembentuk sel darah merah, membantu sistem imunitas tubuh, memiliki aktivitas biologis sebagai antioksidan dan antikanker (Endang, 2007; Limantara, 2009). Berkaitan dengan hal tersebut, klorofil dalam beberapa studi dilaporkan memiliki kapasitas dapat menurunkan kolesterol. Penelitian Alsuhendra et al. (2003) menunjukkan bahwa konsumsi klorofil dari daun singkong secara nyata menurunkan kadar total kolesterol dan LDL serum kelinci New Zealand White jantan setelah 4 minggu diintervensi. Berdasarkan hal tersebut di atas, penulis ingin meneliti lebih lanjut adakah pengaruh pemberian klorofil dari tumbuhan Alfalfa (Medicago sativa L.) dalam penurunan kadar kolesterol Low Density Lipoprotein (LDL) pada hewan coba tikus putih (Rattus norvegicus).

commit to user


digilib.uns.ac.id 3

B. Perumusan Masalah Apakah pemberian klorofil dari tumbuhan Alfalfa (Medicago sativa L.) berpengaruh terhadap penurunan kadar kolesterol LDL pada tikus putih (Rattus norvegicus) ?

C. Tujuan Penelitian Untuk mengetahui pengaruh pemberian klorofil dari tumbuhan Alfalfa (Medicago sativa L.) terhadap penurunan kadar kolesterol LDL pada tikus putih (Rattus norvegicus).

D. Manfaat Penelitian 1. Manfaat teoritis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah mengenai pengaruh pemberian klorofil dari tumbuhan Alfalfa (Medicago sativa L.) terhadap kadar kolesterol LDL pada tikus putih (Rattus norvegicus). 2. Manfaat Praktis Penelitian ini diharapkan dapat dijadikan dasar bagi tahap penelitian lebih lanjut sebagai upaya memanfaatkan klorofil tumbuhan Alfalfa sebagai alternatif diet bagi penderita hiperkolesterolemia.

commit to user


digilib.uns.ac.id

BAB II LANDASAN TEORI

A. Tinjauan Pustaka

1. Kolesterol LDL (Low Density Lipoprotein) a. Definisi Lipid adalah senyawa yang mengandung karbon dan hidrogen yang umumnya hidrofobik: tidak larut dalam air, tetapi larut dalam pelarut organik (Sacher dan McPherson, 2004). Agar lemak dapat larut dalam cairan darah, maka perlu bergabung dengan suatu fraksi protein. Gabungan lemak dan protein yang disebut lipoprotein berfungsi sebagai pengangkut lemak dan kolesterol dalam darah (Soeharto, 2002). Ada empat jenis lipoprotein yaitu : (1) Very Low Density Lipoprotein (VLDL) yang kaya akan trigliserida, (2) Low Density Lipoprotein (LDL) yang mengandung kolesterol paling banyak (60-70%), (3) High Density Lipoprotein (HDL) kaya akan protein dan sangat sedikit mengandung kolesterol, dan (4) Kilomikron (Adam, 2007; Soeharto, 2002). Low Density Lipoprotein (LDL) merupakan derivat dari VLDL. Perubahan VLDL menjadi LDL terjadi dengan adanya enzim-enzim tertentu. VLDL akan mengalami hidrolisis oleh lipoprotein lipase segera setelah keluar dari hepar dan masuk ke dalam sirkulasi, sehingga akan kehilangan sebagian trigliserida dan terbentuklah Intermediate

commit to user 4


digilib.uns.ac.id 5

Density Lipoprotein (IDL). IDL akan mengalami hidrolisis lagi dan terbentuklah LDL. LDL kemudian akan diambil oleh reseptor LDL dalam hepar dan jaringan ekstrahepatik. Pengambilan LDL dari sirkulasi terutama melalui reseptor LDL di permukaan sel. Hampir semua jaringan tubuh mampu mensintesis reseptor LDL dan hepar merupakan organ dengan tingkat aktivitas reseptor paling tinggi (Mayes, 2003a). LDL diambil oleh jaringan, terutama oleh sel-sel hati, melalui dua proses : (1) reseptor dependent yaitu melibatkan interaksi Apo B100 – reseptor LDL spesifik di permukaan sel dan (2) reseptor independent yaitu non saturable dan tidak diregulasi, uptake melalui proses ini menjadi lebih besar bila kadar LDL plasma meningkat (Mayes, 2003a; Soeharto, 2002; Suthardio, 2006). Kolesterol LDL bersifat aterogenik. Setiap partikel pada permukaannya mempunyai satu molekul Apoprotein B-100 (Apo B100), yang mana dapat berinteraksi dengan reseptor LDL yang ada di hati dan mengangkut kolesterol yang jumlahnya bervariasi (Suthardio, 2006). Reseptor LDL (Apo B-100, E) terdapat pada permukaan sel di dalam lekukan yang terkait pada sisi sitosol membrane sel dengan sebuah protein yang dinamakan klatrin. Reseptor tersebut merupakan glikoprotein yang berpengaruh terhadap membran sel, dan daerah pengikatan Apo B-100 terletak pada ujung terminal yang terpajan.

commit to user


digilib.uns.ac.id 6

Setelah berikatan dengan reseptor, LDL diambil dalam keadaan utuh melalui endositosis. Kemudian LDL dipecah oleh lisosom di dalam sel, yang melibatkan hidrolisis apoprotein dan ester kolesteril yang diikuti oleh translokasi kolesterol ke dalam sel. Reseptor tersebut tidak dihancurkan tetapi kembali ke permukaan sel. Aliran masuk kolesterol ini menghambat kerja HMG-KoA reduktase dengan cara terkoordinasi, dan demikian menghambat sintesis kolesterol serta menstimulasi aktivitas ACAT (asil-KoA: kolesterol asiltransferase) yaitu enzim yang mengkatalisis esterifikasi kolesterol dan mengurangi sintesis reseptor LDL. Jadi, aktivitas reseptor LDL akan diatur turun oleh kadar kolesterol sel yang tinggi dan peningkatkan aktivitas reseptor LDL, terjadi apabila adanya deplesi kolesterol (Mayes, 2003b). Low Density Lipoprotein (LDL) telah diprediksikan sebagai penyebab PJK (Penyakit Jantung Koroner) dalam berbagai penelitian. Penurunan kadar LDL darah dengan terapi statin mengurangi risiko PJK hingga 50%. Small dense LDL adalah partikel LDL berukuran kecil yang dicerminkan dengan peningkatan Apo B. Small dense LDL diperkirakan lebih berisiko menimbulkan PJK dibandingkan dengan LDL berukuran besar. Small dense LDL meningkatkan risiko PJK karena lebih mudah menembus endotel dinding arteri dan menimbulkan plak serta lebih mudah dioksidasi (Cedust de Jakarta, 1995; Murphy, 2004).

commit to user


digilib.uns.ac.id 7

b. Distribusi Distribusi lipoprotein di dalam darah dapat melalui jalur endogen dan jalur eksogen. Pada jalur eksogen, mula-mula trigliserida dan kolesterol makanan di epitel usus diubah menjadi kilomikron. Melalui saluran limfe, kilomikron masuk ke dalam sirkulasi darah hingga kapiler jaringan adiposa dan otot rangka, kemudian trigliserida pada inti kilomikron akan dihidrolisis oleh enzim Lipoprotein Lipase (LPL) menjadi asam lemak yang akan masuk ke dalam jaringanjaringan, serta kilomikron remnant yang nantinya akan diambil oleh hati melalui reseptor yang terdapat di hati (Suthardio, 2006). Pada jalur endogen, trigliserida disintesis di dalam hati kemudian diekskresikan ke dalam darah dalam bentuk Very Low Density Lipoprotein (VLDL). VLDL kemudian akan dimetabolisme oleh enzim lipoprotein lipase menjadi Intermediate Density Lipoprotein (IDL). Kemudian, melalui serangkaian proses, IDL akan diubah menjadi Low Density Lipoprotein (LDL) yang kaya akan kolesterol. LDL ini berfungsi mengangkut kolesterol dari hati ke jaringan-jaringan dalam tubuh (Mayes, 2003a; Suthardio, 2006). c. Interaksi Lipoprotein dalam Dinding Arteri Miller

(1987)

mengemukakan

tentang

proses

interaksi

lipoprotein dalam dinding arteri. Semua lipoprotein dari plasma memasuki dinding arteri, melalui lapisan sel endotel. LDL mangalami perubahan kimia akibat interaksi dengan sel-sel endotel, proteoglikan

commit to user


digilib.uns.ac.id 8

atau oleh makrofag melalui reseptor scavenger. Otot polos dalam intima juga akan menangkap LDL melalui proses yang tidak diperantarai oleh reseptor. Mekanisme utama untuk membersihkan kolesterol dalam makrofag dan sel otot polos adalah melalui pemindahan kolesterol bebas ke High Density Lipoprotein (HDL). HDL yang kaya akan kolesterol akan berdifusi keluar dari dinding arteri menuju kelenjar limfe atau plasma melalui pinositosis balik oleh sel-sel endotel. Foam cell akan terbentuk jika kolesterol yang masuk ke dalam makrofag

melebihi

kolesterol

yang

keluar

dari

makrofag.

Ketidakseimbangan influks dan efluks kolesterol pada sel otot polos pun akan menyebabkan terbentuknya foam cell otot polos. Beberapa sel otot polos menimbun kolesterol dalam jumlah kecil, tetapi lebih banyak mensekresi komponen matrik jaringan ikat kolagen dan proteoglikan. Peningkatan sekresi komponen-komponen jaringan ikat tersebut dapat memperberat lesi atherosklerosis yang terjadi.

2. Tumbuhan Alfalfa (Medicago sativa) a. Klasifikasi Alfalfa (Medicago sativa) Kingdom

: Plantae (Tumbuhan)

Subkingdom

: Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)

Super Divisi

: Spermatophyta (Menghasilkan biji)

Divisi

: Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Kelas

: Magnoliopsida (Berkeping dua/Dikotil)

commit to user


digilib.uns.ac.id 9

Sub Kelas

: Rosidae

Ordo

: Fabales

Famili

: Fabaceae (suku polong-polongan)

Genus

: Medicago

Spesies

: Medicago sativa L.

Nama umum

: Alfalfa, buffalo herb, lucerne, purple medic, jatt, kaba yonca, mielga, mu su, sai pi li ka, dan yonja. (Plantamor, 2008; Rahmayanti dan Sitanggang, 2008)

Alfalfa merupakan tanaman kacang-kacangan yang tumbuh di berbagai kondisi iklim dengan kemampuan adaptasi cukup baik, sehingga tersebar di berbagai belahan dunia. Tanaman Alfalfa dapat hidup tiga hingga 12 tahun, tergantung varietas dan iklim di mana tanaman itu hidup. Tingginya bisa mencapai satu meter, memiliki akar yang sangat panjang hingga mencapai 4,5 meter (Astawan, 2008). Alfalfa (Medicago sativa L.) termasuk golongan famili fabaceae yang ditandai dengan adanya bintil-bintil akar akibat asosiasi dengan bakteri Rhizobium sp sehingga mampu memfiksasi nitrogen atmosfer secara efektif. Hasil penelitian di luar negeri telah berhasil membuktikan berbagai zat yang terkandung di dalam tanaman Alfalfa tersebut. Kandungan protein tanaman Alfalfa yang tinggi dan klorofil tinggi, sampai empat kali lipat dibandingkan dengan tanaman sayuran yang lain, sehingga sangat bermanfaat untuk meningkatkan kesehatan manusia dan hewan ternak (Parman, 2007).

commit to user


digilib.uns.ac.id 10

Gambar 1. Tanaman Alfalfa (Rahmayanti dan Sitanggang, 2008)

b. Kandungan Alfalfa Alfalfa dikenal sebagai salah satu tumbuhan dengan kandungan gizi sangat tinggi. Kandungan kalsium, klorofil, karoten, dan vitamin K yang cukup tinggi, menjadikan alfalfa sebagai salah satu suplemen yang sering dikonsumsi manusia. Seluruh bagian tanaman ini mengandung komponen yang bersifat fungsional bagi tubuh, seperti saponin, sterol, flavonoid, kumarin, alkaloid, vitamin, asam amino, gula, protein, mineral, dan komponen gizi lainnya. Selain itu juga mengandung serat (dietary fiber) dalam jumlah cukup banyak dan dapat berfungsi sebagai antikolesterol (Astawan, 2008). Salah satu komponen paling dominan adalah saponin yang banyak ditemukan pada bagian daun Alfalfa (Parman dan Harnina, 2008). Komponen saponin pada Alfalfa mencapai 2-3 persen. Penelitian pada hewan percobaan terdahulu menunjukkan bahwa saponin bisa membantu menurunkan kadar kolesterol (Astawan, 2008).

commit to user



Keunggulan lain dari daun Alfalfa yaitu memiliki kandungan vitamin dan mineral cukup lengkap. Vitamin yang terkandung dalam Alfalfa adalah vitamin A, thiamin (vitamin B1), riboflavin (vitamin B2), niasin (vitamin B3), vitamin B5, vitamin B6, vitamin C, vitamin K, dan asam folat. Dan mineral unggulan, yakni kalsium, besi, magnesium, fosfor, tembaga, dan seng. Kandungan gizi tersebut dapat dilihat pada tabel 1. Tabel 1. Kandungan Gizi dalam Satu Tanaman Alfalfa (Astawan, 2008) Zat Gizi

Kadar

Energi

23 kal

Karbohidrat total

2,1 gr

Serat Pangan

2,9 gr

Lemak Total

0,7 gr

Protein

4,0 gr

Vitamin A

155 IU

Vitamin C

8,2 mg

Vitamin K

30,5 mg

Asam folat

36 Kg

3. Klorofil Klorofil berasal dari bahasa Yunani, chloros (hijau kekuningan) dan phyllon (daun). Klorofil pertama kali didokumentasikan oleh Palletier dan Caventow dan diisolasi oleh Sorby pada tahun 1873 (Vargas dan Lopez, 2003). Secara struktural, klorofil merupakan porfirin yang mengandung cincin dasar tetrahidrol, di mana keempat cincin berikatan dengan ion Mg2+, dan memiliki cincin isosiklik yang kelima yang berada

commit to user



dekat dengan cincin pirol ketiga. Pada cincin keempat, subtituen asam propionat diesterifikasi oleh gugus fitol, suatu diterpen alkohol (C20H39OH), yang bersifat hidrofobik. Jika gugus ini dihilangkan dari struktur intinya maka klorofil berubah menjadi turunannya yang bersifat hidrofilik (Gross, 1991). Klorofil adalah pigmen utama berwarna hijau pada semua makhluk hidup yang mampu melakukan fotosintesis. Klorofil terletak dalam badan-badan plastid yang disebut kloroplas (Clydesdale dan Francis, 1976). Klorofil dibagi menjadi 2 jenis, yaitu klorofil a dan klorofil b. Kedua bentuk ini identik, kecuali klorofil a mempunyai suatu gugus metil pada C-3 dari cincin II dan klorofil b mempunyai suatu gugus formil pada posisi itu (Amstrong, 1995). Struktur utama dari klorofil adalah cincin porfirin yang menyerupai heme pada hemoglobin (gambar 2), hanya saja atom sentral pada klorofil adalah magnesium, sedangkan pada heme adalah besi (Jane, 2005). Klorofil alami bersifat lipofilik (larut lemak) karena keberadaan gugus fitolnya. Hidrolisis dengan asam atau klorofilase terhadap gugus tersebut akan mengubah klorofil menjadi turunannya yang larut air (hidrofilik) antara lain klorofilid dan klorofilin. Klorofil alami, seperti klorofil-a dan klorofil-b, bersifat lipolifik karena keberadaan gugus fitolnya (C20H39OH). Hidrolisis terhadap gugus tersebut akan mengubah klorofil menjadi turunannya yang larut yang memiliki kemampuan sebagai

commit to user



radik kal scavengeer terhadap *OH, ROO*, O2 dan H2O2 (Kumar et al., 2001; Kam mat et al., 20000). Penelitiann Alsuhendrra et al. (200 03) menunjuukkan bahwaa konsumsi kloro ofil

dari daun singkkong secara nyata mennurunkan kadar k total

kolessterol dan LDL L serum kelinci New w Zealand W White jantan n setelah 4 ming ggu diinterveensi. Klorofil memiliki haampir semuua zat gizi yyang diperlu ukan tubuh dalam m komposissi seimbang. Klorofil juuga kaya akaan zat antipperadangan, antibbakteri, antip parasit, dan zat-zat berk khasiat lainnnya (Limantaara, 2009). Funggsi klorofil yang y terpentting adalah memperbaikki fungsi hatti sehingga dapaat menjalank kan fungsi metabolisme m makanan ddan detoksifiikasi racun sertaa meningkaatkan sistem m imun deengan meraangsang pem mbentukan lymp phosit T-helpper (Sargowoo dan Retty, 2002).

Gamb bar 2. Strukttur klorofil dan d hemogloobin (Jane, 20005)

commit to user



4. Peranan

Tumbuhan

Alfalfa

(Medicago

sativa)

dalam

Proses

Penurunan Kadar Kolesterol LDL Berikut beberapa senyawa-senyawa fitokimia yang terkandung dalam tumbuhan Alfalfa yang dapat menurunkan kadar kolesterol LDL: a. Saponin Menurut Oleszek (2000) saponin pada tumbuhan Alfalfa memiliki kemampuan mengikat kolesterol diet dan membatasi penyerapannya, selain itu saponin Alfalfa meningkatkan ekskresi asam empedu dan meningkatkan konversi kolesterol menjadi asam empedu. b. Klorofil Klorofil mampu menstimulasi fungsi hati untuk menurunkan kadar kolesterol darah dengan cara meningkatkan jumlah dan aktivitas reseptor LDL di hati dan sel, serta meningkatkan ekskresi asam empedu, menurunkan kadar renin dan melebarkan pembuluh darah sehingga tidak terjadi penyumbatan pembuluh darah oleh lemak (Limantara, 2009; Mayes, 2003a). Klorofil terbukti mempunyai aktivitas biologis sebagai antioksidan yang dapat melindungi kolesterol LDL agar tidak mudah teroksidasi (Limantara, 2009; Endang, 2007). Penurunan kadar LDL berhubungan dengan penurunan kadar total kolesterol. Hal ini karena sekitar 65% total kolesterol adalah LDL. Mekanisme penurunan LDL diduga karena adanya hambatan terhadap reabsorpsi asam empedu oleh klorofil yang mengakibatkan peningkatan

commit to user



katabolisme LDL untuk pembentukan asam empedu, sehingga kadar LDL menjadi rendah (Muchtadi et al., 1993). c. Flavonoid Sebagai antioksidan flavonoid akan melindungi LDL kolesterol hingga tidak teroksidasi oleh radikal bebas (Buhler dan Cristobal, 2000). Selain sebagai antioksidan flavonoid juga dapat menurunkan kadar kolesterol darah dengan cara meningkatkan ekskresi asam empedu (Carvajall-Zarrabal et al., 2005). d. Fitosterol Berbagai penelitian menunjukkan asupan fitosterol berbanding terbalik dengan jumlah kolesterol dalam darah. Peningkatan asupan fitosterol akan meningkatkan penggunaan betakaroten untuk membentuk protein yang diperlukan pada proses metabolisme tubuh serta menurunkan kadar kolesterol LDL. Mekanismenya yaitu dengan menurunkan kelarutan kolesterol dalam fase minyak dan menekan reabsorpsi asam empedu (Ikeda dan Sugano, 1998). e. Serat Serat mempunyai mekanisme penurunan kolesterol darah sebagai berikut: 1) peningkatan asam empedu di dalam usus halus yang menyebabkan meningkatnya ekskresi asam empedu fekal; 2) penurunan absorpsi lemak dan kolesterol; 3) penurunan laju insulin serum sehingga menurunkan sintesis kolesterol dan lipoprotein (Astawan et al., 2005).

commit to user



5.

Tikus Putih (Rattus novergicus) Tikus putih jantan dapat digunakan sebagai hewan percobaan karena tikus putih jantan dapat memberikan hasil penelitian yang lebih stabil. Tikus putih jantan tidak dipengaruhi oleh adanya siklus menstruasi dan kehamilan (hormonal) seperti pada tikus putih betina. Tikus putih jantan juga mempunyai kecepatan metabolisme yang lebih cepat dan kondisi biologi yang lebih stabil dibanding dengan tikus putih betina (Sugiyanto, 1995). Tikus putih sebagai hewan percobaan relatif resisten terhadap infeksi dan sangat cerdas. Tikus putih tidak begitu bersifat fotofobik seperti halnya mencit (Mus musculus) dan kecenderungan untuk berkumpul dengan sesamanya tidak begitu besar. Aktivitasnya tidak terganggu oleh adanya manusia di sekitarnya. Tikus Laboratorium jantan jarang berkelahi seperti mencit jantan. Tikus dapat tinggal sendirian dalam kandang dan hewan ini lebih besar dibanding dengan mencit. Sehingga, untuk percobaan laboratorium tikus putih lebih menguntungkan daripada mencit (Mangkoewidjojo, 1988).

6. PTU (Propiltiourasil) Tikus relatif resisten terhadap perubahan profil lipid karena tikus cenderung hipertiroid. Hormon tiroid akan mengaktifkan hormon sensitif lipase sehingga proses katabolisme lipid dalam tubuh tikus tinggi. Peningkatan

induksi

hiperkolesterol

commit to user

dengan

menggunakan

pakan



hiperkolesterolemik dipermudah dengan menurunkan aktivitas hormon tiroid tikus putih. Pemberian Propiltiourasil (PTU) yang dicampur air minum tikus secara ad libitum dapat menurunkan produksi hormon tiroid sehingga kondisi hiperkolesterolemia mudah tercapai (Midian, 1993). Propiltiourasil (PTU) adalah zat kimia yang dapat menekan aktivitas kelenjar tiroid, berupa tablet yang dihaluskan dan dilarutkan dalam air. Propiltiourasil diberikan pada tikus melalui air minumnya. Air minum dicampur dengan PTU sehingga didapatkan konsentrasi PTU adalah 0,01%, artinya dalam satu liter air terlarut 100 mg PTU. Air minum tersebut disediakan dalam tempat air minum tikus dan diberikan ad libitum (Phyto medica, 1993).

commit to user



B. Kerangka Pemikiran

Alfalfa Klorofil

Menghambat reabsorpsi as.empedu

Meningkatkan jumlah dan aktivitas reseptor LDL di hati dan sel

Meningkatkan ekskresi as.empedu

Meningkatkan Katabolisme LDL

Penurunan Kadar kolesterol LDL

C. Hipotesis Klorofil tumbuhan Alfalfa (Medicago sativa L.) memiliki efek menurunkan kadar kolesterol LDL tikus putih (Rattus norvegicus).

commit to user


digilib.uns.ac.id

BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis Penelitian Penelitian ini bersifat eksperimental laboratorik dengan desain penelitian Pretest and Posttest Control Group Design (Pratikya, 2008).

B. Lokasi Penelitian Penelitian dilakukan pada tanggal 31 Mei sampai dengan tanggal 28 Juni 2010 di Laboratorium Farmasi Universitas Setia Budi Surakarta.

C. Subyek Penelitian Subyek penelitian ini adalah tikus putih (Rattus norvegicus), jantan, strain Wistar, usia kurang lebih 3 bulan dengan berat badan ± 200 gram.

D. Teknik Sampling Pemilihan sampel dipilih secara random sederhana (simple random sampling) dengan pengundian dan besar sampel sebanyak 24 ekor, yang dibagi dalam empat kelompok (satu kelompok kontrol dan tiga kelompok perlakuan). Adapun cara perhitungan besar sampel yang dibutuhkan dengan rumus Federer, sebagai berikut (Arkerman, 2006) :

Rumus Federer : (n‐1) (t‐1) > 15 commit to user 19



Ket : n = jumlah tikus per kelompok t = jumlah kelompok (n-1) (t-1) > 15 Æ (t = 4) (n-1) (4-1)> 15 (n-1) (3) > 15 3n-3

> 15 Æ 3n > 18 Æ n = 6 ekor

Dengan dasar ini, didapatkan jumlah tikus putih per kelompok adalah 6 ekor. Namun, untuk mengantisipasi jika terdapat tikus yang mati di tengah percobaan berlangsung, maka peneliti menyediakan 32 ekor tikus dengan 8 ekor tikus sebagai cadangan.

E. Identifikasi Variabel Penelitian 1. Variabel Bebas

: Dosis klorofil Alfalfa (Medicago sativa L.)

2. Variabel Terikat

: Kadar LDL pada tikus putih (Rattus norvegicus)

3. Variabel Perancu a. Terkendali 1) Makanan dan minuman 2) Karakteristik tikus putih (Rattus norvegicus) : galur/strain, umur, jenis kelamin, dan berat badan b. Tidak Terkendali 1) Kondisi psikologis tikus (dipengaruhi lingkungan sekitar) 2) Faktor internal (penyakit hati, stres, fungsi organ dalam tikus)

commit to user



F. Definisi Operasional Variabel 1. Variabel Bebas Dosis Klorofil Klorofil yang digunakan dalam penelitian berbentuk serbuk Klorofil dari tumbuhan Alfalfa (Medicago sativa L.), diperoleh dari High Valley Manufacturing Sdn. Bhd., Selangor, Malaysia. Klorofil diberikan pada subyek penelitian dengan mencampurkan serbuk klorofil dengan air dan diberikan per oral secara sonde lambung. Dosis klorofil untuk terapi adalah 100 mg/kg BB/hari (Limantara, 2009). Faktor konversi manusia dengan berat badan 70 kg ke tikus putih dengan berat badan 200 gr adalah 0,018 (Suhardjono, 1995; lihat Lampiran A), sehingga dosis satu kali pemberian klorofil pada tikus adalah 0,018 x 100 = 1,8 mg/200 gr BB tikus. Selanjutnya untuk mengetahui dosis yang efektif dalam penurunan kadar kolesterol darah, tikus putih dikelompokkan ke dalam empat kelompok perlakuan, sebagai berikut : Kelompok I

: Dosis 0 mg (kelmpok kontrol)

Kelompok II : Dosis 1,8 mg/200 gr BB/hari (Dosis 1x) Kelompok III : Dosis 2,7 mg/200 gr BB/hari (Dosis 1,5x) Kelompok IV : Dosis 3,6 mg/200 gr BB/hari (Dosis 2x) Skala pengukuran variabel menggunakan skala ordinal.

commit to user



2. Variabel Terikat Kadar Low Density Lipoprotein (LDL) Kadar LDL darah hewan uji diukur dengan alat spectrophotometer, dilakukan 2 kali yaitu sebelum dan sesudah pemberian perlakuan setelah subyek dipuasakan selama 12 jam dengan satuan mg/dl. Pengukuran dilakukan dengan mengambil darah tikus melalui sinus orbitalis dengan pipa mikrohematokrit lalu ditampung dalam tabung sentrifuge. Darah dipusingkan selama 10-15 menit dengan kecepatan 3000 rpm sehingga didapatkan serum darah untuk diperiksa kadar LDL darahnya. Sampel serum 10 µL ditambah reagen R1 1000 µL sebagai larutan standar, diinkubasi selama 10 menit pada suhu 370 Celcius. Kemudian dibandingkan dengan larutan blanko (kit-Reagen 1000 µL dicampur dengan 10 µL aquades). Warna hasil antara sampel dan reagen diperiksa absorbansinya

dengan

spectrophotometer

stardust

pada

panjang

gelombang 546 nm, kemudian dibandingkan dengan warna reagent blanko. Lalu hasil absorbansinya dibaca pada panjang gelombang 546 nm dalam waktu kurang dari 60 menit. Proses pengukuran kadar kolesterol LDL darah dilakukan di Laboratorium Farmasi Universitas Setia Budi Surakarta. Skala pengukuran variabel menggunakan skala rasio.

commit to user



3. Variabel Terkendali a.

Pakan Pakan yang digunakan ada dua macam : 1) Pakan Hiperkolesterolemia Pakan yang terbuat dari campuran 5 ml kuning telur itik, 10 ml minyak babi, 1 ml minyak kelapa, dan 0,1 gram serbuk kolesterol (Phyto Medica, 1993). Pakan hiperkolesterolemik diberikan sebanyak 2,5 ml. Hal ini memenuhi syarat dari volume oral maksimum tikus putih yaitu sebesar 5 ml (Lampiran B). Pakan hiperkolesterolemik diberikan setelah masa adaptasi selama 7 hari dan juga pada masa perlakuan dengan klorofil selama 21 hari. Pemberian pakan hiperkolesterolemik sebanyak dua kali sehari secara oral menggunakan sonde lambung. 2) Pakan Biasa/Standar Pakan yang digunakan adalah pakan buatan yang berupa pelet BR-2 yang diproduksi oleh PT. Sentral Proteinaprima, Surabaya.

b.

Minuman Minuman yang diberikan diperoleh dari air PDAM. Air minum tersebut dicampur dengan PTU sehingga didapatkan konsentrasi PTU 0,01% dan diberikan secara ad libitum (Midian, 1993).

commit to user



c.

Faktor Genetik Faktor genetik/galur yang dimaksud di sini adalah faktor genetik Rattus norvegicus. Hal ini diatasi dengan pemilihan subyek penelitian yang berasal dari galur yang sama (galur Wistar) dan menggunakan sistem randomisasi sehingga diharapkan distribusi dari faktor genetik ini merata pada tiap kelompok penelitian.

d. Umur, Jenis Kelamin dan Berat Badan Umur merupakan variabel perancu yang dapat dikendalikan dengan cara digunakan tikus putih (Rattus norvegicus) berumur 3 bulan untuk membuat sampel homogen dan menghindari peningkatan kolesterol LDL darah karena faktor umur. Penelitian ini menggunakan tikus putih (Rattus norvegicus) jantan supaya sampel bersifat homogen serta menghindari adanya pengaruh hormon esterogen. Hormon esterogen pada tikus betina dapat berpengaruh terhadap penurunan kadar kolesterol total darah. Berat badan akan mempengaruhi dosis klorofil yang digunakan. Berat badan dapat dikendalikan dengan cara menggunakan tikus putih (Rattus norvegicus) yang beratnya berkisar antara 189-210 gram (tabel 2). 4. Variabel Tidak Terkendali a. Kondisi Psikologis Tikus Kondisi psikologis tikus dapat dipengaruhi oleh pemberian klorofil melalui sonde oral yang berulang dan imobilisasi tikus. Pengaruh ini

commit to user



dapat dikurangi dengan adanya waktu adaptasi sebelum percobaan dan pemisahan subyek penelitian dalam kandang yang terpisah, di mana satu kelompok perlakuan diberi satu kandang. b. Hormon dan Penyakit Hati Penyakit hati dapat menimbulkan kelainan pada kadar kolesterol. Penyakit hati dan faktor hormonal pada tikus merupakan variabel yang tidak sepenuhnya dapat dikendalikan karena sulitnya pendeteksian dini dan membutuhkan pemeriksaan yang membutuhkan biaya besar. Namun, untuk mengurangi pengaruh faktor penyakit hati dapat dipilih tikus yang sehat dan aktif.

commit to user



G. Rancangan Penelitian Tikus putih 32 ekor, umur 3 bulan dan BB ± 200 gr, diadaptasikan 7 hari dengan pakan standar Pelet BR‐2

Tikus putih dikelompokkan secara random

Klpk. I (Kontrol) 8 ekor Diinduksi pakan hiperkolesterolemik 7 hari

Kelompok II 8 ekor Diinduksi pakan hiperkolesterolemik 7 hari

Kelompok III 8 ekor Diinduksi pakan hiperkolesterolemik 7 hari

Kelompok IV 8 ekor Diinduksi pakan hiperkolesterolemik 7 hari

Dipuasakan 12 jam

Dipuasakan 12 jam

Dipuasakan 12 jam

Dipuasakan 12 jam

Pretest kadar LDL

Pretest kadar LDL

Pretest kadar LDL

Pretest kadar LDL

Perlakuan 21 hari Hiperkolesterolemia + Klorofil dosis 0

Perlakuan 21 hari Hiperkolesterolemia + Klorofil dosis 1,8 mg/200 gr BB


Dipuasakan 12 jam

Dipuasakan 12 jam

Dipuasakan 12 jam

Posttest

Posttest

Posttest

Posttest

kadar LDL

kadar LDL

kadar LDL

kadar LDL

Analisis Statistik

commit to user


Dipuasakan 12 jam



H. Alat dan Bahan Penelitian Alat yang digunakan : 1. Kandang hewan uji 2. Timbangan (Neraca Analitis Elektrik) 3. Tabung sentrifugasi 4. Pipa mikrohematokrit 5. Spuit injeksi/canul 6. Alat pencekok oral/sonde lambung 7. Pipet ukur 8. Gelas ukur 9. Pengaduk 10. Rak tabung reaksi 11. Sentrifuge 12. Spectrophotometer Stardust

Bahan yang digunakan : 1.

Pakan buatan pelet BR-2

2.

Pakan hiperkolesterolemia (serbuk kolesterol, kuning telur itik, minyak babi, minyak kelapa)

3.

Air minum ditambah PTU (Propiltiourasil) 0,01%

4.

Klorofil dari tumbuhan Alfalfa

commit to user



I. Cara Kerja Langkah 1

: Tikus putih sebanyak 32 ekor diadaptasikan selama 1

minggu. Dengan diberi pakan berupa pelet standar BR-2. Subyek penelitian dikelompokkan secara random. Langkah 2

: Subyek penelitian dibagi dalam 4 kelompok masing-

masing 8 ekor. Kelompok kontrol (I), kelompok II, III dan IV berturutturut sebagai kelompok perlakuan 1, 2 dan 3. Langkah 3

: Kemudian tikus yang telah dikelompokkan diinduksi

pakan hiperkolesterolemik selama 7 hari. Pakan hiperkolesterolemik diberikan secara oral menggunakan sonde lambung dua kali sehari pada pukul 07.00 dan pada pukul 16.00, masing-masing sebanyak 2,5 ml. Langkah 4

: Pada hari ke-8 semua subyek diambil darahnya untuk

pemeriksaan kadar LDL darah pretest. Semua tikus dipuasakan selama 12 jam sebelum diambil darahnya, dengan air minum tetap diberikan. Hal ini dilakukan untuk memudahkan pengambilan darah guna pengukuran kadar LDL. Langkah 5

: serbuk klorofil dicampur dengan air dan diberikan secara

oral menggunakan sonde lambung dua kali sehari pada pukul 08.00 dan pukul 17.00. Dosis klorofil yang diberikan terbagi menjadi 3 dosis berturut-turut yaitu : 1,8 mg; 2,7 mg; 3,6 mg/200 gr BB untuk kelompok II, III dan IV. Langkah 6

: Keempat kelompok diberikan perlakuan sebagai berikut:

commit to user



Kelompok I (Kontrol) : diinduksi pakan hiperkolesterolemik 2,5 ml dua kali

sehari selama tiga minggu.

Kelompok II, III dan IV: ketiganya diinduksi pakan hiperkolesterolemik 2,5 ml dua kali sehari dan berturut-turut diberi klorofil 1,8 mg, 2,7 mg dan 3,6 mg dua kali sehari secara oral dengan menggunakan sonde lambung selama tiga minggu. Antara pemberian pakan hiperkolesterolemik dengan pemberian klorofil diberi jeda 1 jam. Langkah 7 : Setelah 3 minggu, semua subyek penelitian diambil darahnya untuk pemeriksaan kadar LDL darah posttest. Sebelumnya subyek dipuasakan dulu selama 12 jam, dengan air minum tetap diberikan. Hal ini dilakukan untuk memudahkan pengambilan darah guna pengukuran kadar LDL. Langkah 8

:

Kadar

LDL

diukur

dengan

metode

langsung

menggunakan alat spectrophotometer stardust. Langkah 9

: Kadar LDL darah tiap kelompok ditabulasi dan dianalisis.

J. Teknik Analisis Data Data yang diperoleh dari penelitian dianalisis secara statistik dengan uji ANOVA (Analysis of Varians) dilanjutkan uji komparatif LSD Post Hoc Test dengan derajat kemaknaan α = 0,05. Jika data tidak memenuhi syarat untuk uji ANOVA, karena sebaran data tidak normal dan varians data tidak

commit to user



sama meskipun telah ditransformasi, digunakan uji alternatifnya yaitu uji Kruskal-Wallis untuk membandingkan perbedaan mean lebih dari dua kelompok.

Analisis,

dilanjutkan

dengan

uji

Mann-Whitney,

untuk

membandingkan perbedaan mean antarkelompok menggunakan program SPSS for Windows Release 17.0.

commit to user


digilib.uns.ac.id

BAB IV HASIL PENELITIAN

A. Hasil Penelitian Penelitian ini menggunakan 32 ekor tikus putih (Rattus norvegicus) strain Wistar, jantan, berumur ± 3 bulan dengan berat badan ± 200 gram. Berat badan tikus putih yang digunakan sebagai sampel adalah berkisar antara 189 sampai dengan 210 gram. Adapun rerata berat badan tikus dapat dilihat dalam tabel berikut : Tabel 2. Tabel Rerata Berat Badan Tikus Putih Sebelum Diberi Perlakuan Rerata Berat Badan (g) + SD

Kelompok

N

I

8

196

II

8

197,5 + 4,95

III

8

198

IV

8

199,5 + 1,06

+ 4,56 + 3,54

Hasil uji statistik ANOVA untuk berat badan tikus putih sebelum diberi perlakuan menunjukkan nilai p = 0,355, oleh karena p >0,05 maka dapat disimpulkan bahwa perbedaan berat badan antara keempat kelompok tidak bermakna. Pengukuran kadar kolesterol LDL dilakukan sebanyak dua kali, yaitu sebelum diberi perlakuan (pretest) dan setelah diberi perlakuan (posttest). Hasil pengukuran kedua kadar kolesterol LDL darah tikus putih (Rattus norvegicus) tersebut ditunjukkan dalam tabel 3.

commit to user 31



Tabel 3. 3 Rerata Kad dar Kolesterrol LDL Darah Kelompok

N

Rerataa Kadar Koleesterol LDL Darah + SD D Prretest

P Posttest

I

8

106,877 + 18,33

90,65 + 46,82

II

8

121,622 + 8,45

8,95 + 3,59

III

8

120,500 + 13,37

16,65 + 6,13

IV

8

122,955 + 35,07

16,97 + 3,53

Untuk U lebihh memperjelas hasil peengukuran kkadar kolessterol LDL darah prretest dan po osttest pada masing-massing kelompook, dapat diggambarkan dalam gambar g 3.

140 120 100 80 60 40 20 0

pretest posttest

Kontrol (dosis 0)

Kelompok II Kelompok III Kelompok IV (dosis 1,8 (dosis 2,7 (dosis 3,6 mg) mg) mg)

Gamba ar 3. Histog gram Rerata K Kadar Kolessterol LDL Darah D Tikus Putih

Pada P gambarr 3 di atas, dapat d dilihat terjadi penuurunan kadarr kolesterol LDL darah

padaa kelompok perlakuan II, III dann IV. Grafiik tersebut

merupakkan gambarran mengenaai sejauh mana m efek hiipokolesteroolemik dari perlakuaan yang diharapkan d dari masingg-masing kelompok. k D Data hasil penguku uran posttest inilah yangg akan diujii secara statiistik untuk mengetahui m

commit to user



efektivitas pemberian klorofil dari tumbuhan Alfalfa dalam menurunkan kadar kolesterol LDL darah dan diharapkan dapat diketahui dosis mana yang paling efektif dalam menurunkan kadar kolesterol LDL darah. Untuk hasil lebih lengkapnya terdapat pada lampiran F.

B. Analisis Data Analisis data hasil penelitian yang telah diperoleh tersebut diuji statistik dengan bantuan program SPSS for Windows Versi 17.0. 1. Uji Normalitas Dari data tersebut dilakukan uji normalitas (test of normality) untuk mengetahui sebaran data dari penelitian ini menggunakan uji nonparametrik Shapiro-Wilk pada program SPSS for Windows Versi 17.0 dengan nilai signifikasi (p) >0,05. Uji Shapiro-Wilk ini digunakan karena jumlah sampelnya yang kurang dari 50 (Dahlan, 2008). Hasil uji normalitas pretest dan posttest menunjukkan nilai signifikansi (p) pada kelompok I (kontrol) sebesar 0,028 dan 0,022; kelompok II sebesar 0,216 dan 0,940; kelompok III sebesar 0,178 dan 0,985; serta kelompok IV sebesar 0,000 dan 0,085. Dari data tersebut terlihat terdapat perbedaan pada keempat kelompok untuk tiap pengukuran. Hasil uji normalitas pada kelompok II, III dan IV menunjukkan nilai p >0,05 sehingga dapat disimpulkan bahwa populasi berdistribusi normal, namun pada kelompok I (kontrol) menunjukkan nilai p <0,05 yang berarti populasi tidak berdistribusi normal.

commit to user



2. Uji Homogenitas Hasil uji homogenitas varians menunjukkan nilai signifikansi (p) data pretest dan posttest sebesar 0,241 dan 0,000, nilai p data selisih (penurunan) kadar kolesterol LDL sebesar 0,011. Hasil nilai signifikansi (p) untuk pretest saja yang memenuhi syarat p >0,05, sedangkan untuk posttest dan selisih kadar kolesterol LDL tidak memenuhi syarat yaitu p <0,05. Dapat disimpulkan bahwa variansi data tidak sama. Karena tidak memenuhi syarat uji ANOVA dalam distribusi dan homogenitas variansnya, sehingga data yang diperoleh dianalisis secara statistik menggunakan uji alternatifnya yaitu Kruskall-Wallis. 3. Uji Kruskall-Wallis Uji Kruskall-Wallis ini merupakan uji nonparametrik untuk membandingkan perbedaan mean lebih dari dua kelompok dengan distribusi data yang tidak normal (Dahlan, 2008). Hasil uji Kruskall-Wallis diperoleh nilai signifikansi (p) sebesar 0,001. Nilai p= 0,001 (p <0,05), maka dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan bermakna dari kadar kolesterol LDL darah di antara keempat kelompok dalam penelitian ini. Hasil uji statistik selengkapnya dapat dilihat pada lampiran F. 4. Uji Mann-Whitney Untuk mengetahui perbedaan mean antarkelompok tersebut dilakukan uji Post Hoc dengan batas signifikansi (p) <0,05. Pada penelitian ini digunakan prosedur uji Mann-Whitney karena keempat

commit to user



kelompok menunjukkan variansi yang tidak sama pada uji homogenitas varians (Dahlan, 2008). Hasil uji Post Hoc bermakna menunjukkan adanya perbedaan mean penurunan kadar kolesterol LDL yang signifikan serta adanya perbedaan pengaruh antarkelompok yang dibandingkan tersebut. Dengan melihat hasil analisis tersebut peneliti dapat melihat terdapatnya perbedaan penurunan kadar kolesterol LDL darah. Berdasarkan perhitungan uji Mann-Whitney diperoleh perbedaan mean atau rerata penurunan kadar kolesterol LDL darah yang bermakna pada kelompok I (kontrol) terhadap kelompok II, kelompok III dan kelompok IV; serta untuk kelompok II terhadap kelompok III dan kelompok IV. Sedangkan kelompok III terhadap kelompok IV tidak terdapat perbedaan bermakna. Data hasil perhitungan uji Mann-Whitney antarkelompok dapat dilihat pada tabel 4. Tabel 4. Hasil Uji Mann-Whitney Antarkelompok Kelompok

p (α = 0,05)

Kemaknaan

I dan II

0,001

Bermakna

I dan III

0,006

Bermakna

I dan IV

0,006

Bermakna

II dan III

0,014

Bermakna

II dan IV

0,002

Bermakna

III dan IV

0,916

Tidak Bermakna

commit to user


digilib.uns.ac.id

BAB V PEMBAHASAN

Hasil uji Kruskall-Wallis data pengukuran kadar kolesterol LDL darah setelah pemberian perlakuan (posstest) didapatkan nilai p = 0,001 , sehingga dapat disimpulkan terdapat perbedaan rerata kadar kolesterol LDL darah yang signifikan secara statistik di antara keempat kelompok hewan coba. Sedangkan hasil uji Mann-Whitney menunjukkan terdapat perbedaan yang bermakna antara kelompok I dengan kelompok II, III dan IV serta kelompok II dengan kelompok III dan IV setelah pemberian perlakuan (posttest), namun antara kelompok III dengan IV tidak terdapat perbedaan yang bermakna (tabel 4). Hasil pengukuran kadar kolesterol LDL darah tikus putih yang tercantum pada tabel 3 maupun yang digambarkan pada gambar 3, menunjukkan adanya penurunan kadar kolesterol LDL darah pada kelompok yang diberikan perlakuan klorofil dari tumbuhan Alfalfa (kelompok II, III dan IV), dapat dikatakan pemberian klorofil dari tumbuhan Alfalfa dapat mempengaruhi kadar LDL darah tikus putih. Adapun hasil perhitungan penurunan yang bermakna terjadi pada kelompok II (klorofil dosis 1,8 mg/200 gr BB) dengan rerata penurunan sebesar 112,67 mg/dl. Sedangkan untuk kelompok III (klorofil dosis 2,7 mg/200 gr BB) dan IV (klorofil dosis 3,6 mg/200 gr BB) masing-masing rerata penurunannya sebesar 103,85 mg/dl dan 105,97 mg/dl. Hasil analisis tersebut menunjukkan bahwa dosis 1,8 mg ini mungkin merupakan dosis optimal untuk menurunkan

commit to user 36



kadar kolesterol LDL darah tikus putih, sehingga penambahan/peningkatan dosis tidak berpengaruh secara bermakna terhadap kolesterol LDL darah tikus putih. Adapun efek penurunan kadar kolesterol LDL pada tumbuhan Alfalfa tersebut didasarkan pada kandungan klorofilnya empat kali lebih banyak dibanding tumbuhan lain (Parman dan Hernina, 2008). Efek penurunan kadar kolesterol LDL ini sesuai dengan hasil penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Alsuhendra et al. (2003) yang menunjukkan konsumsi klorofil yang berasal dari daun singkong secara nyata menurunkan total kolesterol dan LDL serum pada kelinci New Zealand White jantan setelah 4 minggu diintervensi. Penelitian ini juga didukung oleh Crayhon (2009) yang mengatakan bahwa klorofil pada Chlorella (sejenis tumbuhan alga) telah terbukti dapat menurunkan kadar kolesterol pada manusia. Dalam penelitian ini mekanisme penurunan kadar LDL diduga karena adanya penghambatan terhadap reabsorpsi asam empedu oleh klorofil yang mengakibatkan peningkatan katabolisme LDL untuk pembentukan asam empedu (Muchtadi et al., 1993). Ferruzzi et al. (2002) mengatakan bahwa klorofil termasuk senyawa porfirin yang di mana mempunyai kemampuan dalam mengikat asam empedu. Dalam penelitian ini hubungan LDL dengan total kolesterol akan bersifat searah karena 65% kolesterol berada dalam bentuk LDL, artinya jika kolesterol turun LDL juga turun. Hal ini terjadi karena terhambatnya atau terganggunya proses penyerapan kolesterol di usus dan ekskresi asam empedu lebih besar. Oleh karena asam empedu terbuat dari kolesterol, maka rangsangan untuk ekskresi asam empedu berarti meningkatkan laju metabolisme kolesterol sehingga

commit to user



menurunkan total kolesterol dan kadar LDL plasma. Kemungkinan lain penurunan kadar LDL terjadi karena penurunan sintesis LDL itu sendiri dan penginduksian reseptor hepatik dalam hal ini reseptor LDL, akibatnya banyak LDL yang ditangkap reseptor hepatik sehingga konsentrasinya dalam darah menurun (Muchtadi et al., 1993; Mayes, 2003b; Guyton dan John, 2008). Terdapat hubungan kausal antara klorofil dari tumbuhan Alfalfa dengan kadar kolesterol LDL darah yang menunjukkan bahwa klorofil dari tumbuhan Alfalfa mempunyai potensi sebagai alternatif terapi yang dapat mencegah terjadinya atherosklerosis dan menurunkan kolesterol.

commit to user


digilib.uns.ac.id

BAB VI SIMPULAN DAN SARAN

A. SIMPULAN Hasil penelitian ini menunjukkan pemberian klorofil dari tumbuhan Alfalfa (Medicago sativa L.) mampu menurunkan kadar kolesterol LDL darah secara bermakna pada tikus putih (Rattus norvegicus) strain Wistar model hiperkolesterolemia. Pemberian klorofil dari tumbuhan Alfalfa dengan dosis 1,8 mg; 2,7 mg dan 3,6 mg per 200 gr BB mampu menurunkan kadar kolesterol LDL darah (112,67 mg; 103,85 mg dan 105,97 mg per dl).

B. SARAN 1. Perlu dilakukannya penelitian lebih lanjut pada manusia agar dapat diketahui pengaruh klorofil dari tumbuhan Alfalfa terhadap kadar LDL darahnya. 2. Perlu dipertimbangkan budidaya tumbuhan Alfalfa di Indonesia, agar tumbuhan ini lebih dikenal dan mudah didapat oleh masyarakat sebagai alternatif terapi pencegahan atherosklerosis dan menurunkan kolesterol, serta dari segi ekonomi akan lebih terjangkau bagi masyarakat Indonesia.

commit to user

PENGARUH PEMBERIAN KLOROFIL DARI TUMBUHAN ALFALFA (Medicago sativa L.) TERHADAP KADAR KOLESTEROL LDL TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus)

Recommend Documents