PDGFR βA fibroblast aktiváció korai markere myelofibrosisban Bedekovics Judit, Szeghalmi Szilvia, Fazekas Attila, Károlyi Katalin, Kiss Attila, Méhes Gábor Debreceni Egyetem, Orvos- és Egészségtudományi Centrum Debreceni Egyetem, Informatikai Kar
Bevezetés
Reticulin szaporulat
Kollagén szaporulat
OsteoOsteo
• III-as típusú kollagén • Ezüst impregnáció • I-es típusú kollagén • Ezüst Impregnáció, Trichrome festés
Rostok kimutatása Nincs információ a fibroblastokról
• Csont újdonképzés • Hematoxilin-eosin
myelofibrosis
1/13
DEOEC, Pathologiai Intézet
Bevezetés
Sebgyógyulás
PDGF Fibroblast proliferáció
Máj cirrhosis Tüdő fibrózis
Fibrosis
Myelofibrosis?
Vese mesangialis fibrózis Scleroderma
1/13
TGF-β Rosttermelés
DEOEC, Pathologiai Intézet
Bevezetés PLATELET DERIVED GROWTH FACTOR (PDGF) PDGF-A, -B, -C, -D ligand alegységek. Megakaryocyta, macrophag, endothel , simaizom, fibroblast, cytotrophoblast sejtek termelik. PDGFR-α és -β receptor alegységek. Különböző sejteken eltérő megoszlás.
Ligand kötés
dimerizáció
Tirozin-kináz receptor család
1/13
autofoszforiláció
PDGFR β
PDGFRα
aktiváció
imatinib mesyláttal blokkolható
DEOEC, Pathologiai Intézet
Célkitűzések
PDGF ÉS PDGFR SZEREPÉNEK VIZSGÁLATA MYELOFIBROSISBAN Jelen tanulmány célja:
PDGFR-α és -β expresszió vizsgálata a csontvelői stroma sejteken A PDGFR expresszió mértéke és az ezüst impregnációval meghatározott myelofibrosis grádus (MF) közötti korreláció PDGFR expresszió képanalitikai vizsgálata
1/13
DEOEC, Pathologiai Intézet
Anyagok és módszerek
Kérdés:
PDGFR-α és -β expresszió vizsgálata a csontvelői stroma sejteken.
Módszer: Kettős immunhisztokémiai vizsgálatok.
1/13
DEOEC, Pathologiai Intézet
Anyagok és módszerek
A/1, Silver reticulin
A/2, PDGFR β - DAB CD34 - VIP
B/1, PDGFR β - DAB SMA - VIP
B/3, PDGFR β - DAB
A/3, PDGFR β - DAB SMA - VIP
A/4, PDGFR β - DAB PDGFR α- VIP
B/2, PDGFR β - DAB CD34- VIP
C, PDGFR β - DAB
1/13
DEOEC, Pathologiai Intézet
Eredmények
PDGFR α ÉS β ALEGYSÉG EXPRESSZIÓ CSONTVELŐI MESENCHYMALIS SEJTEKEN
1/13
Sejt típus
PDGFRβ
PDGFRα
SMA
CD34
Aktivált fibroblaszt
+
+/-
-
-
Adventitialis fibroblaszt
+
-
-
-
Perisinusoideali + s pericyta
-
+
-
Pericapillaris pericyta
+
-
+
-
Endothel
-
+
-
+
Endostealis sejt +
+
-
-
Adipocyta
-
-
-
-
DEOEC, Pathologiai Intézet
Anyagok és módszerek
Kérdés:
A PDGFR expresszió mértéke és az ezüst impregnációval meghatározott myelofibrosis grádus (MF) közötti korreláció
Módszer: A PDGFR β expresszión alapuló gradálási rendszer kialakítása. 89 eset vizsgálata. 20 kontrol 32 MPN 12 MDS 4 MPN/MDS 21 egyéb (AML, HCL, Apl.an., met., LCH) A gold standard MF grádus és az új PDGFR β grádus meghatározása.
1/13
DEOEC, Pathologiai Intézet
Anyagok és módszerek
1/13
PDGFR β 0:
PDGFR β 1:
pozitív sejtek nem/ elvétve láthatók, kereszteződések nem láthatók
izolált pozitív sejtek és/ vagy ezek vékony nyúlványai, helyenként kereszteződések előfordulhatnak, de nem alkotnak diffúz hálózatot
PDGFR β 2:
PDGFR β 3:
pozitív sejtek, illetve ezek nyúlványai diffúz, laza hálózatot alkotnak, a nyúlványok között számos kereszteződés
pozitív sejtek és nyúlványaik, diffúz, dens hálózatot alkotnak, sejtekből és nyúlványaikból álló kötegekkel
DEOEC, Pathologiai Intézet
RETICULIN (MF)
Eredmények
MF 0
A/2,
MF 1
A/3,
MF 2
A/4,
MF 3
PDGFR β
A/1,
B/1,PDGFR β 0
1/13
B/2,PDGFR β 1
B/3,PDGFR β 2
B/4,PDGFR β 3
DEOEC, Pathologiai Intézet
Eredmények
r=0,86 7
2
11
56/89
megegyező grádus
1/89
MF grádus magasabb
32/89
PDGFRβ grádus magasabb
10
13 1
12
14
Pre-fibrotikus stádium diagnózisa - követéses vizsgálatok -
19
PDGF
Fibrosis TGFβ 1/13
DEOEC, Pathologiai Intézet
Anyagok és módszerek
Kérdés:
PDGFR expresszió képanalitikai vizsgálata
Módszer: 40 digitalizált metszet képanalitikiai feldolgozása.
1/13
DEOEC, Pathologiai Intézet
Anyagok és módszerek
40 CSONTVELŐ BIOPSZIA PDGFR β immunhisztokémia
40 DIGITÁLIS METSZET
Scan
Digitális metszet
1/13
Csempe
DEOEC, Pathologiai Intézet
Anyagok és módszerek
Hasznos terület= parenchyma
Barna terület= PDGFR β+ terület
1/13
DEOEC, Pathologiai Intézet
Eredmények
VIZSGÁLT PARAMÉTEREK Név
Definíció
Hasznos Terület
A csontvelői parenchyma összterülete, zsír- és a csontszövet kivételével.
Barna Terület
A PDGFR β pozitív, barna objektumok összterülete,
DB
A PDGFR β pozitív, barna objektumok száma.
MaxKerület
A legnagyobb PDGFR β pozitív, barna objektum kerülete.
SumKerület
A PDGFR β pozitív, barna objektumok kerületeinek összege.
wKerület
A kerület súlyozás a kereszteződések és a végpontok számával.
SumSkeleton
A PDGFR β pozitív, barna objektumok vázainak összege.
Top50Area
A metszeten belül az 50 legnagyobb barna objektum területének összege.
Top50Ker
A metszeten belül az 50 legnagyobb barna objektum kerületének összege.
Top50Skel
A metszeten belül az 50 legnagyobb barna objektum vázának összege.
/Hasznos T.
Minden paramétert a hasznos területtel normalizálva is vizsgáltunk.
1/13
DEOEC, Pathologiai Intézet
Eredmények
1/13
DEOEC, Pathologiai Intézet
Összefoglalás
A PDGFR-β és -α alegységek számos stroma sejten kifejeződnek. Az aktivált fibroblastok a PDGFR-β alegységet minden esetben , míg a PDGR-α alegységet csak részlegesen expresszálják. A PDGFR-β alegység expresszió és a myelofibrosis gradus (MF) között szoros összefüggés van.
1/13
DEOEC, Pathologiai Intézet
Köszönöm a figyelmet!
