SD Rapid test TnI/Myo Duo Návod k použití soupravy Výrobce: STANDARD DIAGNOSTICS, INC. 156-68 Hagal-dong, Giheung-gu, Yongin-si, Kyonggido, Korea. Tel: +82 31 899 2800, fax: +82 31 899 2840, www.standardia.com Distributor: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail:
[email protected], www.vidia.cz
POUŽITÍ: SD Rapid test TnI/Myo Duo je rychlý imunochromatografický test pro kvalitativní detekci srdečního troponinu I (cTnI) a myoglobinu. Test umožňuje rychlou a jednoduchou detekci antigenů v lidském séru, plazmě a plné krvi. Test lze rovněž použít jako pomůcku při diagnostice infarktu myokardu. SD Rapid test TnI/Myo Duo poskytuje kvalitativní analytický výsledek, kterým nelze sledovat vzestup a pokles cTnI a myoglobinu v jednom testování. Testování se nedoporučuje pro monitorování AMI (akutní infarkt myokardu). Výsledky testu je potřeba interpretovat ve spojení s ostatními výsledky a klinickými nálezy pacienta. ÚVOD: Myoglobin a troponin I jsou proteiny nacházející se v buňkách srdečního svalu a jsou uvolňovány do krve po poškození srdečné tkáně. Myoglobin je hemový protein vážící kyslík a běžně se nachází v kosterní a srdeční svalové tkáni. Má molekulovou váhu 17 800 daltonů. Troponinový komplex je tvořen ze tří podjednotek, troponinu T (TnT), troponinu C (TnC) a troponinu I (TnI). Tyto podjednotky mají různé funkce: TnC váže Ca2+, TnT váže tropomyosin a TnI je inhibiční podjednotka. Troponinový komplex, společně s tropomyozinem, formuje hlavní komponentu, která reguluje aktivitu Ca2+ senzitivní ATPasy aktinomyozinu v příčně pruhovaném svalstvu (kosterní a srdečný sval). TnC srdečního svalu je stejné jako v kosterním svalu, kdežto TnI a TnT srdečné isoformy jsou jiné než isoformy v kosterním svalu, co umožňuje přípravu specifických protilátek proti srdečním isoformám. V současné době se zkoumá využití detekce sérových hladin různých isoforem TnI. Detekce cTnI v séru bylo vyzkoumáno jako pomůcka při stanovení poškození myokardu u pacientů s akutním infarktem myokardu (AMI). Několik klinických zpráv prokázalo diagnostickou hodnotu stanovení sérové hladiny cTnI v identifikaci pacientů s akutním infarktem myokardu. Byla zkoumána časová závislost uvolňování cTnI v séru a srovnávána s jinými zavedenými srdečními markery, jako je CK-MB, myoglobin a TnT. Souhrnné údaje z několika klinických záznamů dokumentují, že u pacientů s AMI, je cTnI uvolňováno do oběhu ve vyšším množství než je horní referenční mez pro normální stav, 4-6 hodin od nástupu příznaků a vrcholové koncentrace jsou dosaženy po 12–24 hodinách. Tento průběh uvolňování je podobný jako u CK-MB. Nicméně, hladina CK-MB se navrátí k normálním hodnotám po 72 hodinách, zatímco hladina cTnI zůstává zvýšená po dobu 5 až 7 dnů. Vzhledem k odlišné struktuře cTnI a dostupnosti vysoce specifické metody detekce pro cTnI, byla zkoumána užitečnost tohoto markeru pro diagnostiku AMI v celkových klinických podmínkách, které zahrnují poškození kosterního svalstva. Vysoká specificita měření TnI pro 1
identifikaci poškození myokardu byla prokázána v podmínkách, jako je perioperační období, po maratonském běhu a po tupém traumatu hrudníku. Uvolňování cTnI do krve bylo dokumentováno v klinických podmínkách, které zahrnují poškození myokardu, jiné než AMI, jako je nestabilní angina pectoris, městnavé srdeční selhání a ischemické poškození v důsledku operace by-passu koronární tepny. Měření cTnI byly zkoumány a dokumentovány jako cenné při identifikaci pacientů s AMI prezentující se erektilní dysfunkci s bolestí na hrudi. PRINCIP TESTU: Na membráně SD Rapid test TnI/Myo Duo jsou na testovacích liniích navázány myší monoklonální anti-myoglobin (T2) protilátky a kozí polyklonální anti-troponin (T1) protilátky; na kontrolní linii kozí anti-myší IgG protilátky (C). Podložka s konjugátem, který je umístěna na konci membrány, obsahuje částice koloidního zlata s navázaným protilátkou proti myoglobinu a cTnI. Když je vzorek aplikován do okénka pro vzorek, myoglobin a cTnI ze vzorku se váže na specifické protilátky navázané na koloidní zlato a tvoří komplexy. Tyto komplexy vzlínají po membráně a jsou vychytávány protilátkami proti myoglobinu (T2) a cTnI (T1) na testovací linkách. Nenavázané komplexy se vážou na kontrolní linii. Pokud je koncentrace myoglobinu a cTnI nižší než cut-off hodnota, ve výsledkové zóně bude viditelná jen kontrolní linka. Pokud není přítomna kontrolní linka, výsledek je neplatný a test musí být zopakován. OBSAH SOUPRAVY: -
-
25 samostatně balených testovacích kazet s desikantem - 1 test obsahuje: zlaté konjugáty (jako hlavní komponenta): myší monoklonální protilátka anti-Troponin I– koloidní zlato (0,104±0,020g), myší monoklonální protilátka anti-myoglobin–koloidní zlato (0,026±0,005 g); testovací linie 1 (jako hlavní komponenta): kozí polyklonální anti-Troponin I (0,48±0,096g); testovací linie 2 (jako hlavní komponenta) myší monoklonální protilátka anti-myoglobin (0,32±0,064g), kontrolní linie (jako hlavní komponenta): kozí anti-myší imunoglobulin G (0,64±0,128g), 25 jednorázových kapátek (80 l) návod k použití
SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ, SKLADOVÁNÍ: 1. Plná krev • Odeberte plnou krev do zkumavky (obsahující antikoagulancia jako je heparin, EDTA a citrát sodný) ze žíly. • Optimální výsledky jsou dosaženy, v případě testování pacientských vzorků bezprostředně po odběru. Pokud vzorky krve nejsou testovány okamžitě, měly by být uskladněny v lednici při teplotě 2 ~ 8 ° C. Při skladování v rozmezí teplot 2 ~ 8 ° C , by vzorky měly být zpracovány do 24 hodin od odběru. 2. Plazma nebo sérum • [Plazma] Odeberte plnou krev do zkumavky (obsahující antikoagulancia, jako je heparin, EDTA a citrát sodný) ze žíly a následnou centrifugací krve získejte vzorek plazmy. • [Sérum] Odeberte plnou krev do zkumavky (neobsahující antikoagulancia jako je heparin, EDTA a citrát sodný) ze žíly, nechte krev usadit po dobu 30 minut kvůli koagulaci, následně centrifugujte a odeberte supernatant. • Pokud plazma nebo sérum nejsou testovány okamžitě, měly by být uskladněny v lednici, při teplotě 2 ~ 8 ° C. Pro skladování delší než 24 hodin se doporučuje zmražení vzorku (pod -20 °C) . Před použitím se vzorky nechají vytemperovat při pokojové teplotě (15 ~ 30 °C). 2
• U plazmy nebo séra obsahujících sraženiny můžou vzniknout nekonzistentní výsledky testu. Tyto vzorky musí být před analýzou pročištěny. • Vyhněte se opakovanému zmrazování a rozmrazováním vzorků. 3. Opatření • Antikoagulancia, jako heparin, EDTA, citrát a nemají vliv na výsledek testu. • Interference: hemolytické vzorky, vzorky s revmatoidním faktorem a lipemické a ikterické vzorky mohou ovlivnit výsledky testů. • Používejte jednorázové kapátka nebo špičky pipety pro každý vzorek, aby se zabránilo křížové kontaminaci vzorků, které by mohly způsobit chybné výsledky. PRACOVNÍ POSTUP (TESTOVACÍ SCHÉMA): I. Pracovní postup (viz testovací schéma) 1. Odeberte vzorky podle instrukcí v odstavci „Sběr a příprava vzorků, skladování“ 2. Před testem vytemperujte testovací kazetu na pokojovou teplotu (15 – 30°C). Neotevírejte sáček pokud nejste připraveni provést test. 3. Vyjměte testovací kazetu ze sáčku před provedením testu. Označte kazetu podle pacienta nebo kontroly kvůli identifikaci. 4. Napipetujte 80 l séra, plazmy, plné krve (pomocí pipety) do jamky pro vzorek (S). V případe použití kapátka, naplňte kapátko na úroveň vyznačené linky (80 l) a aplikujte do jamky pro vzorek (S). 5. Odečtěte výsledek za 15 minut. Výsledky po více než 15 minutách neinterpretujte. Upozornění: Čas pro odečtení výsledku je optimalizován pro pokojovou teplotu 15 – 30°C. Pokud je teplota výrazně nižší než 15°C, čas interpretace by měl být adekvátně prodloužen.
INTERPRETACE VÝSLEDKU: 1. V levé části výsledkové zóny se objeví kontrolní barevná linka, která ukazuje, že test řádně funguje. Tato linka se nazývá „Kontrolní linka“. 2. Prostřední část výsledkové zóny ukazuje výsledek testu na myoglobin a pravá část výsledek na troponin I. Negativní výsledek: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna barevná linka. Výsledková zóna T zůstane bez linky. Pozitivní výsledek: Kromě barevné linky v kontrolní zóně C se objeví také barevná linka ve výsledkové zóně T, nezáleží na tom, která se objeví dříve. Přítomnost dvou linek značí pozitivní výsledek. 1. TnI pozitivní:
2. Myo pozitivní:
3. TnI a Myo pozitivní: 3
Poznámka: - Pokud se objeví linka v zóně pro troponin (TnI, „T1“) a kontrolní línka („C“), koncentrace troponínu I je 0,5 ng/ml nebo vyšší. - Pokud se objeví linka v zóně pro myoglobin (Myo, „T2“) a kontrolní linka, koncentrace myoglobinu je 50 ng/ml nebo vyšší. Neplatný: Test je neplatný, pokud se ve výsledkové zóně neobjeví barevná linka, a to bez ohledu na přítomnost barevné linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nesprávný pracovní postup nebo poškození testu. Zkontrolujte pracovní postup a zopakujte test. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. INTERNÍ KONTROLA KVALITY: SD Rapid test TnI/Myo Duo má na povrchu testu testovací linky 1 a 2 a kontrolní linku, které nejsou viditelné před aplikací vzorku. Kontrolní linka zajišťuje kontrolu průběhu testu a měla by se objevit, pokud je test řádně proveden a reagencie jsou funkční. Kontrolní linka ukazuje, že roztok byl úspěšně aplikován a aktivní komponenty na stripu jsou funkční. Negarantuje však, že vzorek byl řádně aplikován. Kontrolní linie také nereprezentuje pozitivní kontrolu. OMEZENÍ TESTU: Test je určen pouze pro profesionální a in-vitro diagnostické účely. Pozitivní výsledek testu může být použit pouze jako ukazatel poškození myokardu a vyžaduje další potvrzení . Doporučováno je také opakované testování pacientů s podezřením na AMI v různých časových úsecích, z důvodu zpoždění mezi počátkem příznaků a uvolněním kardiálních bílkovinných markerů do krevního řečiště. Jedná se o kvalitativní screeningový test a není navržen pro použití kvantitativního stanovení. Stejně jako u všech diagnostických testů by neměla být definitivní klinická diagnóza stanovena na základě výsledků jediného testu. Výsledky testů by měly být použity ve spojení s dalšími klinickými informacemi, jako jsou klinické příznaky a symptomy a jiné výsledky testů pro diagnostiku AMI. Potvrzení výsledků testů by mělo být provedeno pouze lékařem, po zhodnocení všech klinických a laboratorních nálezů. U vzorků, které obsahují neobvykle vysoké titry určitých protilátek, jako jsou lidské anti-myší nebo lidské anti-králičí protilátky je známo, že mají vliv na výsledné fungování testů. Nicméně tyto studie nebyly testovány s použitím rychlého testu SD Rapid test TnI/Myo Duo. CHARAKTERISTIKA TESTU: Bylo provedeno srovnání SD Rapid test TnI/Myo Duo s referenčním laboratorním testem. Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce: Metoda ER Triage Citlivost Specifita
Pozitivní Negativní
Troponin I Suma Pozitivní Negativní 46 1 47 0 473 473 97,9% (46/47) 100% (473/473) 4
Myoglobin Pozitivní Negativní 160 0 13 527 100% (160/160) 97,6% (527/540)
Suma 160 540
OČEKÁVANÉ HODNOTY: Cut-off hodnota pro myoglobin je 50 ng/ml a pro cTnI je 0,5 ng/ml. Vzorky obsahující cTnI a/nebo myoglobin o koncentraci stejné nebo vyšší než stanovený cut-off budou dávat pozitivní výsledek s použitím SD Rapid test TnI/Myo Duo testu. SKLADOVÁNÍ A STABILITA / BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
Testovací kazeta by měla být skladována při pokojové teplotě (1-30°C). Soupravu nebo komponenty nezmrazujte. Testovací kazeta je citlivá na vlhkost i teplo. Vykonejte test ihned po otevření a vyjmutí testovací kazety z obalu. Nepoužívejte po uplynutí expirační doby. Expirace soupravy je uvedena na vnějším obalu soupravy. Nepoužívejte soupravu v případě poškození obalu nebo poškození zatavení testu. Zkontrolujte změnu barvy indikátoru vlhkosti vysoušedla a vyhoďte obal, pokud barevný indikátor vykazuje saturaci.
UPOZORNĚNÍ: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.
Pouze pro diagnostiku in vitro. Test je na jedno použití, nepoužívejte opakovaně. Osoba provádějící test musí být vyškolena pro jeho použití a musí být kvalifikovaná pro práci v laboratoři. Dodržujte důsledně návod k použití, abyste dosáhli přesných výsledků. Nejezte a nekuřte při nakládání se vzorky. Při práci se vzorky používejte ochranné rukavice. Po práci si důkladně umyjte ruce. Vyvarujte se rozlití nebo tvorbě aerosolu. Pokud došlo k rozlití, použijte vhodný desinfekční prostředek. Dekontaminujte a zlikvidujte všechny vzorky, reakční soupravy a potencionálně kontaminované materiály do odpadní nádoby jako infekční odpad.
Vyloučení odpovědnosti: Přestože byla uplatněna všechna opatření pro zabezpečení diagnostické spolehlivosti a přesnosti tohoto produktu, produkt je používán mimo dosahu výrobce a distributora, a výsledky proto mohou být ovlivněny vnějšími faktory a /nebo chybou uživatele. Osoba, která je subjektem diagnózy, by měla kontaktovat lékaře pro potvrzení výsledku testu. Upozornění: Výrobce a distributor tohoto produktu není zodpovědný za případné ztráty, odpovědnost, nároky, náklady nebo ztrátu, jestli přímé nebo nepřímé nebo následné, vycházející z podobné nebo nesprávné diagnózy – pozitivní nebo negativní, při použití tohoto produktu.
POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro
Číslo šarže (LOT)
Skladujte při 1-30°C
Na jedno použití. Nepoužívejte znovu
Návod k použití
Katalogové číslo
TESTOVACÍ SCHÉMA: I. Otevřete vnější obal a prohlédněte obsah: 1. Testovací kazeta individuálně balená s desikantem 2. Kapátko (80 µl) 5
3. Návod k použití
Otevřete obal kazety a prohlédněte obsah: 1. Výsledková zóna 2. Okénko pro nanesení vzorku a ředicího roztoku
žlutá zelená
II. Pozorně si přečtěte návod k použití soupravy. III. Zkontrolujte expiraci na zadní straně obalu kazety. Pokud je souprava proexpirovaná, použijte jinou soupravu.
IV. Napipetujte 80 l séra, plazmy, plné krve (pomocí pipety, nebo kapátka) do jamky pro vzorek.
80ml séra, plasmy nebo plné krve
Vzorek nasajte po černou rysku
6
V. Za 15 minut odečtěte výsledek. Neodečítejte výsledek po více než 15 minutách. Můžou se objevit falešně negativní výsledky.
INTERPRETACE VÝSLEDKU: Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna barevná linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Pozitivní: 4. TnI pozitivní:
5. Myo pozitivní:
6. TnI a Myo pozitivní: Neplatný: Žádná linka v C zóně. Doporučujeme opakování testu.
Poslední revize tohoto návodu: 03/2014
7
