MODIFIKASI STRUKTUR SENYAWA ETIL P- METOKSISINAMAT MELALUI PROSES NITRASI- ESTERIFIKASI DENGAN 1-BUTANOL SERTA UJI AKTIVITAS SEBAGAI ANTIINFLAMASI

UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

MODIFIKASI STRUKTUR SENYAWA ETIL PMETOKSISINAMAT MELALUI PROSES NITRASIESTERIFIKASI DENGAN 1-BUTANOL SERTA UJI AKTIVITAS SEBAGAI ANTIINFLAMASI

SKRIPSI

INDAH NUNIK NUGRAINI 1111102000101

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI JAKARTA JUNI 2015

UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

MODIFIKASI STRUKTUR SENYAWA ETIL PMETOKSISINAMAT MELALUI PROSES NITRASIESTERIFIKASI DENGAN 1-BUTANOL SERTA UJI AKTIVITAS SEBAGAI ANTIINFLAMASI

SKRIPSI Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi

INDAH NUNIK NUGRAINI 1111102000101

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI JAKARTA JUNI 2015

ABSTRAK Nama Program Studi Judul

: Indah Nunik Nugraini : Strata-1-Farmasi : Modifikasi Struktur Senyawa Etil Pmetoksisinamat Melalui Proses NitrasiEsterifikasi dengan 1-Butanol Serta Uji Aktivitas Sebagai Antiinflamasi

Etil p-metoksisinamat (EPMS) merupakan salah satu metabolit sekunder yang terdapat pada tanaman kencur (Kaempferia galanga Linn) dalam jumlah yang relatif besar dan memiliki aktivitas sebagai antiinflamasi. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan modifikasi struktur senyawa etil p-metoksisinamat dan melihat pengaruh hasil modifikasi terhadap aktivitas antiinflamasinya. Modifikasi senyawa etil p-metoksisinamat (EPMS) melalui proses nitrasi-esterifikasi dengan 1-butanol telah dilakukan untuk mengeksplorasi lebih jauh hubungan struktur aktivitas senyawa turunan EPMS terhadap antiinflamasi. Sebelum dimodifikasi, EPMS terlebih dahulu diubah menjadi asam p-metoksisinamat (APMS) melalui reaksi hidrolisis. Modifikasi senyawa APMS dilakukan secara dua tahap, pertama melalui reaksi nitrasi dengan asam nitrat 65 % untuk memasukkan gugus NO2 pada cincin benzen dan yang kedua melalui reaksi esterifikasi dengan 1-butanol untuk mensubstitusi gugus karboksilat dengan 4 rantai karbon sehingga menghasilkan senyawa butil 4-metoksi 6-nitrosinamat dengan rendemen 10,7241 %. Berdasarkan uji aktivitas antiinflamasi yang dilakukan dengan menggunakan metode inhibisi denaturasi protein BSA didapatkan bahwa senyawa butil 4-metoksi 6-nitrosinamat aktif sebagai agen antiinflamasi pada konsentrasi 0,1-10 ppm, namun aktivitas antiinflamasinya tidak lebih tinggi dari pada etil pmetoksisinamat. Sementara, senyawa APMS tidak memiliki aktivitas antiinflamasi. Dengan demikian, hubungan struktur aktivitas antiinflamasi terhadap senyawa hasil modifikasi menunjukkan bahwa gugus ester pada turunan senyawa EPMS memiliki peran penting terhadap aktivitas antiinflamasi.

Kata kunci

: Etil p-metoksisinamat, asam p-metoksisinamat, esterifikasi, Bovine Serum Albumin.

nitrasi,

ABSTRACT Name Programme Study Title

: Indah Nunik Nugraini : Strata-1-Pharmacy : Modification of Ethyl P-methoxycinnamate Compound Through Nitration-Esterification Process with 1-Butanol and Antiinflammatory Activity Test

Ethyl p-metoxycinnamate (EPMC) is one of secondary metabolite which is found in kencur (Kaempferia galanga Linn) in relatively large quantity and has antiinflammatory activity. The aims of this study were to modify ethyl pmetoxycinnamate acid structure and determine the modification effect toward its antiinflammatory activity. Modification of ethyl p-methoxycinnamate compound through nitration-esterification process with 1-Butanol had been done to explore structure activity relationship against the antiinflammatory. Before being modified, EPMC was converted to be p-metoxycinnamate acid (PMCA) by hidrolysis reaction. In this research, there are two processes of reaction to modify PMCA. First, nitration of PMCA with nitric acid 65 % to subtitute NO2 group in benzene ring, and the second is esterification with 1-butanol to subtitute carboxylate group with esther 4 carbon chain produces butyl 4-methoxy 6-nitrocinnamate compound in 10,7241 % yield. Based on antiinflammatory activity assays using inhibition of bovine serum albumine (BSA) denaturation method found that butyl 4-methoxy 6nitrocinnamate was active as an anti-inflammatory agent, however its antiinflammatory activity was not higher than ethyl p-metoxycinnamate. While, the pmetoxycinnamate acid compound did not have anti-inflammatory activity. Thus, the relationship of anti-inflammatory activity toward modified compound indicates that the ester group in EPMC derivatives have an important role in antiinflammatory activity.

Key word

: Ethyl p-methoxycinnamate, p-methoxycinnamate nitration, estherification, Bovine Serum Albumin.

acid,

KATA PENGANTAR Segala puji dan syukur kehadirat Allah SWT yang senantiasa mencurahkan segala rahmat-Nya kepada kita semua, khususnya penulis dalam menyelesaikan skripsi yang berjudul “Modifikasi Struktur Senyawa Etil pMetoksisinamat Melalui Proses Nitrasi-Esterifikasi Dengan 1-Butanol Serta Uji Aktivitas Sebagai Antiinflamasi”. Penulisan skripsi ini dilakukan dalam rangka memenuhi salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta. Dalam penulisan skripsi ini tentu banyak berbagai kesulitan dan halangan yang menyertai, sehingga penulis tidak terlepas dari doa, bantuan, dan bimbingan berbagai pihak. Oleh karena itu, saya mengucapkan terima kasih kepada: 1. Ibu Ismiarni Komala, M.Sc., Ph.D., Apt. sebagai Pembimbing I sekaligus Dosen Pembimbing Akademik yang telah memberikan ilmu, nasehat, waktu, tenaga, dan dukungan moral maupun material selama masa perkuliahan, penelitian, hingga penulisan skripsi. 2. Ibu Ofa Suzanti Betha, M.Si., Apt. sebagai Pembimbing II yang telah membimbing dan memberikan masukan terhadap proses penulisan skripsi. 3. Bapak Dr. H Arif Sumantri, SKM., M.Kes. selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta. 4. Bapak Yardi, Ph.D., Apt. atas dedikasi dan profesionalitas beliau sebagai ketua Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta. 5. Bapak dan Ibu staf pengajar, serta karyawan yang telah memberikan bimbingan dan bantuan selama menempuh pendidikan di Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta. 6. Kedua orang tua tercinta, Ayahanda Sartiman Winarto Hidayat dan Ibuunda Siti Nurhasanah yang selalu ikhlas memberikan dukungan moral,

material, nasehat, serta lantunan doa yang tiada pernah putus di setiap waktu. 7. Kakak Sigit Sulistyawan yang selalu memberikan semangat dan Adik Adji Setia Negara yang selalu tersenyum memberikan keceriaan dan semangat untuk meraih cita. 8. Kakak-kakak dan teman-teman seperjuangan di Laboratorium PHA, Kingdom EPMS: Kak Ivo, Kak Fikri, Nova, Indri, Ali, Aziz, Reza, Sutar, Mida, Aditya, dan Bahtiar atas bantuan dan dukungan yang telah diberikan. 9. Teman-teman di Program Studi Farmasi 2011: Nindya, Elsa, Puji, Subhan, Andis, Annisa, Aditya, Fitri, Beryl serta teman-teman Farmasi 2011 bengbeng atas semangat dan kebersamaan kita selama perkuliahan berlangsung. 10. Teman-teman BEM FKIK 2012-2014 dan FUN (FKIK Untuk Negeri) sebagai keluarga kecil yang selalu memberikan doa dan semangat kebersamaan selama masa kuliah. 11. Arif Setiyawan yang selalu hadir memberi semangat dan dukungan tanpa henti, yang selalu menemani suka duka, yang selalu memotivasi dan menginspirasi. 12. Semua pihak yang telah membantu penulis selama melakukan penelitian dan penulisan. Semoga semua bantuan yang telah diberikan mendapatkan balasan dari Allah SWT. Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan. Oleh karena itu, kritik dan saran yang bersifat membangun akan

penulis

nantikan.

Semoga

skripsi

ini

dapat

bermanfaat

pengembangan ilmu pengetahuan.

Ciputat, 30 Juni 2015 Penulis

bagi

HALAMAN PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI TUGAS AKHIR UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS

Sebagai sivitas akademik Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta, saya yang bertanda tangan di bawah ini :

Nama

: Indah Nunik Nugraini

NIM

: 1111102000101

Program Studi

: Strata-1 Farmasi

Fakultas

: Kedokteran dan Ilmu Kesehatan

Jenis Karya

: Skripsi

demi perkembangan ilmu pengetahuan, saya menyetujui skripsi/karya ilmiah saya, dengan judul :

MODIFIKASI STRUKTUR SENYAWA ETIL P-METOKSISINAMAT MELALUI PROSES NITRASI-ESTERIFIKASI DENGAN 1-BUTANOL SERTA UJI AKTIVITAS SEBAGAI ANTIINFLAMASI

untuk dipublikasikan atau ditampilkan di internet atau media lain yaitu Digital Library Perpustakaan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta untuk kepentingan akademik sebatas sesuai dengan Undang-Undang Hak Cipta. Demikian pernyataan publikasi karya ilmiah ini saya buat dengan sebenarnya.

Dibuat di : Jakarta Pada tanggal : 30 Juni 2015

Yang menyatakan,

(Indah Nunik Nugraini)

DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL ............................................................................................ ii HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS .............................................. iii LEMBAR PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................... iv HALAMAN PENGESAHAN .............................................................................. v ABSTRAK ........................................................................................................... vi KATA PENGANTAR ....................................................................................... viii HALAMAN PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI TUGAS AKHIR UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ............................................. x DAFTAR ISI ....................................................................................................... iii DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... vi DAFTAR TABEL ............................................................................................. xiv DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xvi DAFTAR ISTILAH ......................................................................................... xvii BAB 1 PENDAHULUAN .................................................................................... 1 1.1 Latar Belakang ........................................................................................ 1 1.2 Rumusan Masalah ................................................................................... 4 1.3 Tujuan Penelitian .................................................................................... 4 1.4 Manfaat Penelitian .................................................................................. 4 1.5 Hipotesis ................................................................................................. 5 BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................... 6 2.1 Tumbuhan Kencur .................................................................................. 6 2.1.1 Klasifikasi ................................................................................... 7 2.1.2 Tempat Tumbuh ......................................................................... 7 2.1.3 Kandungan Kimia Kaempferia galanga L. ................................ 7 2.1.4 Manfaat Kaempferia galanga L. ................................................ 9 2.2 Senyawa Etil p-metoksisinamat ............................................................. 9 2.2.1 Isolasi Senyawa Etil p-Metoksisinamat .................................... 10 2.3 Hidrolisis ............................................................................................. 11 2.4 Nitrasi .................................................................................................. 14 2.5 Esterifikasi ........................................................................................... 16 2.6 Spesifikasi Asam Nitrat dan Etanolamin ..............................................18 2.6.1 Asam Nitrat ............................................................................... 18 2.6.2 1-Butanol .................................................................................. 18 2.7 Gelombang Mikro ................................................................................. 19 2.7.1 Prinsip Umum ............................................................................ 19 2.7.2 Mekanisme Pemanasan .............................................................. 19 2.7.3 Instrumentasi Oven Gelombang Mikro ..................................... 20 2.8 Identifikasi ........................................................................................... 21 2.8.1 Kromatografi ............................................................................ 21 a. Kromatografi Lapis Tipis ................................................. 21 b. Kromatografi Kolom ........................................................ 23 2.8.2 Spektrofotometri ....................................................................... 24 a. Spektrofotometri IR .......................................................... 25

b. Spektrofotometri UV-Vis ................................................. 25 c. Spektrofotometri Resonansi Magnetik ............................. 27 2.9 Inflamasi .............................................................................................. 28 2.9.1 Definisi Inflamasi ..................................................................... 28 2.9.2 Mekanisme Inflamasi ............................................................... 29 2.9.3 Obat-Obat Antiinflamasi .......................................................... 30 a. Antiinflamasi Steroid ........................................................ 30 b. Antiinflamasi Non Steroid ................................................ 30 2.9.4 Natrium Diklofenak .................................................................. 31 2.10 Uji Antiinflamasi ................................................................................ 31 2.10.1 Bovine Serum Albumin (BSA) ................................................ 32 BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN ........................................................... 34 3.1 Tempat dan Waktu ................................................................................ 34 3.1.1 Tempat ....................................................................................... 34 3.1.2 Waktu .......................................................................................... 34 3.2 Alat dan Bahan ..................................................................................... 34 3.2.1 Alat ............................................................................................. 34 3.2.2 Bahan .......................................................................................... 34 3.3 Prosedur Penelitian ............................................................................... 35 3.3.1 Modifikasi Etil p-metoksisinamat ............................................. 35 a. Hidrolisis Etil p-metoksisinamat ......................................... 35 b. Nitrasi Asam p-metoksisinamat .......................................... 35 c. Esterifikasi Senyawa Hasil Reaksi Nitrasi .......................... 36 3.3.2 Pemurnian dengan Kromatografi Kolom .................................. 36 3.3.3 Identifikasi Senyawa .................................................................. 36 a. Identifikasi Organoleptis ..................................................... 36 b. Pengukuran Titik Leleh ....................................................... 36 c. Identifikasi senyawa menggunakan FTIR ........................... 37 d. Identifikasi senyawa menggunakan GCMS ........................ 37 e. Identifikasi senyawa menggunakan H 1 -NMR dan C 13 NMR .................................................................................... 37 3.3.4 Uji In Vitro Antiinflamasi .......................................................... 37 a. Pembuatan Reagen untuk Uji Antiinflamasi ....................... 37 b. Pengujian Aktivitas Senyawa Hasil Modifikasi Terhadap Denaturasi BSA ................................................................... 39 BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN .............................................................. 41 4.1 Modifikasi Struktur Asam p-metoksisinamat ....................................... 41 4.1.1 Reaksi Hidrolisis Etil p-metoksisinamat .................................... 42 4.1.2 Reaksi Nitrasi Asam p-metoksisinamat ..................................... 45 4.1.3 Reaksi Esterifikasi Senyawa Hasil Nitrasi ................................. 46 4.2 Identifikasi Senyawa Hasil Modifikasi.................................................. 49 4.2.1 Senyawa Hasil Hidrolisis Etil p-metoksisinamat ....................... 50 4.2.2 Hasil Nitrasi APMS .................................................................... 52 4.2.3 Senyawa Hasil Esterifikasi (Senyawa B) ................................... 53 4.3 Pengujian Aktivitas Antiinflamasi dan Hubungan Struktur Aktivitas Senyawa Hasil Modifikasi ................................................................... 58

BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN .............................................................. 63 5.1 Kesimpulan ........................................................................................... 63 5.2 Saran ..................................................................................................... 63 DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 64 LAMPIRAN ........................................................................................................ 69

DAFTAR GAMBAR Gambar 2.1 Rimpang kencur (Kaempferia galanga L) ..................................... Gambar 2.2 Struktur Senyawa dari (a) beta-sitosterol (b) etil p-metoksisinamat (c) pentadekan (d) asam tridekanoat ................................................. Gambar 2.3 Jalur sikimat untuk menghasilkan etil p-metoksisinamat ................ Gambar 2.4 Prisnsip Reaksi Hidrolisis ................................................................ Gambar 2.5 Mekanisme Reaksi Hidrolisis pada Ester ......................................... Gambar 2.6 Mekanisme Reaksi Hidrolisis Ester dengan Katalis Basa ................ Gambar 2.7 Mekanisme Hidrolisis Etil p-metoksisinamat .................................. Gambar 2.8 Struktur Asam p-metoksisinamat ..................................................... Gambar 2.9 Mekanisme Reaksi Nitrasi dengan HNO3 dan H2SO4 pada Senyawa Aromatik ......................................................................................... Gambar 2.10 Struktur Senyawa 1-Butanol .......................................................... Gambar 2.11 Instrumentasi Oven Microwave ..................................................... Gambar 2.12 Skema Kromatografi Lapis Tipis.................................................... Gambar 2.13 Mekanisme Inflamasi ..................................................................... Gambar 4.1 Mekanisme Reaksi Hidrolisis EPMS ............................................... Gambar 4.2 Pola Spot KLT Hasil Hidrolis .......................................................... Gambar 4.3 Reaksi Nitrasi APMS ....................................................................... Gambar 4.4 Residu Hasil Penyaringan pada Reaksi Nitrasi APMS .................... Gambar 4.5 Reaksi Esterifikasi Senyawa Hasil Nitrasi ....................................... Gambar 4.6 Pola Spot KLT Setelah Reaksi Esterifikasi ...................................... Gambar 4.7 KLT Senyawa Hasil Esterifikasi Setelah Pemurnian ....................... Gambar 4.8 Identifikasi Senyawa Modifikasi dengan KLT ................................ Gambar 4.9 Senyawa Hasil Hidrolisis EPMS .................................................... Gambar 4.10 Pola Fragmentasi GCMS Asam p-metoksisinamat ........................... Gambar 4.11 Struktur Asam p-metoksisinamat ................................................... Gambar 4.12 Hasil Reaksi Nitrasi yang Mengandung Senyawa A ..................... Gambar 4.13 Pola KLT Hasil Reaksi Nitrasi APMS .............................................. Gambar 4.14 Senyawa B ......................................................................................... Gambar 4.15 Spektrum IR Senyawa B .................................................................... Gambar 4.16 Fragmentasi GCMS Senyawa B ........................................................ Gambar 4.17 Pola Kromatogram GCMS Senyawa B ............................................. Gambar 4.18 Spektrum H-NMR Senyawa B .......................................................... Gambar 4.19 Struktur Senyawa Hasil Esterifikasi dan Etil 4-metoksi 6-nitro sinamat ............................................................................................... Gambar 4.20 Grafik Persen Inhibisi Denaturasi Protein BSA ................................

6 8 11 11 12 13 13 14 15 19 21 23 29 43 44 45 46 47 48 49 49 50 51 52 52 53 53 54 55 56 56 57 60

DAFTAR TABEL Tabel 4.1 Spektrum IR Senyawa Esterifikasi Hasil Nitrasi .......................... 55 Tabel 4.2 Data Pergeseran Kimia (δ) Spektrum 1H-NMR Senyawa Hasil Esterifikasi........................................................................... 57 Tabel 4.3 Hasil Uji Aktivitas Antiinflamasi ................................................... 59

DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Kerangka Penelitian .........................................................................69 Lampiran 2. Skema Identifikasi Senyawa Hasil Modifikasi ................................ 70 Lampiran 3. Alat dan Bahan Penelitian ............................................................... 71 Lampiran 4. Alur Kerja Reaksi Esterifikasi ......................................................... 73 Lampiran 5. Perhitungan Reaksi .......................................................................... 75 Lampiran 6. Optimasi Reaksi Hidrolisis ............................................................ 76 Lampiran 7. Optimasi Reaksi Nitrasi ................................................................. 77 Lampiran 8. Optimasi Reaksi Esterifikasi ........................................................ 78 Lampiran 9. Gambar Senyawa ............................................................................. 79 Lampiran 10. Spektrum GCMS Asam p-metoksisinamat .................................... 80 Lampiran 11. Spektrum IR Hasil Esterifikasi ...................................................... 82 Lampiran 12. Spektrum GCMS Hasil Esterifikasi ............................................... 83 Lampiran 13. Spektrum H1-NMR Hasil Esterifikasi ........................................... 85 Lampiran 14. Spektrum C13-NMR Hasil Esterifikasi .......................................... 89 Lampiran 15. Hasil Perhitungan Uji Antiinflamasi ............................................. 93 Lampiran 16. Diagram Hasil Uji Antiinflamasi ................................................... 95

DAFTAR ISTILAH APMS

Asam p-metoksisinamat

COX

Cyclooxigenase (Siklooksigenase)

DSC

Differential Scanning Calorimeter

EPMS

Etil p-metoksisinamat

g

Gram

GCMS

Gas Chromatography Mass Spectrofotometry

IC

Inhibitor Concentration

IR

Infra Red

KLT

Kromatografi Lapis Tipis

MIC

Minimum Inhibitor Concentration

NMR

Nuclear Magnetic Resonance

UV

Ultra Violet

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1

Latar Belakang Indonesia adalah negara megabiodiversity yang kaya akan tanaman obat, dan sangat potensial untuk dikembangkan, namun pengelolaannya belum dilakukan secara maksimal. Kekayaan alam flora di Indonesia meliputi 30.000 jenis tumbuhan dari total 40.000 jenis tumbuhan di dunia. 940 jenis diantaranya merupakan tumbuhan berkhasiat obat (jumlah ini merupakan 90% dari jumlah tumbuhan obat di Asia). Namun berdasarkan hasil penelitian, dari sekian banyak jenis tanaman obat, baru 20-22% yang dibudidayakan. Sedangkan sekitar 78% diperoleh melalui pengambilan langsung (eksplorasi) dari hutan (Masyhud, 2010). Butuh adanya strategi untuk mengurangi ketergantungan terhadap bahan baku obat dari tanaman. Termasuk diantaranya adalah upaya untuk meningkatkan penelitian dan pengembangan terhadap potensi alam Indonesia terkait isolasi, sintesis, maupun modifikasi lebih lanjut untuk mendapatkan hasil dan aktivitas obat yang lebih baik dengan biaya yang layak secara ekonomi, kemudian berkembang untuk mendapatkan obat dengan efek samping yang minimal (aman digunakan), bekerja selektif, masa kerja lebih lama, dan meningkatkan kenyaman pemakaian obat (Kemristek RI, 2009) Kencur (Kaempferia galanga L) sebagai salah satu tanaman obat memiliki

prospek

baik

untuk

dikembangkan.

Salah

satu

alasan

pengembangan tanaman kencur adalah kandungan bahan aktif yang beragam dan cukup tinggi yang mampu mencegah maupun mengobati berbagai penyakit (Siswanto et al., 2010). Adapun berbagai pengujian aktivitas terhadap ekstrak kencur telah dilakukan oleh beberapa peneliti terdahulu. Ekstrak minyak atsiri kencur telah diteliti memiliki aktivitas antibakteri dan antijamur (Tewtrakul et al.,

1 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

2

2005). Ekstrak etanol rimpang kencur memiliki daya hambat yang baik terhadap

jamur

Trichophyton

mentagrophytes

dan

Cryptococcus

neoformans yang merupakan jamur penyabab penyakit kurap pada kulit dan penyakit paru (Gholib, 2009). Selain itu, ekstrak etanol kencur dapat berperan sebagai antiinflamasi dan analgesik (Vittalrao, 2011) dan sebagai penyembuh luka (Tara, 2006). Umar et al. (2012) telah meneliti kandungan yang terdapat dalam ekstrak kencur. Adapun senyawa metabolit sekunder yang terdapat dalam ekstrak kencur adalah etil p-metoksisinamat (80,05%), beta-sitosterol (9,88%), asam propionate (4,7%), pentadekan (2,08%), asam tridekanoat (1,81%), dan 1,21-docosadiene (1,47%). Menurut data tersebut, jelas bahwa etil p-metoksisinamat adalah komponen utama (major coumpound) dalam ekstrak kencur. Etil p-metoksisinamat berperan penting terhadap berbagai aktivitas yang dimiliki oleh tanaman kencur. Dalam studi in vitro, etil pmetoksisinamat secara non-selektif mampu menghambat aktivitas COX-1 dan COX-2, dengan masing-masng nilai IC50 1,12 μM dan 0,83 μM. Hasil ini memvalidasi aktivitas antiinflamasi kencur yang dihasilkan oleh penghambatan COX-1 dan COX-2 (Umar et al., 2012). Penelitian terbaru oleh Ju Ko et al. (2014) menunjukkan bahwa etil p-metoksisinamat mampu menghambat pembentukan melanin sehingga memungkinkan untuk menjadi salah satu alternatif pengobatan pada kasus hiperpigmentasi. Senyawa etil p-metoksisinamat, yang merupakan salah satu senyawa utama dalam rimpang kencur, telah mendorong para ahli kimia medisinal untuk melakukan pengembangan terhadap senyawa tersebut. Diantaranya, sintesis

oktil

p-metoksisinamat

sebagai

sunblock

melalui

reaksi

transesterifikasi (Suzana, 2011), modifikasi etil p-metoksisinamat sebagai agen kemopreventif pada fibrosarkoma tikus (Ekowati et al., 2012), dan modifikasi

etil

p-metoksisinamat

melalui

reaksi

hidrolisis

dapat

menghilangkan aktivitas antiinflamasi (Mufidah, 2014).

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

3

Salah satu hal yang mendasari penulis untuk melakukan modifikasi terhadap senyawa etil p-metoksisinamat adalah karena senyawa turunan sinamat tersebut mempunyai gugus fungsi reaktif seperti olefin dan ester yang mudah ditransformasikan menjadi gugus fungsi lain, sehingga senyawa etil p-metoksisinamat merupakan senyawa yang potensial sebagai bahan dasar sintesis (Surbakti, 2008). Selain itu, senyawa etil pmetoksisinamat juga relatif mudah diisolasi dari ekstrak tanaman kencur. Bentuk modifikasi yang akan dilakukan adalah dengan menambahkan gugus nitro (NO2) pada cincin benzen etil p-metoksisinamat melalui reaksi nitrasi dan mensubstitusi gugus karboksilat dengan gugus butil ester melalui reaksi esterifikasi menggunakan 1-butanol. Pemilihan reaksi didasarkan pada teori bahwa penambahan gugus NO2 dan rantai karbon pada bagian ester menunjukkan efek induksi negatif yang dapat mempengaruhi keelektronegatifan suatu senyawa dengan demikian akan memberikan perubahan sifat kimia fisika senyawa dan mempengaruhi aktivitas biologisnya (Siswandono, 2008), sehingga ini menjadi menarik untuk dilakukan. Menurut penelitian sebelumnya oleh Rakesh et al., (2015) menunjukkan bahwa turunan senyawa modifikasi quinazolinone yang memiliki gugus Cl dan NO2 mampu menghasilkan agen antiinflamasi yang lebih baik dari aspirin (Rakesh et al., 2015). Sedangkan, penambahan gugus butil melalui reaksi esterifikasi dapat meningkatkan lipofilisitas senyawa, dengan demikian akan terjadi perbedaan polaritas yang mungkin dapat mempengaruhi aktivitas antiinlamasi. Inilah dasar yang memperkuat pemilihan reaksi nitrasi-esterifikasi dalam penelitian ini. Penelitian modifikasi struktur EPMS melalui reaksi nitrasi telah dilakukan oleh Mufidah (2014), namun hal tersebut menyebabkan terjadinya degradasi sinamat. Selain itu, peneliti telah melakukan studi pendahuluan reaksi nitrasi dari asam p-metoksisinamat. Oleh karena itu, penelitian ini menggunakan turunan asam dari etil p-metoksisinamat sebagai starting material. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

4

Uji antiinflamasi hasil modifikasi senyawa dilakukan secara in vitro menggunakan metode inhibisi denaturasi Bovine Serum Albumine (BSA). Pengujian ini dipilih karena mudah, hanya menggunakan sampel dalam jumlah sedikit, memiliki waktu analisis yang cepat dan merupakan uji pendahuluan yang dilakukan sebagai skrining awal aktivitas antiinflamasi (Mufidah, 2014).

1.2. Rumusan Masalah a. Apakah gugus fungsi pada senyawa etil p-metoksisinamat dapat ditransformasi melalui reaksi nitrasi-esterifikasi dengan 1-butanol? b. Bagaimana hubungan struktur senyawa hasil transformasi gugus fungsi etil p-metoksisinamat terhadap aktivitas antiinflamasi?

1.3. Tujuan Penelitian a. Melakukan modifikasi struktur senyawa etil p-metoksisinamat melalui reaksi nitrasi-esterifikasi. b. Menganalisis hubungan struktur aktivitas antiinflamasi senyawa hasil modifikasi yang dihasilkan dari transformasi gugus fungsi etil pmetoksisinamat.

1.4. Manfaat Penelitian a. Mendapatkan senyawa turunan etil p-metoksisinamat yang diharapkan mampu memberikan informasi baru mengenai hubungan struktur aktivitas senyawa turunan etil p-metoksisinamat sebagai agen antiinflamasi. b. Hasil dari penelitian ini diharapkan mampu memberikan informasi untuk proses modifikasi struktur dan uji aktivitas dari senyawa etil pmetoksisinamat lebih lanjut.


5

1.5. Hipotesis Penambahan gugus nitro dan butil ester pada senyawa etil pmetoksisinamat akan memberikan pengaruh terhadap aktivitas antiinflamasi.


BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tumbuhan Kencur

Gambar 2.1 Rimpang kencur (Kaempferia galanga L)

Tumbuhan kencur (Kaempferia galanga L) diperkirakan berasal dari India. Meskipun demikian, kencur sudah menyebar luas di berbagai negara terutama di benua Asia (Rukmana, 1994). Kencur merupakan tanaman tropis yang banyak tumbuh di berbagai daerah di Indonesia sebagai tanaman yang dipelihara. Bagian tanaman yang sering digunakan adalah rimpang yang mempunyai aroma yang khas dan lembut sehingga mudah membedakannya dengan jenis Zingiberaceae lain. Daun kencur berbentuk bulat lebar, tumbuh mendatar diatas permukaan tanah dengan jumlah daun tiga sampai empat helai. Permukaan daun sebelah atas berwarna hijau sedangkan sebelah bawah berwarna hijau pucat. Panjang daun berukuran 10-12 cm dengan lebar 8-10 cm mempunyai sirip daun yang tipis dari pangkal tanpa tulang induk daun yang nyata (Backer, 1986). Rimpang kencur terdapat di dalam tanah bergerombol dan bercabangcabang dengan induk rimpang di tengah. Kulit ari berwarna coklat dan bagian dalam putih berair dengan aroma yang tajam. Rimpang yang masih muda berwarna putih kekuningan dengan kandungan air yang lebih banyak dan rimpang yang lebih tua ditumbuhi akar pada ruas rimpang berwarna putih kekuningan (Backer, 1986).

6


7

Bunga kencur berwarna putih berbau harum terdiri dari empat helai daun mahkota. Tangkai bunga berdaun kecil-kecil sepanjang 2-3 cm, tidak bercabang, dapat tumbuh lebih dari satu tangkai, panjang tangkai 5-7 cm berbentuk bulat dan beruas-ruas. Putik menonjol ke atas berukuran 1-1,5 cm, tangkai sari berbentuk corong pendek. Bunga kencur termasuk ke dalam bunga majemuk sempurna (lengkap), karena mempunyai bunga jantan, bunga betina, mahkota, dan kelopak bunga yang terletak dalam satu anak bunga (Haryudi, 2008).

2.1.1 Klasifikasi (USDA) Kingdom

: Plantae

Subkingdom

: Trecheobionta

Super divisi

: Spematophyta

Divisi

: Magnoliophyta

Kelas

: Liliopsida

Sub Kelas

: Commenlinidae

Ordo

: Zingiberales

Famili

: Zingiberaceae

Genus

: Kaempferia

Spesies

: Kaempferia galanga Linn.

2.1.2 Tempat Tumbuh Kencur merupakan temu kecil yang tumbuh subur di daerah dataran rendah atau pegunungan yang tanahnya gembur (Armando, 2009). Produksi, mutu, dan kandungan bahan aktif di dalam rimpang kencur ditentukan oleh varietas cara budidaya dan lingkungan tempat tumbuhnya (Muhlisah, 1999). Kencur dapat tumbuh di berbagai tempat di dataran rendah hingga pegunungan dengan ketinggian daerah antara 80 – 700 m dari permukaan laut. Tanaman ini menghendaki tanah yang subur dan gembur. Kencur tumbuh lebih baik pada tempat yang sedikit terlindung (Syukur, Hernani, 2001). Tumbuhan kencur yang ditanam UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

8

pada ketinggian lebih dari 600 m dpl. mempunyai

resiko

pertumbuhan yang kurang baik. Selain itu, peta curah hujan di Jawa menunjukkan bahwa kencur dapat beradaptasi di daerah yang basah (9 bulan basah) maupun yang sedang (5-6 bulan basah dan 5-6 bulan kering) dan mencakup areal kira-kira 60% dari luas pulau Jawa (Roemantyo, 1996).

2.1.3 Kandungan Kimia Kaempferia galanga L. Pada penelitian yang telah dilakukan oleh Umar et al. (2012), kandungan senyawa kimia dalam ekstrak kencur adalah asam propionat (4,71%), pantadekan (2,08%), asam tridekanoat (1,81%), 1,21-docosadiene (1,47%), beta-sitosterol (9,88 %), dan etil pmetoksisinamat sebagai komponen terbesar (80,05%). Selain itu, pada penelitian yang dilakukan oleh Tewtrakul et al. (2005) juga dipaparkan bahwa terdapat kandungan α-pinen, kamphen, karvon, benzen, eukaliptol, borneol, dan metil sinamat dalam tanaman kencur.

(a)

(b)

(c)

(d)

Gambar 2.2 Struktur Senyawa dari (a) beta-sitosterol (b) etil p-metoksisinamat (c) pentadekan (d) asam tridekanoat


9

2.1.4 Manfaat Kaempferia galanga L. Kencur merupakan jenis tanaman obat potensial yang dapat dimanfaatkan sebagai bahan baku minuman untuk kesehatan, obatobatan dan penyedap masakan, serta dapat juga dimanfaatkan sebagai kosmetik (Haryudin et al., 2008). Dalam ramuan obat tradisional (jamu) kencur dipakai sebagai obat luar (topikal) maupun obat dalam (oral). Jamu yang mengandung kencur digunakan untuk pengobatan antara lain antiinflamasi, antimikroba, analgesik dan antipiretik (Suwito, 2005).

2.2 Senyawa Etil p-metoksisinamat Etil p–metoksisinamat (C12H14O3) termasuk turunan asam sinamat, dimana asam sinamat adalah turunan senyawa fenil propanoat. Senyawa EPMS berbentuk kristal berwarna putih dengan berat molekul 206,24 g/mol dan memiliki titik lebur 55-56oC (Bangun, 2011). EPMS sebelumnya dimanfaatkan sebagai bahan tabir surya (Windono et al., 1997), namun dewasa ini telah diteliti lebih lanjut bahwa EPMS merupakan senyawa isolat kencur yang memiliki aktivitas sebagai antiinflamasi non selektif menghambat COX-1 dan COX-2 secara in vitro. Etil p-metoksisinamat (EPMS) mampu menghambat induksi edema karagenan pada tikus dengan MIC 100 mg/kg dan juga berdasarkan hasil uji in vitro EPMS secara nonselektif menghambat aktivitas COX-1 dan COX-2 dengan nilai IC 50 masing-masing 1,12 μM dan 0,83 μM (Umar et al., 2012). Etil p-metoksisinamat adalah salah satu produk alam yang terdapat pada kencur (Kaempferia galanga) dalam jumlah yang relatif besar. Isolasi dan pemurnian etil p-metoksisinamat dapat dilakukan dengan mudah, selain itu etil p-metoksisinamat mempunyai gugus fungsi yang reaktif sehingga sangat mudah ditransformasikan menjadi gugus fungsi lain (Barus, 2009). EPMS merupakan salah satu senyawa turunan asam sinamat dengan demikian jalur biosintesis senyawa EPMS adalah melalui jalur biosintesis asam sikhimat.


10

Gambar 2.3 Jalur sikimat untuk menghasilkan etil p-metoksisinamat

2.2.1 Isolasi Senyawa Etil p-metoksisinamat EPMS termasuk ke dalam senyawa ester yang mengandung cincin benzene dan gugus metoksi yang bersifat nonpolar dan juga gugus karbonil yang mengikat etil yang bersifat sedikit polar sehingga dalam

ekstraksinya

dapat

menggunakan

pelarut-pelarut

yang

mempunyai variasi kepolaran yaitu etanol, etil asetat, metanol, air dan heksan. Dalam ekstrasi suatu senyawa yang harus diperhatikan adalah UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

11

kepolaran antara pelarut dengan senyawa yang diekstrak, keduanya harus memiliki kepolaran yang sama atau mendekati sama. EPMS adalah suatu ester yang mengandung cincin benzen dan gugus metoksi yang bersifat non polar dan mengandung gugus karbonil yang mengikat etil yang bersifat agak polar menyebabkan senyawa ini mampu larut dalam beberapa pelarut dengan kepolaran bervariasi. Hasil penelitian pada pemilihan pelarut pada suhu kamar didapat bahwa heksan adalah pelarut yang paling sesuai ditandai dengan persen hasil isolasi tertinggi yaitu 2,111 % yang diikuti dengan etanol yatu 1,434 %, dan etil asetat 0,542% sedangkan dengan aquades tidak terdapat kristal (Taufikkurohmah et al., 2008).

2.3 Hidrolisis Hidrolisis adalah perubahan atau transformasi kimia dimana molekul organik berupa RX akan bereaksi dengan air menghasilkan sebuah struktur dengan ikatan kovalen OH seperti dijelaskan pada gambar 2.4. Hidrolisis adalah contoh dari kelas reaksi terbesar dalam reaksi kimia disebut sebagai reaksi perpindahan nukleofilik di mana nukleofil menyerang atom elektrofilik. Proses hidrolitik mencakup beberapa jenis mekasnime reaksi yang dapat didefinisikan oleh jenis pusat reaksi dimana terjadi hidrolisis. Mekanisme reaksi yang paling sering ditemui adalah substitusi nukleofilik, baik secara langsung maupun tidak langsung dan eliminasi-adisi nukleofilik (Larson and Weber, 1994).

Gambar 2.4 Prisnsip Reaksi Hidrolisis (Larson and Weber, 1994)

Reaksi hidrolisis dapat terjadi dengan katalis basa atau asam, mekanisme reaksi hidrolisis sendiri dikelompokkan berdasarkan tipe reaksi dasar seperti substitusi nukleofilik, gugus fungsi yang ditransformasikan dengan reaksi substitusi nukleofilik, substitusi asil nukleofilik, gugus fungsi yang ditransformasikan dengan reaksi substitusi asil nukleofilik. Hidrolisis


12

untuk turunan asam karboksilat masuk ke dalam kategori yakni gugus fungsi yang ditransformasikan dengan reaksi substitusi asil nukleofilik. Mekanisme hidrolisis pada gambar 2.5 diinisiasi oleh protonasi pada karbon oksigen. Protonasi menyebabkan keadaan terpolarisasi pada gugus karbonil melepaskan elektron dari karbon sehingga bersifat lebih elektrofilik dan akan menerima penambahan nukleofilik dari air (Larson and Weber, 1994).

Gambar 2.5 Mekanisme Reaksi Hidrolisis pada Ester (Larson and Weber, 1994)

Hidrolisis ester dengan katalis basa melalui mekanisme penambahan nukleofilik OH (Gambar 2.6) secara langsung kepada gugus karbonil. Hidrolisis ester berkatalis basa terjadi karena ion OH merupakan nukleofil yang lebih kuat dibandingkan air (Larson and Weber, 1994).


13

Gambar 2.6 Mekanisme Reaksi Hidrolisis Ester dengan Katalis Basa (Larson and Weber, 1994)

Hidrolisis terhadap EPMS telah dilakukan sebelumnya oleh Mufidah (2014) dengan mereaksikan etil p-metoksisinamat dengan NaOH sebagai katalis basa dan etanol p.a sebagai pelarut sehingga menghasilkan senyawa asam karboksilat. Asam p-metoksisinamat, yang merupakan hasil hidrolisis EPMS, sama sekali tidak memiliki aktivitas antiinflamasi, kebalikannya senyawa tersebut diduga menginduksi terjadinya denaturasi protein sebagaimana ditunjukkan pada konsentrasi 40 ppm nilai inhibisinya adalah -254,84%.

Gambar 2.7 Mekanisme Hidrolisis Etil p-metoksisinamat (Mufidah, 2014)


14

Senyawa hasil hidrolisis etil p-metoksisinamat memiliki karakteristik berikut (Mufidah, 2014):  Warna

: Putih

 Bau

: Tidak berbau

 Bentuk

: Serbuk

 Titik leleh

:172-176oC

 Nilai entalpi (H)

: 89,3 J/g

Gambar 2.8 Struktur Asam p-metoksisinamat (Mufidah, 2014)

2.4 Nitrasi Nitrasi merupakan reaksi substitusi atom H pada benzen oleh gugus nitro (NO2). Reaksi ini terjadi dengan mereaksikan benzen dengan asam nitrat (HNO3) pekat dengan bantuan H2SO4 sebagai katalis atau larutan HNO3 dalam suasana asam asetat glasial. Mekanisme reaksi nitrasi terhadap benzene ditunjukkan pada Gambar 2.7. Nitrasi dari benzen awalnya dipengaruhi oleh pembentukan elektrofilik kuat yaitu ion nitronium, yang mana ini terjadi karena interaksi antara 2 asam kuat yaitu asam sulfat dan asam nitrat. Asam sulfat lebih kuat dan dapat memprotonasi asam nitrat pada gugus OH sehingga molekul dari air dapat berpisah. Selanjutnya benzene menyerang muatan positif atom nitrogen dari elektrofil, yang mana ikatan N=O lepas pada waktu yang sama. Hal ini diikuti dengan lepasnya proton untuk menstabilkan gugus aromatik (Lynnb, 2012).


15

Gambar 2.9 Mekanisme Reaksi Nitrasi dengan HNO3 dan H2SO4 pada Senyawa Aromatik (Khoirunni’mah, 2012)

Reaksi ini berlangsung dengan penggantian satu atau lebih gugus nitro (-NO2) menjadi molekul yang reaktif. Gugus nitro akan menyerang karbon membentuk nitro aromatik atau nitro parafin. Jika menyerang nitrogen membentuk nitramin dan bila menyerang oksigen membentuk nitrat ester. Pasa proses nitrasi masuknya gugus (-NO2) ke dalam senyawa dapat terjadi dengan menggantikan kedudukan beberapa atom atau gugus yang ada dalam senyawa. Umumnya nitrasi yang banyak dijumpai adalah nitrasi –NO2 menggantikan atom H (Yulianto, 2010). Metode reaksi nitrasi dengan menggunakan iradiasi microwave barubaru ini mulai menjadi perhatian para ahli. Metode “Cold Microwave” biasa digunakan untuk reaksi nitrasi karena memiliki beberapa keuntungan, yaitu waktu reaksi yang cepat, reaksi nitrasi dapat berlangsung tanpa adanya asam sulfat, dan dapat memberikan hasil yang lebih spesifik (single product) akibat dari reagen yang didinginkan terlebih dahulu sebelum pencampuran (Bose,2009). Nitrating agent merupakan reaktan elektrofilik, dimana reaksi akan terjadi pada atom karbon dari cincin aromatik yang mempunyai kepadatan elektron terbesar. Gugus NO2 yang masuk dapat membentuk posisi ortho, para, dan meta. Jumlah isomer pada produk tergantung pada substituen ini. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

16

Subtituen meta menyebabkan kepadatan elektron menjadi lebih besar dibandingkan substituen ortho dan para, sehingga yield produk nitrasi akan didominasi isomer meta (Yulianto, 2010).

2.5 Esterifikasi Reaksi esterifikasi asam karboksilat adalah reaksi pembentukan ester dengan bahan dasar asam karboksilat. Ester asam karboksilat ini merupakan suatu senyawa yang mengandung gugus –COOR dengan R yang berbentuk alkil maupun aril (Fessenden & Fessenden, 2006). Katalis memainkan peranan penting terhadap keberlangsungan reaksi esterifikasi. Katalis yang digunakan dalam reaksi esterifikasi dapat berupa katalis asam atau katalis basa dan berlangsung secara reversibel (Supardjan, 2004). Untuk memperoleh rendemen tinggi dari ester tersebut, kesetimbangan harus digeser ke arah sisi ester dengan menambahkan salah satu pereaksi secara berlebih. Kereaktifan asam karboksilat hanya memainkan peranan kecil dalam laju pembentukan ester (Fessenden & Fessenden, 2006). Kereaktifan asam karboksilat terhadap esterifikasi:

Variabel-Variabel yang Mempengaruhi Reaksi Esterifikasi Reaksi esterifikasi dipengaruhi oleh beberapa variabel. Variabelvariabel yang dimaksud antara lain (Hakim dan Irawan, 2010): a. Waktu Reaksi Semakin lama waktu reaksi maka kemungkinan kontak antar zat semakin besar sehingga akan menghasilkan konversi yang besar. Jika kesetimbangan reaksi sudah tercapai maka dengan bertambahnya waktu reaksi tidak akan menguntungkan karena tidak memperbesar hasil.


17

b. Perbandingan Zat Pereaksi Dikarenakan sifatnya yang reversibel, maka salah satu reaktan harus dibuat berlebih agar optimal dalam pembentukan produk ester yang diinginkan. c. Pengadukan Pengadukan akan menambah ferkuensi tumbukan antara molekul zat pereaksi dengan zat yang bereaksi semakin baik sehingga mempercepat reaksi dan reaksi terjadi sempurna. Hal ini sesuai dengan persamaan Arrhenius :

Keterangan: k

= Konstanta laju reaksi

A

= Faktor frekuensi atau faktor pre-eksponensial

Ea

= Energi Aktivasi (kL/mol)

R

= Tetapan gas universal (0,0821 atm/mol.K atau 8,314 J/mol.K)

T

= Temperatur atau suhu (K) Semakin besar tumbukan, maka semakin besar pula harga

konstanta laju reaksi, sehingga reaksi dapat berjalan lebih optimal. d. Suhu Dikarenakan sifat dari reaksi yang isotermis, maka suhu dapat mempengaruhi harga konstanta laju reaksi. Semakin tinggi suhu yang dioperasikan maka semakin banyak konversi yang dihasilkan. Hal ini sesuai dengan persamaan Arrhenius, bila suhu naik maka harga k semakin besar, sehingga reaksi berjalan cepat dan hasil konversi semakin besar. e. Katalisator Sifat reaksi esterifikasi yang lambat membutuhkan katalisator agar berjalan lebih cepat. Katalisator berfungsi untuk mengurangi energi aktivasi pada suatu reaksi, sehingga pada suhu tertentu harga konstanta laju reaksi semakin besar. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

18

2.6 Spesifikasi Asam Nitrat dan 1-Butanol 2.6.1 Asam Nitrat 

Sifat Fisika: Rumus kimia

: HNO3

Berat molekul

: 63,012 g/mol

Bentuk (30oC, 1 atm)

: cair

Titik didih

: 83,4 oC

Titik leleh

: -41,59oC

Densitas (20oC)

: 1,502 g/mL

Kelarutan (dalam 100 bagian) - Air dingin

: tak terhingga

- Air panas

: tak terhingga

Meledak dalam solvent etanol Viskositas (25oC)

: 0,761 Cp

Panas peleburan (Hfus)

: 10,48 Kj/mol

Panas pembentukan (Hf)

: -174,10 Kj/mol

Panas penguapan (25oC)

: 39,04 Kj/mol

Energi bebas pembentukan (25oC)

: -80,71 Kj/mol

Entropy (25oC)

: 155,60 J/molK (Kirk Orthmer, 1996., Yulianto, 2010)



Sifat Kimia Asam Nitrat adalah suatu asam monobasa yang kuat, yang mudah bereaksi dengan alkali, oksida dan senyawa basa dalam bentuk garam. Asam nitrat merupakan senyawa yang berperan yang berperan dalam proses nitrasi, yaitu sebagai nitrating agent. Komponen yang dinitrasi adalah benzen, baik dengan adanya asam sulfat ataupun tidak.


19

2.6.2 1-Butanol 

Sifat Fisika Rumus kimia

: C4H10O

Organoleptis

: tak berwarna, cairan kental, bau khas

Berat molekul

: 74,12 g/mol

Bentuk (30oC, 1 atm)

: cair

Titik didih

: 117,73 oC

Massa jenis

: 0,811 g/mL

Kelarutan dalam air pada 3OoC

: 7,1 % berat (Halimatuddahliana, 2004)



Sifat Kimia 1-Butanol merupakan senyawa organik yang memiliki ikatan hidrogen sehingga senyawa ini mempunyai titik didih yang tinggi (Halimatuddahliana, 2004).

Gambar 2.12 Struktur Senyawa 1-Butanol

2.7 Gelombang Mikro 2.7.1 Prinsip Umum Gelombang mikro merupakan gelombang elektromagnet. Gelombang elektromagnet itu sendiri merupakan suatu gelombang yang tidak memerlukan medium perambatan, dengan kecepatan rambat 3X108 m/detik. Gelombang elektromagnet terdiri dari komponen medan listrik (E) dan medan magnet (B) yang saling tegak lurus. Gelombang ini memiliki daerah frekuensi yang sangat besar, yaitu 109-1022 Hz. Sebagian besar spektrum gelombang mikro digunakan untuk keperluan telekomunikasi (Kappe, 2003).


20

2.7.2 Mekanisme Pemanasan Pemanasan suatu materi dengan menggunakan gelombang elektromagnetik berfrekuensi tinggi ditimbulkan dari interaksi komponen medan listrik gelombang elektromagnetik dengan partikel yang memiliki muatan dalam materi sehingga menghasilkan polarisasi dipolar. Selain itu, terdapat faktor konduksi yang berperan dalam pemanasan terutama pada suhu tinggi (Chem-team, 2004). Fenomena yang berperan dalam pemanasan dengan gelombang mikro adalah adanya konduksi ion. Dalam pengaruh suatu medan listrik, ion-ion yang terdapat dalam sampel yang dipanaskan akan bergerak dan saling bergesekan sehingga menimbulkan panas. Migrasi ion ini dipengaruhi oleh ukuran muatan dan konduktivitas ion terlarut. Faktor yang mempengaruhi konduksi ion adalah konsentrasi, mobilitas ion, dan temperatur larutan (Neas, E.D & M.J. Collins, 1988). 2.7.3 Instrumentasi Oven Gelombang Mikro (Belinda, 2011) Instrumentasi gelombang mikro yang digunakan untuk pemanasan terdiri dari enam komponen utama, yaitu: 

Magnetron, merupakan tabung hampa elektronik penghasil gelombang mikro. Fungsinya adalah memancarkan gelombang mikro ke sebuah kincir yang terbuat dari logam yang disebut stirrer.



Pengarah gelombang (wave guide)



Cavity, merupakan tempat dimana sampel akan diiradiasi dengan gelombang mikro. Berdasarkan jenis cavity, instrumen gelombang mikro terdiri dari dua macam reaktor utama, yaitu reactor monomade/single mode dan multimode.



Stirrer, alat ini akan berputar selama magnetron memancarkan gelombang mikro sehingga gelombang tersebut terpancarkan dan terdistribusi secara merata ke dalam ruang pemanasan dari oven gelombang mikro. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

21



Sirkulator



Turntable

Gambar 2.11 Instrumentasi Oven Microwave (Belinda, 2011)

2.8 Identifikasi 2.8.1 Kromatografi Kromatografi didefinisikan sebagai prosedur pemisahan zat terlarut oleh suatu proses nitrasi migrasi diferensial dinamis dalam sistem yang terdiri dari dua fase atau lebih, salah satu diantaranya bergerak

secara

berkesinambungan

dalam

arah

tertentu

dan

didalamnya zat-zat itu menunjukkan perbedaan mobilitas disebabkan adanya perbedaan dalam adsorpsi, partisi, kelarutan, tekanan uap, ukuran molekul atau kerapatan muatan ion. Dengan demikian masingmasing zat dapat diidentifikasi atau ditetapkan dengan metode analitik (Departemen Kesehatan, 1995). a. Kromatografi Lapis Tipis Kromatografi

lapis

tipis

adalah

metode

pemisahan

fisikokimia. Lapisan yang memisahkan, yang terdiri atas bahan berbutir-butir (fase diam), ditempatkan pada penyangga berupa pelat gelas, atau lapisan yang cocok. Campuran yang akan dipisah berupa larutan ditotolkan dalam bentuk bercak atau pita (awal). Setelah pelat atau lapisan ditaruh di dalam bejana tertutup rapat yang berisi larutan pengembang yang cocok (fase gerak), pemisahan terjadi selama perambatan kapiler (pengembangan). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

22

Selanjutnya senyawa yang tidak berwarna harus ditampakkan (dideteksi) (Stahl Egon dalam Khoirunni’mah, 2012). Diantara berbagai jenis teknik kromatografi, kromatografi lapis tipis adalah yang paling banyak digunakan untuk analisis obat di laboratorium farmasi. Metode ini hanya memerlukan investasi kecil untuk perlengkapan dan menggunakan waktu yang singkat untuk menyelesaikan analisis (15-60 menit), memerlukan jumlah cuplikan yang sangat sedikit (kira-kira 0,1 g). Selain itu, hasil palsu yang disebabkan oleh komponen sekunder tidak mungkin

terjadi,

kebutuhan

ruangan

minimum,

dan

penanganannya sederhana (Stahl Egon dalam Khoirunni’mah, 2012). Prinsip KLT yaitu perpindahan analit pada fase diam karena pengaruh fase gerak. Proses ini disebut elusi. Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan semakin sempit kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik kinerja KLT dalam hal efeisiensi dan resolusinya. Fase gerak yang dikenal sebagai pelarut pengembang akan bergerak sepanjang fase diam karena pengaruh kapiler pada pengembangan ke atas (ascending), atau karena pengaruh gravitasi pada pengembangan secara menurun (descending) (Rohman, 2007). Menurut Farmakope Indonesia IV, tatalaksana identifikasi senyawa dengan KLT adalah sebagai berikut: Totolkan larutan uji dan larutan baku menurut cara yang tertera pada masing-masing monografi dengan jarak antara lebih kurang 1,5 cm dan lebih kurang 2 cm dari tepi bawah lempeng, dan biarkan mengering (tepi bawah lempeng adalah bagian lempeng yang pertama kali dilalui oleh alat saat membuat lapisan pada waktu melapiskan zat penjerap). Beri tanda pada jarak 10 cm hingga 15 cm di atas titik penotolan. Tempatkan lempeng pada rak penyangga hingga tempat penotolan terletak di sebelah bawah, dan masukkan rak ke UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

23

dalam bejana kromatografi. Pelarut dalam bejana harus mencapai tepi bawah lapisan penjerap tetapi titik penotolan jangan sampai terendam. Letakkan tutup bejana pada tempatnya dan biarkan sistem hingga pelarut merambat 10 cm hingga 15 cm di atas titik penotolan, umumya diperlukan waktu lebih kurang 15 menit hingga 1 jam. Keluarkan lempeng dari bejana, buat tanda batas rambat pelarut, keringkan lempeng di udara dan amati bercak mula-mula dengan cahaya ultraviolet gelombang pendek (254 nm) dan kemudian dengan cahaya ultraviolet gelombang panjang (365 nm). Ukur dan catat jarak tiap bercak yang diamati. Tentukan harga Rf untuk bercak utama. Jika diperlukan, semprot bercak

dengan

pereaksi

tertentu,

amati

dan

bandingkan

kromatogram zat uji dengan kromatogram baku pembanding (Departemen Kesehatan, 1995).

Gambar 2.12 Skema Kromatografi Lapis Tipis (Mufidah, 2014)

b. Kromatografi Kolom Tujuan kromatografi kolom adalah memisahkan komponen cuplikan menjadi pita atau fraksi yang lebih sederhana, ketika cuplikan itu bergerak melalui kolom. Zat penyerap dalam keadaan kering atau bubur, dimampatkan ke dalam tabung kaca atau UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

24

tabung kuwarsa dengan ukuran tertentu dan mempunyai lubang pengalir tertentu dengan ukuran tertentu (Departemen Kesehatan, 1979). Zat penjerap atau fase diam yang digunakan bisa berupa aluminium oksida yang telah diaktifkan, silika gel, tanah diatome terkalsinasi, atau tanah silika yang dimurnikan dalam keadaan kering atau dalam campuran air, dimampatkan ke dalam tabung kromatografi kaca atau kuarsa. Zat uji yang dilarutkan dalam jumlah kecil pelarut, dituangkan ke dalam kolom dan dibiarkan mengalir ke dalam zat penjerap. Zat berkhasiat diadsorpsi dari larutan secara kuantitatif oleh bahan penjerap berupa pita sempit pada permukaan atas kolom. Dengan penambahan pelarut lebih lanjut melalui kolom, oleh gaya gravitasi atau dengan memberi tekanan, masing-masing zat bergerak turun dalam kolom dengan kecepatan tertentu, sehingga terjadi pemisahan dan diperoleh kromatogram (Departemen Kesehatan, 1995). Fraksi yang diperoeh dari kolom kromatografi ditampung dan dimonitor dengan kromatografi lapis tipis. Fraksi-fraksi yang memiliki pola kromatogram yang sama digabung kemudian pelarutnya diauapkan sehingga akan diperoleh beberapa fraksi. Noda pada plat KLT dideteksi dengan lampu gelombang

254/365

nm

untuk

UV panjang

senyawa-senyawa

yang

mempunyai gugus kromofor, dengan penampak noda seperti larutan iod, FeCl3, dan H2SO4 dalam metanol 10% (Stahl, 1969).

2.8.2

Spektrofotometri Spektrofotometri merupakan pengukuran suatu interaksi antara radiasi elektromagnetik dan molekul atau atom dari suatu zat kimia. Teknik yang sering digunakan dalam analisis farmasi meliputi spektrofotometri serapan ultraviolet, cahaya tampak, infamerah dan serapan atom (Departemen Kesehatan, 1995).


25

a. Spektrofotometri IR Spektrofotometri inframerah merupakan alat untuk merekam spektrum di daerah inframerah terdiri dari suatu sistem optik dengan kemampuan menghasilkan cahaya monokromatik di daerah 4000 cm-1 hingga 625 cm-1 (lebih kurang 2,5 πm hingga 16πm) dan suatu metode untuk mengukur perbandingan intensitas perbandingan cahaya yang ditransmisikan cahaya datang (Departemen Kesehatan, 1995). Setiap molekul memiliki karakteristik spektrum inframereah yang berbeda-beda baik dalam posisi maupun intensitas pita absorbsinya. Spektrum yang diperoleh merupakan hubungan antara bilangan gelombang (cm-1) dan persen transmitan. Spektrum IR digunakan untuk mengidentifikasi gugus fungsi (Departemen Kesehatan, 1995). Absorpsi molekul pada inframerah terjadi ketika molekul tereksitasi ke tingkat energi yang lebih tinggi. Suatu molekul hanya menyerap frekuensi (energi) tertentu dari radiasi inframerah. Kegunaan spektroskopi IR adalah sebagai sidik jari suatu molekul dan untuk menentukan informasi struktural dari suatu molekul. Absorpsi dari tiap tipe ikatan (N-H, C-H, O-H, C-X, C=O, C-O, C-C, C=C, dan sebagainya) umumnya ditemukan hanya dalam porsi yang sedikit dari area vibrasi inframerah. Rentang kecil dari absorpsi dapat didefinisikan untuk tiap ikatan (Pavia et al., 2001). b. Spektrofotometri UV-Vis Spektrofotometri serap merupakan pengukuran interaksi antara radiasi elektromagnetik panjang geombang tertentu yang sempit dan mendekati monokromatik, dengan molekul atau atom dari suatu zat kimia. Hal ini didasarkan pada kenyataan bahwa molekul selalu mengabsorpsi cahaya elektromagnetik jika frekuensi cahaya tersebut sama dengan frekuensi getaran dari molekul tersebut. Elektron yang terikat dan elektron yang tidak terikat akan tereksitasi pada suatu UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

26

daerah frekuensi yang sesuai dengan cahaya ultraviolet dan cahaya tampak (UV-Vis) (Roth et al., 1994). Spektrum absorpsi daerah ini adalah sekitar 220 nm sampai 880 nm dan dinyatakan sebagai spektrum elektron. Suatu spektrum ultraviolet meliputi daerah bagian ultraviolet (190-380 nm), spektrum Vis (Visible) bagian sinat tampak (380-780 nm). Prinsip spektroskopi absorpsi adalah semakin besar angka meolekul yang mampu menyerap cahaya dari panjang gelombang yang diberikan, semakin besar perluasan absorpsi cahaya. Selan itu, semakin efektif suatu molekul menyerap cahaya dari panjang gelombang yang diberikan, semakin besar perluasan absorpsi (Pavia et al., 2001). Pengukuran dengan alat spektrofotometer UV-Vis didasarkan pada hubungan antara berkas radiasi elektromagnetik yang ditransmisikan (diteruskan) atau yang diabsorpsi dengan tebalnya cuplikan dengan konsentrasi dari komponen penyerap. Hubungan tersebut diyatakan dalam Hukum Lambert-Beer (Sastroamidjojo, 1985): A=a.b.c Keterangan : A= Serapan a = Daya serap b = Tebal kuvet c = Konsentrasi larutan Instrumentasi

dari

spektrofotometer

UV-Vis

ini

dapat

diuraikan sebagai berikut: 1. Sumber energi cahaya yang berkesinambungan yang meliputi daerah spektrum yang mana alat tersebut dirancang untuk beroperasi.


27

2. Monokromator, yakni sebuah piranti untuk memencilkan pita sempit

panjang

gelombang

dari

spektrum

lebar

yang

dipancarkan oleh sumber cahaya. 3. Wadah untuk sampel (dalam hal ini digunakan kuvet). 4. Detektor, yang berupa transduser yang merubah energi cahaya menjadi suatu sinyal listrik. 5. Amplifier (pengganda) dan rangkaian yang perubah energi cahaya menjadi suatu sinyal listrik. 6. Suatu sistem baca dimana diperagakan besarnya sinyal listrik yang ditangkap. c. Spektrofotometri Resonansi Magnetik Resonansi magnetik nuklir (Nuclear Magnetic Resonance) adalah metode spektrofotometri yang bahkan lebih penting bagi ahli kimia organik dari spektrofotometri inframerah. Banyak inti dapat dipelajari dengan teknik NMR, tetapi hidrogen dan karbon yang paling umum tersedia. Jika spektrofotometri inframerah (IR) digunakan untuk mengidentifikasi gugus fungsi, NMR memberikan informasi mengenai jumlah atom magnetis yang berbeda dari jenis yang dipelajari (Mufidah, 2014). NMR dapat menentukan jumlah masing-masing jenis yang berbeda dari inti hidrogen serta memperoleh informasi mengenai sifat dasar dari lingkungan terdekat dari masing-masing jenis. Informasi yang sama dapat ditentukan untuk inti karbon. Kombinasi IR dan data NMR seringkali cukup untuk menentukan secara benar struktur molekul yang tidak diketahui (Pavia et al., 2008). Prinsip dasar spektroskopi NMR yakni inti dari setiap isotop tertentu memiliki gerakan berputar di sekililing sumbunya. Perputaran patrikel berenergi atau sirkulasinya, menimbulkan kejadian megnetis sepanjang sumbu magnetisnya dapat sejajar atau melawan medan magnet (Willard at al., 1988).


28

Instrumen NMR terdiri atas komponen-komponen sebagai berikut (Willard et al., 1988): a. Magnet Merupakan

suatu

alat

tambahan

yang

berguna

untuk

menstabilkan medan magnet. b. Probe sampel Tempat meletakkan sampel dan tempat terjadinya resonansi. c. Sumber dan detektor radiasi radioaktif Merekam perubahan magnetisasi sampel dan peluruhannya yang disebabkan oleh pengaruh waktu. d. Rekorder data Memberikan informasi berupa sinyal yang dikirim ke suatu komputer untuk diproses, diakumulasi lalu ditransformasikan secara otomatis (Atta-ur-Rahman, 1986., Willards et al., 1988).

2.9 Inflamasi 2.9.1 Definisi Inflamasi Inflamasi adalah reaksi kompleks dalam jaringan ikat vaskular yang terjadi karena rangasangan eksogen dan endogen. Inflamasi merupakan respon normal, pelindung terhadap cedera jaringan yang disebabkan oleh trauma fisik, bahan kimia berbahaya atau agen mikrobiologis, yang berupaya menonaktifkan atau menghancurkan organisme asing, menghilangkan iritasi yang merupakan tahap pertama perbaikan jaringan (Sen et al., 2010). Proses inflamasi biasanya mereda pada proses penyelesaian atau penyembuhan, tetapi kadang-kadang berubah menjadi radang yang parah, yang mungkin jauh lebih buruk dari penyakit ini dan dalam kasus ekstrim juga dapat berakibat fatal. Kemerahan, suhu yang meningkat, pembengkakan, nyeri, dan hilangnya fungsi adalah tanda klasik dari inflamasi. Inflamasi dapat diprovokasi oleh berbagai agen berbahaya, bahan asing, toksin, infeksi, bahan kimia, patogen, reaksi kekebalan tubuh, dan luka fisik (Sen et al., 2010). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

29

2.9.2 Mekanisme Inflamasi Proses

inflamasi

dimulai

dari

stimulus

yang

akan

mengakibatkan kerusakan sel, sebagai reaksi terhadap kerusakan sel, maka sel tersebut akan melepaskan beberapa fosfolipid yang diantaranya adalah asam arakidonat. Setelah asam arakidonat tersebut bebas, kemudian akan diaktifkan oleh beberapa enzim, diantaranya siklooksigenase dan lipooksigenase. Enzim tersebut merubah asam arakidonat ke dalam bentuk yang tidak stabil (hidroperoksid dan endoperoksid) yang selanjutnya dimetabolisme menajdi leukotrien, prostaglandin, prostasiklin, dan tromboksan. Bagian prostaglandin dan leukotrien bertanggung jawab terhadap gejala-gejala peradangan (Katzung, 2006). Rangsangan

Kortikosteroid

Gangguan membran sel

Fosfolipase Fosfolipid AINS

Asam arakhidonat

Siklooksigenase

Lipooksigenase Leukotrien

LTB4

Prostaglandin

Prostasiklin

LTC4/D4/E4

Tromboksan

Modulasi leukosit

Aktivasi/atraksi fagosit Inflamasi Gambar 2.13 Mekanisme Inflamasi (Katzung, 2006)


30

2.9.3 Obat-Obat Antiinflamasi Obat-obat antiinflamasi adalah golongan obat yang memiliki aktivitas menekan atau mengurangi peradangan. Aktivitas ini dapat dicapai melalui berbagai cara. Salah satunya ialah menghambat pelepasan prostaglandin dari sel-sel tempat pembentukannya. Obat antiinflamasi sangat efektif menghilangkan rasa nyeri dan dan pembengkakan akibat adanya inflamasi dengan menekan produksi prostaglandin dan metabolisme asam arakidonat dengan cara penghambatan siklooksigenase dan lipooksigenase pada kaskade inflamasi sehingga fungsi otot dan sendi membaik (Setyarini, 2009). Berdasarkan mekanisme kerjanya obat-obatan antiinflamasi dibagi menjadi dua golongan, yaitu: a. Antiinflamasi Steroid Obat golongan ini bekerja dengan cara menghambat fosfolipase, suatu enzim yang bertanggung jawab terhadap pelepasan asam arakidonat dari membran lipid. Termasuk golongan obat ini adalah: prednison, hidrokortison, deksametason, dan betametason (Katzung, 2006). b. Antiinflamasi Non Steroid (AINS) Obat AINS bekerja dengan cara menghambat enzim siklooksigenase sehingga konversi asam arakidonat menjadi prostaglandin menjadi terganggu. Termasuk golongan obat ini adalah: aspirin, ibuprofen, indometasin, diklofenak, fenil butazon, dan piroksikam (Katzung, 2006). Efek samping utama yang dimiliki oleh obat antiinflamasi non steroid (AINS) adalah iritasi lambung yang mengarah pada pembentukan ulkus lambung (Chatterjee et al., 2012).


31

2.9.4 Natrium Diklofenak Natrium dikofenak merupakan obat antiinflamasi non steroid yang termasuk ke dalam kelompok preverencially selective COX inhibitor.

Obat

ini

bekerja

menghambat

aktivitas

enzim

siklooksigenase yang berperan dalam metabolisme asam arakidonat menjadi prostaglandin yang merupakan salah satu mediator inflamasi (Kertia, 2009). Natrium diklofenak merupakan turunan fenilasetat yang daya antiradangnya paling kuat dengan efek samping yang kurang dibandingkan dengan obat lainnya (seperti indometasin, piroksikam) (Tjay, 2002). Absorpsi obat ini melalui saluran cerna berlangsung cepat dan terikat 99% pada protein plasma dengan jumlah obat yang mengalami efek lintas pertama sebesar 40-50%. Walaupun waktu paruh singkat yakni 1-3 jam, Na diklofenak diakumulasi di cairan sinovilia yang menjelaskan efek terapi di sendi jauh lebih panjang dari waktu paruh obat tersebut. Efek samping yang lazim terjadi ialah mual, gastritis, eritema kulit, dan sakit kepala. Dosis orang dewasa 100-500 mg sehari terbagi dua atau tiga dosis (Gunawan, 2008). 2.10

Uji Antiinflamasi Beberapa metode in vitro dapat digunakan dalam mengetahui potensi atau aktivitas antiinflamasi dari suatu obat, kandungan kimia dan preparat herbal. Teknik-teknik yang bisa digunakan antara lain adalah pelepasan fosforilasi

oksidatif

(ATP

biogenesis

terkait

dengan

respirasi),

penghambatan denaturasi protein, stabilisasi membran eritrosit, stabilisasi membran lisosomal, tes fibrinolitik dan agregasi trombosit (Oyedapo et al., 2010). Selain itu uji antiinflamasi secara in vitro juga bisa dilakukan dengan melihat efek inhibisi pada siklooksigenase menggunakan kit khusus uji skrining siklooksigenase (Umar et al., 2012).


32

Dalam

pengembangan

AINS,

prinsip

denaturasi

dalam

uji

antiinflamasi sering digunakan seperti pada uji antiinflamasi dengan albumin telur (Chandra, 2012) dan uji dengan bovine serum albumin (BSA) (Williams et al., 2008). Denaturasi protein pada jaringan adalah salah satu penyebab penyakit inflamasi dan atritis. Produksi dari antigenauto pada penyakit atritis dapat mengakibatkan denaturasi protein secara in vivo. Oleh karena itu, penggunaan suatu agen tertentu yang bisa mencegah denaturasi protein akan bermanfaat pada pengembangan obat antiinflamasi (Chatterjee et al., 2012). Denaturasi protein adalah sebuah proses dimana protein kehilangan struktur tersier dan struktur sekunder oleh senyawa eksternal, seperti asam kuat atau basa kuat, garam anorganik terkonsentrasi, pelarut organik, dan pemanasan. Pada umumnya protein kehilangan fungsi biologisnya ketika didenaturasi. Misalnya, enzim kehilangan aktivitas mereka karena substrat tidak dapat lagi mengikat pada gugus aktifnya (Verma et al., 2011). Beberapa AINS seperti indometasin, ibufenak, asam flufenamik, dan asam salisilat memiliki kemampuan dalam mencegah denaturasi BSA yang dipanaskan pada pH patologis yakni 6,2-6,5. Selain itu beberapa ekstrak dan komponen murni tumbuhan seperti ekstrak Boehmeria jamaicensis (Urb), fenil propanoid, eugenol, polisulfid, dibenzil trisulfid dapat menghambat denaturasi BSA, memiliki aktivitas sebagai antioksidan dan merupakan kandidat obat antiinflamasi. Pada uji BSA, jika senyawa sampel menghambat denaturasi dengan persen inhibisi > 20% maka dianggap memiliki aktivitas antiinflamasi dan layak untuk dikembangkan lebih lanjut (Williams et al., 2008).

2.10.1

Bovine Serum Albumine (BSA) Albumin memiliki berat molekul relatif rendah, yang larut dalam air, mudah mengkristal, dan mengandung asam amino. BSA adalah rantai polipepetida tunggal yang terdiri dari sekitar 583 residu asam amino dan tidak ada karbohidrat di pH 5-7 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

33

mengandung 17 jembatan rantai disulfida dan 1 kelompok sulfihidril. Serbuk BSA disimpan pada suhu 2-8oC. Stabilitas larutan BSA sangat baik. Bahkan, albumin sering digunakan sebagai stabilisator untuk protein terlarut lainnya (misalnya, enzim labil). Namun, albumin mudah digumpalkan oleh pemanasan. Ketika dipanaskan sampai 50oC atau di atasnya, albumin cukup pesat membentuk agregat hidrofobik yang tidak kembali ke monomer pada saat pendinginan. Pada suhu yang lebih rendah agregasi juga terjadi, tetapi pada tingkat yang relatif lebih lambat (www.sigma-aldrich.com).


BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN

3.1

Tempat dan Waktu Penelitian 3.1.1 Tempat Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Obat dan Pangan Halal, Laboratorium Kimia Obat, dan Laboratorium Farmakognosi dan Fitokimia, Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 3.1.2 Waktu Penelitian ini dilaksanakan pada bulan November 2014 sampai dengan Juni 2015.

3.2

Alat dan Bahan 3.2.1 Alat Digital water bath (SB-100 Eyela), spektrometri IR (Shimadzu), spektrofotometer UV-Vis (Hitachi), Spektrometri 1H-NMR (500 Hz, JEOL), Differential Scanning Calorimeter (Shimadzu), refrigerator, Gas

Chromatography

Mass

Spectrometer

(GCMS

QP2010

Shimadzu), vacuum rotary evaporator (SB-1000 Eyela), timbangan analitik, Plat aluminium TLC silica gel

60 F254 (Merck),

microwave, erlenmeyer, gelas piala, rak, labu reaksi, statif, penangas, corong, pipet eppendorf, blender, termometer, chamber KLT, mikropipet, batang pengaduk, pinset, spatula, pH meter, pengaduk magnetik, kertas saring, kapas, aluminium foil, vial, dan botol. 3.2.2 Bahan Senyawa etil p-metoksisinamat yang merupakan isolat dari tanaman kencur (Kaempferia galanga L.), natrium hidroksida (Merck), asam klorida 15%, asam nitrat p.a (JT Baker), asam sulfat 98% (Merck), Bovine Serum Albumin (Sigma), silika gel 60 (0,0630,200 mm) (Merck), metanol p.a (Merck), etanol p.a (Merck) dan 34


35

natrium klorida (Merck), 1-butanol (Merck). Pelarut dan bahan pembantu lain seperti aquades, etil asetat, n-heksan, metanol, dan air es.

3. 3

Prosedur Penelitian 3.3.1 Modifikasi Senyawa Asam p-metoksisinamat a. Hidrolisis Etil p-metoksisinamat Metode hidrolisis etil p-metoksisinamat mengacu pada cara kerja yang telah dilakukan oleh Mufidah (2014) dengan modifikasi. Sebanyak 1,5 g (0,036 mol) NaOH dilarutkan dengan 100 mL etanol p.a dalam gelas kimia dengan pengadukan menggunakan pengaduk magnetik sambil dipanaskan di atas hot plate dengan suhu 60-70oC. Kemudian ditambahkan senyawa EPMS sebanyak 5 g (0,024 mmol) ke dalamnya. Proses hidrolisis dilakukan selama 3 jam. Pengecekan reaksi dilakukan dengan menggunakan KLT dengan eluen heksan-etil asetat (4:1). Hasil reaksi dilarutkan dengan 200 mL aquades hingga larut sempurna, kemudian ditambahkan 15% HCl untuk membentuk endapan hingga tidak ada lagi endapan putih yang terbentuk atau pH filtrat mencapai 4. Setelah itu dilakukan penyaringan dengan kertas saring untuk mendapatkan endapan/residu tersebut. Residu yang didapatkan merupakan senyawa hasil hidrolisis yang kemudian dikeringanginkan. b. Nitrasi Asam p-metoksisinamat Metode nitrasi mengacu pada cara kerja yang telah dilakukan oleh Bose (2006) dengan modifikasi. Sebanyak 2,5 gram (0,014 mol) APMS dilarutkan dengan 10 mL (0,22 mol) HNO3 65% yang telah didinginkan dalam erlenmeyer yang berada dalam gelas kimia berisi es sehingga membentuk ice jacket. Kemudian diiradiasi dengan menggunakan microwave oven 450 watt selama 2 menit. Setelah itu ditambahkan 100 mL aquades untuk memisahkan sisa asam nitrat dan produk yang terbentuk, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

36

kemudian disaring dengan kertas saring lalu dikeringanginkan. Pengecekan terhadap hasil reaksi dilakukan dengan menggunakan KLT dengan perbandingan pelarut etil asetat – heksan (2:3) c. Esterifikasi Senyawa Hasil Reaksi Nitrasi Sebanyak 500 mg senyawa hasil nitrasi dilarutkan dalam 50 mL (0,547 mol) 1-butanol pro analisys dalam erlenmeyer sambil diaduk menggunakan magnetic stirrer dan dipanaskan pada suhu 90oC hingga larut sempurna. Setelah itu ditambahkan 0,2 mL (4 mmol)

asam

sulfat

98%.

Kemudian

diiradiasi

dengan

menggunakan microwave oven 300 watt selama 30 menit dalam erlenmeyer tertutup. Kemudian dilakukan pengecekan terhadap hasil reaksi dengan menggunakan KLT dengan perbandingan pelarut 1 etil asetat : 4 heksan (Indriyani, 2015).

3.3.2 Pemurnian dengan Kromatografi Kolom Pemurnian

senyawa

hasil

modifikasi

dilakukan

dengan

menggunakan metode pemisahan kromatografi kolom. Sistem kromatografi yang digunakan adalah kromatografi kolom fase normal, dimana silika gel 60 yang bersifat polar bertindak sebagai fase diam. Pelarut yang digunakan adalah pelarut heksan 100% hingga heksan-etil asetat dengan perbandingan 9:1.

3.3.3 Identifikasi Senyawa a. Identifikasi Organoleptis Senyawa yang didapat baik senyawa murni asam pmetoksisinamat maupun senyawa hasil modifikasi kemudian diidentifikasi warna, bentuk dan bau. b. Pengukuran Titik Leleh Senyawa murni asam p-metoksisinamat diidentifikasi titik lelehnya menggunakan alat apparatus melting point dan DSC.


37

c. Identifikasi senyawa menggunakan FTIR Sedikit sampel padat (kira-kira 1 – 2 mg), kemudian ditambahkan bubuk KBr murni (kira-kira 200 mg) dan diaduk hingga rata. Kemudian sampel yang terbentuk diambil dan kemudian

ditempatkan

dalam

tempat

sampel

pada

alat

spektrofotometri inframerah untuk dianalisis (Hidayati, 2012). d. Identifikasi senyawa menggunakan GCMS Kolom yang digunakan adalah HP-5MS (30 m x 0,25 mm ID x 0,25 μm); suhu awal 70 ºC selama 2 menit, dinaikkan ke suhu 285 ºC dengan kecepatan 20 ºC/menit selama 20 menit. Suhu MSD 285 ºC. Kecepatan aliran 1,2 mL/menit dengan split 1:100. Parameter scanning dilakukan dari massa paling rendah yakni 35 sampai paling tinggi 550 (Umar et al., 2012). e. Identifikasi senyawa menggunakan H1-NMR dan C13-NMR Sedikit sampel padat (kira-kira 10 mg), kemudian dilarutkan dalam pelarut bebas proton (khusus NMR), setelah dilarutkan kemudian dimasukkan ke dalam tabung khusus NMR untuk kemudian dianalisis.

3.3.4

Uji In Vitro Antiinflamasi (Williams et al., 2008) a. Pembuatan Reagen untuk Uji Antiinflamasi 1. Larutan TBS (Tris Buffer Saline) pH 6.3 Sebanyak 1,21 g Tris base dan 8,7 NaCl dilarutkan dalam 1000 mL aquades. Kemudian pH diatur sampai 6,3 menggunakan asam asetat glasial (Mohan, 2003). 2. Penyiapan variat konsentrasi Natrium diklofenak sebagai kontrol positif Pembuatan larutan induk sebesar 10.000 ppm Natrium Diklofenak dengan pelarut metanol. Pembuatan larutan induk dilakukan dengan melarutkan 50 mg Natrium diklofenak dalam 5 mL metanol. Kemudian dilakukan pengenceran dari UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

38

larutan induk sehingga didapatkan seri konsentrasi 1.000, 100, dan 10 ppm. Selanjutnya dilakukan pengenceran dari larutan induk, yaitu: 

1.000 ppm: Sebanyak 500 μL dari larutan induk ditambahkan dengan 4.500 μL metanol.



100 ppm: Sebanyak 50 μL dari larutan induk ditambahkan dengan 4.950 μL metanol.




3. Penyiapan variat konsentrasi EPMS, APMS, dan senyawa hasil modifikasi (sampel) Pembuatan larutan induk sebesar 10.000 ppm EPMS, APMS, dan senyawa hasil modifikasi dengan pelarut metanol. Pembuatan larutan induk dilakukan dengan melarutkan 50 mg EPMS, APMS, dan senyawa hasil modifikasi dalam 5 mL metanol. Kemudian dilakukan pengenceran dari larutan induk sehingga didapatkan seri konsentrasi 1.000, 100, dan 10 ppm. Selanjutnya dilakukan pengenceran dari larutan induk, yaitu: 

1.000 ppm: Sebanyak 500 μL dari larutan induk ditambahkan dengan 4.500 μL metanol.







4. Pembuatan BSA 0,2% (w/v) Sebanyak 0,5 g BSA dilarutkan dalam Tris Buffer Saline (TBS) 250 mL pH 6,3 (Williams et al., 2008).


39

b.

Pengujian Aktivitas Senyawa Hasil Modifikasi Terhadap Denaturasi BSA 1. Pembuatan Larutan Uji Sebanyak 5 mL larutan uji terdiri dari 50 μL larutan sampel yang kemudian ditambah dengan 4.950 μL BSA. Larutan uji dibuat berbagai macam konsentrasi, yaitu: 

100 ppm: Sebanyak 50 μL dari larutan sampel 10.000 ppm ditambahkan dengan 4.950 μL larutan BSA.



10 ppm: Sebanyak 50 μL dari larutan sampel 1.000 ppm ditambahkan dengan 4.950 μL larutan BSA.



1 ppm: Sebanyak 50 μL dari larutan sampel 100 ppm ditambahkan dengan 4.950 μL larutan BSA.



0,1 ppm: Sebanyak 50 μL dari larutan sampel 10 ppm ditambahkan dengan 4.950 μL larutan BSA.

2. Pembuatan Larutan Kontrol Negatif Sebanyak 5 mL larutan kontrol negatif terdiri dari 50 μL metanol pro analisis yang kemudian ditambah dengan 4.950 μL BSA. 3. Pembuatan Larutan Kontrol Positif Sebanyak 5 mL larutan kontrol positif terdiri dari 50 μL larutan Natrium diklofenak yang kemudian ditambah dengan 4.950 μL BSA. Larutan kontrol positif dibuat berbagai macam konsentrasi, yaitu: 

100 ppm: Sebanyak 50 μL dari larutan kontrol positif 10.000 ppm ditambahkan dengan 4.950 μL larutan BSA.



10 ppm: Sebanyak 50 μL dari larutan kontrol positif 1.000 ppm ditambahkan dengan 4.950 μL larutan BSA.



1 ppm: Sebanyak 50 μL dari larutan kontrol positif 100 ppm ditambahkan dengan 4.950 μL larutan BSA. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

40



0,1 ppm: Sebanyak 50 μL dari larutan kontrol positif 10 ppm ditambahkan dengan 4.950 μL larutan BSA. Masing-masing

larutan

dihomogenkan

dengan

menggunakan vortex kemudian diinkubasi selama 30 menit di suhu ruang (27ºC). Setelah itu dipanaskan selama 5 menit pada suhu 72 ºC, lalu didiamkan pada suhu ruang selama 25 menit dan diukur turbiditasnya dengan spektrofotometer UV-Vis (HITACHI) pada gelombang 660 nm. Presentase inhibisi dari denaturasi atau presipitasi BSA dikalkulasikan dengan rumus berikut: % inhibisi =

x 100 %

Pengujian aktivitas Natrium diklofenak, EPMS, APMS, dan senyawa hasil modifikasi terhadap denaturasi BSA dilakukan secara triplo dan dilakukan penghitungan standar deviasi terhadap tiap konsentrasi yang digunakan.


BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN

Pada penelitian ini dilakukan modifikasi senyawa etil p-metoksisinamat (EPMS) melalui reaksi nitrasi dan esterifikasi. Sebelum proses modifikasi, senyawa etil p-metoksisinamat harus dihidrolisis terlebih dahulu menjadi asam pmetoksisinamat. Tujuan modifikasi tersebut adalah untuk melihat adanya pengaruh penambahan gugus nitro dan rantai karbon pada bagian ester dari EPMS terhadap aktivitas antiinflamasinya. Metode pengujian aktivitas antiinflamasi dengan menggunakan Bovine Serum Albumin telah dipilih untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi senyawa hasil modifikasi dengan prinsip inhibisi denaturasi protein.

4.1

Modifikasi Struktur Etil p-metoksisinamat Modifikasi struktur etil p-metoksisinamat belum banyak dilakukan oleh peneliti terdahulu. Pada penelitian ini, EPMS pertama-tama diubah terlebih dahulu menjadi asam p-metoksisinamat. Hal ini dilakukan karena pada uji pendahuluan menunjukkan bahwa apabila reaksi nitrasi EPMS dilakukan secara langsung, maka akan menghasilkan beberapa senyawa yang memiliki kepolaran yang sama sehingga akan menyulitkan proses pemisahan senyawa yang diinginkan (Indriyani, 2015). Selain itu, proses nitrasi langsung terhadap EPMS dapat menyebabkan terjadinya degradasi sinamat (Mufidah, 2014). APMS sangat berbeda dengan EPMS ditinjau dari aktivitas antiinflamasinya karena APMS sama sekali tidak aktif sebagai agen antiinflamasi dan cenderung menginduksi terjadinya proses inflamasi (Mufidah, 2014), sedangkan studi aktivitas antiinflamasi EPMS secara in vitro menunjukkan bahwa etil p-metoksisinamat mampu menghambat aktivitas COX-1 dan COX-2 secara non-selektif, dengan masing-masing nilai IC50 1,12 μM dan 0,83 μM (Umar et al., 2012). Tahap awal penelitian ini adalah mengubah EPMS menjadi APMS melalui proses hidrolisis. Kemudian dilanjutkan dengan melakukan reaksi nitrasi terhadap APMS dengan menggunakan HNO3 sebagai nitrating agent. 41


42

Setelah itu dilakukan reaksi esterifikasi dengan menggunakan 1-butanol agar mensubstitusi gugus karboksilat menjadi gugus ester yang memiliki empat rantai karbon. Pemilihan reaksi tersebut didasarkan pada teori bahwa penambahan gugus NO2 pada cincin benzen dan rantai karbon pada bagian ester menunjukkan

efek

induksi

negatif

yang

dapat

mempengaruhi

keelektronegatifan suatu senyawa, dengan demikian akan memberikan perubahan sifat kimia fisika senyawa dan mempengaruhi aktivitas biologisnya (Siswandono, 2008). Sehingga senyawa hasil modifikasi yang didapatkan akan mempunyai aktivitas antiinflamasi yang berbeda dengan senyawa induknya. Senyawa tersebut dapat memiliki aktivitas antiinflamasi yang lebih besar atau lebih kecil dibandingkan dengan senyawa EPMS, ataupun senyawa APMS yang digunakan sebagai starting material. Menurut penelitian yang telah dilakukan oleh Rakesh et al. (2015) menunjukkan bahwa turunan senyawa modifikasi quinazolinone yang memiliki gugus Cl dan NO2 mampu menghasilkan agen antiinflamasi yang lebih baik dari aspirin. Penelitian lain yang telah dilakukan oleh Halen et al. (2009) menunjukkan bahwa gugus fungsi NO dalam struktur senyawa antiinflamasi telah diketahui berperan dalam mempertahankan aliran darah mukosa lambung dan mencegah kepatuhan leukosit pada endotel vaskular sirkulasi splanknikus (salah satu peritiwa paling awal setelah pemberian AINS) sehingga dapat mengurangi efek merugikan dari COX-1 dan cedera mukosa tidak terjadi. Sedangkan penambahan gugus karbon melalui reaksi esterifikasi mampu meningkatkan sifat lipofilisitas senyawa (Siswandono, 2008).

4.1.1. Reaksi Hidrolisis Etil p-metoksisinamat Reaksi hidrolisis EPMS merupakan tahap awal pada rangkaian proses modifikasi untuk menghasilkan APMS yang berperan sebagai starting material. Hidrolisis terhadap EPMS telah dilakukan sebelumnya oleh Mufidah (2014) dengan mereaksikan etil pUIN Syarif Hidayatullah Jakarta

43

metoksisinamat dengan NaOH sebagai katalis basa dan etanol p.a sebagai pelarut sehingga menghasilkan senyawa asam karboksilat. Mekanisme reaksi hidrolisis diinisiasi oleh protonasi pada karbonil oksigen. Larson dan Weber (1994) menyebutkan bahwa protonasi dapat menyebabkan keadaan terpolarisasi pada gugus karbonil sehingga melepaskan proton dari karbon menyebabkan kondisi yang bersifat lebih elektrofilik dan lebih mudah menerima nukleofilik OH (Indriyani, 2015).

Gambar 4.1 Mekanisme Reaksi Hidrolisis EPMS (Aulia, 2015)

Pada

reaksi

ini,

proses

hidrolisis

dilakukan

dengan

menggunakan metode penelitian Mufidah (2014) yang telah dimodifikasi. NaOH sebanyak 1,5 gram (0,0375 mol) dilarutkan dengan 100 mL etanol pro analisys hingga larut sempurna dengan menggunakan bantuan magnetic stirrer di atas hot plate, kemudian ditambahkan EPMS sebanyak 5 gram (0,024 mol). Campuran tersebut selanjutnya dipanaskan pada suhu 60oC selama 5 jam sampai terbentuk koloid berwarna putih. Hasil reaksi dimonitor setiap selang waktu 15 menit sampai terbentuk spot APMS dan tidak ada lagi spot EPMS yang tersisa dengan menggunakan kromatografi lapis tipis seperti yang terlihat pada gambar berikut.


44

4 Heksan : 1 Etil asetat

1

2

Gambar 4.2 Pola Spot KLT Hasil Hidrolis Keterangan: 1) APMS, 2) EPMS

Tahapan hidrolisis yang dimodifikasi dari metode yang dilakukan oleh Mufidah (2014) adalah adanya proses pemanasan. Proses pemanasan ini dilakukan dengan tujuan untuk mempercepat proses reaksi hidrolisis sehingga produk yang diharapkan akan terbentuk dalam waktu yang lebih singkat. Berbeda dengan Mufidah (2014) yang melakukan proses hidrolisis EPMS tanpa proses pemanasan berlangsung selama 32 jam, proses reaksi yang telah dimodifikasi hanya membutuhkan waktu 5 jam. Hal ini terjadi karena adanya pemanasan akan meningkatkan energi kinetik sehingga reaksi berlangsung lebih cepat. Ketika reaksi ini selesai, kemudian dilakukan proses pencucian dengan menggunakan 200 mL aquades hingga diperoleh larutan yang bening atau kekuningan dan tidak keruh (lihat lampiran). Pada fase ini, APMS yang telah terbentuk berada dalam kondisi terlarut, oleh karena itu kemudian ditambahkan HCl 15 % untuk mengikat ion Na+ sehingga terbentuk endapan putih APMS yang dapat disaring. Penambahan HCl terus dilakukan hingga tidak ada lagi endapan putih yang terbentuk. Residu endapan putih yang terbentuk kemudian disaring dengan menggunakan kertas saring dan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

45

dikeringanginkan sehingga didapatkan serbuk berwarna putih (Gambar 4.9). Persen rendemen reaksi hidrolisis yaitu: % rendemen =

X 100 % = 85,744 %

4.1.2. Reaksi Hasil Nitrasi Asam p-metoksisinamat Reaksi nitrasi yang dilakukan pada penelitian ini bertujuan untuk menambahkan gugus NO2 pada cincin benzen APMS. Reaksi ini terjadi dengan mereaksikan APMS sebanyak 2,5 gram (0,014 mol) dengan 10 mL (0,22 mol) asam nitrat (HNO3) 65% dengan metode “Cold Microwave”. Metode reaksi nitrasi ini merujuk pada penelitian yang telah dilakukan oleh Bose (2006). Pada metode tersebut, kondisi dan pereaksi yang digunakan harus berada dalam kondisi dingin (dalam suhu -15oC). Oleh karena itu, asam nitrat yang digunakan harus didinginkan terlebih dahulu di dalam refrigerator kemudian dicampurkan ke dalam erlenmeyer berisi APMS yang berada dalam beaker glass berisi es yang membungkus erlenmeyer tersebut membentuk ice jacket. Segera setelah proses pencampuran dilakukan, kemudian dimasukkan

ke dalam

microwave 450 watt selama 2

menit.

Gambar 4.3 Reaksi Nitrasi APMS

Setelah reaksi selesai berlangsung, kemudian ditambahkan 100 mL aquades untuk melarutkan sisa asam yang tidak diperlukan. Senyawa hasil nitrasi yang terbentuk tidak akan larut dengan aquades dan akan mengendap sehingga dapat disaring untuk memisahkannya. Setelah disaring menggunakan kertas saring, kemudian residu yang UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

46

diperoleh dikeringanginkan sehingga didapatkan serbuk berwarna kuning seperti pada gambar berikut.

Gambar 4.4 Residu Hasil Penyaringan pada Reaksi Nitrasi APMS

Didapatkan serbuk kuning yang telah kering, yang mengandung senyawa hasil reaksi nitrasi asam p-metoksisinamat, sebanyak 2,066 gram. Pada reaksi ini terjadi substitusi atom H pada benzen dari APMS oleh gugus nitro dari nitrating agent yang digunakan yaitu HNO3, dengan bantuan iradiasi gelombang mikro. Nitrasi dari benzen awalnya dipengaruhi oleh pembentukan elektrofilik kuat yaitu ion nitronium, yang mana ini terjadi karena interaksi antara asam kuat yaitu asam nitrat. Adanya bantuan gelombang mikro dapat memprotonasi asam nitrat pada gugus OH sehingga molekul dari air dapat berpisah. Selanjutnya benzen menyerang muatan positif atom nitrogen dari elektrofil, yang mana ikatan N=O lepas pada waktu yang sama. Hal ini diikuti dengan lepasnya proton untuk menstabilkan gugus aromatik (Lynnb, 2012).

4.1.3. Reaksi Esterifikasi Senyawa Hasil Nitrasi Reaksi esterifikasi asam karboksilat adalah reaksi pembentukan ester dengan berbahan dasar asam karboksilat. Ester asam karboksilat ini merupakan suatu senyawa yang mengandung gugus –COOR dengan R yang berbentuk alkil maupun aril (Fessesnden & Fessenden, 2006). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

47

Gambar 4.5 Reaksi Esterifikasi Senyawa Hasil Nitrasi

Pada penelitian ini, reaksi esterifikasi dilakukan dengan melarutkan 500 mg senyawa hasil nitrasi dengan 1-butanol sebanyak 50 mL sambil diaduk menggunakan magnetic stirrer dalam erlenmeyer dan dipanaskan pada suhu 90oC hingga larut sempurna, kemudian ditambahkan dengan katalis asam sulfat pekat 0,2 mL (4 mmol). Erlenmeyer tempat mencampurkan bahan-bahan tersebut dimasukkan ke dalam gelas kimia berisi air sehingga membentuk water jacket (lihat Lampiran 4). Setelah itu diiradiasi menggunakan microwave 300 watt selama 30 menit. Kemudian dilakukan partisi dengan etil asetat dan aquades untuk memisahkan hasil senyawa yang diharapkan (Indriyani, 2015). Senyawa tersebut berada pada lapisan atas, yakni lapisan etil asetat. Pengadukan, pemanasan, dan penggunaan katalis pada reaksi esterifikasi adalah hal yang penting. Pengadukan berfungsi untuk meningkatkan frekuensi tumbukan antar partikel zat pereaksi dengan yang bereaksi, sehingga reaksi esterifikasi terjadi secara sempurna. Lain halnya dengan pemanasan yang berungsi untuk meningkatkan hasil konversi dengan meningkatkan harga k (konstanta laju reaksi). Sedangkan

penggunaan

katalis

asam

sulfat

berfungsi

untuk

menurunkan energi aktivasi pada reaksi tersebut sehingga reaksi dapat berjalan lebih cepat. Adapun pemilihan penggunaan asam sulfat (H2SO4) sebagai katalisator dalam reaksi esterifikasi dikarenakan beberapa faktor, diantaranya adalah (Sukardjo, 1997):


48

1. Selain bersifat asam, juga merupakan agen pengoksidasi yang kuat 2. Dapat larut dalam air pada semua kepekatan 3. Konsentrasi ion H+ berpengaruh terhadap kecepatan reaksi 4. Dapat menghilangkan bagian terbesar uap air dan gas yang basah seperti udara lembab karena aktivitasnya terhadap air. Hasil dari reaksi nitrasi APMS tidaklah tunggal yang hanya terdiri dari satu jenis senyawa saja, tetapi terdiri dari beberapa senyawa. Oleh karena itu, hasil reaksi esterifikasi pun akan menghasilkan senyawa sampingan. Oleh karena itu, perlu dilakukan pemisahan lanjutan dengan menggunakan kromatografi kolom dengan pelarut n-heksan 100% kemudian dilanjutkan dengan perbandingan pelarut 9:1 (n-heksan : etil asetat), sehingga didapatkan senyawa murni. Kemudian dilakukan identifikasi dengan KLT terhadap senyawa hasil pemurnian menggunakan kromatografi kolom. 4 Heksan : 1 Etil asetat

B A

Gambar 4.6 Pola Spot KLT Setelah Reaksi Esterifikasi Ket: A) Senyawa hasil nitrasi APMS, B) Hasil esterifikasi senyawa A

Hasil senyawa tersesterifikasi setelah pemurnian, didapatkan persen rendemen sebesar: % rendemen =

X 100 % = 10,7241 %


49


B Gambar 4.7 KLT Senyawa Hasil Esterifikasi Setelah Pemurnian

4.2. Identifikasi Senyawa Hasil Modifikasi Identifikasi senyawa hasil modifikasi yang paling mudah adalah membandingkan nilai Rf seluruh senyawa yang di KLT menggunakan eluen heksan : etil asetat dengan perbandingan 4:1. Nilai Rf yang didapat adalah sebagai berikut : Etil p-metoksisinamat

: 0,5875


: 0,0875

Senyawa hasil nitrasi

: 0,1500

Senyawa nitrasi yang telah diesterifikasi

: 0,3250


1

2

3

4

Gambar 4.8 Identifikasi Senyawa Modifikasi dengan KLT Ket: 1) APMS, 2) EPMS, 3) Hasil nitrasi APMS, 4) Hasil Esterifikasi


50

Berdasarkan nilai Rf dapat diketahui tingkat kepolaran dari senyawa modifikasi dibandingkan dengan senyawa mula sebelum modifikasi. Nilai Rf etil p-metoksisinamat memiliki nilai Rf yang paling besar sehingga dapat dikatakan bahwa senyawa EPMS memiliki sifat polaritas paling rendah. Senyawa hasil hidrolisis, asam p-metoksisinamat, memiliki nilai Rf paling kecil, sehingga dengan demikian senyawa asam p-metoksisinamat memiliki sifat polaritas yang lebih tinggi dibandingkan dengan senyawa etil pmetoksisinamat. Hal ini karena APMS tidak memiliki gugus ester, tetapi memiliki gugus karboksilat yang jelas bersifat polar. Sedangkan senyawa hasil nitrasi memiliki nilai Rf yang tidak lebih tinggi dari EPMS namun tidak juga lebih rendah dibandingkan APMS. Hal ini menunjukkan bahwa sifat senyawa tersebut tidak lebih polar dari APMS, tetapi lebih polar dibandingkan dengan EPMS. Pada senyawa nitrasi yang telah teresterifikasi menunjukkan polaritas yang lebih rendah dibandingkan dengan APMS dan lebih tinggi dibandingkan dengan senyawa hasil nitrasi.

4.2.1 Senyawa Hasil Hidrolisis Etil p-metoksisinamat Senyawa hasil hidrolisis etil p-metoksisinamat yang dilakukan oleh Mufidah (2014) memiliki karakteristik seperti berikut : 

Warna

: Putih



Bau

: Tidak berbau



Bentuk

: Serbuk



Titik leleh

:172-176oC



Nilai entalpi (H) : 89,3 J/g

Gambar 4.9 Senyawa Hasil Hidrolisis EPMS


51

Senyawa APMS, hasil reaksi hidrolisis EPMS yang telah dilakukan oleh peneliti, memiliki karakteristik organoleptis yang sama seperti pada penelitian Mufidah (2014). Pengukuran titik leleh senyawa tersebut menggunakan melting point “smp 10” didapatkan rentang titik pada senyawa hasil hidrolisis yaitu 172-174oC. Analisis lebih lanjut terhadap senyawa hasil hidrolisis dilakukan dengan menggunakan GCMS kemudian dicocokan dengan hasil dari Mufidah (2014) baik itu nilai Rf, titik leleh, dan GCMS senyawa hasil hidrolisis (APMS). Dari interpretasi hasil GCMS pada senyawa hasil hidrolisis muncul pada waktu retensi 9,637 yang memiliki berat molekul 178,0 dengan fragmentasi massa pada 161; 133; 118; 89; dan 63. Adapun fragmentasi yang terjadi pada senyawa hasil hidrolisis adalah sebagai berikut.

Gambar 4.10 Pola Fragmentasi GCMS Asam p-metoksisinamat


52

Berdasarkan perbandingan identifikasi organoleptis, KLT, titik leleh, dan GCMS terhadap senyawa hasil hidrolisis yang telah dilakukan oleh peneliti dengan senyawa hasil hidrolisis oleh Mufidah (2014), menunjukkan bahwa reaksi hidrolisis telah berhasil dilakukan dimana gugus ester pada etil p-metoksisinamat telah berubah menjadi gugus karboksilat.

Gambar 4.11 Struktur Asam p-metoksisinamat (Mufidah, 2014)

4.2.2 Hasil Nitrasi APMS Tahap awal pemeriksaan senyawa hasil nitrasi dilakukan secara organoleptis. Senyawa hasil nitrasi asam p-metoksisinamat memiliki karakteristik seperti berikut : 

Warna

: Kuning



Bau

: Tidak berbau



Bentuk

: Serbuk

Gambar 4.12 Hasil Reaksi Nitrasi yang Mengandung Senyawa A

Hasil reaksi nitrasi terdiri dari beberapa senyawa. Salah satu diantaranya adalah senyawa A yang merupakan senyawa APMS yang ternitrasi.

Identifikasi

senyawa

A

dilakukan

menggunakan

kromatografi lapis tipis dan membandingkan pola spot yang terbentuk terhadap pola spot senyawa starting material, APMS. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

53


A

1

2

Gambar 4.13 Pola KLT Hasil Reaksi Nitrasi APMS Keterangan: 1) Hasil Nitrasi APMS, 2) APMS, A) Senyawa A

4.2.3 Senyawa Hasil Esterifikasi (Senyawa B) Senyawa B adalah senyawa yang dihasilkan dari reaksi esterifikasi terhadap senyawa A dengan menggunakan 1-butanol. Identifikasi secara organoleptis telah dilakukan terhadap senyawa B yang telah dimurnikan melalui pemisahan dengan menggunakan kromatografi kolom. Senyawa tersebut memiliki karakteristik sebagai berikut: 

Warna

: Kuning



Bau

: Tidak berbau



Bentuk

: Cairan seperti minyak

Gambar 4.14 Senyawa B


54

Identifikasi lebih lanjut telah dilakukan dengan menggunakan FTIR. Penafsiran spektrum IR senyawa B ditunjukkan dari hasil bilangan gelombang absorbansi gugus fungsi yang spesifik pada Tabel 4.1. Ditemukan pita serapan pada bilangan gelombang v 3090 cm-1 adalah serapan spesifik vibrasi ulur ikatan antar atom C-H aromatik. Keberadaan aromatik ini juga ditunjukkan dengan adanya ikatan antar atom C=C pada bilangan gelombang v 1642,46 cm-1. Aromatik disubstitusi para dapat ditunjukkan dengan munculnya serapan pada bilangan gelombang v 825,57 cm-1. Pada bilangan gelombang 2960,86 cm-1 menunjukkan adanya ikatan atom antar C-H alifatik. C-O yang berikatan dengan gugus aromatik ditunjukkan dengan bilangan gelombang 1355,05 cm-1. Pita serapan pada bilangan gelombang v 1711,90 cm-1 merupakan serapan spesifik vibrasi ulur dari gugus C=O karbonil, dan serapan vibrasi C-O pada pita serapan panjang gelombang v 1355,05 cm-1, serapan dari kedua gugus tadi menunjukkan terdapatnya ester. Diperkuat dengan munculnya pita serapan pada panjang gelombang v 2300-2000 cm-1. Lalu terdapatnya gugus nitro pada posisi aromatik dapat ditunjukkan denga adanya pita serapan pada panjang gelombang v 1533,47 cm-1.

80 %T 70

2568.33

60

50

20 4000 3500 Nitro butil PMS

1086.93

1016.53

1178.56

1355.05

1275.97

1448.60

1533.47 1502.61

1711.90

2960.86

30

1642.46

40

Gambar 4.9. Identifikasi Senyawa B dengan FTIR 3000

2500

2000

1750

1500

1250

1000

750

500 1/cm

Gambar 4.15 Spektrum IR Senyawa B


55

Tabel 4.1 Spektrum IR Senyawa B

C-H aril

Daerah Absorbansi Referensi (v, cm-1) (Indriyani, 2015 & Pavia, 2010) 3150 – 3050

Daerah Absorbansi Senyawa (v, cm-1) 3090

C-H alifatik

3000 – 2850

2960,86

Ester (COOR)

2300 – 2000

2300 – 2000

C=O

1750 – 1730

1711,90

C=C aril

1600 – 1680

1642,46

Nitro aromatik

1570 – 1300

1533,47

C-O

1300 – 1000

1355,05

C-O aril

1261,50 – 1220,03

1275,97

Aromatik posisi para

825,57

825,7

Ikatan

Hal ini menunjukkan bahwa reaksi esterifikasi dengan menggunakan 1-butanol telah berhasil dilakukan ditunjukkan dengan munculnya gugus nitro aromatik pada spektrum IR. Identifikasi selanjutnya dilakukan dengan menggunakan GCMS. Interpretasi GCMS menunjukkan bahwa senyawa B muncul pada waktu retensi 12,888 dan memiliki berat molekul 279 dengan fragmentasi massa pada 223, 206, 160, 131, 102, dan 76 (lihat lampiran). Adapun fragmentasi senyawa tersebut adalah sebagai berikut:

Gambar 4.16 Fragmentasi GCMS Senyawa B


56

Gambar 4.17 Pola Kromatogram GCMS Senyawa B

Data analisis spektrum IR dan GCMS dikonfirmasi kembali dengan menggunakan analisis yang terakhir yaitu H-NMR dan CNMR. Interpretasi analisis NMR berupa nilai pergeseran kimia (δ) dalam satuan ppm (Pavia et al., 2008).

Gambar 4. 18 Spektrum H-NMR Senyawa B

Analisis data NMR senyawa B dibandingkan dengan data NMR senyawa esterifikasi yang telah dilakukan oleh Indriyani (2015), yang melakukan esterifikasi dengan menggunakan etanol terhadap senyawa


57

hasil nitrasi APMS (Senyawa A) dengan metode reaksi yang sama sehingga menghasilkan senyawa etil 4-metoksi 6-nitrosinamat. Data perbandingan keduanya ditunjukkan pada tabel dengan panduan gambar berikut.

Gambar 4.19 Struktur Senyawa B dan Etil 4-metoksi 6-nitrosinamat Tabel 4.2 Data Pergeseran Kimia (δ) Spektrum 1H-NMR Senyawa Hasil Esterifikasi (CDCL3, 500MHz)

Pergeseran Kimia (δ, ppm) No

Senyawa Hasil Esterifikasi 13

C-NMR

1

H-NMR

Etil 4-metoksi 6-nitrosinamat

Posisi

(Indriyani, 2015) 13

C-NMR

1

H-NMR

17

13,9028

0,95 (t, 3H, J = 7,1)

-

-

-

16

19,3396

1,42 (quintet, 2H, J = 7,1)

-

-

-

15

30,8810

1,68 (sextet, 2H, J = 7,1)

15

14,453

1,32 (t, 3H, J = 7,15)

11

56,9206

3,99 (s, 3H)

11

56,928

3,98 (s, 3H)

14

64,8184

4,20 (q, 2H, J = 7,1)

14

60,886

4,25 (q, 2H, J = 7,15)

6

114,0075

8,01 (d, 1H, J = 9,1)

6

114,053

7,99 (d, 1H, J = 1,95)

8

119,1296

7,69 (d,d, 1H, J=9,1)

8

114,053

7,67 (d,d, 1H, J=9,1;1,95)

2

125,1101

6,40 (d, 1H, J = 16,3)

2

119,146

6,37 (d, 1H, J = 15,55)

9

127,3612

7,11 (d, 1H, J=9,1)

9

125,089

7,11 (d, 1H, J=9,1)

4

133,6564

-

4

127,387

-

5

139,9517

-

5

133,616

-

3

141,6400

7,60 (d, 1H, J = 16,3)

3

141,666

7,59 (d, 1H, J = 15,6)

7

154,1352

-

7

154,142

-

1

166,7449

-

1

166,618

-


58

Interpretasi NMR senyawa B dibandingkan dengan hasil interpretasi NMR pada senyawa etil 4-metoksi 6-nitrosinamat pada penelitian Putri (2015). Spektrum 1H-NMR memberikan sinyal pada pergeseran kimia 0,95 ppm (3H) berbentuk triplet, 1,42 ppm (2H) berbentuk quintet, 1,68 ppm (2H) berbentuk sextet, dan pada 4,20 ppm (2H) berbentuk quartet. Pada sinyal ini, terbentuk lebih downfield hal ini dikarenaan adanya ikatan dengan oksigen. Spektrum 1

H-NMR memberikan sinyal pada pergeseran kimia 3,99 ppm (3H)

dan muncul dengan bentuk singlet. Sinyal ini lebih ke arah downfield karena berikatan dengan oksigen (-OCH3, metoksi). Pergeseran kimia 6,40 ppm (1H) berbentuk doublet memiliki hubungan dengan puncak pada pergeseran kimia 7,60 ppm (1H) yang berbentuk doublet, dengan rentang nilai konstanta kopling J = 16,3 Hz. Sinyal pergeseran kimia pada 8,01 ppm (1H) dan 7,60 ppm (1H) merupakan proton-proton dari benzen yang tersubstitusi. Pola sinyal pada pergeseran kimia 7,69 ppm menunjukkan bahwa 1 proton terkopling secara ortho dengan 1 proton pada sinyal 7,11 ppm dengan nilai konstanta kopling yaitu 9,1 Hz dan terkopling secara metha dengan 1 proton pada sinyal 8,01 ppm dengan nilai konstanta kopling yaitu 9,1 Hz. Dari data interpretasi IR, GCMS, 1H-NMR, dan

13

C-NMR,

senyawa hasil esterifikasi hasil nitrasi asam p-metoksisinamat adalah Butil 4-metoksi 6-nitrosinamat.

4.3 Pengujian Aktivitas Antiinflamasi dan Hubungan Struktur Aktivitas Senyawa Hasil Modifikasi Uji aktivitas antiinflamasi hasil modifikasi senyawa dilakukan secara in vitro dengan menggunakan metode inhibisi denaturasi protein Bovine Serum Albumin (BSA). Pengujian ini dipilih karena mudah, hanya menggunakan sampel dalam jumlah sedikit, memiliki waktu analisis yang cepat dan merupakan uji pendahuluan yang dilakukan sebagai skrining awal aktivitas antiinflamasi (Mufidah, 2014). Selain itu, uji in vitro lebih UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

59

menguntungkan dari uji in vivo karena menurut Chatterjee et al. (2012) banyak sekali masalah yang terjadi berkaitan dengan penggunaan hewan percobaan pada peneitian dalam bidang farmakologi, yaitu seperti masalah kode etik dan kurang rasional penggunaan metode tersebut apabila terdapat metode lain yang dapat digunakan (Mufidah, 2014). Pada penelitian ini, uji aktivitas antiinflamasi in vitro dengan prinsip penghambatan denaturasi protein BSA (Williams et al., 2008) dipilih untuk melakukan skrining awal aktivitas antiinflamasi pada senyawa hasil modifikasi. Penghambatan denaturasi protein, yang merupakan mekanisme utama AINS sebagaimana dinyatakan oleh Mizhushima (1964) sebelum ditemukannya efek inhibisi pada siklooksigenase oleh Vane (1971), mempunyai peran penting sebagai antirematik oleh AINS (Umapathy et al., 2010). Tabel 4.3 Hasil Uji Aktivitas Antiinflamasi

No

1

2

3

4

Sampel

Natrium Diklofenak



Butil 4-metoksi 6-nitrosinamat

Konsentrasi (ppm)

% Inhibisi

0,1

1,59

1

2,99

10

24,93

100

97,43

0,1

32,56

1

40,13

10

42,73

100

54,01

0,1

-0,41

1

-0,31

10

-0,28

100

0,43

0,1

32,065

1

28,960

10

25,260

100

-17,28


60

120 100 80 60

NAD EPMS

40

APMS B4M6N

20 0 -20

0

20

40

60

80

100

120

-20 -40

Gambar 4.15 Grafik Persen Inhibisi Denaturasi Protein BSA Keterangan: NAD: Natrium diklofenak, EPMS: Etil p-metoksisinamat, APMS: Asam pmetoksisinamat, B4M6N: Butil 4-metoksi 6-nitrosinamat

Suatu senyawa dianggap memiliki aktivitas sebagai antiinflamasi jika pada uji inhibisi denaturasi BSA dengan rentang konsentrasi uji 50-0,035 ppm dapat memberikan persen inhibisi > 20% (William et al., 2008). Natrium diklofenak, sebagai kontrol positif, aktif dalam memberikan aktivitas sebagai antiinflamasi dimulai dari konsentrasi 10 ppm dengan persen inhibisi 24,930 % dan pada konsentrasi 100 ppm dapat menghambat denaturasi protein sebesar 97,430 % (Indriyani, 2015). Sedangkan pada konsentrasi 0,1-1 ppm, natrium diklofenak tidak aktif sebagai agen antiinflamasi. Berbeda dengan senyawa EPMS yang mampu menghambat denturasi protein dengan baik, meskipun pada konsentrasi 0,1; 1; dan 10 ppm dengan persen inhibisi sebesar 32, 56%; 40,13%; dan 42,74%. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa EPMS memiliki aktivitas antiinflamasi lebih baik dibandingkan dengan natrium diklofenak pada konsentrasi 0,1 – 10 ppm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa senyawa butil 4-metoksi 6nitrosinamat memiliki aktivitas antiinflamasi pada konsentrasi rendah (0,110 ppm) dan tidak memiliki aktivitas pada konsentrasi tinggi (100 ppm). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

61

Berbeda dengan EPMS yang aktif sebagai agen antiinflamasi pada konsentrasi 0,1-100 ppm. Selain itu, persen inhibisi denaturasi protein senyawa butil 4-metoksi 6-nitrosinamat tidak lebih besar dibandingkan dengan senyawa EPMS. Sedangkan senyawa APMS tidak memiliki aktivitas antiinflamasi sama sekali. Hal ini dikarenakan hasil pengujian antidenaturasi protein BSA terhadap senyawa APMS memiliki nilai persen inhibisi di bawah 20% untuk semua konsentrasi yang diuji (lihat Tabel 4.3). Dengan demikian, dapat dikatakan bahwa senyawa EPMS memiliki aktivitas antiinflamasi yang lebih baik dibandingkan dengan senyawa butil 4-metoksi 6-nitrosinamat dan APMS. Hal menarik yang dapat dibahas adalah adanya pengaruh gugus ester pada senyawa butil 4-metoksi 6-nitrosinamat dan EPMS terhadap aktivitas antiinflamasinya. Pada penelitian Mufidah (2014), modifikasi senyawa EPMS melalui reaksi transesterifikasi, yang menghasilkan senyawa metil pmetoksisinamat, dapat menghilangkan aktivitas antiinflamasinya. Selain itu, menghilangkan gugus ester dan menggantinya dengan gugus karboksilat juga dapat menghilangkan aktivitas antiinflamasi, seperti yang terjadi pada senyawa APMS. Sehingga dapat disimpulkan bahwa gugus ester pada turunan senyawa EPMS memiliki peran penting terhadap aktivitas antiinflamasi. SA (Serum Albumin) menunjukkan aktivitas seperti enzim esterase yang dapat digunakan untuk mengaktivasi prodrug seperti omesartan medoxomil menjadi obat aktif. Dengan kata lain, serum albumin mampu berikatan dengan baik dengan senyawa yang memiliki gugus ester dikarenakan sifatnya yang mirip seperti enzim esterase. Aktivitas SA terhadap gugus ester sangat dipengaruhi oleh kekuatan ikatan antara suatu molekul senyawa dengan asam amino spesifik yang terdapat pada SA (Varshney et al, ; Sakurai et al, 2004). Hal ini semakin menguatkan pernyataan bahwa gugus ester pada senyawa butil 4-metoksi 6-nitrosinamat dan etil p-metoksisinamat berperan penting terhadap aktivitas antidenaturasi


62

protein. Berbeda dengan asam p-metoksisinamat yang tidak memiliki aktivitas antidenaturasi dan tidak juga memiliki gugus ester. Menurut Halen et al. (2009), modifikasi struktur AINS dengan penambahan gugus donor NO memiliki tujuan untuk mengurangi efek samping dari AINS dengan mempertahankan aliran darah mukosa lambung dan mencegah kepatuhan leukosit pada endotel vaskular sirkulasi splanknikus (salah satu peristiwa paling awal setelah pemberian AINS) sehingga dapat melawan efek merugikan dari COX-1 dan cedera mukosa tidak terjadi. Meskipun menurut Indriyani (2015) gugus NO2 tidak berpengaruh signifikan terhadap aktivitas antiinflamasi senyawa modifikasi, namun ada kemungkinan penambahan gugus nitro pada senyawa hasil modifikasi EPMS mampu menurunkan efek sampingnya. Maka dari itu perlu dilakukan uji in vivo pada penelitian selanjutnya untuk mengetahui kemungkinan penurunan efek samping pada senyawa hasil modifikasi.


BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN

5.1.

Kesimpulan a. Senyawa etil p-metoksisinamat telah berhasil dimodifikasi melalui proses nitrasi-esterifikasi dengan 1-butanol menjadi butil 4-metoksi 6-nitrosinamat dengan rendemen sebesar 10,7241%. b. Senyawa butil 4-metoksi 6-nitrosinamat aktif sebagai agen antiinflamasi pada konsentrasi 0,1-10 ppm, namun senyawa butil 4metoksi 6-nitrosinamat tidak memiliki aktivitas antiinflamasi yang lebih tinggi dibandingkan dengan senyawa etil p-metoksisinamat. c. Hubungan struktur aktivitas antiinflamasi terhadap senyawa hasil modifikasi menunjukkan bahwa gugus ester pada turunan senyawa EPMS memiliki peran penting terhadap aktivitas antiinflamasi.

5.2.

Saran a. Perlu adanya penelitian lebih lanjut tentang pengujian aktivitas antiinflamasi senyawa butil 4-metoksi 6-nitrosinamat secara in vivo untuk melihat bagaimana efek penambahan gugus butil ester dan nitro terhadap efek samping senyawa antiinflamasi. b. Sebaiknya dilakukan identifikasi lebih lanjut dengan menggunakan HSQC dan HMBC untuk mengetahui letak gugus nitro yang lebih spesifik pada senyawa hasil modifikasi.

63


DAFTAR PUSTAKA

Armando, R. 2009. Memproduksi Minyak Atsiri Berkualitas. Jakarta: Penebar Swadaya. Hal. 51 Atta-ur-Rahman. 1986. Nuclear Magnetic Resonance. New York: SpringerVerlag. Aulia, Nova Sari. 2015. Modifikasi Struktur Etil p-metoksisinamat Melalui Proses Nitrasi dengan Metode Cold Microwave Serta Uji Aktivitas Sebagai Antiinflamasi. Program Studi Farmasi - Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Skripsi. Backer, C. A. R. C. B. Van den Briak. 1986. Flora of Java. Vol 2. Walters Noordhoff.N.V.Groningen.P. 33 Belinda, Putri. 2011. Studi Reaksi Esterifikasi Antara Asam Galat dan Gliserol dengan Menggunakan Gelombang Mikro. FMIPA Universitas Indonesia. Skripsi. Billenstein, S dan Baschke, D. 1984. Industrial Production of Fatty Amines and Their Derivates. J. Am. Oil Chem Soc., 61(2), 354. Bose, Ajay K; Subhendeu N. Ganguly; Maghar S. Manhas; Jeffrey Speck; William He. 2006. Cold Microwave Chemistry: Synthesis Using Pre-cooled Reagents. Tetrahedron Letters 47 3213-3215 available at www.sciencedirect.com BSA (Bovine Serum Albumine). Product Information by Sigma. www.sigmaaldrich.com. Diakses pada tanggal 18 Februari 2015. Brahmana, H. R. et al. 1998. Pemanfaatan Asam Lemak Bebas Minyak Kelapa Sawit dan Inti Sawit Dalam Pembuatan Nilon 9,9 dan Ester Sorbitol Asam Lemak. Laporan Riset dan Teknologi, Dewan Riset Nasional. Chandra, Sangita. 2012. Evaluation of In Vitro Anti-Inflammatory Activity of Coffee Against The Denaturation of Protein. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine S178-S180. Chatterjee, Priyanka; Sangita Chandra; Protapditya Dey; Sanjib Bhattacharya. 2012. Evaluation of Anti-Inflammatory Effects of Green Tean and Black Tea: A Comparative In Vitro Study. J. Adv. Pharm Technol Res Vol 3 (2) 136-138. Chem-team.. “Microwave Chemistry”. 2004. Diakses pada 5 Februari 2015. http://unc.edu/depts/mtcgroup/litmeetings/microwaves.pdf Departemen Kesehatan RI. 1979. Farmakope Indonesia Edisi III. Jakarta. Departemen Kesehatan RI. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Jakarta. 64


65

Ekowati, Juni, Bimo A. Tejo, Shigeru Sasaki, et al. 2012. Structure Modification of Ethyl p-Methoxycinnamate and Their Bioassay as Chemopreventive Against Mice’s Fibrosarcoma. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Science. Vol 4. Fessenden R.J. dan J. Fessenden. 1999. Kimia Organik. Edisi Ketiga. Jilid 2. 63 Jakarta: Erlangga. Gunawan, dkk. 2008. Farmakologi dan Terapi Edisi 5. Jakarta: Departemen Farmakologi dan Terapetutik Fakultas Kedokteran UI. 231. Halimatuddahliana. 2004. Pembuatan n-Butanol dari Berbagai Proses. Program Studi Teknik Kimia Fakultas Teknik. Universitas Sumatera Utara. Haryudin, Wawan dan Otih Rostiana. 2008. Karakteristik Morfologi Bunga Kencur (Kaempferia galanga L.). Balai Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik. Bul. Littro Vol XIX No.2. Indriyani, Nur Khayati Putri. 2015. Modifikasi Struktur Senyawa Hasil Nitrasi Asam p-metoksisinamat Melalui Proses Esterifikasi Serta Uji Aktivitas Sebagai Antiinflamasi. Program Studi Farmasi - Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Skripsi. Ju Ko, Hyun, Hae Jong Kim, Su Yeon Kim, et al. 2014. Hypopigmentary Effects of Ethyl p-Methoxycinnamate Isolated from Kaempferia galanga. Phytotherapy Research in Wiley Online Library. Kappe, C. 2003. Tehnology High-Throughput Screening, Businessbriefing: Future Drug Discover. Vol: 42-44. Katzung, Bertram G. 2006. Basic and Clinical Pharmacology, 10th Edition. McGRaw Hill Lange. Kementrian Riset dan Teknologi Republik Indonesia, 2009. Terobosan Kemandirian Industri Farmasi Nasional. Jakarta. Kertia, Nyoman. 2009. Aktivitas Anti-inflamasi Kurkuminoid Ekstrak Rimpang Kunyit. Program Doktor Ilmu Kedokteran dan Kesehatan. Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Khoirunni’mah, Zulfa.2012. Modifikasi Senyawa Metil Sinamat Melalui Proses Nitrasi Serta Uji Toksisitas BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) Terhadap Hasil Senyawa Modifikasi. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Skripsi. Larson, Richard A.; Eric J. Weber. 1994. Reaction Mechanisms In Environmental Organic Chemistry. United States of America: Lewis Publisher. Masyhud. 2010. Lokakarya Nasional Tanaman Obat Indonesia. Siaran Pers Nomor S.376/PIK-1/2010. Kementrian Lingkungan Hidup dan Kehutanan. http://www.dephut.go.id/index.php/news/details/7044. Diakses pada 23 Januari 2015.


66

Mufidah, Syarifatul. 2014. Modifikasi Struktur Senyawa Etil p-metoksisinamat yang Diisolasi dari Kencur (Kaempferia galanga Linn.) Melalui Transformasi Gugus Fungsi Serta Uji Aktivitas Sebagai Antiinflamasi. Program Studi Farmasi - Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Skripsi. Muhlisah, F. 1999. Temu-Temuan dan Empon-empon Budidaya dan Manfaatnya. Yogyakarta: Penerbit Kanisius. Neas, E.D. & M.J. Collins. 1988. Microwave Heating Theoritcal Concept and Equipment Design. Dalam: Kingston, H.M. & L.B. Jassie (eds). 1988. Introduction to Microwave Sample Preperation. America Chemistry Society, Washington: 7-32. Oyedapo, O.O; B.A. Akinpeu; K. F. Akinwunni; M.O Adeyinka; F.O Sipeolu. 2010. Red Blood Cell Membrane Stabilizing Potentials of Extract of Lantana camara and Its Fractions. International Journal of Plant Physiology and BioChemistry Vol.2(4) 46-51. Pavia, Donald L.; Gary M. Lampman; George S.Kriz; James R. Vyvyan. 2008. Introduction to Spectroscopy Fourth Edition. USA: Brooks/Cole Cengage Learning. Pavia, D.L., Lampman, G.M., dan George S. Kris. 2001. Introduction to Spectroscopy: A Guide for Students of Organic Chemistry (Thrid Edition). Washington: Thomson Learning. Pratiwi, Dini Novalia. 2011. Optimalisasi Reaksi Esterifikasi Asam Asetat dengan 1-Heksena, Sebagai Salah Satu Tahapan pada Proses Pembuatan Etanol. Program Studi Kimia Fakultas Sains dan Teknologi. Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Skripsi. Rakesh, K.P.; Manukumar, H.M.; Gowda, D. Channe. 2015. Schiff’s Bases of Quinazolinone Derivatives: Synthesis and SAR Studies of A Novel Series of Potential Anti-Inflammatory and Antioxidants.University of Mysore: India. Elsevier Journal. Roemantyo, G; Somaatmadja. 1996. Analisis Terhadap Keanekaragaman dan Konservasi Kencur Di Jawa. Warta Tumbuhan Obat Indonesai Vol.3 No.2. Roth, H.J. et al. 1994. Analisis Farmasi, cetakan kedua diterjemahkan oleh Sardjono Kisman dan Slamet Ibrahim. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Rukmana, Rahmat. 1994. Kencur. Yogyakarta: Penerbit Kanisius. Cetakan ke-13. Sadek, Basem; Ha,ruoni, Amar Mansuor; Adem, Abdu. 2013. Anti-inflammatory Agents Of The Carbamoylmethyl Ester Class: Synthesis, Characterization, and Pharmacological Evaluation. Journal of Inflammation Research 6 3543.


67

Sakurai, Yuji, et al. 2004. Esterase-Like Activity of Serum Albumin: Charactherization of Its Structural Chemistry Using p-Nitrohenyl Esters as Substrates. Pharmaceutical Research, Vol 21, No.2. Sastroamidjojo, Hardjono. 1985. Spektroskopi Edisi I. Yogyakarta: Liberty. Sen, S. Et al. 2010. Analgesic and Anti-inflammatory Herbs: A Potential Source of Modern Medicine. India: IJPSR, Vol. 1 (11): 32-44, ISSN: 0975-8232. Siswandono dan Bambang Soekardjo, 2008. Kimia Medisinal Jilid I. Surabaya: Airlangga Univerisity Press. Siswanto, Agus, Wiranti Sri Rahayu, Pri Iswati Utami. Formulasi Tabir Surya Ekstrak Etanol Rimpang Kencur (Kaempferia galanga L). Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto. Stahl, Egon. 1985. Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi. Bandung: Institut Teknologi Bandung. Surbakti, Darwis. Isolasi dan Transformasi Etil p-metoksisinamat dari Kaempferia galanga, Linn. Tesis ITB via Perpustakaan Digital ITB (http://digilib.itb.ac.id/ diakses pada 15 Januari 2015). Suzana; Nunuk Irawati; Tutuk Budiati. 2011. Synthesis Octyl pMethoxycinnamate as Sunblock by Transesterification Reaction with The Starting Material Ethyl p-methoxycinnamate. Indonesian Journal of Cancer Chemoprevention 2(2):216-220. Syukur dan Hernani. 2001. Budidaya Tanaman Obat Komersial. 118. Jakarta: Penebar Swadaya. Tara

V., Shanbag; Sharma candrakala; Adiga Sachidananda; Bary Laximinarayana Kurady; Shenoy Smita; Shenoy Ganesh. 2006. Wound Healing Activity of Alcoholic Extract of Kaempferia galanga in Wistar Rats. Indian J.Physiol Pharmacol 50 (4) : 384-390.

Tatti, Praveen Nngppa; S. Anitha; S. Shashidhara et al. 2012. Evaluation of In Vitro Anti-Denaturation Activity of Isolated Compound of Butea monosperma Bark. International Journal of Pharmaceutical Sciences. 3(4). Tewtrakul, Supinya, et al. 2005. Chemical Components and Biological Activities of Volatile Oil of Kaempferia galanga Linn. Songklanakarin J. Sci. Technol. Tjay, Tan H., Kirana Rahardja. 2002. Obat-Obat Penting: Khasiat, Penggunaan dan Efek-efek Sampingnya, Edisi Kelima. PT Elexmedia Komputindo Kelompok Gramedia, Jakarta: 313. Umar, Muhammad Ihtisam, Mohd Zaini Asmawi, Amirin Sadikun, et al. 2012. Bioactivity-Guided Isolation of Ehtyl-p-methoxycinnamate, an Antiinflammatory Constituent, from Kaempferia galanga L. Extracts. Molecules. ISSN 1420-3049. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

68

USDA (United States Department of Agriculture). Natural Resource Conservation Service. Akses online via http://plants.esda.gov/ (Diakses pada tanggal 1 Februari 2015). Varshney, Ankita, et al. 2010. Review Article Ligand Binding Strategies of Human Serum Albumin: How Can the Cargo be Utilized?. Research Gate Publication. Verma, et al. 2011. Antidenaturation and Antioxidant Activities of Annona cherimola In-Vitro. India: International Journal of Pharma and Bio Sciences. Vol. 2. ISSN: 0975-6299. Vittalrao, Amberkar Mohanbabu, Tara Shanbag, Meena Kumari, et al. 2011. Evaluastion of Antiinflammatory and Analgesic Activities of Alcoholic Extract of Kaempferia galanga In Rats. Manipal: Indian J Physiol Pharmacol 2011; 55 (1). Willard, Hobart H.; Lynne L/Merritt; John A. Dean; Frank A. Settle, Jr. 1988. Instrumental Methods of Analysis Seventh Edition. California: Wadsworth Publishing Company. Williams, LAD. Et al. 2008. The In Vitro Anti-denaturation Effects Induced by Natural Product and Non-steroidal Compounds in Heat Treated (Immunogenic) Bovine Serum Albumin is Proposed as a Screening Assay for The Detection of Anti-inflammatory Compounds, Without The Use of Animals, In The Early Stages of The Drug Discovery Process. West Indian Medical Journal 57 (4): 327. Windono, Tri; Jany; Widji Suratri. 1997. Aktivitas Tabir Matahari Etil pmetoksisinamat yang Diisolasi dari Rimpang Kencur. Warta Tumbuhan Obat Indonesia Volume 3. No.4. Yulianto, Yogo Tri. 2010. Prarancangan Pabrik Nitrobenzen dan Benzen dan Asam Campuran dengan Proses Kontinyu Kapasitas 120.000 Ton/Tahun. Teknik Kimia Fakultas Teknik Universitas Muhammadiyah Surakarta.


69

LAMPIRAN Lampiran 1. Kerangka Penelititan Etil p-metoksisinamat

Modifikasi Struktur

Hidrolisis EPMS

Nitrasi APMS

Esterifikasi Hasil Nitrasi

Karakterisasi

Identifikasi Struktur Senyawa

Uji Aktivitas Antiinflamasi

Analisis Hubungan Struktur Aktivitas

70

Lampiran 2. Skema Identifikasi Senyawa Hasil Modifikasi Senyawa hasil modifikasi

Kromatografi lapis tipis

Kromatografi kolom

Identifikasi spektrofotometri

Spektrofotometri IR

GCMS

Analisis data

H1-NMR & C13-NMR

71

Lampiran 3. Alat dan Bahan Penelitian

GCMS (Gas Chromatography Mass Spectrofotometry)

Microwave

72

(lanjutan)

Bahan-bahan yang digunakan untuk uji aktivitas antiinflamasi dengan metode BSA

73

Lampiran 4. Alur Kerja Reaksi Esterifikasi 500 mg senyawa hasil nitrasi dicampurkan dengan 50 mL 1butanol p.a

Diaduk menggunakan magnetic stirrer sambil dipanaskan 90oC hingga larut sempurna

Ditambahkan 0,2 mL asam sulfat 98%

Erlenmeyer dimasukkan ke dalam gelas kimia berisi air membentuk water jacket

Campuran sebelum diaduk

Diiradiasi dengan microwave 300 watt selama 30 menit Water Jacket

Didinginkan pada suhu ruang

Setelah diiradiasi

Etil Asetat Aquades

Sebelum diiradiasi

Dipartisi dengan aquades dan etil asetat. Lapisan etil asetat ditampung (bagian atas)

KLT dengan eluen 4 heksan : 1 etil asetat

74

Lampiran 5. Perhitungan Reaksi 1. Perhitungan Bahan untuk Reaski Hidrolisis a. Etil p-metoksisinamat 



Terpakai

= 5,00 g

BM

= 206,24 g/mol

Mol

= = = 0,024 mol

b. NaOH 

BM

= 40 g/mol



Mol

= 1,5 x 0,024 = 0,036 mol



Massa (g)

= mol x BM = 0,036 x 40 = 1,44 g, terpakai 1,5 gram

2. Perhitungan Bahan untuk Reaksi Nitrasi a. Asam p-metoksisinamat 



Terpakai

= 2,50 g

BM

= 178 g/mol)

Mol

= = = 0,014 mol

b. Asam Nitrat 65% 

BM

= 63,01 g/mol



ρ

= 1,4 g/mL



Massa

= mol x BM = 0,222 x 63,01 = 13,988 g ≈ 14 g



Volume

=

75

= = 10 mL

3. Perhitungan Bahan untuk Reaksi Esterfikasi a. Senyawa Hasil Nitrasi 

Terpakai

= 500 mg



Mol

= tidak teridentifikasi, karena senyawa hasil

nitrasi masih berupa campuran dari beberapa senyawa b. 1-Butanol 

BM

= 74,12 g/mol



ρ

= 0,811 g/mL



Massa

= mol x BM = 0,547 x 74,12 = 40,55 g



Volume

= = = 50 mL

c. Asam Sulfat 98% 

BM

= 98,08 g/mol



ρ

= 1,84 g/mL



Volume terpakai = 0,2 mL



Massa

= volume terpakai x ρ = 0,2 x 1,84 = 0,368 g



Mol

= = = 0,00375 mol ≈ 0,004 mol

76

Lampiran 6. Optimasi Reaksi Hidrolisis Berdasarkan penelitian Mufidah (2014), reaksi hidrolisis etil pmetoksisinamat yang dilakukan pada suhu ruang tanpa adanya pemanasan dan pengadukan berlangsung secara sempurna selama 32 jam. Sedangkan pada penelitian ini reaksi hidrolisis terjadi pada kondisi panas pada temperatur 60oC dan sambil diaduk dengan menggunakan magnetic stirrer selama 5 jam. Penetuan lama waktu reaksi hidrolis EPMS telah dilakukan optimasi oleh peneliti. Adapun indikator reaksi hidrolisis berjalan secara optimal adalah tidak adanya spot EPMS yang nampak pada KLT hasil reaksi. Hal ini menandakan bahwa semua senyawa EPMS telah berubah menjadi senyawa APMS. Berikut adalah hasil optimasi reaksi hidrolisis EPMS pada jam ke-3, 4, dan 5. 4 Heksan : 1 Etil Asetat

H

E 1

E

H 2

E

H 3

Gambar Pengamatan KLT Hasil Optimasi Reaksi Hidrolisis Keterangan: E) Standar EPMS, A) Hasil reaksi hidrolisis, 1) Jam ke-3, 2) Jam ke-4, 3) Jam ke-5

Pada jam ke-3, masih terdapat pola spot EPMS dan spot senyawa APMS masih sedikit. Pada jam ke-4, spot senyawa APMS sudah lebih banyak dari jam ke 3, namun spot senyawa EPMS masih ada. Sehingga dapat disimpulkan bahwa reaksi hidrolisis belum sempurna pada jam ke-3 dan ke-4. Sedangkan pada jam ke-5, spot senyawa EPMS sudah tidak ada lagi, sehingga dapat dianggap bahwa reaksi hidrolisis sudah berlangsung sempurna pada jam ke-5, karena senyawa EPMS sudah berubah semuanya menjadi APMS melalui reaksi hidrolisis. Kemudian senyawa tersebut dibandingkan pola KLT dan fragmentasi GCMS-nya dengan standar APMS untuk divalidasi.

77

Lampiran 7. Optimasi Reaksi Nitrasi Metode reaksi nitrasi APMS dilakukan dengan mencampurkan senyawa asam p-metoksisinamat dengan HNO3 65%

dalam kondisi dingin kemudian

diiradiasi dengan microwave 450 watt selama 2 menit atau disebut juga dengan metode Cold Microwave (Bose, 2006). Adapun kuat daya yang digunakan pada reaksi ini sudah didasarkan pada hasil optimasi yang dilakukan oleh peneliti. Reaksi nitrasi APMS telah dioptimasi pada keadaan 300 watt dan 450 watt untuk melihat efektivitas kuat daya gelombang mikro yang digunakan dibandingkan dengan pola spot KLT hasil reaksi tersebut. 3 Heksan : 2 Etil Asetat

Senyawa hasil nitrasi APMS

1

2

A

Gambar Pengamatan KLT Hasil Optimasi Reaksi Nitrasi APMS Keterangan: 1) 300 watt, 2) 450 watt, A) APMS

Berdasarkan hasil optimasi diketahui bahwa reaksi yang berlangsung pada 450 watt memiliki jumlah hasil reaksi nitrasi yang lebih banyak dibandingkan dengan reaksi yang berlangsung pada kondisi 300 watt meskipun keduanya dilakukan dengan durasi yang sama, yakni 2 menit. Sehingga, peneliti memilih untuk melakukan iradiasi dengan daya 450 watt selama 2 menit pada reaksi nitrasi APMS.

78

Lampiran 8. Optimasi Reaksi Esterifikasi Metode reaksi esterifikasi dilakukan dengan cara melarutkan senyawa A atau senyawa hasil nitrasi APMS dengan 1-butanol kemudian ditambahkan dengan asam sulfat 98%, setelah itu diiradiasi 300 watt selama 30 menit (Indriyani, 2015). Optimasi reaksi esterifikasi dari senyawa hasil nitrasi APMS telah dilakukan dengan perbedaan lama waktu reaksi dan kuat daya gelombang mikro yang digunakan. Optimasi dilakukan dengan tujuan untuk melihat kondisi reaksi optimal yang dapat menghasilkan hasil reaksi lebih baik. Reaksi

Kuat daya gelombang mikro

Lama waktu reaksi

1

180 watt

30 menit

2

300 watt

30 menit

3

450 watt

30 menit

4

300 watt

60 menit

4 Heksan : 1 Etil Asetat

Senyawa hasil esterifikasi

1

2

3

4

E

A

N

Gambar Optimasi Reaksi Esterifikasi Senyawa Hasil Nitrasi APMS Keterangan: 1) 180 watt, 30 menit; 2) 300 watt, 30 menit; 3) 450 watt, 30 menit; 4) 300watt, 60 menit; E) EPMS; A) APMS; N) Senyawa hasil nitrasi

Berdasarkan hasil optimasi, reaksi esterifikasi tidak berlangsung pada reaksi 1 (180 watt, 30 menit) karena tidak terdapat pola spot senyawa yang diingingkan. Pada reaksi 2 (300 watt, 30 menit), reaksi 3 (450 watt, 30 menit), dan reaksi 4 (300 watt, 60 menit) tidak menunjukkan perbedaan signifikan terhadap pola spot senyawa hasil esterifikasi, sehingga dapat dikatakan ketiga reaksi tersebut sama efektifnya. Namun reaksi 2 lebih efisien karena menggunakan daya yang lebih kecil dan waktu yang lebih singkat.

79

Lampiran 9. Gambar Senyawa



Senyawa Hasil Nitrasi

Butil 4-metoksi 6-nitrosinamat

80

Lampiran 10. Spektrum GCMS Asam p-metoksisinamat

81

(lanjutan)

82

Lampiran 11. Spektrum IR Hasil Esterifikasi

83

Lampiran 12. Spektrum GCMS Hasil Esterifikasi

84

(lanjutan)

85

Lampiran 13. Spektrum H1-NMR Hasil Esterifikasi

86

(lanjutan)

87

(lanjutan)

88

(lanjutan)

89

Lampiran 14. Spektrum C13-NMR Hasil Esterifikasi

90

(lanjutan)

91

(lanjutan)

92

(lanjutan)

93

Lampiran 15. Hasil Perhitungan Uji Antiinflamasi

Persen Inhibisi

Etil p-

% Inhibisi

Standar

metoksisinamat

Uji 1

Uji 2

Uji 3

Rata-rata

Deviasi

0,1 ppm

32,60

32,8

32,27

32,56

0,27

1 ppm

39,90

40,5

39,98

40,13

0,32

10 ppm

44,40

40,8

42,98

42,73

1,81

100 ppm

55,20

52,4

54,43

54,01

1,45

% Inhibisi

Standar

Persen Inhibisi

Asam pmetoksisinamat

Uji 1

Uji 2

Uji 3

Rata-rata

Deviasi

0,1 ppm

-0,28

-0,25

-0,7

-0,41

0,25

1 ppm

-0,27

-0,22

-0,43

-0,31

0,11

10 ppm

-0,32

-0,19

-0,33

-0,28

0,08

100 ppm

0,24

0,25

0,81

0,43

0,33

94

(lanjutan) Persen Inhibisi

Buti 4-metoksi 6-

% Inhibisi

Standar Deviasi

nitrosinamat

Uji 1

Uji 2

Rata-rata

0,1 ppm

33,07

31,06

32,065

1,42

1 ppm

29,60

28,32

28,960

0,91

10 ppm

24,04

26,48

25,260

1,72

100 ppm

-17,89

-16,67

-17,280

0,86

Persen Inhibisi

Natrium

% Inhibisi

Standar Deviasi

Diklofenak

Uji 1

Uji 2

Rata-rata

0,1 ppm

1,84

1,34

1,59

0,36

1 ppm

3,53

2,45

2,99

0,74

10 ppm

26,23

23,63

24,93

1,84

100 ppm

97,87

96,99

97,43

0,62

95

Lampiran 16. Diagram Hasil Uji Antiinflamasi

Natrium Diklofenak 120 y = 0.9222x + 6.1198 R² = 0.9786

100 80 60 40 20 0 -20

0

20

40

60

80

100

120

Etil p-metoksisinamat 60 50

y = 0.1662x + 37.742 R² = 0.8178

40 30 20 10 0 -20

0

20

40

60

80

100

120

96

(lanjutan)

Asam p-metoksisinamat 0.5 y = 0.0079x - 0.363 R² = 0.9903

0.4 0.3 0.2 0.1 0 -20

-0.1

0

20

40

60

80

100

120

100

120

-0.2 -0.3 -0.4 -0.5

Butil 4-metoksi 6-nitrosinamat 40 30 20 10 0 -20

0

20

40

60

80

-10 -20

y = -0.4789x + 30.554 R² = 0.9976

MODIFIKASI STRUKTUR SENYAWA ETIL P- METOKSISINAMAT MELALUI PROSES NITRASI- ESTERIFIKASI DENGAN 1-BUTANOL SERTA UJI AKTIVITAS SEBAGAI ANTIINFLAMASI

Recommend Documents