LAPORAN AKHIR PENELITIAN PEN6EMBANGAN EI$1IIAIC ICUUT ICAYU ICWWIH

LAPORAN AKHIR PENELITIAN

PEN6EMBANGAN EI$1IIAIC ICUUT ICAYU

ICWWIH

(Artocarpus c:ommuais J.R.)SEBAGAIBAHAN OMt1ERBAT1ERSTANDO AR.,( HJ1 ANTITUMOR PAYUDARA

: Ujlila VitrO. staad •isasi Ebtrak, dan Kajian Prakllnik

Ofeh: dr. Burhannudin lchsan, M.Med.Ed Andi SUhendf, S.Farm, Apt

Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta Februari 2012

LAPORAN AKHIR PENELITIAN

PENGEMBANGAN EKSTRAK KULIT KAYU KLUWIH (Artocarpus communis J.R.) SEBAGAI BAHAN OBAT HERBAT TERSTANDAR (OHT) ANTITUMOR PAYUDARA : Uji in Vitro, Standarisasi Ekstrak, dan Kajian Praklinik

Oleh: dr. Burhannudin lchsan, M.Med.Ed Andi Suhendi, S.Farm, Apt

Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta Februari2012

\

J

HALAMAN PENGESAHAN LAPORAN PENELITIAN

1.

1udul Risbin

Pengembangan El<.stral< Ku\\t Kayu Kluwih \Artocarpus

communis)

Sebagai

Bahan Obat Herbal Terstandar (OHT)

Antitu mor Payudara : Uji In Vitro, Standarisasi Ekstrak, dan Kaj ian Praklinik

2.

3.

4.

Ketua Pelaksana a.Nama Lengkap

dr.Burhannudin lchsan, M.Med.Ed

b.Jenis Kelamin

laki-laki

c. NIP

1002

d. Pangkat/Golongan

I lib

e.Jabatan Fungsional

Asisten Ahli

f.Program Studi

Kedokteran Umum

Anngota a.Nama

Andl Suhendi, S.Farm, Apt

b.Program Studi

Farmasi

c.Perguruan Tinggi

Universitas Muhammadiyah Surakarta

Pendanaan tahun Pertama a.Biaya yang disetujui

Rp 121.066.000

Surakarta, 28 Februari 2012

..

Ketua Peneliti

dr Burhan

ii

INTISARI

Latar belakang: Kanker payudara masih merupakan masalah kesehatan yang besar di Indonesia. Pengobatan kanker dengan kemoterapi seringkali belum memberikan hasil yang memuaskan, karena bersifat tidak spesifik sehingga menimbulkan efek samping yang tidak " ringan. Pengobatan dengan ramuan herbal dapat menjadi solusi altematif dalam penanganan beberapa kasus penyakit, tetapi aspek ilmiahnya belum banyak dikaji. Tujuan: Mempelajari potensi pemanfaatan bahan obat alam asli Indonesia, yaitu kulit kayu Kluwih(Arlocarpus communis J.R.) menjadi obat herbal terstandar antitumor payudara, yang nantinya dapat dipromosikan & dimanfaatkan dalam membantu pengobatan tumor/kanker payudara di masyarakat

Metode: Rancangan penelitian adalah eksperimental. Penelitian ini mengukur: {1) potensi sitotoksik invitro ekstrak metanol kulit kayu kluwih terhadap set MCF-7, (2) standarisasi ekstrak kulit kayu kluwih, (3) uji efektivitas in vivo ekstrak kulit kayu kluwih terhadap kanker payudara tikus yang diinduksi dengan DMBA, dan (4) melihat mekanisme penghambatan sel tumor dalam hal ini adalah mekanisme apoptosis.

Hasll: {1) IC50 ekstrak metanol kulit kayu kluwih terhadap set MCF-7 adalah 40, 16 �g/ml, (2} Nilai parameter non spesifik dari ekstrak metanol kulit kayu kluwih diperoleh nilai susut pengeringan sebesar 3,6-12,8%; bobot jenis ekstrak sebesar 1 ,0034-1,0180g/ml, kadar abu total 3,06-7,58%, kadar abu larut asam 0,06-0,26%, kadar air dalam ekstrak sebesar 1,37,0% dan tidak terdeteksi adanya sisa pelarut dalam ektrak dari tiap daerah. Nilai parameter spesifik dari ekstrak metanol kulit kayu kluwih adalah organoleptik ekstrak: ekstrak kering, berwarna coklat tua, bau khas dan rasa pahit; kelarutan dalam air 12,52-21,02% dan kelarutan dalam etanol 65,33-92,69%; pola kromatogram ekstrak dengan fase gerak heksan:etil asetat:asam formiat (6:4:0,5) pembanding artonin E berada pada Rf 0,14 dan kadar chemical marker (artonin E) dalam ekstrak sebesar 0,4476-3,4146% b/b, (3) pada uji in vivo, ekstrak kulit kayu kluwih tidak menunjukkan penghambatan terhadap kanker payudara (4) uji mekanisme apoptosis tidak dilakukan, karena pada uji in vivo ekstrak kulit kayu kluwih tidak menunjukkan penghambatan kanker payudara Kesimpulan: Secara in vitro ekstrak metanol kulit kayu kluwih memiliki potensi anti kanker payudara, namun secara in vivo tidak menunjukkan penghambatan kanker payudara •

Kata-kata kunci: ekstrak metanol kulit kayu kluwih, kanker payudara .

iii

Ucapan terima kasih Ucapan

terima

kasih

yang

sebesar-besarnya

disampaikan

kepada

Badan

Litbang

Kesehatan Kementerian Kesehatan Republik Indonesia atas dana yang diberikan untuk penelitian ini. Surat Keputusan Kepala Badan Penelitian dan PengembangaA Kesehatan Kementerian Kesehatan Republik Indonesia Nemer: HK.03.05/1/393/2011

iv

KATA PENGANTAR · · Alhamdulillaahi Rabbi! alamiin. Segala puji bagi Alloh Subhaanahu Wata aala, zat yang

menguasai seluruh alam. Sholawat dan salam atas nabi Muhammad · Shallallaahu alaihi wasalllam. Karena karunia dan izin-Nya, penulis dapat menyelesaikan

penelitian ini. Dalam melakukan penelitian dan penulisan laporannya, banyak sekali pihak yang telah

membantu

penulis,

baik

langsung

maupun

tidak

langsung.

Sebagai

bentuk

penghormatan dan penghargaan penulis atas segala bantuan yang telah diberikan, penulis ingin menghaturkan terima kasih yang tiada terkira kepada: 1.

Badan

Litbangkes

Kementerian

Kesehatan

Republik

Indonesia

yang

telah

dan tanpa mengenal

Ieiah

memberikan dananya untuk penelitian ini. 2.

Para reviewer yang dengan sabar, sungguh-sungguh

telah membimbing dan banyak memberikan masukan pada penelitian ini. 3.

Prof.DR.dr.Bambang Subagyo, SpA(K) yang telah berkenan memberikan dukungan pada penelitian ini.

4. DR. Muhtadi,M.Si yang telah berkenan memberikan bimbingan pada penelitian ini. 5. Semua pihak yang telah membantu, yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu.

Mudah-mudahan tulisan ini dapat memberikan manfaat yang banyak. Saran dan kritik akan penulis terima dengan senang.

•

Surakarta,28 Desember i 2011

Penulis

v

DAFTAR lSI

Halaman Judul Halaman Pengesahan

ii

Inti Sari

iii

Ucapan Terima Kasih

iv

Kata Pengantar

v

Daftar lsi

vi

Daftar Tabel

vii

Daftar Gambar

viii

Daftar Lampiran

ix

Bab I. Pendahuluan A Latar Belakang B.Perumusan Masalah

2

C.Keutamaan Penelitian

3

Bab II. Tinjauan Pustaka dan Road Map

5

ATinjauan Umum Tentang Kluwih

5

B.Kajian Fitokimia

6

C.Kajian Farmakologi

9

D.Kajian Efek Sitotoksik

11

E.Efek anti lnflamasi

12

Bab Ill. Metode Penelitian

14

ALokasi Penelitian

14

B.Peralatan dan Bahan

14

Bab IV. Tujuan dan Manfaat Penelitian

19

A.Tujuan Penelitian

19

B.Manfaat Peneltian

19

Bab V. Hasil dan Pembahasan

20

AUji Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Metano\ Kulit Kayu Kluwih dengan metode MTI

20

B.Standarisasi Ekstrak Metanol Kulit Kayu Kluwih

23

C.Aktivitas Ekstrak Kulit Kayu Kluwih Terhadap Kanker Payudara Yang Diinduksi 30 DMBA

•

Bab VI.Kesimpulan dan Saran

33

AKesimpulan

33

B.Saran

33

Daftar Pustaka

34

Lampiran

37

vi

-· � =-== -

Daftar Tabel Tabel

Halaman

1.

Nama-nama botani yang telah diberikan untuk Kluwih dan Sukun

5

2.

Kajian fitokimia yang telah dilakukan terhadap Kluwih dan sukun

6

3.

Metabolit sekunder yang diisolasi dari A. Communjs

7

4.

Sifat biologis metabolit sekunder dari Sukun dan Kluwih

9

5.

Efek sitotoksik metabolit sekunder dari Kluwih atau sukun

11

6.

Keaktifan metabolit sekunder dari Sukun atau Kluwih terhadap enzim Sa­ 13

reduktase 7. Prosentase sel hidup dengan perlakuan ekstrak kulit kayu Kluwih dan doksorubisin

24

8.

Rata-rata rendemen ekstrak metanol kulit kayu Kluwih

9.

Rekapitulasi penetapan parameter non spesifik ekstrak kulit kayu kluwih

10.

Rekapitulasi penetapan parameter spesifik ekstrak kulit kayu Kluwih

11.

Rekapitulasi profil kromatogram ekstrak kulit kayu Kluwih dan marker

12.

Gambaran makroskopis tikus yang diinduksi OMBA pada

2

minggu setelah

2

minggu setelah

induksi terakhir OMBA 13.

Gambaran mikroskopis tikus yang diinduksi DMBA pada induksi OMBA terakhir

14.

Gambaran mikroskopis tikus yang diinduksi DMBA pada 7 minggu setelah induksi OMBA terakhir

23

24 26

28

31 31

32

vii

Daftar Gam bar Gam bar

I.

Halaman

�

Reaksi reduksi MTI menjadi formazan oleh enzim suksinat dehi rogenase

20

(Mosmann, 1983)

2.

Krista! fonnazan. Kristal berwarna ungu has\1 reduksi garam MTI oleh sistem reduktase suksinat tetrazolium mitokondria sel hidup. Jumlah kristal formazan yang terbentuk berbanding lurus dengan jumlah sel hidup

3.

Fotomikroskopik Sel MCF7 setelah Perlakuan dengan Ekstrak Metanol Kulit

21

Kayu Kluwih 10 IJQ/ mL (B) dan 40 10 IJQ/ ml (C) dibandingkan dengan kontrol sel (A). Tanda -+ menunjukkan sel MCF7 yang hidup dan -+ sel MCF7 yang mati. Peningkatan konsentrasi ekstrak yang diberikan berbanding lurus dengan jumlah kematian sel MCF7 4.

22

Grafik Hubungan Konsentrasi Dengan Prosentase Sel Hidup MCF7. Dalam microplate 96 ditanam 5.000 seVsumuran, kemudian diberi perlakuan dengan (A) ekstrak kulit kayu kluwih dan

(B) Doksorubisin diinkubasi 24 jam

5.

Senyawa identitas Artoni E

6.

Profil Kromatografi ekstrak metanol kulit kayu kluwih dari tiga daerah yaitu

22

27

Klaten (K), Colomadu ©, dan Blora (B) dengan pembanding aronin E (P). Fase gerak : heksan:etil asetat:asam formiat (6:4:0,5) dan fase diam silica gel GF254. Pengamatan dilakukan pada

(1) sinar tampak (artonin E berwarna

kecoklatan), (2) uv 254 nm (artonin E memadamkan fluoresensi) dan (3) UV 366 nm setelah disemprot dengan sitroborat (artonin E berfluoresensi coklatorange) 7.

Reaksi antara Artonin E dengan Sitroborat

28 29

viii

OAFTAR LAMPIRAN

Lamplran A. Gambar-gambar penelitian B. Gambaran histologi minggu ke-2 setelah induksi DMBA terakhir

C. Gambaran histologi minggu ke-7 setelah induksi DMBA terakhir D. Personalia peneliti

E. Pembacaan Patologi Anatomi oleh bagian Patologi FKH UGM

ix

BAB I. PENDAHULUAN A. Latar Belakang

Kanker merupakan salah satu penyakit yang menyebabkan kematian dalam jumlah besar, baik di Indonesia maupun di dunia. Perkembangan penyakit kanker seringkali dijumpai sudah dalam stadium lanjut, sehingga perkembangan sudah sedemikian pesat dan menimbulkan masalah yang 'kompleks' dalam penanganannya. Jenis penyakit kanker pun menunjukkan kecenderungan makin beragam. Bahkan ada fenomena hampir semua organ berpotensi muncul kanker, sehingga dikenal ada banyak penyakit kanker seperti; kanker payudara, rahim, paru-paru, darah, prostat, kulit dan lain sebagainya. Di antara berbagai jenis kanker tersebut, kanker payudara masih merupakan masalah kesehatan besar, baik di negara maju maupun berkembang seperti Indonesia. Tumor payudara merupakan salah satu kelainan yang sering ditemukan di seluruh dunia. Insidensi kanker payudara di dunia merupakan

27%

dari kanker pada wanita dan menyebabkan

20%

kematian

akibat kanker. Kanker ini menduduki tempat kedua setelah kanker servik uteri. Insiden kanker payudara pada tahun

1994

berkisar antara

17,7%

(Malang) hingga

27,9%

(Makassar). Di

12,16%

kasus tiap tahun.

.

Semarang, insidensi kanker payudara menduduki peringkat kedua, atau Dalam

tO

tahun terakhir, kanker payudara merupakan penyebab kematian nomor enam di

Indonesia. Hal ini disebabkan karena sebagian penderita kanker payudara di Indonesia datang dalam keadaan telah lanjut. (Henderson, 2000; Sarjadi dan Trihartini, 2001) Pengobatan kanker dengan kemoterapi seringkali belurn rnemberikan hasil yang memuaskan, karena bersifat tidak spesifik sehingga menimbulkan efek samping yang tidak ringan. Pengobatan dengan ramuan herbal dapat menjadi solusi alternatif dalam penanganan beberapa kasus penyakit, tetapi aspek ilmiahnya belum banyak dikaji. Masyarakat secara tradisional dan turun temurun, telah memiliki pengetahuan empiris tentang pemanfaatan tumbuhan obat asli Indonesia, khususnya dalam pengobatan kanker. Salah satu tumbuhan obat asli Indonesia yang juga dilaporkan secara empiris digunakan di beberapa daerah dalam penanganan penyakit kanker yaitu tumbuhan Kluwih atau Sukun. Tumbuhan dari famili Moraceae (kelompok Nangka-nangkaan) berdasarkan kajian literatur, telah dilaporkan memiliki kandungan senyawa-senyawa kimia yang potensial pada skrining antitumor dengan set uji. Artokarpin dan artonin E merupakan senyawa turunan

1

•

flavonoid dari tumbuhan famili Moraceae, dilaporkan sangat aktif pada uji sitotoksik terhadap beberapa sel kanker yaitu A549, MCF-7, MDA-MB-231, IA9, HCT-8, KB, KB-Vin dan P-388 (Syah, 2005). Akan tetapi, hingga saat ini belum dilaporkan adanya produk-produk OHT dan fitofarmaka yang dihasilkan dari ekstrak tumbuhan Moraceae ini. Hasil penelitian pendahuluan oleh Peneliti dan tim di Fak. Farmasi UMS, menunjukkan bahwa ekstrak metanol dan fraksi-fraksinya dari ektrak kulit kayu Kluwih (salah satu spesies dari genus Artocarpus) terbukti memiliki efek menghambat pertumbuhan sel kanker leher rahim (HeLa), dengan nilai ICso sebesar 17,82 f.!g/mL untuk ekstrak metanol (Salasiah, 2007), fraksi semipolar IC50 sebesar 19,24

�g/mL (Apsari, 2007), fa r ksi polar IC50 sebesar 19,90 Jlg/mL

(Khasanah, 2007). Kekerabatan spesies Kluwih dengan Sukun, Nangka, dan Cempedak dalam genus Artocarpus pada famili Moraceae sangat dekat, sehingga secara teoritis kandungan metabolit sekunder yang akan diperoleh juga akan memiliki kemiripan senyawa kimianya (Kazuki, 1995). Berdasarkan latar belakang dan landasan ilmiah tersebut, penelitian ini akan mempelajari efek penghambatan karsinogenesis kanker payudara yang diinduksi 7, 12-dimetilbenz(a)antrasen (DMBA) secara in vivo oleh ekstrak metanol dan fraksi-fraksinya dari kulit kayu Nangka. Ekstrak atau fraksi yang memberikan penghambatan karsinogenesis terbaik, pada tahap selanjutnya (tahun kedua) akan dilanjutkan untuk pengujian toksisitas akut dan subkronis pada hewan uji, untuk memperoleh data efek toksisitasnya secara in vivo. Penelitian ini, merupakan penyelidikan yang cukup mendalam untuk meningkatkan kapasitas bahan obat alam Indonesia menjadi produk yang lebih berkualitas dan berdaya guna kepada masyarakat, sehingga memberikan landasan ilmiah yang kuat untuk pemanfaatan ekstrak kulit kayu Kluwih sebagai obat herbaJ terstandar (OHT) yang dapat digunakan untuk alternatif pengobatan tumor payudara .

•

B.

Perumusan masalah

a. Seberapa kuat efek penghambatan karsinogensesis tumor payudara yang diinduksi dengan DMBA pada tikus secara in vivo dari ekstrak & fraksi-fraksi dari ekstrak metanol kulit kayu Kluwih(A. communis)? b. Seberapa besar efek toksik (samping) yang ditimbulkan dari pemanfaatan ekstrak dan fraksi aktif dari kulit kayu Nangka, melalui pengujian toksisitas akut dan subkronis?

2-

c.

Apa saja kandungan kimia (chemical marker) yang terdapat dalam ekstrak metanol kulit kayu Kluwihdan seberapa besar kadamya sebagai cara untuk menentukan bahan/ekstrak yang lebih terstandar?

C. Keutamaan Penelitian Dari hasil kajian pustaka berdasarkan hasil-hasil penelitian sebelumnya, diketahui bahwa penelitian terhadap tumbuhan dari genus Artocarpus sudah sedemikian banyak, meliputi penelitian

taksonomi,

fitokimia,

isolasi

senyawa

metabolit

sekunder

dan

beberapa

uji

farmakologinya. Hasil pengujian terhadap beberapa sel uji kanker dari beberapa metabolit sekunder dari tumbuhan Artocarpus. Diperoleh petunjuk dan kesimpulan bahwa senyawa artokarpin aktif terhadap 10 (sepuluh) sel uji kanker, sedangkan senyawa artonin E sangat aktif terhadap sel uji 1A9 dan P388, dan aktifterhadap sel uji MCF-7, HCT-8, SK-MEL-2 dan MDA-MB-231 (Syah, 2005). Akan tetapi, penelitian tentang ekstrak dari bagian tumbuhan Artocarpus untuk pengujian efek antitumor secara in vivo belum pemah dilaporkan, apalagi pemanfaatannya hingga diperoleh produk OHT dan standarisasi ekstraknya dari bagian tumbuhan ini. Tim Peneliti selama dua tahun terakhir (2007 & 2008) dibantu oleh beberapa mahasiswa tugas akhir di Fakultas Farmasi UMS, telah meneliti ekstrak, fraksi nonpolar, semipolar dan polar dari ekstrak metanol kulit kayu Kluwih (A. communis

J.R)

terhadap efek pengharnbatan

pertumbuhan sel kanker rahim (HeLa) secara in vitro. Hasil penelitian menunjukkan aktivitas yang potensial dengan nilai IC50 < 20 �g/mL. Penelitian yang akan dilaksanakan ini, merupakan penelitian lanjutan dari pengujian­ pengujian in vitro yang telah dilaporkan sebelumnya, meliputi uji praklinik pengharnbatan karsinogenesis antitumor secara in vivo, uj i toksisitas (akut & subkronis), dan penyelidikan kimia •

yang meliputi analisis dan standarisasi ekstrak, isolasi dan karakterisasi struktur chemical marker dari ekstrak kulit kayu KJuwih(Artocmpus communis). Target keseluruhan dari penelitian ini adalah diperolehnya produk OHT antitumor dari ekstrak kulit kayu Kluwih (A. communis), yang memilik.i landasan ilmiah yang kuat berdasarkan kajian farmakologi in vivo, toksisitas akut & subkronis dan standarisasi ekstraknya. Sehingga hasil penelitian ini, akan diperoleh kemanfaatan secara ilmiah-akademik yang berupa artikel

3-

dalam jumal ilmiah terakreditasi nasional/intemasional, patent!HKI, serta produk OHT yang dapat diproduksi & dipasarkan secara masal yang dikerjasamakan dengan mitra industri farmasi/perusahaan jamu. Produksi obat herbal terstandar ini diharapkan menjadi sol usi altematif dalam penanganan dan pengobatan tumor atau kanker payudara yang banyak dijumpai di masyarakat. Peneliti telah menjajaki kerjasama dengan mitra UMKM obat herbal, seperti CV. AI Manar Herbafit

Yogyakarta dan PJ. Borobudur Semarang. Dan keduanya, telah menyatakan

kesediaannya untuk bekerjasama dalam memproduksi & memasarkan produk-produk obat herbal hasil penelitian, terutama produk obat herbal terstandar (OHT).

4-

BAB

II. TINJAUAN PUSTAKA DAN

ROAD MAP

A. Tinjauan umum tentang Kluwih Kluwih adalah tumbuhan yang masuk jenis nangka-nangkaan �genus Artocarpus), berupa pohon yang relatif besar, dengan tinggi dapat mencapai 30 m. Tumbuhan Kluwih relatif dikenal luas oleh masyarakat di seluruh Indonesia, karena menghasilkan buah yang memiliki nilai ekonomi cukup penting, selain buah Nangka, Sukun dan Cempedak. Kecuali sebagai penghasil buah, tumbuhan Kluwih juga merupakan sumber kayu, terutama untuk bahan perkakas rumah tangga,

sementara

daunnya

dapat

digunakan

sebagai

obat

luar

pada

penyembuhan

pembengkakan limfa, dan bunganya untuk penyembuhan sakit gigi (Heyne, 1986). Para ahli biologi yang mengkarakterisasi ciri-ciri tumbuhan Kluwih relatif cukup banyak. Sebagaimana dapat dilihat pada Tabel paling populer diantaranya adalah Linn., dan

1,

Kluwih memiliki banyak nama botani, tetapi yang

Artocarpus communis J.R. & G. Forster, Artocarpus incisus

Artocarpus altilis (Parkinson) Forsbeg. Jarret telah membahas secara lengkap

mengenai asal-usul nama bagi tumbuhan Kluwih dan memilih

A. communis sebagai nama botani

yang paling sesuai (Jarret, 1960). Dari segi penyebaran, Kluwih terutama tersebar di Indonesia bagian timur, yang meliputi Maluku dan Irian (Papua), serta Melanesia, sementara Sukun terutama tersebar di daerah Pasifik. Jarret juga mencatat bahwa ciri masing-masing bentuk dapat bervariasi di masing-masing tempat penyebarannya, dan hal tersebut barangkali menjelaskan mengapa kedua tumbuhan tersebut memiliki banyak nama botani. Tabel 1. Nama-nama botani yang telah diberikan untuk Kluwih dan Sukun

Soccus lanosus Rumphius Saccus granosus Rumphius Sitodium a/tile (Banks & Selander ex.) Sitodium a/tile Selander ex. Seem Sitodium incisum Thumb. Rima Sonnerat Rademachia incisa Thumb.

Artocarpus nucifera {Thompson) Artocarpus camansi Blanco Artocarpus rima Blanco Artocarpus laevis Hassk Artocarpus mariannensis Artocarpus incisa Linn. f. laevis Miq. Artocarpus incisa Linn. f. var. murricata Becc.

Artocarpus communis J.R. & G. Forster Artocarpus incisus Linn. f. Artocarpus incisifo/ia Stokes Sumber: Jarret,

Artocarpus leeuwenii Diets Artocarpuspapuana Diels rtocarpus altilis (Parkinson) Forsbeg

1960.

5-

Penamaan atau penyebutan Kluwih dalam penelitian ini berdasarkan penamaan oleh masyarakat di sekitar tumbuhan ini diambilldiperoleh, dengan ciri-ciri bahwa buah dari tumbuhan Kluwih ini memiliki biji, kulit buahnya berduri tidak tajam. Sedangkan penamaan

Artocarpus communis Park didasarkan oleh hasil determinasi yang dilakukan oleh ahli taksonomi tumbuhan dari Jurusan Biologi FKIP UMS dan Balai Penelitian Tanaman Obat (BPTO) Tawangmangu. Hasil pengujian praklinik antitumor secara

in vivo dan toksisitas dari

ekstrak, fraksi dan isolat dalam ekstrak metanol kulit kayu Kluwih ini, akan sangat bennakna dalam memberikan landasan ilmiah tentang pemanfaatan ekstrak, fraksi dan isolat Kluwih

tumbuhan

(Artocarpus communis J.R.) dan potensinya untuk pengobatan tumor/kanker di

masyarakat.

B. Kajian fitokimia Tumbuhan Kluwih yang telah dikaji kandungan metabolit sekundemya disajikan secara lengkap pada Tabel 2 . Asal tumbuhan yang diteliti meliputi berbagai wilayah geografis yang berbeda, yaitu Indonesia, Sri Lanka, Thailand, dan Taiwan. Perlu dicatat disini bahwa tidak semua peneliti mencantumkan rincian apakah penelitian tersebut berasal dari Kluwih atau Sukun yang merupakan jenis spesies yang lain, sehingga pembedaan fitokimia dari kedua tumbuhan tersebut tidak dapat dilakukan secara jelas. Tabel 2. Kajian fitokimia yang telah dilakukan terhadap Kluwih atau Sukun

Spesies/Asal

Ba2ian yan2 diteliti

Pustaka

Artocarpus communis J.R. & G. Akar

Forster.:

Chan et.

al., 2003 Aida et. al., 1997; Hano et. a/., 1990

Taiwan

Kulit batang

Indonesia

Kulit akar

Lin & Shieh, l992a-b, & 1991a-b

Taiwan

Kulit batang (Kluwih)

Fujimoto

Indonesia

Bunga (Kiuwih)

et. al., 1990 Fujimoto et. al., 1987

Indonesia

Daun

Syah et.

Thailand

Daun

Shimizu et.

Indonesia

Artocarpus

altilis

(Parkinson) Forsbeg:

Sri Lanka

Kulit akar

Taiwan

Ranting

Indonesia

Kayu batang

a/., 2006 al., 2000a Hano et. al., 1994 Chen et. a/., 1993 Kurdi, 200 I ; Erwin, 2001

Indonesia

Ka yu akar

Kurdi, 200 1 ; Erwin, 2001

6-

Artocarpus incisus

Linn. f.: Jepang Papua

Shimizu et. a/., 2000b Shimizu et. a!., 2000c

Daun Kayu

Sebagaimana tercantum pada Tabel 2, hampir semua bagian tumbuhan telah dikaji secara fitokimia, yaitu meliputi daun, bunga, kulit batang, kulit akar, kayu batang, dan kayu

akar.

Total

50 senyawa turunan fenolik, yang meliputi turunan geranil atau prenil dari kalkon, dihidrokalkon, flavanon, flavon, 3-prenil atau 3-geranilflavon, piranoflavon, oksepinolavon, flavon jenis dihidrobenzosanton, santon, dan stilben (Syah, 2005). Hasil penelitian fitokimia terhadap Kluwih dan Sukun setelah dipelajari dan dirangkum, dilaporkan sebanyak 50 senyawa kimia hasil isolasi seperti dalam Tabel 3 berikut. Tabel 3. Metabolit sekunder yang diisolasi dari A. communis Senyawa

Jenis

Basdan

3' -Geranil-2' ,3,4,4'Kalkon tetrahidroksi-kaJkon (1) Dihidrokalkon AC-3-2 (2)

AsaI

Pustaka

Daun

Papua

Bunga

Indonesia

Shimizu et a!., 2000-a Fujimoto, et al, 1987

AC-5-l (3) .

Dihidrokalkon

Bunga

Indonesia

Fujimoto,

et

al,

et

al,

1987

Bunga

Dihidrokalkon

AC-3-1 (4)

Indonesia

Fujimoto, 1987

"

Sikloaltilisin 6 (5) Norartokarpanon (6)

Dihidrokalkon Flavanon

Pucuk Kayu

Mikronesia Papua

Dihidromorin (7)

Flavanonol

Kayu

Papua

AC-3-3 (8)

Flavanon

Bunga

Indonesia

AC-5-2 (9)

Flavanon

Bunga

Indonesia

Sikloaltilisin 7 (10) Artokarpesin (11)

Flavanon 6-prenilflavon

Pucuk Kayu

Mikronesia Papua

Isoartokarpesin (12)

6-prenilflavon

Kayu

Papua

Artokomunol CE (13) Artokarpin (14)

3-prenilflavon 3-prenil flavon

Akar Kayu batang Kulit akar

Taiwan Indonesia

Artonin

V

(15)

Patil, et al., 2002 Shimizu et a!., 2000-b Shimizu eJ a!., 2000-b Fujimoto, et al, 1987

Fujimoto,

et

al,

1987

3-prenilflavon

Srilanka

Patil, et a!., 2002 Shimizu et a/., 2000-b Shimizu et a/., 2000-b Chan, et al, 2003 Hano, et al., 1994

7-

¥J!lllt@

3-geranilflavon 3-geranilflavon 3-prenilflavon

Artokomunol CD (16) Artokomunol CB (17) Morusin (18)

Artonin E (=KB-3) (19) 3-prenilflavon KB-2 (20)

3-prenilflavon

SikJokomunol (21)

Piranotlavon

Sik1okomunin (22)

Piranoflavon

Sikloartokarpin (23)

Piranoflavon

Kudraflavon A (24)

Piranoflavon

Sikloartomunosanton

Piranoflavon

Dihidroisosikloartomun (26) Sikloaltilisin (27) Siklomorusin (28) Artokomunol CA(29) Sikloartomunin (30)

Piranoflavon Piranoflavon Piranoflavon Piranoflavon Piranoflavon

Artokomunol CC (31) Caplasin (32)

Oksepinoflavon Oksepinoflavon

Artoindonesianin

Oksepinoflavon

.(25) j

B

(33) Artobilosanton

(=KB-

1)(34) Artomunosanton (35) Artomunosantentrion •

(36) Artomunosantotrion epoksida (37) Artonol E (38)

Dihidrobenzosanto n Dihidrobenzosanto n Kuininodihidrobenzosanton Kuininodihidrobenzosanton Dihidrobenzosanto n

Artonol C (39) Artonol D (40)

Dihidrobenzosanto n Dihidrobenzosanto n

8-

Akar Akar Kulit akar Kulit batang Kulit batang Kulit akar Kulit akar Kayu akar Kulit akar Kulit akar Kulit akar Ranting Akar Akar Kulit akar Akar Kayu batang Kayu batang Kulit batang Kulit akar Kulit akar Kulit akar Kulit batang Kulit batang Kulit batang

Taiwan Taiwan Srilanka

Chan, et al, 2003 Chan, et al, 2003 Hano, et al., 1994

Indonesia

Fujimoto,

Indonesia Taiwan

Fujimoto, et al, 1990 Lin & Shieh, 1992

Taiwan

Lin & Shieh, 1992

Indonesia

Kurdi, 2001

Taiwan

Shieh & Lin, 1991

Taiwan

Lin & Shieh, 1991

Taiwan

Lin & Shieh, 1992

Taiwan Taiwan Taiwan Taiwan

Chen, et al., 1993 Chan, et al, 2003 Chan, et al, 2003 Lin & Shieh, 1992

Taiwan Indonesia

Chan, et al, 2003 Kurdi, 2001

Indonesia

Kurdi, 2001

Indonesia

Taiwan

Aida, et al, 1997; Fujimoto, et al, 1990 Shieh & Lin, 1991

Taiwan

Shieh & Lin, 1991

Taiwan

Lin & Shieh, 1992

Indonesia

Aida, et al, 1997

Indonesia

Aida, et al, 1997

Indonesia

Aida, et al, 1997

et

al,

1990

Artonin K (41)

Artonol B (45)

Furanodihidrobenz osanton Furanodihidrobenz osanton Furanodihidrobenz osanton Furanodihidrobenz osanton Santon

Artonol A (46)

Tetrahidrosanton

Sikloartobilosanton (42) Dihidrosikloartomunin

(43)

Artonin F (44)

Artoindonesianin (48) Kloroforin (49) Artokarben (SO)

F Stilben

Kulit batang Kulit batang Kulit akar

Kulit batang Kulit batang Kulit batang Kayu

Indonesia

Aida, et a!, 1997

Indonesia Indonesia .

Aida, et al, 1997; Hano, et al, 1990 Lin & Shieh, 1991

Indonesia

Hano, et al, 1990

Indonesia

Aida, et al, 1997

Indonesia

Aida, et a!, 1997

Indonesia

Kurdi, 2001 Shimizu 2000-b Shimizu 2000-b

akar

Stilben

Kayu

Papua

Stilben

Kayu

Papua

et

a/.,

et

a/.,

C. Kajian farmokologi Sebagian dari metabolit sekunder yang diisolasi dari Kluwih telah ditentukan efek farmakologisnya terhadap berbagai sistem uji, yang meliputi efek sitotoksik, antiinflamasi, antimalaria, antimikroba, inhibitor enzim 5a.-reduktase, tirosinase, dan protease sistein chatepsin K. Hasil kajian farmakologi dari metabolit sekunder yang diisolasi dari Kluwih atau Sukun tercantum dalam Tabel 4 s.d 6 berikut : Tabel 4. Sifat biologis metabolit sekunder dari Sukun atau Kluwih Senyawa

AC-5-1 (3) •

Sikloaltilisin 6 (5) Sikloaltilisin 7(10) Artokarpin (14)

Sifat biologis yang diuji Antiinflamasi : inhibitor enzim 5-lipoksigenase Antitumor Inhibitor chatepsin K Inhibitor chatepsin K Antiperoksidatif lebih lemah dari kuersetin Sitotoksik terhadap I 0 jenis sel tumor Penangkap radikal dan antioksidan Inhibitor pertumbuhan bakteri

9-

Pustaka

Koshihara et a/., 1988 Fujimoto et a/., 1987 Patil et al., 2002 Patil et a/.. 2002 Rajendran et a/., 2004 Wang et a/., 2004 Ko et al., 1998 Sato et al., 1996

Artnonin E (19)

Siklokomunol (21) Siklokomunin (22)

kariogenik Sitotoksik kuat terhactap 11 jenis Wang et al., 2004; sel tumor Seo et al., 2003; Suhartati eta/., 2001 Inhibitor kuat pacta proses pembelahan rantai DNA Menurunkan sekresi protein pada penyakit glomerural Sitotoksik: tidak aktif terhactap sel P-388 sebagai Aktif inhibitor pertumbuhan tiga jenis sel tumor Antiinflamasi: sangat lemah Sitotoksik : aktif terhadap sel P-

Seo

•

et al., 2003

Fukai

etal.,

2003

Hakim

etal.,

2006

Cidacte

etal.,

200 I

We etal., 2005 Hakim eta/., 2006

388

Sikloartokarpin (23)

Antiperoksidatif lebih lemah dari Rajendran eta/., 2004 artokarpin (14) Sitotoksik : aktif terhadap sel P- Hakim etal., 2006 388

Kudraflavon A (24) Dihidroisosikloartomunin {26) Siklomorusin(28) Sikloartomunin (30) Dihidrosikloartomunin (43) Caplasin (32)

Antiintlamasi; sangat lemah We eta/., 2005 Sitotoksik : tidak aktif terhactap Hakim eta/., 2006 sel P-388 Antiinflamasi : sedang We eta/., 2005 Antiinflamasi : sangat lemah Antiinflamasi : sangat lemah Antiinflamasi : san_g_at lemah Sitotoksik : aktif terhadap sel P388

Artoindonesianin B (33)

Sitotoksik : aktif terhadap sel

P-

We etal., 2005 We etal., 2005 We eta/., 2005 Hakim etal., 2006 Hakim

eta/.,

1999

388

Artobilosanton (34)

Artomunosanton (35) Sikloartobilosanton ( 42)

Inhibitor lemah pada proses Seo etal., 2003 pembelahan rantai DNA Sitotoksik kuat terhadap sel KB Hakim etal., 2002 dan P-388 Antiinflamsi: sangat lemah We eta/., 2005 Sitotoksik : 6 jenis sel tumor Wang et al., 2004; Seo, et a/., 2003; Hakim et a/.,2002

Artonin F (44) Artonol B (45)

Inhibitor kuat pacta pembelahan We et al., 2005 rantai DNA Sitotoksik : tidak aktif terhadap Ko, eta/., 2005 4jenis sel tumor Sitotoksik : tidak aktif terhadap Hakim eta/., 2002; Ko 5jenis sel tumor etal., 2005

10-

Artonol A

Sitotoksik : aktif terhadap 3 jenis

(46)

sel tumor

4-Preniloksiresveratrol (47) Antimalaria: kurang aktif Antijamur

(Cladosporium c/adospo-rioides)

Ko

eta/., 2005

Boonlaksiri

et al., 2000 Jayasinghe eta/., 2004

Penangkap radikal (DPPH)

Artoindonesianin F (48)

Jayasinghe etal., 2004 (Cladosporium Jayasinghe et a/., 2004

Antijamur

cladosporioides)

Penangkap radikal (DPPH)

Antimalaria: aktif

Artokarben(50)

Antimalaria : kurang aktif

Jayasinghe

et a/., 2004 et a/., 2000 Boonlaksiri et al., 2000

Boonlaksiri

D. Kajian efek sitotoksik T igabelas senyawa flavonoid yang telah diisolasi dari Kluwih atau Sukun telah diuji efek sitotoksiknya terhadap sejumlah sel tumor. Senyawa-senyawa tersebut adalah artokarpin, artonin E, siklokomunol, siklokomunin, sikloartokarpin, kudraflavon A, caplasin, artoindonesin B, artobilosanton, artonin F, artonol B dan artonol A, sementara sel tumor yang digunakan meliputi 14 jenis

(T abel 5). Sebagaimana

dinyatakan

pada Tabel

5, artokarpin

dan artonin E

menunjukkan sifat sitotoksik kuat terhadap hampir semua jenis sel tumor yang diujikan. Keduanya adalah turunan flavon jenis 3-prenilflavon yang berbeda pada pola oksigenasi di cincin B, gugus prenil di

C-6,

dan adanya metilasi terhadap 7-0H pada senyawa artokarpin.

Adanya tambahan gugus -OH di C-5' pada senyawa artonin E meningkatkan efek sitotoksik senyawa ini dibandingkan dengan senyawa artokarpin, terutama terhadap sel

P-388, serta relatif

lebih selektif (Syah, 2005).

T abel 5. Efek sitotoksik metabolit sekunder dari Kluwih atau Sukun (Syah, 2005) Sel

tumor

A549

14

3,3

19

TA

MCF-7

3,3

2,2

HC T -8 CAKJ-1

3,8

3,3

TA

4,3

lA9

SK-MEL-

2

3,4

TA

U-87-MG

3,7

MDA-

3,8

PC-3

4, 1

Senvawa basil isolasi dari Kluwih atau Sukuo 21 22 23 24 32 33 34 42 44 TA

TA

< 1,25 TA

TA

TA

3,0

II

•

TA

TA

45

TA

TA

46

1,1

2,7

MB-231 KB

3,2

TA

KB-VIN

3,6

TA

P-388 Hep3B

1,9

0,06

TA

TA

1,9

TA

2,0

3,9

3,5

2,5

1,7

TA

HT-29

TA

TA

TA

TA

TA

TA

TA

TA

3,1

Keterangan : A549 =human lung carcinoma, MCF-7 =dan MDA-MB-231 =breast adenocarcinoma, IA9 ovarian carcinoma, HCT-8 = ile ocecal carcinoma, CAKI-1 = kidney carcinoma, SK-MEL-2 = melanoma, U-87-MG glioblastoma, PC-3 =prostate cancer, KB =epidermoid carcinoma dari nasopharynx, KB-YIN = subclone dari KB, Hep3B =hepatomacellular carcinoma, HT-29 = =

=

human colorectal adenocarcinoma, TA =tidak aktif, jika IC50 > 4 �g/ml.

E. Efek Anfiinflamasi Inflamasi atau peradangan, melibatkan sejumlah proses yang dapat dirangsang oleh berbagai stimulus, antara lain karena infeksi, ischemia, interaksi antigen-antibodi, bahan kimia tertentu, dan luka bakar atau mekanik. Respon inflamasi dapat digolongkan ke dalam tiga fase yang berbeda : respon akut, yang dicirikan oleh adanya lokal vasodilatasi dan peningkatan penneabilitas pembuluh kapiler; respon sub-akut, yang dicirikan oleh adanya infiltrasi sel-sel leukosit dan f�gosit; dan fase respon kronik, yaitu terjadinya degenerasi jaringan dan fibrosis {Alejandra eta/., 2003). Salah

satu

mediator

kimia

yang

dapat

menimbulkan

reaksi

inflamasi

adalah

prostaglandin. Selain itu, sel-sel mast dapat berperan penting dalam menimbulkan keluhan­ keluhan inflamasi kronik. Sel neutrofil juga merupakan sel intlamasi yang penting, yang dapat dirangsang pembentukannya oleh adanya spesi oksigen reaktif. Tambahan pula, sebagai akibat adanya infeksi bakteri, makrofag juga dapat menghasilkan oksida nitrit {NO), dan mediator kimia lain, secara berlebihan sehingga menimbulkan inflamasi akut dan kronik, yang diiringi dengan rusaknya fungsi jaringan normal. Berkaitan dengan usaha-usaha pencegahan terhadap reaksi inflamasi tersebut, sejumlah senyawa turunan flavonoid telah dilaporkan memiliki efek antiinflamasi, termasuk juga turunan flavonoid yang diisolasi dari Sukun atau Kluwih. Tujuh senyawa turunan flavonoid yang diisolasi dari Kluwih atau Sukun telah diuji sebagai bahan kimia antiinflamasi. Ketujuh senyawa tersebut adalah AC-5-1, siklokomunin, kudraflavon

A,

dihidroisosiklokomunin,

siklomorusin,

sikloartomunin,

dan

dihidroksisikloartomunin. Senyawa AC-5-1 telah dilaporkan mampu menghambat enzim 5lipooksigenase secara menyakinkan dengan nilai ICso 0,05 JlM. enzim 5-lipooksigenase adalah

12-

salah satu enzim yang terlibat dalam pembentukan

prostaglandin.

Walaupun

demikian,

penghambatan secara keseluruhan pada proses pembentukan prostaglandin oleh senyawa ini 5 terjadi pada konsentrasi 10' M. Oleh karenanya, senyawa inhibitor selektif untuk enzim tersebut. Senyawa

AC-5-1

AC-5-1

dapat dipandang sebagai

juga dapat menginhibisi secara sangat

signifikan peradangan in vivo telinga mencit yang diinduksi oleh asam arakidonat. Hasil-hasil tersebut memperlihatkan

bahwa kemarnpuan senyawa

AC-5-1

sebagai senyawa turunan

flavononoid yang sangat potensial meredam proses inflamasi. Berkaitan dengan hal tersebut, sejumlah ilmuwan Jepang telah berhasil mensintesis senyawa

AC-5-1

dan telah mematenkannya

(Nakano etal., I 989; Nakano dan Uchida, 1990). 1t se kun der dan' Su kun atau KlUWI'h terhad ap enz1m 5a-reduktase Tabe I 6 Keakt'fi 1 an metabo l'

Senyawa 3'-Geranil-2',3,4,4'tetrahidroksikalkon (1) AC-5-1(3) Norartokarpanon (6)

Jeois

IC50 (J.lglml)

Kalkon

104

Dihidrokalkon

38

Flavanon

TA

Dihidromorin (7)

Flavanonol

TA

Artokarpesin(11)

6-prenilflavon 6-prenilflavon

216

3-prenilflavon Piranoflavon

85 TA

Stilben

128

lsoartokarpesin (12) Artokarpin (14) Sikloartokarpin

(23)

4-Prenioksiresveratrol

Kloroforin (49)

Artokarben (50)

2',2,4',5'Tetrahidroksistilben

TA

Stilben

37

Stilben Stilben

242 TA

•

13-

BAB III. METODE PENELITIAN

A. Lokasi Penelitian Penelitian ini menggunakan metode eksperimen laboratorium. Tahap uji praklinik secara in

vivo dan toksisitas akut-subkronis dilakukan di laboratorium Farrnakologi & Toksikologi

Fakultas Farrnasi VMS, pengujian standarisasi ekstrak dilakukan di laboratorium Kimia Farrnasi Fak. Farrnasi UMS, pengukuran spektrum IR dilakukan bekerjasama dengan Lab. Kimia Organik

UNY, pengukuran H-NMR, C-NMR dan NMR 20 dilakukan dengan dengan rekan-rekan peneliti di UiTM dan UKM Malaysia.

B. Peralatan dan Bahan 1. Alat Penelitian Spektrum

ultraviolet

(UV)

dan

inframerah

(IR)

rnasing-masing

diukur dengan

spektrofotometer Varian Cary 100 Cone. dan Spectrum One Perkin Elmer. Spektrum 1H dan 13C NMR diukur menggunakan spektrometer JEOL JNM 5000 spectrometer, yang bekerja pada 400 MHz ('H) dan 100 MHz (13C) (UiTM dan UKM Malaysia), dengan menggunakan sinyal residu (1H)

dan pelarut terdeuterasi

('3C)

sebagai

standar.

Kromatografi

cair vakum

(KCV),

kromatografi kolom gravitasi (KKG), kromatografi kolom tekan (KKT), dan kromatografi radial (KR), berturut-turut menggunakan silika gel Merck 60 GF2s4 (230 - 400 mesh), silika gel 60 (35 -

70 mesh), silika gel 60 (200 mesh), dan silika gel 60 PF2s4 (dengan ketebalan plat 0,5, 1, dan 2 mm). Anal isis kromatografi lapis tipis

(KLT) dilakukan pada pelat alumunium berlapis Si gel

Merck Kieselgel 60 GF2s4 0,25 mm.

2. Bahan Penelitian Bahan tumbuhan yang digunakan adalah kulit kayu Kluwih dari tanaman masyarakat di wilayah Delanggu Jawa Tengah.

(A. communis), diperoleh Tumbuhan tersebut telah

diidentifikasi oleh staf Herbarium Fak. Biologi UGM. Sedangkan petarut yang digunakan semuanya berkualitas teknis yang telah didestilasi.

14 -

3. Jalaonya/tahapan Penelitiao Pemecahan masalah dalam penelitian ini dilakukan dengan menggunakan pendekatan yang lazim dalam penelitian untuk penemuan obat herbal terstandar (OHT) yang disarankan oleh BPOM Rl. Tahapan penelitian selengkapnya seperti berikut :

Pada Tahun Pertama, dilakukan 1.

langkah-langkah penelitian :

Uji praklinik in vivo

a. Persiapan hewan uji Tikus betina Sprague-Dawley dipelihara dalam ruangan berventilasi cukup, suhu ruangan 2932 °C, kelembaban 98%, dengan pengaturan gelap terang masing-masing 1 2 jam, makanan dalam bentuk

pellet dan minuman air diberikan secukupnya. Hewan diadaptasikan dalam

kandang selama

I

minggu sebelum perlakuan. Umur tikus sekitar 45-60 hari dan berat badan

1 50-200 g (Susilowati, 2004) b. Pembuatan larutan karsinogen (DMBA dalam soy oil) Beberapa mg DMBA, sesuai dengan dosis, dilarutkan dalam beberapa ml

soy oil. Proses

pelarutan dipercepat dengan vortex. Larutan diberikan kepada hewan uji secara peroral dengan volume tidak melebihi volume maksimal yang diperbolehkan. Larutan DMBA dalam

soy oil ini

selalu dibuat baru, sebelum pemberian terhadap hewan uji (Susilowati, 2004). c. Pembuatan larutan uji dalam Na CMC 0,5% Beberapa mg ekstrak etanol atau fraksi semi polar, sesuai dengan dosis, disuspensikan dengan

sejumlah ml larutan Na CMC 0,5%. Larutan ini diberikan kepada hewan uji secara

peroral dengan volume tidak melebihi volume maksimal yang diperbolehkan. Suspensi ini selalu dibuat baru, sebelum diberikan pada hewan uji (Susilowati, 2004). d. lnduksi karsinogenesis dengan DMBA Setiap kelompok terdiri dari 10 ekor tikus yang telah diinduksi dengan O:MBA 20 mg/200gBB p.o pada saat umur 47 hari. Perlakuan sediaan uj i dan kontrol diberikan secara per oral sejak 7 hari sampai dengan 1 3 minggu setelah pemberian DMBA. l.

Kontrol negatif: 2,5 ml/200 g BB CMC N a 0,5%

2. Kontrol positif : doxorubicin 1,87 mg/200g BB secara i.p tiap 14 hari sebanyak 4 kali pemberian 3 . Sediaan uji dosis 1 : 0,25 mg/200gBB

15-

4. Sediaan uji dosis II: 2,5 mg/200gBB

5. Sediaan uji dosis III : 25 mg/200gBB e.

Pemeriksaan fisik masing-masing mammary gland (6 pasang) dengan pengamatan visual dan

perabaan pada 8-13 minggu setelah induksi kanker. Pada akhir minggu ke-13

setelah

induksi,

tikus dikorbankan dengan menggunakan eter dan besar tumor diukur serta ditirnbang beratnya. f. Pemeriksaan histopatologi dengan metode pengecatan Haematoxillin dan Eosin

Pada akhir pengamatan (minggu ke 13), dilakukan nekropsi terhadap hewan uji. Analisis histopatologi dilakukan terhadap fragment tumor yang terjadi, untuk mengetahui keadaan sitologinya serta tingkat keparahan tumorlkanker yang teijadi. Analisis mikroskopis dilakukan dengan mengamati sifat karsinogenisitas seluler pada jaringan yang diperiksa. Adapun proses pembuatan preparat H & E tersebut adalah sebagai berikut : 1.) Proses jaringan Organ yang akan diperiksa yaitu mammae, paru-paru, dan hepar difiksasi dengan Jarutan formalin 10%, kemudian masing-masing organ tersebut dipotong kira-kira setebal 35 mm. Proses ini dilanjutkan dengan dehidrasi, penjernihan, penembusan, dan blocking dengan paraffin. Jaringan direndam dalam atanol 80% selama 0,5-1 jam, lalu dalam etanol 95% 0,5-2 Jam sebanyak 2x. Jaringan kemudian direndam dalam etanol 100% selama 0,5-2 jam sebanyak 3x, kemduan direndam dalam xylen selama 0,5-2 jam sebanyak 3x, preparat kemudian diblock dengan parafin selama 0,5-2 jam 3x, lalu dipotong dengan ketebalan 5-7 �m. 2). Pengecatan H & E Preparat direndam dalam xylen selama 5 menit 2x, lalu direndam Jagi dalam xylen selama 2 menit. Dilanjutkan dengan direndam dalam etanol 100% 2x dan etanol 95% 2x masing-masing selama 2 menit. Jaringan lalu direndam dalam etanol 70% selama 1 menit, direndam dalam hematoksilin 10 menit, dicelupkan dalam air 4x, alkohol 3-10 x, dialiri air 10 menit. Preparat kemudian direndam dalam eosin 15 detik sampai 2 menit dan dilanjutkan dengan pencelupan dalam etanol 70%, etanol 95% masing-masing lx celupan. Kemudian direndam dalam etanol 100% 2x masing-masing selama 1 men it. Dan dilanjutkan dengan direndam dalam xylen 2 menit sebanyak 3x.

16-

3). Pemeriksaan histologi Pemeriksaan

ini

dilakukan

di

bawah

mikroskop binokuler di

Laboratorium

Diagnostik Fakultas Kedokteran Hewan UGM, Yogyakarta dengan perbesaran

tara 20-40

an

kali, basil diarnati dan terekarn di komputer (Susilowati, 2004).

2.

Standarisasi (identifikasi) ekstrak & fraksi aktif Standarisasi ekstrak (bahan) mengikuti prosedur baku yang telah direkomendasikan oleh BPOM

Rl, yaitu analisis non-spesifik yang meliputi analisis susut pengeringan, bobot jenis,

kadar air, kadar abu, kandungan sisa pelarut, residu pestisida, cemaran logam berat, cemaran mikroba, dan analisis spesifik yang meliputi identitas ekstrak, organoleptik, senyawa terlarut dalam pelarut tertentu, juga uj i kandungan kimia ekstrak. Masing-masing analisis parameter tersebut, mengikuti prosedur yang telah disarankan oleh BPOM Rl.

Berdasarkan kajian dan analisis hasil pengujian praklinik in vivo, dan standarisasi ekstrak tersebut, diharapkan dapat menjadi landasan ilmiah yang kuat tentang pemanfaatan ekstrak kulit kayu Kluwih

i (A. communs

) sebagai salah satu altematif obat herbal terstandar antitumor

payudara.

17-

DIAGRAM ALIR PENELITIAN

TAHUN I

I

I

Persiapan sampel & maserasi

.

Evaporasi & ditimbang ,

I

l

I

Ekstrak total kering

I

Uji praklinik in vivo

I

Standarisasi ekstrak

TARGET TAHUN I :

•

Data uji praklinik in vivo (melengkapi data uji praklinik in vitro yang sebelumnya telah dilakukan) •

Data sifat fisika dan kimia dari ekstrak

•

18-

I

Bab IV. Tujuan dan Manfaat Penelitian

A.Tujuan penelitian

I.

Mempelajari potensi pemanfaatan bahan obat alam asli Indonesia, yaitu kulit kayu

Kluwih(Artocarpus communis J.R.) menjadi obat herbal terstandar antitumor payudara, yang nantinya dapat dipromosikan & dimanfaatkan dalam membantu pengobatan tumor/kanker payudara di masyarakat. 2 . Mendapatkan data ilmiah yang kuat, HKI dan produk OHT antitumor payudara yang berkualitas dari ekstrak kulit kayu

Kluwih, yang nantinya dapat diproduksi oleh mitra

industri jamu/farmasi & dipasarkan kepada masyarakat. 3.

Untuk lebih menggali & memanfaatkan potensi kekayaan hayati (tumbuhan obat) asli Indonesia menjadi produk-produk herbal yang berkualitas & bermanfaat bagi kehidupan dan kesehatan masyarakat, sehingga memberikan pemanfaatan yang lebih baik secara ekonomi maupun medis.

4. Hasi l-h!lsil riset yang diperoleh dapat dijadikan sarana peningkatan & penguatan keijasama lembaga, baik Fakultas Farmasi, LPPM maupun UMS dengan mitra-mitra industri, lembaga riset lain, maupun stakeholder yang lain.

B.Maofaat penelitian

1. Membantu masyarakat terutama bagi penyandang kanker payudara untuk mendapatkan pengobatan yang efektif dengan efek samping yang ringan. 2.

Membantu masyarakat terutama bagi penyandang kanker payudara untuk mendapatkan pengobatan yang efektif dan murah.

19 -

Bab V. Hasil dan Pembahasan

A.

Uji Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Metanol Kulit Kayu Kluwih dengan Metode MIT Artonin E yang merupakan senyawa aktifa yang terkandung dalam Kluwih memiliki

aktivitas sitotoksik terhadap sel kanker T47D (Arung, et al., 2010). Walaupun artonin E merupakan senyawa yang aktif terhadap sel kanker T470 tapi belum diteliti bagaimana aktivitas dari ekstrak kulit kayu Kluwihnya. Pengujian ekstrak penting untuk dilakukan mengingat di lapangan para produsen obat tradisional memproduksi dalam bentuk ekstrak. Oleh karena itu untuk memberikan landasan ilmiah yang kuat terhadap aktivitas sitotoksiknya maka perlu diuji pada set kanker. Pengujian ekstrak kulit kayu kluwih dilakukan pada sel kanker MCF7 yang juga merupakan sel kanker payudara. Metode awal untuk penentuan aktivitas sitotoksik dari ekstrak kulit kayu kluwih yang peneliti usulkan adalah dengan metode

direct counting. Namun berdasarkan evaluasi di

lapangan bahwa metode ini memiliki reliabilitas yang rendah dan subjektivitas yang tinggi. Oleh karena itu yang dipakai untuk mengukur proliferasi sel secara kolorimetri adalah MTT (Doyle and Griffiths, 2000 cit Anggrianti, 2008). Prinsip dari metode MTT adalah terjadinya reduksi garam kuning tetrazolium MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromid) oleh sistem reduktase (Gambar 1).

NADH +H* NAO' + H8t

Gambar 1 . Reaksi reduksi MTT menjadi formazan oleh enzim suksinat dehidrogenase (Mosmann,

1983)

Suksinat tetrazolium yang termasuk dalam rantai respirasi dalam mitokondria sel-sel yang hidup membentuk kristal formazan berwama ungu dan tidak larut air Gambar 2). Penambahan reagen stopper (bersifat detergenik) akan melarutkan kristal berwama ini yang

20 -

kemudian diukur absorbansinya menggunakan ELISA reader. lntensitas warna ungu yang terbentuk proporsional dengan jumlah sel hidup. Sehingga jika intensitas warna ungu semakin besar, maka berarti jumlah sel hidup semakin banyak (Meiyanto, E, 2000.). Hasil dari pengujian ini adalah IC50, yang menggambarkan konsentrasi dari suatu senyawa yang dapat membunuh 50% sel hidup.

Gambar 2. Krista! formazan. Krista! berwarna ungu hasil reduksi garam MTT oleh sistem reduktase suksinat tetra.zolium mitokondria sel hidup. Jumlah kristal formazan yang terbentuk berbanding lurus dengan jumlah sel hidup Pelarut yang digunakan dalam uji sitotoksik ini adalah dimetil sulfoksida (DMSO) merupakan pelarut yang baik untuk ion anorganik maupun organik (Fessenden dan Fessenden, 1993), selain itu DMSO juga tidak toksik terhadap sel (Ojajanegara dan Wahyudi, 2009). Menurut Astirin et al. (2009) penggunaan DMSO dengan konsentrasi 0, 7% tidak mempengaruhi persentase sel hidup dan morfologi sel T470. Konsentrasi DMSO yang digunakan sebagai kontrol pelarut adalah konsentrasi DMSO tertinggi yang terdapat dalam sampel yaitu 0,5%. Tujuan digunakan kontrol pelarut DMSO adalah untuk melihat apakah pelarut mempengaruhi kehidupan sel. Untuk mengurangi kesalahan pembacaan absorbansi digunakan kontrol media sebagai faktor koreksi . •

Set kanker payudara yang digunakan adalah sel MCF7. Sel MCF7 yang hidup memiliki bentuk epitelia seperti daun memanjang dan bergerombol, melekat pada sumuran. Sel yang hidup dapat meneruskan cahaya sehingga akan terlihat terang, sedangkan sel yang mati akan berubah menjadi bulat-bulatan tidak beraturan, mengapung pada media dan terlihat gelap karena tidak bisa meneruskan cahaya. Morfologi sel dapat dilihat dari fotomikroskopik sel MCF7 setelah perlakuan dengan ekstrak metanol kulit kayu kluwih (Gambar 3).

21 -

A

B

c

Gambar 3. Fotomikroskopik Sel MCF7 setelah Perlakuan dengan Ekstrak Metanol Kulit Kayu Kluwih 10 JJg/ m l (B) dan 40 10 ..,g/ ml (C) dibandingkan dengan kontrol sel (A). Tanda -+ menunjukkan sel MCF7 yang hidup dan -+ sel MCF7 yang mati. Peningkatan konsentrasi ekstrak yang diberikan berbanding lurus dengan jumlah kematian sel MCF7 Pengamatan menghitung

efek sitotoksik setetah

persentase

set

hidup

pemberian

(Tabet 1).

pertakuan ditakukan

Setanjutnya

dengan cara

dibuat grafik ( Gambar 4) dan

persamaan regresi tinier antara prosentase sel hidup dengan log konsentrasi untuk menghitung

f

IC50.

14o,ooo

r-

----· ----

Doksorubisin (B)

12o.ooo 100,000 -;---

--

80,000 60,000

40,000

20.000 0,000

�l t

--------...,

--

--

-

K a-yu Ki uwi h-(-A)-----'

Ekstrak Kulit

-

-

----

v = -60

+

147,4

R

.1 ·------------�looi;::--" -� &

' -20,000 -'-

0,5

1

1,5

-

-

Gam bar

f.': '

4.

-

-··----- --

���

----

It

J

Grafik Hubungan Konsentrasi Dengan Prosentase Sel Hidup MCF7. Dalam microplate 96 ditaoam 5.000 sel/sumuran, kemudian diberi perlakuan deogao (A) ekstrak kulit kayu kluwih dan (B) Doksorubisin diiokubasi 24 jam.

Grafik di atas memperlihatkan hubungan yang linier antara persen sel hidup dengan log konsentrasi. Artinya pada range kadar senyawa tersebut memberikan respon yang tinier. Sehingga persamaan regresi yang dihasitk.an dapat diaplikasikan untuk menghitung IC50.

22 -

TabeJ

7.

Prosentase Sel Hidup dengan Perlakuan Ekstrak Kulit Kayu KJuwih dan Doksorubisin

Senyawa

hidup

1

89.Z08

1.477

74.797

1.602

27.337

ml)

2.301

3.963

2.477

4.167

2

114.750

2.176

87.500

2.301

67.378

2.398

23.272

2.477

0.00

·-·

Doksorubisin

(nM)

'

rata-rata % sel

Kayu Kluwih (�

Ekstrak Kulit

,.

Konsentrasi

Persamaan Regresi

Nilai R2

ICSO

Y = -60.73x + 147.4

0.861

40,16

Y = -241.3x +606.5

0.945

202A2

Hasil penelitian didapatkan bahwa ICso dari ekstrak metanol kulit kayu kluwih adalah 40, 1 6 IJg/mL dan doksorubisin adalah 0 , 1 1 1Jg/ml. Aktivitas sitotoksik dari ekstrak metanol kulit

.,'

kayu kluwih karena ada senyawa aktif yaitu Artonin E. Aktivitas sitotoksik doksorubisin masih lebih kuat dan pada ekstrak. Walaupun demikian ekstrak kulit kayu kluwih masih mempunyai kesempatan untuk dikembangkan menjadi senyawa anti kanker karena menurut Meiyanto, dkk (2008) suatu senyawa berpotensi sebagai agen sitotoksik jika nilai IC5o di bawah 100 J.Jg/ml. B. Standardisasi Ekstrak metanol Kulit kayu Kluwih 1 . Penyiapan Simplisia & Ekstraksi Kulit Kayu Kluwih Pada penetapan standardisasi ekstrak, terdiri dari tahap penyiapan ekstrak, penetapan parameter non spesifik dan spesifik. Penyiapan ekstrak dilakukan dengan menggunakan metode maserasi dengan pelarut metanol. Pnnsip dan maserasi itu sendin adalah difusi pelarut organik yang menembus dinding set dan masuk ke dalam rongga set yang mengandung zat aktif, sehingga zat aktif akan larut sampai terjadi kesetimbangan. Hasil maserasi diperoleh rendemen ekstrak sebanyak 1 ,7-3,4 % b/b dan berat serbuk simplisia (Tabel 1). Rendemen tersebut diperoleh dari rendemen ekstrak yang berasal dari tiga daerah, yaitu Klaten, Colomadu, dan Blora.

.r·.

23 -

-�---=.--

Tabel 8. Rata-rata Rendemen Ekstrak MetanoI Kulit Kayu Kluwih Asal Simplisia

Rata-rata Rendemen (n=3)

Klaten

1 ,69 ± 0,29

Blora

2,67 ± 0,86

Colomadu

3,35 ± 0,54

Berdasarkan data di atas maka simplisia yang berasal dari cofomadu memberikan rendemen terbanyak.

Namun

demikian,

belum tentu tingginya

rendemen menunjukkan

kandungan zat aktif yang tinggi juga. 2. Penetapan parameter non spesifik Penentuan parameter spesifik dan non spesifik dalam standardisasi ini menggunakan sampel dari 3 daerah yang berbeda. Tujuan dari variasi tempat berbeda adalah agar dapat diketahui pengaruh faktor eksternal, khususnya untuk lokasi asal tumbuhan, terhadap mutu ekstrak. Perbedaan lokasi asal tumbuhan dapat mempengaruhi jenis dan jumlah senyawa kimia yang terkandung di dalam tanaman. Hal tersebut disebabkan karena unsur hara yang terkandung di dalam tanah pada tiap daerah tidak sama, sehingga kandungan unsur hara yang berbeda memuf1gkinkan terbentuk senyawa kimia yang berbeda pula (Anonim, 2000). Hasil dari penetapan parameter non spesifik dari ekstrak kulit kayu Kluwih, sebagai berikut : Tabel 9. Rekapitulasi penetapan parameter non spesifik ekstrak kulit kayu Kluwih Parameter

Hasil (n=3)

Susutpengeringan(% bib) Bobotjenis(g/ml) Kadar Abu Total (% b/b) Kadar abu tidak larut asam (%bib)

Klaten 3,6723 ± 0, 1 g24 1 ,0034± 0,0135 7,5815 ± 0,2879 0,1 958 ± 0,0245

Colomadu 6,0138± 1 '1963 1,0180 ± 0,0167 3,0568 ± 0,0709 0,0599 ± 0,0099

Blora 12,8189 ± 2,0317 1 ,0066 ± 0,0191 3,2864 ± 0,0852 0,2587± 0,0128

Kadar air(%) Sisapelarut(%)

1 ,3000±0 , 1 1 55 Tidak terdeteksi

2,3000±0,1528 Tidak terdeteksi

7,0000±0,2000 Tidak terdeteksi

Parameter susut pengeringan

memberikan

batasan

maksimal

(rentang)

tentang

senyawa yang hilang pada proses pengeringan. Selama proses pengeringan terjadi proses penguapan dari air maupun senyawa-senyawa lain terutama yang bersifat mudah menguap

(volatile), sehingga yang tersisa berupa padatan yang merupakan senyawa-senyawa yang tidak teruapkan. Hasil yang didapatkan pada penetapan parameter ini sebesar 3,6-12,8% bib (fabel 2). Berdasarkan Voigt (1 984) bahwa maksimal susut pengeringan ekstrak kering kurang dari 15%, maka parameter susut pengeringan memenuhi kriteria standar.

24 -

Parameter bobot jenis menggambarkan besarnya massa persatuan vofume untuk memberikan batasan antara ekstrak cair dan ekstrak kental (Anonim, 2000).

Hasil yang

diperoleh sebesar 1 , 0034-1,0180 b/v (Tabel 2), menunjukkan bahwa bobot jenis ektrak lebih besar dibanding bobot jenis air (BJ air: 1 ,00 blv). Parameter bobot Jenis juga terkait dengan kemumian ekstrak dan kontaminasi. Ekstrak yang terkontaminasi dengan cemaran seperti logam berat atau ekstrak lain dimungkinkan memiliki bobot jenis yang berbeda dari bobot jenis ekstrak yang sebenamya. Parameter bobot jenis jika dihubungkan dengan parameter kadar senyawa terlarut menunjukkan adanya korelasi, dimana jika volume pengukuran tetap, maka semakin besar bobot jenis yang terukur, kadar senyawa yang tertarut dalam pelarut yang digunakan semakin besar pula. Hal ini disebabkan karena bobot jenis ekstrak diperoleh dari adanya senyawa yang terlarut di dalam pelarut yang digunakan. Penentuan parameter kadar abu bertujuan untuk memberikan gambaran kandungan mineral

internal dan

eksternal.

Jika

ekstrak dipanaskan maka

senyawa

organik akan

terdestruksi. Sebagian besar Senyawa hidrokarbon akan berubah menjadi gas karbon dioksida hidrogen dan oksigen menjadi uap air, dan nitrogen menjadi uap nitrogen, sedangkan sebagian senyawa anorganik akan tertinggal dalam bentuk abu berupa mineral atau garam mineral (Arifin, 2008). K�dar abu total ekstrak yang didapat sebesar 3,06-7,58% bib, sedangkan kadar abu yang tidak larut dalam asam diperoleh hasil sebesar 0,06-0,26% bib (Tabel 2). Hal ini menunjukan bahwa sisa senyawa anorgan ik berupa mineral atau garam mineral yang terdapat dalam ekstrak sebesar 3,06-7,58 % dan kadar unsur anorganik yang tidak larut dalam asam sebesar 0,06-0,26 % dari bobot awal penimbangan ekstrak. Adanya kandungan abu yang tidak larut dalam asam menunjukkan adanya pasir atau kotoran yang lain (Sudarmadji, 1989). Parameter lain yang menunjukkan stabilitas dan mtu dari suatu ekstrak adalah kadar air. Kadar air dalam ekstrak sangat mempengaruhi kualitas dan daya simpan dari ekstrak tersebut. Ekstrak yang mengandung air lebih dari 30% akan mudah ditumbuhi oleh jamur (Voigt, 1984). Menurut literatur lain kadar air dalam ekstrak tidak boleh lebih dari 10%, karena ekstrak dengan kadar air lebih dari 10% juga berpotensi ditumbuhi jamur (Soetamo dan Soediro, 1997, cit Helmi et a/., 2006). Oleh karena itu, penentuan kadar air dari ekstrak penting untuk ditetapkan. Pada penelitian ini penetapan kadar air dalam ekstrak dilakukan dengan metode destilasi toluen. Toluen merupakan suatu pelarut organik yang bersifat non polar dengan bobot jenis 0,87 g/ml, memiliki titik didih 1 1 ooc dan tidak larut dalam air (Moffat, 2005). Bila toluen dicampur dengan air akan terbentuk dua lapisan terpisah, air akan berada pada lapisan bawah karena bobot jenis air lebih besar dibanding toluen. Kadar air dalam ekstrak diperoleh 1 , 3-7,0 %

(Tabel 2). Kadar air terse but memenuhi persyaratan, dan berdasarkan pembagian jenis ekstrak

25 -

(Voight, 1 984), ekstrak yang berasal dari Klaten dan Colomadu termasuk dalam ekstrak kering, sedangkan ekstrak dari Blora merupakan ekstrak kental. Penetapan parameter lain yang berpengaruh pada keamanan ekstrakl toksisitas adalah sisa pelarut khususnya pelarut organik. Mengingat metanol sebagai pelarut merupakan senyawa organik yang memiliki toksisitas yang tinggi. Metanol dalam jumlah kecil dapat menyebabkan kebutaan hingga kematian (Moffat, 2005). Oleh karena itu, parameter sisa pelarut harus ditetapkan untuk memberikan jaminan bahwa selama proses tidak meninggalkan sisa peJarut. Penetapan parameter sisa pelarut menggunakan metode destilasi dengan pemanasan pada suhu titik didih metanol (TO metanol: 64,-r'C). Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa di dalam ekstrak dari tiap daerah tidak terdeteksi adanya sisa pelarut dengan menggunakan metode destilasi. Hal ini karena residu yang kecil tidak dapat terdeteksi oleh prosedur standar biasa tapi harus menggunakan metode yang lebih sensitive seperti kromatografi gas.

3. Parameter Spesifik Parameter spesifik dari suatu ekstrak sangat diperlukan karena mempengaruhi efek farmakologinya. Penetapan parameter spesifik terdiri dari organoleptik, profit kromatogram dan kadar chemical marker.

Penentuan organoleptik ditentukan dengan menggunakan panca

indera. Tuj uannya adalah untuk pengenalan awal secara sederhana dan subjektif. Dari pengamatan didapatkan hasil: ekstrak berkosistensi kering, berwama coklat tua, berbau khas dan rasa pahit (Tabel 3). Wama ekstrak dari tiap-tiap daerah menunjukkan ciri yang berbeda dimana diduga ekstrak dari tiap daerah memiliki kandungan senyawa yang berbeda-beda . Dugaan tersebut dapat diverifikasi dengan menetapkan parameter pola kromatogram ekstrak.

Tabel 10. Rekapitulasi Penetapan Parameter Spesifik Ekstrak Kulit Kayu Kluwih Hasil

Parameter

Blora

Klaten coklat­ kehitaman bau khas pahit kering

Colomadu coklat­ kekuningan bau khas pahit kering

coklat­ kemerahanbau khas pahit kental

Senyawa terlarut air

21 ,0231±1 ,5402

12,51 87±0,5495

1 3,491 0±0,6801

Senyawa terlarut etanol

92,6871 ±1 ,9873

92,6458±0,9961

65,3301±2,1079

0,4476±0,0105

3,4146±0,3079

1 ,3584±0,0799

Organoleptis: Bentuk

Warna

Bau

Rasa

Kadar chemical marker (Artonin E)

Parameter pola kromatogram menunjukkan gambaran awal komposisi kandungan kimia

26-

berdasarkan pola kromatogramnya, khususnya untuk memastikan bahwa senyawa aktif yang diinginkan benar terkandung dalam ekstrak. Selain itu pola kromatogram dapat mencegah pemalsuan terhadap simplisia (Helmi et a/., 2006). Senyawa pembanding/ chemical marker yang digunakan yaitu artonin E (Gambar 5. )

.

0

OH

0

Gambar 5. Senyawa identitas Artoni E Chemical marker dikategorikan dalam 4 kelompok, yaitu zat aktif, senyawa khas (unique compound), senyawa terbanyak (mayor compound) dan senyawa aktual. Berdasarkan kategori pemilihannya, artonin E merupakan senyawa aktif dalam ekstrak kulit kayu kluwih yang telah terbukti memiliki beberapa aktifitas antara lain efek sitotoksik kuat terhadap 1 1 jenis sel tumor terutama terhadap set P-388 (Wang et a/., 2004; Seo et a/., 2003; Suhartati et a/., 2001), sebagai inhibitor kuat pada proses pembetahan rantai DNA (Seo et a/. , 2003), dan menurunkan sekresi protein pada penyakit glomerural (Fukai et al., 2003). Profit kromatogram memberikan gambaran awal mengenai kandungan senyawa yang terdapat dalam sampel. Parameter ini juga dapat digunakan untuk memastikan adanya senyawa marker di datam ekstrak. Pada profit kromatogram menunjukkan perbedaan komposisi senyawa dalam ekstrak dari masing-masing daerah. Perbedaan komposisi tersebut terlihat dan jumlah spot pada masing-masing ekstrak. Pada ekstrak dari daerah Klaten terdin dan 6 spot, sedangkan untuk daerah Cotomadu dan Blora masing-masing terdapat 7 spot dengan fase gerak heksan:etil asetat:asam formiat (6:4:0,5) (Tabel 4). Pada pembanding artonin E terdapat 4 spot, hal ini dimungkinan karena artonin E tidak stabil dan mudah terdegradasi. Spot dengan intensitas paling besar dianggap sebagai senyawa artonin E yang berada pada Rf 0,14. Hasil pola kromatogram ekstrak dari tiga daerah memitiki spot pada Rf yang sama dengan artonin E, hal tersebut menunjukkan bahwa ketiga ekstrak mengandung artonin E (Gambar 6).

27 -

K

P

C

1

R

2

3

Gambar 6. Profil Kromatografi ekstrak metanol kulit kayu kluwih dari tiga daerah yaitu Klaten (K), Colomadu ©, dan Blora (B) dengan pembanding aronin E (P). Fase gerak : heksan:etil asetat:asam formiat (6:4:0,5) dan fase diam silica gel GF254. Pengamatan dilakukan pada (1) sinar tampak (artonin E berwama kecoklatan), (2) uv 254 nm (artonin E memadamkan fluoresensi) dan (3) UV 366 nm setelah disemprot dengan sitroborat (artonin E berfluoresensi coklat-orange). Tabel 1 1 . Rekapitulasi Profil kromatogram Ekstrak kulit kayu kluwih dan Marker Asai Bahan

Marker

•

Klaten

Colomadu

Nilai Rf 0,09 0,14 0,17 0 28 0,14 0,17 0,30 0,69 0,84 0,89 0,09 0,14 0,17 0,30

Penampakan pada sinar tampak

Kuning-coklat

Kuning-coklat Kuning-coklat Kuning-coklat

Kuning-coklat Kuning-coklat Kuning-coklat

28 -

Penampakkan pada UV 254 nm Pemadaman Pemadaman Pemadaman Pemadaman Pemadaman Pemadaman Pemadaman Pemadaman Pemadaman Pemadaman Pemadaman Pemadaman Pemadaman Pemadaman

Penampakkan pada UV 366 nm+sitroborat Coklat-orange

Coklat-orange Coklat-orange Kuning-biru Kuning Kuning Kuning Coklat Coklat-orange Coklat-orange Kuning-biru

Blora

0,69

Pemadaman

0,84

Pemadaman

Kuning

0,89

Pemadaman

Kuning

0,09

Kuning

Pemadaman

Coklat

Kuning-coklat

Pemadaman

Coklat-orange

0,1 7

Kuning-coklat

Pemadaman

Coklat-orange

0,30

Kuning-coklat

Pemadaman

Kuning-biru

0,69

Pemadaman

Kuning

0,84

Pemadaman

Kuning

0,89

Pemadaman

Kuning

0,14

Artonin E merupakan suatu senyawa flavonoid jenis flavon yang terprenilasi. Hasil KLT menunjukkan bahwa artonin E berwama kuning kecoklatan pada sinar tampak, pemadaman dibawah sinar UV 254 nm dan sitroborat.

Sitroborat digunakan

berfluorosensi coklat-orange setelah disemprot dengan sebagai

peraksi

penegas adanya

Sitroborat dan artonin E akan membentuk komplek karena artonin

flavanoid

pada

KLT.

E termasuk dalam flavanoid

yang memiliki gugus OH pada posisi orto (Gambar.3). Komplek antara sitroborat dan artonin E menyebabkan fluoresensi coklat-orange akibat penambahan gugus auksokrom pada ikatan antara Boron dan dua gugus OH pada flavonoid, sehingga panjang gelombang bergeer ke arah yang lebih panjang. Selain nilai Rf artonin E. dari pola kromatogram dapat diketahui pula .

gambaran awal mengenai kandungan senyawa yang terdapat dalam sampel.

Gambar 7. Reaksi antara Artonin E dengan Sitroborat

· ·\.

Kadar marker merupakan salah satu parameter spesifik yang bertanggung jawab terhadap efikasi, untuk menjamin jumlah kandungan zat aktif di dalam ekstrak. Kadar chemical marker dari ekstrak kulit kayu kluwih yaitu artonin

E ditetapkan dengan metode densitometri.

Ada beberapa syarat yang harus dipenuhi agar pembacaan dengan densitometri memberikan hasil yang

baik,

antara

lain

marker merupakan

senyawa

mumi

atau

sudah

diketahui

kemumiaannya, setidaknya senyawa marker pada ekstrak muncu\ sebagai bercak terpisah, dan pembacaan dengan densitometri menghasilkan bentuk peak yang simetris. Optimasi KLT, senyawa artonin E muncul sebagai 4 bercak yang terpisah. Hal ini menunjukkan bahwa artonin E yang digunakan tidak mumi. Sebagai pendekatan, puncak dengan luas area terbesar dianggap sebagai artonin E. Kurva baku yang diperoleh dari 5 seri

29 -

kadar artonin E yaitu y

=

6.593,67x - 45,289 memberikan koefisien korelasi sebesar 0,9907.

Hasil pengukuran secara densitometri menunjukkan bahwa kadar artonin E dari ekstrak metanol kulit kayu kluwih berkisar antara 0,45-3,41% bib (fabel 4.). Berdasarkan uji statistik, kadar marker yang diperoleh menunjukkan hasil yang berbeda bermakna antar daerah. Hal ini menunjukkan perbedaan kandungan marker dari tiap daerah, sehingga perbedaan asal tanaman sangat mempengaruhi kadar senyawa marker. Kadar senyawa yang terlarut da/am air adalah 12,52-21,02% bib dan kadar senyawa yang terlarut dalam etanol adalah 65,33-92,69% bib (Tabel 4). Hal ini berarti senyawa dalam ekstrak lebih banyak terlarut dalam etanol dibandingkan dalam air, sehingga dapat diketahui bahwa kadar senyawa kurang polar yang terkandung di dalam ekstrak lebih banyak dibandingkan kadar senyawa yang lebih polar. Senyawa artonin E merupakan flavanoid aglikon yang bersifat kurang polar, sehingga lebih mudah larut dalam etanol. Jika dihubungkan antara kadar marker dari tiga daerah dengan senyawa larut etanol tidak menunjukkan adanya korelasi, sebab dengan kadar senyawa larut etanol yang besar bukan berarti senyawa artonin E yang terlarut juga lebih banyak. Kadar zat terlarut dalam pelarut tertentu ini merupakan uji kemurnian ekstrak yang dilakukan untuk mengetahui jumlah senyawa kimia kandungan ekstrak yang teriarut dalam pelarut tertentu (Anonim, 2000). C.Aktivitas Ekstrak Kulit Kayu Kluwih terhadap Kanker Payudara yang Diinduksi DMBA Setelah terlihat potensi aktivitas antikankernya berdasarkan nilai ICSO, maka ekstrak kulit kayu kluwih diuji aktivitas terhadap kanker payudara dengan model in vivo. Pembuatan model kanker

payudara

pada

penelitian

ini

menggunakan

senyawa

karsinogen

7,12-

dimetilbenz(a)antrasen (DMBA), karena DMBA merupakan senyawa karsinogen yang spesifik untuk pembuatan model tumor mamae pada hewan percobaan jika diberikan secara peroral (intragastric) (Kubatka et al., 2002). Dan ada beberapa faktor yang mempengaruhi induksi

karsinogenesis mamae pada tikus betina, yaitu umur, galur (strain), dosis, dan waktu pemberian ..

karsiogen, pola sistem imun, status sistem endokrin dan pakan (Kubatka eta/. 2002) . Untuk nekropsi tikus dilakukan 2 kali yakni sekitar 2 minggu setelah induksi DMBA terakhir dan sekitar 7 minggu setelah induksi DMBA terakhir. Untuk nekropsi yang pertama sebenamya tidak direncanakan dalam penelitian, namun karena kepentingan laporan Risbin pada pertemuan di Bali bulan Desember 201 1 , maka nekropsi pada 2 minggu setelah induksi terakhir DMBA dilakukan, sedangkan nekropsi pada 7 minggu setelah induksi DMBA terakhir, dilakukan

30 -

selain untuk pengumpulan terakhir laporan juga hal ini sesuai dengan pengalaman empirik bahwa kanker payudara mulai muncul pada waktu-waktu tersebut. Hasil penellitian in vivo secara makroskopis pada 2 minggu setetah induksi DMBA terakhir yakni sebagai berikut. Tabel 12. Gambaran makroskopik tikus yang diinduksi DMBA Kelompok Per1akuan Kontrol Negatif Kontrol positif

Palpasi

Waktu muncul

Teraba glandula mamae perbesaran di bawah leher

2 minggu setelah induksi

Per1akuan ekstrak dosis 0,4 m91 200g 88 Perlakuan ekstrak dosis 4 mg/ 2009 88 Per1akuan ekstrak dosis 40 mg/ 200 g88 : tidak teraba Hasil penelitian in vivo secara mikroskopis pada 2 minggu setelah induksi DM8A terakhir yakni sebagai berikut. Tabel 13. Gambaran mikroskopis tikus yang diinduksi DM8A pada 2 minggu setelah induksi _ DM8A terakhir Kelompok Per1akuan Kontrol Negatif

Hasil Pembacaan Preparat Stadium awal adenokarsinoma

Kontrolpositif Per1akuan ekstrak dosis 0,4 mg/ 2009 88

Adenokarsinoma

Per1akuan ekstrak dosis 4 mgt 200 88 Per1akuan ekstrak dosis 40 mgt 2009 88

Stadium awal adenokarsinoma

Normal

Stadium awal adenokarsinoma

•

Hasil penellitian in vivo secara makroskopis pada yakni, pada masing-masing kelompok teraba benjolan.

31 -

7 minggu setelah induksi DMBA terakhir

Hasil penelitian in vivo secara mikroskopis pada 7 minggu setelah induksi DMBA terakhir yakni sebagai berikut. Tabel 14. Gambaran mikroskopis tikus yang diinduksi DMBA pada 7 minggu setelah induksi DMBA terakhir Kelompok Perlakuan Hasil Pembacaan Preparat Kontrol Negatif Stadium awal adenokarsinoma Kontrolpositif Stadium awal adenokarsinoma Perlakuan ekstrak dosis 0,4 mgt Stadium awal adenokarsinoma 200 g BB Perlakuan ekstrak dosis 4 mgt 200 Stadium awal adenokarsinoma 88

Perlakuan ekstrak dosis 40 mgt 200g BB

Stadium awal adenokarsinoma

Dari gambaran makroskopis maupun mikroskopis

tersebut secara umum dapat

disimpulkan bahwa semua kelompok muncul stadium awal adenokarsinoma. Dari hasil ini maka pada penelitian ini, ekstrak kulit kayu kluwih tidak menghambat pertumbuhan kanker payudara. Oleh karena tidak terdapat penghambatan kanker payudara dari ekstrak kulit kayu kluwih, maka penelitian untuk mengetahui mekanisme penghambatannya tidak dilakukan .

•

32 -

-

--

Bab VJ. Kesimpulan d.an

S aran

A.Kesimpulan 1.

Besamya aktivitas sitotoksik (1Cs0) ekstrak metanol kulit kayu kluwih sebesar 40, 1 6 J.lg/ml.

2. Nilai parameter non spesifik dari ekstrak metanol kulit kayu kluwih diperoleh nilai susut pengeringan sebesar 3,6-12,8%; bobot jenis ekstrak sebesar 1 , 0034-1 ,01 80g/ml, kadar abu total 3,06-7,58%, kadar abu larut asam 0,06-0,26%, kadar air dalam ekstrak sebesar 1 ,3-7,0% dan tidak terdeteksi adanya sisa pelarut dalam ektrak dari tiap daerah. 3.

Nilai parameter spesifik dari ekstrak metanol kulit kayu kluwih adalah organoleptik ekstrak: ekstrak kering, berwarna coklat tua, bau khas dan rasa pahit; kelarutan dalam air 12,5221 ,02% dan kelarutan dalam etanol 65,33-92,69%; pola kromatogram ekstrak dengan fase gerak heksan:etil asetat:asam formiat (6:4:0,5) pembanding artonin E berada pada Rf 0,14 dan kadar chemical marker (artonin

E) dalam ekstrak sebesar 0,4476-3,4146% b/b.

4 . Tidak terda J?at penghambatan kanker payudara dari ekstrak kulit kayu kluwih pada uji in vivo.

B.Saran 1.

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan model pengujian yang sudah baku, seperti memakai kanker pada mencit C3H

•

33 -

DAFTAR PUSTAKA

•

Aida, M., Yamaguchi, N., Hano, Y., Nomura, T., {1997), Constituents of the Moraceae plants, 30. Artonols A, B, C, D, and E, five new isoprenylated phenols from the bark of Artocarpus communis Forst, Heterocycles, Vol. 45, 163-175. Alejandra, E.R., Guardia, T., Juarez, A.O., de Ia Rocha, N.E., Pelzer, L.E., {2003), Comparative study of flavonoids in experimental models of inflammation, Pharmacol. Res., 48, 601606. Apsari, 2007, Efek Sitotoksik Fraksi Semipolar Ekstrak Metanol Kulit Batang Kluwih (Artocarpus altilis Park) Terhadap Sel He/a dan Profit Kromatografi Lapis Tipisnya, Skripsi, Fakultas Farmasi UMS, Surakarta. Barros, A.C.S.D., Muranaka, E. N. K., Mori, L.J., Pelizon, C. H. T., Iriya, K., Giocondo, G. and Pinotti, J.A., (2004), Induction of experimental mammary carcinogenesis in rats with 7,1 2-dimethylbenz(a)anthracene, REV. HOSP. CLfN. FAC. MED. S. PA ULO, 59 (5), 257-261 Boonlaksiri, C., Oonanant, W., Kongsaeree, P., Kittakoop, P., Tanticharoen, M., Thebtaranonth, Y., (2000), An antimalarial stilbene from Artocarpus integer, Phytochemistry, 54, 4154 1 7. Chan, S-C., Ko, H-H., Lin, C-N., (2003), New prenylflavonoids from Artocarpus communis, J. Nat. Prod., Vol 66, 427-430. Chen, C.C., Huang, Y.L., Ou, J.C., Lin, C.F., Pan, T.M., ( 1 993), Three new pyranoflavones from ArtocarpiLs altilis, J. Nat. Prod., 56, 1594-1597. Cidade, H.M., Nacimento, M.S.J., Pinto, M.M.M., Kiljoa, A., Silva, A.M.S., Herz, W., (2001), Artelastocarpin and carpelastofuran, two new flavones, and cytotoxicities of prenyl flavonoids from Artocarpus elastic-us against three cancer cell lines.,· Planta Med., 67, 867-870. Fujimoto, Y., Agusutein, S., Made, S., ( 1987), Isolation of a chalcone derivative and antitumor compositions containing it, Jpn.Kokai Tokkyo Koho, 5 hal. . Fujimoto, Y., Uzawa, J., Suhanda, S., Soemartono, A., Sumatra, M., Koshihara, Y., ( 1 987), Isolation and structural elucidation of new lipoxygenase inhibitors from Indonesian i 29, 721-728. Artocarpus communis, Tennen Yuki Kagobutsu Toronkai Koen Yoshshu, Fujimoto, Y., Zhang, X.X., Kirisawa, M., Uzawa, J., Sumatra, M., (1990), New flavones from A rtocarpus communis Forst, Chem, Pharm. BUll., Vol. 38, 1 787-1789. Fukai, T., Satoh, K., Nomura, T., Sakagami, H., (2003), Antinephritis and radical scavenging activity ofprenyflavonoids, Fitoterapia, 74, 720-724 . Hakim, E.H., Asnizar, Y., Aimi, N., Kitajima, M., Takayama, H., (2002), Artoindonesianin P, a new prenylated flavone with cytotoxic activity from Artocarpus lanceifolius, Fitoterapia, 73, 668-673. Hakim, E.H., Fahriyati, A., Mulhimah, S., Achmad, S.A., Makmur, L., Ghisalberti, E.L., Nomura, T., (1999), Artoindonesianins A and B, two new prenylated flavones from the root ofA rtocarpus champeden, J. Nat. Prod., 62, 61 3-615. Hakim, E.H., Juliawaty, L.D., Syah, Y.M., Achmad, S.A., (2005), . Molecular diversity of Artocarpus champeden (Moraceae) : A species endemic to Indonesia, Mol. Divers., 9, " 149-158.

34 -

Hano, Y., Yamagami, Y., Kobayash i, M , Isohata, R., Nomura, T., ( 1 990), Artonins E and F, two new prenylflavones from the bark ofArtocarpus communis Forst, Heterocycles, 3 1 , 877882. Henderson IC. Kanker payudara. Dalam: Harrison prinsip-prinsip ilmu penyakit dalam. (2000). Edisi 1 3 volume. Alih bahasa dan editor: Asdie AH. Jakarta: EGC;. 2045-2056. Heyne, K., ( 1 987), "Tumbuhan Berguna Indonesia II", Badan Penelitian dan Pengembangan Hutan, Departemen Kebutanan Republik Indonesia, hal. 670-673. Jarret, F.M., ( 1 960), Studied in Artocarpus and allied genera. IV. A revision Artocarpus subgenera Artocarpus, J. Arnold Arbor., Vol. 4 1 , 73-320. Jayasinghe, U.L.B., Puvanendran, S., Hara, N., Fujimoto,

Y., (2004), Stilbene derivatives with

antifungal and rad ical scavenging properties from the stem bark of Artocarpus nobilis, Nat. Prod Res. 1 8, 571 -574. Kanzaki, S., Yonemari, K., Sugiura, A., Subhadrabandbu, S., ( 1997), Phylogenetic relationships between the jackfruit, the breadfruit and nine other Artocarpus spp. From RFLP analysis of an amplified region og cpDNA, Sci. Hortic. (Amsterdam), 70, 57-6. Khasanah, U., 2007, Efek Sitotoksik Fraksi Polar Ekstrak Metanol Kulit Satang Kluwih (Artocarpus altilis Park) Terhadap Sel Hela Dan Profil Kromatografi Lapis Tipisnya, Skripsi, Fakultas Farmasi UMS, Surakarta.

Ko, F.N., Cheng, Z.J., Lin, C.N., Teng, C.M., (1 998), Scavenger and antioxidant properties of prenylflavones isolated from Artocarpus heterophyllus, Free Radical Bioi. Med., 25, 160-168. Ko, H-H., Lu, Y-H., Yang, S-Z., Won, S-J., Lin, C-N., (2005), Cytotoxic prenyltlavonoids from Artocarpus elasticus, J. Nat. Prod, 68, 1692-1 695.

Koj ima, H., Chikamatsu, Y., Ando, H., Kondo, M., Naito, T., (1 996), Cosmetic, preservative or antimicrobial compositions containing artocarpin and/or sophoratlavanone

G, Jpn. Kokai

Tokkyo Koho, 1 2 hal. Koshihara, Y., Fujimoto, Y., Inoue, H., ( 1 988), A new 5-lipoxygenase selective inhibitor derived from .Artocarpus communis strongly inhibits arachidonic acid-induced ear edema, Biochem. Pharmacol. , 37, 2 1 6 1-2165. Kurdi, V.A., (200 1), Artoindonesianin Z, suatu senyawa baru turunan 2-arilbenzofuran dari kayu akar Artocarpus altilis (Park.) Fosb., Tesis S2, Institut Teknologi Bandung Lin, C.N. and Shieh,

W.L., ( 1 99 1 ), Pyranoflavonoids and a pyranodihydrobenzoxanthone irom

Artocarpus communis, Phytochemistry, Vol. 30, 1669- 1 6 7 1 .

Lin, C.N. and Shieh,

W.L., ( 1 992), The bioactive principles of Formosan

Artocarpus spesies.

Part. 4. Pyranoflavonoids from Artocarpus communis, Phytochemi stry, Vol. 3 1 , 29222924. •

Lin, C.N., Shieh, spesies�

W.L., Jong, T.T., ( 1 992), The bioactive principles of Formosan

Part.

3.

A

pyranodihydrobenzoxanthone

from

Artocarpus

Artocarpus communis,

Phytochemstry, i Vol. 3 1 , 2563-2564. Nakano,

J.

and

Uchida,

K.,

( 1 990),

Preparation

of

2-geranyl-3,4,2' ,4'-

tetrabydroxydihydrochalcone and its intermediates, Jpn. Kokai Tokkyo, Koho, 1 7 bal. Nakano, J., Uchida, K., Fujimoto, Y., ( 1 989), An efficient total synthesis of AC-5- 1 , a novel 5lipoxygenase inhibitor isolated from Artocarpus communis, Heterocycles, 29, 427-430. Nomura, T., Hano, Y., Aida, M., ( 1 999), Isoprenoid substituted flavonoids from Artocarpus plants (Moraceae), Heterocycles, 47, 1 1 79-1 204.

35 -

Patil, A.D., Freyer, A.J., Killmer, L., Offen, P., Taylor, P.B., Votta, B.J., Johnson, R.K., (2002), A new dimeric dihydrochalcone and a new prenylated flavone from the bud covers of Artocarpus altilis: potent inhibitors of cathepsin K, J. Nat. Prod., 65, 624-627. Rajendran, M., Manisankar, P.,

Gandhidasan, R., Murugesan, R., (2004), Free radicals

scavenging efficiency of a few naturally occurring flavonoids

•

A comparative study, J.

Agric. Food Chem., 52, 7389-7394. Salasiah, 2007, Efek Sitotoksik Ekstrak Metanol Kulit Batang Kluwih (Artocarpus altiU s Park) Terhadap Sel He/a dan Profil Kromatografi Lapis Tipisnya, Skripsi, Fakultas Farmasi VMS, Surakarta. Sarjadi dan Trihartini P., (200 1), Cancer registration in Indonesia. Asian Pasific Journal Cancer Prevention. IACR Supplement. 2, 2 1 -24. Sarjadi, Padmi T, Pawitra I. (200 1 ) Insiden kanker penduduk Semarang tahun 1 990-1 999. Media Medika Indonesia, 36,15-21 Sato, M., Fuj iwara, S., Tsuchiya, H., Fujii, T., linuma, M., Tosak, H., Ohkawa, Y., ( 1996), Flavones with antibacterial activity against cariogenic bacteria, J. Ethnopharmacol., 54, 1 7 1 - 176. Seo, E-K., Lee, D., Shin, Y.G., Chai, H-B., Navarro, H.A., Kardono., L.B.S., Rahman, 1., Cordell, G.A., Farnsworth, N.R., Pezzuto, J.M., Kinghorn, A.D., Wani, M.C., Wall, M.E., (2003), Bioactive prenylated flavonoids from the stem bark of Artocarpus kemando, Arch. Pharmacol. Res. , 26, 124-127. Shieh,

W.L.

and

Lin,

C.N.,

(1991),

pyranodihydrobenzoxanthone from

A

quinonoid

pyranobenzoxanthone

and

Artocarpus communis, Phytochemi stry, Vol. 30,

364-367. Shimizu, K., Kondo, R., Sakai, K., Buabarn, S., D i lokkunanant, U., (2000), 50-reductase inhibitory component from leaves ofArtocarpus altilis, J. Wood Sci. , 46, 385-389. Shimizu, K., Kondo, R., Sakai, K., Buabarn, S., Di lokkunanant, U., (2000), A geranylated chalcone

with

50 -reductase

inhib itory

properties

from

Artocarpus

incisus,

Phytochemi stry, 54, 737-739. Suhartati, T., Achmad, S.A., Aimi, N., Hakim, E.H., Kitajima, M., Takayama, H., Takeya, K., (200 I ), Artoindonesianin L, a new prenylated flavone with cytotoxic activity from Artocarpus rotunda, Fitoterapia, 72, 912-918. Susilowati, S., (2004), Efek kemopreventif ekstrak etanol daun Gynura procumoens (Lour) Merr terhadap kanker payudara tikus yang diinduksi 7, 12-Dimetilbenz(a)antrasen (DMBA), Tesis, UGM, Jogjakarta. Syah, Y.M., (2005), Fitokimia, kemotaksonomi dan sifat biologis metabolit sekunder dari tanaman Sukun (Kelewih), Bulletin of The Indonesian Society of Natural Product Chemstry, i 5(2), July-December, 33-50. Wang, Y-H., Hou, A-J., Chen, L., Chen, D-F., Sun, H-D., Zhao, Q-S., Bastow, K.F., Nakanish, Y ., Wang, X-H., Lee, K-H., (2004), New isoprenylated flavones, artochamins A-E, and cytotoxic principles from Artocarpus chama, J. NaL Prod., 67, 757-76 1 . We, 8-L., Weng, J-R., Chiu, P-H., Hung, C-F., Wang, J-P., Lin, C-N., (2005), Antiinflammatory tlavonoids from Artocarpus heterophyllus and Artocarpus communis, J. Agric. Food Chem. , 53, 3867-387 1 .

36 -

Lampiran A.Gambar-gambar penelitian

Ekstrak kulit kayu kluwih

Pemberian DMBA peroral

•

Tilrus percobaan

37 .

Jaringan siap dibawa ke PA

38-

B.Gambaran histologi minggu ke-2 setelah induksi DMBA terakhir

Kelompok DMBA (kontrol negatif)

Kelompok DMBA + Tamoxifen (kontrol positif)

•

Kelompok DMBA + 0,4 (ekstrak kulit kayu kluwih)

39-

Kelompok DMBA + 4 (ekstrak kulit kayu kluwih)

Kelompok DMBA +40 (ekstrak kulit kayu kluwih)

40 -

C.Gambaran histologi minggu ke-7 setelah induksi DMBA terakhir

Kelompok DMBA (kontrol negatit)

Kelompok DMBA + Tamoxifen (kontrol positit)

Kelompok DMBA + 0,4 (ekstrak kulit kayu kluwih)

41

•

Kelompok DMBA + 4 (ekstr"ak kulit kayu kluwih)

Kelompok DMBA + 40 (ekstrak kulit kayu kluwih)

"

42 -

O.Personalia peneliti 1.

Ketua a. Nam·a Lengkap b. c.

NIP

: Laki-laki : 1002

d.

Pangkat!Golongan

: Ill 8

e.

Jabatan Fungsional

: Asisten ahli

f. g.

2.

Jenis Kelamin

: dr Burhannudin lchsan, M.Med.ed

Program studi Perguruan tinggi

: Kedokteran Umum : Universitas Muhammadiyah Surakarta

Anggota a.

Nama

: Andi Suhendi, S.Farm, Apt

b.

Program studi

: Farmasi

c.

Perguruan tinggi

: Universitas Muhammadiyah Surakarta

43 -

E.Pembacaan Patologi Anatomi oleh bagian Patologi FKH UGM (lembar pembacaan ada di lembaran berikutnya)

44 -

DEPARTEMEN PENDIDIKAN NASIONAL

LABORATORIUM PATOLOGI

FAKULTAS KEDOKTERAN HE W AN UNIVERSITAS GADJAH MADA

Jl. Fauna, Karangmalang, Yogyakarta 55281, Tlp. (0274) 9061103, 560862 Fax. 560861 : 5/PNJX/2012 : Hasil Oiagnosa : drh_ Sitaril"'a Widyarini, MP., Ph.D. dan drh. Sugiyono, M.Sc.

No Hal Patologis

Yth. dr. Burhanudin Di Universitas Muhanunadiyah Surakarta Berikut kami sampaikan hasil analisis preparat jaringan mamae 2 minggu setelah induksi terakhir dengan DMBA Kode

Hasil Pembacaan Prepa rat

Stadium awal adenokarsinoma Stadrum awal adenokarsinoma

DMBA 1 DMBA 1 DMBA 1 DMBA T1 DMBA T1 DMBA0.4 DMBA 0.4 DMBA 4 DMBA4 DMBA40 DMBA40

Normal

Adenokarsinoma Adenokarsinoma Normal Normal

Stadium awal adenokarsinoma Stadtum awal adenokarsinoma Stadium awal adenokarsinoma Stadium awaJ adenokarsinoma

KETERANGAN

Stadium awal adenokarsinoma : Proliferasi epithet glandula asiner mamae dengan inti yang hiperkromatik (basofilik). Diferensiasi sel masih jelas. Adenokarsinoma : Proliferasi ke arah lumen lebih ekstensif dengan gambaran mitotik lebih aktif dengan bentuk dan ukuran set masih seragam (well-differentiation)

----- - -

:

Berikut kami sampaikan hasil analisis preparat jaringan mamae 7 minggu setelah induksi terakhir dengan DMBA

(-} 1 (-) 1

Kode

(-) 2 _(-J2

(-}2

DMBA 0.4

DMBA0.4

Normal

Hasil Pembacaan Preparat

Normal

Stadium awal adenokarsinoma Nodus limphatikus aktif normal

Stadium awal adenokarsinoma

Stadium awal adenokarsinoma Nodus timphatikus aktif normal Stadium awal adenokarsinoma

Stadium awal adenokarsinoma

DMBA 4

Stadium awal adenokarsinoma

DMBA 40.1

Stadium awal adenokarsinoma

DMBA40.1

Stadium awal adenokarsinoma

DMBA40.2

Normal

Tamox

Stadium awal adenokarsinoma

DMBA4

DMBA40.2

Tamox Tamox

-

Stadium awal adenokarsinoma

DMBA0.4 DMBA 4

.

Stadium awal adenokarsinoma Nodus limphatikus aktif normal Normal

Nodus limphatikus aktif normal

Nodus limphatikus aktif normal

Normal

Stadium awal adenokarsinoma N_9dus timehatikus aktif normal Stadium awal adenokarsinoma

KETERANGAN : Stadium awal adenokarsinoma : Proliferasi epithel glandula asiner mamae dengan inti yang hiperkromatik (basofilik). Diferensiasi sel masih jelas.

�-----.. .V.ogyakarta, 26 Januari 2012 LABORATO � t IU �:l Ketua �agian Patologi ·-

¥V � : •. v<-·�y I/

P A T O L <: >" ;.

FAK. KEDOKTERAN HEW;-. . ,.

Prof. drh. Kurniasih, MVSc., Ph.D. NIP. 195105221 977032001