Lactulosum liquidum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 - 1
01/2009:0924
LACTULOSUM LIQUIDUM Laktulóz-szirup
DEFINÍCIÓ A laktulóz-szirup a 4-O-(β-D-galaktopiranozil)-D-arabino-hex-2-ulofuranóz vizes oldata, amelyet általában laktóz lúgos izomerizációjával állítanak elő. Kisebb mennyiségben tartalmazhat egyéb cukrokat, mint például laktózt, epilaktózt, galaktózt, tagatózt és fruktózt is. Tartalom: legalább 620 g/l laktulóz (C12H22O11; Mr 342,3); laktulóz-tartalma a feliraton feltüntetett érték 95,0–105,0 %-a. Megfelelő mikrobiológiai tartósítószert tartalmazhat.
SAJÁTSÁGOK Küllem: tiszta, színtelen vagy halvány barnássárga, viszkózus folyadék. Oldékonyság: vízzel elegyedik. Túltelített oldatot képezhet, továbbá tartalmazhat kristályokat, amelyek melegítés hatására feloldódnak. 10% V/V-os oldata balraforgató.
AZONOSÍTÁS Első azonosítás: B, C, D. Második azonosítás: A, C, D. A. Vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatot végzünk (2.2.27). Vizsgálati oldat. A vizsgálandó anyag 0,50 g-ját R vízzel 50 ml-re oldjuk. Összehasonlító oldat. 60 mg CRS laktulózt R vízzel 10 ml-re oldunk. Lemez: R VRK szilikagél G.
Lactulosum liquidum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 - 2
Mozgófázis: R tömény ecetsav – R bórsav 50 g/l töménységű oldata – R metanol – R etil-acetát (10 + 15 + 20 + 55 V/V). Felvitel: 2 µl. Kifejlesztés: 15 cm-es fronttávolságig. Szárítás: a lemezt 100–105 °C-on 5 percig szárítjuk, majd hűlni hagyjuk. Előhívás: R naftalin-1,3-diol 10 térfogatrész R tömény kénsav és 90 térfogatrész R metanol elegyével készült, 1,0 g/l töménységű oldatával bepermetezzük; 110 °C-on 5 percig melegítjük. Értékelés: a vizsgálati oldat kromatogramjának főfoltja – helyét, színét és méretét tekintve – egyezzék meg az összehasonlító oldat kromatogramjának főfoltjával. B. Értékelés: a „Tartalmi meghatározás” pontban nyert kromatogramokat értékeljük. Értékelés: a vizsgálati oldat kromatogramján a főcsúcs retenciós ideje egyezzék meg a b) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcséval. C. 0,1 g anyagot 10 ml R vízben oldunk. Az oldatot 3 ml R réz(II)-tartarát– oldattal elegyítjük, majd melegítjük. Vörös csapadék képződik. D. 0,25 g anyagot 5 ml R vízben oldunk. Az oldatot 5 ml R ammónia–oldattal elegyítjük, majd 80 °C-os vízfürdőben 10 percig melegítjük. Vörös színeződés keletkezik.
VIZSGÁLATOK S oldat. 10 g anyagot R szén-dioxid-mentes vízzel 100 ml-re oldunk. Az oldat külleme. Az S oldat tiszta legyen (2.2.1). Színe nem lehet erősebb, mint a BS5 szín–mértékoldaté (2.2.2, II. módszer). pH (2.2.3): 3,0–7,0. A vizsgálathoz az S oldat 10 ml-éhez R kálium-klorid telített oldatának 0,1 ml-ét elegyítjük. Rokon vegyületek. Folyadékkromatográfia (2.2.29). Vizsgálati oldat. A vizsgálandó anyag 4,00 g-ját 20 ml R vízben oldjuk. Az oldatot enyhe melegítés közben 25,0 ml R acetonitrillel elegyítjük, majd R vízzel 50,0 ml-re hígítjuk.
Lactulosum liquidum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 - 3
Összehasonlító oldat (a). A vizsgálati oldat 5 ml-ét enyhe melegítés közben 47,5 ml R acetonitrillel elegyítjük, majd R vízzel 100,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (b). 2,00 g CRS laktulózt 20 ml R vízben oldunk. Az oldatot enyhe melegítés közben 25,0 ml R acetonitrillel elegyítjük, majd R vízzel 50,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (c). CRS rendszeralkalmassági vizsgálatra szánt laktulózt tartalmazó 1 injekciós üveg tartalmát R acetonitril és R víz egyenlő térfogatarányú elegyének 1 ml-ében oldjuk. Előtétoszlop: –
méretei: l = 0,05 m, Ø = 4,6 mm;
–
állófázis: R kromatográfiás célra szánt, aminopropilszililezett szilikagél (3 µm);
–
hőmérséklet: 38±1 °C.
Oszlop: –
méretei: l = 0,15 m, Ø = 4,6 mm;
–
állófázis: R kromatográfiás célra szánt, aminopropilszililezett szilikagél (3 µm);
–
hőmérséklet: 38±1 °C.
Mozgófázis: 0,253 g R nátrium-dihidrogén-foszfát-dihidrátot 220 ml R vízben oldunk, majd az oldatot 780 ml R acetonitrillel elegyítjük. Áramlási sebesség: 1,0 ml/perc. Detektor: állandó hőmérsékleten tartott refraktométer. Injektálás: 20 µl vizsgálati oldat, valamint a) és c) összehasonlító oldat. Kromatografálási idő: a laktulóz retenciós idejének 2,5-szerese. Relatív retenciók a laktulózra (retenciós ideje kb. 18 perc) vonatkoztatva: Eszennyező kb. 0,38; D-szennyező kb. 0,42; B-szennyező kb. 0,57; A-szennyező kb. 0,90; C-szennyező kb. 1,17. Rendszeralkalmasság: c) összehasonlító oldat: –
csúcsfelbontás: legalább 1,3 a laktulóz és az A-szennyező csúcsa között; szükség esetén módosítjuk a mozgófázis R acetonitril-tartalmát 75,0 %V/V és 82,0 %V/V között.
Lactulosum liquidum
–
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 - 4
az így nyert kromatogram profilja meg kell egyezzen a CRS rendszeralkalmassági vizsgálatra szánt laktulózhoz mellékelt kromatogram profiljával.
Követelmények: –
B-szennyező: csúcsterülete nem lehet nagyobb, mint az a) összehasonlító oldat kromatogramján a laktulóznak megfelelő csúcs területének háromszorosa (15%);
–
A- és C-szennyező: csúcsterületük egyenként nem lehet nagyobb, mint az a) összehasonlító oldat kromatogramján a laktulóznak megfelelő csúcs területének kétszerese (10%);
–
E-szennyező: csúcsterülete nem lehet nagyobb, mint az a) összehasonlító oldat kromatogramján a laktulóznak megfelelő csúcs területének 0,8-szerese (4%);
–
D-szennyező: csúcsterülete nem lehet nagyobb, mint az a) összehasonlító oldat kromatogramján a laktulóznak megfelelő csúcs területének 0,2-szerese (2%).
Metanol. Statikus gőztér (head-space) gázkromatográfiás vizsgálatot végzünk (2.2.28). Belső standard oldat. 0,5 ml R 1-propanolt 100,0 ml R vízzel elegyítünk. Az oldat 1,0 ml-ét R vízzel 100,0 ml-re hígítjuk. A hígított oldat 5,0 ml-ét R vízzel 50,0 ml-re továbbhígítjuk. Vizsgálati oldat. A vizsgálandó anyag 0,13 g-ját 20 ml-es injekciós üvegbe mérjük, majd 1,0 ml belső standard oldatot adunk hozzá és R metanol 0,1% V/V-os oldatának 5 µl-ével elegyítjük. Összehasonlító oldat. A belső standard oldat 1,0 ml-ét 20 ml-es injekciós üvegbe mérjük, majd R metanol 0,1% V/V-os oldatának 5 µl-ével elegyítjük. Oszlop: –
méretei: l = 2 m, Ø = 2 mm;
–
állófázis: R etilvinilbenzol–divinilbenzol-kopolimer (180 µm).
Vivőgáz: R kromatográfiás célra szánt hélium. Áramlási sebesség: 30 ml/perc. A statikus gőztér injektálás injektáláshoz javasolt körülmények: –
az egyensúly beállítás hőmérséklete: 60 °C;
–
az egyensúly beállítás ideje: 1 óra;
Lactulosum liquidum
–
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 - 5
a nyomás alá helyezés időtartama: 1 perc.
Hőmérséklet: –
oszlop: 140 °C;
–
injektor: 200 °C;
–
detektor: 220 °C.
Detektálás: lángionizáció. Injektálás: a gőzfázis 1 ml-e. Kiszámoljuk a metanoltartalmat, annak sűrűségét (2.2.5) 20 °C-on 0,79 g/ml-nek tekintve. Követelmények: –
metanol: kiszámoljuk az összehasonlító oldat kromatogramján a metanol csúcsterületének és a belső standard csúcsterületének arányát (R); kiszámoljuk vizsgálati oldat kromatogramjának ugyanezen csúcsaiból számított arányt: ez utóbbi nem lehet nagyobb, mint 2R (30 ppm).
Szulfit: legfeljebb 30 ppm. 5,0 g anyagot 40 ml R vízzel, majd 2,0 ml 0,1 M nátrium-hidroxid–oldattal elegyítünk, ezután az oldatot R vízzel 100 ml-re hígítjuk. Az így készült oldat 10,0 ml-ét 1,0 ml R1 sósavval, 2,0 ml R1 elszíntelenített fukszin–oldattal és R formaldehid 0,5% V/V-os oldatának 2,0 ml-ével elegyítjük. Az elegyet 30 percig állni hagyjuk, majd abszorbanciáját (2.2.25) 583 nm-en mérjük. Kompenzáló folyadékként az egyidejűleg és azonos módon, de a vizsgálandó anyag oldata helyett 10,0 ml R vízzel készült oldatot használunk. Az oldat abszorbanciája nem lehet nagyobb, mint az összehasonlító oldaté. Az összehasonlító oldatot egyidejűleg, azonos módon, de a vizsgálandó anyag oldata helyett 10,0 ml R szulfit−mértékoldattal (1,5 ppm SO2) készítjük. Bór. Üvegeszközök használatát lehetőleg kerüljük. Összehasonlító oldat. 56,0 mg R bórsavat R vízzel 100,0 ml-re oldunk. Az így készült oldat 5,0 ml-ét R vízzel 100,0 ml-re hígítjuk. Jól záró polietiléntartályban tartjuk. Négy 25 ml-es politetilénlombikba a következőket mérjük: –
1,00 g vizsgálandó anyagot és 1 ml R vizet (A-oldat),
–
1,00 g vizsgálandó anyagot és 1 ml összehasonlító oldatot (B-oldat),
–
1 ml összehasonlító oldatot és 1 ml R vizet (C-oldat),
–
2 ml R vizet (D-oldat).
Lactulosum liquidum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 - 6
Mindegyik lombik tartalmához 4,0 ml R acetát-edetát–tompítóoldatot (pH 5,5) elegyítünk, majd hozzáadunk 4,0 ml, frissen készített R azometin-H–oldatot. Az oldatokat összekeverjük, majd 1 órán át állni hagyjuk. Az A-, B- és C-oldatok abszorbanciáját (2.2.25) 420 nm-en határozzuk meg; kompenzáló folyadékként a Doldatot használjuk. A vizsgálat csak abban az esetben értékelhető, ha a C-oldat abszorbanciája legalább 0,25. A B-oldat abszorbanciája nem lehet kisebb az A-oldat abszorbanciájának kétszeresénél (5 ppm B). Ólom (2.4.10). legfeljebb 0,5 ppm, a feltüntetett laktulóztartalomra vonatkoztatva. Szulfáthamu (2.4.14): legfeljebb 0,2%, vonatkoztatva. 1,5 g anyagot vizsgálunk.
a
feltüntetett
laktulóztartalomra
Mikrobiológiai szennyezés. TAMC: elfogadhatósági követelmény: 103 CFU /g (2.6.12). TYMC: elfogadhatósági követelmény: 102 CFU /g (2.6.12). Escherichia coli nem lehet jelen (2.6.13).
TARTALMI MEGHATÁROZÁS Folyadékkromatográfia (2.2.29), a „Rokon vegyületek” pontban leírtak szerint, az alábbi módosítással. Injektálás: 20 µl vizsgálati oldat, valamint b) összehasonlító oldat. Az anyag százalékos, C12H22O11 (laktulóz) mennyiségét a CRS laktulóz deklarált tartalma alapján számítjuk ki.
FELIRAT A feliraton fel kell tüntetni: a deklarált laktulóztartalmat.
SZENNYEZŐK Egyedi határértékhez kötött (specifikált) szennyezők: A, B, C, D, E.
Lactulosum liquidum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 - 7 Törölt: ( 1. képlet helye)
Törölt:
Formázott: Emelt: 32 pt
és C* epimere
A. 4-O-(β-D-galaktopiranozil)-D-mannopiranóz (epilaktóz), B.
galaktóz,
C. laktóz, D. fruktóz, Törölt: (2. képlet helye)
Formázott: Emelt: 32 pt
és C* epimere
E.
D-lixo-hex-2-ulopiranóz
(tagatóz).
