LABORATOŘ EXPERIMENTÁLNÍ MEDICÍNY. Marián Hajdúch. Fórum onkologů a zástupců pojišťoven

LABORATOŘ EXPERIMENTÁLNÍ MEDICÍNY

Vyšetření mutací genu KRAS u pacientů s metastatickým karcinomem kolorekta indikovaných k léčbě panitumumabem

Marián Hajdúch Fórum onkologů a zástupců pojišťoven 16.5.2008


HER rodina receptorů

EGF TGF-α Ligandy: Amphiregulin Betacellulin HB-EGF Epiregulin

Hereguliny

NRG2 NRG3 Hereguliny Betacellulin

Doména bohatá na cystein

HER1/EGFR erbB1

HER2 erbB2 neu

HER3 erbB3

HER4 erbB4

Salomon D, Brandt R, Ciardiello F, et al. Crit Rev Oncol Hematol. 1995;19:183-232. Woodburn J. Pharmacol Ther. 1999;82:241-250.

Tyrosinkinázová doména


•

HER/EGFR inhibitory

Monoklonální protilátky ⇒ Inhibice signální transdukce a další mechanismy ⇒ Imunitní odpověď???

• trastuzumab

cílí HER2, HER2 pozitivní karcinom prsu registrační status: schválený pro paliativní i adjuvantní léčbu indikace/klinické zkoušky: ca prsu, další tumory málo efektivní, s výjimkou dětského osteosarkomu?

• cetuximab

cílí EGFR1, kolorektální rakovina, H&N registrační status: schválený pro paliativní léčbu indikace/klinické zkoušky : H&N – nový standard léčby?, karcinom prsu, pankreatu, NSCLC

•panitumab

cílí EGFR1, kolorektální rakovina registrační status: schválený pro paliativní léčbu indikace/klinické zkoušky: Fáze II/III u dalších solidních nádorů

•další


Klinické a molekulární prediktory účinnosti EGFR1 TK inhibitorů – příklad NSCLC

Klinické: 1.

nekuřáci (<5 krabiček za život, nebo nekuřák po >25 let?)

2.

ženy

3.

asiaté

4.

adenocarcinomy včetně BAL

5.

pacienti s kožní toxiciou

Molekulární: •

EGFR1-TK mutace v exonech 19-21

•

EGFR1 amplifikace

•

EGFR1 overexprese nemá prediktivní váhu!!!

•

K-ras mutace – negativní prediktor

EGFR1 dráha intracelulární signalizace

KRAS dráha intracelulární signalizace

AKTIVACE KRAS PROTEINU

AKTIVACE KRAS PROTEINU - MUTACE

MUTACE KRAS V NÁDORECH

Možné mutace na kodonech 12-GGT & 13-GGC KRAS genu Kras Mutation Analysis -- Theoretical Pattern [Examples* (not all possibilities are listed)]

Genotype

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

T

C

G

A

T

C

G

A

T

C

G

Wild Type

GGTGGC

GG

Mutant [1]

GATGGC

G

Mutant [2]

GTTGGC

Mutant [3]

CGTGGC

Mutant [4]

GCTGGC

Mutant [5]

TGTGGC

Mutant [6]

AGTGGC

Mutant [7]

GGTTGC

C

T

GG

C

G

T

GG

C

G

G

TT

GG

C

G

G

T

GG

C

G

A

G T A

C

T

GG

G

T

GG

C

G

G

T

GG

C

G

GG

TT

G

C

G

135 analyzovaných biopsií NSCLC – KRAS mutace

•

5 mutací v kodonu 12 K-Ras 1 mutace v kodonu 13 K-Ras ( 4% )

9 mutací v kodonu 12 K-Ras 1 mutace v kodonu 13 K-Ras (7%)

Beckman capillary sequencing Number of samples

Amount of Mutant DNA %

Codon 12 GGT- Gly

Codon 13 GGC- Gly

Pyrosequencing Codon 12 GGT- Gly

St 733

60%

TGT- Cys

TGT- Cys

St 961

46%

TGT- Cys

TGT- Cys

St 852

45%

GAT- Asp

GAT- Asp

St 320

32%

St 865

31%

TGT- Cys

TGT- Cys

St 189

31%

TGT- Cys

TGT- Cys

St 931

27%

GTT- Val

St 945

17%

TGT- Cys

St 252

12%

TGT- Cys

St 1026

7%

TGT- Cys

TGC- Cys

Codon 13 GGC- Gly

TGC- Cys

TECHNIKA qPCR – sondy typu škorpión

MUTATIONS – LOD approx. 1% 1. Gly12Asp (GGT>GAT) 2. Gly12Ala (GGT>GCT) 3. Gly12Val (GGT>GTT) 4. Gly12Ser (GGT>AGT) 5. Gly12Arg (GGT>CGT) 6. Gly12Cys (GGT>TGT) 7. Gly13Asp (GGC>GAC)

TheraScreen Diagnostic Kit DNA Sequencing

Time to result Detection of low level mutations (<10%) < 3 hours Yes > 8 hours No

Fragmented DNA +++ +

Work Flow Simple Complex


Predikce účinnosti na cetuximab

Gene copy number for epidermal growth factor receptor (EGFR) and clinical response to antiEGFR treatment in colorectal cancer: a cohort study. Moroni M, Veronese S, Benvenuti S, Marrapese G, Sartore-Bianchi A, Di Nicolantonio F, Gambacorta M, Siena S, Bardelli A. Lancet Oncol. 2005 May;6(5):279-86

8/9 pacientů s objektivní odpovědí na cetuximab vykázalo amplifikaci EGFR1 genu nebo vysokou polyzomii chromozomu 7. Naproti tomu žádný z 21 pacientů bez klinické odpovědi na terapii tuto genetickou anomálii v nádoru neměl (P<0.0001). KRAS mutation status is predictive of response to cetuximab therapy in colorectal cancer. Lievre A, Bachet JB, Le Corre D, Boige V, Landi B, Emile JF, Cote JF, Tomasic G, Penna C, Ducreux M, Rougier P, Penault-Llorca F, Laurent-Puig P. Cancer Res. 2006 Apr 15;66(8):3992-5.

KRAS mutace byla nalezena ve 13 nádorech (43%) a byla spojena s rezistencí na cetuximab (KRAS mutace u 0% z 11 responderů versus 68.4% z 19 nonresponderů; P = 0.0003). OS je lepší u pacientů bez KRAS mutace (P = 0.016; medián 16.3 versus 6.9 měsíců). Studie rovněž potvrdila význam EGFR1 amplifikace.


Predikce účinnosti na cetuximab

Multicenter phase II and translational study of cetuximab in metastatic colorectal carcinoma refractory to irinotecan, oxaliplatin, and fluoropyrimidines. Lenz HJ, et al. J Clin Oncol. 2006 Oct 20;24(30):4914-21.

346 pacientů s metastatickým kolorektálním karcinomem refrakterních na irinotekan, oxaliplatinu, fluoropyrimidiny léčeno cetuximabem v monoterapii. RR byl cca 12%. odpovědi na terapii tuto genetickou anomálii v nádoru neměl (P<0.0001). PFS byl 1,4 versus 6,6 měsíce. Klinický benefit (RR a PFS) nekoreloval s EGFR1 expresí, mutacemi ani amplifikací, ale celkové přežití korelovalo s EGFR1 amplifikací (p=0,03).

LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE

Panitumumab -Vectibix - SPC

1. NÁZEV PŘÍPRAVKU Vectibix 20 mg/ml koncentrát pro přípravu infuzního roztoku 2. KVALITATIVNÍ A KVANTITATIVNÍ SLOŽENÍ Jeden ml koncentrátu obsahuje 20 mg panitumumabu. Jedna injekční lahvička obsahuje buď 100 mg panitumumabu v 5 ml, 200 mg v 10 ml nebo 400 mg ve 20 ml koncentrátu. Pokud byl přípravek připraven k podání podle pokynů uvedených v bodě 6.6., výsledná koncentrace panitumumabu by neměla přesahovat 10 mg/ml. Panitumumab je humánní monoklonální IgG2 protilátka produkovaná savčí buněčnou linií (CHO) za pomoci rekombinantní DNA technologie. Pomocné látky: 1 ml koncentrátu obsahuje 0,150 mmol sodíku, což odpovídá 3,45 mg sodíku. Úplný seznam pomocných látek – viz bod 6.1 3. LÉKOVÁ FORMA Koncentrát pro přípravu infúzního roztoku. Bezbarvý roztok, který může obsahovat okem viditelné amorfní částice panitumumabu. 4. KLINICKÉ ÚDAJE 4.1 Terapeutické indikace Vectibix je určen v monoterapii k léčbě pacientů s metastazujícím kolorektálním karcinomem exprimujícím EGFR, vykazujícím expresi nemutovaného („wild-type“) onkogenu KRAS (Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog), u kterých selhala léčba chemoterapeutickými režimy zahrnujícími fluoropyrimidin, oxaliplatinu a irinotekan.

Fig 1. CONSORT diagram. BSC, best supportive care; WT, wild-type.

Amado et al.: Wild-Type KRAS Is Required for Panitumumab Efficacy in Patients With Metastatic Colorectal Cancer JCO 26, 2008

Fig 2. Progression-free survival by treatment within KRAS groups. Progressionfree survival by

MUT

randomized treatment in (A) mutant and (B) wild-type KRAS groups. Hazard ratios (HR) are shown for panitumumab (panit.) versus best supportive care (BSC) adjusted for randomization factors (Eastern Cooperative Oncology

WT

Group score, geographic region).


Fig 3. Subset analyses of progressionfree survival in the KRAS wild-type group. Hazard ratio (HR; circle) and 95% CI (horizontal lines) adjusted for randomization factors for panitumumab (panit.) versus best supportive care (BSC).


Fig 4. Waterfall plots showing maximum percent decrease in target lesions (blinded central radiology). (A) Patients receiving panitumumab, mutant KRAS. (B) Patients receiving panitumumab, WT KRAS. (C) Best supportive care (BSC) patients, mutant KRAS. (D) BSC patients, WT KRAS. Percentages are best response within each KRAS group, excluding missing or nonassessable postbaseline tumor assessments.

PANIT-MUT

BSC-MUT

PANIT-WT

BSC-WT


Fig 5. Kaplan-Meier curves for overall survival by treatment and KRAS status. Hazard ratio (HR) for wild-type (WT) versus mutant (MT) KRAS status adjusted for randomized treatment and randomization factors.


Fig A1. (A) Progression-free survival

WT

and (B) overall survival by KRAS status among patients receiving panitumumab after progression on best supportive care alone. HR, hazard ratio; WT, wild-type; MT, mutant; events, deaths; N, sample size.

MUT


Figure 1. TTP according to the K-RAS (A) and K-RAS and/or BRAF (B) mutational status.

Benvenuti S. et al. Oncogenic Activation of the RAS/RAF Signaling Pathway Impairs the Response of Metastatic Colorectal Cancers to Anti– Epidermal Growth Factor Receptor Antibody Therapies. Cancer Res 67, 2007

Diagnostika KRAS v Laboratořích prediktivní onkologie v ČR

HRADEC KRÁLOVÉ

PRAHA PLZEŇ

OLOMOUC

BRNO

2008- úhrada kitů společností AM|GEN, v jednání externí kontrola kvality

Nové kódy od roku 2009 v přípravě • Fluorescenční in situ hybridizace lidské DNA se značenou sondou za účelem indikace cílené protinádorové léčby. • Kvantitativní PCR reakce na cykléru s měřením v reálném čase za účelem indikace cílené protinádorové léčby. • Imunohistochemické vyšetření exprese proteinu za účelem indikace cílené protinádorové léčby. • Tkáňová mikrodisekce za účelem molekulárního vyšetření pro indikaci cílené protinádorové léčby.

DĚKUJI ZA POZORNOST A SPOLUPRÁCI!

LABORATOŘ EXPERIMENTÁLNÍ MEDICÍNY. Marián Hajdúch. Fórum onkologů a zástupců pojišťoven

Recommend Documents