IVD Bacterial Test Standard

Használati útmutató

IVD Bacterial Test Standard

Típusos Escherichia coli DH5-alfa-peptid- és fehérjeprofilt és további fehérjéket mutató tömegkalibrációs standard. Mátrixtámogatott lézer deszorpciós/ionizációs repülési idő tömegspektrometriához történő használat céljára (MALDI-TOF-MS).

A CARE termékek ügyfeleink kiváló minőségű fogyóeszközökkel, tartozékokkal és dedikált készletekkel történő támogatására szolgálnak világszerte. A CARE termékek skáláját speciálisan a Bruker Daltonics rendszerekkel való használathoz optimalizáltuk és minősítettük.

nyelv: hu

www.bruker.com/care

1. kiadás (2014. március)

Bruker

1 Alkalmazási terület

2

2 Termékleírás

2

3 Szemrevételezés, tárolás és stabilitás

3

3.1

Szemrevételezés érkezéskor

3

3.2

Tárolás érkezéskor

3

3.3

Tárolás alikvotokba történő elosztást követően

3

4 Kockázatra és biztonságra vonatkozó információk

3

5 Szoftverrel kapcsolatos követelmények

4

6 IVD BTS minta-előkészítési eljárás

4

6.1

Az IVD BTS alikvotok oldhatóvá tétele és elkészítése

5

6.2

Az IVD BTS minta elkészítése MALDI tárgylemezen

5

7 A Bruker MALDI-TOF tömegspektrométer kalibrálása az IVD BTS segítségével

6

7.1

A használt kalibrációs pontok

6

7.2

Kalibrálási eljárások

6

7.2.1 Kézi kalibrálási eljárás

6

7.2.2 Automatikus kalibrálási eljárás

9

8 Gyártó

1

12

Alkalmazási terület

Az IVD Bacterial Test Standard egy in vitro diagnosztikai termék, amely a Bruker MALDI- TOF tömegspektrométerek kalibrálására és optimalizálására, valamint a humán mintákból tenyésztett mikroorganizmusok azonosításának teljesítmény-ellenőrzésére szolgál.

2

Termékleírás

Az IVD Bacterial Test Standard (más néven „IVD BTS”) körültekintően előállított Escherichia coli DH5alfa- kivonatot tartalmaz, amely jellegzetes peptid- és fehérjeprofilt mutat a MALDI- TOF tömegspektrumokon. A kivonatot két további fehérje egészíti ki, amelyek kiterjesztik az IVD BTS által lefedett tömegtartomány felső határát. Az IVD BTS által lefedett általános tömegtartomány 3,6 és 17 kDa közötti. Minden egyes cső mintegy 40 MALDI tárgylemezminta elkészítéséhez elegendő anyagot tartalmaz. Ez a készlet egy in vitro diagnosztikai eszköz.

Rendelési adatok Termék

Cikkszám

IVD Bacterial Test Standard, 5 cső

12/2. oldal

8290190 vagy 290190

IVD Bacterial Test Standard – Használati útmutató

1. kiadás

Bruker

3

Szemrevételezés, tárolás és stabilitás

3.1

Szemrevételezés érkezéskor

Érkezéskor ellenőrizze az IVD BTS csomagot. Ha a csomag sérült, ellenőrizze a csöveket. Ha a csövek sérültek, az IVD BTS analitot tilos használni. Ártalmatlanítsa az IVD BTS terméket (csövek és csomag) a termék anyagbiztonsági adatlapján található iránymutatást követve, és lépjen kapcsolatba a Bruker Daltonik GmbH szervizosztályával ([email protected]) a csereeszköz beszerzése érdekében.

3.2

Tárolás érkezéskor –18°C Az IVD BTS szállítása környezeti hőmérsékleten történik, de szállítás után azonnal biztosítani kell a –18°C-on vagy annál alacsonyabb hőmérsékleten való tárolást. A csomagoláson feltüntetett lejárati idő akkor érvényes a benne lévő IVD BTS analitra vonatkozóan, ha érkezés után – 18°C- on vagy annál alacsonyabb hőmérsékleten való tárolják.

3.3

Tárolás alikvotokba történő elosztást követően

Az IVD BTS analitot használat előtt fel kell oldani. Kifejezetten javasoljuk, hogy a feloldott IVD BTS analitot osszák szét alikvotokra, és fagyasszák le 0,5 mL-es csavaros kupakú mikrocsövekben. –18°C A lefagyasztott, feloldott IVD BTS analitok legfeljebb 5 hónapig tárolhatók –18°C- on vagy ennél alacsonyabb hőmérsékleten. Idővel előfordulhat, hogy oxidációs termékek lesznek észlelhetők benne. Ezek az oxidációs termékek nem befolyásolják jelentős mértékben a spektrumminőséget.

4

Kockázatra és biztonságra vonatkozó információk

Ez a termék nincs osztályozva az 1272/2008/EK rendelet szerint, így a vegyi anyagok osztályozásának és címkézésének globálisan harmonizált rendszere (Globally Harmonized System of Classification and Labeling of Chemicals, GHS) szerint sincs osztályozva. A gyártó tapasztalata szerint a terméknek nincs semmilyen káros hatása, ha a specifikációknak megfelelően használják és kezelik. Ennek ellenére minden anyag esetében jelentkezhetnek ismeretlen veszélyek, így óvatosan kell kezelni őket. További információkat a www.bruker.com/msds oldalról letölthető anyagbiztonsági adatlapon olvashat. A használati útmutatóban leírt eljárásokhoz további vegyi anyagokra lehet szükség. Olvassa el figyelmesen a szállító által biztosított anyagbiztonsági adatlapot, és kövesse az általános biztonsági előírásokat a vegyi anyagok és a biológiailag veszélyes anyagok kezelése során.

1. kiadás


12/3. oldal

Bruker

5

Szoftverrel kapcsolatos követelmények

Bizonyos szoftververziók/kombinációk esetében ingyenes szoftverjavításra van szükség az IVD BTS támogatásához (lásd: 1. táblázat). Kérjük, forduljon a helyi Bruker Daltonics szervizcsapathoz a telepítéssel kapcsolatos támogatásért. 1. táblázat

A szoftverjavítással kapcsolatos követelmények

Szoftververzió

Compass verzió

1.4

1.3

1.2

1.1

1.0

flexControl verzió

3.4

3.3

3.0

2.4

2.2

2.0

1.2

1.1

Nem Nem Igen

Igen

Igen

Igen

Igen

Igen

Van szükség szoftverjavításra?

6

IVD BTS minta-előkészítési eljárás

Megjegyzés A következő eljárást nem szabad alkalmazni, ha az Ön munkafolyamata előírt IVD BTS minta-előkészítési módszereket (például IVD MALDI Biotyper SOP-kat) tartalmaz.

Előzetes megjegyzések A gyenge minőségű minta-előkészítés csökkenteni fogja az érzékenységet, és alacsony felbontást, valamint rossz reprodukálhatóságot fog eredményezni. A MALDI-n keresztül történő iongenerálás az optimális mátrix-analit arány jelenlététől függ. A legjobb eredmények érdekében használjon frissen elkészített oldatokat és az elérhető legnagyobb tisztaságú vegyi anyagokat (például CHROMASOLV LC-MS oldószereket).

Szükséges vegyszerek és anyagok l

l

l

l

IVD Matrix HCCA- portioned (más néven „IVD HCCA”) (cikkszám 8290200 vagy cikkszám 290200) vagy Matrix HCCA- portioned (más néven „HCCA”, HCCA = α- ciano- 4- hidroxifahéjsav) (cikkszám 8255344 vagy cikkszám 255344), amelyet a releváns használati útmutatóban leírtak alapján kell előkészíteni. Standard oldószer (acetonitril 50%, víz 47,5% és trifluor-ecetsav 2,5%), a Sigma-Aldrich vállalat terméke (cikkszám: 19182), amelyet a Bruker Daltonik GmbH tesztelt, és amelynek használatát javasolja az IVD BTS oldhatóvá tételéhez. Csavaros kupakú mikrocsövek (Sarstedt, cikkszám: 72.730.003) csavaros kupakkal (Sarstedt, cikkszám: 65.716.002). Az Ön munkafolyamatához kiválasztott típusú MALDI tárgylemez.

Szükséges berendezések és eszközök Centrifuga, pipetták, pipettahegyek

12/4. oldal


1. kiadás

Bruker

6.1

Az IVD BTS alikvotok oldhatóvá tétele és elkészítése

1. Adjon 50 µL standard oldószert az IVD BTS pellethez, és oldja azt fel szobahőmérsékleten legalább 20-szori fel-le pipettázással. Ügyeljen arra, hogy az oldat ne habosodjon fel! 2. Inkubálja az IVD BTS oldatot szobahőmérsékleten 5 percig, majd keverje össze legalább 20-szori fel-le pipettázással. 3. Centrifugálja 2 percig 13 000 rpm fordulatszámon, szobahőmérsékleten. 4. Pipettázzon a felülúszóból 5 µL- nyi alikvotokat csavaros kupakú mikrocsövekbe, és zárja le szorosan a csöveket. 5. Tárolja az alikvotokat –18 °C-on vagy ennél alacsonyabb hőmérsékleten.

6.2

Az IVD BTS minta elkészítése MALDI tárgylemezen

Megjegyzés A lefagyasztott IVD BTS alikvotokat fel kell oldani szobahőmérsékleten, és ujjpöcköléssel összekeverni a csavaros kupakú mikrocső tartalmát. A csavaros kupakú mikrocsöveket le kell zárni, és biztosítani legfeljebb – 18°C- on történő tárolásukat közvetlenül az IVD BTS minták elkészítését követően. Minden 5 µL-es alikvot legalább négy mintához elegendő anyagot tartalmaz. 1. Helyezzen 1 µL IVD BTS oldatot a MALDI tárgylemez tetszőleges pozíciójába. 2. Hagyja az IVD BTS mintát szobahőmérsékleten megszáradni. 3. Száradás után azonnal fedje be az IVD BTS mintát 1 µL IVD HCCA vagy HCCA oldattal. 4. Hagyja a mintát szobahőmérsékleten megszáradni. A készítménynek homogénnek kell lennie.

1. kiadás


12/5. oldal

Bruker

7

A Bruker MALDI-TOF tömegspektrométer kalibrálása az IVD BTS segítségével

7.1

A használt kalibrációs pontok

2. táblázat

A kalibrációs pontok és a ±300 ppm-es tömegtűréshatárok

Fehérje

Referenciatömeg (átlagos tömeg)

± 300 ppm tartomány

RL29 [M+2H]2+

3637,8 Da

3636,7 Da – 3638,8 Da

RS32 [M+H]+

5096,8 Da

5095,3 Da – 5098,3 Da

RS34 [M+H]+

5381,4 Da

5379,8 Da – 5383,0 Da

RS33meth [M+H]+

6255,4 Da

6253,5 Da – 6257,3 Da

RL29 [M+H]+

7274,5 Da

7272,3 Da – 7276,7 Da

RS19 [M+H]+

10300,1 Da

10297,0 Da – 10303,2 Da

RNáz A [M+H]+

13683,2 Da

13679,1 Da – 13687,3 Da

Mioglobin [M+H]+

16952,3 Da

16947,2 Da – 16957,4 Da

7.2

Kalibrálási eljárások

Kézi és automatikus kalibrálási eljárások egyaránt rendelkezésre állnak. A kézi eljárás alkalmazható a flexControl valamennyi verziójával, míg az automatikus eljáráshoz a flexControl 3.3-as vagy későbbi verziójára van szükség.

7.2.1

Kézi kalibrálási eljárás

1. Helyezze be az IVD BTS mintával előkészített MALDI tárgylemezt a MALDI- TOF tömegspektrométerbe. 2. Ellenőrizze, hogy fut-e a flexControl. 3. Használja a standard flexControl módszert MBT_ FC.par (lineáris és pozitív mód) a méréshez és kalibráláshoz. 4. Kézzel mérjen egy összegspektrumot az IVD BTS mintáról különböző raszterpozíciókból készített 6 × 40 lézeres felvétel összeadásával. Minden egyes kívánt raszterpozícióban kattintson a Start gombra

, majd a Add gombra

összesen 240 lézerfelvétel

rögzítéséhez, ami a következőképpen jelenik meg: kell.

. A lézerenergia szintjét optimalizálni

12/6. oldal


1. kiadás

Bruker

Opcionális: másik lehetőségként összegspektrum automatikusan is mérhető a következő módon:

l

kattintson az AutoXecute lapfülre, válassza ki az autoX módszert MBT_AutoX a Method legördülő listából (1. ábra),

l

kattintson a Run method on current spot

l

1. ábra

gombra.

Az AutoXecute lapfül az MBT_AutoX módszer kijelölésével az automatikus összegspektrum méréséhez.

Ez automatikusan megmér egy összegspektrumot. 5. Kattintson az Single Buffer eszköztárgombra

az aktuálisan megjelenített egyszeres spektrum

elrejtéséhez. Ez aktiválja a Sum Buffer eszköztárgombot összegspektrumot. 6. Kattintson a Smooth Spectrum eszköztárgombra

2. ábra

, és megjeleníti a mért

az összegspektrum simításához (2. ábra).

Az IVD BTS simított összegspektruma

7. Kattintson a Calibration lapfülre, és válassza ki a kalibrációs fájlt MBT_Standard a Mass Control List legördülő listából (3. ábra).

3. ábra

A Calibration lapfül és a Mass Control List

8. Kattintson az Automatic csúcsok kiválasztásához.

1. kiadás

Assign

gombra


a

helyes

kalibrációs

12/7. oldal

Bruker

9. Ellenőrizze, hogy a kalibrációs csúcsok automatikus hozzárendelése megfelelően működött-e. A kalibrációs csúcs listán látszania kell annak, hogy az összes csúcs hozzárendelése megtörtént, és az Err/ppm maximális eltérés egyik csúcs esetében sem több, mint ± 300 ppm (4. ábra).

4. ábra

A kalibrációs csúcsok automatikus hozzárendelésének eredménye az összes csúcs hozzárendelése esetén, amikor az Err/ppm maximális eltérés egyik csúcs esetében sem több, mint ± 300 ppm.

Az eredménytől függően a következők szerint járjon el: l

l

l

l

l

Ha az összes csúcs hozzárendelése megtörtént, és az Err/ppm maximális eltérés az összes csúcs esetében kevesebb, mint ±300 ppm, a kalibrációs csúcsok automatikus hozzárendelése sikeres volt. Folytassa a (12) lépéssel. Ha az összes csúcs hozzárendelése megtörtént, de az Err/ppm maximális eltérés bármelyik csúcs esetében több, mint ± 300 ppm, ismételje meg a (4)–(9) lépéseket. Ha néhány csúcs hozzárendelése történt meg, és az Err/ppm maximális eltérés az összes csúcs esetében kevesebb, mint ± 300 ppm, folytassa a (10) lépéssel. Ha néhány csúcs hozzárendelése történt meg, de az Err/ppm maximális eltérés bármelyik csúcs esetében kevesebb, mint ± 300 ppm, ismételje meg a (4)–(9) lépéseket. Ha egyik csúcs sincs hozzárendelve, folytassa a (11) lépéssel.

10. Kattintson az Apply gombra hozzárendelést az Automatic Assign gombra

, és ismételje meg az automatikus csúcskattintva.

Ellenőrizze, hogy valamennyi csúcs hozzárendelése megtörtént-e, és hogy az Err/ppm maximális eltérés kevesebb-e, mint ± 300 ppm az összes csúcs esetében. l

l

12/8. oldal

Ha az összes csúcs hozzárendelése megtörtént, és az Err/ppm maximális eltérés az összes csúcs esetében kevesebb, mint ±300 ppm, a kalibrációs csúcsok automatikus hozzárendelése sikeres volt. Folytassa a (12) lépéssel. Ha nem minden csúcs hozzárendelése történt meg, vagy az Err/ppm maximális eltérés bármely csúcs esetében több, mint ± 300 ppm, ismételje meg a (4)–(9) lépéseket.


1. kiadás

Bruker

11. Kézzel válassza ki az m/z 6255,4 Da-nál lévő csúcsot, a csúcstól balra kattintva a spektrumon. A csúcs melletti függőleges vonalnak pirosról zöldre kell váltania sikeres csúcs-hozzárendelés esetén (a megfelelő adatokat a kalibrációs csúcslistába kell beírni). Kattintson az Apply gombra , és ismételje meg az automatikus csúcs-hozzárendelést az Automatic Assign gombra

kattintva.

Ellenőrizze, hogy valamennyi csúcs hozzárendelése megtörtént-e, és hogy az Err/ppm maximális eltérés kevesebb-e, mint ± 300 ppm az összes csúcs esetében. l

l

Ha az összes csúcs hozzárendelése megtörtént, és az Err/ppm maximális eltérés az összes csúcs esetében kevesebb, mint ±300 ppm, a kalibrációs csúcsok automatikus hozzárendelése sikeres volt. Folytassa a (12) lépéssel. Ha nem minden csúcs hozzárendelése történt meg, vagy az Err/ppm maximális eltérés bármely csúcs esetében több, mint ± 300 ppm, ismételje meg a (4)–(9) lépéseket.

12. Miután megtörtént az összes csúcs automatikus hozzárendelése úgy, hogy az Err/ppm maximális eltérés az összes csúcs esetében kevesebb, mint ±300 ppm, kattintson az Apply gombra . 13. Mentse el az új kalibrációs értékeket a flexControl módszerbe (MBT_FC.par). A Save method as eszköztárgombra kattintva megnyílik a Save flexControl Method As párbeszédpanel. Kattintson a Save gombra. Erősítse meg a fájl (MBT_FC.par) cseréjét az Yes gombra kattintva a megerősítő párbeszédpanelen (5. ábra).

5. ábra

7.2.2

Megerősítő párbeszédpanel a megadott módszerfájl cseréjére vonatkozóan

Automatikus kalibrálási eljárás

Megjegyzés Az automatikus kalibrálási eljáráshoz a flexControl 3.3-as vagy újabb verziójára van szükség. 1. Helyezze be az IVD BTS mintával előkészített MALDI tárgylemezt a MALDI- TOF tömegspektrométerbe. 2. Ellenőrizze, hogy fut-e a flexControl. 3. Használja a standard flexControl módszert MBT_ FC.par (lineáris és pozitív mód) a méréshez és kalibráláshoz.

1. kiadás


12/9. oldal

Bruker

4. Válassza az Tools > Method Calibration Parameters lehetőséget ( 6. ábra ) a flexControl módszer kalibrálásának beállításához, illetve a beállítások ellenőrzéséhez. Megjegyzés A kalibrálási paraméterek beállítására csak az első (kezdeti) kalibrálás esetében van szükség. A későbbi kalibrálások során csupán a helyes autoX módszer ( MBT_ AutoX) kiválasztását kell ellenőrizni.

6. ábra

A Method Calibration Parameters parancs a Tools menüben

5. Írja be vagy ellenőrizze a 7. ábra bemutatott automatikus kalibrálási paraméterbeállításokat. Ezután kattintson az OK gombra.

7. ábra

12/10. oldal

Az Edit Auto Calibration Parameters párbeszédpanel


1. kiadás

Bruker

6. A Calibration lapfülön (3. ábra) ellenőrizze, hogy a Peak Assignment Tolerance paraméter az 1000 ppm-es maximális értékre van-e beállítva (8. ábra).

8. ábra

A Peak Assignment Tolerance paraméter

7. A kalibrálási eljárás elindításához kattintson a Calibrate gombra

.

Automatikusan begyűjtésre kerül egy összegspektrum az IVD BTS mintáról különböző pozíciókból készített 6 × 40 lézeres felvétel összeadásával, és a kalibrálás automatikusan megtörténik. A sikeres kalibrálás után megnyílik egy kalibrálási információs ablak (9. ábra ). Kattintson az OK gombra a kalibrálás befejezéséhez.

9. ábra

Kalibrálási információs párbeszédpanel

8. Ha a kalibrálás sikertelen, ismételje meg az automatikus kalibrálási eljárás (4)–(7) lépéseit, vagy kövesse a 7.2.1 részben leírt kézi kalibrálási eljárás lépéseit.

1. kiadás


12/11. oldal

Bruker

8

Gyártó Bruker Daltonik GmbH Fahrenheitstraße 4 28359 Bremen Németország

Ügyfélszolgálat E-mail: Telefon: Fax:

[email protected] +49-421-2205-1401 +49-421-2205-106

Értékesítési információk E-mail: Telefon: Weboldal:

[email protected] +49-421-220-50 www.bruker.com/care

cikkszám 8290190 vagy cikkszám 290190 A leírások és specifikációk felülírnak minden korábbi információt, és értesítés nélkül megváltoztathatók. © Copyright 2014 Bruker Daltonik GmbH

12/12. oldal


1. kiadás

IVD Bacterial Test Standard

Recommend Documents