INSTRUKSI KERJA ALAT MINI TRANSBLOTTER
Laboratorium Biosains Universitas Brawijaya Malang 2012
1 Instruksi Kerja LBioS-UB 2012
Instruksi Kerja MINI TRANSBLOTTER
Laboratorium Biosains Universitas Brawijaya Kode Dokumen
:
000XX 06003
Revisi
:
Tanggal
:
01 Oktober 2012
Diajukan oleh
:
Manajer Riset dan Kerjasama
Dr. drg. Nur Permatasari, M.Kes Dikendalikan oleh
:
Manajer Sumber Daya dan Keuangan
Dr. Ir. Gatot Cipatadi. DESS Disetujui oleh
:
Direktur
Dra. Fatchiyah, M.Kes., Ph. D
2 Instruksi Kerja LBioS-UB 2012
INSTRUKSI KERJA ALAT MINI TRANSBLOTTER LABORATORIUM BIOSAINS-UB TUJUAN Instruksi kerja ini adalah penuntun untuk operator dari produk Mini Transblotter dan memberikan informasi yang diperlukan untuk mengoperasikan alat dengan benar dan aman. RUANG LINGKUP Instruksi Kerja ini meliputi semua prosedur penggunaan dan perawatan Mini Transblotter di Laboratorium Biosains UB. PIHAK YANG TERKAIT Pihak-pihak berikut ini bertanggung jawab untuk penggunaan secara benar dan perawatan Mini Transblotter: Staff Laboratorium Biosains, dan peneliti PRINSIP Alat ini digunakan untuk memindahkan protein yang telah dipisahkan berdasarkan berat molekul dari gel poliakrilamid ke membran. DOKUMEN Log penggunaan alat INFORMASI ALAT Jenis Alat Merek Kode Suhu maksimum Voltage maksimum Arus Power maksimum
: : : : : : :
Mini Transblotter Biorad 170-3930 50°C 150V 90 mA – 500 mA 40 watt
CARA KERJA 1.
Penyiapan Transfer Buffer 1.1 Siapkan transfer buffer dan simpan pada suhu 4⁰C sampai siap digunakan 1.2 Potong membran sesuai dengan ukuran gel. Rendam gel, membran, filter paper dan filter pads dalam transfer buffer ± 15-20 menit
3 Instruksi Kerja LBioS-UB 2012
2.
Penyiapan Gel Sandwich 2.1 Letakkan cassette pada tempat yang datar dengan posisi bagian berwarna abu-abu berada dibagian bawah 2.2 Letakkan satu fiber pad pada sisi berwarna abu-abu 2.3 Letakkan satu lembar paper filter diatas fiber pad dan hilangkan gelembung udara 2.4 Letakkan gel diatas paper filter dan hilangkan gelembung udara 2.5 Letakkan membran diatas gel dan hilangkan gelembung udara 2.6 Letakkan paper filter diatas membran dan hilangkan gembung udara 2.7 Letakkan fiber pad diatasnya 2.8 Tutup cassette dengan hati-hati supaya gel dan membrane tidak bergeser. Kunci cassette menggunakan kait berwarna putih. 2.9 Masukkan cassette ke dalam alat.
3.
Masukkan blue cooling unit yang telah di bekukan dan isi penuh tank dengan transfer buffer
4.
Masukkan stirrer untuk mengatur suhu buffer dan distribusi ion dalam tank. Atur kecepatan yang memungkinkan distribusi ion secara merata.
5.
Pasang lid, hubungkan plud dengan power supply dan atur tegangan. Standar Internsitas tinggi Buffer Transfer overnight Transfer 1 jam SDS PAGE A. Tris 25 mM pH 8,3; glisin 192 mM dengan atau tanpa methanol 20% dan 0,025-0,1% SDS B. Tris 48 mM pH 9,2; glisin Buffer A, B atau C Buffer A, B atau C 39 mM dengan atau Tegangan 30 V Tegangan 100 V tanpa methanol 20% dan Arus 90 mA Arus 350 mA 0,025-0,1% SDS C. 10 mM NaHCO3; 3 mM NaCO3 pH 9,9; dan dengan atau tanpa methanol 20% dan 0,0250,1% SDS DNA atau RNA TAE: 20 mM Tris pH 7,8; 10 mM CH3COONa; 0,5 mM EDTA Tegangan 30 V Tegangan 80 V TBE: 50 mM Tris pH 8,3; Arus 100 mA Arus 500 mA 50 mM Na2O-B2O3 (natrium borat); 1 mM EDTA Native Gel Tegangan 30 V Tegangan100 V 25 mM Tris pH 8,3; 192 mM Arus 90 mA Arus 350 mA glisin; tanpa metanol 4
Instruksi Kerja LBioS-UB 2012
Isoelectric Focusing, Native gel, Basic Protein, Gel Asam Urea Asam asetat 0,7%
Tegangan 30 V Arus 100 mA
Tegangan100 V Arus 350 mA
6. Setelah proses selesai, bongkar blotting sandwich dan lepas membran dari susunan sandwich. Bersihkan alat, fiber pads, dan cassette dengan sabun laboratorium serta dibilas dengan aquades.
5 Instruksi Kerja LBioS-UB 2012
Contoh Dokumen
LABORATORIUM BIOSAINS UNIVERSITAS BRAWIJAYA
LOG PENGGUNAAN ALAT
No
Hari/Tangg al
Nama/Instan si
Status Pengguna S1
S2
S3
laboran
Lama pemakaian mulai
selesai
Keterang an
Tandatangan pengguna
Penanggung jawab
6 Instruksi Kerja LBioS-UB 2012
