Gyorsteszt a glutén kimutatására ételből, italból, orál higiéniás termékekből és felületektről

Biomedal Diagnostics GlutenTox®- Pro Gyorsteszt a glutén kimutatására ételből, italból, orál higiéniás termékekből és felületektről Ed.6 – December 2014 KT-5660

GlutenTox®- Pro Gyorsteszt a glutén kimutatására ételből, italból, orál higiéniás termékekből és felületekről. Tartalom 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

10.

11. 12.

13.

A vizsgálat célja Bevezetés A teszt alapja Biztosított anyagok (25 elemzéshez) Hasznos, de nem biztosított anyagok Tárolási feltételek Óvintézkedések Figyelmeztetések és korlátozások Ételek, italok és orál higiéniás termékek 9.1 Előkészítés és mintaelemzés 9.2 Az eredmények értelmezése Felületi elemzés 10.1 Előkészítés és mintaelemzés 10.2 Az eredmények értelmezése Minőség-ellenőrzés Analitikus jellemzők 12.1 Szenzitivitás 12.2 Specificitás 12.3 Belső validálás Referenciák

Melléklet 1

1. A vizsgálat célja A GlutenTox®-Pro egy gyors és felhasználó barát teszt a glutén érzékenységben szenvedők számára káros glutén kimutatására ételből, italból és orál higiéniás termékekből valamint használható még felületekre is.

2. Bevezetés A glutén érzékenység egy olyan rendellenesség, ami károsítja a vékonybelet, a bélbolyhok elsorvadnak, és ez megakadályozza a tápanyagok úgy, mint fehérje, lipidek, szénhidrát, ásványi sók és vitaminok, felszívódását. Ezt a betegséget az immunrendszer a gluténre (fehérje, ami a gabonafélékben – búza, árpa, rozs és kisebb mértékben zab (ref 1,2) - található) adott nem megfelelő válasza okozza, ami hasmenéshez, vitamin és ásványi anyagok hiányához, vérszegénységhez és vékony csontokhoz (oszteoporózis) vezet. A glutén érzékenység életkortól függetlenül hatással van az emberekre. Jelenleg az egyedüli gyógymód a glutén érzékenységben szenvedők számára egy szigorú, élethosszig tartó gluténmentes diéta, ami nehézséget jelent, hiszen a glutén, amellett, hogy jelen van sok ételben, még adalékanyagokban és tartósítószerekben is megtalálható. A Tápanyag Kódex és az EC 41/2009-es szabályozása szerint az ételkészítmény címkéjén akkor lehet feltüntetni, hogy a termék „gluténmentes” és megfelelő a glutén érzékenységben szenvedők számára, ha a glutén tartalom nem haladja meg a 20 rész / milliót (ppm*). * ppm = milligramm glutén 1 kiló ételben.

3. A teszt alapja A GlutenTox®-Pro egy immunkromatográfiás teszt a glutén kimutatására különböző összetételű és a feldolgozottság különböző fokán álló (nyerstől a készételig) ételből és italból. A GlutenTox®-Pro-t használni lehet még a glutén kimutatására orál higiéniás termékekből, mint például fogkrémből és szájöblítőből, ami hasznos, hiszen ezeket a termékeket is le lehet nyelni. Továbbá a GlutenTox®-Pro – t felületelemzési kontrollként lehet használni az étel készítési terület tisztaságának ellenőrzésekor, ami alapvető, hogy megelőzzük a végtermék keresztfertőzésének kockázatát. A teszt tartalmaz egy egyszerű folyamatból álló extrakciós lépést, mely közös az összes étel típusnál. A kimutatási fázis a mintában található immuntoxikus glutén részecskék a pálcán (ref.3) korábban fixált színes konjugátumokkal (monoklonális anti-gliadin 33mer antitest / piros színű mikro gömbök) való reakcióján alapszik. Ez a komplex a kapilláris hatás miatt elterjed a pálcán. Ha az eredmény pozitív, akkor egy PIROS csík jelenik meg a pálca eredmény zónájában. A PIROS csík hiánya negatív eredményt jelez. Akár van jelen glutén akár nincs, a konjugátum keresztülmegy a pálca kontroll zónáján ahol immobilizált antitestek vannak, és amennyiben a teszt működik akkor egy KÉK csík (kontroll vonal) jelenik meg. Ezek a gyors tesztek különösen hasznosak a glutén rutin megfigyelésében és annak biztosításában, hogy a termék megfelel a HACCP (Hazard Analysis and Critical Control Points = Veszélyelemzés és kritikus ellenőrző pontok) szabályozásnak és megfelelő a címkéje. Gyors döntéseket és javító cselekvéseket is lehetővé tesznek abban az esetben, ha a szennyeződésnek bármilyen kockázata

felmerül a termelési lánc során.

4. Biztosított anyagok (25 elemzéshez) -

GlutenTox®-Pro pálca (25 db) csőben Műanyag pipetta (50 db) Eldobható műanyag kanál (25 db) Sárga kupakos palack az extrakciós oldattal (25 db) Kék kupakos palack oldószerrel (25 db) Használati utasítás

5. Hasznos, de nem biztosított anyagok -

Mozsár vagy bármilyen más eszköz, ami a minta őrléséhez használható. Mérleg (0.1 grammos pontosságú) Stopper Nem hintőporos eldobható kesztyű Alkohol (etanol)

6. Tárolási feltételek A terméket 2 - 30°C / 35.6 – 86°F között kell tárolni. A teszt optimális teljesítményének elérése érdekében a terméket az eredeti csomagolásban kell tárolni és a rányomtatott lejárati idő előtt fel kell használni. Figyelmeztetés: A pálcát tartalmazó csövet csak a használat előtt szabad kinyitni. A teszt minden komponensét ki lehet dobni normál hulladék tárolóba illetve újra felhasználhatóba, ahol ez megengedett.

7. Óvintézkedések -

-

Az elemzéssel interferáló szennyeződés elkerülése érdekében, nem hintőporos kesztyű viselése ajánlott. Ha nincsen eldobható kesztyű, akkor a teszt előtt alaposan mossa meg a kezét. Ha egyszer a GlutenTox®-Pro pálcát eltávolította a csőből akkor fel kell használni amilyen hamar csak lehet, szigorúan tiszta körülmények között. Utána zárja le a csövet. A lejárati idő után ne használjon semmit a kit-ből. Ne igya meg egyik oldatot (folyékony) sem a kit-ből. Az extrakciós oldat alkoholt (etanolt) tartalmaz.

Gyermekektől távol tartandó.

8. Figyelmeztetések és korlátozások -

Bizonyos típusú mintákból a glutént csak kisebb hatékonysággal lehet kivonni ezért a maximum szenzitivitással dolgozva (10 csepp kivonat a kék kupakos oldat palackba) javasolt a legalább 10 ppm kimutatási limit biztosítása. Alábbiakban találhatók ezek a minták:

- Alacsony polifenol vagy tannin tartalmú ételminták, amelyekben ez a komponens - csokoládé, fekete tea, kávé, bor, bogyós gyümölcs stb. - a kisebb összetevő (70%-ig). - Minták antioxidánssal, pl. A, E és C vitamin. - 180°C/356°F feletti hővel kezelt ételek. FONTOS MEGJEGYZÉS! Ezekben az esetekben úgy találták, hogy a mintában jelen lévő teljes glutén tartalom legalább 50%-a kimutatható. Ezért, amennyiben negatív eredményt kapunk maximum szenzitivitással dolgozva (10 csepp) akkor biztosak lehetünk benne, hogy az étel kevesebb, mint 10 ppm glutént tartalmaz és így gluténmentesnek minősül és megfelel a glutén érzékenységgel kapcsolatos jelenlegi szabályozásnak. -

Néhány magas polifenol és tannin tartalmú étel mintában (olyan ételek ahol ez a komponens – csokoládé, fekete tea, kávé, bor, bogyós gyümölcsök - több mint 70%-os) a kivonási folyamat nem megfelelő lehet és ezért a glutén mennyisége alulértékelt lehet. Ilyen esetekben a GlutenTox® Sticks Plus* használata javasolt.

-

A gumi típusú minták elemzése nehéz lehet, mivel sűrű paszta alakul ki a GlutenTox®Pro teszt kit által biztosított extrakciós oldatot használva. Kérjük, hogy forduljon a teszt gyártójához tanácsért. * Több információért forduljon a beszállítójához.

9. Étel, Ital és orál higiéniás termékek 9.1 Előkészítés és minta analízis FONTOS MEGJEGYZÉS! Mielőtt használja a kit-et szappan tisztítsa meg az eszközöket és a területet amivel a minta kapcsolatba kerül, majd öblítse le alaposan. A tisztítás után erősen javasolt alkoholba mártott kendővel még egyszer mindent letörölni. A kit-ben található anyagok készek az azonnal használatra és használat után eldobhatók. 9.1.1. Ha a minta folyékony, akkor a mintavétel előtt alaposan rázza össze, hogy homogén legyen. Ha minta félig folyékony vagy tésztaszerű, akkor egy fogpiszkáló vagy tiszta kanál segítségével vegyen mintát és keverje össze, hogy homogén keveréket alkosson. Ha a minta szilárd, akkor őrölje meg a mozsárban vagy házi húsdarálóban (aminek teljesen tisztának kell lennie). Ha az étel minta túl kemény (cukorka, nugát, stb.) akkor törjön le belőle egy darabot késsel vagy kis kalapáccsal, hogy hatékony legyen az őrlés.

FONTOS MEGJEGYZÉS! Ha az ételnek több alkotórésze van, bizonyosodjon meg arról, hogy reprezentatív mintát vesz minden részből és egy végső homogén mintát készít elő. Ha ezt nem teszi, és a glutén nem egyformán oszlik el az ételben, akkor hamis negatív eredményt kaphat.

9.1.2. Használja a biztosított kanalat és az első táblázatban megadott mennyiségeket, vagy ha van megfelelő mérleg (1) akkor 1 grammot kell kimérni. Ha a minta folyékony, akkor használja a beméretezett kanalat vagy vegyen 1 milliliter mintát. (1)

A mérleg használata növeli az elemzési folyamat pontosságát.

1. táblázat: Az ételminta mennyisége az étel típusától függően

Étel típusa

Példa

Lisztek, finom porok

kukoricaliszt, rizsliszt, tejpor, fűszerek, stb.

Finom morzsa

kenyér, keksz, sütemény, snacks, stb.

Folyadék és szószok

tej, tejszín, gyümölcslé, sűrített tej, joghurt, leves barnamártás, szószok, stb.

Kanál mennyisége

Hús, hal és Hús, hal, kolbász, hurka, felvágott pástétom, konzerv hús és hal, stb. 9.1.3. Nyisson ki egy sárga kupakos extrakciós palackot és tegye bele a kanál tartalmát (gr vagy ml) 9.1.4. Zárja le a palackot és alaposan rázza össze legalább 2 percig és aztán hagyja állni kb. 5 percig, hogy a szilárd részek az aljára kerüljenek. A lenyugvási idő a minta típusától függ. 9.1.5. Nyisson ki egy kék kupakos oldatos palackot. Az eldobható műanyag pipettát használva vegyen ki kb. 1 ml mintát a sárga kupakos extrakciós palackból. Tegyen 10,4,2 vagy 1 extrakciós cseppet a kék kupakos oldat palackba attól függően, hogy mi a kívánt küszöbértéke a kimutatásnak. (2. táblázat. Az extrakciós mintacseppek számának kapcsolata a teszt kimutatási küszöbértékével) Keverje lágyan legalább 15 másodpercig. Cseppek száma 10 4 2 1

Kimutatási limit 5 ppm 10 ppm 20 ppm 40 ppm

9.1.6. A kék kupakos oldatos palackból adjon 5-10 cseppet egy új eldobható műanyag pipettával ugyanabba a felfordított kék kupakba. Tegye a pálca vattás végét a folyadékba, amíg az összes folyadék felszívódik a kék kupakból. Hagyja állni a kék kupakban. 9.1.7. Várjon pontosan 10 percet, hogy lássa a végeredményt (ha magas a glutén koncentrációja, az eredmény már 1-2 percen belül megjelenhet). FONTOS MEGJEGYZÉS! 10 perc után az eredmények nem teljesen megbízhatóak. 1. ábra: A minta előkészítése és analizálása

9.2 Az eredmények interpretálása Negatív: Egy KÉK csík (kontroll vonal) jelenik meg a pálca középső részén (kontroll zóna). Pozitív: A kontroll vonal (KÉK) mellett egy PIROS csík (eredmény vonal) is megjelenik az eredmény zónában. The piros vonal intenzitása a minta glutén koncentrációjától függ. A küszöb kimutatási érték a 9.1.5 pontban jelzett kék kupakos oldat palackba tett cseppek számától (10,4,2 vagy1) függ. (Lásd 3. táblázat) 3. táblázat: Az eredmények interpretálása (2)

Teszt eredmény (2)

Pozitív Negatív

Kimutatási küszöb érték 10 csepp 4 csepp 2 csepp 1 csepp > 5 ppm > 10 ppm > 20 ppm > 40 ppm < 5 ppm < 10 ppm < 20 ppm < 40 ppm

Az eredmények kvalitatívak minden kimutatási limitnél.

Érvénytelen: A kontroll vonal (KÉK) nem jelenik meg attól függetlenül, hogy az eredmény csík (PIROS) megjelenik-e. A leggyakoribb okok az érvénytelen eredménynél: nem megfelelő mennyiségű minta, melyet egy helytelen folyamat követ, vagy a reagensek lebomlása. Érvénytelen eredmény esetében szükséges a folyamat felülvizsgálata és meg kell ismételni a vizsgálatot egy új teszttel. A probléma továbbra is fennáll akkor lépjen kapcsolatba a szállítóval és hagyja abba a teszt használatát.

10. Felületi analízis 10.1 Előkészítés és mintaelemzés 10.1.1 Dörzsölje a pálca vattás oldalát egy legalább 16 cm2/ 2.46 inch2 területű vagy 40 cm / 15.6 inch hosszú felületen. Az analízisre kiválasztott területnek képviselnie kell a teljes területet. 10.1.2 Nyissa ki a kék kupakos oldatos palackot és helyezze a felfordított kupakot egy tiszta felületre. Használjon új, eldobható műanyag pipettát, hogy beletegyen 5-10 cseppet a palackból a kék kupakba. Tegye a pálca vattás oldalát a kék kupakba, amíg az összes folyadékot felszívja. Hagyja állni a kék kupakban. 10.1.3 Várjon pontosan 10 percet, hogy lássa a végeredményt (ha magas a glutén koncentráció, akkor az eredmény már 1-2 percen belül megjelenhet). 2. ábra: A felületi analízis folyamata Ide jön az ábra a 8. oldal tetejéről. 10.2 Az eredmények interpretálása Negatív: egy KÉK csík (kontroll vonal) jelenik meg a pálca középső részén (kontroll zóna). Pozitív: A kontroll vonal (KÉK) mellett egy PIROS csík (eredmény vonal) is megjelenik az eredmény zónában. The piros vonal intenzitása a minta glutén koncentrációjától függ. The piros vonal intenzitása a minta glutén koncentrációjától függ.

Érvénytelen: A kontroll vonal (KÉK) nem jelenik meg, attól függetlenül, hogy az eredmény vonal (PIROS) megjelenik-e. Ugyanazok a megfontolásokat kell figyelembe venni, mint a 9.2 pontban jelzett érvénytelen teszt eredményeknél. 11. Minőség ellenőrzés A belső kontroll benne van a tesztben. A kék vonal, ami megjelenik a tesztben, jelenti a belső kontrollt, ami ellenőrzi, hogy a minta mennyisége elegendő és a folyamat megfelelő-e 12. Analitikus jellemzők 12.1 Szenzitivitás Étel, ital és orál higiéniás termékek elemzése A vizsgálat kimutatási határa 5 ppm, maximum szenzitivitással dolgozva (10 csepp). Ez a kimutatási limit minden egyszerű mintánál – pl. nyers anyagoknál, kevéssé feldolgozott ételeknél és nem hő kezelt ételeknél - mindig elérhető. A teszt magas szenzitivitása eleget tesz a Tápanyag Kódex és az EC 41/2009-es szabályozásának, ami 20 ppm-es limitet állapít meg gluténmentesként. Felületi analízis A teszt által kapott eredmény a glutén jelenlétét vagy hiányát jelzi az elemzett felületen, ezt nem lehet glutén ppm értékké kivetíteni. Ha egy 16 cm2/2.46 inch2 méretű vagy 40 cm/15.6 inch hosszú felületen 10ng/cm2 kimutatott érték van, akkor azt lehet becsülni, hogy egy 1000 cm2 –es (40 cm x25 cm / 15.6 cm x 9.8 cm) munkafelületen, 1 kilogramm étel masszával dolgozva a végtermék kevesebb mint 0.01 ppm-et (0.01 mg glutén / étel kilogramm) fog tartalmazni. Ez a mennyiség 2000-szer kevesebb, mint az európai normák szerint megállapított 20 ppm (20 mg glutén / étel kilogramm). Ez azt jelenti, hogy a módszernek nagy a biztonsági ráhagyása és ez biztosítékot ad az ügyfeleknek, glutén érzékenyeknek és ételbiztonsági felügyelőknek (ref.4). 12.2 Specificitás Ez a teszt kifejezetten az alábbi mérgező részek jelenlétének kimutatására készült: búza prolamin (gliadin), rozs (secalin), árpa (hordein) és zab (avenin) különböző variácója. Ezek mérgezőek lehetnek és így károsak a glutén érzékenységben szenvedő betegek számára. Mindazonáltal, nem figyeltek meg pozitív eredményt, ha a minta rizst, kukoricát, szóját, hajdinát, szezámot, kölest, teffet, quinoa-t és amarant-ot tartalmazott, ezek a növényi hozzávalók biztonságosak a glutén érzékenységben szenvedők számára. 12.3 Belső validálás A teszt azon képességének biztosítására, hogy széles skálájú különböző mintákat tud elemezni, különböző kereskedelmi mintákat teszteltek. A GlutenTox®-Pro-val elvégzett mintaelemzések minden típusú mátrixban (lásd 1-es melléklet) kielégítően eredményesek és következetesek voltak a Tápanyag Kódex által validált módszerek szerint, ami azt jelenti, hogy a tesztet széles körű mintákon lehet használni.

13. Referenciák 1. SHAN L., et al.; „Structural basis for gluten intolerance in celiac sprue”; Science, 2002, 297: 22759 2. COMINO I., et al.; „Diversity in oat potential immunogenicity: basis for the selection of oat varieties with no toxicity”; Gut; 2011; 60:915-922. 3. MORON B.; et al.; „Sensitive detection of cereal fractions that are toxic to celiac disease patients by using monoclonal antibodies to a main immunogenetic wheat peptide”, 2008; 87:405-414 4. SIGLEZ M.A.; et al.; „Método de detección de gluten en superficies”; Alimentaria, 2010; 411:6770 Melléklet 1. A GlutenTox®-Pro validálásra tesztelt minták

Csoport

Tesztelt minták

Liszt és dara

kukoricaliszt, előfőzött kukoricaliszt, kukoricadara, rizsliszt, búzaliszt, hajdina liszt

Tejtermékek

tehén tej, tej oldódó rostokkal, tej gabonafélékkel, natúr és ízesített joghurt sajtkrém, kockasajt

Sült és gabona termékek

pirítós, grisini, kekszek, csokoládés keksz, Madeline, torta, kukoricapehely, tészta, kukorica palacsinta, rizs sütemény, tönkölybúza sütemény, snack

Hústermékek Haltermékek Zöldségek

darált pulyka és csirke, pulyka kolbász, csirke érmék, disznó kolbász, chorizo tőkehal és hekk salátakeverék, sült zöldségek

Levesek, krémek és száraz keverékek

zöldségleves, csirkés rizses leves, szárított zöldségleves, leveskockák, mogyoróvaj

Szószok, dresszingek, fűszerek Cukrok

joghurtos salátaöntet, ketchup, szójaszósz, salátaöntet, fokhagymapor, paprikapor, főzőtejszín glükóz szirup, porcukor

Előre elkészített ételek

húsgombóc szószban borsóval, húsos ravioli tojásos tésztában, babfőzelék

Zsíros ételek

olíva olaj, napraforgó olaj, vaj margarin, tejszín

Savak ételek

paradicsomszósz, borecet, almaecet, citromlé

Italok Orál higiéniés termékek

víz, tej, gyümölcslevek, sör, szója italok rizs italok, zab italok, alkoholmentes italok fogkrém, szájöblítő

Biomedal Diagnostics Több információért kérjük, hogy látogasson el a honlapunkra vagy keressen fel minket: SEVILLA Av. Américo Vespucio, n 5-4, planta 1, módulo 12 Parque Cientifico Tecnológico Cartuja 93. 41092 – Sevilla – Espana Tel (+34) 95 408 12 76 Fax. (+34) 95 408 12 79 Biomedal S.L. www.biomedal.com [email protected]