BACTEC Peds Plus/F Culture Vials
Živná pùda s výtažkem sójového kaseinu a pryskyøicí
PP091JAA 2008/01 Èesky
*Èíslo patentu (USA): 4 632 902 ÚÈEL POUŽITÍ Kultivační lahvičky BACTEC Peds Plus/F (obohacená živná půda s výtažkem sójového kaseinu a CO2) se používají pro aerobní krevní kultury. Hlavní použití je s fluorescenčními přístroji BACTEC pro kvalitativní kultivaci a průkaz aerobních mikroorganismů (hlavně bakterií a kvasinek) v pediatrických a jiných krevních vzorcích, které mají zpravidla objem menší než 3 mL. SHRNUTÍ A VYSVÌTLENÍ Testovaný vzorek se inokuluje do lahvièky, která se poté vloží do fluorescenèního pøístroje BACTEC za úèelem inkubace a pravidelného odeètu. Každá lahvièka obsahuje èidlo, které detekuje zvýšení množství CO2 vyprodukovaného rùstem mikroorganismù. Pøístroj každých deset minut monitoruje zvýšení fluorescence èidla, která je pøímo úmìrná množství pøítomného CO2. Pozitivní odeèet znamená, že se v lahvièce pravdìpodobnì nachází životaschopné mikroorganismy. Detekce se týká pouze mikroorganismù, které se budou vyvíjet v urèitém typu média. Pryskyøice byly popsány pro úpravu vzorkù krve pøed inokulací do kultivaèního média i po ní. Pryskyøice je souèástí kultivaèních médií BACTEC, protože zlepšuje možnost prokazování organismù bez nutnosti zvláštního zpracování.1-3 ZÁSADY POSTUPU Pokud se v testovaném vzorku inokulovaném do lahvièky BACTEC mikroorganismy nachází, budou organismy pøi metabolizaci substrátù nacházejících se v lahvièce vytváøet CO2. Fluorescenèní pøístroj BACTEC bude monitorovat zvyšování fluorescence èidla v lahvièce zpùsobené zvýšením množství CO2. Analýza rychlosti zvýšení CO2 a zvýšení množství CO2 umožòuje fluorescenènímu pøístroji BACTEC urèit, zda je lahvièka pozitivní, tj. zda testovaný vzorek obsahuje životaschopné organismy. REAGENTY Kultivaèní lahvièky BACTEC Peds Plus/F obsahují pøed zpracováním následující aktivní složky: Seznam složek Destilovaná voda..............................................................40 mL Živná pùda s výtažkem sójového kaseinu..........................2,75% w/v Kvasnièný výtažek...............................................................0,25% w/v Natrávenina zvíøecí tkánì...................................................0,10% w/v Pyruvát sodný......................................................................0,10% w/v Glukóza...............................................................................0,06% w/v Tøtinový cukr.......................................................................0,08% w/v Hemin..................................................................................0,0005% w/v Menadion...........................................................................0,00005% w/v Polyanetholsulfonát sodný (SPS)........................................0,020% w/v Pyridoxal HCl (vitamín B6)...................................................0,001% w/v Neionická adsorpèní pryskyøice........................................10,0% w/v Kationaktivní výmìnná pryskyøice.....................................0,6% w/v Všechna média BACTEC jsou zøedìna pøidaným CO2. Varování a bezpeènostní opatøení Pro diagnostiku in vitro. Výrobek obsahuje suchou pøírodní pryž. Klinických vzorcích se mohou nacházet patogenní mikroorganismy vèetnì viru hepatitidy a viru lidské imunodeficience (HIV). Proto dodržujte pøi práci s‑veškerým materiálem kontaminovaným krví a jinými tìlními tekutinami „standardní bezpeènostní opatøení“4-7 a pøedpisy své instituce. Pøed použitím každou lahvièku prohlédnìte a zkontrolujte, zda není poškozená, kontaminovaná èi opotøebená. Lahvièky, které vykazují známky poškození nebo kontaminace, napø. netìsnost, zakalení, zmìnu zabarvení (ztmavnutí), vypoukliny nebo stlaèené víèko, nepoužívejte. V kontaminované lahvièce by mohl být pøetlak. Pokud pro pøímý odbìr použijete kontaminovanou lahvièku, mohlo by dojít ke zpìtnému prùtoku kontaminovaného kultivaèního média do žíly pacienta. Kontaminace lahvièky nemusí být zøejmá na první pohled. Rozhodnete-li se použít pøímý odbìr, pozornì jeho postup sledujte, abyste zabránili zpìtnému prùtoku látek do tìla pacienta. Ve výjimeèných pøípadech mùže pøi snímání zaklápìcího víèka nebo pøi manipulaci dojít k prasknutí sklenìné lahvièky nebo ke zlomení krèku. Ve výjimeèných pøípadech mùže také dojít k nedostateènému uzavøení lahvièky. V obou pøípadech mùže obsah lahvièek vytéci. Dojde-li po inokulaci lahvièky k úniku nebo rozlití jejího obsahu, postupujte opatrnì, protože se zde mohou nacházet patogenní organismy nebo látky. Pøed likvidací všechny inokulované lahvièky sterilizujte v autoklávu. Pozitivní kultivaèní lahvièky pro subkultivaci nebo barvení atd.: Pøed odebráním vzorkù je nezbytné odstranit plynné metabolity mikroorganismù. Odbìr vzorkù provádìjte pokud možno v místnosti zabezpeèené proti biologické nákaze. Pøed odbìrem si obleète odpovídající ochranný odìv, rukavice a masku. Další informace o subkultivaci naleznete v èásti Postup. Možný únik bìhem inokulace vzorkù do kultivaèních lahvièek lze minimalizovat pomocí injekèních støíkaèek s trvale nasazenými jehlami nebo hroty typu Luer-Lok. Pokyny ke skladování Lahvièky BACTEC jsou po dodání pøipraveny k použití; nevyžadují žádné znovuobnovení ani zøedìní obsahu. Skladujte pøi teplotì 2 – 25 °C na suchém místì mimo dosah pøímého sluneèního záøení. ODBÌR VZORKÙ Odbìr vzorkù provádìjte sterilními postupy, abyste snížili riziko kontaminace. Rozmezí pro objem krve, který lze kultivovat, je 0,5 až 5,0 mL. Optimálních výsledkù dosáhnete pøi objemu v rozmezí 1,0 až 3,0 mL. Pokud bude objem kultivované krve menší než 0,5 mL, bude pro prokázání nìkterých nároèných organismù, napø. druhù Haemophilus, zøejmì nutné použít odpovídající pøídavek (tak, jak je uvedeno níže v tomto pøíbalovém letáku). Doporuèujeme inokulovat vzorky do lahvièek BACTEC v blízkosti postele pacienta. Vìtšinou se vzorky odebírají injekèní støíkaèkou s hrotem typu Luer-Lok. Podle potøeby lze použít držák na jehly Vacutainer, soupravu pro odbìr krve Vacutainer, soupravu pro odbìr krve Vacutainer Safety-Lok nebo jinou soupravu hadièek s kanylou typu „butterfly“. Rozhodnete-li se pro pøímý odbìr použít jehlu se soupravou hadièek, pozornì pøi zahájení odbìru vzorku sledujte smìr prùtoku krve. Vakuum v lahvièce obvykle pøesáhne hodnotu 5 mL, takže je dùležité, aby uživatel sledoval odebraný objem prostøednictvím znaèek v rozestupu 5 mL na štítku lahvièky. Po natažení požadovaných 1 – 3 mL zastavte prùtok ohnutím hadièky a odstranìním soupravy hadièek z lahvièky BACTEC. Inokulovanou lahvièku BACTEC co nejrychleji pøepravte do laboratoøe.
POSTUP Odstraòte z lahvièky BACTEC zaklápìcí víèko a zkontrolujte, zda není lahvièka popraskaná, kontaminovaná, pøíliš zakalená, vypouklá nebo zda nemá stlaèenou zátku. Jestliže si všimnete jakéhokoli defektu, lahvièku NEPOUŽÍVEJTE. Pøed inokulací oèistìte víèko alkoholem (použití jódu nedoporuèujeme). Aseptickým postupem vstøíknìte nebo proveïte pøímý odbìr maximálnì 5 mL vzorku na každou lahvièku (viz èást Omezení postupu). Inokulované aerobní lahvièky umístìte co nejrychleji do fluorescenèního pøístroje BACTEC za úèelem inkubace a monitorování. Pokud inokulovanou lahvièku neumístíte do pøístroje ihned a shledáte v ní viditelný rùst, netestujte ji ve fluorescenèním pøístroji BACTEC, ale radìji proveïte subkultivaci a Gramovo barvení a zacházejte s ní jako s pozitivní lahvièkou. Lahvièky vložené do pøístroje budou automaticky testovány každých deset minut po dobu uvedenou v testovacím protokolu. Fluorescenční přístroj BACTEC určí a identifikuje pozitivní lahvičky (viz příslušná Uživatelská příručka fluorescenčního přístroje BACTEC). Èidlo uvnitø pozitivních lahvièek se nebude na první pohled lišit od èidla v negativních lahvièkách, fluorescenèní pøístroj BACTEC však zjistí rozdíl ve fluorescenci. Pokud bude na konci testu negativní lahvièka na první pohled pozitivní (znaky: krev èokoládového zbarvení, vypouklé víèko, hemolyzovaná a/nebo velmi tmavá krev), proveïte subkultivaci a Gramovo barvení a zacházejte s ní jako s pozitivní lahvièkou. Pozitivní lahvièky subkultivujte a na podložním sklíèku proveïte Gramovo barvení. Ve velké vìtšinì pøípadù budou organismy viditelné a laboratoø tak mùže lékaøi oznámit pøedbìžné výsledky. Subkultivace na selektivních médiích a pøedbìžný pøímý antimikrobiální test na citlivost lze pøipravit z tekutiny obsažené v lahvièkách BACTEC. Subkultivace: Pøed zahájením subkultivace umístìte lahvièku do svislé polohy a na víèko umístìte alkoholem napuštìné krytí. Abyste z lahvièky uvolnili tlak, zaveïte pøes krytí napuštìné alkoholem a pøes víèko sterilní jehlu s odpovídající filtrem nebo tampónem. Po uvolnìní tlaku a pøed odbìrem vzorku lahvièky za úèelem provedení subkultivace jehlu vyjmìte. Pøi zavádìní a vyjímání udržujte jehlu v pøímé poloze, nezavádìjte ji ani nevyjímejte otáèivými pohyby. Abyste získali maximální množství izolátù, mùžete negativní kultury nejprve zkontrolovat barvením a/nebo subkultivací a teprve poté je zlikvidovat jako negativní. KONTROLA KVALITY Požadavky na kontrolu kvality musí být splnìny v souladu s platnými místními, státními a federálními zákony a požadavky na akreditaci a se standardními postupy kontroly kvality vaší laboratoøe. Doporuèujeme, aby si uživatel prostudoval informace o správném provedení kontroly kvality v pøíslušných smìrnicích CLSI (dříve NCCLS) a pøedpisech CLIA. Po uplynutí data expirace kultivaèní lahvièky nepoužívejte. Lahvièky, které vykazují známky popraskání nebo jiného poškození, nepoužívejte a odpovídajícím zpùsobem je zlikvidujte. Souèástí každého balení médií jsou certifikáty kontroly jakosti. Certifikáty kontroly jakosti uvádìjí seznam testovacích organismù, vèetnì kultur ATCC urèených normou CLSI, Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media (Zajištìní jakosti u kultivaèních médiích pro komerèní úèely).8 Èasové rozmezí pøed detekcí v hodinách pro každý z organismù uvedený v certifikátu kontroly jakosti pro toto médium je ≤ 72 h: Organismus Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Escherichia coli ATCC 25922 Streptococcus pneumoniae* ATCC 6305 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Candida albicans ATCC 18804 Neisseria meningitidis ATCC 13090 Alcaligenes faecalis ATCC 8750 Haemophilus influenzae ATCC 19418 Staphylococcus aureus ATCC 25923 *Barvení CLSI Informace o kontrole kvality pro fluorescenční přístroj řady BACTEC naleznete v příslušné uživatelské příručce fluorescenčního přístroje BACTEC. OMEZENÍ POSTUPU Kontaminace Bìhem odbìru a inokulace do lahvièky BACTEC nesmí dojít ke kontaminaci vzorku. Výsledkem kontaminovaného vzorku bude pozitivní odeèet, který však nebude relevantním klinickým vzorkem. Rozhodnutí musí uèinit uživatel v závislosti na takových faktorech jako je typ prokázaných organismù, pøítomnost stejných organismù ve více kulturách, záznamy pacienta atd. Prokázání organismù citlivých na SPS a nároèných organismù ze vzorkù krve Jelikož krev mùže vùèi organismùm citlivým na SPS (napø. nìkteré druhy Neisseria) neutralizovat toxicitu SPS, je pøítomnost optimálního objemu krve (1 – 3 mL) pøi prokazování tìchto organismù výhodou. Nìkteré nároèné organismy, napø. nìkteré druhy Haemophilus, vyžadují faktory rùstu, napø. NAD nebo faktor V, které lze získat ze vzorkù krve. Je-li objem vzorku krve velmi malý (0,5 mL nebo ménì), bude zøejmì nutné pro prokázání tìchto organismù použít odpovídající pøídavek. Přídavek pro náročné organismy FOS značky BACTEC může být použit jako vyživovací přídavek. Organismy, které nejsou životaschopné Nátìr s Gramovým barvením z kultivaèního média mùže obsahovat malé množství organismù, které nejsou životaschopné. Zdrojem tìchto organismù jsou složky médií, chemikálie pro barvení, imerzní olej, podložní sklíèka a vzorky používané pro inokulaci. Pacientovy vzorky mohou také obsahovat organismy, které se v kultivaèním médiu nebo médiu urèeném k subkultivaci nerozmnoží. Takové vzorky podle potøeby subkultivujte na speciálních médiích.9 Antimikrobiální aktivita Neutralizace antimikrobiální aktivity pryskyøice se liší podle úrovnì dávky a doby odbìru vzorku. Studie prokázaly, že pryskyøice obsažená v tomto médiu nedokáže adekvátnì neutralizovat antimikrobiální pøípravky imipenem-cilastatin. Prokázání Streptococcus pneumoniae U aerobních médií bude S. pneumoniae obvykle na první pohled i po otestování pøístrojem pozitivní, ale v nìkterých pøípadech se mùže stát, že se po Gramovì barvení nebo po bìžné subkultivaci žádný organismus neprokáže. Pokud byla inokulována i anaerobní lahvièka, lze organismus obvykle prokázat provedením aerobní subkultivace anaerobní lahvièky. Bylo totiž prokázáno, že tento organismus se v anaerobních podmínkách dobøe vyvíjí.10 Všeobecné pøedpoklady Optimálního prokázání izolátù bude dosaženo pøidáním 1 – 3 mL krve. Použití menšího èi vìtšího množství mùže nepøíznivì ovlivnit prokazování a/nebo èasová rozmezí detekce. Krev mùže obsahovat antimikrobiální látky nebo jiné inhibitory, které mohou zpomalit rùst mikroorganismù nebo tomuto rùstu úplnì zabránit. Pokud jsou pøítomny organismy, které neprodukují dostateèné množství CO2 na to, aby je pøístroj detekoval, nebo pokud došlo pøed umístìním lahvièky do pøístroje k výraznému rùstu, mùže dojít k falešnému negativnímu odeètu. K nesprávnému urèení pozitivity mùže dojít v pøípadì, že je poèet bílých krvinek vysoký.
OÈEKÁVANÉ VÝSLEDKY Studie týkající se inokulace kultur na pùdu byly provedeny za použití inokula v rozmezí od 10 do 50 CFU na jednu kultivaèní lahvièku s ATCC i nekultivovanými mikrobiálními kmeny. Dále je uveden seznam organismů, které byly zjištěny v kultivačním médiu BACTEC Peds Plus/F během pěti (5) dnů. Acinetobacter baumanii Acinetobacter lwoffii Alcaligenes faecalis Candida albicans Candida (Torulopsis) glabrata Corynebacterium J-K Cryptococcus neoformans Enterobacter cloacae Escherichia coli
Haemophilus influenzae Haemophilus parainfluenzae Klebsiella pneumoniae Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis Proteus mirabilis Providencia stuartii Pseudomonas aeruginosa Salmonella typhimurium
Serratia marcescens Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Stenotrophomonas (Xanthomonas) maltophilia Streptococcus pneumoniae Streptococcus skupiny A Streptococcus skupiny D
Interní studie prokázaly, že antimikrobiální látky jsou úèinnì neutralizovány pryskyøicí použitou v pryskyøicovém médiu BACTEC. V tìchto testech byly antimikrobiální látky pøidány v klinicky relevantních koncentracích pøímo do pryskyøicového média pøed inokulací citlivými kmeny. Tyto testy byly provedeny souèasnì s použitím médií bez pryskyøice jako kontrol. Bylo zjištìno, že pryskyøicí byly neutralizovány antimikrobiální látky zastupující následující kategorie: peniciliny, cefalosporiny (první, druhá a tøetí generace), makrolidy, aminoglykosidy, fluorochinolony, linkomyciny, tetracyklin a choramfenikol. VLASTNOSTI ÚÈINNOST V externí klinické studii na dvou místech, v níž se srovnávala úèinnost kultivaèního média BACTEC Peds Plus/F s úèinností kultivaèního média BACTEC NR Peds Plus, bylo otestováno celkem 3 249 vyhovujících párù vzorkù. Bylo prokázáno celkem 430 organismù. Z tohoto množství bylo 342 (80 %) organismù klinicky signifikantních a 88 (20 %) jich bylo klinicky nesignifikantních. Z množství klinicky signifikantních izolátù jich 219 (64 %) bylo prokázáno v obou médiích, 63 (18 %) pouze v kultivaèním médiu BACTEC Peds Plus/F a 60 (18 %) pouze v kultivaèním médiu BACTEC NR Peds Plus. V tabulce 1 jsou uvedeny prokázané izoláty dle typu média. V této studii byly v kultivaèním médiu BACTEC Peds Plus/F urèeny ètyøi falešnì pozitivní kultivaèní lahvièky a nebyly urèeny žádné falešnì negativní kultivaèní lahvièky. Prùmìrná doba do detekce u kultivaèního média BACTEC Peds Plus/F byla 25 hodin; prùmìrná doba do detekce u kultivaèního média BACTEC Peds Plus byla 33 hodin. Tabulka 1: Prokázání izolátù v klinické studii – dle typu média Organismus Prokázán pouze v médiu Peds Plus/F Negativní po Gramovì barvení 9 Pozitivní po Gramovì barvení 51 Kvasnice 3
Prokázán pouze v médiu NR Peds Plus 6 43 11
Prokázán v obou médiích 50 146 23
Seznam organismù prokázaných v médiu BACTEC Peds Plus/F bìhem klinických pokusù: Actinobacillus lignieresi Escherichia coli Streptococcus skupiny B Burkholderia (Pseudomonas) cepacia Klebsiella pneumoniae Streptococcus constellatus Candida albicans Neisseria meningitidis Streptococcus pneumoniae Candida tropicalis Pseudomonas fluorescens Streptococcus salivarius Citrobacter freundii Salmonella spp. Streptococcus intermedius Enterobacter aerogenes Serratia liquefaciens Enterobacter cloacae Staphylococcus aureus Enterococcus spp. Staphylococcus spp. koag. neg. DOSTUPNOST Kat. è. 442194
Popis BACTEC Peds Plus/F Culture Vials (kultivační lahvičky), krabice s 50 lahvičkami
ODKAZY: 1. Wallis, C. et al. Rapid isolation of bacteria from septicemic patients by use of an antimicrobial removal device. J. Clin. Microbiol. 1980, 11:462-464. 2. Applebaum, P.C. et al. Enhanced detection of bacteremia with a new BACTEC resin blood culture medium. J. Clin Microbiol. 1983, 17:48-51. 3. Jungkind, D.L. et al. Evidence for a second mechanism of action of resin in BACTEC NR16A aerobic blood culture medium. Abstracts of the Annual Meeting of Amer. Soc. for Microbiol. 1989. 4. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 5. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80. 6. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 7. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 8. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2004. Approved Standard M22-A3. Quality control for commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed., CLSI, Wayne, Pa. 9. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller. 2007. Manual of clinical microbiology, 9th ed., American Society for Microbiology, Washington, D.C. 10. Howden, R.J. J. Clin. Path. 1976, 29:50-53.
B
m
A
Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland 21152 USA 800-638-8663
BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: 353-61-47-29-20 Fax: 353-61-47-25-46
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, Peds Plus, Vacutainer, Safety-Lok, FOS and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company. © 2008 BD
