Ekotoxikologie Univerzita Karlova v Praze Přírodovědecká fakulta
Katedra analytické chemie RNDr. R. Čabala, Dr. ZS 2006 - 2015
4. Biologická dostupnost a faktory ovlivňující ekotoxicitu Ekotoxikologická a biologická dostupnost Ekotoxikologická dostupnost ve vodních ekosystémech pH - amoniak, kyanovodík a sulfan Kovy Organické a organokovové sloučeniny Biologická dostupnost v životním prostředí Sediment Půda Vliv faktorů životního prostředí Biologické faktory Adaptace na chemikálie
ZS 2006-15
Ekotoxikologie
2
Ekotoxikologická a biologická dostupnost Předpokladem příjmu látky je její biologická dostupnost (BD) Toxický účinek mohou vyvolat pouze ty látky, které přijdou do styku nebo jsou přijímány organismem Biologická dostupnost = schopnost organismu přijímat látky jednoduchá - esenciální látky a živiny toxikologická - dostupnost škodlivé látky uvnitř organismu ekotoxikologická - schopnost příjmu škodlivin ze ŽP Biologická dostupnost - důležitý faktor pro přenos laboratorních dat do
reálného systému Autoekologie - studuje mechanismy a druhy přizpůsobení organismů vnějším podmínkám (aklimatizace a adaptace) Abiotické a biotické faktory ŽP BD Existenční možnosti druhu ZS 2006-15
BD Klíčové funkce organismů • růst, rozmnožování, metabolismus Ekotoxikologie
3
Ekotoxikologická a biologická dostupnost Fyzikální faktory teplota rozpustnost fázový stav rozpuštěno částice Chemické faktory pH tvorba komplexů tvrdost vody DOC
Faktory ovlivňující ekotoxikologickou a toxikologickou dostupnost
Biologické faktory adsorpce na površích příjem vazebná místa orgamismu ochranné mechanismy
Ekotoxikologická biologická dostupnost ZS 2006-15
Toxikologická biologická dostupnost Ekotoxikologie
4
Ekotoxikologická a biologická dostupnost
Druh látky a její vlastnosti
Speciace
Intenzita toxického účinku ~ koncentrace škodliviny v místě působení (receptoru) - Toxikodynamika Koncentrace u receptoru ~ množství přijaté látky - transport uvnitř organismu - Toxikokinetika Množství přijaté látky ~ vnější koncentrace látky × biologická dostupnost Biologická dostupnost ~ speciace látky v ŽP Speciace látky ~ druh látky × fyzikálně-chemické vlastnosti ŽP
Fyzikálně-chemický stav ŽP
BD Druh a stav organismu
ZS 2006-15
Ekotoxikologie
5
Ekotoxikologická a biologická dostupnost Faktory ovlivňující ekotoxicitu - abiotické + biotické Abiotické pH salinita (iontová síla) Složení vody rozpuštěné anorganické látky rozpuštěné organické látky suspendované látky
obsah O2 teplota
Biotické vývojové stadium, věk, velikost, pohlaví zdravotní stav a příjem potravy sezónní výkyvy citlivosti stupeň aklimatizace adaptace na chemikálie chování, vnitro- a mezidruhová konkurence: sociobiologie ZS 2006-15
Ekotoxikologie
6
Ekotoxikologická biologická dostupnost - voda Význam pH na speciaci - Amoniak, kyanovodík a sulfan
celkový obsah amoniaku (NH3 + NH4+) = = amoniak(NH3) + amonium(NH4+) NH3 je toxičtější Toxicita = f (koncentrace NH3)
LC50 (96 h) (mg N/l)
NH3/NH4+ (pKa=9,3)
nárůst pH o 1 podíl NH3 vzroste 10× nárůst toxicity 6×
Naše podmínky (pH 8,5, t 20°C) - podíl NH3 na celkovém amoniaku asi 10%
ZS 2006-15
Ekotoxikologie
Celkový amoniak NH3 + NH4+
Amoniak NH3
Akutní toxicita amoniaku pro Pstruha duhového 7
Ekotoxikologická biologická dostupnost - voda HCN/CN- (pKa=9,2) HCN je toxičtější než CN- s klesajícím pH toxicita roste CN- komplexy kovů - nárůst toxicity s klesajícím pH větší Ni(CN)42- : pH 7,8 7,5 - nárůst akutní toxicity pro ryby 10× Vlastní toxická částice v organismu: CNinhibice oxidativní fosforylace (produkce energie) inhibice mitochondriální cytochromoxidázy vazba CN- na volné koordinační místo Fe3+ v hemu přednostní poškození buněk s vysokou energetickou spotřebou (nervové) H2S/HS-/S2- (pKa=7,1, 12) H2S je toxičtější s klesajícím pH toxicita roste při pH 8,4 obsah nedisociovaného H2S 4 % při pH 6,0 obsah nedisociovaného H2S 90 % Obecně platí, že neutrální nedisociované formy jsou biologicky dostupnější, na rozdíl od kovů. ZS 2006-15
Ekotoxikologie
8
Ekotoxikologická biologická dostupnost - kovy Chemická speciace kovů volné ionty rozpuštěné anorganické a organické komplexy nerozpustné komplexy sorbované na pevných částicích
Podíl jednotlivých forem závislý na: druhu kovu chemickém složení vody pH tvrdost (alkalinita) iontová síla (salinita ) druhu a koncentraci sorbentů (oxidy Si, Fe, Al, huminové látky) koncentrace ligandů anorganické: CO32-, OH-, Cl-, H2PO4 organické: přírodní - huminové látky, exudáty; syntetické NTA, EDTA ZS 2006-15
Ekotoxikologie
9
Ekotoxikologická biologická dostupnost - kovy
Al-částice (mol/l)
Příklady speciace Al, Pb a Cu v závislosti na pH
ZS 2006-15
Ekotoxikologie
10
Ekotoxikologická biologická dostupnost - kovy
Tvorba komplexů s ligandy snížení biologické dostupnosti snížení ekotoxicity Hg, Cd, Al, Cu, Zn Závislost akutní toxicity Cd u Palaemonetes pugio (mořský krab) na koncentraci NTA
Salinita: mořská voda 33-38‰ - pouze 3,5% Cd jako Cd2+ - 3 ‰ LC50 2.10-6 mol/l - 29 ‰ LC50 10-5 mol/l ZS 2006-15
Podíl živých jedinců (%)
Volné ionty kovů většinou ve formě aquakomplexů (např. [Cu(H2O)6]2+) zodpovědné za ekotoxicitu reakce s receptory
Podíl živých jedinců (%)
Biologický účinek
Ekotoxikologie
11
Ekotoxikologická biologická dostupnost - kovy Vliv rozpuštěných anorganických ligandů Tvrdost vody (mg či mmol/l) Celková: součet všech M2+ kovů, hlavně Ca2+ a Mg2+ Anorganické ligandy sladké vody: HCO3-, SO42-, Cl-, CO32-, HOAlkalinita: součet bází titrovatelných silnou kyselinou na MO (~ [HCO3-]+[CO32-])
Kovy jsou v tvrdé vodě méně biologicky dostupné ~ toxické než ve vodě měkké
LC50 Cu (mg/l)
Závislost akutní toxicity Cu na celkové tvrdosti vody
Celková tvrdost (mg/l CaCO3) ZS 2006-15
Ekotoxikologie
12
Komplexace Al3+ fluoridy
Snížení úmrtnosti juvenilních lososů v závislosti na koncentraci F- při konstantní koncentraci Al3+ (8,7 mol/l) ZS 2006-15
Kumulativní mortalita (%)
Hlavní důvod rostoucí ekotoxicity půd a vod: kyselé deště + ostatní imise okyselování půd mobilizace Al3+ z aluminosilikátů půdních hornin srážení Al sloučenin na žábrách vodních organizmů - toxicita dominantní forma Al v přírodních vodách - [AlF4]- hned po komplexech s H2O a HO-
Al-částice (mol/l)
Ekotoxikologická biologická dostupnost - kovy
Ekotoxikologie
Čas (h) 13
Ekotoxikologická biologická dostupnost - kovy Přírodní a syntetické organické látky Koncentrace org. ligandů - mnohonásobně nižší než anorg. Vyšší afinita org. ligandů vůči kovům Závislost akutní toxicity Cu na obsahu DOC pro larvy Střevle potoční (Pimephales promelas)
Organické látky ve vodě TOC .. Total Organic Carbon DOC .. Dissolved Organic Carbon ta část TOC, která projde 0,45 m filtrem látky o menší Mr: peptidy, tuky,cukry, huminové a fulvinové kyseliny
Nejnižší hodnota pH v kyselých skandinávských jezerech kdy ještě existuje populace Okouna říčního a obsah organických látek (TOC) TOC (mg/l) pH ZS 2006-15
0-2,0 2,1-3,0 4,96
4,90
3,1-4,0
4,1-5,0
5,1-6,0
>6
4,55
4,51
4,45
4,44
Ekotoxikologie
14
Ekotoxikologická biologická dostupnost - kovy Huminové látky Fulvonové kyseliny - rozpustné v kyselinách a bázích (Mr = 800 - 9000) Huminové kyseliny - rozpustné v bázích, nerozpustné v kyselinách (Mr = 9000 - 500 000) Huminy - nerozpustné v bázích a kyselinách
Vlastnosti vysokomolekulární organické látky žlutohnědé, hnědé a až černé barvy proměnlivé složení a struktura slině vnitřně zesítěné s velkým specifickým povrchem iontově-výměnné schopnosti (funkční skupiny) hydrofilní často obsahují cukry, polysacharidy, aminokyseliny a bílkoviny či jejich zbytky koagulují v roztocích s vysokou koncentrací solí
Původ specifická půdní syntéza - mikrobiální pedologické procesy - humifikace mikrobiální rozklad rostlinných a živočišných materiálů
Funkce absorpce slunečního záření fotochemické reakce: tvorba radikálů (R-O-O•, R-O•, O2•-/HOO• ), tvorba 1O2 , reakce s HO• -nejvýznamnější cesta rozkladu i tvorby sorpce a iontová výměna
ZS 2006-15
Ekotoxikologie
15
Ekotoxikologická biologická dostupnost - kovy Huminové látky - hypotetické struktury O CH HOOC
HO
HO CH
R
COOH CH H N O O
O
4
Huminová kyselina
C O O
O
O
H O
OH OH
HOOC
O
O N O
OH
OH COOH
O
HN O
R CH
O
COOH
C O NH
Fulvinová kyselina Koncentrace (mg/l): • povrchová voda: 1-10 • rybníky, bažiny, louže: i přes 30 Afinita • vysoká: Pb2+, Cu2+, Fe3+ • malá: Zn2+, Ni2+, Cd2+, Mn2+, Co2+ ZS 2006-15
Ekotoxikologie
16
Ekotoxikologická biologická dostupnost - kovy Syntetické organické látky Silné komplexotvorné látky (M2+) - náhražka PO43- jako změkčovadla NTA (I) - dobře odbouratelná v ČOV EDTA (II) - perzistentní, špatně fotochemicky odbouratelná jako Fe(II)-komplex
COOH
I
H2C HOOC
II HOOC CH2
N CH 2
CH 2
CH2 COOH N CH2
HOOC CH2
CH2 N CH2 COOH
COOH
ZS 2006-15
Ekotoxikologie
17
Ekotoxikologická biologická dostupnost - kovy Vliv pH Komplexní vliv na ekotoxicitu - při poklesu hodnoty pH: vzrůst koncentrace volných iontů kovů vzrůst BD změna biologické aktivity povrchu orgánů
Biologické povrchy - vzájemná interakce mezi povrchem membrány (často pozitivně nabité) a kationty v roztoku s poklesem pH: nárůst konkurence mezi M2+ a H+ o vazebná místa H+ někdy vytlačují M2+ pokles toxicity Cu2+, Cd2+, Zn2+, Al3+ (pH 4-7)
Obecně je o vlivu pH na biologickou aktivitu málo známo Aktivní obranné mechanizmy povrchy orgánů často chráněny biologickými filmy rozdílné složení a pH od okolí povrch žaber: vylučování CO2 a NH3 - ovlivnění speciace kovů a jejich BD vylučování exudátů rozpustné organické sloučeniny fungující jako ligandy kyseliny citrónová, oxalová, malonová, glycin pokles BD a toxicity kovů ZS 2006-15
Ekotoxikologie
18
Organické a organokovové sloučeniny Obecně dobrá BD pro rozpuštěné nepolární látky (platí i pro org. báze a kyseliny - vliv pH) Adsorpce rozpuštěných org. látek na humínových látkách variabilní druhy interakcí adsorpce, komplexace, chemická vazba (chemisorpce) variabilní změny BD: jak pokles - tak i vzrůst pokles: PAH, chlorované látky, tenzidy, organo-Sn, pyrethroidní insekticidy
Redukce akutní toxicity pyrethroidních insekticidů u Daphnia magna se stoupající koncentrací DOC
ZS 2006-15
Sloučenina
Fenvalerat
Deltamethrin Ekotoxikologie
DOC (mg/l)
LC50 (24 h, g/l)
3,3
1,14
8,6
11,04
15,5
19,50
2,2
0,64
4,5
3,42
10,1
4,65 19
Biologická dostupnost - kovy Důležité faktory ŽP ovlivňující biologickou dostupnost Faktor
Těžké kovy
Organické a organokovové sloučeniny
pH
+++ rozhodující koncentrace volných iontů
+++ (kyseliny, báze, organokovové sloučeniny)
Tvrdost vody
+++ vysoká toxicita v měkké vodě rozhodují volné ionty
- až +
Salinita
+
+ (lipofilní látky)
DOC
+++ (komplexace)
+++ (komplexace, vazba)
Sulfidy (sediment)
+++ (komplexace)
- až +
Teplota
+ (bioakumulace)
+ (bioakumulace)
+++ veliký, ++ střední, + malý a - žádný vliv ZS 2006-15
Ekotoxikologie
20
Biologická dostupnost v životním prostředí
Sediment BD v sedimentu má význam pro: remobilizaci chemikálií vymývání do podzemní vody příjem bentickými organizmy
Látky v sedimentu přítomny: volné ve vodné fázi ve vodné fázi v pórech pevných částic v intersticiální vodě
Stejně jako ve vodě: lépe biologicky dostupné jsou volné ionty kovů a rozpuštěné nepolární látky V sedimentu navíc: jílové minerály (oxidy a sulfidy kovů, aluminosilikáty) jako ligandy
Extrahovatelnost kovů ze sedimentu - koreluje s jejich BD snadná ~ vysoká BD obtížná ~ nízká BD Adsorpce na: oxidech Fe a Mn - redukují BD kovů vázaných v sedimentu: As, Co, Cu, Pb, Zn Adsorpce a komplexace: DOC/TOC - Al, Co, Cu, Fe, Hg, Mn, Pb, Zn ZS 2006-15
Ekotoxikologie
21
Biologická dostupnost v životním prostředí Sediment oxický - aerobní - provzdušněný anoxický - anaerobní nejdůležitějším ligandem z hlediska BD kovů: HS-/S2 tvorba těžce rozpustných sulfidů kovů - snížení toxicity
Mortalita (%)
Úmrtnost obojživelníků, chudoštětinatých červů a šneků v závislosti na poměru koncentrace extrahovatelných kovů a koncentrace sulfidů v sedimentu
ZS 2006-15
Ekotoxikologie
22
Biologická dostupnost v životním prostředí Půda komplexní materiál proměnlivého složení půdní roztok - výživa rostlin pórová a intersticiální voda pevná fáze - sorpce proměnlivá sorpční kapacita • obsah humínových látek • jílové složky - iontová výměna (reverzibilní u Pb2+ a Cu2+) • oxidy/hydroxidy Al a Fe
Těžké kovy čistírenské kaly a přirozeně kontaminovaná fosfátová hnojiva (Cd, Pb, As, Cu) vázány adsorpcí na povrchu pevné fáze komplexy s humínovými látkami zabudovány do struktury půdních minerálů volné v roztoku pohyblivé = dobře rozpustné a biologicky dostupné akumulace rostlinami fytoremediace vysoká mobilita a BD při malém pH a malém obsahu DOC ZS 2006-15
Ekotoxikologie
23
Biologická dostupnost v životním prostředí Půda aktivní ochrana rostlin při kontaminaci půdy těžkými kovy vylučování organických kyselin (citrónová, malonová, oxalová) kořeny ukládání do vakuol tolerantní (akumulátory až hyperakumulátory) × citlivé kultivary Příjem těžkých kovů salátem (Lactuca sativa) po hnojení čistírenským kalem
Množství čistírenského kalu (t/ha) 0
Cd
Zn
Cu
Pb
1,4
35
5,6
1,6
55
1,7
135
7,8
1,6
110
2,4
181
8,7
1,6
220
4,3
320
12,8
1,4
podíl salát/kal
57
32
5
1
ZS 2006-15
Koncentrace (mg/kg)
Ekotoxikologie
24
Biologická dostupnost v životním prostředí Půda - Fytoremediace Příklady úspěšné dekontaminace půdy Místo
Rostlina
Škodlivina
Ropná rafinerie, Katowice (Polsko)
Brassica juncea (brukev sítinovitá)
Pb, Cd
Zn skládka (ČR)
H. anuus, C. sativa, C. halleri, Zea (kukuřice)
Zn
Skládka (Švýcarsko)
Salix viminalis (vrba)
Zn, Cd
Zn/Cu kontaminovaná půda (Švýcarsko)
Nicotiana (tabák)
Cu, Cd, Zn
Skládka čistírenských kalů (UK)
Salix (vrba)
Ni, Cu, Zn, Cd
Zn/Cd kontaminovaná půda, Balen (Belgie)
Brassica napus (brukev řepka)
Zn, Cd, Pb
Ropou kontaminovaná půda, Trecate (Itálie)
Medicago sativa (vojtěška setá) Trifolium repens (jetel plazivý) Lolium perenne (jílek vytrvalý) Sorghum, kukuřice
ropné produkty
ZS 2006-15
Ekotoxikologie
25
Vliv faktorů ŽP na biologickou dostupnost Stresové faktory - ovlivňují citlivost organismů na chemikálie sucho, vysoká teplota, snížený obsah O2 daphnia magna - nedostatek O2 zvyšuje citlivost na pesticidy pavouci - sucho zvyšuje citlivost na pyrethroidní insekticidy dešťovka - sucho zvyšuje citlivost na Cu2+ Teplota s rostoucí teplotou roste rozpustnost chemikálií s nárůstem t o 10°C vzroste rychlost chemických reakcí 2-3 × (van´t Hoff) CN-, TBT změny fyziologických procesů studenokrevných živočichů neexistuje obecné pravidlo závislosti BD na t někdy akutní toxicita s t roste, zatímco chronická klesá ZS 2006-15
Ekotoxikologie
Vliv teploty na akutní toxicitu Zn u Lososa
Expozice (mg/l)
3°C 11°C 19°C
LC50 (24 h)
20
8,4
5,4
LC50 (96 h)
7,2
3,6
5,4
LOEL
3,5
3,6
5,4
26
Vliv faktorů ŽP na biologickou dostupnost Salinita závislost rozpustnosti neutrálních organických látek (salting-out a salting-in efekty, Hoffmeisterův effekt) příbuzné sladkovodní a mořské organismy jsou přibližně stejně citlivé ve svých běžných prostředích veliký vliv u jediného druhu organismu změna speciace kovů v důsledku tvorby komplexů závislost metabolismu škodlivin růst toxicity - zesílená inhibice acetylcholinesterázy Fenthion (organofosfát) Adlicarb (karbamát)
ZS 2006-15
Ekotoxikologie
27
Vliv faktorů ŽP na biologickou dostupnost UV-záření ozonová díra - nárůst intenzity UV-B záření poškozování zoo- a fytoplanktonu v hloubkách do 20 m silněji postiženy polární oblasti UV-B záření produkuje reaktivní kyslíkové částice (ROS): O2-, H2O2, 1O , HO oxidativní stres 2 ROS napadají násobně nenasycené mastné kyseliny buněčných membrán peroxolipidové radikály poškození membrány fotoindukovaná toxicita PAH: ryby, mušle, fytoplankton Kombinace UV-záření a chemikálií pravděpodobné příčiny redukovaný zdravotní stav zvýšená spotřeba energie na detoxifikaci příklad: u pulců zjištěno zvýšené působení UV-B záření a oktylfenolu ZS 2006-15
Ekotoxikologie
28
Vliv faktorů ŽP na biologickou dostupnost
Biologické faktory Citlivost organizmů na škodliviny genetické předpoklady: vnitro- a mezidruhové rozdíly vývojové stadium strava fyziologické změny podmíněné roční dobou
Přizpůsobivost organizmů - vývoj tolerance Aklimatizace: fyziologicky-fenotypové přizpůsobení Adaptace: genetické přizpůsobení Evoluce - přirozená přizpůsobivost organismů na měnící se životní podmínky - relativně pomalé změny & dlouhé časové periody Působení chemikálií trvalý selekční tlak na všechna vývojová stadia organizmu adaptační mechanismy tolerance × senzibilizace ZS 2006-15
Ekotoxikologie
29
Vliv faktorů ŽP na biologickou dostupnost
ZS 2006-15
Ekotoxikologie
Četnost
Kontrola
Deformace těla (index) Znečištěné místo
Četnost
Tolerance (faktor 10 - 1000) fyziologicky-fenotypové přizpůsobení vyskytne se v průběhu života jedince nemusí být předána potomstvu při vymizení chemikálie se ztrácí genetické přizpůsobení objeví se v průběhu evoluce předává se potomstvu (mutace) - selekce fenotypu nejvíce odolného a nejzdravějšího změna genetického složení populace zůstává i po vymizení chemikálie
Ryby - Long Island Hg a (CH3)2Hg
Deformace těla (index) 30
Vliv faktorů ŽP na biologickou dostupnost
Specificita tolerance látková a druhová nepředpověditelnost (např. Cu×Pb) pro příbuzné látky - kotolerance
Fotosyntéza
Experimentální studium adaptace měření akutní toxicity organismů předem vystaveným subletálním dávkám po delší dobu (předexpozice) projev adaptace - snížení citlivosti organismu
Předexpoziční koncentrace (mol/l)
AsO43- koncentrace (mol/l)
IC20 Fotosyntéza
Studium adaptace pouze pozorováním a srovnáním zatížených a nezatížených oblastí individua, populace, společenstva
Předexpoziční koncentrace (mol/l) ZS 2006-15
Ekotoxikologie
31
Vliv faktorů ŽP na biologickou dostupnost Adaptační mechanismy Většina adaptačních reakcí organismů je založena na redukci biologické dostupnosti škodliviny
vzájemná výměna s vnějším prostředím sekrece chelatačních činidel do okolního prostředí organické kyseliny (např. oxalová, citrónová, malonová, glycin pro redukci BD Al3+ v kyselých půdách)
změny organismu změny povrchů zodpovědných za příjem redukce příjmu zrychlení detoxifikace / metabolismu zrychlení eliminace / vylučování indukce specifických ochranných proteinů heat-shock proteiny, metalothioneiny a fytochelatiny • Octomilky např. zdvojují gen zodpovědný za expresi MT, čímž zvyšují jeho produkci
změny životního cyklu/reprodukce • např. bezobratlí žijící v půdách kontaminovaných těžkými kovy mají kratší životní cyklus a vyšší reprodukční výkonnost ZS 2006-15
Ekotoxikologie
32
Vliv faktorů ŽP na biologickou dostupnost Indukce proteinů - přizpůsobení zátěži škodlivin v ŽP Indukované peptidy / proteiny
Účinek
Chemikálie / Působení
komplexující kovy
redukce volných iontů kovů
Zn2+, Cu2+, Cd2+, atd.
cytochrom P450
zvýšený metabolismus organických látek
PAH, PCB, PCDD, PCDF
stresové / teplotního šoku
oprava denaturovaných bílkovin
teplo, UV záření, těžké kovy, pesticidy
kataláza, superoxiddismutáza
omezení oxidativních poškození
látky vyvolávající oxidativní stres
MDRP, P-glykoprotein
transportní protein zvyšuje vylučování z buňky
léčiva, škodliviny
ZS 2006-15
Ekotoxikologie
33
Vliv faktorů ŽP na biologickou dostupnost Cena za toleranci / adaptaci Následky vývoje tolerance pozitivní - umožňují přežití negativní biologicko-fyziologické změny zkrácení životního cyklu, prodloužení larválního stadia, zvýšený reprodukční výkon - zvýšený výdej energie
ztráta genetické variability přežívají pouze adaptované organizmy, snížení evolučně-vývojového potenciálu ~ snížení schopnosti reagovat na další změny ŽP, snížení "fitness"
Vývoj tolerance neprojevuje se u všech organizmů a u všech chemikálií po vymizení chemikálie může probíhat v opačném směru Díky škodlivému vlivu chemikálií dochází ke genetickému ochuzení ekosystému - vymizí neadaptované organismy ZS 2006-15
Ekotoxikologie
34
