Základy stanovení mikroskopického obrazu ve vodě Petr Pumann Sinice a řasy v praxi 19.-21.4.2013, Praha
Vyhláška č. 252/2004 Sb. mikroskopické ukazatele – počet organismů – živé organismy – abioseston
microcystin-LR důležité poznámky k jednotlivým ukazatelům Státní zdravotní ústav
3, 4, 5
6
7
Zahuštění – odstředění, centrifugace
Státní zdravotní ústav
Pomůcky - odstředivka odstředivka s výkyvným rotorem úhlový rotor nepřípustný kontrola otáček
Státní zdravotní ústav
Parametry odstřeďování 2000 otáček za minutu po dobu 5 min. – bez uvedení poloměru rotoru je údaj, který necharakterizuje přesně podmínky odstřeďování – přejata informativní příloha, ve které je uveden přepočet otáček v závislosti na poloměru rotoru
Státní zdravotní ústav
Pomůcky - zkumavky kalibrace na 10 ml; 1 ml; 0,5 ml; 0,2 ml ověření kalibrace osobou, která bude provádět zahušťování z 10 ml na ? – pitná voda 0,2 ml – povrchová podle množství přítomných organismů Státní zdravotní ústav
Problémy při centrifugaci ztráty chyby při odměřování objemu
Státní zdravotní ústav
Důsledek – pokud se zahušťuje, budou výsledky méně přesné a v některých případech podhodnocené
Počítací komůrka Cyrus I plocha 1 cm2 40 x 40 pásů
0,1 mm = 100 m
Státní zdravotní ústav
250 m
1000 m
125 m
Státní zdravotní ústav
Státní zdravotní ústav
Jednotky pro vyjádření výsledků posun od „protěžování“ jedinců k rovnoprávnosti vyjadřování výsledků v jedincích či buňkách v závislosti na účelu rozboru – jedinci – rychlé, v některých případech je však obtížné interpretovat výsledek – buňky - především u řas a sinic, ale u některých organismů (např. velké kolonie) je nelze spočítat Státní zdravotní ústav
Termín jedinec (organismus) Za jedince se považuje samostatná buňka
(nezáleží na její velikosti), dále cenobium nebo kolonie do velikosti 100µm a vlákna do délky 100µm. Cenobia, kolonie a vlákna překračující uvedené rozměry se vyjadřují jako jejich násobky. U koloniálních nálevníků, vířníků a drobných mnohobuněčných živočichů se počítá každý jedinec zvlášť.
Státní zdravotní ústav
Zahuštění na různé objemy podle oživení vzorku původní normy umožňovaly zahušťovat pouze na 0,2 ml revidovaná norma – podle oživení vzorku zahušťovat lze v rozmezí 0,1 – 1 ml nezahušťovat vzorky od počtů 50 000 jedinců/ml a více (původně od 10 000 jedinců/ml) Státní zdravotní ústav
Fixace Lugolovým roztokem podle Utermöhla povinnost zpracovávat část vzorku po fixaci Lugolovým roztokem podle Utermöhla – při výskytu organismů, které špatně sedimentují (typicky sinice vodních květů) – při výskytu většího množství organismů, které snadno podléhají destrukci Státní zdravotní ústav
Nitzschia živá x mrtvá
Státní zdravotní ústav
Státní zdravotní ústav
Státní zdravotní ústav
Státní zdravotní ústav
Státní zdravotní ústav
Státní zdravotní ústav
Vyjádření abiosestonu kvalitativní - textová informace o typu přítomných částic abiosestonu kvantitativní – odhad pokryvnosti zorného pole mikroskopu v procentech (limit pro pitnou vodu 10 %) Státní zdravotní ústav
Kvalitativní stanovení Abioseston ve vodě pozůstatky těl různých organismů (např. produkty metabolizmu železitých bakterií, prázdné schránky rozsivek, zbytky schránek obrněnek, korýšů, vířníků, hmyzu, pylová a škrobová zrna, zbytky rostlinných pletiv, detritus) částice anorganického původu (např. produkty koroze, různé sraženiny, půdní částice) Státní zdravotní ústav
Sládeček, Sládečková – Atlas vodních organismů se zřetelem na vodárenství...
určování podle kreseb je problematické
Sraženiny železa – foceno objektivem 20x
Státní zdravotní ústav
Sraženiny železa – foceno objektivem 100x
Státní zdravotní ústav
Sraženiny železa – foceno objektivem 100x
Státní zdravotní ústav
vysrážené železo – stěna láhve se železitou minerální lahve
Státní zdravotní ústav
vysrážené železo – stěna láhve se železitou minerální lahve
Státní zdravotní ústav
vysrážené železo – stěna láhve se železitou minerální lahve
Státní zdravotní ústav
Sraženiny železa – foceno objektivem 100x
Státní zdravotní ústav
Sraženiny manganu
Státní zdravotní ústav
Gallionella ferruginea – stopka
Státní zdravotní ústav
Gallionella ferruginea - stopka
Státní zdravotní ústav
Gallionella ferruginea - stopka
Státní zdravotní ústav
produkty železitých bakterií Gallionella; foceno objektivem 20x
Státní zdravotní ústav
Crenothrix polyspora
Státní zdravotní ústav
Leptothrix ochracea
Státní zdravotní ústav
Toxothrix trichogenes
Státní zdravotní ústav
Leptothrix echinata
Státní zdravotní ústav
Siderocapsa
Státní zdravotní ústav
Planktomyces bekefii (plankton)
Státní zdravotní ústav
kalcit – krystaly
Státní zdravotní ústav
Přechodná tvrdost - uhličitan
Státní zdravotní ústav
Přechodná tvrdost – uhličitan vápenatý a ?
Státní zdravotní ústav
Vzorek 3A ze skleněného zábrusu úlomky skla úlomky skla ze(šipka) skleněného zábrusu shluk bakterií foceno objektivem 100x
Státní zdravotní ústav
úlomky skla ze skleněného zábrusu foceno objektivem 100x
Státní zdravotní ústav
pylové zrno břízy
Státní zdravotní ústav
1. 2.
pyl břízy heterotrofní bakterie
1
1
2 1
Státní zdravotní ústav
1. 2.
pyl vrby spory micromycét
Státní zdravotní ústav
bramborový škrob
Státní zdravotní ústav
Státní zdravotní ústav
Scenedesmus (Desmodesmus) - prázdný
Státní zdravotní ústav
Státní zdravotní ústav
Gomphonema (rozsivka) - prázdná
Státní zdravotní ústav
Problémy při počítání - prázdné schránky rozsivek Příčinou chyb při kvantifikaci může být také nejednotný přístup k prázdným a téměř prázdným schránkám rozsivek. Na příkladech je ukázáno, jak jsme posuzovali jednotlivé organismy v naší laboratoři, i když u organismů v prostředním rámečku není podle našeho názoru situace jednoznačná.
Nepočítali
Počítali Nepočítali
Státní zdravotní ústav
Zbytky pancířů obrněnek
Státní zdravotní ústav
Jedlice sladkovodních hub
Státní zdravotní ústav
zbytky chitinu z hmyzu
Státní zdravotní ústav
šupina z křídla motýla
Státní zdravotní ústav
zbytek rostlinného pletiva
Státní zdravotní ústav
vata – kontaminace v laboratoři
Vata je slisované vlákenné rouno o hustotě až 80 kg/m³, jehož vlákna drží vlastní silou pohromadě. Vyrábí se z krátké Státní bavlny, bavlněného odpadu nebo z viskózové stříže ke zdravotní zdravotnickým, hygienickým a kosmetickým účelům.
ústav
http://cs.wikipedia.org/wiki/Vata
buničina – kontaminace v laboratoři
Buničitá vata se vyrábí ve tvaru listu z bělené sulfitové nebo sulfátové buničiny, do které se smí přimíchávat až 20 % dřevní buničiny (papíru). Konečný výrobek sestává z jednoho listu nebo z několika vrstev nad sebou. Pro zdravotnické účely se vata dodává adjustovaná nebo dělená v různých formách a velikostech. http://cs.wikipedia.org/wiki/Vata
prach v laboratoři
Státní zdravotní ústav
Kvantitativní stanovení abiosestonu podle ČSN 75 7713 společně s biosestonem – odstředění 10 ml vzorku – zahuštění na 0,2 ml – přenesení do komůrky Cyrus I. – pozorování při 200 násobném zvětšení
odhad pokryvnosti zorného pole v procentech Státní zdravotní ústav
Problémy s ČSN 75 7713
Státní zdravotní ústav
?%
Hlavní příčiny velmi subjektivní tabule nejsou příliš podobné skutečnému pohledu do mikroskopu
Jak si pomoci (i bez analýzy obrazu)?
Analýza obrazu stejné jako u ČSN 75 7713 místo odhadu použití analýzy obrazu nutné vybavení – mikroskop s digitálním fotoaparátem nebo kamerou – vhodný software
Státní zdravotní ústav
Státní zdravotní ústav
Státní zdravotní ústav
Státní zdravotní ústav