szaporodás mérése automata mérőműszerekkel

Mikrobaaktivitás/szaporodás mérése automata mérőműszerekkel

Automatikus turbidimetria Impedimetria/konduktometria

PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com



Mikroorganizmusok szaporodási görbéi Bioscreen készülékkel mérve


Kalibrációs görbe

~106 – 108 sejt/ml tartományban lineáris kapcsolat az OD és a sejtszám között


TTD

Detekciós idő:TTD



MULTISKAN ASCENT Automata fotométer

Élesztőgomba növekedése különböző glükóz és N-forrás tartalom mellett 1,800

0.5y ; 1.5g

1,600

0.92y ; 1.5g

1,400

0.5y ; 2.92g

OD595

1,200

0.08y ; 1.5g

1,000

0.5y ; 0.08g

0,800

0.8y ; 2.5g

0,600

0.2y ; 2.5g

0,400

0.2y ; 0.5g

0,200

0.8y ; 0.5g

0,000 0

5

10

15 Idő [óra]


20

IMPEDIMETRIA Stewart (1898, Edinburgh): „The changes produced by the growth of bacteria in the molecular concentration and electrical conductivity of culture media.” (Journal of Experimental Medicine)


Az impedimetria elve Glucose

Beoltás

tápközeg

elektródok


Glucose

Anyagcsere - szaporodás

Vezetőképesség nő

Impedimetriás szaporodási görbe

TTD



Ø Az elektromos jel függ Ø az adatgyűjtés gyakoriságától, Ø hőmérséklettől, konduktív és kapacitatív komponense van.

• A hőmérséklet szabályozás/kontroll kritikus! (1 °C hőmérséklet emelkedés hatására 0.9% kapacitancia és 1.8% konduktancia növekedés)


Detekciós idő (TTD): Az az időtartam, ami alatt a mikrobaszaporodás által okozott változás egy (bizonyos) küszöbértéket elér. • kb. 105 – 106 sejt/ml baktériumoknál • kb. 104 sejt/ml élesztőgombáknál Ø Fordítottan arányos a minta eredeti mikrobaszámával. A TTD függ: Ø A kezdeti mikrobaszámtól, Ø A vizsgált mikroorganizmus szaporodási kinetikájától, Ø A tápközeg tulajdonságaitól PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

Bactometer

Malthus Instrument


M-value: relative medium impedance

BacTrac system Sy-Lab, Austria PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

E-value: relative electrode impedance

RABIT mérőműszer (Rapid Automated Bacterial Impedance Technique) Don Whitley Ltd, U.K.


RABIT modul

RABIT mérőcella

tápleves

elektródok


Impedimetriás műszerek jellemzői

(Bolton & Gibson, 1994)


E. coli, 37 °C D.W. tápleves


Salmonella

Pseudomonas

(Don Whitley Broth, 30 °C)

Baktériumok impedimetrás görbéi


Kalibráció: Egyenes arányosság a minta sejtszáma (log CFU/ml) és a TTD között adott tápközegben és tenyésztési körülmények között PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

Indirekt konduktometria

tápközeg

CO2abszorbens elektródok

(Owens et al., 1989.)


CO2 + 2OH- => CO32- + H2O

Saccharomyces cerevisiae indirekt vizsgálata


Az indirekt konduktometria előnyei: ü Hagyományos tápközegek is használhatók. ü A mérő elektródok nem érintkeznek a tápközeggel => nagy sótartalmú tápközegek is használhatók. ü A csekély konduktancia-változást előidéző mikroorganizmusok is kimutathatók. ü A direkt módszerrel elektród interferenciát okozó minták is vizsgálhatók. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

Alkalmazási területek Kórokozók szelektív kimutatása élelmiszerekből üSalmonella 25 g élelmiszer => 225 ml elődúsító leves => 37 °C 16-24 óra => 100 µl beoltása szelektív dúsító levesbe (RV) => inkubálás indirekt RABIT csőben 42 °C 36 óra => => pozitív konduktometriás válasz => megerősítés => negatív konduktometriás válasz => Salmonella nem kimutatható (Madden et al., 1996) PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

ü Listeria monocytogenes

(Szigeti & Farkas, 2000) L. monocytogenes and Lactococcus lactis mixed culture, BiMedia 403, 30 °C


Detection of Listeria monocytogenes with impedimetric method

24h

24h

48 - 72h

46h

72 - 96h

70h

96 - 120h

>96 - 120h


.

Indikátor/romlást okozó mikroorganizmusok kimutatása ü Koliformok – E. coli indirekt módszer, szelektív tápközeg beoltása: COL-ECO Test Broth (DWS) Fluorocult Brilliantgreen Broth (MERCK) Fluorocult Laurylsulphate Broth (MERCK) => pozitív válasz: koliform kimutatható UV-fényben fluoreszkálás => E. coli kimutatható


ü Spórás baktériumok

Clostridium pasteurianum kimutatása körtevelőből


üMezofil aerob összcsíraszám

(Mohácsi-Farkas et al., 1999/a)


ü Természetes antimikrobás anyagok vizsgálata

(Mohácsi-Farkas et al., 1999/b)


Mikrobaaktivitás mérés MALTHUS készülékkel Koliform Enterobacteriaceae Salmonella Listeria Összmikroba aktivitás Élesztő- és penészgomba

Élelmiszerek

Salmonella Campylobacter Pseudomonas spp.

Hús és hústermékek

Listeria Salmonella

Környezeti minták

Salmonella Tejsavbaktérium Összmikroba aktivitás

Takarmány

Összmikroba aktivitás Koliform Pseudomonas Challange test

Kozmetikumok


ELŐNYÖK - HÁTRÁNYOK v A mikrobiológiai problémák gyorsabban kimutathatók, mint a hagyományos tenyésztési eljárással v A vizsgálat előtt rövid mintaelőkészítés szükséges v Az eredmények könyen leolvashatók és értékelhetők v Számítógéppel vezérelt redszer v Az eredmények/adatok használhatók

a

prediktív

mikrobiológiában

fel-

§ Az impedimetria nem szupergyors módszer § Az impedimetria és a hagyományos telepszámlálás alapelve eltérő => szoros összefüggés csak bizonyos, kontrollált körülmények között áll fenn


Klasszikus

Munkaidő/ meghatározás Mintaelőkészítés Hígítás Leoltás Számlálás

Malthus

perc/l

perc/50

perc/l

perc/50

5 2 5 2,5

250 100 250 125

5 1 -

250 -50 --

725

300

Munkaidőmegtakarítás: 59%

Anyagfelhaszn./ meghat.

Klasszikus

Malthus

anyag/l

anyag/50

anyag/l

anyag/50

90 ml 36 ml

4500 ml 1800 ml

90 ml -

4500 ml ---

150 ml 10 db 5 db

7500 ml 500 db 250 db

4 ml 1 db

200 ml --50 db

Előkészítés alapszuszpenzió hígítás Anyagmegtakarítás: 39 %

Leoltás táptalaj Petri csésze pipetta Anyagmegtakarítás: 97 % PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

szaporodás mérése automata mérőműszerekkel

Recommend Documents