Emésztőszervi betegségek (PEC/PEMS) járványtani és virológiai vizsgálata pulykaállományokban Rusvai Miklós, Demeter Zoltán, Coman Alina, Palade Alina
Emésztőszervi betegségek (enteric diseases, ED) pulykaállományokban • PEC (Poult enteritis complex) – hasmenés, levertség, alomevés, immunszuppresszió és megemelkedett mortalitás – nagy gazdasági károk
• PEMS (Poult enteritis and mortality syndrome) – hasonló klinikai tünetek és kórbonctani elváltozások – magas (akár 100%) morbiditás és mortalitás
A PEC/PEMS kórképben esetleg szerepet játszó kórokozók • Pulyka astrovírus – Pulyka astrovírus 1 (TAstV-1) – Pulyka astrovírus 2 (TAstV-2) – Avian nephritis vírus (ANV)?
• • • • • •
Pulyka coronavírus (TCV) Avian reovírus (ARV) Avian rotavírus (AvRV) Vérzéses bélgyulladás vírus (HEV) Pulyka parvovírus (TuPV) Enteropathogén E. coli törzsek
Pulyka astrovírus (TAstV) • Astroviridae • csillag alakú, nem burkos, 28-30 nm • egyszálú, pozitív RNs • Avian nephritis vírus (ANV) – vesekárosodás napos csirkékben – ragályos – eltérő pathogenitás – pulykaállományokban is kimutatták
TCV, ARV, AvRV, HEV • Pulyka coronavírus (TCV) – Coronaviridae – kerekded vagy pleomorf, burkos, 120 nm – ss RNs
• Avian reovírus (ARV) – Reoviridae – ikozahaedrális, 60-70 nm – ds RNs • Avian rotavírus (AvRV) – a reovírusokhoz hasonló morfológia – a kapszidban küllőszerű rendeződés („rota”)
• Vérzéses bélgyulladás vírusa (HEV) – Adenoviridae – ikozahaedrális, 70-90 nm – ds DNs
Pulyka parvovírus (TuPV) • parvovírus-szerű részecskék 10 napos hasmenéses csirkék bélhomogenizátumában (Kisary et al., 1984) • naposcsirkék kísérleti fertőzése tisztított vírussal – klinikai tünetekben megnyilvánuló RSS (Kisary et al., 1985) • vírusazonosítás molekuláris biológiai módszerekkel: Parvoviridae (Kisary et al., 1985) • újabban: az USA számos államában előfordul csirke- és pulyka-állományokban (Zsák et al., 2009)
• teljes genomszekvencia (Day and Zsák, 2010)
• Előfordul magyarországi csirke és pulykaállományok ban is (Palade et al., 2011)
TuPV
Day and Zsák, 2010
PEC/PEMS: tünetek
Szétnövés, tollasodási zavar, fejlődésben való visszamaradás (4-5 hetes pulykapipék)
PEC/PEMS: tünetek
Hasmenéstől összetapadt tollak a cloaca körül
PEC/PEMS: kórbonctani elváltozások
Kitágult vérerek, emésztetlen, nyálkás tartalommal telt vékonybelek, enteritis
PEC/PEMS: kórbonctani elváltozások
Vékonybélgyulladás, gázos tartalommal telt vakbelek (dysbacteriosis jele)
Kórszövettan
A bélbolyhok megrövidülése és összeolvadása, a mucosa enyhe denudatioja, enteritis
Kórszövettan
A bélbolyhok megrövidülése és összeolvadása, a mucosa súlyosfokú denudatioja, enteritis
Kórszövettan
Gyulladásos sejtes beszűrődés: histiocyták, lymphocyták és granulocyták
Kórszövettan
Gyulladásos sejtes beszűrődés: histiocyták, lymphocyták és néhány granulocyta
Kórszövettan
A Lieberkühn crypták kitágulása
Kórszövettan
Kitágult Lieberkühn crypták, ellaposodott epithelium, desquamalódott sejtek
Kórszövettan
A bursa Fabricii enyhe lymphoid depletioja
Gócos, multifocalis pancreatitis pancreas, H&E
Regeneratio jelei a vékonybélben jejunum, H&E
Pulykaállományok • 18 állomány 2008 – kék • 31 állomány 2009 – narancssárga
6 -43 napos állatok, klinikai PEC/PEMS, megemelkedett mortalitás
Primerek Targeted virus
Targeted gene
Primer name and sequence (5’-3’)
Size (bp)
Annealing
ChPV / TuPV
NS1
PVF1: TTCTAATAACGATATCACTCAAGTTTC PVR1: TTTGCGCTTGCGGTGAAGTCTGGCTCG
561
55
ANV
GP1
ANV-ORF1-f: AGATACGCTTGCTCGTCTTG ANV-ORF1-r: CCTCTAACCGGCGATATTCT
608
53
TAstVs
ORF-1b
TAPG-L1:TGG TGG TGY TTY CTC AAR A TAPG-R1:GYC KGT CAT CMC CRT ARC A
601
55
TAstV-2
capsid ORF 2
MKCAP8F:TCA TCA TCC TCT CAC ACT GG MKCAP19R:AGC AGC AGT AGG TGG CAG TG
802
53
TCV
nucleocapsid
TCV-NF:GGT AGC GGT GTT CCT GA TCV-NR:CCC TCC TTA CCT TTA GT
598
53
HEV
CP1
HEV-CP1-F: GGTTCGTGAACATTGGAGAC HEV-CP1-R: CAGGCACAACAGGTGTAACT
155
48
ARV
S4
S4-F13:GTG CGT GTT GGA GTT TCC CG S4-R1133:TAC GCC ATC CTA GCT GGA
1120
53
AvRV
NSP4
NSP4-F30:GTG CGG AAA GAT GGA GAA C NSP4-R660:GTT GGG GTA CCA GGG ATT AA
630
55
PCR és RT-PCR eredmények
Year
Farm/House
TuPV
ARV
AvRV
TastV-2
HEV
TCV
ANV
TAstVs
B-369/4
+
-
-
-
-
+
-
-
B-284
+
-
-
-
-
-
-
-
B-486/2
-
-
+
-
-
-
-
+
B-369/9
+
-
-
-
-
-
-
+
B-23/1
+
-
-
-
-
+
-
-
B-281
+
-
-
-
-
-
-
-
B-122
-
-
-
-
-
-
-
+
B-496
-
-
+
-
-
-
-
+
B-589/4
+
-
+
-
-
-
-
+
B-589/1
+
-
+
-
-
-
-
+
B-547
+
-
-
-
-
+
-
+
B-470/2
-
-
-
-
-
-
-
+
B-288
+
-
+
-
-
-
-
+
B-584
+
-
-
-
-
-
-
+
B-369/1
-
-
+
-
-
+
-
-
B-501
+
+
-
-
-
-
+
+
B-23/8
-
-
-
+
-
-
-
+
B-23/3
+
-
-
-
-
-
-
+
2008
Year
2009
Farm/House B-291/11 B-87 B-280 B-232 B-160 B-164/3 B-307/2 B-307/8 B-649 B-557 B-297 B-893 B-125 B-169/7 B-184 B-27 B-70 B-31/2 B-315 B-465/9 B-164/1 B-346 B-320/4 B-164/4 B-31/5 B121 B-648/1 B-307/6 B-546 B-671 B-648/2
TuPV + + + + + + + + + + + -
ARV + + + + + + -
AvRV + + + + + + + + -
TastV-2 + + + + + + + + + + + +
HEV -
TCV + + + -
ANV + -
TAstVs + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
enzimes Cleavage siteemésztés recognition
ChPV 561bp
415bp
146bp
enzimes emésztés
TuPV like 561bp
323bp
146bp 92bp
enzimes emésztés
TuPV 561bp
323bp
238bp
RFLP-analízis enzimes emésztés
ChPV 561bp
415bp
146bp
enzimes emésztés
TuPV like 561bp
emésztetlen
323bp
146bp 92bp
enzimes emésztés
TuPV 561bp
323bp
238bp
PCR és RT-PCR összesítés • TAstVs: 41/49 (83,67%) 13/49 TAstV-2 (26,53%) • TuPV: 25/49 (51,02%) • AvRV: 14/49 (28,57%) • ARV: 7/49 (14,28%) • TCV: 7/49 (14,28%) • ANV: 2/49 (4,08%) • HEV: 0
Statisztikai elemzés • szignifikánsan negatív értékek aTAstV-2 és TuPV előfordulása között (p: 0.02) • pozitív, “majdnem” szignificáns korreláció a TAstV-2 és ARV előfordulása között (p: 0.057) P-értékek TuPV
ARV
AvRV
TAstV-2
TCV
ANV
TAstVs
TuPV
NA
1
1
0.02
1
1
1
ARV
NA
NA
1
0.057
1
1
1
AvRV
NA
NA
NA
1
1
1
1
TAstV-2
NA
NA
NA
NA
1
1
1
TCV
NA
NA
NA
NA
NA
1
0
ANV
NA
NA
NA
NA
NA
NA
1
TAstVs
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
Következtetések • a bélbolyhok megrövidülése, enyhe denudatioja és összeolvadása • enterocyta desquamatio • 2 esetben E. coli • Legmagasabb előfordulási arány: astrovírusok • ANV pulykaállományokban • Újabban felismert kórokozó TuPV: gyakori (51,02%) • a pulykaállományokban a csirke- és pulykaparvovírus egyaránt előfordul • létezik egy „átmeneti” (pulykaparvovírus-szerű) genotípus • negatív korreláció: TAstV-2 and TuPV • pozitív korreláció : TAstV-2 and ARV
Thank you for your attention!
