EFEK PEMBERIAN EKSTRAK DAUN ZAITUN (Olea europea L) SEBAGAI TERAPI ASMA TERHADAP LIMPA MENCIT BALB/C
SKRIPSI Laporan penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA KEDOKTERAN
Disusun oleh
Latifatul Bariyah NIM : 1113103000080
PROGRAM STUDI KEDOKTERAN DAN PROFESI DOKTER FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA 1438 H/ 2016 M
LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN KARYA
ii
LEMBAR PERSETUJUAN PEMBIMBING
iii
LEMBAR PENGESAHAN
iv
KATA PENGANTAR بسم هللا الرحمن الرحيم Assalamu’alaikum warahmatullahi wabarakatuh Puji syukur kehadirat Allah SWT, karena atas segala limpahan Rahmat dan Karunia-Nya, akhirnya penulis dapat menyelesaikan penyusunan skripsi ini yang berjudul “EFEK EKSTRAK DAUN ZAITUN (Olea europaea L.) SEBAGAI TERAPI ASMA TERHADAP LIMPA MENCIT BALB/c”. Shalawat serta salam semoga tetap terlimpahkan pada nabi Muhammad SAW, beserta keluarga serta sahabatnya. Skripsi ini diajukan untuk memenuhi salah satu syarat menempuh ujian akhir guna memperoleh gelar Sarjana Kedokteran (S.Ked) Program Studi Kedokteran dan Profesi Dokter Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Secara umum skripsi ini berisi tentang latar belakang, tujuan penelitian, tinjauan pustaka, prosedur penelitian serta hasil dan pembahasan dari pengujian tentang efek ekstrak daun zaitun pada pengobatan asma terhadap limpa mencit BALB/c. Dalam penyusunan skripsi ini, Penulis mendapat bantuan, arahan dan bimbingan dari banyak pihak. Oleh karena itu pada kesempatan kali ini penulis ingin mengucapkan terimakasih kepada: 1. Prof. Dr. H. Arif Sumantri, S.K.M, M.Kes selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta. 2. dr. Achmad Zaki, M.Epid, Sp.OT, selaku Ketua Program Studi Kedokteran dan Profesi Dokter Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta. 3. dr. Nurul Hiedayati, Ph.D dan Ibu Dr. Endah Wulandari, S.Si, M.Biomed. selaku dosen pembimbing I & II yang telah membimbing, memberikan arahan, nasihat serta masukan sehingga penulis dapat menyelesaikan penyusunan skripsi ini.
v
4. dr Alyya Siddiqa Sp.FK dan dr Francisca A. Tjakradidjaja MS, Sp.GK selaku dewan penguji penelitian saya untuk waktu, ilmu dan tenaga dalam memperbaiki laporan penelitian ini. 5. Ibu Nurlaely Mida R, M.Biomed, Ph.D selaku penanggungjawab laboratorium Animal house yang telah membantu penulis dalam pengerjaan skripsi ini khususnya dalam perlakuan hewan coba 6. dr. Flori Ratna Sari, Ph.D selaku penanggung jawab modul riset PSKPD 2013, dr. Alyya Siddiqa, Sp.FK selaku PJ Laboratorium Farmakologi, Ibu Rr. Ayu Fitri Hapsari, M.Biomed selaku PJ Laboratorium Histologi yang telah memberikan izin yang telah memberikan izin atas penggunaan laboratorium pada penelitian ini 7. Dosen-dosen pengajar Program Studi Kedokteran dan Profesi Dokter dan FKIK UIN Jakarta yang telah memberikan ilmu yang sangat bermanfaat bagi penulis. 8. Direktorat Pendidikan Diniyah dan Pondok Pesantren Kementerian Agama RI yang telah memberikan beasiswa sehingga saya bisa meneruskan pendidikan di PSKPD FKIK UIN Jakarta 9. Kedua orang tua tercinta, Tafriji dan Kartini yang selalu memberikan kasih sayangnya, nasihat, dukungan serta doa. Juga pada adik saya Kamil Muqtafa, serta seluruh keluarga besar saya yang selalu memberikan semangat dan dukungan kepada saya dalam menempuh pendidikan di PSKPD FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 10. Teman-teman Program Studi Kedokteran dan Profesi Dokter 2013, terutama Abdirrohman Al-Hamdani, Aris Adi Purnomo, Muhammad Iqbal Dzaki Asy’ari, Nihayatul Kamila dan Rahmei Sofia selaku kelompok riset dengan saya yang telah memberikan dukungan dan masukan dalam pengerjaan skripsi ini 11. Mbak Din selaku Laboran Histologi, Pak Rahmadi selaku Laboran Farmakologi yang telah membantu kami dalam penggunaan laboratorium. 12. Teman-teman Puri Laras 1 dan CSSMoRA UIN Jakarta 2013 yang selalu bersama dan menemani saat duka maupun suka.
vi
13. Semua pihak yang terlibat baik secara langsung maupun tidak langsung yang namanya tidak penulis sebutkan dalam pengerjaan skripsi ini Harapan penulis semoga skripsi ini dapat di pergunakan sebagai salah satu acuan, petunjuk maupun pedoman bagi pembaca. Selain itu, penulis juga berharap makalah ini dapat membantu menambah pengetahuan dan pengalaman bagi para pembaca, sehingga penulis dapat memperbaiki bentuk maupun isi skripsi ini sehingga dapat menjadi lebih baik untuk masa depan. Penulis menyadari bahwa masih banyak terdapat kekurangan dan kesalahan dalam penyusunan skripsi ini. Oleh karena itu penulis sangat mengharapkan kritik dan masukan dari para pembaca demi kesempurnaan skripsi ini. Demikian laporan penelitian ini saya tulis, Semoga hasil penelitian ini dapat bermanfaat bagi kita semua.
Ciputat, Oktober 2016
Latifatul Bariyah
vii
ABSTRAK Latifatul Bariyah, Program Studi Kedokteran dan Prosfesi Dokter, Efek Pemberian Ekstrak Daun Zaitun (Olea europaea L.) sebagai terapi asma terhadap limpa mencit BALB/C, 2016 Penggunaan obat herbal meningkat di masyarakat. Zaitun (Olea europaea L.) merupakan salah satu tanaman yang memiliki efek anti-inflamasi yang digunakan sebagai obat anti-asma. Namun, belum banyak penelitian yang melaporkan efek samping pemberian ekstrak daun zaitun pada limpa sebagai salah satu organ penyaringan darah dari zat asing. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efek pemberian ekstrak daun zaitun 100 mg/kgBB dan 200 mg/kgBB pada limpa mencit BALB/c dalam pengobatan asma. Hasil penelitian adalah terdapat peningkatan diameter pulpa putih limpa pada semua kelompok dibandingkan dengan kontrol, (p>0,05). Pada ekstrak daun zaitun (OLE) dosis 100mg/kgBB didapatkan berat limpa yang lebih rendah dari kontrol, (p<0,05). Ekstrak daun zaitun pada dosis 100mg/kgBB dan 200mg/kgBB secara oral dapat meningkatkan respon imun ditandai dengan meningkatnya diameter pulpa putih limpa. Kata Kunci: Olea europaea L., diameter pulpa putih limpa, berat limpa
ABSTRACT Latifatul Bariyah. Medical Education Study and Doctor Profession. Effect of giving Olive Leaves Extract (Olea europaea L.) in Asthma Treatment on Spleen of BALB / C Mice. 2016 Using of herbal medicine has increased worldwide. Olive (Olea europaea L.) was a plant that has anti-inflammatory effect and commonly used for asthma treatment. However, few studies was reported for adverse effects of olive leaf extract on spleen as one of the filtering organs that removes foreign material. The purpose of this study was to determine the effects of 100 and 200 mg/kg body weight olive leaves extract on spleen of BALB/c mice in the asthma treatment. The results showed increasing in the diameter of the white pulp of spleen in all groups compared with control group (p>0,05). Olive leaves extract in 100mg/kg body weight dose obtained lower spleen weight than control, (p<0,05). Giving olive leaves extract in 100 and 200 mg/kg body weight dose orally increased the immune response characterized by increasing diameter of the splenic white pulp. Key word : Olea europaea L., white pulp splenic diameter, spleen weight
viii
DAFTAR ISI LEMBAR JUDUL .................................................................................................. i LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN KARYA............................................. ii LEMBAR PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................................... iii LEMBAR PENGESAHAN ................................................................................. iv ABSTRAK .......................................................................................................... viii DAFTAR ISI ......................................................................................................... ix DAFTAR TABEL ............................................................................................... xii DAFTAR GRAFIK ............................................................................................ xiii DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... xiv DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... xv DAFTAR SINGKATAN .................................................................................... xvi BAB I ...................................................................................................................... 1 PENDAHULUAN.................................................................................................. 1 1.1.
LATAR BELAKANG ............................................................................ 1
1.2.
RUMUSAN MASALAH ........................................................................ 3
1.3.
TUJUAN PENELITIAN ........................................................................ 3
1.4.
MANFAAT PENELITIAN .................................................................... 3
1.4.1
Penelitian ........................................................................................... 3
1.4.2
Pendidikan (Ilmu Pengetahuan) ........................................................ 3
1.4.3
Penyelenggaraan Pelayanan Kesehatan ............................................ 3
BAB II .................................................................................................................... 4 TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................................ 4 2.1. Zaitun (Olea europea L.) ............................................................................ 4 2.1.1. Karakteristik ........................................................................................ 4 2.1.2. Kandungan dan Manfaat Zaitun ...................................................... 5 2.1.3. Farmakokinetik Ekstrak Daun Zaitun .............................................. 6 2.2. Efek Samping Penggunaan Herbal .......................................................... 7 2.3. Limpa .......................................................................................................... 9 2.3.1. Anatomi Limpa ................................................................................... 9 2.3.2. Histologi Limpa ................................................................................... 9 2.3.3. Fisiologi Limpa................................................................................... 13 2.3.4. Respon Limpa terhadap Jejas, Bahan Kimia dan Herbal ............. 14 ix
2.3.5. Respon Limpa Terhadap Ovalbumin .............................................. 15 2.4. Asma .......................................................................................................... 15 2.5. Kerangka Teori......................................................................................... 17 2.6. Kerangka Konsep ..................................................................................... 17 2.7. Definisi Operasional ................................................................................ 19 BAB III ................................................................................................................. 20 METODE PENELITIAN ................................................................................... 20 3.1. Desain Penelitian ...................................................................................... 20 3.2. Waktu dan Tempat Penelitian ................................................................ 20 3.3. Sampel Penelitian ..................................................................................... 20 3.3.1. Populasi ............................................................................................... 20 3.3.2. Sampel ................................................................................................. 20 3.3.3. Kriteria Inklusi ................................................................................. 21 3.3.4. Krieria Eksklusi ................................................................................ 21 3.4. Variabel Penelitian ................................................................................... 21 3.4.1. Variabel Bebas ................................................................................... 21 3.4.2. Variabel Tergantung ......................................................................... 21 3.5. Alat dan Bahan Penenlitian ..................................................................... 21 3.5.1. Alat ..................................................................................................... 21 3.5.2. Bahan ................................................................................................. 22 3.6. Cara Kerja ................................................................................................ 22 3.6.1. Penyimpanan Simplisia .................................................................... 22 3.6.2. Pembuatan Ekstrak ........................................................................... 22 3.6.3. Adaptasi Hewaan Coba ..................................................................... 22 3.6.4. Sensitisasi Hewan Coba .................................................................... 23 3.6.5. Pemberian Ekstrak Daun Zaitun Terhadap Mencit ..................... 23 3.6.6. Induksi Ovalbumin ........................................................................... 23 3.6.7. Pengambilan Organ Limpa ............................................................. 23 3.6.8. Pengukuran Berat Limpa ................................................................. 24 3.6.9. Pembuatan Preparat ......................................................................... 24 3.6.9.1 Dehidrasi ........................................................................................ 24 3.6.9.2. Clearing ........................................................................................ 25 2.6.9.3. Embedding .................................................................................... 25 x
3.6.9.4. Pencetakan .................................................................................... 25 3.6.9.5. Pemotongan Jaringan .................................................................... 25 3.6.9.6. Pewarnaan dengan Hematoksilin-Eosin ........................................ 26 3.6.10. Pengambilan Gambar Preparat Histologi Limpa ........................ 27 3.6.11. Penghitungan Diameter Pulpa Putih Limpa ................................. 27 3.7. Alur Penelitian ......................................................................................... 28 3.8. Analisis Data ............................................................................................ 29 BAB IV ................................................................................................................. 30 HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................................... 30 4.1. Diameter Pulpa Putih Limpa .................................................................. 30 4.3. Keterbatasan Penelitian ........................................................................... 37 BAB V................................................................................................................... 38 SIMPULAN DAN SARAN ................................................................................. 38 5.1. Simpulan.................................................................................................... 38 5.2. Saran .......................................................................................................... 38 BAB VI ................................................................................................................. 39 KERJASAMA PENELITIAN ........................................................................... 39 DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 40 LAMPIRAN ......................................................................................................... 44
xi
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Contoh manfaat dan efek samping obat herbal..................................... 9 Tabel 2.2 Perbedaan struktur histologis limpa tikus dan manusia…................... 13 Tabel 2.3 Definisi operasional............................................................................ 20 Tabel 3.1 Kelompok perlakuan........................................................................... 21 Tabel 6.1 Uji normalitas diameter pulpa putih limpa.......................................... 51 Tabel 6.2 Uji homogenitas diameter pulpa putih limpa…................................... 51 Tabel 6.3 Uji nomalitas berat limpa…................................................................. 51 Tabel 6.4 Uji homogenitas berat limpa............................................................... 52 Tabel 6.2 Uji one way ANOVA diameter pulpa putih limpa…........................... 52 Tabel 6.3 Uji one way ANOVA berat limpa…................................................... 52 Tabel 6.4 Uji post hoc berat limpa...................................................................... 53
xii
DAFTAR GRAFIK Grafik 4.1 Rata-Rata Diameter pulpa putih limpa………………………........... 34 Grafik 4.2 Rata-Rata Berat limpa mencit Setiap…………………….................. 36
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Buah dan daun zaitun........................................................................ 6 Gambar 2.2 Peredaran darah terbuka dan tertutup pada limpa............................ 11 Gambar 2.3 Gambaran histologis potongan melintang limpa…………............. 12 Gambar 2.4 Gambaran histologis potongan memanjang limpa........................... 12 Gambar 7.5 Perbedaan gambaran histologi limpa pada tikus dan manusia......... 13 Gambar 4.1 Gambaran mikroskopik limpa perbesaran 100X............................. 32 Gambar 7.1 Surat hasil determinasi bahan uji..................................................... 45 Gambar 7.2 Aklimatisasi hewan coba................................................................ 48 Gambar 7.3 Pemberian ekstrak daun zaitun oral................................................ 48 Gambar 7.4 Nebulisasi hewan coba.................................................................... 48 Gambar 7.5 Pembiusan hewan coba.................................................................... 49 Gambar 7.6 Pengambilan jaringan hewan coba…….......................................... 49 Gambar 7.7 Penyimpanan jaringan hewan coba pada larutan formalin............... 49 Gambar 7.8 Timbangan....................................................................................... 50
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Hasil Determinasi / Identifikasi Bahan Uji....................................... 45 Lampiran 2 Penghitungan Sampel…………………........................................... 46 Lampiran 3 Penghitungan Dosis Ekstrak Daun Zaitun....................................... 47 Lampiran 4 Dokumentasi Penelitian................................................................. 48 Lampiran 5 Hasil Uji Statistik.............................................................................. 51 Lampiran 6 Riwayat Penulis................................................................................ 54
xv
DAFTAR SINGKATAN
Al(OH)3
: Alumunium Hidoksida
ALP
: Alkali PhosPhatase
APC
: Antigen Precenting Cell
AST
: Aspartate AminoTransferase
BHT
: Butil Hidroksi Toluen
COX
: Cyclooxygenase
IFN
: Interferon
IL
: Interleukin
OVA
: Ovalbumin
PALS
: PeriArteriolar Lymphatic Sheath
PBS
: Phosphate Buffer Saline
TNF-α
: Tumor Necrosis Factor- α
xvi
BAB I PENDAHULUAN 1.1. LATAR BELAKANG Pengobatan herbal (herbal treatment) adalah pengobatan dengan bahan alami, zat yang berasal dari tumbuhan, dengan sedikit atau tidak ada pengolahan industri.1 Sekitar 90% penduduk Afrika dan 70% penduduk India tergantung pada pengobatan herbal dalam mengatasi masalah kesehatan. Pemakaian pengobatan herbal tidak hanya terbatas pada negara berkembang, melainkan juga pada negaranegara industri yang meningkat di dua dekade terakhir.2 Pada tahun 2007 di Amerika Serikat penggunaan pengobatan tradisional mencapai 38% pada dewasa dan 12% pada anak.2 Di Indonesia pada tahun 2006 penggunaan pengobatan herbal menglami peningkatan lebih dari dua kali lipat dibandingkan tahun 2000.3 Zaitun (Olea europea L.) adalah salah satu tumbuhan yang banyak terdapat di negara-negara Mediterania. Lebih dari 8 juta hektar lahan lembah di Mediterania ditanami dengan zaitun.4 Ekstrak minyak zaitun telah banyak digunakan oleh masyarakat Mediterania sejak beberapa ribu tahun yang lalu.5 Salah satu produk dari pohon zaitun yang dimanfaatkan adalah daunnya yang didapatkan cukup banyak yaitu 10% dari total berat dari pohon zaitun.6 Saat ini, zaitun telah banyak dibudidayakan di Indonesia. Daun zaitun memiliki kandungan senyawa fenol yang bermanfaat sebagai anti-alergi, anti-artrogenik, anti-inflamasi, anti-mikroba, antioksidan, antitrombotik, anti-kanker kardioprotektif, dan vasodilator.7 Daun zaitun mengandung sedikitnya 30 komponen fenol, diantarannya oleuropein, hidroksitirosol, dan tirosol, komponen flavonoid, squalene, beta-karoten dan alfa-takoferol.8 Diantara komponen fenol yang berperan dalam anti-inflamasi adalah flavonoid. Disebutkan bahwa flavonoid dapat digunakan sebagai pengobatan asma dengan menurunkan respon IgE dan eosinofil serta remodelling saluran napas melalui mekanisme mengurangi stress oksidatif sitokin pro inflamasi Th2 dan kemokin serta aktivasi NF- kB pada sel yang inflamasi.9 1
2
Pengobatan herbal umunya lebih dipilih karena dianggap aman, minimal efek samping dan tidak berisiko. Pada kenyataannya pengobatan herbal juga memiliki efek samping. Efek samping mungkin terjadi disebabkan karena dosis, herbal yang terkontaminasi dengan logam atau zat berbahaya, mikroorganisme dan patogen yang terdapat dalam herbal.10 Karena itu saat ini, banyak dilakukan penelitian tentang keamanan terapi dengan obat herbal dan efeknya terhadap organ tubuh lain. Salah satu penelitian yang dilakukan Rodrigues dkk, (2011) membuktikan bahwa pemberian ekstrak daun zaitun pada mencit dengan konsentrasi 0,75% didapatkan perbedaan berat organ limpa mencit dibandingkan dengan kelompok kontrol. Pada studi tersebut juga didapatkan bahwa mencit yang diberikan ekstrak daun zaitun pada konsentrasi 0,25%, 0,50% dan 0,75% didapatkan gambaran hiperplasia duktus empedu, kolestasis, nekrosis dan infiltrasi sel inflamasi pada hepatosit yang tingkat kerusakannya berbanding lurus dengan konsentrasi pemberian ekstrak zaitun.5 Limpa merupakan organ limfoid yang terbesar dalam tubuh. Fungsi limpa adalah sebagai organ yang membersihkan partikel dan antigen, mikroorganisme dan tempat penghancuran sel darah merah tua.11,12 Fungsi limpa dalam penghancuran sel darah merah ini dapat terganggu jika limpa membesar (splenomegali). Salah satu penyebab splenomegali adalah adanya penyakit di bagian tubuh yang lain. Fungsi pengahancuran sel darah merah yang terganggu ini nantinya bisa menyebabkan anemia.13 Selain itu, kerusakan pada limpa juga bisa diakibatkan oleh inflamasi, toksin dan neoplasma yang membentuk lesi fibrosis parenkimal dan kapsular.14 Banyaknya studi tentang manfaat daun zaitun sebagai pengobatan dan kesehatan serta minimnya informasi studi yang menjelaskan tentang efek penggunaan daun zaitun pada gambaran histopatologi limpa melatarbelakangi penulis melakukan penelitian tentang efek penggunaan ekstrak daun zaitun (Olea europaea L.) terhadap gambaran histopatologi limpa mencit BALB/c yang mendapatkan terapi asma. Pada Penelitian ini, digunakan ekstrak daun zaitun yang diperoleh dari Indonesia.
3
1.2. RUMUSAN MASALAH Rumusan masalah pada penelitian ini adalah -
Bagaimana pengaruh pemberian ekstrak daun zaitun (Olea europea L.) sebagai terapi asma terhadap limpa mencit BALB/c?
1.3. TUJUAN PENELITIAN Tujuan penelitian adalah mengetahui efek ekstrak daun zaitun (Olea europea L.) sebagai terapi asma terhadap limpa mencit BALB/c. 1.4. MANFAAT PENELITIAN Diharapkan pada penelitian ini dapat memberikan manfaat 1.4.1
Penelitian Informasi mengenai efek ekstrak daun zaitun pada fungsi limpa dapat digunakan sebagai data untuk penelitian selanjutnya
1.4.2
Pendidikan (Ilmu Pengetahuan) Melalui penelitian ini diharapkan dapat membuka wawasan dan meningkatkan pemahaman mengenai pengaruh pengobatan asma dengan menggunakan ekstrak daun zaitun (Olea europaea L) terhadap limpa mencit BALB/c
1.4.3
Penyelenggaraan Pelayanan Kesehatan Melalui penelitian ini diharapkan dapat digunakan sebagai dasar mengenai terapi alternatif pengganti terapi konvensional pada pelayanan kesehatan jika selanjutnya diketahui pengobatan dengan esktrak daun zaitun memiliki efek samping minimal melalui berbagai uji preklinik mapun uji klinik.
BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1. Zaitun (Olea europea L.) 2.1.1. Karakteristik Zaitun merupakan tumbuhan yang berasal dari negara-negara mediterenia. Zaitun dapat hidup pada daerah dengan suhu lebih dari 10oC sehingga bisa tumbuh di Indonesia.15 Pohon zaitun tidak terlalu tiggi dengan bentuk daun pendek, sempit, sperti lancet atau kadang oval. Bunga dari zaitun ada dua macam yaitu sempurna dan tidak sempurna sehingga untuk penyerbukan tergantung dengan angin. Buah zaitun kecil, dengan kulit luar berwarna hitam keunguan dan biji yang keras. Ukuran panjang buah zaitun adalah sekitar 1-2,5 cm seperti pada gambar 2.1.16 Klasifikasi tumbuhan zaitun (Olea europea L.) adalah15 Kingdom Filum Kelas Ordo Famili Sub-famili Genus Sub Genera
Sub-spesies
: Plantae : Magnoliophyta : Roopsida : Lamiales : Oleaceae : Oleideae : Olea : Paniculatae Tetrapilus Olea Sections : Liguistroides Olea : cuspidata laperrine maroccana cerasiformis guanchica europaea varieties sylvestris (wild olive) europaea (cultivated olive)
4
5
Gambar. 2.1 Buah dan Daun Zaitun17 sumber: Olive Germplasm - The Olive Cultivation, Table Olive and Olive Oil Industry in Italy, 2012
2.1.2. Kandungan dan Manfaat Zaitun Salah satu pilihan terapi yang banyak diminati adalah penggunaan ekstrak tumbuhan herbal yang dianggap memiliki lebih sedikit efek samping. Penggunaan obat herbal ini mulai banyak dikembangkan di negara-negara bekembang pada pertengahan abad keduapuluh ini. Zaitun merupakan salah satu tumbuhan yang diberkahi yang disebutkan didalam Al-Quran. Tentunya dengan disebutkannya Zaitun ini merupakan salah satu tumbuhan yang berguna untuk berbagai macam pengobatan. Zaitun telah digunakan sejak jaman dahulu oleh nenek moyang. Hal ini dibuktikan dengan adanya laporan arkeologi zaitun yang dibudidayakan pada tahun 3000 sebelum masehi dengan tujuan untuk diperdagangkan. Bagian pohon zaitun yang sering digunakan adalah minyaknya dicampur dengan jus lemon untuk mengobati batu empedu. Daun zaitun yang dikonsumsi secara oral untuk gejala lambung dan usus serta kebersihan mulut.16 Hampir semua bagian pohon zaitun bisa dimanfaatkan untuk keperluan pengobatan. Disebutkan bahwa minyak zaitun mengandung monosaturated fatty acid dalam konsentrasi tinggi, dan juga sedikitnya ada 30 komponen fenol, diantarannya oleuropein, hidroksitirosol, dan tirosol, selain itu juga mengandung komponen flavonoid, squalene, beta-karoten dan alfa-takoferol. Bahan aktif yang
6
terdapat dalam daun zaitun tidak berbeda dengan yang ada di minyak zaitun, yaitu komponen fenol dan juga luteolin kateksin, dan apigenin serta selenium, kromium, besi, zink, dan vitamin C. Perbedaan kandungan hanya pada daun zaitun tidak mengandung monosaturated fatty acid dalam konsentrasi tinggi serta asam oleat. Komponen oleuropein pada daun zaitun lebih tinggi dibandingkan pada minyak zaitun yaitu didapatkan fenol total 6360-8190 mg/L pada daun zaitun dan 200-800 mg/L pada minyak zaitun.8 Senyawa fenol yang paling banyak pada daun zaitun adalah oleuropein yang mencapai 264 mg/g dalam daun kering.16 Salah satu manfaat daun zaitun adalah anti-inflamasi. Kandungan zat aktif dalam daun zaitun yang memiliki efek anti-inflamasi adalah oleuropein melalui inhibisi produksi sitokin pro-inflamasi yaitu TNF-α IL-1β dan nitrit oxide (NO) dan juga menurunkan ekspresi COX-2 dan stimulasi sitokin anti-inflamasi yaitu IL4.18,19 Disebutkan dalam penelitian Mahjoub dkk (2011) bahwa pemberian ekstrak daun zaitun dengan dosis 50, 100 dan 200 mg/KgBB memberikan efek antiinflamasi pada telapak kaki tikus yang diinduksi dengan karagenan.19 Sebagai agen anti-mikroba, ekstrak daun zaitun secara signifkan mengurangi jumlah koloni bakteri pada udang yang telah dibuang kulit ekornya yang direndam dengan zaitun 1% dan 2% selama 30 menit dibandingkan dengan kontrol. Studi ini mungkin berguna sebagai terapan ekstrak daun zaitun yaitu sebagai bahan pengawet makanan laut.20 Efek anti-oksidan daun zaitun salah satunya dibuktikan dengan penelitian yang dilakukan oleh Le Tutour dan Guedon yang melihat aktivitas anti-oksidan dari oleuropein, hidroksitirosol, dan tirosol yang dibandingkan dengan vitamin E dan Butil Hidroksi Toluen (BHT).16 Oleuropein bersama dengan komponen fenol lainnya
yaitu
hidroksitirosol,
hidroksitirosol-elenolat,
asam
3,4-
dihidroksifeniletanol-elenolic dialdehid menimbulkan efek protektif terhadap sel darah merah dari stress oksidatif.21 2.1.3. Farmakokinetik Ekstrak Daun Zaitun Daun zaitun merupakan salah satu herbal yang kaya akan fenol. Fenol inilah yang merupakan komponen yang menyebabkan zaitun baik buah, daun dan
7
minyaknya memiliki efek terhadap kesehatan. Komponen fenol dapat ditemukan pada semua bagian zaitun. Mekanisme absorpsi komponen fenol dari zaitun berbeda-beda. Tirosol dan hidroksitirosol yang merupakan komponen polar dapat langsung diserap melalui difusi pasif. Oleuropein yang merupakan komponen polar dengan ukuran yang lebih besar dengan mudah berdifusi melewati membran fosfolipid bilayer dari membran epitelial. Oleuropein cepat diabsorpsi dengan pemberian oral dengan konsentrasi tertinggi didarah pada 2 jam pasca pemberian.22,23 Darah masuk kelimpa melalui arteri splenika yang masuk pada hilum limpa kemudian menuju arteri trabekularis kemudian masuk kedalam organ menjadi arteriol sentral dan memperdarahi bagian-bagian limpa.13,24 Setelah diabsorpsi, komponen fenol dari zaitun dimetabolisme di hepar dengan glukoronidasi. Kemudian di ekskresikan dalam bentuk tirosol dan hidroksitirosol. Pada manusia yang mendapatkan suplemetasi oleuropein-glikosida didapatkan 15% ekskresi dalam bentuk tirosol dan hidoksitirosol pada urin.22,23 2.2. Efek Samping Penggunaan Herbal Penggunaan obat herbal yang dianggap lebih aman sebenarnya juga mempunyai efek samping.10 Minimnya laporan mengenai efek samping pada pengobatan herbal karena memang belum banyak studi yang mengkaji mengenai hal tersebut. Studi yang banyak dilakukan pada pengobatan herbal adalah hanya mengenai manfaat. Efek samping penggunaan herbal dikelompokkan dalam dua bagian yaitu intrinsik dan ekstrinsik. Efek samping intrinsik berkaitan dengan keberadaan bahan aktif dalam obat herbal, sedangkan efek samping ekstrinsik meliputi kontaminasi, pemalsuan, dan
misidentifikasi tanaman herbal yang
digunakan dan berkaitan dengan keberadaan zat toksik yang ada pada tanaman herbal tersebut. Beberapa contoh mengenai efek samping penggunaan obat herbal tercantum pada tabel 2.125 Tabel 2.1 contoh manfaat dan efek samping obat herbal8 Nama Tanaman Curcuma longae rhizoma
Efek Potensial Anti-inflamasi, anti-tumor, anto-atherogenik, antiplatelet, anti-mikroba
Efek Samping Iritasi saluran gastrointestinal, menurunkan fertilitas (studi pada tikus jantan)
8
Nama Tanaman Aloe vera
Efek Potensial Laksatif, anti-ulcer, hipoglikemik, anti-virus, antibakteri,
Cinnamomun verum
Anti-bakteri, anti-jamur, antidiabetik, Anti-hipersensitivitas, menurunkan kolesterol serum, anti-aterosklerosis Antti-emetik, anti-ulcer, analgesik, anti-inflamasi, antiplatelet, anti-mikroba, antiparasit, imunomodulator, antioksidan, termogenik
Allium sativum
Zingiber officinale Rosceo
Efek Samping Dermatitis kontak dan hipersensitivitas yang bermanifestasi sebagai eksematous numular generalisata. Dermatitis kontak alergi, nausea, flatulensi, Bau badan dan napas, mual, flatulensi, diare, sakit kepala, mialgia Iritasi lambung, heartburn
Studi yang dilakukan oleh Alferah pada tikus yang diterapi dengan eksrak daun pacar kuku (Lawsonia inermis L.) didapatkan bahwa pemberian ekstrak daun pacar kuku (Lawsonia inermis L.) dengan dosis 200 mg selama 6 minggu tidak ada perubahan pada hati, ginjal dan limpa, sedangkan pemberian ekstrak daun pacar kuku (Lawsonia inermis L.) dengan dosis 1000 mg menyebabkan perubahan pada pada ginjal dan hati dengan gambaran sel apoptotik.26 Salah satu efek samping pemberian obat herbal yang dilaporkan adalah studi yang dilakukan oleh Rodrigues dkk dilakukan pemberian ekstrak daun zaitun dengan konsentrasi 0,25%, 0,50%, 0,75% selama 14 minggu pada mencit didapatkan pemberian ekstrak dengan konsentrasi minimal 0,50% menyebabkan peningkatan enzim hati yaitu ALP dan AST yang menandakan adanya peningkatan aktivitas hati. Pada pemberian ekstrak dengan konsentrasi yang sama menyebabkan ikterus pada membran mukosa dan kulit yang disebabkan oleh hiperbilirubinemia yang dikonformasi dengan adanya peningkatan serum bilirubin. Pada preparat histologi hati didapatkan gambaran fibrosis hati, nekrosis hepatosit dan infiltrasi sel radang. Pada penelitian tersebut juga dilihat berat limpa, pada konsentrasi 0,75% didapatkan peningkatan berat limpa yang bermakna dibandingkan dengan kontrol sedangkan pada konsentrasi 0,25 dan 0,50 tidak didapatkan kenaikan yang bermakna dibandingkan dengan kontrol 5
9
2.3. Limpa 2.3.1. Anatomi Limpa Limpa merupakan organ limfoid terbesar dalam tubuh dan organ yang terlibat dalam filtrasi darah dari zat asing sehingga berperan dalam pertahanan tubuh terhadap antigen.12 Berat limpa antara 150-250 gram dan panjang sekitar 513 cm.13 Rasio berat limpa dan berat tubuh cenderung konstan, tidak dipengaruhi oleh usia.27 Pada orang dewasa, limpa terletak didepan diafragma area costa 9-10 kuadran hipokondrium sinistra abdomen. Limpa dikelilingi omentum visceral kecuali pada hilum. Suplai perdarahan limpa dari ateri lienalis cabang dari trunkus coeliacus. Posisi limpa dipertahankan oleh 2 ligamen yaitu ligamentum gastrosplenikum yang berisi vasa gastrika brevis dan gastroomentalis dan ligamentum splenorenal yang berisi vasa splenika yang kedua ligament tersebut merupakan bagian dari omentum majus.28 Pada tikus, limpa terletak pada kuadran hipokondrium sinistra (left upper quadrant) berdekatan dengan kurvatura mayus lambung. Limpa tikus agak sedikit memanjang dari limpa manusia. Berat limpa tikus biasanya berkisar anatara 0,2% dari berat tubuh yaitu antara 100-200 mg pada tikus usia 2 samapi 4 bulan. Pada tikus berat limpa.28,29 2.3.2. Histologi Limpa Peredaran darah dalam limpa melalui arteri splenika yang masuk pada hilum limpa kemudian menuju arteri trabekularis kemudian masuk kedalam organ menjadi arteriol sentral yang sebagian besar berakhir pada korda yang tidak memiliki lapisan endotel. Darah bisa kembali dengan melewati endotel dari sinus venosus kemudian melewati vena trabekularis menuju vena splenika dan kembali ke sirkulasi umum seperti pada gambar 2.2.13,24 Pada sirkulasi limpa tidak ada perbedaan antara manusia dan tikus.29
10
Gambar 2.2 peredaran darah terbuka dan tertutup pada limpa24 sumber : Color textbook of histology 3rd edition, 2007
Limpa terdiri atas atas simpai yang terdiri dari jaringan fibrosa padat, jaringan elastik, dan otot polos yang mengelilingi sisi luar limpa dan jaringan retikular yang mengandung sel-sel seperti limfosit, makrofag, APC dan sel darah lain. Simpai inilah yang menjadi asal trabekula yang sebagian membagi menjadi parenkim atau pulpa limpa. Trabekula berasal dari hilus limpa yang membawa arteri dan saraf dan vena yang berperan dalam proses sirkulasi.12,27 Pulpa limpa terbagi menjadi dua jenis yaitu pulpa putih dan pulpa merah. Komposisi pulpa merah dan pulpa putih berbeda antara manusia dan tikus. Pada manusia pulpa merah merupakan komponen terbesar dari limpa yaitu sekitar 7590% dari bagian limpa. Sedangkan pada tikus komponen terbesar adalah pulpa putih.11,29 Struktur penyusun limpa pada mencit dan manusia sama, hanya pada pembagian komponen banyak dan sedikitnya yang berbeda, diharapkan dengan kemiripan struktur mencit bisa mencerminkan jika studi dilakukan pada manusia. Perbedaan secara detail dijelaskan pada tabel 2.2 dan gambar 2.4. Pulpa putih terdiri dari nodulus limfoid dengan pusat germinal disekitar arteri sentralis. Pada nodulus limfoid banyak terdapat sel B sedangkan sel T mengelilingi arteri sentralis sebagai periarteriolar lymphatic sheath (PALS).30 Nodus limfoid terdiri dari sel B dan sedikit sel dendriti serta CD4+ tanpa adanya CD8+.27 Nodus limfoid juga terdapat gambaran sel germinal yang merupakan tanda
11
adanya aktivitas antigen challenge.24 Pada potongan cross seperti pada gambar 2.3 dapat terlihat dengan jelas gambaran nodus besar yang merupakan jaringan limfoid yang dikelilingi PALS. Gambaran arteriol sentral tak selalu berada ditengah nodus, terkadang dipinggir. Pada potongan longitudinal seperti pada gambar 2.4 tidak didapatkan gambaran nodus bulat melainkan gambaran mamanjang dengan PALS yang terwarna lebih ungu jelas berada dipinggir dari nodus.12 Pulpa merah dibentuk oleh korda dan sinus yang merupakan 75% dari bagian limpa. Korda dan sinus ini merupakan mikrovaskular yang berperan penting dalam pemantauan integritas eritrosit.13 korda limpa mengandung serat retikular yang menunjang limfosit B dan T, makrofag sel plasma, dan sel-sel darah lainnya. Pulpa merah terisi semua jenis sel darah baik di korda maupun sinus sehingga pada sajian histologi tampak lebih merah.12
A Gambar 2.3 Gambaran histologis potongan melintang limpa12 W (pulpa putih) R pulpa merah sumber : Histologi Dasar Junqueira Teks dan Atlas, 2011
12
B Gambar 2.4 Gambaran histologis potongan memanjang limpa12 W (pulpa putih) R pulpa merah12 sumber : Histologi Dasar Junqueira Teks dan Atlas, 2011
Tabel 2.2 Perbedaan struktur histologis limpa tikus dan manusia29 Bagian Limpa Kapsul Pulpa merah
Hematopoiesis ekstramedular
Periarteriol lymphoid sheats (PALS) Folikel sel B
Zona marginalis
Tikus Jaringan ikat dan otot Menyaring dan transport komponen; sinusoid dan korda menyusun aparatus penyaringan; korda terdiri dari makrofag yang mengenali dan menghilangkan zat asing dan sel darah merah tua dari sirkulasi Pada pulpa merah terjadi hematopoiesis normal atau rendah, tetapi berubah menjadi reaktif pada kondisi yang bisa menstimulasi sumsum tulang Sama seperti pada manusia tetapi perkembangannya lebih rendah Terdiri dari folikel primer inaktif yang mengandung sel B naif dan folikel sekunde aktif yang mengandung sentrum germinatium Tipis pada beberapa strain mencit
Manusia Sama dengan tikus Sama dengan tikus
Hematopoiesis tidak terjadi atau minimal terjadi apda kondisi normal; hematopoiesis dapat meningkat pada kondisi fibrosis sumsum tulang Selubung limfoid dekat dengan arteriol yang komponen terbanyaknya adalah sel T CD4+ Sama dengan tikus
Terletak melingkupi folikel primer dan sekunder sel B, terdiri dari sel B memori dengan sitoplasma yang berlimpah Sumber : Comparative Anatomy and Histology a Mouse and Human Atlas, 2012
13
Gambar 2.5 perbedaan gambaran histologi limpa pada tikus dan manusia29 (A dan B) limpa tikus; (C dan D) limpa manusia (C) Kapsul; (R) Pulpa Merah; (A) Arteriol Sentral; (T) Area Sel T; (B) Area sel B; (GC) Sentrum Germinativum; (M) Mantel Zone; (MZ) Zona Marginalis (W) Pulpa Putih sumber Comparative Anatomy and Histology a Mouse and Human Atlas, 2012
2.3.3. Fisiologi Limpa Limpa memiliki banyak fungsi yang berkaitan dengan penyaringan darah dan imunitas. Sebagai penyaring darah, limpa berperan dalam mengontrol kualitas eritrosit. Eritrosit yang telah berumur 120 hari akan mengalami perubahan membran sehingga tidak bisa melewati stave cell di sinusoid sehingga tidak bisa memasuki sirkulasi darah dan tertinggal didalam limpa yang kemudian dihancurkan oleh makrofag.12,13 Pada masa fetus 3-7 bulan limpa merupakan organ hematopoiesis ekstramedular. Proses hematopoiesis ini tidak berlangsung hingga dewasa kecuali bila teraktivasinya sel punca yang tertinggal di limpa atau kembalinya sel punca dari sumsum tulang ke limpa. Diantara kondisi yang dapat menyebabkan hal tersebut adalah mielofibrosis primer dan hemoloitik kronis dan anemia megaloblastik.13 Sebagai organ limfoid, limpa fungsi untuk menyaring antigen melalui proses darah masuk ke pulpa putih, ketika sampai di zona marginal, sel dendritik dan makrofag akan mempresentasikan antigen ke sel B dan sel T untuk memulai
14
respon yang sesuai.13 Disebutkan bahwa presesntasi antigen pada sel dendritik atau makrofag akan diikuti dengan sekresi IL-2 dan IL-18 yang kemudian menstimulasi sel T dan menghasilkan IFN-γ yang akan menyebabkan diferensiasi sel B yang ada di sentrum germinativum menjadi sel plasma dan sel memori. Proliferasi sel B tersebut akan meningkatkan diameter sentrum germinativum.31 Berbeda dengan manusia, salah satu fingsi limpa tikus merupakan tempat hematopoiesis normal yang dapat terjadi sepanjang hidup yang berespon terhadap berbagai rangsangan. Kondisi hematopoiesis normal pada limpa ini berubah menjadi reaktif saat terjadi kondisi yang dapat merangsang sumsum tulang.29 2.3.4. Respon Limpa terhadap Jejas, Bahan Kimia dan Herbal Seperti yang telah dijelaskan bahwa fungsi limpa adalah untuk destruksi eritrosit dan sebagai orgam limfoid. Keadaan tidak fisiologis dalam tubuh dapat mempengaruhi kerja limpa, misalnya ketika eritrosit mengalami malformasi akan mengakibatkan destruksi terlalu berlebih sehingga aktivitas limpa meningkat dan menjadikan ukuran limpa akan bertambah atau yang sering disebut dengan istilah splenomegali. Splenomegali ini bisa dikarenakan berbagai macam penyebab diantaranya keganasan hematologi, hipertensi porta, malaria dan skistosomiasis.13 Peningkatan aktivitas sel imun pada limpa dapat diketahui dari ukuran pulpa putih. Peningkatan ukuran diameter ini menunjukkan peningktan aktivitas imun pada limpa. Pada penelitian yang dilakukan Makiyah dkk (2014) memperlihatkan bahwa paparan sinar ultraviolet minimal 30 menit 2 kali sehari selama 14 hari pada tikus dapat meningkatkan aktivitas sel imun pada limpa dibuktikan dengan meningkatnya secara bermakna diameter pulpa putih tikus yang diberikan paparan dibandingkan dengan kontrol.32 Proses reparatif dari jejas dan inflamasi yang terjadi pada limpa bisa menyebabakan lesi fibrosis parenkimal dan kapsular. Fibrosis juga bisa diinduksi oleh paparan zat kimia dan hal tersebut bisa memungkinkan untuk menjadi formasi sarkoma. Fibrosis parenkimal terjadi hanya terbatas pada pulpa merah kecuali jika ekstensif maka bisa sampai pada pulpa putih. Paparan terhadap toksik, atau lesi neoplastik pada limpa juga bisa menyebabkan gambaran fibrosis kapsular limpa.33
15
Pada penelitian yang dilakukan oleh Kumar (2013) memperlihatkan bahwa terdapat degenerasi pulpa merah dan apoptosis splenosit pada tikus yang diberikan fluoride 25mg/KgBB/hari dan 50mg/KgBB/hari. Degenerasi pulpa dan apoptosis splenosit ini mengarah kepada fungsi imunologik yang berkurang.34 Studi yang dilakukan Voloshin dkk (2014) pada tikus albino yang diberikan paparan toluen dosis rendah selama 5 jam perhari, 5 hari dalam seminggu selama 2 bulan menunjukkan gambaran histologis limpa berupa peningkatan diameter pulpa putih dibandingkan dengan kontrol.35 Pada mencit yang diterapi dengan ekstrak daun zaitun dengan dosis 0,75% oral selama 14 minggu mengalami penambahan berat limpa yang bermakna dibanding dengan kontrol.5 2.3.5. Respon Limpa Terhadap Ovalbumin Ovalbumin membentuk 54% dari protein total putih telur. Ovalbumin merupakan protein bermassa rendah yaitu 44.500 Da yang terdenaturasi pada suhu 84oC. Pada penelitian yang dilakukan pada mencit BALB/c yang diimunisasi dengan injeksi intraperitoneal ovalbumin (100µl) dengan variasi dosis (0,25 0,5 1 da 3 mg) sebanyak 500µl pada hari ke 0. Kemudian diberikan lagi sebanyak 1µg/ml pada hari ke 21 dan 23 dan kemudian pada hari ke 30 mencit di sacrifice setelah di challenge dengan 1mg/ml ovalbumin. Pada penelitian tesebut didapatkan penampakan hiperplasia limfosit dan sel-sel radang lain.36 Efek ovalbumin pada limpa juga dibuktikan pada penelitain Horani, dkk (2010) bahwa pada pemberian ovalbumin 50 µg dalam 3 mg Al(OH)3 intraperitoneal sebagai sensitisasi asma dan challenge ovalbumin 100 mg dalam 50 ml salin sebanyak 3 kali dalam satu minggu selama 4 minggu memberikan gambaran peningkatan bermakna produksi limfosit yang dibiakkan dari jaringan limpa jika dibandingkan dengan kontrol.37 2.4. Asma Asma merupakan kumpulan gejala yang ditandai dengan obstruksi jalan napas karena inflamasi kronik saluran napas yang hiperresponsif terhadap pencetus.
16
Inflamasi saluran napas ini bisa dapat kembali pada keadaan awal tanpa pengobatan terkadang memerlukan pengobatan juga. Karena patogenesis asma berhubungan dengan hiperresponsifitas saluran napas terhadap pencetus tertentu, kejadian asma kerap kali berkaitan dengan alergi.38 Patogenesis asma berhubungan dengan reaksi hipersensitivitas. Saat paparan awal alergen berikatan dengan reseptor IgE pada sel mast di saluran napas. Pengikatan antigen pada sel mast mengakibatkan sekresi mediator inflamasi, salah satunya histamin yang akan mempengaruhi sel epitel untuk produksi mukus dan membuka taut sel di epitel saluran napas. Setelah taut disaluran napas terbuka antigen dapat masuk dan mempengaruhi eosinofil yang akan memproduksi lebih banyak mediator lagi. Mediator yang disekresi dapat menyebabkan meningkatnya permeabilitas vaskular dan edema. Pengaruh mediator pada nervus vagus dapat menyebabkan bronkospasme.14 Kondisi asma pada hewan coba dapat diinduksi dengan ovalbumin. Pemberian ovalbumin pada mencit secara intraperitoneal dan challenge secara intratrakeal maupun inhalasi menyebabkan overproduksi IgE.39 Daun zaitun merupakan herbal yang mengandung flavonoid. Flavonoid diketahui mempunyai efek menghambat terhadap produksi igE spesifik OVA.40 Terapi standar pada asma adalah glukokortioid yang terbukti dapat menghambat inflamasi pada paru. Pada beberapa studi menjelaskan bahwa terapi dengan glukokortikoid yang dikombinasikan dengan β-2 agonis menyebabkan efek samping.9 Karena itu, terapi dengan bahan herbal saat ini banyak diminati.
17
2.5. Kerangka Teori
Sensitisasi ovalbumin (+ Alum sebagai adjuvant) intraperitoneal
Pajanan kedua dnegan inhalasi
Menyebabkan inflamasi di saluran napas
Asma
Deteksi oleh sel B Produksi IgE spesifik OVA
Pemberian ekstrak daun zaitun (Olea europaea L) oral
Zat aktif Ekstrak daun Zaitun
-
IgE terakumulasi di pembuluh darah
Flavonoid
Luteolin
Masuk ke pembuluh darah limpa
Polifenol
Mempengaruhi regulasi sel T
Limpa
Presentasi ke sel dendritik atau makrofag Sekresi IL-2
Proliferasi sel T
Sekresi IL-1 Stimulasi sel T
Peningkatan berat limpa Diferesiasi sel B di sentrum germinativum menjadi sel B memori
Peningkatan diameter pulpa putih limpa
18
2.6. Kerangka Konsep Mencit BALB/c
Ovalbumin
Asma
Toksik
Limpa Berat limpa Histo PA H&E
Diameter pulpa putih limpa
Terapi ekstrak zaitun oral
19
2.7. Definisi Operasional Untuk memperjelas dan memberikan batasan agar penelitian tidak terlalu luas maka peneliti membuat definisi operasional seperti yang tertera pada tabel 3.1 berikut : Tabel 2.3 Definisi Operasional Variabel Diameter pulpa putih
Berat Limpa
Definisi Panjang diameter/garis tengah dari pulpa putih limpa yang pada preparat terwarna lebih ungu dan berbentuk nodus bulat Berat limpa mencit yang diukur dengan timbangan
Cara Pengukuran Pada perbesaran 100x foto dibuka dengan penampil foto Corel Photo Paint X7 dan dihitung diameter pulpa dengan mistar Menimbang berat limpa dan mencatat hasilnya dengan ketelitian 0,00 gram
Alat Ukur Mistar
Skala Numerik
Timbangan
Numerik
BAB III METODE PENELITIAN 3.1. Desain Penelitian Desain yang digunakan dalam penelitian ini adalah desain eksperimental laboratorium dengan melihat berat dan sediaan histoptologi limpa mencit BALB/c. 3.2. Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian ini dilakukan pada pada tanggal 12 Oktober 2015 – 27 Juli 2016 Pembuatan ekstrak daun zaitun dilakukan di BALITTRO (Balai Penelitian Tanaman Rempah dan Obat). Pemeliharaan dan perlakuan mencit dilakukan di Laboratorium Animal House FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Perlakuan dan pengambilan jaringan dilakukan di Laboratorium Farmakologi. Pembuatan preparat dilakukan di laboratorium histologi FKUI. Dokumentasi foto preparat dan analisis dilakukan di Laboratorium Histologi FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 3.3. Sampel Penelitian 3.3.1. Populasi Obyek penelitian yang digunakan adalah mencit BALB/c yang sudah diverifikasi dan didatangkan dari Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor (IPB) 3.3.2. Sampel Sampel hewan coba pada penelitian ini adalah mencit jantan jenis BALB/c sejumlah 15 ekor melalui perhituang rumus Mead dengan 5 kelompok perlakuan.41 Perhituang rumus Mead adalah E = N - B – T, dengan hasil 3 ekor mencit disetiap kelompok perlakuan (Lampiran 5). Keterangan: N = Jumlah total sampel pada penelitian (dikurangi 1) B = Blocking Component bernilai 0 jika tidak ada stratifikasi T = Jumlah total perlakuan E = Degree of freedom of error component, harus bernilai antara 10-20 20
21
Tabel 3.1. Kelompok perlakuan NO 1. 2.
KELOMPOK Kontrol
4.
P1 (Ekstrak daun zaitun 100 mg + OVA) P2 (Ekstrak daun zaitun 200 mg + OVA) P3 (Esktrak daun zaitun 100 mg)
5.
P4 (Ekstrak daun zaitun 200 mg)
3.
PERLAKUAN PBS (phosphate buffered saline) i.p. + PBS oral + PBS inhalasi OVA-Alum 50 µg/ml i.p. + Ekstrak daun zaitun 100 mg/KgBB oral + OVA inhalasi OVA-Alum 50 µg/ml i.p. + Ekstrak daun zaitun 200 mg/KgBB oral + OVA inhalasi Ekstrak daun zaitun 50 mg/KgBB i.p. + zaitun 100 mg/KgBB oral + Ekstrak daun zaitun inhalasi Ekstrak daun zaitun 50 mg/KgBB i.p. + Zaitun 200 mg/KgBB oral + Ekstrak daun zaitun inhalasi
3.3.3. Kriteria Inklusi 1. Kelompok N : Mencit jantan strain BALB/c 2. Mencit tidak ada kelainan anatomi sebelum perlakuan 3. Mencit tidak tampak gambaran rambut kusam, rontok atau botak 3.3.4. Krieria Eksklusi 1. Mencit sakit atau mati selama penelitian berlangsung 3.4. Variabel Penelitian 3.4.1. Variabel Bebas Variabel bebas pada penelitian ini adalah pemberian ekstrak daun zaitun (Olea europaea L.) per oral. 3.4.2. Variabel Tergantung Variabel tergantung pada penelitian ini adalah gambaran mikroskopik limpa mencit BALB/c dan berat limpa mencit BALB/c 3.5. Alat dan Bahan Penenlitian 3.5.1. Alat Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain : kandang, mencit, tempat makan dan minum mencit, perlengkapan kebersihan, neraca hewan ketelitian 0.01 gram, spuit insulin, sonde, tabung reaksi, gelas ukur, spuit insulin,
22
label, spuit 1 cc, spuit 3cc, tabung reaksi (untuk darah mencit), alat nebulisasi, kandang untuk nebulisasi, toples untuk eter, minor set, papan bedah, kulkas. 3.5.2. Bahan Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah ekstrak daun zaitun dengan dosis 100 mg/KgBB dan 200 mg/KgBB. Pada penelitian ini juga menggunakan PBS dan ovalbumin dan alumunium hidroksida untuk perlakuan hewan coba.39 3.6. Cara Kerja 3.6.1. Penyimpanan Simplisia Daun zaitun diperoleh dari BALITTRO (Balai Penelitain Tanaman Rempah dan Obat) Bogor, Jawa Barat dalam bentuk serbuk halus. Serbuk simplisia disimpan dalam wadah inert yang tertutup rapat dan terlindungi dari cahaya.42 3.6.2. Pembuatan Ekstrak Pembuatan ekstrak daun zaitun menggunakan metode ekstraksi cara dingin yaitu dengan remaserasi. Serbuk simplisia dimaserasi dengan pelarut dalam wadah inert yang gelap dan tertutup rapat hingga terendam dan sesekali diaduk selama 24 jam pada suhuh kamar. Proses maserasi ini diulang hingga menghasilkan maserat yang berwaran pucat (mendekati tak berwarna). Maserat yang telah didapat difiltrasi menggunakan kapas dan kertas saring hingga didapatkan filtrat. Filtrat dipekatkandengan vacuum rotary evaporator sehingga didapatkan ekstrak.42,43 3.6.3. Adaptasi Hewaan Coba Mencit diadaptasikan di Animal house mulai hari pertama sampai hari ke-7. Mencit diadaptasi dengan tempat tinggal barunya, pemberian makanan maupun minuman. Perlakuan disamakan terhadap semua mencit. Menurut Aravind, et al (2012), adaptasi mencit BALB/c untuk dilakukan sensitisasi asma cukup dilakukan selama 7 hari.39 Adaptasi bertujuan agar semua obyek penelitian berada pada kondisi yang sama saat dimulai penelitian dan juga agar hewan coba tidak mengalami stres.
23
3.6.4. Sensitisasi Hewan Coba Setelah melewati masa adaptasi, mencit disensitisasi sebanyak dua kali. Mencit kelompok P1 dan P2 mendapatkan 50 µg/ml ovalbumin intraperitoneal dan 2 mg alumunium hidroksida (Alum) sebagai adjuvan yang diemulsifikasi dalam 0,2 ml PBS.39 Sensitisasi bertujuan sebagai pengenalan antigen pertama agar hewan coba tersensitisasi dengan ovalbumin sehingga nantinya bisa timbul reaksi inflamasi. Menurut Conrad, et al (2009) pemberian adjuvan dapat meningkatkan IgE dan IgG spesifik OVA dibandingkan non adjuvan.36 Sedangkan mencit kelompok P3 dan P4 mendapatkan ekstrak daun zaitun 50 mg intraperitoneal 3.6.5. Pemberian Ekstrak Daun Zaitun Terhadap Mencit Setelah disensitisaasi, mencit diberikan ekstrak daun zaitun (Olea europea L) selama 7 hari dengan dosis 100 mg/KgBB dan 200 mg/KgBB secara oral dengan menggunakan sonde. 3.6.6. Induksi Ovalbumin Setelah dilakukan pemberian ekstrak aun zaitun (Olea euroapaea L.) selama 7 hari pada kelompok P1 dan P2 kemudian mencit di challenge dengan ovalbumin 2% 5-7ml secara inhalan selama 20 menit selama dua hari. Challenge untuk kali ke-3 dengan inhalasi ovalbumin 5% 5-7ml selama 30 menit. Challenge ini bertujuan untuk memastikan bahwa mencit sudah terinduksi dengan baik sehingga mencit benar-benar dalam kondisi asma.39 Pada perlakuan P3 dan P4 setelah diberikan ekstrak zaitun oral selama 7 hari kemudian dilakukan challenge dengan inhalasi ekstrak daun zaitun 2% 5-7 ml dalam 20 menit selama dua hari. Challenge yang ketiga dengan inhalasi ekstrak daun zaitun 5% 5-7 ml dalam 30 menit. 3.6.7. Pengambilan Organ Limpa Setelah mendapatkan induksi ovalbumin, mencit dipuasakan untuk nekropsi pada esok harinya. Mencit dipuasakan sehari dengan tujuan agar tidak banyak makanan yang tertinggal di organ mencit dan organ berada dalam kondisi bersih sehingga dihasilkan potongan preparat yang bagus dan bersih.
24
Setelah dipuasakan, dilakukan nekropsi pada mencit. Sebelum dinekropsi, mencit dianastesi terlebih dahulu dengan larutan eter yang diletakkan didalam toples kemudian mencit dimasukkan kedalam toples tersebut sehingga eter terinhalasi mencit dan menjadikan mencit tersebut lemah. Setelah mencit melemah, mencit dinekropsi. Teknik eksplorasi organ saat nekropsi bisa dari trakea ataupun abdomen. Karena penelitian ini bersamaan dengan pengambilan trakea, eksplorasi organ dilakukan dari daerah leher. Setelah trakea diambil, dilakukan pembedahan sampai pada bagian abdomen sampai terlihat gaster kemudian limpa terdapat dibelakang gaster. Setelah terlihat limpa lalu ambil limpa dan masukkan ke larutan PBS kemudian disimpan dalam larutan formalin.26 3.6.8. Pengukuran Berat Limpa Setelah limpa diambil dari tubuh mencit dan di masukkan ke larutan PBS agar organ tetap berada dalam keadaan fisiologis, kemudian organ dikeringkan dengan kertas saring dan tisu, kemudian ditimbang dengan timbangan digital dan dicatat hasil pengukuran beratnya. Setelah diukur beratnya, limpa disimpan dalam larutan formalin 5%. Pengukuran berat limpa ini dilakukan sesuai penelitian yang dilakukan oleh Rodrigues et al 2011 yang mengukur berat limpa pada pemberian ekstrak daun zaitun dengan berbagai konsentrasi.5 3.6.9. Pembuatan Preparat 3.6.9.1 Dehidrasi Proses dehidrasi dilakukan dengan menggunakan alkohol dari konsentrasi rendah ke konsentrasi tinggi. Pertama, alkohol diencerkan sesuai konsentrasi yang dibutuhkan kemudian ditungkan kedalam pot plastik sebanyak setengah dari volume pot. Setiap larutan dituangkan dalam 3 buah pot dan diberi label dari I sampai III untuk menandakan urutan perlakuan. Jaringan yang telah disimpan dalam formalin dimasukkan kedalam pot mulai dari label I, II, III secara berurutan dari alkohol konsentrasi rendah ke konsentrasi tinggi yaitu 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% dn alkohol absolut. Pada masing-masing pot jaringan didiamkan selama 20 menit44.
25
3.6.9.2. Clearing Proses clearing bertujuan untuk menghilangkan alkolhol dalam jaringan. Bahan yang digunakan adalah toluol-alkohol 1:1 dan toluol murni. Jaringan yang sudah melewati proses dehidrasi dimasukkan kedalam wadah kaca bertutup yang berisi campuran toluol-alkohol 1:1 untuk direndam selama 25 menit. Setelah itu jaringan direndam selama 1 jam dalam larutan toluol murni.44 2.6.9.3. Embedding Proses embedding dilakukan untuk menghilangkan cairan dalam jaringan selama proses clearing. Bahan yang digunakan adalah toluol-parafin 1:1 dan parafin murni. Pertama toluol-parafin 1:1 dicairkan daam 3 wadah kaca lalu organ didiamkan selama 24 jam dalm wadah tersebut. Hari setelahnya wadah berisi organ tersebut dipanaskan untuk mencairkan toluol-parafin 1:1. Organ kemudian dimasukkan kedalam botol berisi parafin cair yang telah diberi nomor urut sesuai perlakuan selama 15 menit. Perendaman didalam parafin harus dilakukan dalam inkubator 62oC agar parafin tetap cair.44 3.6.9.4. Pencetakan Proses pencetakan dilakukan untuk membuat parafin blok. Bahan yang dibutuhkan adalah cetakan blok, embedding cassete, dan parafin cair. Pertama parafin cair dituangkan kedalam cetakan secukupnya kemudian jaringan direndam kedalam parafin cair lalu embedding cassete diletakkan diatasnya. Untuk merekatkan parafin cair dituangkan kembali dan dibiarkan hingga blok membeku pada suhu ruangan.35 3.6.9.5. Pemotongan Jaringan Pemotongan jaringan dilakukan untuk memotong blok sesuai dengan ketebalan yang diinginkan dan dibuat preparat histologis. Alat dan bahan yang digunakan adalah mikrotom geser, paraffin water bath, kaca objek, kuas, akuades dan es batu. Blok parafin dipasangkan pada holder dimikrotom geser, kemudian dipotong dengan ketebalan 6 µm. Hasil potongan jaringan pada parafin diambil dan direndam dalam paraffin water bath yang berisi akuades dengan suhu 40oC hingga
26
jaringan terlihat meregang. Potongan diambil dengan menggunakan kaca objek yang sudah diolesi dengan campuran albumin dan gliserin yang didiamkan selama semalam. Kemudian kaca objek diletakkan ditepi paraffin waterbath hingga kering dan jaringan melekat kuat dikaca objek.45 3.6.9.6. Pewarnaan dengan Hematoksilin-Eosin Bahan yang diperlukan dalam proses pewarnaan adalah xylol, alkohol absolut, alkohol dengan konsentrasi 70%, 80%, 90%, dan 95%, akuades, Hematoksilin-Eosin (HE) dan asam alkohol yang merupakan campuran 200 ml alkohol 70% dengan 2 ml HCl yang masing-masing bahan tersebut dituang dalam staining jar sebanyak 200 ml.44 Preparat yang telah dibuat disusun dalam cawan lalu direndam dalam xylol selama 10 menit sebanyak 2 kali. Setelah itu cawan dipindahkan dan direndam dalam alkohol absolut selama 5 menit sebanyak 2 kali, lalu cawan dipindahkan dan direndam dalam alkohol 90%, 80% dan 70% masing-masing selama 1 menit dan berurutan mulai konsnsentrasi tertinggi hingga terendah. Kemudian cawan dipindahkan dan direndam kedalam aquadest selama 4 menit. Setelah itu cawan dipindahkan dan direndam dalam pewarna Hematoksilin-Eosin selama 4 menit. Cawan dipindahkan dan direndam dalam akuades selama 1 menit sebanyak 3 kali. Lalu cwan dipindakan dan direndam dalam asam alkohol selama 30 detik. Cawan dipindahkan dan direndam dalam akuades selama 1 menit. Setelah itu preparat dilihat dibawah mikroskop untuk memeriksa pewarnaan.44,46 Setelah preparat diperiksa dibawah mikroskop preparat dimasukkan kedalam cawan lagi dan direndam kembali kedalam akuades selama 1 menit sebanyak 3 kali. Setelah itu kemudian dipindahkan dan direndam dalam alkohol 70%, 80%, 90% dan alkohol absolut masing-masing selama 1 menit dan berurutan dari konsentrasi terendah ke konsentrasi tertinggi. Kemudian cawan dipindahkan dan direndam dalam xylol selama 3 menit sebanyak 3 kali.44 Segera setelah perendaman dalam xylol terakhir, preparat ditetesi dengan kanada balsam secukupnya, lalu ditutup pelan-pelan dengan cover glass dengan
27
hati-hati agar tidak terbentuk gelembung udara. Terakhir, preparat diberi label sesuai kode pada perlakuan dan dibiarkan hingga mengering.44 3.6.10. Pengambilan Gambar Preparat Histologi Limpa Setelah preparat kering, dilakukan pengambilan foto preparat. Alat yang dibutuhkan adalah mikroskop konfokal (Olympus BX41) dan software DP2-BSW, dan perangkat komputer. Pertama, komputer dan mikroskop dinyalakan dan dipastikan terkoneksi dengan komputer dengan baik. Preparat diletakkan di meja objek dan diamati dengan lensa perbesaran 40 kali, kemudian setelah terlihat jaringan yang akan diambil fotonya, lensa diperbesar menjadi perbesaran 100 kali.32 Setelah itu ambi foto bagian dari preparat yang diinginkan dan simpan file foto. 3.6.11. Penghitungan Diameter Pulpa Putih Limpa Setelah dokumentasi foto selesai dilakukan penghitungan diameter pulpa putih limpa pada penampil foto Corel Photo Paint X7 pada perbesaran 40% yang diukur dengan mistar. Diameter pulpa putih adalah rereta diameter yang ditentukan dari hasil pengukuran diameter terpendek dan terpanjang.31 Kemudian hasil yang didapatkan dikalikan dengan 45,455 yang merupakan skalanya, atau dengan kata lain jika didapatkan pengukuran 1 cm dengan mistar maka panjang sebenarnya adalah 45,455 µm. Perhitungan diameter pulpa putih limpa sebagai salah satu indikator adanya peningkatan aktitas sel pada limpa berdasarkan penelitian yang dilakukan Voloshin et al, (2014) pada tikus albino yang diekspos dengan toluen level rendah.35
28
3.7. Alur Penelitian Mencit tiba di animal house
Adaptasi selama 7 hari makan dan minum adlibitum Mencit dibagi menjadi 5 kelompok
Kel K (kontrol)
Kel 1 (z100+ova)
Kel 2 (z200+ova)
Kel 3 (PBS+z100)
Kel 4 (PBS+z200)
PBS i.p
Sensitisasi ovalbumin i.p
Sensitisasi ovalbumin i.p
Sensitisasi zaitun i.p
Sensitisasi zaitun i.p
Sonde ekstrak daun zaitun (olea europea L.) 100 mg/kgBB selama 7 hari
Sonde ekstrak daun zaitun (olea europea L.) 200 mg/kgBB selama 7 hari
Sonde ekstrak daun zaitun (olea europea L.) 100 mg/KgBB selama 7 hari
Sonde ekstrak daun zaitun (olea europea L.) 100 mg/KgBB selama 7 hari
Sonde pbs selama 7 hari
Challenge dengan inhalasi
PBS
Ovalbumin
Ovalbumin
Dipuasakan satu hari
Nekropsi Pengukuran berat limpa Evakuasi organ limpa Pembuatan preparat
Pengamatan mikroskop
Analisis data
Daun zaitun
Daun zaitun
29
3.8. Analisis Data Pengambilan data pada penelitian ini dilakukan eksperimen langsung terhadap mencit jenis BALB/c yang diberi perlakuan berupa pemberian ekstrak daun zaitun (Olea europaea L.) dan induksi ovalbumin. Setelah data terkumpul dilakukan pengolahan data dengan microsoft excel dan analisis statistik dengan SPSS versi 22.0. Uji yang digunakan adalah uji One way ANOVA karena penelitian termasuk analitik komparatif lebih dari dua kelompok. Sebelum diuji dengan uji one way ANOVA data yang didapatkan harus diuji normalitas dan homogenitasnya. Jika salah satua uji tersebut tidak terpenuhi maka dilakukan transformasi data. Jika transformasi data tidak berhasil dilakukan maka dilakukan uji Kruskal Wallis.
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1. Diameter Pulpa Putih Limpa Penelitian efek pemberian ekstrak daun zaitun (Olea europaea L.) sebagai terapi asma terhadap limpa mencit BALB/c dibagi menjadi 5 kelompok yaitu kelompok mencit yang diberikan PBS (phosphate buffered saline) oral dan inhalasi PBS sebagai kelompok kontrol (K). Kelompok mencit yang diberikan ekstrak daun zaitun (Olea europaea L.) 100 mg/kgBB per oral dan inhalasi ovalbumin sebagai kelompok perlakuaan 1 (P1). Kelompok mencit yang diberikan ekstrak daun zaitun (Olea europaea L.) 200 mg/KgBB per oral dan inhalasi ovalbumin sebagai kelompok perlakuan 2 (P2). Kelompok mencit yang diberikan ekstrak daun zaitun (Olea europaea L.) 100 mg/KgBB per oral dan inhalasi ekstrak daun zaitun (Olea europaea L.) sebagai kelompok perlakuan 3 (P3). Kelompok mencit yang diberikan ekstrak daun zaitun (Olea europaea L.) 200 mg/KgBB per oral dan ekstrak daun zaitun (Olea europaea L.) sebagai kelompok perlakuan 4 (P4). Pelakuan dilakukan selama 7 hari. Data mikroskopik limpa berdasarkan pengelompokan diatas diperoleh melalui jumlah rata-rata hitungan dari diameter pulpa putih limpa yang dilakukan oleh peneliti. Gambar histologis diameter pulpa putih limpa mencit disajikan pada gambar 4.1. Dari hasil pengamatan mikroskopik pada limpa mencit BALB/c didapatkan hasil bahwa semua kelompok perlakuan memiliki rata-rata diameter pulpa putih lebih besar dibandingkan dengan kontrol.
30
31
K
P2
P1
P3
P4 Gambar 4.1 gambaran mikroskopik limpa setelah pemberian ekstrak daun zaitun pada mencit BALB/c pewarnaan HE perbesarana 100X. K: kontrol ; P1 : ekstrak daun zaitun 100 mg + OVA; P2: ekstrak daun zaitun 200 mg +OVA; P3: ekstrak daun zaitun 100 mg; P4: ekstrak daun zaitun 200 mg (tanda panah menunjukkan diameter limpa) Kelompok P1 (ekstrak daun zaitun 100 mg/KgBB + OVA) dan P2 (ekstrak daun zaitun 200 mg/KgBB + OVA) jika dibandingkan dengan kelompok P3 (ekstrak daun zaitun 100 mg/KgBB + ekstrak daun zaitun inhalasi) dan P4 (ekstrak daun zaitun 200 mg/KgBB + ekstrak daun zaitun inhalasi) terlihat terjadi perbedaan diameter pulpa putih yang lebih besar. Hal ini dikarenakan pada kelompok P1 dan
32
P2 diberikan injeksi ovalbumin intra peritoneal dapat mengaktivasi jaringan mesenterium mencit dan dapat mengakibatkan peningkatan aktivitas sel imun pada tubuh mencit melalui respon alergi pada pemberian berulang. Reaksi alergi yang terjadi melalui pengenalan awal dengan APC yang kemudian akan mensekresi IL1 yang akan merangasang sel T untuk sekresi IL-2 yang akan mengkibatkan proliferasi sel T. Proliferasi sel T
akan semakin banyak dihasilkan IFN-γ
mengakibatkan diferensiasi sel B di sentrum germinativum semakin meningkat. Peningkatan proliferasi sel T dan sel B mengakibatkan semakin luasnya diameter pulpa putih limpa.31,47 Kelompok P2 (ekstrak daun zaitun 200 mg/KgBB + OVA) menunjukkan gambaran diameter pulpa putih paling tinggi dibanding kelompok kelompok lainnya. Hal ini mungkin disebabkan oleh pemberian ekstrak dalam dosis yang lebih tinggi dan pemberian ovalbumin. Pemberian ovalbumin pada mencit mengakibatkan respon alergi sehingga produksi limfosit meningkat dan diameter pulpa putih limpa mencit juga meningkat.31 Pada kelompok P1 (ekstrak daun zaitun 100 mg/KgBB + OVA) didapatkan peningkatan diameter pulpa putih limpa tidak terlalu tinggi jika dibandingkan dengan kelompok P2, hal ini mungkin dikarenakan dosis ekstrak daun zaitun yang diberikan pada P2 lebih besar dibandingkan P1 tapi perbedaan tidak terlalu besar . Pada kelompok P3 (ekstrak daun zaitun 100 mg/KgBB + ekstrak daun zaitun inhalasi) dan P4 (ekstrak daun zaitun 200 mg/KgBB + ekstrak daun zaitun inhalasi) menunjukkan gambaran diameter pulpa putih limpa yang lebih besar dari kontrol. Hal ini mungkin disebabkan paparan polifenol yang merupakan komponen ekstrak daun zaitun yang dapat menyebabkan peningkatan produksi sel imun pada pulpa putih limpa.48 Kelompok P3 dan P4 hewan coba diberikan ekstrak daun zaitun dengan dosis 100 mg/KgBB dan 200 mg/KgBB. Hasil menunjukkan bahwa terjadi peningkatan diameter pulpa putih limpa dibandingkan dengan kontrol. Peningkatan pulpa putih ini mungkin karena adanya aktivitas imunomodulator dari flavonoid yang merupakan komponen dari ekstrak daun zaitun. Sebagai imunomodulator flavonoid dapat meningkatkan index proliferasi limfosit dan splenosit sehingga
33
diduga dapat meningkatkan diameter pulpa putih limpa yang komponennya adalah limfosit.49 Pada sebuah penelitian menjelaskan bahawa pemberian flavonoid meningkatkan jumlah sel T dan IL-2.50 Pada studi lain juga menjelaskan ekstrak herbal yang kaya akan flavonoid pada mencit secara oral menyebabkan peningkatan sel imun pada payer’s patch dan limpa.51 Kelompok P3 (ekstrak daun zaitun 100 mg/KgBB + ekstrak daun zaitun inhalasi) jika dibandingkan dengan P4 (ekstrak daun zaitun 200 mg/KgBB + ekstrak daun zaitun inhalasi) menunjukkan gambaran bahwa pada P4 peningkatan diameter pulpa putih limpa lebih tinggi. Hal ini mungkin disebabkan oleh dosis yang diberikan juga lebih besar sehingga memberikan efek peningkatan diameter pulpa putih lebih besar juga. Setelah
dilakukan
pengamatan
pada
sediaan
histologi
dilakukan
penghitungan rata-rata diameter pulpa putih limpa didapatkan hasil yang disajikan pada grafik 4.1 dan analisis SPSS dengan one way ANOVA (lampiran)
DIAMETER PULPA PUTIH (µm)
300.00 250.00 200.00 150.00 100.00 50.00 0.00 RATA-RATA
K
P1
P2
P3
P5
164.03
168.18
203.47
190.76
196.40
Grafik 4.1 Rata-rata diameter pulpa putih limpa setelah pemberian ekstrak daun zaitun pada mencit BALB/c pewarnaan HE perbesaran 100X. (K: kontrol ; P1 : esktrak daun zaitun 100 mg + OVA; P2: ekstrak daun zaitun 200 mg + OVA; P3: ekstrak daun zaitun 100 mg; P4: ekstrak daun zaitun 200 mg) Hasil dari pengukuran diameter pulpa putih dianalisis dengan one way ANOVA untuk melihat signifikansi. Didapatkan bahwa diameter pulpa putih limpa
34
mencit secara keseluruhan mengalami peningkatan yang tidak signifikan. Hal ini mungkin dikarenakan pemberian ekstrak daun zaitun hanya dalam 7 hari sehingga perbedaan yang ditimbulkan dari masing-masing perlakuan belum terlihat. Pada penelitian sebelumnya yang melibatkan efek terhadap limpa dan penilaian yang sama yaitu dengan mengukur diameter pulpa putih limpa dilakukan selama 10 hari dan didapatkan hasil signifikan antar kelompok.52
35
4.2. Berat Limpa Pada penelitian ini dilakukan juga pengukuran berat limpa mencit. Pada kelompok P1, P2 dan P4 menunjukkan berat limpa lebih besar jika dibandingkan dengan kelompok kontrol. 0.40 0.35
berat limpa (gram)
0.30
*
0.25 0.20 0.15 0.10 0.05 0.00
BERAT LIMPA
K
P1
P2
P3
P4
0.25
0.26
0.32
0.17
0.26
Grafik 4.2. Rata-rata berat limpa setelah pemberian ekstrak daun zaitun pada mencit BALB/c pewarnaan HE perbesaran 100X. (K: kontrol ; P1 : esktrak daun zaitun 100 mg + OVA; P2: ekstrak daun zaitun 200 mg +OVA; P3: ekstrak daun zaitun 100 mg; P4: ekstrak daun zaitun 200 mg) (ANOVA, *p value< 0,05) Pada kelompok P1 (ekstrak daun zaitun 100mg/KgBB + OVA) dan P2 (ekstrak daun zaitun 200mg/KgBB + OVA) didapatkan hasil berat limpa yang lebih besar dibandingkan dengan kontrol. Hal ini mungkin disebabkan karena mencit mendapatkan ekstrak daun zaitun dan ovalbumin. Pada penelitian yang dilakukan Roy, et al (2013) menunjukkan hiperplasia splenosit pada mencit yang diberikan ovalbumin intraperitoneal berulang.36 Pada kelompok P3 (ekstrak daun zaitun 100 mg/KgBB + ekstrak daun zaitun inhalasi) memiliki berat limpa yang lebih rendah jika dibandingkan dengan kelompok kontrol. Pada kelompok P4 (ekstrak daun zaitun 200 mg/KgBB + ekstrak daun zaitun inhalasi) didapatkan peningkatan berat limpa hal ini mungkin dikarenakan dosis ekstrak yang diberikan lebih tinggi. Sedangkan pada P3 berat limpa lebih rendah jika dibandingkan dengan kontrol. Temuan ini sejalan dengan penelitian yang dilakuan oleh Rodrigues (2011) memperlihatkan bahwa pemberian ekstrak daun zaitun dengan konsentrasi 0,75% selama 14 minggu menyebabkan
36
peningkatan berat limpa mencit dan pada konsentrasi 0,25% memiliki berat limpa yang lebih rendah dibandingkan dengan kontrol.5 Pemberian ekstrak daun zaitun dapat meningkatan berat limpa diduga melalui peningkatan proliferasi sel imun yang terdapat pada limpa. Seperti pada penelitian lain menggunakan ekstrak herbal lain yang mengandung flavonoid dapat meningkatkan titer IgE yang sejalan dengan peningkatan berat limpa.53 Kemudian dilanjutkan dengan uji statistik untuk melihat signifikansi hasil penelitian dengan one way ANOVA. Dari uji post hoc LSD (lampiran 5) didapatkan perbedaan bermakna (p<0,05) antara kelompok P3 (ekstrak daun zaitun 100 mg/KgBB + ekstrak daun zaitun inhalasi) dengan kontrol. Sedangkan pada kelompok perlakuan lainnya didapatkan hasil tidak bermakna (p>0,05). Terdapat perbedaan antara hasil mikroskopik limpa dan berat limpa pada kelompok P3 (ekstrak daun zaitun 100 mg/KgBB + ekstrak daun zaitun inhalasi). Pada preparat histologis P3 tampak peningkatan diameter pulpa putih jika dibandingkan dengan kontrol sedangkan pada berat limpa P3 memiliki berat yang lebih rendah dibandingkan dengan kontrol. Hal ini mungkin disebebkan karena proliferasi limfosit masih terjadi di pulpa putih belum sampai pada pulpa merah sehingga walaupun terjadi proliferasi tidak bisa menyebabkan pembengkakan atau peningkatan berat limpa karena proliferasi limfosit di pulpa merah dan infiltrasi neutrofil dan makrofag kedaan limpa dapat meningkatkan berat limpa.50 Perbedaan hasil ini juga dimungkinkan karena perubahan pada struktur mikroskopis limpa belum dapat mengakibatakan perubahan pada struktur makroskopis limpa. Keadaan animal house yang tidak ideal seperti kandang mencit yang kecil, sirkulasi udara, pemberian makan mencit menggunakan makanan hewan biasa, air minum dengan air keran memugkinkan terjadinya bias hasil pada penelitian ini. Selain itu juga karena variasi individu, sampel yang digunakan terbatas maka perbedaan nilai akan sangat berpengaruh pada hasil akhir pengukuran dalam penelitian ini.
37
4.3. Keterbatasan Penelitian Selama penelitian berlangsung banyak hambatan yang didapat, anatara lain 1. Minimnya referensi penelitian mengenai efek ekstrak daun zaitun pada limpa mencit 2. Tidak adanya kelompok kontrol positif (ovalbumin) 3. Keterbatasan sampel 4. Ketidaksempurnaan dalam pembuatan preparat sehingga beberapa preparat didapatkan gambar jaringan yang terlipat serta pecah. 5. Laboratorium Animal House belum terstandarisasi.
BAB V SIMPULAN DAN SARAN 5.1. Simpulan Pemberian ekstrak daun zaitun (Olea europaea L.) seagai terapi asma pada mencit BALB/c menyebabkan peningkatan aktivitas limpa yang ditandai dengan menigkatnya diameter pulpa putih limpa dan menigkatnya berat limpa meskipun tidak signifikan 5.2. Saran 1. Penelitian efek ekstrak daun zaitun (Olea europaea L.) pada limpa dengan jangka waktu lama 2. Jika penelitian seperti ini dilakukan lagi sebaiknya ditambahkan kelompok kontrol positif ovalbumin 3. Dilakukan pemeriksaan imunologis pada limpa yang diberikan esktrak daun zaitun
38
BAB VI KERJASAMA PENELITIAN Penelitian ini merupakan bentuk kerjasama penelitian mahasiswa, dan dosen FKIK yaitu dr Nurul Hiedayati, Ph.D., dr Riva Auda, Sp.A., M. Kes. dan Nur Laely Mida Rahmawati, M.Biomed, Ph.D. yaitu tentang efek pemberian ekstrak daun zaitun untuk terapi asma terhadap organ pernafasan mencit BALB/c yang diinduksi ovalbumin. Penelitian ini didanai oleh Lemlit UIN, dan Kementerian Agama.
39
DAFTAR PUSTAKA 1.
Tilburt JC, Kaptchuk TJ. Herbal medicine research and global health : an ethical analysis. Bull World Heal Organ. 2008;86(8):594–9.
2.
IFF B, S W-G, editors. Herbal Medicine: Biomolecular and Clinical Aspect. 2nd ed. Francis: CRC Press; 2011.
3.
Supardi S, Leny Susyanty. Penggunaan obat tradisional dalam upaya pengobatan sendiri di indonesia (analisis data susenas tahun 2007). Bul Penelit Kesehat. 2010;38(2):80–9.
4.
Ferreira ICFR, Barros L, Elisa M, Lourdes M, Lourdes M, Pereira JA. Food Chemistry Antioxidant activity and phenolic contents of Olea europaea L . leaves sprayed with different copper formulations. Food Chem. 2007;103:188–95.
5.
Arantes-Rodrigues R, Henriques A, Pires MJ, Colaco B, Calado A m., Rema P, et al. High doses of olive leaf extract induce liver changes in mice. Food Chem Toxicol. 2011;49(9):1989–97.
6.
Abaza L, Taamalli A, Nsir H, Zarrouk M. Olive tree (Olea europeae L.) leaves: importance and advances in the analysis of phenolic compounds. Antioxidant. 2015;4(11):682–98.
7.
Balasundram N, Sundram K, Samman S. Food Chemistry Phenolic compounds in plants and agri-industrial by-products : Antioxidant activity , occurrence , and potential uses. Food Chem. 2006;99:191–203.
8.
Braun L, Cohen M. Herbs & Natural Supplements. 2nd ed. Sydney: Elsevier; 2007.
9.
Toledo AC, Sakoda CPP, Perini A, Pinheiro NM, Magalhães RM, Grecco S, et al. Flavonone treatment reverses airway inflammation and remodelling in an asthma. Br J Pharmacol. 2013;168:1736–49.
10.
WHO. Guidelines on safety monitoring of herbal medicines in pharmacovigilance systems. Geneva; 2004.
11.
Steiniger BS. Human spleen microanatomy : why mice do not suffice. Immunology. 2015;145:334–46.
12.
Mescher AL. Histologi Dasar Junqueira: Teks dan Atlas. 12th ed. Jakarta: EGC; 2011.
13.
Hoffband A, PAH M. Kapita Selekta Hematologi. 6th ed. Jakarta: EGC; 2013. 40
41
14.
Kumar V, Cotran RS, Robbins SL. Buku Ajar Patologi Robbins. 7th ed. EGC; 2007.
15.
Muzaluppo I, editor. Olive Germplasm - The Olive Cultivation, Table Olive and Olive Oil Industry in Italy. InTech; 2012.
16.
Hashmi MA, Khan A, Hanif M, Farooq U, Perveen S. Traditional uses, phytochemistry, and pharmacology of olea europaea (olive). Evidence-based Complement Altern Med. 2015;2015:1–29.
17.
Khan Y, Panchal S, Vyas N, Butani A, Kumar V. Olea europaea : A PhytoPharmacological Review. Pharmacogn Rev. 2007;1(1):112–6.
18.
Barbaro B, Toietta G, Maggio R, Arciello M, Tarocchi M, Galli A, et al. Effects of the olive-derived polyphenol oleuropein on human health. Int J Mol Sci. 2014;15(10):18508–24.
19.
Chebbi Mahjoub R, Khemiss M, Dhidah M, Dellaï A, Bouraoui A, Khemiss F. Chloroformic and Methanolic Extracts of Olea europaea L. Leaves Present Anti-Inflammatory and Analgesic Activities. ISRN Pharmacol. 2011;2011(506):564972.
20.
Ahmed AM, Rabii NS, Garbaj AM, Abolghait SK. Antibacterial effect of olive (Olea europaea L.) leaves extract in raw peeled undeveined shrimp (Penaeus semisulcatus). Int J Vet Sci Med. 2014;2(1):53–6.
21.
Paiva-Martins F, Fernandes J, Rocha S, Nascimento H, Vitorino R, Amado F, et al. Effects of olive oil polyphenols on erythrocyte oxidative damage. Mol Nutr Food Res. 2009;53(5):609–16.
22.
Vissers MN, Zock PL, Roodenburg AJC, Leenen R, Katan MB. Human Nutrition and Metabolism Olive Oil Phenols Are Absorbed in Humans. J Nutrtion. 2002;409–17.
23.
Omar SH. Oleuropein in olive and its pharmacological effect. Sci Pharm. 2010;78:133–54.
24.
Gartner LP, JL H. Color Textbook of Histology. 3rd ed. Saunders; 2007.
25.
Woo CSJ, Lau JSH, El-Nezami H. Herbal medicine: toxicity and recent trends in assessing their potential toxic effects. In: Shyur L-F, Lau AlSY, editors. Advance in Botanical Research Recent Trends in Medicinal Plants Research. Elsevier; 2012. p. 365–84.
26.
Alferah MAZ. Toxicity Induced Histological Changes in Selected Organs of Male (Wistar) Rats by Lawsonia inermis Leaf Extract. European J Med Plants. 2012;2(2):151–8.
42
27.
Cesta MF. Normal structure, function, and histology of the spleen. Toxicol Pathol. 2006;34:455–65.
28.
L DR, Vogl AW, Mitchell AWM. Gray Dasar Dasar Anatomi. Elsevier; 2014.
29.
Linden M, Ward JM, Cherian S. Hematopoietic and Lymphoid Tissues. In: Treuting PM, Dintzis SM, editors. Comparative Anatomy and Histology. First Edit. Elsevier Inc.; 2012. p. 309–38.
30.
Eroschenko VP. Atlas Histologi dFiore: dengan Korelasi Fungsional. 11th ed. Jakarta: EGC; 2010.
31.
Winarni D, Handono CD, Sugiharto. Efek stimulatori beberapa fraksi teripang lokal Phyllophorus sp terhadap histologi mencit (Mus musculus) yang diinfeksi Mycobacterium tuberculosis. UNAIR; 2009.
32.
Makiyah S, Iszamriach R, Nofariyandi A. Paparan ultraviolet C meningkatkan diameter pulpa alba limpa dan indeks mitotik epidermis kulit mencit. J Kedokt Brawijaya. 2014;28(1):17–21.
33.
Suttie AW. Histopathology of the spleen. Vol. 34, Toxicologic pathology. 2006. 466-503 p.
34.
Kumar A, Kumari S. Histopathology of spleen of rat (Rattus norwegicus) fed on doses of sodium flouride. Indian J Scinetific Res. 2013;4(1):87–92.
35.
Voloshin VN, Koveshnikov VG, Voloshina IS. Morphology of the spleen in adult albino rats after whole-body exposure to low-level of toluene. Int J Anat Res. 2014;2(2):421–30.
36.
Roy R, Kumar S, Verma AK, Sharma A, Chaudhari BP, Tripathi A, et al. Zinc oxide nanoparticles provide an adjuvant effect to ovalbumin via a th2 response in Balb/c mice. Int Immunol. 2014;26(3):159–72.
37.
Horani A, Shoseyov D, Doron S, Mruwat R, Amer J, Kerem E, et al. Immune modulation of ovalbumin-indoced lung injury in mice using β-glucoseramid and a potential role of the liver. Immunology. 2011;216:548–57.
38.
Longo DL, Kasper DL, Jamenson JL, Fauci AS, Hauser SL, Loscalzo J, editors. Harrison’s Principles of Internal Medicine. 18th ed. New York: Mc Graw Hill; 2012.
39.
Reddy AT, Lakshmi SP, Reddy RC. Murine model of allergen induced asthma. J Vis Axperiments. 2012;63:1–7.
40.
Tanaka T, Takahashi R. Flavonoids and asthma. Nutrients. 2013;5:2128–43.
43
41.
Singh AS, Masuku MB. Sampling techniques & determination of sample size in applied statistics research: an overview. Int J Econ Commer Manag. 2014;II(11):1–22.
42.
Mukhriani. Ekstraksi, pemisahan senyawa, dan identifikasi senyawa aktif. J Kesehat. 2014;VII(2):361–7.
43.
Istiqomah. Perbandingan metode ekstraksi maserasi dan sokletasi terhadap kadar piperin buah cabe jawa (Piperis retrofracti fructus). Skripsi. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta; 2013.
44.
Suntoro S. Metode pewarnaan : histologi dan histokimia. Jakarta: Bhatara Karya Aksara; 1983. 1-76 p.
45.
Muntiha M. Teknik pembuatan preparat histopatologi dari jaringan hewan dengan pewarnaan hematoksilin eosin (H&E). Temu Tek Fungsional non Peneliti. 2001;156–63.
46.
Mulyono A, Ristiyanto, H NS. Karakteristik histopatologi hepar tikus got Rattus norvegicus invektif Leptospira sp. J Vektora. 2009;1(2):84–92.
47.
Hong SH, Kim SR, Choi H-S, Ku JM, Seo HS, Shin YC, et al. Effect of hyeonggaeyeongyo-tang in ovalbumin-induced allergic rhinitis model. Mediators Inflamm. 2014;1–9.
48.
Cuevas A, Salazar LA, Abdalla DSP, Bioresource T, Analysis T, Paulo S. Modulation of Immune Function by Polyphenols: Possible Contribution of Epigenetic Factors. 2013;2314–32.
49.
Talmale S, Bhujade A, Patil M. Immunostimulatory activity of flavonoids isolated from stem bark of Zizyphus mauritiana. Int J Innov Res Sci Eengineering Technol. 2014;3(7):14285–96.
50.
Jiao Y, Wen J, Zhang X. Influence of flavonoid of astragalus membranaceus ’ s stem and leaf on the function of cell mediated immunity in mice. Chinese J Integr Tradit West Med. 2001;7(2):117–20.
51.
Karasawa K, Uzuhashi Y, Hirota M, Otani H. A Matured fruit extract of date palm tree ( Phoenix dactylifera L .) stimulates the cellular immune system in mice. J Agric Food Chem. 2011;59:11287–93.
52.
Medika V. Pengaruh pemaparan karbofuran terhadap gambaran diameter limpa mencit (Mus musculus). Vet Med. 2014;7(2):100–5.
53.
Khairinal. Efek kurkumin terhadap proliferasi sel limfosit dari mencit CH3 bertumor payudara secara in vitro. UI; 2012.
44
LAMPIRAN Lampiran 1 Hasil Determinasi / Identifikasi Bahan Uji
Gambar 7.1 Surat hasil determinasi bahan uji
45
Lampiran 2 Penghitungan Sampel 1. Rumus Mead 𝑬=𝑵−𝑩−𝑻 Keterangan N = total dari jumlah individu (dikurangi 1) B = blocking component, mempresentasikan efek limgkungan yang diperbolehkan dalam penelitian T = kelompok uji coba, termasuk kelompok kontrol (dikuragi 1) E = derajat kebebasan dari kelompok eror, nilainya diantara 10-20 10 ≤ E ≤ 20 E=N–B–T
E=N–B–T
≥ 10 = (N – 1) – 0 – (5 – 1)
≤ 20 = (N–1) – 0 – (5–1)
≥ 10 = N – 1 – 4
≤ 20 = N – 1 – 4
≥ 10 = N – 5
≤ 20 = N – 5
N ≥ 15
N ≤ 25 15 ≤ N ≤ 25
46
Lampiran 3 Penghitungan Dosis Ekstrak Daun Zaitun 1. Pemberian esktrak daun zaitun Berat mencit berkisar anatara 35-45gram, diambil nilai tengah yaitu 40 gram. a. Dosis 100mg/KgBB (x) 100𝑚𝑔 100𝑚𝑔 1𝑚𝑔 = = 1𝑘𝑔 1000𝑔 10𝑔 1𝑚𝑔 𝑥 = 10𝑔 40𝑔 10𝑥𝑔 = 40𝑚𝑔 𝑥=
40𝑚𝑔 10𝑔
𝑥 = 4𝑚𝑔 b. Dosis 200mg/KgBB (y) 200𝑚𝑔 200𝑚𝑔 2𝑚𝑔 = = 1𝑘𝑔 1000𝑔 10𝑔 2𝑚𝑔 𝑦 = 10𝑔 40𝑔 10𝑦𝑔 = 80𝑚𝑔 𝑦=
80𝑚𝑔 10𝑔
𝑦 = 8𝑚𝑔
47
Lampiran 4 Dokumentasi Penelitian
Gambar 7.2 Aklimatisasi hewan coba
Gambar 7.3 Pemberian ekstrak daun zaitun oral
Gambar 7.4 Nebulisasi hewan coba
48
(Lanjutan)
Gambar 7.5 Pembiusan hewan coba
Gambar 7.6 Pengambilan jaringan hewan coba
Gambar 7.7 Penyimpanan jaringan hewan coba pada larutan formalin
49
(Lanjutan)
Gambar 7.8 Timbangan
50
Lampiran 5 Hasil Uji Statistik Tabel 6.1 Uji Normalitas Diameter Pulpa Putih Limpa Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Perlakuan
Statistic
df
Shapiro-Wilk
Sig.
Statistic
df
Sig.
Diameter_P
Kontrol
.284
3
.
.933
3
.500
ulpa_Putih
Zaitun100+OVA
.291
3
.
.925
3
.468
Zaitun200+OVA
.176
3
.
1.000
3
.976
Zaitun100+Zaitun
.358
3
.
.813
3
.146
Zaitun200+Zaitun
.214
3
.
.990
3
.804
a. Lilliefors Significance Correction
Tabel 6.2 Uji Homogenitas Diameter Pulpa Putih Limpa
Test of Homogeneity of Variances Dimeter_Pulpa_Putih Levene Statistic
df1
1.599
df2 4
Sig. 10
.249
Tabel 6.3 Uji Normalitas Berat Limpa Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Perlakuan Berat_Limpa KONTROL
Statistic
df
Shapiro-Wilk
Sig.
Statistic
df
Sig.
.269
3
.
.949
3
.567
ZAITUN100+OVA
.292
3
.
.923
3
.463
ZAITUN200+OVA
.219
3
.
.987
3
.780
ZAITUN100+ZAITUN
.175
3
.
1.000
3
1.000
ZAITUN200+ZAITUN
.219
3
.
.987
3
.780
a. Lilliefors Significance Correction
51
Tabel 6.4 Uji Homogenitas Berat Limpa Test of Homogeneity of Variances Berat_Limpa Levene Statistic
df1
1.043
df2 4
Sig. 10
.433
Tabel 6.5 Uji Oneway ANOVA Diamater Pulpa Putih Limpa ANOVA Diameter_Pulpa_Putih Sum of Squares Between Groups
df
Mean Square
3677.955
4
919.489
Within Groups
11299.557
10
1129.956
Total
14977.513
14
F
Sig. .814
.544
Tabel 6.6 Uji Oneway ANOVA Berat Limpa ANOVA Berat_Limpa Sum of Squares
df
Mean Square
Between Groups
.034
4
.008
Within Groups
.016
10
.002
Total
.049
14
F 5.290
Sig. .015
52
Tabel 6.7 Uji post hoc LSD Berat Limpa Multiple Comparisons Dependent Variable: Berat_Limpa LSD 95% Confidence Interval
Mean (I) Perlakuan (J) Perlakuan
Difference (I-J)
Std. Error
ZAITUN100+OVA
-.01667
.03252
.619
-.0891
.0558
ZAITUN200+OVA
-.07000
.03252
.057
-.1425
.0025
ZAITUN100+ZAITUN
.07667*
.03252
.040
.0042
.1491
ZAITUN200+ZAITUN
-.01667
.03252
.619
-.0891
.0558
.01667
.03252
.619
-.0558
.0891
ZAITUN200+OVA
-.05333
.03252
.132
-.1258
.0191
ZAITUN100+ZAITUN
.09333*
.03252
.017
.0209
.1658
ZAITUN200+ZAITUN
.00000
.03252
1.000
-.0725
.0725
ZAITUN200+ KONTROL
.07000
.03252
.057
-.0025
.1425
OVA
ZAITUN100+OVA
.05333
.03252
.132
-.0191
.1258
ZAITUN100+ZAITUN
.14667*
.03252
.001
.0742
.2191
ZAITUN200+ZAITUN
.05333
.03252
.132
-.0191
.1258
ZAITUN100+ KONTROL
-.07667*
.03252
.040
-.1491
-.0042
ZAITUN
ZAITUN100+OVA
-.09333*
.03252
.017
-.1658
-.0209
ZAITUN200+OVA
-.14667*
.03252
.001
-.2191
-.0742
ZAITUN200+ZAITUN
-.09333*
.03252
.017
-.1658
-.0209
ZAITUN200+ KONTROL
.01667
.03252
.619
-.0558
.0891
ZAITUN
ZAITUN100+OVA
.00000
.03252
1.000
-.0725
.0725
ZAITUN200+OVA
-.05333
.03252
.132
-.1258
.0191
ZAITUN100+ZAITUN
.09333*
.03252
.017
.0209
.1658
KONTROL
ZAITUN100+ KONTROL OVA
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
Sig.
Lower Bound
Upper Bound
53
Riwayat Penulis Nama
: Latifatul Bariyah
NIM
: 1113103000080
Tempat, Tanggal Lahir
: Tuban, 1 Januari 1995
Agama
: Islam
Alamat
: Jalan Tanjung 820 RT/RW 002/002 Winong, Margomulyo, Kerek, Tuban, Jawa Timur
Email
:
[email protected]
Riwayat Pendidikan 1999-2001
: RA Salafiyah Margomulyo, Kerek, Tuban
2001-2007
: MI Salafiyah Margomulyo, Kerek, Tuban
2007-2010
: MTsN Denanyar Jombang
2010-2013
: MAN Denanyar Jombang
2013-sekarang
: Program Studi Kedokteran dan Profesi Dokter Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta
