LAPORAN AKHIR PENELITIAN

1585 'UMU LAPORAN AKHIR PENELITIAN

Rekayasa Struktur Indola Sebagai

Anti-!Jfycobacteriu1n tuberculosis Baru

[Antimycobacterial Activities of Indole Derivatives]

Nama Penyusun Laporan: 1.

Arif Fadlan, S.Si., M.Si.

2.

Lanny Hartanti, S.Si., M.Si.

3. Wahyu Hidayatiningsih, S.Si., M.Kes.

lnstitut Teknologi Scpuluh Nopember

Kampus ITS Sulwlilo Surabaya 60111

2012

LAPORAN AKHIR PENELITIAN

Rekayasa Struktur lndola Sebagai Anti-Mycobacterium tuberculosis Baru [Antimycobacterial Activities of Indole Derivatives]

L----- --

Nama Penyusun Laporan: 1.

Arif Fadlan, S.Si., M.Si.

2. Lanny Hartanti, S.Si., M.Si. 3. Wahyu Hidayatiningsih, S.Si., M.Kes.

Institut Teknologi Sepuluh Nopember Kampus ITS Sukolilo Surabaya 60111

2012

lAPORAN AKHIR RISBIN IPTEKDOK 2011

Kata Pengantar bismillahirrahmaanirrahiim Puji syukur kehadirat Allah SWT, hanya dengan rahmat dan ridho-Nya laporan akhir pelaksanaan penelitian Risbin lptekdok tahun anggaran

2011

yang be�udul: "Rekayasa Struktur lndola Sebagai Anti

Myc obac terium tuberculosis Baru" dapat terselesaikan.

Pada kesempatan ini ucapan terima kasih yang sebesar-besamya disampaikan kepada Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kementerian Kesehatan Republik Indonesia yang telah memberikan dana penelitian, Jurusan Kimia FMIPA ITS atas kesempatan dan fasilitas selama penelitian, dan lnstitut of Tropical Disease Universitas Airlangga Surabaya. Demikian prakata yang dapat diberikan, semoga hasil penelitian ini dapat memberikan manfaat yang besar.

Surabaya, Februari 2012

..

Laporan Akhir Risbin /ptekdok 2011 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

2

LAPORAN AKHIR RISBIN IPTEKDOK 2011

Ringkasan Eksekutif Oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) telah berhasil disintesis. Oksilidola (7a) diperoleh dengan rendemen 88 % dari reaksi antara indola (2) dengan isatin, sedangkan oksindola (7b) diperoleh dari reaksi antara N-metilindola dengan isatin dengan rendemen 86 %. Reaksi antara indola (2) dengan 5-fluoroisatin menghasilkan oksindola (7c) dengan rendemen 92 %, sementara reaksi antara N-metilindola dengan

5-

fluoroisatin menghasilkan oksindola (7d) dengan rendemen 92 %, dan oksindola (7e) dihasilkan dari reaksi antara N-metilindola dengan 5-nitroisatin dengan rendemen 99 %. Struktur oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) ditetapkan dengan spektrometer NMR dan massa. Oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) menunjukkan aktivitas

anti-Mycobacterium tuberculosis

dengan nilai konsentrasi hambat minimal (MIC)

sebesar 500 �g/ml.

Laporan Akhir Risbin /ptekdok 2011 Badan Pene/iit an dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

3


Abstrak Tuberkulosis (TBC), penyakit menular yang disebabkan oleh Mycobacterium tuberculosis, merupakan penyebab kematian nomor tiga di Indonesia, negara ketiga terbesar dengan masalah TBC di dunia, setelah penyakit kardiovaskular dan penyakit saluran pemafasan, dan penyebab kematian nomor satu pada golongan penyakit infeksi/menular. First-line anti-TBC telah bertahun-tahun dimanfaatkan sebagai anti TBC, tetapi sebagian penderita telah menunjukkan resistensi terhadap first-line anti TBC ini. Second-line anti-TBC telah diluncurkan; tetapi kurang efektif, terlalu toksik, serta menunjukkan efek samping yang serius. Senyawa-senyawa heterosiklik dengan cincin indola pada strukturnya menunjukkan aktivitas in vitro yang baik melawan M. tuberculosis. 3,3'-Bis(indol-3-il)oksindola antibiotika terhadap E.

(1) menunjukkan aktivitas

Coli, Bacillus subtilis, dan Staphylococcus aureus, dan mempunyai aktivitas

antikanker. Penelitian pendahuluan yang dilakukan menunjukkan senyawa baru turunan indola

(6)

diketahui aktif sebagai anti-Mycobacterium tuberculosis H37Rv. Sebagai rangkaian dari penelitian tersebut, penelitian yang telah dilaksanakan bermaksud mensintesis 3 turunan indola

(7a-e)

dalam upaya

mengoptimasi bioaktivitas turunan indola sebagai anti-Mycobacterium tuberculosis. Oksindola dan turunannya nitro-isatin dengan indola

(2)

(7a,-e)

disintesis dengan mereaksikan antara isatin atau 5-fluoro-/5-

atau N-metilindola dalam pelarut air atau metanol dengan menggunakan

katalis asam. Struktur oksindola dan turunannya

(7a,b,c,d,e)

ditetapkan dengan spektrometer NMR dan

massa. Pengujian aktivitas anti-M. tuberculosis dilakukan dengan uji kepekaan obat (drug sensitivity test, DST) menggunakan media konvensional Lowenstein-Jeensen (LJ) dan tabung indikator pertumbuhan mikobakteri, mycobacteria growth indicator tube (MGIT) dengan menggunakan alat pembaca BACTEC MicroMGIT. Oksindola

(7a-e) berturut-turut

diperoleh dengan rendemen

NMR dan massa menetapkan struktur oksindola dan turunannya

(7a,b,c,d,e)

88, 86,

92, 92, dan 99

(7a,b,c,d,e).

%.

Spektrum

Oksindola dan turunannya

menunjukkan aktivitas anti-Mycobacterium tuberculosis dengan nilai konsentrasi hambat

minimal (MIG) sebesar 500 �g/ml.

Laporan Akhir Risbin lptekdok 2011 Badan Penelii t an dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

4


DaftarAnggota Tim Peneliti 1. Peneliti Utama

Nama

: Arif Fadlan

Gelar

:S.Si., M.Si.

Tempat Lahir

: Lamongan

Tanggal Lahir

: 09 Agustus 1981

Kelamin

: Laki-laki

Jabatan

: Dosen

Bagian/Divisi

: Jurusan Kimia FMIPA

lnstitusi Asal

: lnstitut Teknologi Sepuluh Nopember

Alamat

: Jurusan Kimia FMIPA Kampus ITS Sukolilo Surabaya 601 1 1

Telepon/Faksimie

: 031-5943353/031-5928314

Alamatemail

: [email protected]

Telepon Rumah Telepon Genggam

: 0815 5325 8424

Kualifikasi Akademik : Tahun

lnstitusi

Gelar

2001

lnstitut Teknologi Sepuluh Nopember

S.Si

2006

lnstitut Teknologi Sepuluh Nopember

M.Si.

2. Peneliti 1 •

Nama

: Lanny Hartanti

Gelar

: S.Si., M.Si.

Tempat Lahir

: Surabaya

Tanggal Lahir

: 22 Juni 1974

Kelamin

: Perempuan

Jabatan

: Dosen

Bagian/Divisi

: Fakultas Farmasi

5

Laporan Akhir Risbin lptekdok 2011 &dan Penelitian dan Peng·embangan Kesahatan Kemankes Rl

-.-

---

�

_. pw H M ·

lnstitusi Asal

: Unika Widya Mandala

Alamat

: Fakultas Farmasi Unika Widya Mandala Surabaya,

Telepon/Faksimie

: 031 -5678478/031-

Aiamat email

: [email protected]

Jl.

Dinoyo 42-44 Surabaya

Telepon Rumah Telepon Genggam

: 081 7397 819

Kualifikasi Akademik :

3.

Tahun

lnstitusi

Gelar

1996

Universitas Brawijaya

S.Si

2000

Universitas Brawijaya

M.Si.

Peneliti 2 Nama

: Wahyu Hidayatiningsih

Ge!ar

: S.Si., M.Kes.

Tempat Lahir .

: Surabaya

Tanggal Lahir

: 28 Februari 1975

Kelamin

: Perempuan

Jabatan

: Peneliti

Bagian/Divisi

: lnstitut of Tropical Disease

lnstitusi Asal

: Universitas Airlangga

Alamat

: Jurusan Kimia FMIPA Kampus C Unair Mulyorejo Surabaya 60115

Telepon/Faksimie

: 031 -5992445/031 -5992445

Alamat email

: [email protected]

Telepon Rumah

: 031-376 9562

Telepon Genggam

: 0856 3190 303

Kualifikasi Akademik: Tahun

lnstitusi

Gelar

2006

Universitas Airlangga

S.Si

2008

Universitas Airlangga

M.Kes.

Laporan Akhir Risbin lptekdok 2011 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

6


Daftar lsi HALAMAN JUDUL KATA PENGANTAR

2

RINGKASAN EKSEKUTIF

3

ABSTRAK

4

DAFTARANGGOTA TIM PENELITI

5

DAFTAR ISI

7

DAFTAR GAMBAR

9

BAB l PENDAHULUAN

10

BAB II TUJUAN DAN MAN FAAT

12

BAB Ill METODE 111.1 Peralatan dan Bahan 111.1.1 Peralatan

13

111.1.2 Bahan

13

111.2 Prosedur Penelitian 111.2.1 Sintesis N-Metilindola

14

111.2.2 Sintesis 3,3'-Bis{indola-3-il}oksindola (7a)

14

111.2.3 Sintesis 3,3'-Bis(N-metilindola-3-il}oksindola (7b)

14

111.2.4 Sintesis 3,3'-Bis{indola-3-il}-5-fluorooksindola (7c)

15

111.2.5 Sintesis 3,3'-Bis{N-metilindola-3-il}-5-fluorooksindola (7d)

15

111.2.6 Sintesis 3,3'-Bis{N-metilindola-3-il)-5-nitrooksindola (7e)

15

111.2.7 Uji bioaktivitas oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) terhadap

16

M. tuberculosis

BAB IV HASIL IV.1 Sintesis 3,3'-Bis{indola-3-il}oksindola (7a)

laporan Akhir Risbin lptekdok 2011 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes R/

18

7

IV.2 Sintesis 3,3' -Bis(N-metilindola-3-il)oksindola (7b)

19

IV.3 Sintesis 3,3'-Bis(indola-3-il)-5-fluorooksindola (7c)

20

IV.4 Sintesis 3,3'-Bis(N-metilindola-3-il)-5-fluorooksindola (7d)

23

IV.5 Sintesis 3,3'-Bis(N-metilindola-3-il)-5-nitrooksindola (7e)

24

IV.6 Uji bioaktivitas oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) terhadap

26

M. tuberculosis

BAB V PEMBAHASAN V.1 Sintesis 3,3'-Bis(indola-3-il)oksindola (7a)

28

V.2 Sintesis 3,3'-Bis(N-metilindola-3-il)oksindola (7b)

28

V.3 Sintesis 3,3'-Bis(indola-3-il)-5-fluorooksindola (7c)

29

V.4 Sintesis 3,3'-Bis(N-metilindola-3-il)-5-fluorooksindola (7d)

29

V.5 Sintesis 3,3'-Bis(N-metilindola-3-il)-5-nitrooksindola (7e)

30

V.6 Uji bioaktivitas oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) terhadap

30

M. tuberculosis

BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN Vl.1 Kesimpulan

31

Vl.2 Saran

31

UCAPAN TERIMA KASIH

32

OAFTAR PUSTAKA

33

LEMBAR PENGESAHAN

36

LAMPIRAN SK PENELITIAN

37

Laporan Akhir Risbin Jptekdok 201 1 Badan Pene/itian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

8


Daftar Gambar Gambar4.1

Spektrum massa 3,3'�bis(indol�3-il)oksindola (7a)

18

Gambar4. 2

Spektrum 1 H�NMR 3,3'�bis(indol�3�il)oksindola (7a)

19

Gambar4.3

Spektrum 1H�NMR 3,3'-bis(1-metilindol-3-il)oksindola (7b)

20

Gambar4.4

Spektrum massa 3,3'-bis(1-metilindol-3-il)oksindola (7b)

20

Gambar4.5

Spektrum 1H-NMR 3,3'-bis(indol-3-il)-5-fluorooksindola (7c)

21

Gambar4.6

Spektrum 13C-NMR 3,3'-bis(indol-3-il)-5-fluorooksindola (7c)

22

Gambar4.7

Spektrum massa 3,3'-bis(1-metilindol-3-il)-5-fluorooksindola (7d)

23

Gambar4.8

Spektrum 1 H�NMR 3,3' -bis(1-metilindol-3-il) -5-fluorooksindola (7d)

24

Gambar4.9

Spektrum 1H-NMR 3,3'-Bis(N-metilindol-3-il)-5-nitrooksindola (7e)

24

Gambar4.10

Spektrum Massa 3,3'-Bis(N-metilindol-3-il)-5-nitrooksindola (7e)

25

Gambar4.11

Hasil Uji oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) pada konsentrasi 200

26

�g/ml terhadap M.tuberculos is H37Rv dengan Media MGIT

,-_

v•

Laporan Akhir Risbin lptekdok 2011 &dan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

9

lAPORAN AKHIR RISBIN IPTEKDOK 2011

BA BI PENDAHULUAN Tuberkulosis (TBC) merupakan penyakit menular yang disebabkan oleh Mycobacterium tuberculosis. Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) pada tahun 2005 memperkirakan terdapat 8,8 juta penderita TBC dan 1,6 diantaranya mengalami kematian. TBC merupakan penyebab kematian nomor tiga di Indonesia setelah penyakit kardiovaskular dan penyakit saluran pemafasan, dan penyebab kematian nomor satu pada golongan penyakit infeksi/menular. Indonesia sendiri merupakan negara ketiga terbesar dengan masalah TBC di dunia dengan angka kematian satu orang tiap lima menit. Pada tahun 2004, tercatat 2 1 1 .753 kasus baru TBC di Indonesia dan diperkirakan sekitar 300 kematian te�adi setiap hari akibat TBC. Kasus baru TBC di Indonesia bertambah seperempat juta per tahun (Castagnola

et a/.,

2008;

Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2002; Nikmawati et at., 2006). Rifampicin (RIF), isoniazid (INH), ethambutol (EMB), streptomicin, pirazinamida (PZA) telah bertahun-tahun dimanfaatkan sebagai anti TBC, tetapi sebagian penderita telah menunjukkan resistensi rerhadap

first-line

anti TBC ini. Second-line anti TBC berupa etionamida, para amino salisilat (PAS),

sikloserina, amikacin, kanamicin dan kapreomicin telah diluncurkan, tetapi kurang efektif, terlalu toksik, serta menunjukkan efek samping yang serius (Rivers dan Manchera, 2008; Sriram eta!., 2009). Akibatnya senyawa-senyawa anti TBC baru yang lebih baik sangat dibutuhkan. Manadomanzamina A

(1a) dan B (1b) yang diisolasi dari span

Acanthostrongy/ophora

dengan

cincin indola (2) pada strukturnya menunjukkan aktivitas in vitro yang baik melawan Mycobacterium tuberculosis dengan nilai konsentrasi penghambatan minimum (MIC) masing-masing 1,9 dan 1,5 �g/ mL (Allin

et

at., 2007). 2-Aril-3,4-dihidro-2H-tieno[3,2-b]indola (3) dengan cincin indola (2) pada struktumya

dilaporkan Karthikeyan et a/. (2009) menunjukkan aktivitas in vitro terhadap M. tuberculosis dengan MIC 0,4 �g/ mL yang lebih tinggi daripada isoniazid dengan MIC 0,04 �g/ ml dan lebih rendah daripada pirazinamida dengan MIC 6,25 �g/ ml.

Laporan Akhir Risbin /ptekdok 2011 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

10

� 8 y Ar �/ x� )-1 �N HN (2)

H

R' N' NH N-{ 0 (S) a R = 4-N02Ph b R= Ph

(3)

�

R2

b:-{�'J� N s ('-tn-N NH �1

a RR=H =Me

H

'>-===( v

(4) b

S

Triazinoindola-benzimidazolon (4) dan triflorometoksi-1 H-indola-2,3-dion 3-tiosemikar-bazon (5) yang juga memiliki cincin indola (2) pada strukturnya menunjukkan aktivitas terhadap tuberculosis.

Mycobacterium

Senyawa (4a) dengan gugus metil terikat nitrogen unit indola mempunyai ICso sebesar 0,5

JJg/mL yang lebih rendah dibanding dengan senyawa (4b) dengan ICso 3,3 �g/ml (Sivendran et a/., 2010). Senyawa (5a) dengan substituent gugus nitro mempunyai ICso sebesar 3,77 �g/ml yang lebih rendah dibanding dengan senyawa (5b) tanpa gugus nitro dengan ICso 14,21 �g/ml (Guzel et al., 2008). Canpolat dan Kaya (2005}, Mendonca (2005), dan Cerchiaro dan Ferreira (2006) mendapatkan bahwa aktivitas antimikroba semakin tinggi dan luas dengan adanya halogen pada cincin indola. Turunan-turunan indola tersebut di atas dengan struktur yang bervariatif telah menunjukkan bioaktivitas terhadap tuberculosis

Mycobacterium

sehingga memberikan inspirasi untuk mensintesis turunan-turunan indola yang sangat

dimungkinkan aktif terhadap

Mycobacterium

tuberculosis Penelitian pendahuluan yang dilakukan .

menunjukkan senyawa baru tunman indola (6) diketahui aktif sebagai anti

Mycobacterium tuberculosis

H37Rv (Setyowati, 201 0). Sebagai rangkaian dari penelitian tersebut di atas, maka penelitian yang diusulkan bermaksud mensintesis 3 tunman indola (1a·e) dalam upaya mengoptimasi bioaktivitas turunan indola sebagai anti-Mycoba cterium tuberculosis.

aX=H bX=H

X cX=F dX=F

R=H R=Me R=H

R=Me eX= N02 R =Me


11


BAB II

TUJUAN DAN MANFAAT PENELITIA N Penelitian ini sangat penting untuk pengembangan ilmu pengetahua·n dan teknologi, khususnya

sebagai upaya untuk mendapatkan kelompok senyawa baru dengan kerangka struktur indola sebagai anti Mycobacterium

tuberculosis.

Penelitian bermaksud mensintesis oksindola dan turunannya (7a·e) untuk

mengungkap pengaruh unit oksindola, atom fluorin dan gugus nitro pada posisi C-5 unit oksindola, dan gugus metil pada posisi N-oksindola terhadap aktivitas anti-M. tuberculosis.

l.B{XJran Akhir Risbin /ptekdok 2011 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

12

LAPORAN AKHIR RISBIN IPTEKDOK 201 1

BA B Ill METOD E Penelitian yang dilaksanakan mencakup tiga hal yaitu sintesis oksinaola dan turunannya (7a·e), karakterisasi struktur dan sifat fisik&-kimia hasil sintesis, dan uji aktivitas anti Mycobacterium -

tuberculosis

terhadap hasil sintesis. Oksindola dan turunannya berupa 3,3'-bis(indol-3-il)oksindola (7a), 3,3'-bis(N metilindola-3-il)oksindola (7b), 3,3'-bis(indol-3-il)-5-fluoro-oksindola (7c), 3,3'-bis(N-metilindola-3-il)-5fluorooksindola (7d), dan 3,3'-bis(N-metilindola-3-il)-5-nitrooksindola (7e) telah berhasil disintesis dan dikarakterisasi dengan spektroskopi 1H NMR dan spektroskopi massa. m.1.

Peralatan dan Bahan

W. 1.1 Peralatan Peralatan yang digunakan adalah hotplate stirrer Thermoline Cimarec, magnetic stirrer bar, evaporator

BOchi Rotavapor R-114,

rotary evaporator

rotary

Eyela N-1 001, neraca analitis Sartorius CP 2248,

termometer, gelas ukur, labu tentukur, beaker glass, corong pisah, corong, corong Buchner, portable pump GAST, kertas saring, erlenmeyer, pipet mikro, pipet tetes, pipet volum, pipet ukur, labu alas bulat. kaca arioji, spatula, pinset,

bent,

kondenser, statif, klem, bejana pengembang untuk kromatografi lapis tipis

(KLT), plat KLT aluminium silika gel 60 GF254, kertas saring Whatman No. 41, vortex mixer, inkubator, pipet steril Falcon 7522, tabung steril (diameter 16,5 mm, tinggi 128 mm), pipet transfer steril Falcon 7575, melting point apparatus

Fisher-Johns, lampu UV (A

=

254 dan 365 nm), spektrometer FT-NMR JNM

ECA300 500 MHz, spektrometer massa Bruker HCT (ESI-Ion Trap}, dan kromatografi gas Agilent 6890 series Plus dengan Agilent 5973 N Mass Selective Detector,

BACTEC MicroMGIT.

m.1.2 Bahan ..

Bahan-bahan yang digunakan adalah indola (Merck, 1 .2145980), isatin (Aldrich, 114618), metanol (Merck 1 .06009}, dimetil sulfoksida anhidrat (Merck 8.02912), magnesium sulfat anhidrat (Merck 1.06067), asam sulfat (Merck 1.0073), dimeti.lsulfat (Merck, 8.0307 1), etil asetat (Merck 1.09623), n-heksana (Merck 1.04367), diklorometana (Merck, 1.06050}, aquabides steril, silikagel (Merck 1 .07733), silikagel (Merck 1.07730), silika gel pengering, akuades,


H31Rv strain ATCC 27294,

desinfektan tuberkolosidal, BBL Middlebrook 7H9 Broth, MGIT OADC, media Lowenstein-Jeensen (LJ), dan media mycobacteria growth indicator tube (MGIT).

..aporan Akhir Risbin Jptekdok 2011 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

13

a2.

Prosedur Penelitlan

a2.1

Sintesls N·Metilindola Sintesis N-Metilindola dilakukan dengan mengadaptasi prosedur sintesis N-metilpirola yang

�ukan oleh Rondriguez (1 989). Larutan natrium hidroksida (0,16 gram; · 4,00 mmol) dalam 10 ml c!metilsulfoksida ditambahkan pada larutan indola {0, 12 gram; 1,02 mmol) dalam 10 ml dimetilsulfoksida. �puran selanjutnya diaduk selama 60 menit, dan ditambahkan dimetil sulfat {0,38 ml; 4,00 mmol). Campuran reaksi yang berjalan diaduk lebih lanjut dan kemudian dimonitor dengan KLT. Setelah reaksi beljalan tuntas, hasil reaksi ditambah 100 ml akuades dan diekstrak dengan diklorometana (5x20 ml). Ekstrak kemudian dikeringkan dengan magnesium sulfat anhidrat, diuapkan dengan rotary evaporator sehingga diperoleh N-metilindola yang selanjutnya diuji kemumiannya dengan kromatografi lapis tipis {KLD. ditimbang, dan diidentifikasi dengan spektroskopi NMR.

11.2.2 Sintesis 3,3'-Bis(indola-3-il)oksindola (7a) Sintesis oksindola (7a) dilakukan dengan mengadaptasi prosedur sintesis 3,3'-bis(indol-3-il)-5kk:>rooksindola yang dilaporkan Santoso et a/ (2007). Indo! a (0, 1 0 gram; 0,85 mmol) dan isatin (0,063 gram; 43 mmol} masing-masing dilarutkan dalam 30 mililiter air pada suhu 45 oc. Kedua larutan dimasukkan 3alam labu alas bulat, ditambah setetes asam sulfat pekat, dan diaduk pada suhu 45 oc selama 120 menit. -lasil reaksi kemudian didinginkan sehingga mencapai suhu kamar, dan ditambahkan air ding in sebanyak 100 mililiter. Endapan yang terbentuk kemudian disaring, dicuci dengan air dingin, dikeringkan dalam oesikator dan ditimbang. Hasil sintesis selanjutnya diuji kemumiannya dengan kromatografi lapis tipis ii
dipanaskan dalam penangas minyak bertemperatur 58-64 oc selama 120 menit. Campuran

selanjutnya didinginkan pada temperatur kamar, lalu didinginkan dalam penangas es. Endapan putih yang !efbentuk kemudian disaring dengan kertas saring, dicuci dengan air dingin, dan dikeringkan dalam desikator. Hasil sintesis selanjutnya ditimbang, diukur titik leleh dan diidentifikasi dengan spektroskopi 1H NMR dan massa.

Laporan Ak.hir Risbin Jptekdok 2011 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

14

a2.4 Sintesis 3,3'·Bis(indola·3-il)-5·fluorooksindola (7c) Sintesis oksindola (7c) dilakukan dengan mengadaptasi prosedur sintesis 3,3'-bis(indol-3l)>ksindola (7a). lndola (0,081 gram; 0,69 mmol) dan 5-flouroisatin (0,057 gram; 0,35 mmol) masing masing dilarutkan dalam 30 mililiter dan 50 mililiter air pada suhu 45 °C. Kedua larutan dimasukkan dalam labu alas bulat, ditambahkan setetes katalis asam sulfat pekat dan diaduk lebih lanjut pada suhu 45 oc selama 120 menit. Hasil reaksi kemudian didinginkan sehingga mencapai suhu kamar, dan ditambahkan atr dingin sebanyak 100 mililiter. Endapan yang terbentuk kemudian disaring, dicuci dengan air dingin, �keringkan

dalam desikator dan ditimbang. Hasil sintesis selanjutnya diuji kemurniannya dengan

kromatografi lapis tipis (KLT), diukur titik lelehnya, diidentifikasi dengan spektroskopi 1 H-NMR dan 13CMR. 11.2.5 Sintesis 3,3'·Bis(N·metilindola·3·il)·5-fluorooksindola (7d) Sintesis oksindola (7d) dilakukan dengan mengadaptasi prosedur sintesis 3,3'-bis(indol-3l):lksindola (7a). N-Metilindola (0, 14 ml; 1,14 mmol) dilarutkan dalam 150 mililiter metanol: air (1 :2) pada suhu 45 oc. 5-Fiouroisatin (0,094 gram; 0,57 mmol) dilarutkan dalam 50 mi!iliter air pada suhu 45 oc. Kedua larutan di�asukkan dalam labu alas bulat, ditambahkan setetes katalis asam sulfat pekat dan d'iaduk pada suhu 45 oc selama 120 menit. Hasil reaksi kemudian didinginkan sehingga mencapai suhu kamar, dan ditambahkan air dingin sebanyak 100 mililiter. Endapan yang terbentuk kemudian disaring, :::1cuci dengan air dingin, dikeringkan dalam desikator dan ditimbang. Hasil sintesis selanjutnya diuji kemurniannya dengan kromatografi lapis tipis (KLT), diukur titik lelehnya, diidentifikasi dengan spektroskopi 1H-NMR, dan massa. 18.2.6

Sintesis 3,3'·Bis(N·metilindola·3·il)-5-nitrooksindola (7e) Sintesis oksindola dilakukan dengan mengadaptasi prosedur sintesis 3-(1H-indol-3-il)-3,3'

..

biindolin-2-on yang dilaporkan Santoso et al. (2007). N-metilindola (0,39 gram; 2,97 mmol) dan 5nitroisatin (0,29 gram; 1 ,51 mmol) dalam 10 mililiter metanol. Hasi! sintesis selanjutnya diuji kemurniannya dengan kromatografi lapis tipis (KLT), diukur titik lelehnya dan diidentifikasi dengan spektroskopi 1 H-NMR dan massa.

l.eporan Akhir Risbin lptekdok 2011 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

a

15

R2.7 Uji Bioaktivitas oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) terhadap M. tuberculosis Pengujian aktivitas anti-M. JST)

tuberculosis

dilakukan dengan uji kepekaan obat (drug

sensitivity test,

menggunakan media konvensional Lowenstein-Jeensen (LJ) dan tabung indikator pertumbuhan

-:ik:obakteri,

mycobacteria growth indicator tube

(MGIT) dengan menggunal'
roMGIT. M. tuberculosis H37Rv disiapkan dengan mengambil koloni bakteri yang terdapat pada media :adat. Koloni bakteri selanjutnya dimasukkan ke dalam tabung steril (diameter 16,5 mm, tinggi 128 mm) J009 berisi 5 ml BBL Middlebrook 7H9 Broth dan 8-10 glass beads dengan kekeruhan suspensi 1

' Farland atau setara dengan 1Q8 CFU/ml. Suspensi divortex selama 2-3 manit untuk memecahkan .mk>ni yang besar, selanjutnya didiamkan selama 20 menit sehingga diperoleh cairan supernatan. Cairan 3Upernatan selanjutnya diambil sebanyak 0,5 mL (hindari berpindahnya endapan) dan dimasukkan ke .:.alam tabung steril (diameter 16,5 mm, tinggi 128 mm) yang berisi 4,5 ml BBL Middlebrook 7H9 Broth 'I

sehingga diperoleh kekeruhan suspensi sebesar 107 CFU/ml. Pengenceran dilakukan lagi sampai dperoleh kekeruhan suspensi sebesar 0,5.1 06 CFU/ml. Senyawa uji oksindola dan turunannya (1a,b,c,d,e) disiapkan dengan konsentrasi masing-masing 1 000, 500, 200, 100, 50, 25, 12,5 IJQ/ml dalam r:elarut DMSO 20 % (dalam aquabidest steril). Uji dengqn media MGIT diawali dengan memberi label pada setiap tabung MGIT yang telah berisi ..;. ml BBL Middlebrook 7H9 Broth, tabung pertama MGIT kontrol positif, tabung kedua MGIT kontrol ::egatif, tabung ketiga MGIT 1 000, tabung keempat MGIT 500, tabung kelima MGIT 200, tabung keenam GIT 100, dan tabung ketujuh MGIT 50, tabung kedelapan MGIT 25, tabung kesembilan MGIT 12,5. Selanjutnya pada masing-masing tabung ditambahkan 0,5 ml MGIT OADC secara aseptik. Suspensi M. ruberculosis

sebanyak 100 I JL dipipet secara aseptik dan dimasukkan ke dalam tabung MGIT kontrol

positif, sementara 100 I JL senyawa uji dengan konsentrasi 200 IJQ/ml dimasukkan pada tabung MGIT kontrol negatif. Selanjutnya senyawa uji dengan konsentrasi berturut-turut 1000, 500, 200, 100, 50, 25, 2,5 I Jg/mL dimasukkan kedalam tabung yang sesuai sebanyak 100 !Jl. Suspensi bakteri dengan kekeruhan 0,5.106 CFU/mL sebanyak 0,5 mL dimasukkan ke dalam setiap tabung MGIT. Tabung

"

selanjutnya ditutup rapat, dikocok, bag ian luar tabung dibersihkan dengan desinfektan tuberkulosidal, dan diinkubasi pada temperatur 3rC. Pengamatan dilakukan dengan mengamati tabung MGIT menggunakan aat pembaca BACTEC MicroMGIT. Pertumbuhan bakteri dapat dilihat dari adanya cahaya fluorosensi pada skala yang bersesuaian (1 4-20) akibat berkurangnya kadar oksigen di dalam tabung yang diakibatkan oleh pertumbuhan M. tuberculosis H31Rv. Pengamatan dilakukan setiap hari mulai hari ke-2 sampai hari ke-14.

... � ,.

l.aporan Akhir Risbin lptekdok 2011 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

16

Uji dengan media LJ dilakukan dengan meneteskan masing-masing 100 �L suspensi bakteri dalam tiap tabung MGIT uji pada media Middlebrook 7H1 0 dan media LJ. Botol masing-masing media selanjutnya mtutup dengan udak terlalu rapat. Bahan pemeriksaan disebar secara merata di atas media dengan cara menggerak-gerakkan botol. Botol selanjutnya diletakkan pada rak dengan kemiringan 30° selama

24 jam

dalam inkubator pada suhu 37°C. Tutup botol dikencangkan dan botol diletakkan pada rak dengan posisi regak dan diinkubasi lebih lanjut. Pertumbuhan bakteri diamati tiap minggu dan pengamatan pertumbuhan oloni dilakukan pada hari ke-30 . Uji dinyatakan negatif jika tidak ada pertumbuhan

Mycobacterium

tuberculosis H37Rv yang ditandai dengan tidak adanya perubahan wama media .

..

,,

la{x;ran AkhirRisbin /ptekdok 2011 Badan Penelitian dan Pengembangan Keseh8tan Kemenkes Rl

17

ORAN AKHIR RISBlN rPTEKOO 201 I2AB IV HA SIL

.1

Sintesis 3,3'-Bis(ni dol-3-il)oksindola (7a) Sintesis 3,3'-bis(indol-3-il)oksindola (7a) dilakukan pada suhu 45°C dengan

asam

sulfat pekat

salaQai katalis. Reaksi dilakukan selama 120 menit dan pemantauan dilakukan setiap 15 menit dengan komatografi lapis tipis (KLT). Hasil reaksi yang terbentuk ditambah air dingin dan endapan putih yang .31lentuk disaring, dicuci dengan air untuk menghilangkan pengotor-pengotor dan selanjutnya dikeringkan :mam desikator.

Uji kemurnian hasil sintesis menggunakan KLT.

2fJ1 1 1

219

13

mlz •

Gambar 4.1 Spektrum massa 3,3'-bis(indol-3-il)oksindola (7a) Analisis hasil sintesis dengan spektrometer massa memberikan spektrum massa seperti anunjukkan pada Gambar 4.1. Spektrum massa menunjukkan puncak ion molekul pada

mlz

363, kation

oada m/z 335 dan 334, puncak dasar pada m/z 247, fragmen dengan m/z 219 dan mlz 1 17.

_.aporan Akhir Risbn i Jptekdok 2011 Badan Penefitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

18

Pengukuran spektrum 1H-NMR dalam pelarut dimetilsulfoksida-ds menunjukkan adanya tiga kelompok sinyal sebagaimana terlihat pada Gambar 4.2. Sinyal multiplet pada pergeseran kimia 6,79-7,350 ppm,

sinyal singlet pada pergeseran kimia 10,60 ppm, dan sinyal singlet pada pergeseran kimia 10,96

oom. Reaksi 0,10 gram (0,85 mmol) indola (2) dengan 0,063 gram (0,43 mmot) isatin dalam 60 mililiter air

�ghasilkan 3,3'-bis(indol-3-il)oksindola (7a) sebagai padatan putih sebesar 0,14 gram atau dengan ';Sfldemen 88%.

10,96; 10,60; 7,35; 7,22; 7,00; 6 ,92; 6,85; 6,79

•

4 I3

,,

1

o

ppm

Gambar 4.2 Spektrum 1H-NMR 3,3'-bis(indol-3-il)oksindola (7a) f'./.2

Sintesis 3,3'·Bis(1-metilindol·3·il)oksindola (7b) Sintesis 3,3'-bis(1-metilindol-3-il)oksindola (7b) dilakukan dengan mengadaptasi prosedur sintesis

oksindola (7a). Reaksi 0,44 gram (3,4 mmol) 1-metilindola dengan 0,25 gram (1, 73 mmol) isatin dalam 20 19

l...af:oran Akhir Risbin lptakdok 2011 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes R/

I,.

- metanol menggunakan katalis boron triftuorida dalam metana! dengan pengadukan dan pemanasan :aJam penangas minyak (58-64 oq selama 120 menit menghasilkan oksindola (7b) berupa serbuk putih leleh 329-331 °C} sebanyak 0,58 gram atau dengan rendemen 86 %. ldentifikasi 3,3'-bis(1 -metilindol-3-il)oksindola (7b) menggunakan spektrometer NMR dalam pelarut 01letilsulfoksida (DMSO-d6) memberikan spektrum 1H NMR yang menunjukkan adanya tiga signal Gambar 4.3). Signal pertama berupa singlet pada pergeseran kimia 3,70 ppm, signal kedua berupa signal r:tdtiplet pada pergeseran kimia 6,88-7,23 ppm, dan signal ketiga merupakan signal singlet pada :ageseran kimia 10,62 ppm. Analisis dengan spektrometer massa (Gambar 4.4) menunjukkan spektrum -:msa dengan puncak ion molekul dengan mle 391, fragmen dengan m/e 261, 223, 376, dan 362.

10,62; 7,38; 7,23; 7,08; 6,98; 6,92; 6,88; 3,70

I.

I".. ••

15

14

.... ,I 4 iii

13

12

I

I

11

I

1{)

Ii4 '1" I"• i'

9

8

7

'I

6

ji

5

....... "'

4

3

h

,. . ..,. ''" 4.. I0 ...

2

1

0 ppm

Gambar 4.3 Spektrum 1H-NMR 3,3'-bis(1-metilindol-3-il)oksindola (7b) .3

Sintesis 3,3'-Bis(indol-3-11)·5-fluorooksindola (7c) Sintesis 3,3'-bis(indol-3-il)-5-ftuorooksindola (7c) dilakukan dengan mengadaptasi prosedur

3iltesis 3,3'-bis(indol-3-il)oksindola (7a). Sintesis dilakukan selama 120 menit dengan pemantauan reaksi ::lakukan setiap 15 menit dengan kromatografi lapis tipis (KLT). Hasil reaksi kemudian ditambahkan air �in dan endapan yang terbentuk disaring, dicuci dengan air untuk menghilangkan pengotor-pengotor, 3ail

selanjutnya dikeringkan dalam desikator.

2JXJran AkhirRisbin fptekdok 2011 Badan Penefitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rf

· ·--

- -- -

20

· ,-

· �--·----- ---·

362 391

42

n 89 101 100

131144 158 ISO

m

195 218 200

m

ut 250

305

331 346

300

350

376 400

450

Gambar 4.4 Spektrum massa 3,3'-bis(1-metilindol-3-il)oksindola (7b)

11,01; 10,64; 7,36; 7,22; 7,09; 7,07; 7,02; 6,99; 6,98; 6,89; 6,82

I Gam bar 4.5 Spektrum 1 H-NMR 3,3'-bis(indol-3-il)-5-fluorooksindola (7c) �alisis 1H-NMR oksindola (7c) dalam pelarut dimetilsulfoksida (DMSO-ds) memberikan spektrum seperti mrlihat pada Gambar 4.5. Spektrum menunjukkan adanya tiga sinyal. Sinyal multiplet pada pergeseran kimia 6,82-7,36 ppm, sinyal singlet pada pergeseran kimia 10,64 ppm, dan sinyal singlet pada pergeseran kimia 1 1 ,01 ppm. Analisis 13C-NMR oksindola (7c) dalam pelarut dimetilsulfoksida (DMSO-ds) memberikan spektrum seperti terlihat pada Gambar 4.6. Spektrum tersebut menunjukkan sinyal khas pada pergeseran mia 53,13 ppm dan 178,71 ppm, dan sejumlah sinyal pada 1 10,37; 1 1 1 ,74; 1 1 2,36; 1 1 3,67; 1 1 4, 18;

!..aporan Akhir Risbin lptekdok 2011 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

21

�

178,71

�

158,82

� � s·

156,95

::; ·

137,58

-o CD"

G)

i"-> !i\' g. :::.

� Q)"

� 0> (/)

124,47

2

118,42

...... w

� ::s

(") I z s:: ::::0

� :::.

�

114,18 113,67 112,36 111,74 110,38 53,13

�

::;· a.. 0

�

..!... �

Q)

(T1

�

120,63

I c::r c;r

-

� (/)

121,08

w

<":?

:::. "" Q) :::.

,.. , ..

125,56

3

:::.

I

c::r

-o CD ;::.:-

� :::.

� ·� � �l:j

136,38

3 w ....,

� .....

136,96

w

DlfSO

-;w I

3

I

:::b c 0 a 0

� (/)

�

;::.:en

II

r "-> "->

::;· a.. 0 w � .e

I''II1''''1'[1111It1 1

.0 100.0 �.0 80.0 70.0 60.0 50.0 40.0 30.0 20.0 10.0

18,42; 120,63; 121 ,08; 124,47; 125,56; 136,38; 136, 96; 137,58; 156,94 dan 158,82 ppm. Reaksi 0,081 :;:c1T1 (0,69 mmol) indola (1) dan 0,057 gram (0,35 mmol) 5-flouroisatin (19) dalam 80 mililiter air pada suhu �oc dihasilkan 3,3'-bis(indol-3-il)-5-fluorooksindola (14) sebagai padatan coRiat sebesar 0, 12 gram atau

:.engan rendemen 92%. '1.4

Sintesis Sintesis 3,3'·Bis(N-metilindola·3·il)-5·fluorooksindola (7d) Sintesis 3,3'-bis(N-metilindol-3-il)-5-fluorooksindola (7d) dilakukan dengan mengadaptasi prosedur

:31tesis 3,3'-bis(indol-3-il)oksindola

(7a). Reaksi dilakukan selama 120 menit dengan pemantauan reaksi

:3akukan setiap 1 5 men it menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT). Hasil reaksi kemudian ditambahkan al'dingin dan endapan yang terbentuk disaring, dicuci dengan air untuk menghilangkan pengotor-pengotor, :sn dikeringkan

dalam desikator.

ldentifikasi menggunakan spektrometer mass a memberikan spektrum seperti terlihat pada Gambar -.-..7. Spektrum massa menunjukkan puncak ion molekul pada mlz 409, kation dengan

mlz

380, dan

;agmen dengan mlz 251.

fD

0

9 l3 -

�

a; 0:: c:::: ttl ..s:::. ttl c..

.§ a; �

1

6 s '

3 2

m/z

Gambar 4.7 Spektrum massa 3,3'-bis(1-metilindol-3-il)-5-fluorooksindola (7d)

t..aporan Akhir Risbin /ptekdok 2011 Badan Penelii t an dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

23

Analisis 1H-NMR dalam DMSO-ds seperti terlihat pada Gambar 4.8 menunjukkan adanya sinyal -o::ef pada pergeseran kimia 3,72 ppm; sinyal multiplet pada 6,86-7,38 ppm dan sinyal singlet pada 10,66 Reaksi 0,14 ml (1, 14 mmol) N-metilindola dengan 0,094 gram (0,57 mmol) 5-fluoroisatin dalam 200

'7

� campuran metanol:air (1 :3) pada suhu 45°C menghasilkan oksindolcr (7d) berupa padatan coklat _a::esar 0,23 gram atau dengan

:S

rendemen sebesar 91 %.

Sintesis 3,3'·Bis(N·metilindola·3·il)·5·nitrooksindola (7e) Sintesis oksindola (7e) dilakukan dengan mengadaptasi prosedur sintesis oksindola (7a). oring reaksi dilakukan dengan KLT dan pad a menit ke 90 menunjukkan adanya satu noda yang

·

J!lflQindikasikan 5-nitroisatin dan N-metilindola telah bereaksi tuntas, untuk lebih memastikan maka reaksi jutkan kembali sampai manit ke 120. Uji 1<emurnian hasil sintesis dengan KLT menunjukkan bahwa - ·ndola (7e) memberikan noda tunggal yang menandakan sebagai senyawa murni, diperkuat dengan uji �

leleh yang menunjukkan kisaran 291-292 oc. Senyawa murni mempunyai perbedaan titik leleh ± 1°C.

-=tssi 0,39 gram (2,97 mmol) N-metilindola dan 0,29 gram (1 ,51 mmol) 5-nitroisatin dalam 10 ml metana I nasilkan 3,3'-bis(N-metilindol-3-il)-5-nitrooksindola (7e) sebagai padatan kuning sebesar 0,65 gram atau ::engan rendeme� 99%.

10,66; 7,38; 7,23; 7, 10; 7,09; 7,07; 7,05; 7,03; 6,98; 6,96; 6,94; 5,86; 3,72

• '2' i

8

7

5

4

.

. ''

2

.

..

1

·a

ppm

Gambar 4.8 Spektrum 1H-NMR 3,3'-bis(1-metilindol-3-il) -5-fluorooksindola (7d) Analisis 3,3'-bis(N-metilindol-3-il)-5-nitrooksindola (7e) dengan spektrofotometer NMR dalam pelarut aseton-d6 memberikan spektrum 1H-NMR (Gambar 4.9). Spektrum 1H-NMR menunjukkan adanya

l.a po ran Akhir Risbin lptekdok 2011 Badan Penelftian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

24

!ga sinyal singlet pada pergeseran kimia 3,72 ppm, sinyal multiplet pada pergeseran kimia 6,88-8,25 ppm, Jail

sinyal singlet pada pergeseran kimia 11 ,35 ppm.

11,35; 8,25; 8,24 ; 7,98; 7,40; 7,23; 7,20; 7,10; 7,00; 6,88; 3,72

, 13

I(i

11

io

L

9

I

'6'

"4

'0

ppm

Gambar 4. 9 Spektrum 1H-NMR 3,3'-Bis(N-metilindol-3-il)-5-nitrooksindola (7e)

Gambar 4.10 Spektrum Massa 3,3'-Bis(N-metilindol-3-il)-5-nitrooksindola (7e) _::pJran Akhir Risbin /ptekdok 2011 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

25

Analisis oksindola (7e) dengan spektrometer massa (ESI) memberikan spektrum massa seperti ditunjukkan pada Gambar 4.10. Spektrum massa menunjukkan puncak [M-H]-1 pada m/z 435 yang sesuai dengan massa relatif oksindola (7e). IV.6 Uji Bioaktivitas oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) terhadap M. tuberculosis Uji bioaktivitas oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) terhadap mikobakteri TBC Mycobacterium tuberculosis H37Rv yang sensitif terhadap semua obat anti TBC dilakukan dengan uji kepekaan obat (drug sensitivity test, DST) menggunakan tabung indikator pertumbuhan mikobakteri, mycobacteria growth ;ndicator tube (MGIT) yang dibaca dengan menggunakan alat pembaca BACTEC MicroMGIT dan

ditegaskan dengan media konvensional Lowenstein-Jeensen (LJ) dan Middlebrook 7H10. Uji dilakukan dengan konsentrasi masing-masing oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) sebesar 1000, 500, 200, 100, 50, 25, 12,5 �g/ml dalam pelarut DMSO 20 % (dalam aquabidest steril). Pengujian dengan MGIT menggunakan kontrol positif berupa suspensi

M.

tuberculosis dan kontrol negatif yaitu DMSO 20 % yang

ditambah dengan senyawa uji. Hasil uji menggunakan media MGIT dengan konsentrasi 200 �g/ml untuk masing-masing oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) sebagaimana terlihat pad a Gambar 4.11 .

•

Laporan Akhir Risbin Jptekdok 2011 Badan Penelman dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

26

Gambar 4.1 1 Hasil Uji oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) pada konsentrasi 200 �g/ml terhadap M.tubercu/osis H37Rv dengan Media MGIT

Laporan Akhir Risbin lptekdok 2011 Baden Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

27


BAB V PEMBAHASAN V.1

Sintesis 3,3'·Bis(indol·3·il)oksindola (7a) Sintesis 3,3'-bis(indol-3-il)oksindola

(7a) dilakukan dengan menggunakan pelarut air untuk

mendapatkan kondisi yang lebih ramah lingkungan. Reaksi dilakukan pada suhu 45°C karena kedua reaktan dapat larut baik pada suhu tersebut. Asam sulfat pekat dimanfaatkan sebagai katalis karena diketahui dapat menghasilkan rendemen tinggi (Kusman, 2007). Uji kemumian hasil sintesis menggunakan KLT menunjukkan

bahwa hasil sintesis memberikan noda tunggal yang menandakan bahwa hasil sintesis

telah mumi. Hal ini diperkuat dengan uji titik leleh dengan titik leleh sebesar 294-295 oc atau dengan kisaran sebesar 1 oc. Spektrum massa (Gambar 4.1) menunjukkan puncak ion molekul pada

mlz

363 yang sesuai

dengan massa relatif oksindola (7a). Pelepasan molekul netral CO dan atom hidrogen secara berturut-turut dari ion molekul menghasilkan kation pada

mlz

335 dan 334. Puncak dasar pada

m/z

247 merupakan

puncak dari fragmen hasil pelepasan sebuah unit indola dari ion molekul. Fragmen ini selanjutnya melepaskan molekul netral CO sehingga dihasilkan fragmen dengan

mlz

219. Puncak pada

mlz

117

merupakan puncak dari fragmen unit indola yang terbentuk. Pengukuran spektrum 1H-NMR (Gambar 4.2) dalam pelarut dimetilsulfoksida-d6 menunjukkan adanya tiga kelompok sinyal. Sinyal multiplet pada pergeseran kimia 6,79-7,350 ppm merupakan sinyal keempat bel as proton aromatik; sinyal singlet pad a pergeseran kimia 10,60 ppm merupakan sinyal proton NH unit oksindola, dan sinyal singlet pada pergeseran kimia 10,96 ppm adalah sinyal kedua proton NH unit indola. Spektrum ini sesuai dengan pengukuran spektrum oksindola (7a) (dalam dimetilsulfoksida- d6) hasil sintesis yang dilaporkan oleh Dwiningsih dan Febriana (2006).

V.2

Sintesis 3,3'·Bis(1-metilindol·3·il)oksindola (7b) ldentifikasi 3,3'-bis(1 -metilindol-3-il)oksindola (7b) menggunakan spektrometer NMR dalam pelarut

dimetilsulfoksida (DMSO-d6) memberikan spektrum 1H NMR (Gambar 4.3) yang menunjukkan adanya tiga signal. Signal pertama berupa singlet pada pergeseran kimia 3,70 ppm merupakan signal dari proton proton gugus metil. Signal kedua berupa signal multiplet pada pergeseran kimia 6,88-7,23 ppm merupakan signal dari proton-proton aromatik turunan trisindolina (7b), sedangkan signal ketiga merupakan signal singlet pada pergeseran kimia 10,62 ppm merupakan signal proton NH. Analisis dengan spektrometer

Laporan Akhir Risbin lptekdok 2011 Badan Penelit ian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

28

massa (Gambar 4.4) menunjukkan spektrum massa dengan puncak ion molekul dengan mle 391 yang sesuai dengan massa relatif turunan trisindolina (7b). Pelepasan sebuah unit 1-metilindola dari ion molekul dihasilkan fragmen dengan m/e 261 yang kemudian melepaskan CO menghasilkan fragmen dengan m/e 223. Pelepasan radikal metil menghasilkan fragmen m/e 376, sedangRan pelepasan radikal etil menghasilkan fragmen dengan m!e 362. V.3

Sintesis 3,3'·Bis(indol·3·il)-5·fluorooksindola (7c) Analisis 1H-NMR oksindola (7c) dalam pelarut dimetilsulfoksida (DMSO-ds) memberikan spektrum

(Gambar 4.5) yang menunjukkan adanya tiga sinyal. Sinyal multiplet pada pergeseran kimia 6,82-7,36 ppm merupakan sinyal ketiga belas proton aromatik; sinyal singlet pada pergeseran kimia 10,64 ppm merupakan sinyal proton NH unit oksindola, dan sinyal singlet pada pergeseran kimia 1 1 ,01 ppm adalah sinyal kedua proton NH unit indola. Analisis 13C-NMR oksindola (7c) dalam pelarut dimetilsulfoksida (DMSO-ds) memberikan spektrum seperti terlihat pada Gambar 4.6. Spektrum tersebut menunjukkan sinyal khas pada pergeseran kimia 53,13 ppm dan 178,71 ppm, masing-masing merupakan sinyal karbon kuartener dan karbon karbonil oksindola (7c). Karbon-karbon aromatik memberikan sinyal pada 1 1 0,37; 1 1 1 ,74; 1 1 2,36; 1 1 3,67; 1 14,18; 1 1 8,42; 120,63; 121 ,08; 124,47; 125,56; 136,38; 136,96; 1 37,58; 156,94 dan 158,82 ppm. V.4

Sintesis Sintesis 3,3'·Bis(N-metilindola·3·il)·5·fluorooksindola (7d) Spektrum massa (Gambar 4.7) menunjukkan puncak ion molekul pada m/z 409 yang sesuai

dengan massa relatif oksindola (7d). Pelepaskan radikal etil dari ion molekul menghasilkan kation dengan mlz 380 yang merupakan puncak dasar. Pelepasan satu unit N-metilindola dan molekul netral CO secara

berturut-turut dari ion molekul menghasilkan fragmen dengan mlz 251. Spektrum 1H-NMR (Gambar 4.8) Sinyal singlet pada pergeseran kimia 3,72 ppm yang merupakan sinyal keenam proton dari dua gugus N-metil, sinyal multiplet pada pergeseran kimia 6,86-7,38 ppm merupakan sinyal ketigabelas proton aromatik, dan sinyal pada pergeseran kimia 10,66 ppm merupakan sinyal proton NH. Sinyal singlet dari dua gugus N-metil pada pergeseran kimia 3,72 ppm memberikan perbedaan yang signifikan pada oksindola (7d) dibandingkan oksindola (1c).

Laporan Akhir Risbin lptekdok 201 1 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

12

29

V.5

Sintesis 3,3'·Bis(N·metilindola·3·il)·5·nitrooksindola (7e) Sintesis oksindola (7e) dilakukan dengan mengadaptasi prosedur sintesis oksindola (7a).

Monitoring reaksi dilakukan dengan KLT dan pada men it ke 90 menunjukkan adanya satu nod a yang mengindikasikan 5-nitroisatin dan N-metilindola telah bereaksi tuntas, untuk letlih memastikan maka reaksi dilanjutkan kembali sampai menit ke 120. Uji kemurnian hasil sintesis dengan KLT menunjukkan bahwa oksindola (7e) memberikan noda tunggal yang menandakan sebagai senyawa murni, diperkuat dengan uji titik leleh yang menunjukkan kisaran 291-292 oc. Senyawa murni mempunyai perbedaan titik leleh ± 1°C. Analisis 3,3'-bis(N-metilindol-3-il)-5-nitrooksindola (7e) dengan spektrofotometer NMR dalam pelarut aseton-d6 memberikan spektrum 1H-NMR (Gambar 4.9) yang menunjukkan adanya tiga sinyal singlet pada pergeseran kimia 3,72 ppm yang merupakan sinyal enam proton dari dua gugus N-metil unit indola, sinyal multiplet pada pergeseran kimia 6,88-8,25 ppm merupakan sinyal tigabelas proton aromatik, dan sinyal singlet pada pergeseran kimia 1 1 ,35 ppm merupakan sinyal proton NH unit 5-nitroisatin. Analisis oksindola (7e) dengan spektrometer massa (ESI) memberikan spektrum massa seperti ditunjukkan pada Gambar 4.1 0. Spektrum massa menunjukkan puncak [M-H]·1 pada m/z 435 yang sesuai dengan massa relatif oksindola (7e). V.6

Uji Bioaktivitas oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) terhadap M. tuberculosis Hasil uji menggunakan media MGIT dengan konsentrasi 200 �g/ml untuk masing-masing

oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) sebagaimana terlihat pada Gambar 4.11 menunjukkan bahwa semua tabung MGIT positif (berpendar terang pada skala maksimal, 20) demikian pula dengan kontrol positif, sedangkan tabung MGIT kontrol negatif tidak berpendar (berpendar redup pada skala 12}. lndikator yang terdapat pada dasar botol media akan berpendar jika kadar oksigen dalam botol menurun sebagai akibat pertumbuhan tuberculosis


H37Rv. Fluorosensi diamati dan

Mycobacterium

H37Rv dinyatakan resisten jika fluorosensi antara tabung MGIT kontrol dan tabung MGIT

sampel memiliki kesamaan setelah dua hari kemudian. Pengamatan yang berbeda terlihat untuk media MGIT dengan konsentrasi 500 �g/ml untuk masing-masing oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) (Gambar tidak diperlihatkan). Semua tabung MGIT pada konsentrasi ini negatif (berpendar redup pada skala 12). Hal ini berarti bahwa oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) bersifat bakteriostatik terhadap tuberculosis

H37Rv pada konsentrasi 200 �g/ml tetapi bersifat bakterisidal terhadap

M.

M. tuberculosis

H37Rv pada konsentrasi 500 IJg/mL.

Laporan Akhir Risbin fpfekdok 2011 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

30


BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN Vl.1

Kesimpulan

Oksindola dan turunannya (7a,b,c,d,e) telah berhasil disintesis dengan rendemen 86-99% melalui reaksi indola (2) atau N-metilindola dengan isatin atau 5-fluoroisaton atau 5-nitroisatin dalam pelarut air atau metanol. Uji bioaktivitas terhadap

M. tuberculosis

H37Rv menunjukkan bahwa oksindola dan

turunannya (7a,b,c,d,e) memiliki aktivitas anti-M. tuberculosis dengan MIG 500 �g/mL. Vl.2

Saran

Penelitian lebih lanjut seperti pengujian eksak pada penentuan MIG, pengujian anti-M.

tuberculosis

dengan metoda yang berbeda, dan pengujian terhadap mikobakterium yang bersifat multidrug resistant terhadap senyawa-senyawa antiTBG yang sudah ada.

! J


31


Ucapan T erima Kasih

Peneliti menyampaikan terima kasih kepada Badan Penelitian dan· Pengembangan Kesehatan Kementerian Kesehatan Republik Indonesia atas dana penelitian melalui Riset Pembinaaan llmu Pengetahuan dan Teknologi Kedokteran (Risbin lptekdok 2011) yang telah diberikan, Prof. Dr. Yana Maolana Syah dari Jurusan Kimia ITB atas bantuan identifikasi spektrometer massa, Ahmad Darmawan, M.Si. dari Pusat Penelitian Kimia UPI Serpong atas bantuan identifikasi senyawa menggunakan spektrometer NMR.

..,


32


Daftar Ppstaka Allin, S. M., L. J. Duffy, P. C. B. Page, V. McKee, dan M. J. McKenzie. 2007. Towards a Total Synthesis of the Manadomanzamine Alkaloids: the First Asymmetric Construction of the Pentacyclic Indole Core. Tetrahedron Letters. 48: 4711-4714. Acheson, R.M. 1976. An

Introduction to The Chemistry of Heterocyclc i Compounds.

3th Edition. New York:

John Wiley & Sons. Azizian, J., Mohammadi, A.A., Karimi, N., Mohammadizadeh, M.R. and Karimi, A.A. 2006. Silica Sulfuric Acid a Novel and Heterogeneous Catalyst for The Synthesis of Some New Oxindole Derivatives. Catalyst Communication,

Vol.?, hal. 752-755.

Bacchi, A., M. Carcelli, P. Palagatti, G. Pelizzi, M. C. Rodriguez-ArgQelles, D. Rogolino, C. Salinas, F. Zani,. 2005. Antimicrobial and Mutagenic Properties of Organotin(IV) Complexes with !satin and N Aikylisatin Bisthiocarbonohydrazones. J. lnorg. Biochem., 99, 397-408. Canpolat, E., M. Kaya, 2005. Studies on Mononuclear Chelates Derived from Subtituted Schiff Base Ligands (Part 4):

Synthesis and

Characterization of A

New 5-Hydroxysalicyliden-P

Aminoacetophenoneoxime and Its Complexes with Co(ll), Ni(ll), Cu(ll) and Zn(ll).

Turk. J. Chern.,

29,

409-415. Castagnola, D., A. D. Logu, M. Radi, B. Bechi, F. Manetti, M. Magnani, S. Supina, R. Meleddu, L. Chisu, M. Botta. 2008. Synthesis, Biological Evaluation and SAR Study of Novel Pyrazole Analogues As Inhibitors of Mycobacterium Tuberculosis.

Bioorganic & Medicinal Chemistry.

16. 8587-8591.

Cerchiaro, G., A. M. da Costa Ferreira. 2006. Oxindoles and Copper Complexes with Oxindole-Derivatives as Potential Pharmacological Agents. J. Braz.

Chern. Soc.

17. 8. 1473-1485.

da Silva, J.F.M., Garden, S.J., dan Pinto, A.C. 2001 . The Chemistry of !satins : A Review from 1975 to 1999. J. Braz.

Chern. Soc.

12, 3: 273-324.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Pedoman Nasional Penanggulangan Tuberkulosis. 2002. 1 23. Dwiningsih, R. 2006.

Strategi Baru Sintesis Trisindolina dan Turunannya,

Skripsi, Jurusan Kimia ITS,

Surabaya. Gribble, G.W., 2003. Novel Chemistry of Indole in the Synthesis of Heterocycles. Chemistry.

Pure Application

75: 1417-1432.


33

Guzel, 0., Krali, N., dan salman, A. 2008. Synthesis and Antituberculosis Activity of 5methyl/trifluoromethoxy-1 H-indole-2,3-dione Medicinal Chemistry Letters.

3-thiosemicarbazone

Derivatives.

Bioorganic

&

16: 8976-8987.

Jarrahpour, A.A., dan Khalili, D. 2006. Synthesis of Some New bis-Schiff Bases of !satin and 5-Fiuoroisatin in a Water Suspension Medium. Molecules. 1 1 : 59-63. Karthikeyan, S.V., Perumal, S., Shetty, K.A., Yogeeswari, P., dan Sriram, D. 2009. A Microwave-Assisted Facile Regioselective Fischer Indole Synthesis and Antitubercular Evaluation of Novel 2-aryl-3,4dihydro-2H-thieno[3,2-b]indoles. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 19: 3006-3009. Kobayashi, M., Aoki, S., Gato, K., Matsunami, K., Kurosu, M. and Kitagawa, I. 1994. Marine Natural Product XXXIV. Trisindoline, a New Antibiotic Indole Trimer, Produced by a Bacterium of Vibrio sp. Separated from the Marine Sponge Hyrtios altum. Chem. Pharm. Bull. 42, 12: 2449-2451 . Kobayashi, M. and Kitagawa,

I.

1994. Bioactive Substances Isolated from Marine Sponge, a Miniature

Conglomerate of Various Organisms, J. Pure & Appl. Chem. , Vol. 66, No.4, hal 819-826. Kusman. 2007.

Sintesis dan Bioaktivitas Tiga Turunan 3,3'-bis(indol-3-il)oksindola,

Tesis Jurusan Kimia.

ITS: Surabaya. Mendonca, G. F. 2005. Trichloroisocyanuric Acid in H2S04: An Efficient Superelectrophilic Reagent for Chlorination of !satin and Benzene Derivatives", J. Braz. Chem. Soc., 16, 4, 695-698. Nikmawati, A., Windarwati, Hardjoeno. 2006. Resistensi Mycobacterium tuberculoss i Terhadap Obat Anti Tuberkulosis. Rehn, S. (2004),

Indonesian Journal of Clinical Pathology and Medical Laboratory.

Vol. 12, No. 2. 58-61 .

Synthesis of Indole and Oxindole Derivatives Incorporating Pyrrolidino, Pyrrolo or

lmidazolo Moieties,

Thesis Ph.D., Departement of Biosciences at Novum, Karolinska lnstitutet,

Stockholm. Rivers, E. C., R. L. Manchera. 2008. New Anti-tuberculos Is Drugs In Clinical Trials with Novel Mechanisms of Action. Drug Discovery Today. 13. 1090-1098. Riyanto A. 2006. lsolasi dan

Uji Antibakterial Dulsanton D dari Kayu Akar Garcinia tetranda

Pierre, Tesis,

Jurusan Kimia, ITS, Surabaya. Santoso, M., Y. Fatmasari, N. F. Novia, T. Qomariyah, R. Dwiningsih, A. Febriana. 2007. Bioaktivitas Enam Turunan 3,3'-Bis(indol-3-iljoksindola.

Sintesis dan

Seminar Nasional Technological and

Professional Skills Development Sector Project Research Grant VII. Denpasar. 25-27 Maret.


a

34

Setyowati, A. 2010.

Sintesis dan Bioaktivitas 3,3'-Bis(/ndoi-3-11)-5-Nitrooksindo/a dan 3,3'-Bis(N-Metilindoi-

3-11)-5-Nitrooksindola Terhadap Mycobacterium tuberculosis H37Rv,

Skripsi, Jurusan Kimia ITS,

Surabaya. Sivendran, S., Jones, V., Sun, D., Wang, Y., Grzegorzewicz, A.E., Scherman, M.S.,Napper, A.D., McCammon, J.A., Lee, R.E., Diamond, S.L., dan McNeil, M. 2010. Identification of Triazinoindoi Benzimidazolones as Nanomolar Inhibitors of the Mycobacterium Tuberculosis Enzyme TDP-6deoxy-D-xylo-4-hexopyranosid-4-ulose 3,5-epimerase (RmiC). Letters.

Bioorganic

& Medicinal Chemistry

18: 896-908.

Sriram, D., M. Dinakaran, P. Senthilkumar, P. Yogeeswari. 2009. Antitubercular Activities Of Novel Benzothiazolo Naphthyridone Carboxylic Acid Derivatives Endowed With High Activity Taward Multi Drug Resistant Tuberculosis. Bomedicine i & Pharmacotherapy. 63. 1 . 11-18. Suksamrarn,S., Suwannapoch, N., Phakodee, W., Thanuhiranlert, J., Ratananukul, P., Chimnoi, N. and Suksamrarn, A 2003. Antimycobacterial Activity of Prenylated Xanthones from the Fruits of Garcinia mangostana. Chern. Pharm. Bull.,

Vol. 51, No.7, hal 857-859.

Sundberg, R. J. 1996. lndoles. London: Academic Press. Wang, S. and Ji, S. 2005. Facile Synthesis of 3,3-Di(heteroaryl}indolin-2-one Derivatives Catalyzed by Ceric Ammonium Nitrate (CAN} under Ultrasound Irradiation. Tetrahedron, Vol.62, hal. 1527-1535. Veluri, R., Oka, Bacterium

1.,

Wagner-Dobler,

I.

and Laatsch, H. 2003. New Indole Alkaloids from the North Sea

Vibrio parahaemolyticus

Bio 249. J. Nat. Prod. Vol. 66, hal. 1520-1523. ,

Laporan Akhir Risbi n lptekdok 201 1 Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rl

a

35


HALAMAN PENGESAHAN LAPORAN AKHIR PELAKSANAAN PENELITIAN RISBIN IPTEKDOK TAHUN ANGGARAN 20 1 1

1.

Judul Penelitian

Rekayasa Struktur lndola sebagai Anti-Mycobacterium tuberculosis Baru

2.

Ketua Peneliti a. Nama b. Jenis Kelamin c. Pangkat/Go!ongan d. NIP e. Jabatan Sekarang f. Faku!tas/Jurusan g. Alamat Kantorffelp/Fax/E-mai!

Arif Fadlan Pria Penata Muda Tk !/!lib 1981 08092008121001 Asisten Ahli M!PNKimia Jurusan Kimia FMIPA Kampus ITS Sukolilo Surabaya 601 1 1 031-5943353/031-5928314 [email protected]

3.

Perguruan Tinggi

ITS

4.

Jangka Waktu Penelitian

10 Bulan

a. Biaya. / . yang diajukan b. Biaya... ./.....dari lnstansi lain Totai Biaya

Rp. 142.940.000, Rp. Rp. 142.940.000,-

.. .

.

..

Surabaya, 1 3 Februari 2012 Ketua Tim Peneliti

Arif Fadlan, MSi. NIP. 19810809 200812 1 001

Laporan Akhir Risbin lptekdok 201 1 Badan Penelifian dan Pengembangan Kesehatan Kemenkes Rf

36

KEMENTERIAN KESEHATAN BADAN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KESEHATAN .I alan Pcrcclakan Ncg:tru No. 29 Jakarta I 0560 Kotak Po� 1226 Tclepon: (02 1 ) 426 I 0!.<8 Fak�imile: (02 1) 4243933

1·:-mai/: [email protected]�.go.id. We/1si1e.· http://www.litbang.dcpkcs.go.id

J< L:: PU'l'USAN KEPALA BADAN P8N fO:LITIAN DAN P1<:NGEMBANOAN KESEHATAN

?>93 /201 1

NOMOR : 1 1 1\.0�.05/ 1 / TL::NT/\NG

PEN ETt\PAN TIM PELt\KSANA I�ISET P!:<� MBINAAN I L M U PENGETAflUAN DAN TEKNOLOGI I<EDOKTERAN T/\I IUN 2 0 1 1 I<EPALA HADAN PENEL!Tlt\N DAN PENGEMBANGAN KESEHATAN, Mcn imba np,

a. bahwa t m t u k mcningkatkan kapasitas pencli lian dan pengcrnbanp;un di bi dang kesdwtan pcrlu dilakukun pcmbina
cinlam

potcnsi

rungka

pcncliLi

PcmllitHI
pcm binaau

Pcn gc t ah u�t n

llrnu

mcnggali

dan

di lukukan

pcrlu

rn u cla

d
Rise\

Tcknologi

Kcdoktcnttl: c.

bahwa

bcrdHsarkan

dimak�ud

pacta

Kcputusan

pcrtimbangan

huntf

a

clan

b

Oadan

1\cpala

sebagaimana

pcrlu

ditctapkan

Pcnditian

dan

Pcngcml>� n1gan 1\.cschatan tcntang Pcrnbl'nlukan Tim Pclnksana

l�isct Pcmbinaan

Tcknologi l
I . Umlan� Und
Pencnlp<m (Lcmb
Nomor

Nasion a l

H'l,

llmu

201 1 ;

Pcngctahuon

Ncgara

Rcpublik

Tamb;:1han

l(:n ta ng

Pcngcmlmngan

Pengcta huan

llmu

2002

lahun

18

Pcnclitian,

c.lan

!ndoncsia

Lcmbaran

dan

dan

Tcknologi tahun

Ncgara

2002

Republik

I ndoncsi<� Nomor 42 I 9);

2. Umi<.1 n�-Undang l
Nomor

(L<'mbaran

36

tuhun

Ncgara

Tahun

tcnt.ang

200Y 2009

Nomor

1 4 4 , 'l'arnbah
Pcra turHtl f>cmcrintah Nomor 39 Tnhun 1995 tcn lang Penc lili
Tambahan Nomor

Pcngcmb<.�ngan l
l�c pu blik Indonesia tahun Lcmbaran

3h09l:

Ncgara

1995

Rcpub li k

Nomor 67, I ndonesi a

KEMENTERIAN KESEHATAN BADAN PENELlTIAN DAN PENGEMBANGAN KESEHATAN Jalan Pcrcctakun Ncgura No. 2<> Jakarta I 05(){) Kotak Pos 1226 ·Tclcpon: (02 1 ) 4261088 Faksimilc: (02 1) 4243933 E-mail: [email protected], Wehsite: http://www.litbang.dcpkcs.go.id

4.

Keputusan

MC'ntcri

Pcnyelengp;aran n

Nomor

Kcsehatan

79 1 / Mcnkcs / S K / V I I / 1 999

lentang

Penclitian

dan

l
. Pcngcmbangan

Kcschat<.m; 5.

Pcraturan

Mcnl.cri

Keschalan

1 575/ Mcnkc.:s/Pcr/Xl/2005

Nomor

langgal

16

Nopember

2005 lcntang Organisasi dan Tata Kerjt1 Departcmcn

1�1

Kcsehatan

scbagaimana

tclah

diubah

dcngan

Nomor

Kcsehala n

Mcnlcri

Pcraturcm

1 1 44/Men kcsjPcr/ V I l l / 20 1 0 tcnlang Organisasi dan Tata Kcrja Kcmcn tcri
PENI"�TAPAN TIM P8LAKSANA RISET PEMBINAAN ILMU PENG ETA I I UAN

DAN

I<EDOKTEI�AN

TEI
TAHUN 201 1 ; Kedua

Tim PclaksanH

Rist:l Pcmbinaan llmu PcngeLahuan dan

Tcknologi l\.cdoktcrun Risl>in

Tahun 201 l (::;clanjutnya disebut

lplckdok 20 I 1 )

scbagaimana

tc rcanlum

dalmn

larnpiran kcpu lus
ilmiah dan

ctika dcngan waklu yang telah ditcta pkan ; 2. Mcmpcrtanggungjawabkan

penggunaan

anggaran

scsuai pcntturan yang bcrlaku; 3. Membunl dan mcnyampai k
ringkasan

pcnclitiun

scbaga i

cksc[..-utif bahan

bcrdasl:lrkan masukun

hasil

kepada

p e nga rn bi l a n kcputu:->an dan pcnge!olu program yang tcrkait dcngun basil pcnclilian; Kctiga

Tim

Pclaksana

climaksud

Risbin

lpwkdok

20 1 1

pada dicLwn kcdua dibcrikan

scbagaimana honor scsuai

dcngun kelentuan .Yang bcrlaku; Kecmpal

Dalam

mclaksanakan tugasnya, Tim Pelaksana Risbin

lptckdok 20 l l berpcdoman pada peraturun pct·undang undangan yang bcrlaku ;

KEMENTERIAN KESE HATAN BADAN PEN ELITIAN DAN PENGEMBANGAN KESEHATAN Jalan Pcrcctakan Ncgara No. 29 Jakarta I 0560 Kotak Pos 1226 Telepon: (02 1 ) 4261 OR!! Faksimilc: (021) 4243933 E-mail: [email protected]. WebsiTe: htlp:l/www.litbang.dcpkes.go.id

Ke l irna

Dalam mclak�anak<Jn

tugasnya, Tim

Pelaksana

Risbin

lplekdok 20 l 1 dapHl bcrkonsult.asi dan bcrkoordinasi Tim Punel Pakar dan Tim Pcngclola Ac.lministrasi

dcngnn

Risbin lptckdok; Biaya l
Keen am

l plc kd o k 20 1 1 dibcbankan padu itbangkes Nomor : 0682/024-

DIPA Sckrctariat Badan L

l l. J .O l /00/2 0 1 1 : l<etujuh

Dc:.;ngan

bcrlakunya Keputusan ini, maka l
Kcpala Bad<.m Pcndili<m dan Pcngernbangan l
e

Nomor : HK .. 03.05/ l / 1 092/20 1 0 tanggal l7 Ma r t 20 1 0 tc nlang Pcnclapan Tim Pcl�tksana Riset Pembinaan flm u Pcngctah uan

dan

Teknologi

l<.edokteran

Tahun

20 1 0

dinyatakan lidak bcrlaku lagi; l(cputusan

l(edelapan

ini

j

bcrlaku

sc ak

ditctapkan

sampai

31

Dcsernbcr 20 1 1 , dcngan kctcntuan apa.bila dikcmudian

hari tcrnyata

terclapal kekeliruan dalam kcputusan ini

dapat dilalntkan pcrubahan dan pcrbaikan sebagaimana mestinya. Ditctapkan eli ,Jakart�l Pada Langgal

\9

�

J an uari 2 0 1 I

,

\ I<EPALA BADAN PENE:LITIAN

��

PENGEMBANG

D r. d r.

DAN

SEH ATAN

�

Sr

NIP. 19 5402 1 4 1 980 1 2 1 00 1

cmbusan :

T

I . Mentcri l<eschalan Rcpublik Indonesia;

is ,Jcndcral

2. SckrL'tar

Kcmcntcrian l
3. Jnspektur ,Jendcral Kcmcn t.crian KeschatHn; 4.

Kepala Kantor Pclayanan Perbcndaharaan Negaru Jakarta V;

j

5. Pc abat Pernbuat Komit.men Risbin fptckdok; 6. Bendahara Pengeluaran Badan Litbang Kcschatan.

�

LAMPlRAN KEPUTUSAN KEPALA BADAN UTBANG KESEHATAN NOMOR : HK.03.05/1 / 39 ;:!> /2011

TANGGAL : 19 JANUARI 2011

NO

INSTANSI

PENELITI1

PENELIT1 2

PENELITI 3

STAF ADMINISTRASL-

JUDUL RISET

ANGGARAN (Rp.)

Potens1 ekstrak metanol 1emu kunci (Boesenbergia Shan:i Listyawat1 S S1, M St

26

W1d1 Hartonc

Muthi lk.awat1. M.Sc. ll.pt

pandurala) sebagao agen kemcprovensi kanker kul1! tennduksl UVB. kSJ!an mekan•sme '" vivo pada

12U8C.OOO

menctt Pengaruh Kombtnasi Ekstrak Ubt Jatar Putih dan U�gu (Ipomoea batanas l 1 terhadap Gir.Jal Tikus 27

s

Sn Lestari Sulistyo R111. dr. M.Sc

Ch Tn Nuryana. dr M Kes

Bud1harto

Doabetes KaJ•an terhadap Kadar G;Jkosa Daran.

125 480 000

.t<.rea:tmtn Te�anan Da,at\ P�otemuria. Kolesterol AGE EKsoreso TGF-3 VEGF PDGF dan ECM

FK UNIVERSITAS AIRLANGGA. SURABAYA 28

Ema a�rniar-�gs•� dr

Karaktensaso dan F110a�atosos Vort:s PandeMI

Kadek Rachmav;;n- drh. M Kes

tnRuenza H1NI 20C9 do Surabay<

!23 6S6 000

LPPM UNIVERSITAS AIRLANGGA, SURABAYA Akltvttas Kataltt.k Mut•n Prote;l1 KatG lsclat Klonts 29

Purl
Mycobacterum tubercu!osos sebagat Konsep Bar;.

Wr.mn Retnowah, Dr M Kes

134 994.000

dalam Mekanosme Res1stens1 lzoniazid

LPPM INSTITUT TEKNOLOGI SEPULUH NOPEMBER, SURABAYA Rekayasa Struktur Indo!a sebaga1 ll.nli Tuber'�ulosos 30

ll.nf Fadlan S S1 M St

Lanny Hartant• S Sr M S1

Wahyu H!dayatiomgs1h, SSt MKes

Zahrotullsl•qomah S s,

(TBC) Paru (Anttmycobactenal Adtvlt'es ol Indo';;

103.900.000

oe�vat-ves)

FK UNIVERSITAS BRAWIJAYA, MALANG Hubungan ar.tara Ka
Dian Hasanat> dr

Dona Mansa dr

PraiiWI. BSc. S Po

Samsul Allf•n

dan Fungs• Set T Rt9uiator Set Thli dan Set Dendnt p
li; ' I I I II Page s of7

14t 540000

LAPORAN AKHIR PENELITIAN

Recommend Documents