EFEK ANTI INFLAMASI EKSTRAK ETANOL DAUN SENGGANI (Melastoma polyanthum Bl.) PADA MENCIT PUTIH BETINA SKRIPSI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

EFEK ANTI INFLAMASI EKSTRAK ETANOL DAUN SENGGANI (Melastoma polyanthum Bl.) PADA MENCIT PUTIH BETINA

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) Program Studi Ilmu Farmasi

Oleh : Endra Dewi Prianingrum NIM : 038114034

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2006

i


ii


iii


Tuhan mengabulkan doa kita dengan tiga cara, yaitu.... Apabila tuhan berkata ‘YA’ maka kita akan mendapatkan apa yang kita inginkan Apabila Tuhan berkata ‘TIDAK’ maka kita akan mendapatkan yang lebih baik Dan apabila Tuhan berkata ‘TUNGGU’ maka kita akan mendapatkan apa yang terbaik untuk kita Oleh karena itu.... If you have problems don’t say “GOD, I HAVE A BIG PROBLEM” But say, “PROBLEM, I HAVE A BIG GOD” And always believe that everything will be alright

Karya kecilku ini kupersembahkan untuk…. Allah SWT atas segala rahmat dan hidayah-Nya Papa, Mama, adikku Angga, dan seluruh keluarga besarku yang selalu memberikan doa dan dukungan baik moril maupun materiil Sahabat-sahabatku yang memberikan bantuan dan dorongan semangat Almamaterku tercinta

iv


v


PRAKATA

Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas berkat dan karunia-Nya sehingga penyusun dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Efek Anti-Inflamasi Ekstrak Etanol Daun Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) Pada Mencit Putih Betina”, sebagai salah satu syarat untuk menyelesaikan pendidikan strata satu. Dalam menyusun skripsi ini penyusun banyak mendapat bantuan berupa bimbingan, dorongan, sarana, maupun finansial dari berbagai pihak. Untuk itu penyusun mengucapkan banyak terima kasih kepada 1. dr. Luciana Kuswibawati, M.Kes., selaku Dosen Pembimbing Utama atas bimbingan, pengarahan, waktu, dan dukungannya selama penelitian sampai penyusunan skripsi ini. 2. Drs. Mulyono, Apt., selaku Dosen Penguji yang telah memberikan masukan , kritik,dan saran untuk kesempurnaan skripsi ini. 3. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt., selaku Dosen Penguji yang telah memberikan masukan, kritik, dan saran untuk kesempurnaan skripsi ini. 4. Rita Suhadi, M.Si., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. 5. Mas Supri dan Mbak Ina yang telah bersedia memberikan sumbangan natrium diklofenak yang digunakan sebagai kontrol positif dalam penelitian ini. 6. Kepala BPTO Tawangmangu yang telah membantu dalam penyediaan senggani sebagai tumbuhan yang diteliti.

vi


7. Mas Heru, Mas Warjiman, Mas Kayat, Mas Wagiran dan Mas Ottok yang telah membantu dalam terlaksananya penelitian ini. 8. Teman-teman “seperjuangan” di Laboratorium, Galuh, Prita, dan Aan yang banyak membantu saat penelitian. 9. Sahabat baikku, Galuh Nindya Tyas Tusthi, Rosalia Prita Riadiani, dan Dika Aprilia K., atas segala kebersamaan baik suka maupun duka dan tempat curhatku. 10. Teman-teman kos “LUNA”, mami Ponco, Nopex-Pothil, Ika-Tholo, Ria-Chan, Yunex, Ita-Kun, Ita-Chan, Venie-Yem, Din-Che, Kadex-Jelex, De2-Q, Angga, Ella2, Mb-Vee, mb-Eva, dan Anien, yang mengisi keceriaan hari-hariku di kos. 11. Teman-temanku kelas A, Ratih”33”(makasih yo laptopnya), Watie, Angger, BamBang, To2x, Bangun, Ble-Q, Gondhes, Nella, Nandoet, Sarie-Yem, Vera, Agata, Dita, Rosa, Ana, Tina, Mitha, Ndari, Nike, dll yang memberiku semangat untuk masuk kuliah. 12. Teman-teman KKN kelompok 16 “ja2x, timoer, henry, anton, inop, tic-tic, heni, dan echik”, atas segala bantuan dan kebersamaannya selama KKN. 13. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu per satu yang telah membantu penyelesaian skripsi ini. Penyusun menyadari bahwa penelitian yang telah dilakukan untuk penyusunan skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan. Walaupun demikian penyusun berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi masyarakat dan perkembangan ilmu pengetahuan.

Penulis

vii


DAFTAR ISI

Halaman HALAMAN JUDUL ....................................................................................

i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ...........................................

ii

HALAMAN PENGESAHAN ......................................................................

iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ...................................................................

iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .......................................................

v

PRAKATA ...................................................................................................

vi

DAFTAR ISI .................................................................................................

viii

DAFTAR TABEL .........................................................................................

xii

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................

xiv

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................

xvi

INTISARI .....................................................................................................

xviii

ABSTRACT ....................................................................................................

xix

BAB I. PENGANTAR ..................................................................................

1

A. Latar Belakang .........................................................................................

1

B. Permasalahan ............................................................................................

3

C. Keaslian Penelitian ...................................................................................

4

D. Manfaat Penelitian ...................................................................................

5

1. Manfaat teoritis .................................................................................

5

2. Manfaat praktis .................................................................................

5

viii


E. Tujuan Penelitian ......................................................................................

6

1. Tujuan umum ....................................................................................

6

2. Tujuan khusus ...................................................................................

6

BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ..........................................................

7

A. Tumbuhan Senggani ...............................................................................

7

1. Klasifikasi .........................................................................................

7

2. Sinonim .............................................................................................

7

3. Deskripsi ...........................................................................................

8

4. Nama daerah .....................................................................................

8

5. Kandungan kimia ..............................................................................

9

6. Khasiat dan kegunaan senggani ........................................................

15

B. Radikal Bebas Dan Antioksidan .............................................................

16

1. Radikal bebas ....................................................................................

16

2. Antioksidan .......................................................................................

18

C. Metode Penyarian ...................................................................................

20

D. Inflamasi .................................................................................................

22

1. Patogenesis ........................................................................................

22

2. Gejala ................................................................................................

24

3. Mekanisme ........................................................................................

26

E. Obat Anti inflamasi ................................................................................

30

F. Natrium Diklofenak ................................................................................

34

G. Metode Uji Efek Anti inflamasi ............................................................

35

H. Landasan Teori ........................................................................................

38

ix


I. Hipotesis .................................................................................................

39

BAB III. METODOLOGI PENELITIAN ....................................................

40

A. Jenis Rancangan Penelitian ......................................................................

40

B. Metode Penelitian .....................................................................................

40

C. Variabel dan Definisi Operasional ...........................................................

41

1. Variabel .............................................................................................

41

2. Definisi operasional ..........................................................................

42

D. Bahan dan Alat Penelitian ........................................................................

42

E. Alat atau Instrumen Penelitian .................................................................

44

F. Tata Cara Penelitian .................................................................................

44

1. Identifikasi/determinasi daun senggani .............................................

44

2. Pembuatan ekstrak etanol daun senggani .........................................

44

3. Persiapan hewan uji ..........................................................................

45

4. Pembuatan suspensi karagenin 1% ..................................................

46

5. Pembuatan CMC Na 1% ..................................................................

46

6. Pembuatan larutan natrium diklofenak .............................................

46

7. Pembuatan suspensi ekstrak etanol daun senggani ...........................

46

8. Penetapan dosis .................................................................................

47

9. Uji pendahuluan rentang waktu pemotongan kaki setelah injeksi karagenin ...........................................................................................

48

10. Uji pendahuluan dosis efektif natrium diklofenak ............................

49

11. Uji pendahuluan waktu pemberian natrium diklofenak dengan dosis efektif ................................................................................................

x

49


12. Uji pendahuluan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani ............................................................................................

50

13. Perlakuan hewan uji ..........................................................................

50

14. Perhitungan % respon anti inflamasi ................................................

52

G. Analisis Hasil ...........................................................................................

53

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .....................................................

54

A. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Senggani .............................................

54

B. Hasil Uji Pendahuluan ............................................................................

54

1. Uji pendahuluan rentang waktu pemotongan kaki setelah injeksi karagenin 1% ....................................................................................

55

2. Uji pendahuluan dosis efektif natrium diklofenak ............................

58

3. Uji pendahuluan waktu pemberian natrium diklofenak dengan dosis efektif ................................................................................................

61

4. Uji pendahuluan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani ............................................................................................

63

C. Hasil Uji Efek Anti inflamasi ................................................................

66

D. Perbandingan Hasil Penelitian Dengan Penelitian Lain .........................

78

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ......................................................

85

A. Kesimpulan ..............................................................................................

85

B. Saran .........................................................................................................

85

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................

86

LAMPIRAN ..................................................................................................

91

BIOGRAFI PENULIS ..................................................................................

124

xi


DAFTAR TABEL

Halaman Tabel I.

Rangkuman hasil anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95% data bobot udema kaki mencit pada uji pendahuluan selang waktu pemotongan kaki mencit setelah diinjeksi karagenin 1% ..............................................................................

Tabel II.

56

Rata-rata bobot udema kaki mencit akibat diinjeksi karagenin 1% secara subplantar pada selang waktu tertentu beserta hasil uji Scheffe ...................................................................................

57

Tabel III. Rangkuman hasil anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95% data bobot udema kaki mencit pada uji pendahuluan akibat pemberian natrium diklofenak dalam tiga peringkat dosis.............................................................................................

59

Tabel IV. Rata-rata bobot udema kaki mencit pada penetapan dosis efektif natrium diklofenak dan hasil uji scheffe ........................ Tabel V.

60

Rangkuman hasil anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95% data bobot udema kaki mencit pada uji pendahuluan waktu pemberian natrium diklofenak dengan dosis efektif (9,75 mg/kgBB) dalam rentang waktu tertentu ..........................

62

Tabel VI. Rata-rata bobot udema kaki mencit pada penetapan Waktu pemberian dosis efektif natrium diklofenak dan hasil uji Scheffe ..................................................................................

xii

62


Tabel VII. Rangkuman hasil anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95% data bobot udema kaki mencit pada uji pendahuluan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani (dosis 1670 mg/kgBB) dalam rentang waktu tertentu ...................................

64

Tabel VIII. Rata-rata bobot udema kaki mencit pada penetapan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani (dosis 1670 mg/kgBB) dan hasil uji Scheffe ...................................................................

65

Tabel IX. Rangkuman hasil anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95% persentase efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani dalam empat peringkat dosis beserta kontrolnya................................................................................... Tabel X.

71

Data bobot udema kaki mencit, persentase efek anti inflamasi, dan uji Shceffe pada perlakuan ekstrak etanol daun senggani dalam empat peringkat dosis beserta kontrolnya ......................

72

Tabel XI. Data perbandingan persen efek anti inflamasi dan efek analgesik ekstrak etanol daun senggani dengan ekstrak petroleum eter daun senggani .....................................................

xiii

78


DAFTAR GAMBAR

Halaman Gambar 1.

Struktur umum flavonoid ........................................................

10

Gambar 2.

Struktur rutin ...........................................................................

11

Gambar 3.

Struktur umum kuersetin .........................................................

12

Gambar 4.

Struktur umum kuersitrin ........................................................

13

Gambar 5.

Struktur umum steroid ............................................................

13

Gambar 6.

Patogenesis dan gejala inflamasi .............................................

26

Gambar 7.

Mekanisme inflamasi ..............................................................

29

Gambar 8.

Obat anti inflamasi non steroid ...............................................

31

Gambar 9.

Struktur natrium diklofenak ....................................................

35

Gambar 10. Diagram batang rata-rata bobot udema kaki mencit hasil uji pendahuluan penetapan rentang pemotongan kaki setelah injeksi karagenin.1% sublantar ...............................................

58

Gambar 11. Diagram batang rata-rata bobot udema kaki mencit hasil uji pendahuluan penetapan dosis efektif natrium diklofenak .......

61

Gambar 12. Diagram batang rata-rata bobot udema kaki mencit hasil uji pendahuluan penetapan waktu pemberian dosis efektif natrium diklofenak ..................................................................

63

Gambar 13. Diagram batang rata-rata bobot udema kaki mencit hasil uji pendahuluan penetapan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani ..........................................................................

xiv

66


Gambar 14. Diagram batang rata-rata bobot udema kaki mencit akibat perlakuan ekstrak etanol daun senggani dalam empat peringkat dosis beserta kontrolnya ..........................................

70

Gambar 15. Diagram batang persentase efek anti inflamasi perlakuan ekstrak etanol daun senggani beserta kontrolnya ....................

73

Gambar 16. Diagram batang perbandingan persentase efek anti inflamasi dan efek analgesik ekstrak etanol daun senggani ....................

79

Gambar 17. Diagram batang perbandingan persentase efek antiInflamasi ekstrak etanol daun senggani dan ekstrak petroleum eter ..........................................................................

81

Gambar 18. Diagram batang perbandingan persen efek anti inflamasi dan efek analgesik ekstrak etanol daun senggani dengan ekstrak petroleum eter .............................................................

84

Gambar 19. Tumbuhan Senggani ................................................................

91

Gambar 20. Daun Senggani ........................................................................

92

Gambar 21. Serbuk Daun Senggani ............................................................

93

Gambar 22. Ekstrak Etanol Daun Senggani ................................................

94

xv


DAFTAR LAMPIRAN

Halaman Lampiran 1.

Foto tumbuhan senggani ......................................................

91

Lampiran 2.

Foto daun senggani ..............................................................

92

Lampiran 3.

Foto serbuk daun senggani ...................................................

93

Lampiran 4.

Foto ekstrak etanol daun senggani .......................................

94

Lampiran 5.

Skema kerja uji pendahuluan penetapan selang waktu pemotongan kaki mencit setelah injeksi karagenin 1% .......................................................................

Lampiran 6.

Hasil dan analisis hasil uji pendahuluan rentang waktu pemotongan setelah injeksi karagenin 1% ............................

Lampiran 7.

99

Hasil dan analisis hasil uji pendahuluan dosis efektif natrium diklofenak ...............................................................

Lampiran 9.

96

Skema kerja uji pendahuluan pemberian Natrium diklofenak dalam tiga peringkat dosis .................................

Lampiran 8.

95

100

Skema kerja uji pendahuluan waktu pemberian Natrium diklofenak dosis efektif (9,75 mg/kgBB) .............................

103

Lampiran 10. Hasil dan analisis hasil uji pendahuluan waktu pemberian natrium diklofenak dengan dosis efektif ..............................

103

Lampiran 11. Skema kerja uji pendahuluan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani ............................................................

xvi

107


Lampiran 12. Hasil dan analisis hasil uji pendahuluan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani ...............................................

108

Lampiran 13. Skema kerja perlakuan hewan uji ........................................

111

Lampiran 14. Hasil dan analisis hasil bobot udema kaki mencit akibat pemberian ekstrak etanol daun senggani dalam empat peringkat dosis dan kontrolnya ............................................

112

Lampiran 15. Hasil perhitangan dan analisis hasil persen (%) efek anti inflamasi pemberian ekstrak etanol daun senggani dalam empat peringkat dosis dan kontrolnya .......................

116

Lampiran 16. Hasil perhitungan potensi relatif efek anti inflamasi pemberian ekstrak etanol daun senggani dalam empat peringkat dosis .....................................................................................

121

Lampiran 17. Certificate of Analysis ..........................................................

122

Lampiran 18. Surat pernyataan pengambilan dan determinasi senggani dari BPTO ............................................................................

xvii

123


INTISARI

Telah dilakukan penelitian tentang efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada mencit putih betina dengan menggunakan metode induksi udema pada kaki belakang hewan uji dengan karagenin 1% secara subplantar yang dimodifikasi oleh Langford dkk. Tujuan penelitian ini adalah untuk membuktikan kebenaran efek anti inflamasi dan mengetahui besarnya potensi relatif efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani dalam menghambat terjadinya udema. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Subjek uji menggunakan mencit putih betina galur Swiss, berumur 2-3 bulan dengan berat badan 20-30 gram. Tiga puluh lima ekor mencit dikelompokkan menjadi 7 kelompok, yaitu kelompok kontrol positif natrium diklofenak, kelompok kontrol negatif karagenin 1%, kelompok kontrol negatif CMCNa 1%, dan 4 kelompok perlakuan ekstrak etanol daun senggani dengan 4 dosis berbeda, 850 mg/kg BB, 1000 mg/kg BB, 1330 mg/kg BB, dan 1670 mg/kg BB. Tiga puluh menit kemudian kaki kiri mencit bagian belakang diinjeksi dengan karagenin 1%, setelah 3 jam hewan uji dikorbankan dan kedua kakinya dipotong pada sendi torsocrural, kemudian ditimbang. Data bobot udema yang diperoleh dianalisis dengan uji Kolmogorov-Smirnov untuk melihat distribusi datanya, kemudian dilanjutkan dengan analisis varian (Anova) pola satu arah dengan taraf kepercayaan 95% yang dilanjutkan dengan uji Scheffe. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun senggani memiliki efek anti inflamasi. Ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kg BB, 1000 mg/kg BB, 1330 mg/kg BB, dan 1670 mg/kg BB memiliki efek anti inflamasi berturut-turut sebesar 10,75 %; 11,57 %; 32,67 %; dan 25,07 %. Potensi relatif efek anti inflamasi secara berturut-turut adalah sebagai berikut : 18,89 %; 20,33 %; 57,42 %; dan 44,06%. Kata kunci : anti inflamasi, ekstrak etanol daun senggani

xviii


ABSTRACT

The research about anti-inflammatory effect of ethanolic extract senggani’s leaves (Melastoma polyanthum Bl.) in white female mice by using an inducing oedema on test animals hind paw with sub plantar injection of 1 % carrageenan that is modified by Langford et all had been done. The goal of this research is to prove the truth of anti-inflammation effect and to know the amount of potency of antiinflammation effect of ethanolic extract of senggani leaves in preventing oedema. This research is pure experimental research. The subject of this experiment was Switzerland white female mice whose age 2-3 months and its weight is 20-30 gram. Thirty five mice were divided into seven groups : the group of positive control natrium diklofenak, group of negative control carrageenan 1%, group of negative control CMC-Na 1%, and 4 groups as treatment with ethanolic extract of senggani leaves use 4 different doses, 850 mg/kg BW, 1000 mg/kg BW, 1330 mg/kg BW, and 1670 mg/kg BW. Successively thirty minutes later, those mice’s left legs were injected with carrageenan 1%. Then, four hours later those mice were killed and its two legs were cut at torsocrural joint. Data about oedema weight was analyzed with Kolmogorov-Smirnov to see its distribution. After that, this research was continued with variant analysis of one direction pattern then researcher did scheffe test. The result of the analysis shows that ethanolic extract of senggani leaves has anti-inflammation effect of ethanolic extract senggani’s leaves whose dosage 850 mg/kg BW, 1000 mg/kg BW, 1330 mg/kg BW, and 1670 mg/kg BW has the percentage of anti-inflammation effect was successively 10,75 %; 11,57 %; 32,67 %; and 25,07 %. Relative potency of anti-inflammation effect is successively 18,89 %; 20,33 %; 57,42 %; dan 44,06%. Key words : anti-inflammatory, ethanolic extract senggani’s leaves

xix

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI 1

BAB I PENGANTAR

A. Latar belakang Pada masa sekarang ini dimana perekonomian Indonesia sedang mengalami krisis, harga-harga melambung tinggi sama halnya dengan biaya pengobatan yang juga semakin mahal. Akibat dari mahalnya biaya pengobatan sekarang ini membuat masyarakat cenderung beralih menggunakan obat tradisional yang berasal dari alam. Obat tradisional selain murah bahan bakunya pun mudah diperoleh karena negara kita merupakan negara tropis yang kaya akan berbagai jenis tumbuhan. Masyarakat Indonesia telah mengenal dan menggunakan obat tradisional sejak dahulu kala yang digunakan secara turun temurun sampai sekarang. Obat tradisional merupakan salah satu alternatif yang digunakan sebagai sarana perawatan kesehatan dan untuk menanggulangi berbagai macam penyakit Budaya bangsa Indonesia yang berkaitan dengan pemanfaatan alam, khususnya untuk pemeliharaan kesehatan dan pengobatan penyakit dilaksanakan berdasarkan pengalaman secara turun-temurun. Dari pengalaman tersebut ternyata banyak tumbuhan di alam sekitar memberi manfaat kesehatan bagi penggunanya. Pengalaman tersebut secara turun-temurun dikembangkan dan diwariskan, sehingga obat tradisional dapat dimanfaatkan sampai sekarang sebagai sarana perawatan kesehatan masyarakat (Sudibyo,1998).


Departemen Kesehatan Republik Indonesia melalui Undang-Undang No. 23 tahun 1992 tentang kesehatan mendefinisikan obat tradisional sebagai bahan atau ramuan bahan yang berupa bahan-bahan tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan galenik, atau campuran dari bahan tersebut yang secara turun temurun telah digunakan untuk pengobatan berdasarkan pengalaman. Obat tradisional sudah sejak lama digunakan secara luas di Indonesia, peran obat tradisional sebagai pendamping obat modern masih sangat kuat (Anonim, 1992). Penggunaan obat tradisional selama ini terutama didasarkan pada tujuan dan pengalaman empiris atau pengetahuan yang diwariskan turun temurun belum didasarkan pada hasil penelitian dan percobaan yang seksama (Setiono dan Djatmiko, 1986). Penyakit inflamasi atau biasa disebut dengan radang merupakan penyakit yang banyak diderita oleh masyarakat. Penyakit ini merupakan reaksi jaringan terhadap semua bentuk lesi, baik lesi kimia maupun fisis dengan tanda utama bengkak, nyeri, kemerahan, panas serta hilangnya fungsi. Reaksi inflamasi diperlukan karena inflamasi ini merupakan respon biologik dari reaksi- reaksi kimia berurutan dan berfungsi melindungi tubuh dari infeksi dan memperbaiki jaringan yang rusak akibat trauma (Wilmana, 1995). Tetapi bila reaksi ini berlebihan maka akan merugikan sehingga diperlukan obat anti inflamasi untuk mengendalikan reaksi inflamasi sampai taraf yang tidak merugikan. Salah satu tumbuhan yang telah dimanfaatkan untuk pengobatan tradisional melawan dan mengendalikan rasa nyeri maupun radang adalah senggani (Melastoma polyanthum Bl.). Tumbuhan ini berkhasiat untuk mengatasi gangguan pencernaan makanan (dispepsi), disentri basiler, diare, hepatitis, keputihan (leukorea), sariawan,


darah haid berlebihan, pendarahan rahim di luar waktu haid, mimisan, berak darah (melena), wasir berdarah, radang dinding pembuluh darah disertai pembekuan darah di dalam salurannya (tromboangitis), air susu ibu (ASI) tidak lancar, keracunan singkong, mabuk minuman keras, busung air, obat kumur, sakit perut, borok (obat luar), dan bisul (Dalimartha, 1999, Soedibyo, 1998). Pereda demam (anti-piretik), penghilang

nyeri

(analgetik),

peluruh

kencing

(diuretik),

menghilangkan

pembengkakan (anti inflamasi), melancarkan aliran darah, dan penghenti pendarahan (hemostatis) (Anonim, 2006). Senyawa kimia yang terkandung di dalam tumbuhan senggani yaitu flavonoid, saponin, tanin, dan steroid dapat larut dalam pelarut etanol yang bersifat polar ini. Flavonoid dan steroid diduga dapat menimbulkan efek anti inflamasi. Oleh karena itu digunakan pelarut etanol sebagai larutan pengekstrak daun senggani. Di dalam penelitian ini akan dilakukan uji efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani pada mencit putih betina sehingga dapat digunakan sebagai acuan penelitian berikutnya tentang pengembangan daun senggani sebagai obat anti inflamasi.

B. Permasalahan Berdasarkan uraian yang telah dijelaskan di atas, maka permasalahan yang muncul dalam penelitian ini dapat dirumuskan sebagai berikut ini. 1. Apakah ekstrak etanol daun senggani mempunyai efek anti inflamasi terhadap mencit?


2. Seberapa besar persentase efek anti inflamasi yang dimiliki ekstrak etanol daun senggani untuk menghambat terjadinya inflamasi? 3. Seberapa besar potensi relatif efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani untuk menghambat terjadinya inflamasi?

C. Keaslian Penelitian Berdasarkan penelusuran pustaka yang telah dilakukan penulis, penelitian tentang senggani sudah banyak dilakukan. Namun penelitian mengenai efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani pada mencit belum pernah dilakukan. Adapun penelitian tentang senggani yang sudah dilakukan antara lain di bawah ini. 1. Penelitian Terhadap Kandungan Tanin Dalam Daun Tumbuhan Senggani (Yosidha, Nakata, Hosotani, Nitta, dan Okuda, 1992) 2. Daya Antifertilitas dan Efek Toksik Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Tikus Betina (Christina, 2000) 3. Teratogenisitas Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Tikus Putih (Japri, 2001) 4. Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) terhadap Jaringan Hati, Ginjal, Ovarium, dan Uterus Tikus Betina (Phin, 2001) 5. Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma Polyanthum Bl.) Terhadap Spermatogenitas Tikus Putih (Irwan, 2001)


6. Toksisitas Akut Infus Daun Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Mencit (Wiwin, 2002) 7. Uji Daya Antifungus Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) terhadap Candida albicans secara in vitro (Katarina, 2002) 8. Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Tikus Jantan dan Betina (Ismirawati, 2002) 9. Uji Daya Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Senggani (Melastoma affine D. Don.) Terhadap Bakteri Gram Positif dan Bakteri Gram Negatif (Toba, 2003)

D. Manfaat Penelitian 1

Manfaat Teoritis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan gambaran dan dapat digunakan untuk pengembangan ilmu pengetahuan pada umumnya dan dalam bidang ilmu kefarmasian pada khususnya mengenai ekstrak etanol daun senggani sebagai obat anti inflamasi.

2

Manfaat Praktis Penelitian ini diharapkan mampu memberikan informasi kepada masyarakat mengenai kemampuan senggani sebagai obat anti inflamasi dan dapat memberikan alternatif dalam penyediaan obat tradisional anti inflamasi menggunakan senggani yang pada masyarakat.


E. Tujuan Penelitian 1. Secara Umum Penelitian ini bertujuan untuk menambah informasi kepada masyarakat tentang penggunaan obat tradisional yang berasal dari bahan alam sebagai obat anti inflamasi.

2. Secara Khusus Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani pada mencit putih betina dan seberapa besar persentase efek anti inflamasi yang dimiliki ekstrak etanol daun senggani sebagai obat anti inflamasi dalam menghambat terjadinya inflamasi serta untuk mengetahui besarnya potensi relatif efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A. Tumbuhan senggani 1. Klasifikasi Divisio

: Spermatophyta

Sub divisio

: Angiospermae

Clasis

: Dicotyledoneae

Sub clasis

: Dialypetalae

Ordo

: Myrtales

Familia

: Melastomataceae

Genus

: Melastoma

Spesies

: Melastoma polyanthum Bl.

(Van Steenis, 1975)

2. Sinonim Melastoma malabathicum L., Melastoma candidum D.Don, dan Melastoma offine G.Don (Dalimartha, 1999; Anonim, 1995). Di Indo-China terdapat 4 (empat) spesies, yaitu Melastoma candidum D.Don (Melastoma septemnervium Lour. non Jacq), Melastoma dodecandum Lour. (Melastoma repens Desr.), Melastoma saigonense (O. Ktze) Merr. (Melastoma villosum Lodd non Aubl.), dan Melastoma affine D.Don. (Melastoma polyanthum Bl.) umumnya paling banyak di Indonesia (Lily, 1980).


3. Deskripsi Senggani merupakan tumbuhan liar pada tempat yang cukup mendapat sinar matahari, seperti lereng gunung, semak belukar, lapangan yang tidak terlalu gersang, atau di daerah objek wisata sebagai tanaman hias. Tumbuhan ini bisa ditemukan sampai ketinggian 1.650 m dari permukaan laut (Dalimartha, 1999). Senggani termasuk tumbuhan perdu, tinggi 0, 5-4 m. Cabang yang muda bersisik. Daun bertangkai, berhadapan, memanjang, atau bulat telur memanjang dengan ujung runcing, bertulang daun 3, 2-20 x 1–8 cm, kedua belah sisi berbulu. Bunga bersama-sama 5–18, pada ujung dan di ketiak daun yang tertinggi, berbilang 5–(4-6). Tabung kelopak berbentuk lonceng, bersisik, taju dengan sejumlah gigi kecil. Daun pelindung bersisik, langsing, 5 x 2 mm, tidak menutupi kuncup. Daun mahkota bulat telur terbalik, panjang 2–3 cm, ungu merah, jarang putih. Benang sari 10-(8-12), memanjang dari penghubung sari di bawah ruang sari pada benang sari yang panjang 6-16 mm, pada yang pendek 2-7 mm. Bakal buah beruang 5-(4-6), dihubungkan oleh bingkai terhadap tabung kelopak. Buah buni berbentuk periuk, membuka melintang secara tidak teratur, dimana terlepas bingkai biji yang merah tua. Biji berbentuk kerang. Senggani dapat tumbuh di padang rumput, semak hutan kecil, 5-2000 m (Van Steenis, 1975).

4. Nama daerah Di tiap daerah yang berbeda tumbuhan ini memiliki nama yang berbeda pula antara lain : Senggani, Kluruk, Sengganen (Jawa), Senduduk (Melayu), Harendong (Sunda), Kemaden (Madura) (Dalimartha, 1999).


5. Kandungan kimia Kandungan kimia yang terdapat dalam tumbuhan senggani, khususnya pada bagian daun adalah flavonoid, steroid/triterpenoid, tanin 4,3 % (Anonim, 1995). Daun senggani juga mengandung saponin (Dalimartha, 1999). Hasil isolasi ekstrak aseton daun harendong (Melastoma malabathricum) dari Sukabumi mengandung 3 dimer tanin hidrolisa baru yaitu malabathrins B, C, dan D dan 11 tanin yang mencakup dimer nobotanin B, G, dan H serta trimer nobotanin J (Yoshida dkk., 1992). Analisis fitokimia tumbuhan senggani menunjukkan senggani mengandung βsitosterol, α-amyrin, sitosterol 3-O-β-D-glucopyranoside, kuersetin, kuersitrin, dan rutin (Sulaiman dkk., 2004). a. Flavonoid Flavonoid merupakan senyawa metabolit sekunder yang banyak terdapat pada tumbuh-tumbuhan. Kandungan senyawa flavonoid di dalam tumbuhan sangat rendah, yaitu sekitar 0,25% dan secara umum terikat atau terkonjugasi dengan senyawa gula membentuk glikosida (Robinson, 1991). Flavonoid umumnya larut dalam air dan dapat diekstraksi dengan etanol 70%. Pada penyarian lebih lanjut digunakan petroleum eter (PE), etenol 80%, dan pelarut organik lain, flavonoid tetap berada dalam lapisan air (Harborne, 1984). Efek flavonoid terhadap organisme sangat banyak macamnya sehingga tumbuhan yang mengandung flavonoid dapat dipakai dalam pengobatan (Robinson, 1991). Flavonoid menunjukkan aktivitasnya sebagai anti alergi, anti inflamasi, anti mikrobial, dan anti kanker. Pada kenyataannya, flavonoid bekerja sebagai anti oksidan kuat, melindungi dari serangan oksidatif dan radikal bebas (Anonim, 2006a).


Di antara senyawa flavonoid yang telah lama dikenal dan merupakan suatu kelompok antioksidan yakni, kelompok polifenol memiliki kemampuan sebagai scavenger superoksida, oksigen singlet, dan radikal peroksi lipid (Sitompul, 2003). Flavonoid dapat bekerja sebagai inhibitor lipoksigenase. Penghambatan lipoksigenase dapat menimbulkan pengaruh lebih luas karena reaksi lipoksigenase merupakan langkah pertama pada jalur yang menuju ke hormon eikosanoid seperti prostaglandin dan tromboksan (Robinson, 1991). Karakteristik struktur flavonoid yang mampu memberikan efek antioksidan antara lain karena adanya (1) gugus katekol (O-dihidroksi) pada cincin B yang mempunyai sifat sebagai donor proton, (2) gugus piragalol (trihidroksi) pada cincin B, (3) gugus 4-oxo pada cincin heterosiklik, (4) gugus 3-OH pada cincin heterosiklik, serta (5) gugus 5-OH dan 7-OH yang potensial pada keadaan tertentu (Middleton dkk., 2000 cit Ladoangin, 2004). 8

2'

1

O

7

2

1'

3'

B

4'

A 3

6 5

6'

5'

4

Gambar 1. Struktur umum flavonoid (Robinson, 1991). Rutin dapat juga disebut dengan rutosida, kuersetin-3-rutinosida, maupun sophorin, termasuk di dalam golongan flavonoid. Rutin adalah glikosida flavonol yang terdiri dari kuersetin dan disakarida rutinosa. Rutin tergolong kuersetin glikosida (Harborne, 1984). Rutin banyak ditemukan di dalam tumbuhan, buah dan sayuran (Anonim, 2006b).


Gambar 2. Struktur rutin (Anonim, 2006b). Rutin merupakan antioksidan kuat. Rutin juga memproduksi perusak radikal oksigen. Rutin dapat membantu dalam menghentikan edema pada vena yang mana merupakan gejala awal dari penyakit vena kronik pada kaki. Rutin juga mempunyai efek anti inflamasi, efek pencegahan dan penyembuhan, menghambat kanker dan kondisi pre-kanker. Selain itu, dapat mencegah atherogenesis, mereduksi sitotoksisitas oksidasi LDL-kolesterol, dan menurunkan resiko penyakit jantung (Anonim, 2006b). Kandungan glikosida flavonoida yang mungkin merupakan kuersetin glikosida inilah yang diduga berperan sebagai anti inflamasi, karena kuersetin telah diketahui berperan sebagai anti inflamasi dengan efeknya yang dapat menghambat pelepasan histamin (merupakan salah satu mediator inflamasi), atau mengurangi produksi asam arakhidonat dengan mekanisme penghambatan pada enzim fosfolipase, selain itu kuersetin juga dapat menghambat pembentukan leukotrien dengan mekanisme hambatan pada 5-lipoksigenase (Bisset, 1991) Kuersetin merupakan senyawa paling aktif dari flavonoid, dan banyak tumbuhan obat yang memiliki kandungan kuersetin yang tinggi memberikan aktivitas yang tinggi pula. Kuersetin menunjukkan secara signifikan aktivitas sebagai anti


inflamasi karena menghambat secara langsung beberapa proses awal dari inflamasi, misalnya, menghambat pembuatan dan pelepasan histamin dam mediator inflamasi lainnya (Anonim, 2006a). Kuersetin juga dapat menghambat siklooksigenase yang berperan pada metabolisme asam arakhidonat, sehingga dapat menurunkan agregasi platelet (Sitompul, 2003). Faktor yang menentukan aktivitas penghambatan ini terutama adalah gugus OH pada cincin B dari struktur molekul flavonoid (Middleton dkk., 2000 cit Ladoangin, 2004). Kuersetin memiliki aktivitas antioksidan yang kuat karena memiliki tiga ciri pada strukturnya, yaitu 3’4’-dihidroksi pada cincin B; 2,3-ikatan rangkap pada cincin C; sebuah gugus 3-hidroksil pada cincin C dan sebuah gugus 5-hidroksil pada cincin A (Sibuea, 2004). Dilihat dari struktur kimianya, kuersetin memiliki aktivitas kuat sebagai pemberi hidrogen (hidrogen donating) karena kandungan hidroksilasi cukup, yakni 5 gugus OH dan empat diantaranya terdapat pada sisi aktif (C5, C7, C3’, dan C4’). Selain itu kuersetin memiliki struktur yang mampu sebagai pengkelat logam, yakni gugus karbonil pada C4 dan gugus hidroksil pada C3 dan C5 (Sibuea, 2004) OH HO

O

OH OH

OH

O

Gambar 3. Struktur umum kuersetin (Harborne, 1984) Jenis flavonoid yang juga terdapat dalam senggani adalah kuersitrin. Kuersitrin sudah diuji mempunyai aktivitas sebagai anti inflamasi akut dan kronis pada tikus terinduksi trinitrobenzenesulfonic-acid. Pemberian kuersitrin secara


peroral dengan dosis 1-5 mg/kgBB dapat menurunkan tingkat myeloperoksida dan alkalin fosfat. Peningkatan atau penurunan dosis flavonoid ditandai dengan menurunnya efek. Efek anti inflamasi akut kuersetin tidak berpengaruh terhadap pengrusakan fungsi netrofil atau penghambatan lipoksigenase. Hal ini mungkin disebabkan oleh adanya proteksi mukosa atau peningkatan perbaikan mukosa sekunder untuk kenaikan pertahanan melawan oksidatif berbahaya dan perbaikan fungsi usus normal. Akibatnya dapat menurunkan resiko terjadinya kerusakan usus pada saat terjadi diare (Medina dkk., 1996)

Gambar 4. Struktur umum kuersitrin (Farlex, 2005)

b. Steroid Steroid merupakan lipid yang dikarakteristikkan mempunyai kerangka karbon yang dihubungkan dengan empat cincin (Anonim, 2006c).

Gambar 5. Struktur umum steroid (Anonim, 2006c).


Sebagian besar senyawa steroid dan terpenoid adalah senyawa non polar dan karena itu dapat dipisahkan dari komponen tumbuhan yang polar dengan mengekstraksi menggunakan pelarut seperti benzena atau eter (Robinson, 1995). Sterol merupakan senyawa steroid berbentuk alkohol dengan kerangka karbon C27-C29 dan mempunyai rantai cabang alifatik. Sterol yang terdapat dalam tumbuhan digolongkan dalam fitosterol, misalnya, β-sitosterol (Harborne, 1984). Senggani juga memiliki komponen aktif steroid, misalnya β-sitosterol, α-amyrin, dan sitosterol 3-O-β-D-glucopyranoside. Pada umumnya steroid dapat bermanfaat untuk mengurangi inflamasi dan sebagai obat kontrasepsi oral.

c. Tanin Tanin merupakan substrat kompleks yang biasanya terjadi sebagai campuran polifenol yang sulit diseparasi karena tidak dapat dikristalkan. Tanin terdapat luas dalam tumbuhan berpembuluh dalam angiospermae khususnya jaringan kayu. Dalam industri, tanin merupakan senyawa yang berasal dari tumbuhan yang mampu mengubah kulit hewan mentah menjadi kulit siap pakai. Sedangkan dalam dunia kesehatan tanin bermanfaat sebagai astringen yang mengakibatkan pengurangan bengkak (edema), radang, dan sekresi pada gastrointestinal (Harborne, 1984). Tanin terhidrolisiskan dan glikosida dapat diekstraksi dengan air panas atau campuran etanol-air (Robinson, 1995).


d. Saponin Saponin adalah senyawa glikosida steroid, steroid alkaloid, atau triterpen yang ditemukan dalam tumbuhan, khususnya pada kulit tumbuhan sebagai lapisan pelindung. Saponin dipercaya bermanfaat untuk diet manusia dan pengontrol kolesterol. Tetapi beberapa mempunyai sifat racun, misalnya, soapberry, jika dimakan dan menyebabkan ruam pada kulit. Saponin jenis ini disebut sebagai sapotoksin (Anonim, 2006d). Beberapa penelitian menunjukkan bahwa saponin mempunyai spektrum yang lebar sebagai anti-jamur, anti-bakteri, menurunkan kadar kolesterol darah, dan menghambat pembentikan sel kanker (Davidson, 2004). Saponin adalah glikosida triterpena dan sterol dan telah terdeteksi dalam lebih dari 90 suku tumbuhan. Saponin merupakan senyawa aktif permukaan dan bersifat seperti sabun, serta dapat dideteksi berdasarkan kemampuannya membentuk busa dan menghemolisis sel darah. Pencarian saponin dalam tumbuhan telah dipicu oleh kebutuhan akan sumber sapogenin yang mudah diperoleh dan dapat diubah di laboratorium menjadi sterol hewan yang berkhasiat penting (misalnya, kortison, estrogen kontraseptik, dll) (Harborne, 1987). Senyawa glikosida seperti saponin dan glikosida jantung tidak larut dalam pelarut non polar. Senyawa ini paling cocok diekstraksi dari tumbuhan memakai etanol atau metanol panas 70-95% (Robinson, 1995)

6. Khasiat dan kegunaan senggani Senggani secara tradisional digunakan untuk pereda demam (antipiretik), penghilang

nyeri

(analgetik),

peluruh

kencing

(diuretik),

menghilangkan


pembengkakan (anti inflamasi), melancarkan aliran darah, dan penghenti pendarahan (hemostatis) (Anonim, 2006). Mengatasi gangguan pencernaan makanan (dispepsi), disentri basiler, diare, hepatitis, keputihan (leukorea), sariawan, darah haid berlebihan, pendarahan rahim di luar waktu haid, mimisan, berak darah (melena), wasir berdarah, radang dinding pembuluh darah disertai pembekuan darah di dalam salurannya (tromboangitis), air susu ibu (ASI) tidak lancar, keracunan singkong, mabuk minuman keras, busung air, obat kumur, sakit perut, borok (obat luar), dan bisul (Dalimartha, 1999, Soedibyo, 1998).

B. Radikal Bebas Dan Antioksidan 1. Radikal bebas Radikal bebas adalah spesies yang mempunyai jumlah elektron ganjil atau elektron tidak berpasangan tunggal pada lingkaran luarnya. Elektron tidak berpasangan tersebut menyebabkan instabilitas dan bersifat reaktif. Radikal bebas diproduksi secara endogen dan eksogen. Secara endogen, radikal bebas diproduksi oleh mitokondria, membran plasma, lisosom, retikulum endoplasma, dan inti sel. Secara eksogen, radikal bebas berasal dari asap rokok, polutan radiasi, obat-obatan, dan pestisida. Sumber utama reaksi radikal bebas pada mamalia adalah pada rantai pernafasan, fagositosis, sintesis prostaglandin, sistem sitokrom P-450, reaksi non enzimatik O2, dan radiasi ion (Setiati, 2003). Radikal bebas akan merusak molekul yang elektronnya ditarik oleh radikal bebas tersebut sehingga menyebabkan kerusakan sel, gangguan fungsi sel, bahkan kematian sel. Molekul utama di dalam tubuh yang dirusak oleh radikal bebas yaitu DNA, lemak, dan protein (Setiati, 2003). Perusakan sel radikal bebas reaktif


didahului oleh kerja kerusakan membran sel, dengan terjadinya rangkaian proses sebagai berikut: a. terjadi ikatan kovalen antara radikal bebas dengan komponen-komponen membran (enzim-enzim membran, komponen karbohidrat membran plasma), sehingga terjadi perubahan struktur dan fungsi reseptor; b. oksidasi gugus tiol pada komponen membran oleh radikal bebas yang menyebabkan prosestranspor lintas membran terganggu; c. reaksi peroksidasi lipid dan kolesterol membran yang mengandung asam lemak tak jenuh. Hasil peroksidasi lipid membran oleh radikal bebas berefek langsung terhadap kerusakan membran sel, antara lain dengan mengubah fluiditas, cross-linking, struktur dan fungsi membran; dalam keadaan yang lebih ekstrim akhirnya akan menyebabkan kematian sel. (Gitawati, 1995). Kerusakan struktur subseluler secara langsung mempengaruhi pengaturan metabolisme. Sebagai contoh yaitu disrupsi membran lisosom menyebabkan pelepasan enzim-enzim hidrolitik lisosom yang selanjutnya mampu memperantarai pengerusakan intraseluler, dan memperkuat kemampuan radikal bebas dalam menginduksi kerusakan sel. Dengan bertambahnya usia, radikal bebas yang terbentuk selama metabolisme normal dapat merusak DNA dan makromolekul lain sehingga terjadi penyakit-penyakit degeneratif, keganasan kematian sel-sel vital tertentu, yang pada akhirnya akan menyebabkan proses penuaan dan kematian bagi individu tersebut (Gitawati, 1995).


Ada beberapa zat yang dapat mengurangi reaksi radikal bebas dengan memutuskan rantai reaksi, yaitu antara lain (1) enzim antioksidan (superoksid dimutase dan SOD), katalase, glutation peroksidase, dan SOD mimics, (2) spin trap, dan(3) komponen yang memutuskan rantai (Setiati, 2003) Radikal bebas yang berlebihan akan menyebabkan kerusakan jaringan sehingga menimbulkan nyeri. Dalam proses peradangan, radikal bebas terbentuk ketika asam arakhidonat dikonversikan menjadi peroksida baik melalui jalur siklooksigenase maupun lipoksigenase. Ketika terjadi kerusakan jaringan organ produksi peroksida meningkat seiring dengan peningkatan jumlah radikal bebas, padahal tubuh memproduksi antioksidan endogen yang terbatas contohnya yaitu superoksida dismutase (SOD), katalase, dan glutation peroksidase (GSH Px) yang bekerja menstabilkan radikal bebas. Apabila jumlah radikal bebas makin banyak, antioksidan endogen tak mampu lagi melumpuhkannya secara efektif sehingga harus ada tambahan antioksidan dari luar (eksogen) yang berasal dari bahan makanan (Sibuea, 2004).

2. Antioksidan Antioksidan adalah senyawa yang dalam kadar lebih rendah dibanding bahan yang dapat dioksidasi, sangat memperlambat atau menghambat oksidasi dari bahan tersebut. Antioksidan dapat berperan sebagai spesies oksigen reaktif radikal bebas bergabung dengan zat lain untuk menimbulkan kerusakan pada sel tubuh (Sibuea, 2004). Peningkatan spesies oksigen reaktif ini juga dapat menimbulkan berbagai


bentuk kerusakan jaringan, padahal spesies oksigen reaktif ini bertanggung jawab terhadap aksi xenobiotik tubuh (Middleton dkk., 2000 cit Ladoangin, 2004). Beberapa efek merugikan yang ditimbulkan akibat peningkatan spesies oksigen reaktif yaitu pada sistem biologi meliputi peroksida membran lipid, bahaya oksidasi asam nukleat, dan karbohidrat, serta oksigen sulfhidril, dan bagian lain dari protein. Pertahanan terhadap spesies oksigen reaktif dilakukan secara enzimatik maupun non enzimatik. Antioksidan enzimatik meliputi superoksid dismutase (SOD), katalase, dan glutation peroksidase. Antioksidan non enzimatik umumnya dapat menangkap radikal bebas, baik organik maipun anorganik (Middleton dkk., 2000 cit Ladoangin, 2004). Antioksidan dibedakan menjadi antioksidan eksogen dan antioksidan endogen. Antioksidan endogen (antioksidan primer) terdiri dari enzim-enzim dan berbagai senyawa yang disintesis dalam tubuh yang bekerja dengan cara mencegah pembentukan radikal bebasbaru. Antioksidan eksogen dikenal juga sebagai antioksidan sekunder karena menangkap radikal dan mencegah reaksi berantai. Contohnya adalah vitamin E (tokoferol), vitamin C (askorbat), karoten, asam urat, bilirubin, dan albumin (Setiati, 2003). Menurut tempat aksinya pada fase air maupun lipofil dari membran antioksidan dibagi menjdi water solubel dan lipid solubel. Antioksidan hidrofil termasuk di dalam vitamin C dan urate. Retinoid, karatenoid, flavonoid, vitamin A, termasuk antioksidan lipofil (Middleton dkk., 2000 cit Ladoangin, 2004). Antioksidan selain di dalam vitamin C dan vitamin E juga terdapat pada flavonoid. Flavonoid telah dikenal dan merupakan suatu kelompok antioksidan


polifenol yang banyak terdapat pada sayuran, buah-buahan, dan beberapa minuman seperti teh hijau dan anggur merah (Sitompul, 2003). Secara umum dapat dikatakan bahwa senyawa turunan flavonoid memberikan efek antioksidan antara lain karena adanya gugus fenolik dalam struktur molekulnya. Ketika senyawa-senyawa ini bereaksi dengan radikal bebas maka terbentuk radikal baru yang distabilisasi oleh efek resonansi inti aromatik (Cuvelier, 1991 cit Hertiani, 2000).

C. Metode Penyarian Isolasi atau cara penyarian dari bahan alam dapat digunakan bahan-bahan tumbuhan atau hewan segar maupun yang telah dikeringkan, tergantung simplisia, dan zat atau senyawa yang diisolasi (Djamal, 1988). Penyarian merupakan peristiwa pemindahan masa. Zat aktif yang semula berada di dalam sel ditarik oleh cairan penyari, sehingga terjadi larutan zat aktif dalam cairan penyari tersebut (Anonim,1986). Secara umum cara penyarian dapat dibedakan infundasi, maserasi, dan perkolasi. 1. Infundasi Infundasi merupakan proses penyarian yang umumnya digunakan untuk menyari zat kandungan aktif yang larut dalam air dari bahan-bahan nabati. Penyarian dengan cara ini menghasilkan sari yang tidak stabil dan mudah tercemar oleh kuman dan kapang. Oleh sebab itu, sari yang diperoleh tidak boleh disimpan lebih dari 24 jam. Cara ini sangat sederhana dan sering digunakan oleh perusahaan obat tradisional. Infus adalah sediaan cair yang dibuat dengan mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 90°C selama 15 menit (Anonim,1986).


2. Maserasi Maserasi merupakan cara penyarian yang sederhana. Maserasi dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari akan menembus dinding sel dan masuk dalam rongga sel yang mengandung zat aktif, zat aktif akan larut dan karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dengan yang di luar sel, maka larutan yang terpekat didesak ke luar. Peristiwa tersebut berulang, sehingga terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam sel. Maserasi digunakan untuk penyarian simplisia yang mengandung zat aktif yang mudah larut dalam cairan penyari. Cairan yang digunakan dapat berupa air, etanol, air-etanol atau pelarut lain (Anonim,1986). 3. Perkolasi Perkolasi adalah cara penyarian yang dilakukan dengan mengalirkan melalui serbuk simplisia yang telah dibasahi. Prinsip perkolasi adalah sebagai berikut: serbuk simplisia ditempatkan dalam suatu bejana silinder yang bagian bawahnya diberi sekat berpori. Cairan penyari dialirkan dari atas ke bawah melalui serbuk tersebut, cairan penyari akan melarutkan zat aktif sel-sel yang dilalui sampai mencapai keadaan jenuh. Gerak ke bawah disebabkan oleh kekuatan gaya beratnya sendiri dan cairan di atasnya, dikurangi dengan daya kapiler yang cenderung untuk menahan (Anonim,1986). Cara perkolasi lebih baik daripada dengan cara maserasi karena aliran cairan penyari menyebabkan adanya pergantian larutan yang terjadi dengan larutan yang konsentrasinya lebih rendah, sehingga meningkatkan derajat perbedaan konsentrasi, ruangan di antara butir-butir serbuk simplisia membentuk saluran tempat mengalir


cairan penyari. Karena kecilnya saluran kapiler tersebut maka kecepatan pelarut cukup untuk mengurangi lapisan batas sehingga dapat meningkatkan perbedaan konsentrasi (Anonim,1986). Alat yang digunakan untuk perkolasi disebut perkolator, cairan yang digunakan untuk menyari disebut cairan penyari atau menstrum, larutan zat aktif yang keluar dari perkolator disebut perkolat atau sari, sedang sisa setelah penyarian disebut ampas atau sisa perkolasi (Anonim,1986). Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode perkolasi. Cairan penyari yang digunakan dalam penelitian ini adalah etanol 70%. Etanol digunakan sebagai penyari karena lebih selektif, kapang/kuman sulit tumbuh dalam etanol >20%, tidak beracun, bersifat netral, absorpsinya baik, dapat bercampur dengan air, panas yang digunakan untuk pemekatan lebih sedikit, selain itu etanol mudah diperoleh dan hanya untuk meningkatkan kemampuan penyariannya hanya perlu ditambah air dengan perbandingan tergantung bahan yang disari (Anonim, 1986)

D. Inflamasi 1. Patogenesis Inflamasi merupakan reaksi antara jaringan ikat pembuluh dengan pengaruhpengaruh yang merusak (noksius). Noksius dapat berupa reaksi kimia, fisika, infeksi mikroorganisme. Rangsangan tersebut membuat adanya pembebasan mediatormediator inflamasi seperti histamin, serotonin, prostaglandin, kinin dan ion kalium. Mediator-mediator nyeri tersebut akan memulai proses yang dapat dikatakan punya tiga tahap, yaitu vasodilatasi, permeabilitas vaskuler meningkat dan eksudasi


leukosit. Hal tersebut terjadi bersamaan dalam rangkaian proses yang rumit dan hasilnya terlihat sebagai tanda-tanda klasik inflamasi, yakni : rubor, color, dolor, tumor, dan fungsio laesa (Mutschler, 1986). Peradangan merupakan suatu mekanisme penting untuk melindungi badan dari serangan organisme penginvasi. Biasanya respon peradangan dimulai oleh antigen misalnya, virus, bakteri, protozoa, atau fungus atau oleh trauma. Tetapi peradangan juga menyebabkan ketidakmampuan yang menyertai berbagai kelainan. Pada arthritis, reaksi radang dapat menyebabkan pembatasan fungsi sendi destruksi tulang dan kartilago, struktur artikular lain (Shearn, 1986). Inflamasi (radang) dibagi dalam 3 fase yaitu inflamasi akut, respon imun, dan inflamasi kronis. Inflamasi akut merupakan respon awal terhadap cedera jaringan, hal tersebut terjadi melalui media rilisnya autacoid seperti histamin, serotonin, dan prostaglandin serta pada umumnya didahului oleh pembentukan respon imun. Respon imun terjadi bila sejumlah sel mampu menimbulkan kekebalan diaktifkan untuk merespon organisme asing atau substansi antigenik yang terlepas sebelum respon terhadap inflamasi akut serta kronis. Akibat dari respon imun bagi tuan rumah mungkin menguntungkan, seperti bila ia menyebabkan organisme penyerang menjadi difagositosis/dinetralisir, sebaliknya akibat tersebut juga dapat bersifat merusak bila menjurus pada inflamasi kronis tanpa penguraian dari proses cedera yang mendasarinya. Inflamasi kronis melibatkan keluarnya sejumlah mediator yang tidak menonjol dalam respon akut seperti interleukin-1, 2, 3, GM-CSF (Granulosyte Macrophage Colony Stimulating Factor) serta Interferon (Furst dan Munster, 2002).


Radang dapat dihentikan dengan meniadakan noksi (misalnya dengan transfer toksin keluar) atau dengan menghentikan kerja yang merusak. Walaupun demikian, seringkali pada gangguan aliran darah regional dan eksudasi terjadi emigrasi sel-sel darah (misal; granulosit, makrofag) ke dalam ruang ekstra sel serta prolifersi histiosit dan fibroblast. Proses-proses ini juga berfungsi primer pada perlawanan terhadap kerusakan serta pemulihan kondisi asalnya (Mutschler, 1986).

2. Gejala Gejala reaksi radang yang dapat diamati adalah pemerahan (rubor), panas meningkat (calor), pembengkaan (tumor), nyeri (dolor), dan gangguan fungsi (fungsio laesa). Gejala-gejala tersebut merupakan akibat dari gangguan aliran darah yang terjadi akibat kerusakan jaringan dalam pembuluh pengalir terminal, gangguan keluarnya plasma darah (eksudasi) ke ruangan ekstra sel akibat meningkatnya ketelapan kapiler dan perangsangan reseptor nyeri (Mutschler, 1986). Rubor biasanya merupakan hal pertama yang terlihat di daerah yang mengalami proses peradangan. Waktu reaksi peradangan dimulai maka arteriol yang mensuplai daerah itu melebar, sehingga lebih banyak darah yang mengalir ke mikrosirkulasi lokal. Kapiler yang semula kosong atau sebagian saja meregang dengan cepat terisi darah. Keadaan ini dinamakan hiperemia atau kongesti yang menyebabkan warna merah lokal karena peradangan akut. Timbulnya hiperemia pada awal reaksi peradangan diatur oleh tubuh, baik secara neurogenik maupun secara kimia, melalui pengeluaran zat seperti histamin (Price dan Wilson, 1992).


Calor terjadi bersamaan dengan rubor pada reaksi peradangan akut. Sebenarnya calor atau panas hanya terjadi pada permukaan tubuh, yang dalam keadaan normal lebih dingin dari 37oC yaitu panas tubuh. Daerah peradangan pada kulit lebih panas dari sekelilingnya sebab darah yang disalurkan ke permukaan daerah yang terkena infeksi lebih banyak daripada daerah yang normal. Fenomena panas lokal ini tidak terlihat pada derah radang yang jauh di dalam tubuh karena jaringan-jaringan tersebut sudah memiliki suhu inti 37oC, dan hiperemia lokal tidak menimbulkan perubahan (Price dan Wilson, 1992). Tumor atau pembengkaan merupakan segi paling mencolok dari peradangan akut. Pembengkaan ditimbulkan oleh pengiriman cairan dan sel-sel dari sirkulasi darah ke jaringan interstisial. Cairan dan sel yang tertimbun dalam daerah peradangan disebut eksudat. Pada keadaan dini reaksi peradangan sebagian besar eksudat adalah cair, seperti yang terjadi pada lepuhan akibat luka bakar ringan. Kemudian sel-sel darah putih atau leukosit meninggalkan aliran darah dan tertimbun sebagai bagian dari eksudat (Price dan Wilson, 1992). Dolor atau rasa sakit dapat dihasilkan dari berbagai cara. Perubahan pH lokal atau konsentrasi lokal ion-ion tertentu dapat merangsang ujung saraf. Hal yang sama, pengeluaran zat tertentu seperti histamin atau zat kimia bioaktif lainnya dapat merangsang saraf. Selain itu, pembengkaan jaringan yang meradang menyebabkan tekanan lokal yang tanpa diragukan lagi dapat menimbulkan rasa sakit (Price dan Wilson, 1992). Functio laesa atau perubahan fungsi terjadi karena bagian yang bengkak dan nyeri disertai sirkulasi abnormal dan lingkungan kimiawi lokal yang abnormal


menyebabkan fungsi jaringan yang meradang menjadi terganggu (Price dan Wilson, 1992). Peradangan juga ditandai dengan munculnya sifat-sifat yaitu vasodilatasi pembuluh darah lokal dengan akibat terjadinya aliran darah lokal yang berlebihan, kenaikan permeabilitas kapiler disertai dengan kebocoran banyak sekali cairan ke dalam ruang interstitial, pembekuan cairan dalam ruang tersebut yang disebabkan oleh sejumlah kebocoran fibrinogen dan protein lainnya yang berlebihan, dan pembengkakan sel. Bahan-bahan yang dihasilkan oleh jaringan yang menimbulkan reaksi ini meliputi histamin, bradikinin, serotonin, prostaglandin (Guyton, 1993). Rangsang Kerusakan sel Emigrasi leukosit Pembebasan mediator Proliferasi sel

gangguan

eksudasi

sirkulasi lokal

pemerahan

panas

perangsangan reseptor nyeri

pembengkakan

gangguan fungsi

nyeri

Gambar 6. Patogenesis dan gejala inflamasi (Mutschler, 1986).

3. Mekanisme Pada proses peradangan terjadi pembentukan atau pengeluaran zat-zat kimia di dalam tubuh yang dinamakan mediator. Mediator yang dikenal dalam peradangan dapat dikelompokkan, yaitu dalam kelompok amina vaso aktif, substansi yang


dihasilkan sistem enzim plasma, metabolit asam arakidonat, dan berbagai macam produk sel (Price & Wilson, 1992). Mekanisme terjadinya radang sangat dipengaruhi oleh senyawa dan mediator yang dihasilkan oleh asam arakidonat. Bila membran sel mengalami kerusakan oleh suatu rangsangan kimiawi, fisik, atau mekanis, maka enzim fosfolipase A2 diaktifkan untuk mengubah fosfolipid yang ada menjadi asam arakidonat. Asam arakidonat ini untuk sebagian diubah oleh enzim siklooksigenase menjadi asam endoperoksida dan seterusnya menjadi prostaglandin, prostasiklin, dan tromboksan. Bagian lain dari arakidonat diubah oleh enzim lipoksigenase menjadi zat-zat leukotrien. Prostaglandin dan leukotrien bertanggung jawab bagi sebagian besar dari gejala peradangan. Selain itu radikal bebas oksigen yang dihasilkan peroksida juga berperan dalam menimbulkan nyeri yang merupakan salah satu gejala peradangan (Tjay dan Rahardja, 2002). Enzim siklooksigenase yang terlibat dalam reaksi ini terdiri dari dua isoenzim, yaitu siklooksigenase-1 (COX-1) dan siklooksigenase-2 (COX-2). Enzim siklooksigenase-1 terdapat di kebanyakan jaringan antara lain di ginjal dan saluran cerna (Tjay dan Rahardja, 2002). Enzim siklooksigenase-1 bersifat konstitutif (bersifat pokok, selalu ada) dan cenderung menjadi homeostatis dalam fungsinya (Katzung, 2001). Enzim siklooksigenase-2 dalam keadaan normal tidak terdapat di jaringan tetapi dibentuk selama proses peradangan (Tjay dan Rahardja, 2002). Melalui jalur siklooksigenase siklooksigenase-2 (COX-2), prostaglandin terpenting yang terbentuk adalah prostaglandin-E2 (PgE2) dan prostaglandin-F2 (PgF2), zat ini berdaya vasodilatasi dan meningkatkan permeabilitas dinding


pembuluh dan membran sinovial sehingga terjadi radang dan nyeri. Prostaglandin-E2 (PgE2) dan prostasiklin dalam jumlah nanogram bisa menimbulkan eritema, vasodilatasi dan peningkatan aliran darah lokal. Efek histamin dan bradikinin yang diperkuat dapat meningkatkan permeabilitas vaskuler (Wilmana, 1995). Prostasiklin (PgI2) dibentuk terutama di dinding pembuluh, berperan dalam vasodilatasi, anti trombosis, dan memiliki efek protektif terhadap mukosa lambung. Mediator ketiga yang dibentuk pada jalur siklooksigenase adalah tromboxan (TXA2, TXB2), zat ini berdaya vasokonstriksi dan menstimulasi agregasi pelat darah (trombosit) (Tjay dan Rahardja, 2002). Melalui jalur lipoksigenase terbentuklah leukotrien yang juga merupakan mediator radang dan nyeri. Leukotrien (LT) ini terdiri dari LTB4, LTC4, LTD4, dan LTE4. LTC4, LTD4, dan LTE4 terutama dibentuk di granulosit eusinofil yang berkhasiat vasokonstriktif di bronki dan mukosa lambung, sedangkan LTB4 khusus B

disintesis di makrofag dan neutrofil alveolar dan bekerja kemotaktis yaitu menstimulus migrasi lekosit dengan jalan meningkatkan mobilitas dan fungsinya. Dengan adanya leukotrien ini sejumlah besar lekosit akan menginvasi daerah peradangan dan mengakibatkan gejala radang juga (Tjay dan Rahardja, 2002). Leukotrien-B4 (LTB4) adalah kemotraktan kuat bagi eosinofil. Leukotrien tersebut juga meningkatkan perlekatan eusinofil, degranulasi, dan pembentukan oksigen radikal bebas (Katzung, 2001) Fosfolipida selain diubah menjadi arakhidonat oleh enzim fosfolipase A2 juga diubah menjadi lyso-glyseril fosforilkolin yang diubah lagi menjadi Platelet Actifating Factor (PAF). Platelet Actifating Factor menyebabkan agregasi dan


pelepasan trombosit, vasodilatasi, peningkatan permeabilitas vaskuler, peningkatan adhesi leukosit, dan kemotaksis leukosit (Rang et al., 2003).

Rangsangan Gangguan membran sel

Fosfolipida Glukokortikoid (menginduksi terbentuknya lipocortin)

Fosfolipase A2

Lyso-glyseril fosforilkolin

Asam arakhidonat PAF Penghambat lipoksigenase

OAINS

siklooksigenase

Lipoksigenase

leukotrien

LTB4

fagosit, kemotaksis

prostaglandin

Antagonis PAF

Vasodilatasi, kemotaksis

tromboksan

prostasiklin

LTC4/D4/E4

mengubah permeabilitas vaskular, konstriksi bronkus, meningkatkan sekresi

kemotaksis

vasodilatasi

inflamasi

inflamasi Bronkospasma, kongesti, penyumbatan mukus

Gambar 7. Mekanisme Inflamasi (Tjay dan Rahardja, 2002; Rang et al., 2003). Keterangan :

= menghambat proses pembentukan = proses pembentukan = enzim yang berperan


E. Obat Anti Inflamasi Inflamasi dicetuskan oleh pelepasan mediator kimiawi dari jaringan yang rusak dan migrasi sel. Mediator kimiawi spesifik bervariasi dengan tipe proses peradangan. Penemuan variasi yang luas diantara mediator kimiawi telah menerangkan paradoks yang tampak bahwa obat-obat Anti inflamasi dapat mempengaruhi kerja mediator utama yang penting pada satu tipe inflamasi tetapi tanpa efek pada proses inflamasi yang tidak melibatkan mediator target obat (Mary dkk., 1997). Obat-obatan Anti inflamasi adalah golongan obat yang memiliki aktivitas menekan atau mengurangi peradangan. Aktivitas ini dapat dicapai melalui berbagai cara yaitu menghambat pembentukan mediator radang prostaglandin, menghambat migrasi sel-sel leukosit ke daerah radang, menghambat pelepasan prostaglandin dari sel-sel tempat pembentukannya (Anonim, 1991). Obat anti inflamasi berdasarkan mekanisme kerjanya secara umum dibagi dalam 2 (dua) golongan yaitu golongan steroid dan golongan non steroid. Obat anti inflamasi golongan steroid memiliki daya anti inflamasi kuat yang mekanismenya terutama menghambat pelepasan prostaglandin dari sel-sel sumbernya. Sedangkan obat anti inflamasi golongan non steroid (AINS) bekerja melalui mekanisme lain seperti inhibisi siklooksigenase yang berperan dalam biosintesis prostaglandin (Anonim, 1991).


Gambar 8. Obat anti inflamasi non steroid (Wilmana, 1995) Obat anti inflamasi golongan steroid efeknya tergantung pada pelepasan kortisol. Kortisol adalah salah satu hormon yang dihasilkan kortek adrenal yang punya

khasiat

fisiologis

utama,

antara

lain

efek

glukokortikoid,

efek

mineralokortikoid, efek anti flogistik, anti alergi, efek kalsiprive, dan efek imunosupresi. Sebagai hormon yang memiliki efek anti flogistik, kortisol mampu mencegah dan melawan semua macam peradangan terutama dari selaput lendir, terlepas dari penyebabnya, misalnya trauma, infeksi, alergi, atau reaksi auto imun. Golongan steroid mekanisme kerjanya sebagian besar berdasar atas rintangan sintesis prostaglandin dan leukotrien dengan menghambat fosfolipase (Anonim,2000).


Kortikosteroid menghambat semua jalur metabolisme eikosanoid (jalur arakidonat) yang telah dikenal dengan merangsang sintesis protein yang dinamai lipokortin, yang pada gilirannya menghambat aktivitas fosfolipase, sehingga menghambat pelepasan awal asam arakidonat yang diperlukan untuk mengaktifasi jalur enzim selanjutnya (Goldyne, 1986). Obat analgesik antipiretik dan anti inflamasi non steroid (AINS) merupakan kelompok obat yang heterogen, bahkan beberapa obat berbeda secara kimia. Walaupun demikian obat-obat ini memiliki banyak persamaan dalam efek terapi dan efek samping (Wilmana, 1995). Obat anti inflamasi non steroid (misal aspirin, indometasin, ibuprofen) menghambat sintesis prostaglandin dan tromboksan dengan menghambat aktivitas siklooksigenase (Goldyne,1986). Sebagian besar cara kerja AINS adalah menghambat sintesis siklooksigenase dimana kedua jenis siklooksigenase diblokir. AINS yang ideal harusnya hanya menghambat COX-2 (peradangan) dan tidak COX1 (perlindungan mukosa lambung). Obat AINS hampir tidak menghalangi pembentukan leukotrien dan terjadinya kemotaksis granulosit tersebut, bahkan penghambatan siklooksigenase (COX) dapat secara tidak langsung meningkatkan sintesis leukotrien sehingga tidak menghilangkan gejala dengan tuntas (Tjay dan Rahardja, 2002).


Khasiat obat AINS ditentukan oleh beberapa hal, yaitu: a. potensi yang digambarkan dari jumlah milligram bahan aktif persediaan (tablet, kapsul atau lainnya), makin kecil takaran persediaan maka makin tinggi potensinya. Misalnya, natrium diklofenak dan meloxicam lebih poten dibanding celecoxib atau nimesulide. b.

mula kerja dari obat, selalu berkaitan dengan saat tercapainya kadar puncak di darah. Sediaan yang makin cepat diserap akan semakin dini mula kerja obatnya. Misal: natrium diklofenak dan nimesulide lebih cepat dari daripada celecoxib, meloxicam, dan rofecoxib.

c. masa kerja obat, berkaitan dengan waktu paruh, waktu paruh yang panjang akan memberi masa kerja yang lama. Misal: celecoxib, meloxicam, dan rofecoxib lebih lama masa kerjanya daripada natrium diklofenak dan nimesulide. Namun sediaan dengan waktu paruh panjang bisa menimbulkan akumulasi, sehingga untuk keamanan obat, sediaan dengan waktu paruh singkat lebih menguntungkan. d. bentuk sediaan aktifnya, apakah sebagai prodrug (misal nabumeton) dan atau resemik (misal ketoprofen) (Lelo,2002). Semua AINS merupakan iritan mukosa lambung walaupun ada perbedaan gradasi antar obat ini. Akhir-akhir ini efek toksik terhadap ginjal lebih banyak dilaporkan sehingga fungsi ginjal perlu lebih diperhatikan pada penggunaan obat ini (Wilmana, 1995).


F. Natrium Diklofenak Natrium diklofenak merupakan kristal putih, larut dalam air, tidak larut dalam pelarut organik (Anonim, 2000), derivat sederhana dari asam fenilasetat. Natrium diklofenak adalah golongan obat non steroid dengan aktivitas analgesia, anti infamasi, dan antipiretik. Aktivitasnya dengan menghambat enzim siklooksigenase sehingga pembentukan prostaglandin terhambat. Natrium diklofenak termasuk NSAID yang terkuat daya anti radang dengan efek samping yang kurang keras dibanding dengan obat anti inflamasi non steroid lainnya (indometasin, piroxicam). Obat ini sering digunakan untuk segala macam nyeri, juga pada migrain dan encok. Secara parentral sangat efektif untuk menanggulangi nyeri kolik hebat. Kerusakan hati fatal telah dilaporkan (Tjay dan Rahardja, 2002). Obat ini cepat diserap sesudah pemberian secara oral, tetapi bioavailabilitas sistemiknya hanya antara 30-70 % karena metabolisme lintas pertama, mempunyai waktu paruh 1-2 jam. Natrium diklofenak menumpuk di dalam cairan sinovial dengan t ½ 2-6 jam dalam kompartemen ini (Furst dan Munster, 2002) sehingga efek terapi di sendi jauh lebih panjang dari waktu paruh obat tersebut. Absorpsi obat ini melalui saluran cerna dan terikat 99% pada protein plasma (Wilmana, 1995). Efek samping yang sering terjadi pada penggunaan natrium diklofenak adalah terjadinya nyeri/kram perut, sakit kepala, retensi cairan, diare nausea, konstipasi, flatulen, indigesti, tukak lambung, pusing, dan ruam (Hardjasaputra dkk.., 2002). Efek samping yang lazim adalah mual, gastritis, eritema kulit, dan sakit kepala seperti semua obat AINS, pemakaian obat ini harus hati-hati pada penderita tukak


lambung. Peningkatan enzim transaminasi dapat terjadi pada 15% pasien dan umumnya kembali normal (Wilmana, 1995). Hal tersebut membuat obat ini banyak digunakan sebagai obat rematik, gangguan otot skelet lainnya, gout akut, dan nyeri paska bedah. Dosis oral yang dianjurkan adalah 75-150 mg/hari dalam 2 - 3 dosis (Anonim, 2000). O

CH 2

CONa

NH Cl

Cl

Gambar 9. Struktur natrium diklofenak (Hanson, 2000)

G. Metode Uji Daya Anti Inflamasi Secara umum model uji inflamasi dibedakan menjadi 2 (dua), sesuai dengan jenis inflamasi, yaitu model inflamasi akut dan kronik. Inflamasi akut dapat dibuat dengan berbagai cara, yaitu dengan induksi udema kaki tikus, pembentukan erithrema (respon kemerahan), dan pembentukan eksudatif inflamasi, sedangkan inflamasi kronis dibuat dengan pembentukan granuloma dan induksi arthritis. 1. Uji eritrema Reaksi peradangan dilakukan pada kulit hewan uji dengan ditandai adanya eritrema (warna merah). Pengamatan dilakukan dua jam setelah kulit diradiasi dengan sinar ultraviolet untuk menentukan terjadi eritrema atau tidak. Kelemahan metode ini adalah eritrema ultraviolet dapat dihambat oleh obat yang kerjanya tidak


menghambat sintesa prostaglandin. Kemungkinan dapat terjadi positif palsu atau negatif palsu (Turner, 1965). 2. Radang telapak kaki belakang Pada metode ini induksi udem dilakukan pada kaki hewan percobaan yaitu tikus jantan atau betina, dengan cara penyuntikan suspensi karagenin secara subplantar pada telapak kaki kiri bagian belakang. Ukuran udema kaki diukur dengan alat plestimometer segera setelah injeksi. Aktivitas anti inflamasi obat ditunjukkan oleh kemampuannya mengurangi udem yang diinduksi pada kaki tikus (Vogel, 2002). 3. Tes granuloma Hewan uji berupa tikus betina atau jantan galur SD yang dicukur punggungnya dan diinjeksi secara subkutan dengan 20 ml udara, kemudian diinjeksi 0,5 ml campuran minyak kroton dengan minyak wijen sebagai senyawa iritan yang merangsang pembentukan udema. Hari kedua setelah terbentuk kantong, udara dihampakan. Hari keempat kantong dibuka cairan eksudat disedot dan volume diukur (Vogel, 2002). 4. Radang sendi Hewan

uji

diinjeksi

subplantar

suspensi

yang

mengandung

0,5%

mycobacterium tuberculosis mati (0,05 ml untuk tikus dan 0,025 ml untuk mencit). Pemberian obat untuk anti inflamasinya sudah diberikan satu hari sebelum injeksi dan dilanjutkan maksimal sampai 28 hari. Untuk mengetahui adanya radang dilihat saat benjolan sudah muncul (biasanya pada hari ke-13), kemudian diukur volumenya (Williamson, 1996).


5. Percobaan In Vitro Percobaan in vitro berguna untuk mengetahui peran dan pengaruh substansisubstansi fisiologis seperti histamin, bradikinin, prostaglandin, dan lain-lain dalam terjadinya inflamasi. Contoh beberapa percobaan in vitro adalah ikatan reseptor bradikinin-H3,

ikatan

reseptor

neurokinin,

dan

uji

kemotaksis

leukosit

polimorfonuklear (Vogel, 2002 ) Pada penelitian yang akan dilakukan, digunakan metode radang telapak kaki belakang dengan menggunakan hewan uji mencit betina. Metode ini merupakan metode yang telah dikembangkan oleh Langford et al. (1972). Dasar metode (termodifikasi) ini adalah dengan membuat udema pada telapak kaki belakang mencit menggunakan karagenin 1%, kemudian kaki dipotong pada sendi torsocrural dan ditimbang. Persentase efek anti inflamasi dapat dihitung dari perubahan berat kaki hewan uji.

% efek anti inflamasi =

⎡U − D ⎤ ⎢⎣ U ⎥⎦ X 100%

keterangan : U : Harga rata-rata berat kaki kelompok karagenin (terinflamasi) dikurangi rata-rata berat kaki kelompok normal ( tanpa perlakuan ) D : Harga rata-rata berat kaki kelompok perlakuan (terinflamasi) dikurangi rata-rata berat kaki normal ( tanpa perlakuan )


H. Landasan Teori Inflamasi merupakan suatu reaksi antara jaringan ikat pembuluh dengan pengaruh-pengaruh yang merusak (noksius). Inflamasi merupakan mekanisme penting untuk melindungi tubuh dari serangan organisme penginvasi. Daun senggani mengandung flavonoid (quercetin, quercitrin, dan rutin), steroid/triterpenoid (β-sitosterol, α-amyrin, sitosterol 3-O-β-D-glucopyranoside), tanin 4,3 % dan saponin (Anonim, 1995; Dalimartha, 1999; Sulaiman dkk., 2004). Flavonoid menunjukkan aktivitasnya sebagai anti alergi, anti inflamasi, anti mikrobial, dan anti kanker. Flavonoid bekerja sebagai anti oksidan kuat, melindungi dari serangan oksidatif dan radikal bebas (Anonim, 2006a). Di antara senyawa flavonoid yang telah lama dikenal dan merupakan suatu kelompok antioksidan yakni, kelompok polifenol memiliki kemampuan sebagai scavenger superoksida, oksigen singlet, dan radikal peroksi lipid (Sitompul, 2003). Flavonoid mampu menghambat radikal bebas dengan menghambat enzim lipoksigenase dan siklooksigenase (Bruneton, 1999). Steroid juga bermanfaat untuk mengurangi inflamasi. Selain itu, di dalam dunia kesehatan tanin juga bermanfaat sebagai astringen yang mengakibatkan pengurangan bengkak (edema), radang, dan sekresi pada gastrointestinal (Harborne, 1984). Etanol dapat melarutkan flavonoid, steroid/triterpenoid, saponin, dan tanin. Pada penelitian ini digunakan etanol 70% dengan harapan senyawa aktif yang terkandung dalam daun senggani dapat terekstraksi dengan baik. Adanya senyawa


kimia daun senggani yang dapat terekstrak oleh etanol 70%, diharapkan memiliki aktivitas sebagai anti inflamasi.

I. Hipotesis Ekstrak etanol daun senggani memiliki efek anti inflamasi pada kaki mencit putih betina yang diinduksi karagenin 1%


BAB III METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis Dan Rancangan Penelitian Penelitian efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani pada mencit putih betina merupakan jenis penelitian eksperimental murni dengan menggunakan rancangan acak lengkap pola satu arah.

B. Metode Penelitian Pada penelitian yang akan dilakukan, digunakan metode radang telapak kaki belakang dengan menggunakan hewan uji mencit betina. Metode ini merupakan metode yang telah dikembangkan oleh Langford et al. (1972). Dasar metode (termodifikasi) ini adalah dengan membuat udema pada telapak kaki belakang mencit menggunakan karagenin 1%, kemudian kaki dipotong pada sendi torsocrural dan ditimbang. Persentase efek anti inflamasi dapat dihitung dari perubahan berat kaki hewan uji. Metode Langford termodifikasi ini dipilih karena caranya sederhana, baik dari perlakuan, pengamatan, pengukuran, tidak membutuhkan alat yang banyak dan rumit, lebih hemat waktu dan mudah dalam pengolahan datanya dibanding uji lainnya.


C. Variabel Dan Definisi Operasional 1.

Variabel

Variabel penelitian ini meliputi : a. Variabel bebas

: dosis ekstrak etanol daun senggani, yaitu sejumlah

miligram (mg) ekstrak etanol daun senggani per kilogram (kg) berat badan yang disuspensikan dalam larutan CMC-Na 1% dan diberikan secara peroral tiap kg berat badan mencit. b. Variabel tergantung : persentase efek anti inflamasi, yaitu kemampuan ekstrak etanol daun senggani dalam menghambat/mengurangi proses inflamasi pada kaki mencit akibat udema buatan dengan injeksi karagenin 1%. c. Variable pengacau terkendali : 1) hewan uji

: mencit putih

2) galur

: Swiss

3) jenis kelamin

: betina

4) umur

: 2-3 bulan

5) berat badan

: 20-30 gram

6) keadaan patologis

: sehat

7) asal tumbuhan senggani : BPTO Tawangmangu, Solo, Jawa Tengah 8) proses isolasi senyawa kimia daun senggani menggunakan penyari etanol 70% dengan metode perkolasi dimana proses ekstraksi dihentikan sampai ekstrak yang keluar berwarna putih bening


d. Variabel pengacau tak terkendali : 1) suhu pemanasan saat proses penguapan ekstrak etanol daun senggani 2) kemampuan absorpsi mencit terhadap ekstrak etanol daun senggani

2. Definisi operasional a. dosis ekstrak etanol daun senggani Dosis diperoleh dengan cara menimbang sejumlah miligram (mg) ekstrak etanol daun senggani per kilogram (kg) berat badan yang disuspensikan dalam larutan CMC-Na 1% dan diberikan secara peroral tiap kg berat badan mencit. b. uji efek anti inflamasi uji efek anti inflamasi menggunakan metode Langford termodifikasi yaitu membuat udema pada telapak kaki belakang mencit menggunakan karagenin 1%, kemudian kaki dipotong pada sendi torsocrural dan ditimbang. Persentase efek anti inflamasi dapat dihitung dari perubahan berat kaki hewan uji (menggunakan berat kaki terinflamasi (kontrol -) terhadap berat kaki terinflamasi yang diobati dengan ekstrak etanol daun senggani).

D. Bahan Dan Alat Penelitian Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah: 1. hewan uji adalah mencit betina galur Swiss, dengan usia 2-3 bulan, dengan berat badan 20-30 gram yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.


2. bahan uji adalah bahan yang diuji yaitu daun senggani yang diambil dari Badan Penelitian Tanaman Obat (BPTO) Tawangmangu, Solo, Jawa Tengah. Senggani diambil pada bulan April 2006 3. karagenin tipe 1 (Sigma Chemcal Company) sebagai zat peradang (inflamatogen) yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. 4. NaCl 0,9% fisiologis (Otsuka) sebagai pensuspensi karagenin yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 5. natrium diklofenak, sebagai kontrol positif yang merupakan bantuan dari PT. Fahrenheit , Tangerang, Banten. 6. CMC-Na (Dai-Ichi Seiyaku Co.,Ltd) sebagai pensuspensi ekstrak etanol daun senggani dan Natrium diklofenak yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. 7. aquadest sebagai pengencer konsentrasi etanol, diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. 8. etanol kualitas p.a. (pro analisa) produksi Merck, Jerman, sebagai pelarut dalam perkolasi, yang diperoleh dari Laboratorium Formulasi Teknologi Sediaan Padat, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.


E. Alat Atau Instrumen Penelitian Alat-alat yang digunakan mencakup : 1. alat-alat gelas berupa beker glass, pipet volume, labu ukur, pipet tetes, erlenmeyer, cawan petri, corong, batang pengaduk, gelas ukur (Pyrex). 2. spuit injeksi oral dan spuit injeksi intravena 1 ml 3. seperangkat alat bedah 4. neraca analitik, Metler Toledo, Tipe AB 204, Switzerland 5. perkolator, sebagai alat bantu dalam proses ekstraksi daun senggani dengan metode perkolasi.

F. Tata Cara Penelitian 1. Identifikasi/determinasi daun senggani Determinasi daun senggani dilakukan oleh BPTO Tawangmangu, Jawa Tengah sebagai pihak yang menyediakan daun senggani. Surat pengambilan dan determinasi daun senggani dari BPTO dapat dilihat pada lampiran 22.

2. Pembuatan ekstrak etanol daun senggani Metode pembuatan ekstrak ini adalah dengan metode perkolasi. Langkah awalnya adalah daun senggani yang sudah kering dihaluskan dengan blender. Sebanyak 150 gram serbuk dimasukkan ke dalam perkolator, kemudian direndam dengan etanol 70% sampai mencapai ketinggian 1,5 cm diatas permukaan serbuk selama 24 jam. Keran perkolator dibuka dan kecepatan alir 20 tetes per menit. Selama proses perkolasi berlangsung tinggi etanol diatas permukaan serbuk harus


tetap 1-1,5 cm. Perkolat ditampung dalam erlenmeyer. Ekstraksi dihentikan jika perkolat yang keluar berwarna bening. Perkolat yang diperoleh diuapkan di atas waterbath hingga diperoleh perkolat yang kental (pekat). Ekstrak pekat kemudian disimpan di dalam lemari pendingin (kulkas).

3. Persiapan hewan uji Metode uji efek anti inflamasi yang digunakan, baik untuk kelompok uji pendahuluan maupun kelompok perlakuan menggunakan metode pembentukan udema pada telapak kaki belakang hewan uji yang telah dimodifikasi oleh Langford et al. (1972). Hewan uji yang dibutuhkan adalah 83 ekor mencit putih betina. Delapan puluh tiga ekor mencit dibagi 2 kelompok. Kelompok pertama untuk uji pendahuluan 48 ekor, dan kelompok kedua sebanyak 35 ekor untuk perlakuan. Sebelum digunakan hewan uji dipuasakan selama dua puluh empat jam tanpa menghentikan pemberian minum. a. dua belas ekor untuk uji pendahuluan waktu pemotongan kaki setelah injeksi karagenin 1 % b. dua belas ekor untuk uji pendahuluan pemberian dosis efektif natrium diklofenak (dalam 4 peringkat dosis) c. dua belas ekor untuk uji pendahuluan waktu pemberian dosis natrium diklofenak dengan dosis efektif d. dua belas ekor untuk uji pendahuluan waktu pemberian ektrak etanol daun senggani


e. tiga puluh lima ekor untuk perlakuan kontrol negatif karagenin 1%, kontrol negatif CMC Na 1%, kontrol positif natrium diklofenak dan kelompok perlakuan ektrak etanol senggani dalam empat peringkat dosis, yaitu 850 mg/kgBB, 1000 mg/kgBB, 1330 mg/kgBB, dan 1670 mg/kgBB, masingmasing lima ekor.

4. Pembuatan suspensi karagenin 1 % Timbang 100 mg karagenin, kemudian larutkan dalam 10 ml larutan NaCl fisiologis dan diaduk sehingga diperoleh konsentrasi suspensi karagenin 1%. Agar bisa digunakan kembali, suspensi karagenin disimpan dalam freezer.

5. Pembuatan CMC Na 1% Timbang 1 gram CMC-Na, disuspensikan sampai 100 ml dengan aquadest hangat, kemudian aduk sampai homogen.

6. Pembuatan larutan natrium diklofenak Ditimbang seksama sejumlah natrium diklofenak dan dilarutkan dalam CMC-Na 1% sampai diperoleh konsentrasi tertentu berdasar uji pendahuluan dosis. CMC-Na 1% dalam kondisi masih hangat sangat membantu kelarutan natrium diklofenak.

7. Pembuatan suspensi ekstrak etanol daun senggani Ditimbang seksama ekstrak etanol daun senggani dan disuspensikan ke dalam larutan CMC-Na 1% sampai diperoleh konsentrasi tertentu berdasarkan orientasi.


8. Penetapan dosis a. Karagenin 1% Menurut Williamson (1996), konsentrasi karagenin yang digunakan pada mencit adalah 1% dengan volume 0,05 ml. 0,05 ml karagenin 1% adalah volume pemberian untuk mencit dengan berat 20 gram sehingga dosis bisa dicari dengan rumus:

V ml

=

D mg / kgBB X BB kg C mg / ml

0,05 ml

=

D mg / kgBB X 0,02 kg 10 mg / ml

D = 25 mg/kg BB dan V = {2,5 x BB kg} ml b. Natrium Diklofenak Dosis yang digunakan berdasarkan dosis natrium diklofenak yang pernah digunakan pada penelitian anti inflamasi yang sudah pernah dilakukan yaitu 9,75 mg/kg BB; 10,795 mg/kg BB, dan 11,95 mg/kg BB (Novita, 2003). Dosis ini berdasarkan dosis pemakaian natrium diklofenak pada manusia sebesar 75-150 mg/70kgBB. Dosis pada manusia tersebut dikonversikan ke mencit 20g dengan faktor konversi sebesar 0,0026. Contoh perhitungannya : Dosis I

: untuk manusia 70 kgBB konversi ke mencit 20 gBB

= 75 mg = 75 mg/70kgBB x 0,0026 = 0,195 mg/20 gBB = 9,75 mg/kgBB

Dosis II

: untuk manusia 70 kgBB konversi ke mencit 20 gBB

= 83,0385 mg = 83,0385 mg/70kgBB x 0,0026 = 0,2195 mg/20 gBB


= 10,79 mg/kgBB Dosis III : untuk manusia 70 kgBB konversi ke mencit 20 gBB

= 91,923 mg = 91,923 mg/70kgBB x 0,0026 = 0,239 mg/20 gBB = 11,95 mg/kgBB

c. CMC 1% Sebagai kontrol negatif CMC 1% diberikan secara per oral, dan volume pemberian maksimal pada mencit adalah 1ml, diketahui berat mencit maksimal dalam penelitian ini adalah 30 g sehingga bisa dihitung dengan rumus: V ml =

D mg / kgBB X BB kg C mg / ml

1 ml =

D mg / kgBB X 0,03 kg 10 mg / ml

D = 333,3 mg/kg BB dan V = {33,3 x BB kg} ml d. Ekstrak etanol daun senggani Dosis maksimum dan peringkat dosis ekstrak etanol daun senggani yang digunakan berdasarkan orientasi dan penelitian Tusthi (2006). Adapun peringkat dosis yang digunakan adalah 850 mg/kg BB, 1000 mg/kg BB, 1330 mg/kg BB, dan 1670 mg/kg BB.

9. Uji pendahuluan rentang waktu pemotongan kaki setelah injeksi karagenin Hewan uji dibagi dalam empat kelompok, tiap kelompok terdiri dari 3 ekor, diberi perlakuan pada kaki kiri bagian belakang diinjeksi 0,05 ml suspensi karagenin 1% secara subplantar dengan kaki kanan hanya diinjeksi dengan spuit injeksi


sublantar tanpa suspensi karagenin 1%. Selanjutnya

tiap kelompok hewan uji

dikorbankan pada selang waktu tertentu, yaitu 1, 2, 3, dan 4 jam setelah injeksi karagenin 1% subplantar, dan kedua kaki belakangnya dipotong pada sendi torsocrural kemudian ditimbang. Waktu yang menunjukkan berat udema paling besar dijadikan acuan untuk perlakuan dengan karagenin 1% selanjutnya.

10. Uji pendahuluan dosis efektif natrium diklofenak Hewan uji dibagi empat kelompok, tiap kelompok 3 ekor,diberi perlakuan natrium diklofenak peroral dengan dosis yang berbeda, kelompok I dengan dosis 9,75 mg/kgBB; dan kelompok II dengan dosis 10,795 mg/kgBB dan kelompok III dengan dosis 11,95 mg/kg BB. Kemudian kaki kiri bagian belakang diinjeksi 0,05 ml suspensi karagenin 1% subplantar, sedangkan kaki kanan bagian belakang hanya disuntik dengan spuit injeksi secara subplantar tanpa suspensi karagenin 1%. Setelah beberapa lama, mencit dikorbankan, kedua kaki belakang dipotong pada sendi torsocrural kemudian ditimbang. Dosis yang menunjukkan berat udema paling kecil adalah dosis efektif dari natrium diklofenak.

11. Uji pendahuluan waktu pemberian natrium diklofenak dengan dosis efektif Hewan uji dibagi dalam empat kelompok, tiap kelompok terdiri tiga ekor dan diberi perlakuan dengan dosis efektif natrium diklofenak secara per oral, dalam rentang waktu tertentu, yaitu 15, 30, 45 dan 60 menit. Kemudian kaki kiri bagian belakang diinjeksi 0,05 ml suspensi karagenin 1% subplantar, kaki kanan bagian belakang disuntik dengan spuit injeksi secara subplantar tanpa suspensi karagenin


1%. Beberapa lama kemudian (berdasar uji pendahuluan waktu karagenin) mencit dikurbankan, kedua kaki belakangnya dipotong pada sendi torsocrural kemudian ditimbang. Waktu yang menunjukkan berat udema paling kecil dijadikan sebagai acuan untuk perlakuan dengan dosis efektif natrium diklofenak selanjutnya.

12. Uji pendahuluan waktu pemberian ektrak etanol senggani Hewan uji dibagi empat kelompok, tiap kelompok terdiri 3 ekor, diberi perlakuan pemberian ektrak etanol daun senggani dengan dosis yang sama dalam rentang waktu tertentu. Tiap-tiap kelompok diberi secara per oral dalam rentang waktu 15, 30, 45 dan 60 menit sebelum injeksi 0,05 ml suspensi karagenin 1%. Setelah beberapa lama (berdasar uji pendahuluan waktu karagenin), mencit dikorbankan,

kedua kaki belakang dipotong pada sendi torsocrural kemudian

ditimbang. Waktu yang menunjukkan berat udema paling kecil dijadikan sebagai acuan untuk perlakuan dengan ekstrak etanol daun senggani selanjutnya.

13. Perlakuan hewan uji Uji efek anti inflamasi ini menggunakan metode pembentukan udema pada telapak kaki belakang hewan uji yang telah dimodifikasi oleh Langford et al. (1972). Tiga puluh lima ekor mencit dibagi secara acak menjadi 7 kelompok. Setiap kelompok terdiri dari lima ekor dengan perlakuan sebagai berikut : a. kelompok I (kelompok kontrol karagenin 1%) Kaki kiri bagian belakang mencit diinjeksi dengan 0,05 ml suspensi karagenin 1% subplantar sedangkan kaki kanan bagian belakang hanya disuntik


subplantar tanpa karagenin. Setelah beberapa lama (berdasar uji pendahuluan) kedua kaki dipotong pada sendi torsocrural dan ditimbang. b. kelompok II (kelompok kontrol CMC-Na 1%) CMC-Na 1% diberikan secar per oral pada mencit dan setelah beberapa waktu (berdasar orientasi waktu natrium diklofenak dan ekstrak etanol daun senggani) kaki kiri bagian belakang mencit diinjeksi dengan 0,05 ml suspensi karagenin 1% subplantar sedangkan kaki kanan bagian belakang hanya disuntik subplantar tanpa karagenin, kemudian kedua kaki dipotong pada sendi torsocrural dan ditimbang. c. kelompok III ( kelompok kontrol natrium diklofenak) Mencit diberi perlakuan per oral natrium diklofenak dengan dosis sesuai orientasi dan setelah beberapa waktu (berdasar orientasi) kaki kiri bagian belakang mencit diinjeksi dengan 0,05 ml suspensi karagenin 1% subplantar sedangkan kaki kanan bagian belakang hanya disuntik subplantar tanpa karagenin, kemudian kedua kaki dipotong pada sendi torsocrural dan ditimbang. d. kelompok perlakuan ekstrak etanol daun senggani Terdiri dari empat kelompok perlakuan yang diberikan 4 dosis ekstrak etanol daun senggani yang berbeda yaitu 850 mg/kg BB; 1000 mg/kg BB; 1330 mg/kg BB, dan 1670 mg/kg BB per oral. Setelah beberapa waktu (berdasar uji pendahuluan) masing-masing kelompok diinjeksi 0,05 ml karagenin 1% subplantar pada kaki kiri belakang sedangkan kaki kanan bagian belakang hanya disuntik subplantar tanpa karagenin, kemudian kedua kaki dipotong pada sendi torsocrural dan ditimbang.


14. Perhitungan % efek anti inflamasi Data hasil penimbangan berat udema kaki belakang mencit digunakan untuk menghitung efek anti inflamasinya baik dari perlakuan natrium diklofenak (kontrol positif) maupun dari pemberian ekstrak etanol daun senggani, metode Langford et al. (1972) digunakan untuk mengetahui efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani yang dihitung dalam persen (%) efek anti inflamasi dengan persamaan :

% efek anti inflamasi =

⎡U − D ⎤ ⎢⎣ U ⎥⎦ X 100%


Untuk mengetahui potensi relatif efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani terhadap larutan natrium diklofenak sebagai kontrol positif maka dapat digunakan rumus sebagai berikut :

Potensi relatif efek anti inflamasi =

DAp x 100% DAd

keterangan : DAp : persen (%) efek anti inflamasi pada kelompok perlakuan ekstrak etanol daun senggani DAd : persen (%) efek anti inflamasi rata-rata natrium diklofenak 9,75 mg/kgBB


G. Analisis Hasil Data yang diperoleh dianalisis dengan Kolmogorov-Smirnov untuk melihat distribusi data. Jika data terdistribusi normal maka dilanjutkan analisis secara statistik menggunakan metode varian (Anova) pola satu arah dengan taraf kepercayaan 95%. Analisis Anova dilakukan untuk mengetahui apakah ada perbedaan pada kelompok perlakuan. Analisis dilanjutkan dengan uji Scheffe untuk mengetahui perbedaan tersebut bermakna atau tidak bermakna. Jika diperoleh nilai p<0,05 berarti ada perbedaan bermakna secara statistik. Jika diperoleh nilai p>0,05 berarti perbedaan tersebut tidak bermakna.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Senggani Metode pembuatan ekstrak ini adalah dengan metode perkolasi. Proses penyarian dilakukan dengan menggunakan etanol 70%. Hal ini dimaksudkan karena etanol merupakan pelarut yang bersifat polar sehingga diharapkan dapat melarutkan senyawa-senyawa yang bersifat polar yang terkandung di dalam daun senggani, yaitu flavonoid, steroid, saponin, dan tanin. Selain itu akan digunakan sebagai perbandingan efek yang ditimbulkan pada uji yang sama tetapi menggunakan pelarut nonpolar dalam hal ini digunakan petroleum eter (PE). Hasil perkolasi dalam pembuatan ekstrak etanol daun senggani ini adalah sebagai berikut ini. Bentuk

: ekstrak kental

Warna

: coklat kehitaman

Bau

: khas

Rasa

: pahit

Untuk uji-uji selanjutnya ekstrak etanol daun senggani ini dilarutkan dalam larutan CMC-Na 1% menjadi bentuk suspensi hingga mencapai konsentrasi 5% sedangkan peringkat dosis yang digunakan yaitu 850 mg/kg BB, 1000 mg/kg BB, 1330 mg/kg BB, dan 1670 mg/kg BB berdasarkan orientasi dan penelitian Tusthi (2006).


B. Hasil Uji Pendahuluan Dalam penelitian ini dilakukan beberapa uji pendahuluan yang bertujuan untuk menvalidasi metode uji efek anti inflamasi. Tujuan validasi ini adalah untuk menjamin agar metode yang digunakan dapat memberikan hasil yang valid dan akurat. Uji pendahuluan dalam penelitian ini meliputi waktu pemotongan kaki setelah injeksi karagenin 1% subplantar, dosis efektif natrium diklofenak, waktu pemberian natrium diklofenak dengan dosis efektif, dan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani. Data yang diperoleh dari uji pendahuluan berupa berat udema pada kaki mencit selanjutnya dianalisis dengan uji Kolmogorov–Smirnov untuk mengetahui homogenitas data yang dapat dilihat pada signifikan lebih besar dari 0,05. Apabila data yang diperoleh homogen dilakukan analisa anova pola searah dengan tingkat kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe. 1. Uji pendahuluan rentang waktu pemotongan kaki setelah injeksi suspensi karagenin 1 % Uji pendahuluan rentang waktu pemotongan kaki setelah injeksi karagenin 1% ini dilakukan untuk mengetahui waktu pemotongan kaki mencit yang tepat setelah injeksi karagenin 1% secara subplantar yaitu waktu dimana karagenin mampu memberikan efek maksimal sehingga diperoleh udema yang maksimal pula. Suspensi karagenin 1% ini dipilih sebagai zat iritan penginduksi udema pada kaki mencit karena karagenin merupakan salah satu iritan penginduksi udema yang paling banyak digunakan. Karagenin tidak menimbulkan respon yang peka terhadap obat anti inflamasi, karagenin tidak menimbulkan kerusakan jaringan pada kaki mencit,


karagenin digunakan untuk memprediksi efektivitas potensial terapetik dari obat-obat anti inflamasi baik dari golongan steroid maupun dari golongan non steroid. Dari uji yang dilakukan diperoleh data bahwa pada selang waktu satu jam berat udema rata-rata sebesar 0,0382g, dua jam sebesar 0,0440g, tiga jam sebesar 0,0916g , dan empat jam sebesar 0,0953g. Data ini dianalisis statistik non parametrik dengan menggunakan analisis Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui homogenitas datanya. Signifikan yang diperoleh sebesar 0,231 dan karena signifikasi datanya melebihi 0,05 maka data yang diperoleh berdistribusi normal. Setelah diketahui bahwa distribusi data normal maka dilanjutkan analisis statistik parametrik. Analisis statistik parametrik yang digunakan adalah anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95 %. Rangkuman hasil analisis anova satu arah dapat dilihat pada tabel I. Tabel I. Rangkuman hasil anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95% data berat udema kaki mencit pada uji pendahuluan selang waktu pemotongan kaki mencit setelah diinjeksi karagenin 1% Keterangan Berat udema antar kelompok perlakuan

Df

F

Probabilitas (p)

3

597,136

0,000

Pada tabel I dapat diketahui bahwa probabilitas (p) yang terjadi sebesar 0,000, sehingga dapat disimpulkan bahwa berat udema yang terjadi antar tiap kelompok perlakuan memiliki perbedaan yang bermakna (p<0,05). Kemudian dilakukan uji Scheffe untuk mengetahui perbedaan antar kelompok bermakna atau tidak bermakna. Hasil uji Scheffe dapat dilihat pada tabel II.


Tabel II. Rata-rata berat udema kaki mencit akibat diinjeksi karagenin 1% secara subplantar pada selang waktu tertentu, beserta hasil uji Scheffe

Selang Waktu 1 jam 2 jam 3 jam 4 jam Keterangan : tb bb x SE

X ± SE (g) 0,0382 ± 0,0007 0,0440 ± 0,0019 0,0916 ± 0,0007 0,0953 ± 0,0013

Hasil uji Scheffe pemberian karagenin 1 % pada selang waktu tertentu 1 jam

2 jam

3 jam

4 jam

tb bb bb

tb bb bb

Bb Bb Tb

bb bb tb -

: Berbeda tidak bermakna : Berbeda bermakna : Rata-rata berat udema kaki mencit : Standar Error

Dari hasil uji Scheffe, ternyata antar kelompok 1 dan 2 menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05), begitu juga antar kelompok 3 dan 4 menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05). Akan tetapi kelompok 1 dan 2 bila dibandingkan kelompok 3 dan 4 menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05). Dari hasil tersebut ada dua data yang bisa dipilih untuk rentang waktu injeksi karagenin yaitu data jam ke-3 dan ke-4, karena keduanya menunjukkan rata-rata berat udem yang cukup besar dibanding data lainnya. Pada jam tersebut terjadi pembebasan mediator-mediator inflamasi yang memicu reseptor nyeri sehingga menyebabkan vasodilatasi, peningkatan permeabilitas membran, gejala peradangan dan meningkatkan berat udema yang bertambah besar. Untuk penelitian selanjutnya dipilih jam ke-3 walau sebenarnya data jam ke-4 menunjukkan berat udema yang lebih besar. Selain karena secara statistik kedua data berbeda tidak bermakna, pemilihan data jam ke-3 bisa memberikan efisiensi waktu.


Hasil uji pendahuluan rata-rata berat udema pada waktu pemotongan kaki mencit dapat dilihat pada lampiran 6 sedangkan bentuk diagram batang dapat dilihat pada gambar 10. Dari diagram tersebut dapat dilihat lebih jelas perbedaan berat ratarata udema dari setiap waktu pemotongan kaki mencit pada uji pendahuluan ini.

rata-rata bobot udema (g)

0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0 1

2

3

4

rentang w aktu pem otongan (jam )

Gambar 10. Diagram batang rata-rata berat udema kaki mencit hasil uji pendahuluan penetapan rentang waktu pemotongan kaki setelah injeksi karagenin 1% subplantar

2. Uji pendahuluan penetapan dosis efektif natrium diklofenak Tujuan uji pendahuluan ini adalah untuk mengetahui kisaran dosis yang paling besar memberikan efek anti inflamasi pada kaki mencit yang mengalami udema atau pembengkaan oleh injeksi karagenin 1%. Penetapan dosis efektif natrium diklofenak pada uji pendahuluan ini berdasarkan dosis pemakaian natrium diklofenak pada manusia Indonesia berdasarkan Anonim (2000) yang kemudian dikonversikan ke mencit dan dibuat dalam tiga peringkat dosis. Dosis yang digunakan berturut-turut adalah 9,75 mg/kg BB, 10,795 mg/kg BB, dan 11,95 mg/kg BB. Dosis-dosis tersebut merupakan dosis yang pernah


digunakan dalam uji anti inflamasi sebelumnya dan masih masuk dalam range dosis natrium diklofenak. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa dosis 9,75 mg/kg BB memberikan pembentukan udema rata-rata sebesar 0,0386 g, dosis 10,795 mg/kg BB sebesar 0,0414 g, dosis 11,95 mg/kg BB sebesar 0,0358 g. Data ini dianalisis dengan uji Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui homogenitas data. Signifikan yang diperoleh sebesar 0,999 dan karena signifikasi datanya melebihi 0,05 maka data yang diperoleh berdistribusi normal sehingga dapat dilanjutkan dengan analisis anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95%, terlihat pada tabel III.

Tabel III. Rangkuman hasil anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95% data berat udema kaki mencit pada uji pendahuluan akibat pemberian natrium diklofenak dalam tiga peringkat dosis

Keterangan

Df

F

Probabilitas (p)

Berat udema antar kelompok perlakuan

2

0,518

0,620

Hasilnya menunjukkan bahwa antar kelompok memberikan hasil yang tidak signifikan karena p>0,05. Untuk mengetahui perbedaan antar kelompok bermakna atau tidak bermakna perlu dilakukan uji scheffe. Hasil uji Scheffe dapat dilihat pada tabel IV.


Tabel

IV.

Rata-rata berat udema kaki mencit pada penetapan dosis efektif natrium diklofenak dan hasil uji Scheffe

Dosis (mg/kg BB)

Mean BU ± SE (g)

n

9,75 10,79 11,95

0,0386 ± 0,0019 0,0414 ± 0,0057 0,0358 ± 0,0031

3 3 3

Hasil uji Scheffe pada dosis natrium diklofenak (mg/kg BB) 9,75 10,79 11,95 tb tb

Tb Tb

tb tb -

Keterangan : BU : Berat udema SE : Standar Eror bb : berbeda bermakna tb : berbeda tidak bermakna n : jumlah mencit

Setelah dilakukan uji statistik diperoleh hasil bahwa ketiga dosis tersebut memiliki perbedaan tidak bermakna. Dosis 11,95 mg/kg BB memberikan rata-rata berat udema yang paling kecil dibandingkan dua peringkat dosis dibawahnya. Namun karena pada uji pendahuluan ini bertujuan untuk menentukan dosis efektif natrium diklofenak dimana pada dosis yang kecil telah mampu menurunkan berat udema. Walaupun berat udema dosis natrium diklofenak 9,75 mg/kgBB masih besar namun karena hasil secara statistik memiliki perbedaan tidak bermakna maka dosis 9,75 mg/kgBB dipilih sebagai dosis efektifnya. Hasil uji pendahuluan rata-rata berat udema pada dosis efektif natrium diklofenak dapat dilihat pada lampiran 8. Perbedaan rata-rata berat udem pada uji pendahuluan dosis efektif natrium diklofenak dapat dilihat pada gambar 11.



0,048 0,04 0,032 0,024 0,016 0,008 0 9,75

10,79

11,95

dosis diklofenak-Na (m g/kgBB)

Gambar 11. Diagram batang rata-rata berat udema kaki mencit hasil uji pendahuluan penetapan dosis efektif natrium diklofenak

3. Uji pendahuluan waktu pemberian natrium diklofenak dengan dosis efektif Tujuan uji ini adalah untuk mengetahui waktu yang tepat untuk pemberian dosis efektif natrium diklofenak berdasarkan dosis efektif yang telah ditetapkan sebelumnya. Untuk menentukan waktu pemberian dosis

natrium diklofenak

digunakan dosis 9,75 mg/kg BB sebagai dosis efektifnya. Uji pendahuluan dilakukan dengan menggunakan selang waktu 15, 30, 45, dan 60 menit sebelum injeksi karagenin 1%. Kemudian setiap kelompok dikorbankan pada selang waktu 3 jam setelah injeksi karagenin 1%, dipotong kedua kakinya pada sendi torsocrural dan ditimbang. Dari hasil uji diketahui pada waktu 15 menit sebelun injeksi karagenin 1% berat udema rata–rata yang terjadi sebesar 0,0425 g, pada 30 menit sebesar 0,0397 g, pada 45 menit sebesar 0,0473 g, dan pada 60 menit sebesar 0,0552 g. Data ini dianalisis dengan uji Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui homogenitas data. Signifikan yang diperoleh sebesar 0,954 dan karena signifikasi datanya melebihi 0,05


maka data yang diperoleh berdistribusi normal sehingga dapat dilanjutkan dengan analisis anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95%, terlihat pada tabel V. Tabel V. Rangkuman hasil anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95% data berat udema kaki mencit pada uji pendahuluan waktu pemberian natrium diklofenak dengan dosis efektif (9,75 mg/kgBB) dalam rentang waktu tertentu Keterangan Berat udema antar kelompok perlakuan

Df

F

Probabilitas (p)

3

4,001

0,052

Hasilnya menunjukkan bahwa antar kelompok memberikan hasil yang tidak signifikan karena p>0,05. Untuk mengetahui perbedaan antar kelompok bermakna atau tidak bermakna perlu dilakukan uji scheffe. Hasil uji Scheffe dapat dilihat pada tabel VI. Tabel VI. Rata-rata berat udema kaki mencit pada penetapan waktu pemberian dosis efektif natrium diklofenak dan hasil uji Scheffe Waktu pemberian (menit) 15 30 45 60

Mean BU ± SE (g) 0,0425 ± 0,0013 0,0397 ± 0,0042 0,0473 ± 0,0043 0,0552 ± 0,0027

n

Hasil uji Scheffe pada waktu pemberian (menit) 15 30 45 60

3 3 3 3

tb tb tb

tb tb tb

Tb Tb Tb

tb tb tb -


Setelah dilakukan uji statistik diperoleh hasil bahwa keempat waktu pemberian tersebut memiliki perbedaan tidak bermakna sehingga semua dapat digunakan. Waktu pemberian larutan natrium diklofenak pada menit ke-30 mampu


menurunkan berat udema paling besar dibandingkan waktu pemberian pada menitmenit lainnya. Hal ini berarti pada menit ke-30 natrium diklofenak telah diabsorpsi secara maksimal sehingga memberikan hasil berupa penurunan berat udema secara maksimal sehingga dapat diambil kesimpulan bahwa waktu pemberian natrium diklofenak dengan dosis efektif (9,75 mg/kgBB) dapat diberikan pada menit ke-30 sebelum injeksi suspensi karagenin secara subplantar. Hasil uji pendahuluan rata-rata berat udema pada waktu pemberian dosis efektif natrium diklofenak dapat dilihat pada lampiran 10. Perbedaan rata-rata berat udema pada uji pendahuluan waktu pemberian natrium diklofenak dengan dosis efektif dalam rentang waktu tertentu dapat dilihat pada gambar 12.


0,06 0,05 0,04 0,03 0,02 0,01 0 15

30

45

60

w ak tu (m e nit)

Gambar 12. Diagram batang rata-rata berat udema kaki mencit hasil uji pendahuluan penetapan waktu pemberian dosis efektif natrium diklofenak

4. Uji pendahuluan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani Uji pendahuluan waktu pemberian ektrak etanol daun senggani secara peroral ini bertujuan untuk mengetahui rentang waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani sampai memberikan efek anti inflamasi yang optimal pada mencit.


Pada uji ini mencit dibagi dalam empat kelompok (masing-masing 3 ekor) berdasar rentang waktu 15, 30, 45, dan 60 menit sebelum injeksi karagenin 1%. Pada rentang waktu 15, 30, 45, dan 60 menit sebelum injeksi karagenin 1% subplantar, masing-masing diberikan ekstrak etanol daun senggani secara per oral dengan dosis 1670 mg/kg BB, konsentrasi 5%. Berdasarkan orientasi dan penelitian Tusthi (2006), dosis ini adalah dosis maksimal ekstrak etanol daun senggani yang bisa diberikan pada mencit. Tiga jam setelah diinjeksi karagenin 1% mencit dikorbankan, dipotong kakinya pada sendi torsocrural dan ditimbang. Hasil penimbangan menunjukkan pada menit ke-15

sebelum injeksi karagenin rata-rata berat udemanya sebesar

0,0878 g, menit ke-30 sebesar 0,0683 g, menit ke-45 sebesar 0,0801 g, dan menit ke60 sebesar 0,0704 g. Data ini dianalisis dengan uji Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui homogenitas data. Signifikan yang diperoleh sebesar 0,886 dan karena signifikasi datanya melebihi 0,05 maka data yang diperoleh homogen atau dapat dikatakan distribusi datanya normal sehingga dapat dilanjutkan dengan analisis anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95%, terlihat pada tabel VII. Tabel VII. Rangkuman hasil anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95% data berat udema kaki mencit pada uji pendahuluan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani (dosis 1670 mg/kgBB) dalam rentang waktu tertentu Keterangan Berat udema antar kelompok perlakuan

Df

F

Probabilitas (p)

3

16,997

0,001

Pada tabel VII dapat diketahui bahwa probabilitas (p) yang terjadi sebesar 0,001, sehingga dapat disimpulkan bahwa berat udema yang terjadi antar tiap


kelompok perlakuan memiliki perbedaan yang bermakna (p<0,05). Kemudian dilakukan uji Scheffe untuk mengetahui perbedaan antar kelompok bermakna atau tidak bermakna. Hasil uji Scheffe dapat dilihat pada tabel VIII. Tabel VIII. Rata-rata berat udema kaki mencit pada penetapan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani (dosis 1670 mg/kgBB) dan hasil uji Scheffe Waktu pemberian (menit) 15 30 45 60

Mean BU ± SE (g) 0,0878 ± 0,0028 0,0683 ± 0,0019 0,0801 ± 0,0011 0,0704 ± 0,0025

n

Hasil uji Scheffe pada waktu pemberian (menit) 15 30 45 60

3 3 3 3

bb tb bb

bb bb tb

Tb Bb Tb

bb tb tb -


Dari hasil uji Scheffe, ternyata waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani antar menit ke-15 dan menit ke-45 menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna, begitu juga antar menit ke-30 dan menit ke-60 menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna. Dari hasil tersebut ada dua data yang bisa dipilih untuk waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani yaitu data menit ke-30 dan menit ke-60. Tetapi dipilih waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani pada menit ke-30 karena mampu menurunkan berat udema paling besar dibandingkan waktu pemberian pada menitmenit lainnya selain itu juga untuk efesiensi waktu. Dapat diambil kesimpulan bahwa waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani dengan dosis 1670 mg/kgBB dapat


diberikan pada menit ke-30 sebelum injeksi suspensi karagenin 1% secara subplantar. Hasil uji pendahuluan rata-rata berat udema pada waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani dapat dilihat pada lampiran 12. Perbedaan rata-rata berat udema pada uji pendahuluan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani dalam rentang waktu tertentu dapat dilihat pada gambar 13.


0,1

0,08

0,06

0,04

0,02

0 15

30

45

60

w aktu (m enit)

Gambar 13. Diagram batang rata-rata berat udema kaki mencit hasil uji pendahuluan penetapan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani.

C. Hasil Uji Efek Anti inflamasi Penelitian uji efek anti inflamasi dilakukan untuk mengetahui apakah ekstrak etanol daun senggani mempunyai efek anti inflamasi sekaligus besarnya kemampuan ekstrak etanol daun senggani sebagai anti inflamasi. Efek anti inflamasi yang dimaksud adalah kemampuan ekstrak etanol daun senggani untuk mengurangi pembengkakan kaki hewan uji akibat injeksi karagenin 1% secara subplantar. Efek anti inflamasi dilihat dari berat udema akibat pemberian ekstrak etanol daun senggani


dan penginduksian karagenin. Pengurangan udema memperlihatkan adanya efek anti inflamasi akibat pemberian ekstrak etanol daun senggani. Uji efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani ini menggunakan metode induksi udema pada kaki belakang mencit. Efek anti inflamasi yang dtimbulkan dapat dihitung dengan persen respon anti inflamasi menurut Langford et al. (1972). Data persen respon anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani dibandingkan dengan kontrol, baik kontrol positif (natrium diklofenak) maupun kontrol negatif (karagenin dan CMC-Na). Metode ini dipilih karena caranya sederhana, baik dari perlakuan, pengamatan, pengukuran, tidak membutuhkan alat yang banyak dan rumit, lebih hemat waktu dibanding uji lainnya, maupun pengolahan datanya. Pada perlakuan uji anti inflamasi hewan uji dibagi dalam tujuh kelompok, kelompok I merupakan kelompok karagenin 1% sebagai zat peradang. Kelompok II merupakan kontrol negatif CMC-Na 1%. Kelompok III merupakan kelompok natrium diklofenak dosis 9,75 mg/kgBB sebagai kontrol positif. Kelompok IV, V, VI, dan VII merupakan kelompok perlakuan menggunakan ekstrak etanol daun senggani dengan dosis masing-masing 850 mg/kg BB, 1000 mg/kg BB, 1330 mg/kg BB, dan 1670 mg/kg BB. Kelompok karagenin 1% nantinya digunakan untuk menghitung persen anti inflamasi dari setiap kelompok perlakuan. Karagenin biasa digunakan sebagai penginduksi inflamasi karena sifatnya yang tidak merusak jaringan saat digunakan untuk memprediksi potensial terapetik obat-obat anti inflamasi steroid ataupun non steroid. Pada kelompok ini mencit diperlakukan sama seperti saat uji pendahuluan, dimana 0,05 ml suspensi karagenin 1% diinjeksikan pada kaki kiri belakang,


sedangkan kaki kanan hanya diinjeksi tanpa suspensi karagenin. Saat menginjeksi secara subplantar harus hati-hati, jarum jangan terlalu masuk ke dalam, diusahakan tepat di bawah lapisan kulit telapak kaki. Hal tersebut perlu diperhatikan agar tidak menimbulkan pendarahan ataupun luka yang terlalu banyak sehingga bisa mempengaruhi udema yang terjadi. Setelah 3 jam kedua kaki dipotong pada sendi torsocrural dan ditimbang. Berat udema merupakan hasil pengurangan berat kaki kiri dengan kaki kanan. Pada kelompok II atau kontrol negatif CMC-Na 1%, setiap mencit diberi perlakuan per oral CMC-Na 1% dengan volume pemberian maksimal untuk mencit 30 g adalah 1 ml. CMC-Na 1% dipilih sebagai kontrol negatif karena digunakan sebagai pelarut natrium diklofenak dan ekstrak etanol daun senggani. Dengan adanya kelompok ini kita bisa mengetahui apakah CMC-Na 1% memberikan pengaruh terhadap udema yang diinduksi karagenin 1% atau tidak. Pemberian CMC-Na 1% dilakukan 30 menit sebelum injeksi karagenin mengikuti uji pendahuluan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani. Kelompok kontrol positif dipilih natrium diklofenak karena obat ini termasuk NSAID yang terkuat efek anti radangnya dengan efek samping yang kurang keras dibanding dengan obat anti inflamasi non steroid lainnya (Tjay dan Rahardja, 2002). Dikatakan kurang keras karena aktifitas natrium diklofenak lebih selektif pada COX2 sehingga efek samping gangguan pencernaan tidak banyak ditemukan. Dengan pembanding natrium diklofenak ini diharapkan bisa menemukan obat baru yang mendekati, sama, atau bahkan lebih baik efek anti inflamasinya dan lebih kecil efek sampingnya. Dosis natrium diklofenak yang dipakai adalah 9,75 mg/kg BB dengan


waktu pemberian

adalah 30 menit sebelum injeksi karagenin, yang pada uji

pendahuluan memberikan rata-rata berat udema paling kecil. Kelompok IV, V, VI, dan VII adalah kelompok perlakuan dosis ekstrak etanol daun senggani. Mencit pada tiap kelompok diberi ekstrak etanol daun senggani sesuai dosis masing-masing yaitu 850 mg/kg BB, 1000 mg/kg BB, 1330 mg/kg BB, dan 1670 mg/kg BB (kelipatan dosis menggunakan faktor perkalian 1,25), 30 menit kemudian diinjeksi karagenin dan setelah 3 jam dikorbankan, dipotong kedua kakinya dan ditimbang. Pada perlakuan diperoleh bahwa berat rata-rata udema pada kelompok karagenin 1% sebesar 0,0923 g, kelompok kontrol CMC-Na 1% sebesar 0,0918 g, kelompok kontrol positif natrium diklofenak sebesar 0,0398 g, kelompok dosis senggani 850 mg/kg BB sebesar 0,0824 g, dosis 1000 mg/kg BB sebesar 0,0816 g, dosis 1330 mg/kg BB sebesar 0,0621 g, dan dosis 1670 mg/kg BB sebesar 0,0692 g. Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan kontrol karagenin 1% memberikan berat udema paling besar diantara kelompok perlakuan lainnya. Kelompok kontrol CMC-Na 1% juga menghasilkan rata-rata berat udema yang besar. Ini berarti karagenin 1% dan CMC-Na 1% tidak memiliki efek anti inflamasi. Berat udema paling kecil dihasilkan oleh perlakuan kontrol natrium diklofenak. Hal ini dikarenakan natrium diklofenak merupakan obat AINS yang telah terbukti mempunyai efek anti inflamasi yang tinggi. Selain itu natrium diklofenak termasuk salah satu obat anti inflamasi non steroid dan memiliki profil sebagai COX-2 prefernential inhibitor (Kasjmir, 2002) dimana natrium diklofenak mampu menekan


COX-2 yang menfasilitasi terjadinya respon inflamasi (Furst dan Munster, 2002). Oleh karena itu natrium diklofenak digunakan sebagai kontrol positif. Hasil uji perlakuan berupa data rata-rata berat udema kaki mencit akibat pemberian ekstrak etanol daun senggani dalam empat peringkat dosis beserta kontrolnya, dapat dilihat pada lampiran 14 diperjelas dengan diagram batang yang ditampilkan pada gambar 14.

0,1

rata-rata udema (g)

0,08

0,06

0,04

0,02

0 I

II

III

IV

V

VI

VII

kelompok perlakuan

Gambar 14. Diagram batang rata-rata berat udema kaki mencit akibat perlakuan ekstrak etanol daun senggani dalam 4 peringkat dosis beserta kontrolnya. Keterangan : I : II : III : IV : V : VI : VII : EEDS :

kelompok kontrol (-) injeksi karagenin 1 % kelompok kontrol (-) pemberian CMC-Na 1% kelompok kontrol (+) pemberian natrium diklofenak 9,75 mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 850 mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 1000 mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 1330 mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 1670 mg/kg BB Ekstrak Etanol Daun Senggani


Hasil penelitian tersebut selanjutnya dicari persen efek anti inflamasinya menurut metode Langford. Hasil perhitungan persentase efek anti inflamasi menunjukkan kontrol negatif CMC-Na 1% sebesar 0,54%, pada kontrol positif natrium diklofenak punya efek anti inflamasi sebesar 56,90%, pada dosis 850 mg/kgBB sebesar 10,75%, pada dosis 1000 mg/kgBB sebesar 11,57%, pada dosis 1330 mg/kgBB sebesar 32,67%, dan dosis 1670 mg/kgBB punya efek anti inflamasi sebesar 25,07%. Data persen (%) efek anti inflamasi distatistik uji Kolmogorov-Smirnov, ternyata

mempunyai

nilai

signifikansi

sebesar

0,416

yang

berarti

nilai

signifikansinya > 0,05 sehingga dapat dikatakan distribusinya normal atau homogen. Kemudian dilanjutkan dengan analisis anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95%, terlihat pada tabel IX berikut ini. Tabel IX. Rangkuman hasil anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95 % persentase efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani dalam empat peringkat dosis beserta kontrolnya Keterangan Persentase efek anti inflamasi antar kelompok perlakuan

df

F

Probabilitas (p)

6

168,989

0,000

Hasil analisis statistik anava satu arah menunjukkan bahwa data antar kelompok perlakuan hasil yang signifikan (p<0,05). Selanjutnya dilakukan uji Shceffe untuk mengetahui perbandingan antar kelompok yang memiliki perbedaan yang bermakna dan tidak bermakna. Hasil uji Shceffe dapat dilihat pada tabel XI berikut ini.


Tabel X. Data berat udema kaki mencit, persentase efek anti inflamasi, dan uji Shceffe pada perlakuan ekstrak etanol daun senggani dalam empat peringkat dosis beserta kontrolnya Klp

Mean BU ± SE (g)

n

I

0,0923 ± 0,0024

5

II

0,0918 ± 0,0007

III IV

0,0398 ± 0,0015

Respon A-I %

Hasil Uji Scheffe terhadap

0

Klp I -

Klp II tb

Klp III bb

Klp IV bb

Klp V bb

Klp VI bb

Klp VII bb

5

0,54

tb

-

bb

bb

bb

bb

bb

0,0824 ± 0,0016

5 5

56,90 10,75

bb bb

bb bb

bb

bb -

bb tb

bb bb

bb bb

V

0,0816 ± 0,0017

5

11,57

bb

bb

bb

tb

-

bb

bb

VI

0,0621 ± 0,0019

5

32,67

bb

bb

bb

bb

bb

-

tb

VII

0,0692 ± 0,0016

5

25,07

bb

bb

bb

bb

bb

tb

-

Keterangan : BU : SE : bb : tb : A-I : n : I : II : III : IV : V : VI : VII : EEDS :

Berat udema Standar Eror berbeda bermakna berbeda tidak bermakna Anti inflamasi jumlah mencit kelompok kontrol (-) injeksi karagenin 1 % kelompok kontrol (-) pemberian CMC-Na 1% kelompok kontrol (+) pemberian natrium diklofenak 9,75 mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 850 mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 1000 mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 1330 mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 1670 mg/kg BB Ekstrak Etanol Daun Senggani

Data persen efek anti inflamasi kelompok kontrol negatif CMC-Na 1%, kelompok kontrol positif natrium diklofenak, dan empat peringkat dosis ekstrak etanol daun senggani beserta contoh perhitungannya dapat dilihat pada lampiran 15. Besarnya respon atau persen efek anti inflamasi antar kelompok bisa ditunjukkan pada gambar 15.


persen efek anti inflamasi (%)

60 50 40 30

20 10 0 I

II

III

IV

V

VI

VII

kelom pok perlakuan

Gambar 15. Diagram batang persentase efek anti inflamasi perlakuan ekstrak etanol daun senggani beserta kontrolnya Keterangan : I : II : III : IV : V : VI : VII : EEDS :

kelompok kontrol (-) injeksi karagenin 1 % kelompok kontrol (-) pemberian CMC-Na 1% kelompok kontrol (+) pemberian natrium diklofenak 9,75 mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 850 mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 1000 mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 1330 mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 1670 mg/kg BB Ekstrak Etanol Daun Senggani

Berdasarkan perhitungan persen efek anti inflamasi kelompok kontrol negatif CMC-Na 1% memberikan hasil perbedaan tidak bermakna dengan kontrol negatif karagenin 1% sedangkan dengan kelompok perlakuan lainnya memberikan hasil berbeda bermakna. Persentase efek anti inflamasi CMC-Na 1% yaitu sebesar 0,54%. Karena nilainya kecil, hampir mendekati 0%, maka CMC-Na 1% sebagai kontrol negatif dianggap tidak memberikan efek anti inflamasi pada saat digunakan sebagai pelarut ekstrak etanol daun senggani.


Kelompok IV dosis 850 mg/kgBB, kelompok V dosis 1000 mg/kgBB, kelompok VI dosis 1330 mg/kgBB, dan kelompok VII dosis 1670 mg/kgBB menujukkan perbedaan bermakna baik dengan kelompok kontrol negatif karagenin 1%, CMC-Na 1%, maupun kelompok kontrol positif natrium diklofenak. Hal ini berarti keempat peringkat dosis tersebut memiliki efek anti inflamasi hanya saja relatif lebih kecil bila dibandingkan dengan kontrol positif

natrium diklofenak,

karena kurang mampu dalam menghambat atau mereduksi terjadinya udema setelah pemberian karagenin 1% subplantar. Dari hasil penelitian dapat dilihat bahwa pada pemberian ekstrak etanol dosis 850; 1000; dan 1330 mg/kgBB menunjukkan penurunan udema dan peningkatan persentase efek anti inflamasi. Namun, setelah pemberian dosis 1670 mg/kgBB berat udema meningkat kembali sehingga efek anti inflamasinya menurun. Dilihat dari persen efek anti inflamasinya kelompok VI dan kelompok VII memiliki persen efek anti inflamasi yang lebih besar (mendekati persen efek anti inflamasi natrium diklofenak) bila dibandingkan dengan kelompok IV dan kelompok V. Perlakuan ekstrak etanol daun senggani dosis 1330 mg/kgBB memberikan efek anti inflamasi 32,67% dan dosis 1670 mg/kgBB memberikan efek anti inflamasi 25,07% sedangkan dosis 850 mg/kgBB dan dosis 1000 mg/kgBB memberikan efek anti inflamasi masing-masing sebesar 10,75% dan 11,57%. Untuk kelompok pemberian dosis ekstrak etanol daun senggani yaitu antar kelompok IV dan kelompok V menunjukkan perbedaan tidak bermakna, yang berarti persen efek anti inflamasi antara kedua kelompok ini tidak berbeda walaupun pemberiannya dalam dosis yang berbeda, yaitu dosis 850 mg/kgBB dan 1000


mg/kgBB. Sedangkan antar kelompok VI dan kelompok VII menunjukkan perbedaan tidak bermakna, yang berarti persen efek anti inflamasi antara kedua kelompok ini tidak berbeda walaupun pemberiannya dalam dosis yang berbeda, yaitu dosis 1330 mg/kgBB dan 1670 mg/kgBB. Akan tetapi kelompok IV dan V bila dibandingkan dengan kelompok VI dan VII menunjukkan perbedaan yang bermakna yang berarti persen efek anti inflamasinya memiliki perbedaan yang berarti. Persen efek anti inflamasi perlakuan yang lebih kecil daripada persen efek anti inflamasi natrium diklofenak dan persen efek anti inflamasi dari dosis rendah ke dosis tinggi yang naik lalu turun lagi ini terjadi, diduga karena kandungan kimia dalam tumbuhan senggani, yaitu flavonoid, steroid, dan tanin yang dapat larut dalam pelarut etanol dapat memberikan efek anti inflamasi. Akibatnya, kerja dari senyawasenyawa kimia tersebut diduga saling berkompetisi dimana pada akhirnya menjadi tidak efektif lagi dalam menghambat inflamasi. Selain itu, diduga radikal bebas yang berada di dalam tubuh jumlahnya berlebihan. Perlu diingat, bahwa reaksi penangkapan radikal bebas oleh flavonoid tetap menghasilkan radikal bebas walaupun aktivitasnya rendah. Keberadaan radikal bebas yang berlebihan serta reaktivitas flavonoid yang berlebihan inilah yang mungkin menyebabkan ekstrak etanol daun senggani menjadi bersifat prooksidan sehingga aktivitasnya sebagai anti inflamasi menjadi berkurang. Akan tetapi, radikal bebas tidak selamanya bersifat buruk bagi makhluk hidup. Prinsip penting yang perlu dipahami adalah bahwa radikal bebas juga berperan sebagai sistem pertahanan tubuh terhadap serangan mikroorganisme atau senyawa asing karena kereaktiannya dan efek rusaknya. Radikal bebas tetap diperlukan bagi


makhluk hidup. Dalam kondisi normal, radikal bebas dan antioksidan samasamaberada dalam tubuh dengan jumlah antioksidan lebih banyak daripada radikal bebas (Hariyanto, 2003). Radikal bebas yang berlebihan akan menyebabkan kerusakan jaringan sehingga menimbulkan nyeri. Dalam proses peradangan, radikal bebas terbentuk ketika asam arakhidonat dikonversikan menjadi peroksida baik melalui jalur siklooksigenase maupun lipoksigenase. Ketika terjadi kerusakan jaringan organ produksi peroksida meningkat seiring dengan peningkatan jumlah radikal bebas, padahal tubuh memproduksi antioksidan endogen yang terbatas untuk menstabilkan radikal bebas. Apabila jumlah radikal bebas makin banyak, antioksidan endogen tak mampu lagi melumpuhkannya secara efektif sehingga harus ada tambahan antioksidan dari luar (eksogen) yang berasal dari bahan makanan (Sibuea, 2004). Pada penelitian ini diharapkan antioksidan eksogen dapat diperoleh dari ekstrak etanol daun senggani, karena ekstrak etanol daun senggani mengandung senyawa kimia rutin, kuersetrin, dan kuersitrin yang merupakan beberapa zat aktif golongan flavonoid. Pada kenyataannya, golongan flavonoid bekerja sebagai anti-oksidan kuat, melindungi dari serangan oksidatif dan radikal bebas (Anonim, 2006a). Berdasarkan hal tersebut, efek anti inflamasi yang ditimbulkan oleh ekstrak etanol daun senggani diduga disebabkan karena adanya senyawa kimia golongan flavonoid yaitu rutin, kuersetin, dan kuersitrin. Flavonoid ini dapat menghambat enzim siklooksigenase pada pembentukan prostaglandin. Dengan terhambatnya pembentukan prostaglandin, udema yang muncul dapat dikurangi atau dihambat. Selain itu, flavonoid dapat bekerja sebagai inhibitor lipoksigenase. Penghambatan


lipoksigenase dapat menimbulkan pengaruh lebih luas karena reaksi lipoksigenase merupakan langkah pertama pada jalur yang menuju ke hormon eikosanoid seperti prostaglandin

dan

tromboksan

(Robinson,

1991).

Dengan

terhambatnya

pembentukan prostaglandin, udema yang muncul dapat dikurangi atau dihambat. Berdasarkan hasil perhitungan persen efek anti inflamasi menunjukkan terjadinya kenaikan persen efek anti inflamasi dari dosis 1000 mg/kg BB sampai dosis 1330 mg/kg BB dan terjadi penurunan saat digunakan dosis 1670 mg/kg BB. Hal ini menunjukkan bahwa pada penelitian ini dosis 1330 mg/kg BB merupakan dosis paling efektif sebagai anti inflamasi dibandingkan dosis yang lain dan efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani ini tidak tergantung pada kenaikan dosis. Dari hasil yang diperoleh tidak menutup kemungkinan adanya dosis yang lebih efektif yang berada diantara dosis 1000 mg/kg BB dan 1330 mg/kg BB dengan penyempitan rentang dosis tersebut diharapkan dapat diperoleh dosis ekstrak etanol daun senggani yang lebih efektif. Perlu adanya penelitian lebih lanjut untuk meneliti fenomena efek tidak tergantung dosis pada dosis ekstrak etanol senggani antara dosis 1000 mg/kgBB sampai 1330 mg/kgBB. Sedangkan untuk hasil perhitungan potensi relatif efek anti inflamasi pemberian menunjukkan ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kgBB, 1000 mg/kgBB, 1330 mg/kgBB, dan 1670 mg/kgBB menghasilkan potensi relatif efek anti inflamasi secara berturut-turut sebesar 18,89%, 20,33%, 57,42%, dan 44,06%. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun senggani mempunyai potensi relatif efek anti inflamasi, khususnya pada dosis 1330 mg/kgBB. Hasil perhitungan potensi


relatif efek anti inflamasi pemberian ekstrak etanol daun senggani dalam empat peringkat dosis dapat dilihat pada lampiran 16.

D. Perbandingan Hasil Penelitian Dengan Penelitian Lain Selain uji efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani, uji efek analgesik ekstrak etanol daun senggani, uji efek anti inflamasi ekstrak petroleum eter daun senggani, dan uji efek analgesik ekstrak petroleum eter daun senggani juga dilakukan dengan peringkat dosis yang sama. Pengujian menggunakan ekstrak dengan dua jenis pelarut yang berbeda ini bertujuan untuk membandingkan besarnya efek yang yang dapat ditimbulkan oleh ekstrak etanol daun senggani yang bersifat polar dengan ekstrak petroleum eter daun senggani yang bersifat non polar. Data perbandingan persen efek anti inflamasi dan efek analgesik ekstrak etanol daun senggani dengan ekstrak petroleum eter daun senggani dapat dilihat pada tabel XI. Tabel XI. Data perbandingan persen efek anti inflamasi dan efek analgesik ekstrak etanol daun senggani dengan ekstrak petroleum eter daun senggani

Klmpk I II III IV

Keterangan : I : II : III : IV :

Ekstrak Etanol Daun Senggani % Efek % Efek Anti inflamasi Analgesik (Tusthi, 2006) 10,75 88,06 11,57 83,42 32,67 68,26 25,07 44,56

Ekstrak Petroleum Eter Daun Senggani % Efek % Efek Anti inflamasi Analgesik (Sudarto, 2006) (Riadiani, 2006) 16,03 -32,75 19,39 -44,72 29,36 -0,35 43,34 80,28

kelompok perlakuan dengan dosis 850 mg/kg BB kelompok perlakuan dengan dosis 1000 mg/kg BB kelompok perlakuan dengan dosis 1330mg/kg BB kelompok perlakuan dengan dosis 1670 mg/kg BB


Hasil pengujian efek analgesik ekstrak etanol daun senggani, menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kgBB, 1000 mg/kgBB, 1330 mg/kgBB, dan 1670 mg/kgBB memberikan persen efek analgesik sebesar 88,06%, 83,42%, 68,26%, dan 44,56% Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun senggani mempunyai potensi efek analgesik, khususnya pada dosis 850 mg/kgBB (Tusthi, 2006). Perbandingan persen efek anti inflamasi dan persen efek analgesik ekstrak etanol daun senggani dapat dilihat dalam gambar 16.

100

% Efek

80 60 40 20 0 I

II

III

IV

Kelom pok Perlakuan % Efek Anti-Inflamasi Ekstrak Etanol Daun Senggani % Efek Analgesik Ekstrak Etanol Daun Senggani (Tusthi, 2006)

Gambar 16. Diagram batang perbandingan persentase efek anti inflamasi dan efek analgesik EEDS Keterangan : I : II : III : IV : EEDS :

kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 850 mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 1000 mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 1330mg/kg BB kelompok perlakuan EEDS dengan dosis 1670 mg/kg BB Ekstrak Etanol Daun Senggani

Jika dibandingkan dengan efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani, efek analgesik ektrak etanol daun menunjukkan semakin kecil dosis persen efek analgesiknya semakin besar. Hal ini diduga karena besarnya peringkat dosis yang


digunakan belum mencukupi untuk memberi efek anti inflamasi, sehingga efek yang muncul kecil dan persen efek anti inflamasi yang didapatkan kecil. Hal ini mungkin dapat dimengerti karena ada beberapa jenis obat analgesikanti inflamasi, misalnya asetosal, membutuhkan dosis yang lebih tinggi apabila digunakan sebagai obat anti inflamasi dibandingkan bila digunakan sebagai obat analgesik. Dosis perhari asetosal sebagai obat analgetik adalah 300-900mg, bila diperlukan maksimum 4 g per hari (Anonim, 2000). Asetosal berkhasiat sebagai obat anti-radang akibat gagalnya sintesa prostaglandin pada dosis lebih besar dari normal yaitu diatas 5 g per hari (Tjay dan Rahardja, 2002). Kemungkinan ekstrak etanol daun senggani termasuk di dalam obat analgesik-anti inflamasi jenis ini. Selain itu, diduga ada mekanisme lain yang belum diketahui, yaitu mekanisme kerja suatu obat sebagai analgesik dan sebagai anti inflamasi. Mekanisme yang sudah diketahui selama ini adalah melalui jalur siklooksigenase atau lipoksigenase sehingga perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai kemungkinan adanya jalur mekanisme yang lain. Kemungkinan yang lain yaitu dosis di atas 850 mg/kgBB telah melebihi dosis efektifnya itu sendiri sehingga semakin tinggi dosis malah semakin kecil efeknya. Diduga efek analgesik ekstrak etanol daun senggani memiliki dosis efektif pada dosis 850 mg/kgBB atau dibawah dosis tersebut sehingga perlu penelitian lebih lanjut untuk mengetahui efek tidak tergantung dosis dibawah dosis 850 mg/kgBB. Untuk perbandingan persen efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani dan persen efek anti inflamasi ekstrak petroleum eter daun senggani dapat dilihat dalam gambar 17.


50

% Efek

40 30 20 10 0 I

II

III

IV

Kelompok Perlakuan % Efek Anti-Inflamasi Ekstrak Etanol Daun Senggani %Efek Anti-Inflamasi Ekstrak Petroleum Eter Daun Senggani (Sudarto, 2006)

Gambar 17. Diagram batang perbandingan persentase efek anti inflamasi EEDS dan EPEDS Keterangan : I : II : III : IV : EEDS : EPEDS :

kelompok perlakuan dosis 850 mg/kg BB kelompok perlakuan dosis 1000 mg/kg BB kelompok perlakuan dosis 1330mg/kg BB kelompok perlakuan dosis 1670 mg/kg BB Ekstrak Etanol Daun Senggani Ekstrak Petroleum Eter Daun Senggani

Hasil pengujian efek anti inflamasi ekstrak petroleum eter daun senggani, menunjukkan bahwa pada dosis 850 mg/kgBB, 1000 mg/kgBB, 1330 mg/kgBB, dan 1670 mg/kgBB memberikan persen efek anti inflamasi sebesar 16,03%, 19,39%, 29,36%, dan 43,34%. Jika dibandingkan dengan efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani, efek anti inflamasi ekstrak petroleum eter daun senggani menunjukkan efek anti inflamasi yang lebih besar. Hal ini karena kontrol negatif yaitu minyak goreng yang digunakan untuk melarutkan ekstrak petroleum eter persen efek anti inflamasinya lebih dari 7% sehingga diduga ikut memberikan efek anti inflamasi pada saat


perlakuan dosis. Akibatnya persen efek anti inflamasi yang diperoleh lebih besar. Sebaiknya dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai pengaruh minyak goreng sebagai pelarut dalam uji anti inflamasi ekstrak petroleum eter daun senggani dan penggunaan pelarut selain minyak goreng, misalnya minyak kelapa, minyak zaitun dan lain-lain. Kemungkinan yang lain karena senyawa kimia daun senggani yang terdapat dalam ekstrak etanol dan petroleum eter berbeda jenisnya. Kandungan kimia daun senggani yang dapat larut dalam pelarut petroleum eter adalah steroid. Flavonoid yang mempunyai aktivitas sebagai anti inflamasi paling kuat tidak dapat terlarut di dalam pelarut petroleum eter. Diduga hanya steroid saja yang berperan sebagai anti inflamasi dalam penelitian efek anti inflamasi ekstrak petroleum eter daun senggani. Selain itu, karena kandungannya diduga berbeda maka mekanisme penghambatan radangnya pun diduga berbeda. Untuk itu sebaiknya perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai mekanisme penghambatan inflamasi dan kandungan senyawa-senyawa kimia yang terdapat baik di dalam ekstrak etanol maupun ekstrak petroleum eter daun senggani. Penelitian yang juga dilakukan yaitu efek analgesik ekstrak petroleum eter pada mencit putih betina (Riadiani, 2006). Hasil pengujian efek analgesik ekstrak petroleum eter daun senggani, menunjukkan bahwa pada dosis 850 mg/kgBB, 1000 mg/kgBB, 1330 mg/kgBB, dan 1670 mg/kgBB memberikan persen efek analgesik sebesar -32,75%, -44,72%, -0,35%, dan 80,28% (Riadiani, 2006). Seperti halnya pada penelitian yang dilakukan oleh Sudarto (2006), hasil persen efek analgesik ini diduga juga dipengaruhi oleh kontrol negatif minyak


goreng yang digunakan sebagai pelarut menunjukkan nilai yang besar, sehingga ikut memberikan efek analgesik pada saat perlakuan dosis pemberian ekstrak petroleum eter daun senggani. Kemungkinan yang lain karena senyawa kimia daun senggani yang terdapat dalam ekstrak etanol dan petroleum eter berbeda jenisnya. Selain itu, karena kandungannya diduga berbeda maka mekanisme penghambatan nyerinya pun diduga juga berbeda. Berdasarkan hasil perhitungan persen efek analgesik, menunjukkan terjadinya kenaikan yang cukup drastis persen analgesik dari dosis 1330 mg/kg BB sampai dosis 1670 mg/kg BB, sedangkan pada dosis 850, 1000, dan 1330 mg/kgBB nilai persen efek analgesiknya negatif. Hal ini menunjukkan bahwa pada penelitian ini dosis 1330 mg/kg BB merupakan dosis paling efektif sebagai obat analgesik dibandingkan dosis yang. Selain itu, diduga dosis ekstrak petroleum eter daun senggani untuk obat analgetik mempunyai indeks terapi yang sempit dilihat dari lonjakan persen efek analgesiknya. Dari hasil yang diperoleh tidak menutup kemungkinan adanya dosis yang lebih efektif yang berada diantara dosis 1330 mg/kg BB dan 1670 mg/kg BB dengan penyempitan rentang dosis tersebut diharapkan dapat diperoleh dosis ekstrak etanol daun senggani yang lebih efektif. Perlu adanya penelitian lebih lanjut untuk meneliti fenomena efek tidak tergantung dosis pada dosis ekstrak etanol senggani antara dosis 1330 mg/kg BB dan 1670 mg/kg BB.


90 70

% Efek

50 30 10 -10 -30 -50 I

II

III

IV

Kelompok Perlakuan % Efek Anti-Inflamasi Ekstrak Etanol Daun Senggani %Efek Analgesik Ekstrak Etanol Daun Senggani (Tusthi, 2006) % Efek Anti-Inflamasi Ekstrak Petroleum Eter Daun Senggani (Sudarto, 2006) % Efek Analgesik Ekstrak Petroleum Eter Daun Senggani (Riadiani, 2006)

Gambar 18. diagram batang perbandingan persen efek anti inflamasi dan efek analgesik ekstrak etanol daun senggani dengan ekstrak petroleum eter daun senggani Keterangan : I : II : III : IV :

kelompok perlakuan dosis 850 mg/kg BB kelompok perlakuan dosis 1000 mg/kg BB kelompok perlakuan dosis 1330 mg/kg BB kelompok perlakuan dosis 1670 mg/kg BB

Dari hasil keempat penelitian yang telah diperoleh, dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol dan ekstrak petroleum eter mempunyai efek anti inflamasi dan efek analgesik, namun memiliki persentase yang berbeda. Diduga kemungkinan karena pengaruh dari senyawa-senyawa kimia yang terekstrak dan karena mekanisme lain yang belum diketahui, sehingga menyebabkan perbedaan pada masing-masing persentase efek anti inflamasi dan analgesik ekstrak etanol maupun ekstrak petroleum eter daun senggani.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan Berdasarkan penelitian uji ekstrak etanol daun senggani secara per oral pada mencit betina yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa 1. ekstrak etanol daun senggani mempunyai potensi sebagai obat anti inflamasi. 2. persentase efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani pada dosis 850 mg/kg BB; 1000 mg/kg BB; 1330 mg/kg BB; dan 1670 mg/kg BB berturut-turut adalah sebesar 10,75%; 11,57%; 32,67%; dan 25,07%. 3. potensi relatif efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kg BB; 1000 mg/kg BB; 1330 mg/kg BB; dan 1670 mg/kg BB terhadap natrium diklofenak dosis 9,75 mg/kgBB berturut-turut adalah sebesar 18,89 %; 20,33 %; 57,42%; dan 44,06%.

B. Saran Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan maka perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang : 1. pengujian senyawa yang bertanggung jawab terhadap efek anti inflamasi dari ekstrak etanol daun senggani ini. 2. pengujian efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani menggunakan metode lain. 3. pengujian efek anti inflamasi pada dosis antara 1000 mg/kg BB sampai 1330 mg/kg BB untuk melihat adanya fenomena efek tidak tergantung dosis.


DAFTAR PUSTAKA

Anonim, 1986, Sediaan Galenik, 8-25, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Anonim, 1991, Pedoman pengujian dan pengembangan Fitofarmaka : Penapisan Farmakologi, Pengujian Fitokimia dan Pengujian Klinik, 49-50, Yayasan Pengembangan dan Pemanfaatan Obat Bahan Alam , Jakarta. Anonim, 1992, Undang-Undang Republik Indonesia No. 23 Tahun 1992 Tentang Kesehatan, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Anonim, 1995, Materia Medika Indonesia, edisi IV, 143-147, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Anonim, 2000, Informatorium Obat Nasional Indonesia, 184, 357, Departemen Kesehatan Republik Indonesia Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta. Anonim, 2006, Senggani (Melastoma candidum Don), http://www.persi.com/Pusat/Data/&/Informasi/PERSI, Diakses pada 01 Januari 2006. Anonim, 2006a, Flavonoid, http://en.wikipedia.org/wiki/Flavonoid, Diakses pada tanggal 25 Juli 2006. Anonim, 2006b, Rutin, http://www.phytochemical.org/phyto/Rutin, Diakses pada tanggal 25 Juli 2006. Anonim, 2006c, Steroid, http://en.wikipedia.org/wiki/Steroid, Diakses pada tanggal 25 Juli 2006. Anonim, 2006d, Saponin, http://en.wikipedia.org/wiki/Saponin, Diakses pada tanggal 25 Juli 2006. Bruneton, 1999, Pharmacognosy Phythochemistry Medical Plants, 2nd Edition, 310343, translated by Hatton, C.K., Intercept Ltd. Christina, 2000, Daya Antifertilitas dan Efek Toksik Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Tikus Betina, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Dalimartha, S, 1999, Atlas Tanaman Obat Indonesia, Jilid I, 130-132, Trubus Agriwidya, Jakarta.


Davidson, M.E., 2004, Molecular Expression: Phytochemical Gallery-Saponin, http://www.molecularexpression.org/phyto/Saponin, Diakses pada tanggal 25 juli 2006. Djamal, R., 1988, Kimia Bahan Alam, 31-35, Universitas Andalas Padang, Sumatra Barat. Farlex, 2005, The Free Dictionary: Quersitron, http://www.thefreedictionary.org/farlex/Quercitron, Diakses pada tanggal 25 Juli 2006. Furst, D. E. dan Munster, T., 2002, Obat-obat Anti Inflamasi Nonsteroid, Obat-obat Antireumatik Pemodifikasi-penyakit, Analgesik Nonopioid dan Obat-obat untuk Pirai dalam Katzung, Farmakologi : Dasar dan Klinik, buku ke-2, edisi I, 449-452, 462, Salemba Medika, Jakarta. Gitawati, R., 1995, Radikal Bebas-Sifat dan Peran dalam Menimbulkan Kerusakan atau Kematian Sel, Cermin Dunia Kedokteran, No. 102, 33-35. Goldyne, M.E., 1986, Prostaglandin & Eikasanoid Lain dalam Katzung, B.G., 1989, Basic and Clinical Pharmacology, diterjemahkan oleh Petrus Ardianto, 251253, EGC, Jakarta. Guyton, A. C., 1993, Texbook of Medical Physiology, edisi 7, bagian I, alih bahasa oleh Ken Ariata T dkk, 72-75, EGC, Jakarta. Hanson, G.R., 2000, Analgesic, Antipyretic, and Anti Inflamantory Drugs, in Gennaro (Ed), Remington : The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, p.1456, Lippincott Williamson Wilkins, USA. Harborne, J.B., 1984, Phytochemical Methods, diterjemahkan oleh Padmawinata, K. Dan Soediro, (1987), Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan, Terbitan kedua, 84-92, Penerbit ITB, Bandung. Hardjasaputra, P.S.L., Budi Pranoto, G., Sembiring, S.U., Kamil, I., 2002, Data Obat di Indonesia, Edisi 10, 350-351, Grafidian Medipress. Hariyanto, 20003, Efek Hepatoprotektif Infus Simplisia Buah Makuto Dewo (Phaleria macrocarpa (Scheff. Boerl.) Pada Mencit Jantan Terinduksi CCl4, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Hertiani, T., 2000, Isolasi dan Identifikasi senyawa flavonoid Antioksidan dari Daun Plantaga mayor L., Tesis, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta


Irwan, Y.D., 2001, Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma Polyanthum Bl.) Terhadap Spermatogenitas Tikus Putih, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Ismirawati, Y., 2002, Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Tikus Jantan dan Betina, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Japri, A., 2001, Teratogenisitas Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Tikus Putih, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Kasjmir, Y. I., 2002, Indikasi Pemakaian NSAIDs Rasional Pada Penyakit Reumatik Inflamatif dalam Naskah Lengkap Pertemuan Ilmiah Tahunan Ilmu Penyakit Dalam FK UGM 2002, edisi I, cet I, Medika, Fakultas Kedokteran UGM bekerjasama dengan Pendidikan Kedokteran berkelanjutan Bagian Ilmu Penyakit Dalam FK UGM, Yogyakarta. Katarina, S.K., 2002, Uji Daya Antifungus Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) terhadap Candida albicans secara in vitro, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Katzung, B.G., 2001, Basic and Clinical Pharmacology, diterjemahkan oleh bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga, 556, Salemba Medika, Jakarta. Ladoangin, A., 2004, Efek Hepatoprotektif Jus Buah Apel Hijau (Pyrus malus, L.) Pada Mencit Jantan Terinduksi Parasetamol, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Langford, F.D., Holmes, P.A., and Emele, J.F., 1972, Objective Method for Evaluation of Analgesic / Anti-Inflammatory Activity, Journal of Pharmaceutical Sciences, 61 (January), 75-77. Lelo, E.A., 2002, Pertimbangan Baru dalam Memilih Selektifitas Penghambatan COX-2 Sebagai Anti Nyeri dan Anti inflamasi,dalam Naskah Lengkap Pertemuan Ilmiah Tahunan Ilmu Penyakit Dalam, Fakultas Kedokteran, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Lily, M.P., 1980, Medical Plant of East and Shoutheast Asia, 258-259, The MIT Press, London. Mary, J.M., Richard, A.H., and Pamela, C.C, 1997, Lippincott’s Illustrated Reviews : Pharmacology, II/E, diterjemahkan oleh Agus, A. Edisi II, 276-281, Widya Medika, Jakarta.


Medina, F.S.D., Galvez, J., Romero, J.A., dan Zarzuelo, A., 1996, Effect of quercitrin on acute and chronic experimental colitis in the rats, http://www.pharmacologiandexperimentaltherapeutics.com//, Diakses pada tanggal 25 juli 2006. Mutschler, E.,1986, Arieneimittelwirkungen, Edisi V, diterjemahkan oleh Mathilda B., Widyanto dan Ranti, A.S.,Dinamika Obat, 193-199, ITB, Bandung. Novita, E., 2003, Daya Anti Inflamasi Perasan Herba Ketumpang (Peperomia pelludica L. Kunth) Pada Mencit Betina, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Phin, K, 2001, Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) terhadap Jaringan Hati, Ginjal, Ovarium, dan Uterus Tikus Betina, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Price, S. A dan Wilson, L. M., 1992, Pathophysiology Clinical Consepts of Disease Processes, diterjemahkan oleh Peter Anugrah, edisi IV, 35-47, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. Rang, H.P., Dale, M.M., Ritter, J.M., and Moore, P.K., 2003, Pharmacology, 5th Edition, p 231-237, 244-250, Bath Press, USA. Riadiani, R.P., 2006, Efek Analgesik Ekstrak Petroleum Eter Daun Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) Pada Mencit Putih Betina, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Robinson, T., 1991, Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi, terjemahkan oleh Kosasi Padmawinata, 191-216, ITB, Bandung. Setiati, S., 2003, Radikal Bebas, Antioksidan, dan Proses Menua, Medika No. 6, 366-369, Jakarta. Setiono dan Djatmiko, W., 1986, Profil Obat Tradisional Indonesia dan Arah Pengembangan untuk Pelayanan Kesehatan Masyarakat dalam Risalah Simposium Penelitian Tumbuhan Obat, Edisi V, 11-15, UnAir, Surabaya. Shearn, M.A.,1986, Obat Anti Inflamasi Nonsteroid; Analgesik Nonopiat; Obat yang Digunakan pada Gout dalam Katzung,B.G., 1989, Basic and Clinical Pharmacology, diterjemahkan oleh Petrus Ardianto, 474, EGC, Jakarta. Sibuea, P., 20004, Kuersetin, Senjata Pemusnah Radikal Bebas, http://www.kompas.com/kompascetak/0402/10/humaniora/840926.htm. Sitompul, B., 2003 Antioksidan dan Penyakit Aterosklerosis, Medika, No. 6, 373377, Jakarta.


Soedibyo, M.B.R.A., 1998, Alam Sumber Kesehatan, Mnfaat dan Kegunaan, Cetakan ke-1, 148, Balai Pustaka, Jakarta. Sudarto, A., 2006, Efek Anti Inflamasi Ekstrak Petroleum Eter Daun Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) Pada Mencit Putih Betina, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Sulaiman, M.R., Somchit, M.N., Israf, D.A., Ahmad, Z., dan Moin,S., 2004, Antinociceptic effect of Melastoma malabathricum ethanolic extract in mice, http://www.elsevier.com/locate/fitote, Diakses pada tanggal 25 Juli 2006. Tjay, T. H. daqn Raharja, K., 2002, Obat-obat Penting : Khasiat,Penggunaan, dan Efek-efek Sampingnya, edisi V, 298, 306-311, Penerbit PT. Elek Media Komputindo Kelompok Gramedia, Jakarta. Toba, M.S., 2003, Uji Daya Antibakteri Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma affine D. Don.) Terhadap Bakteri Gram Positif dan Bakteri Gram Negatif, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Turner, R.A., 1965, Screening Method in Pharmacology, Vol I, 160, Academic Press, New York. Tusthi, G.N.T., 2006, Efek Analgesik Ekstrak Etanol Daun Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) Pada Mencit Putih Betina, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Van Steenis, C.G.G.J, 1975, Flora Untuk Sekolah di Indonesia, 328-330, PT. Pradya Paramita, Jakarta. Vogel, H.G., 2002, Drug Discovery and Evaluation : Pharmacological Assays, Second Edition , 726-769, Spinger Verlag Berlin Heidelberg, New York. Williamson, E. M., Okpako, D. T., Evans, F. J., 1996, Pharmacologicsl Method in Phytotherapy ResearchVolume I: Selection, Preparation and Pharmacological Evaluation of Plant Material, 131-137, John Wiley and Sons Ltd, England. Wilmana, 1995, Analgesik-Antipiretik Analgesik Anti Inflamasi Nonsteroid dan Obat Pirai, dalam Farmakologi dan Terapi , edisi 4, 207-210, Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran- Universitas Indonesia, Jakarta. Wiwin, F., 2002, Toksisitas Akut Infus Daun Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Mencit, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Yosidha, Nakata, Hosotani, Nitta, dan Okuda, 1992, Dimer Hydrolysable Tannins From Melastoma malabathicum, J. Phytochem, 31 (8) 2829-2833.


Lampiran 1. Foto tumbuhan senggani

Gambar 19. Tumbuhan Senggani


Lampiran 2. Foto daun senggani

Gambar 20. Daun Senggani


Lampiran 3. Foto serbuk daun senggani

Gambar 21. Serbuk Daun Senggani


Lampiran 4. Foto ekstrak etanol daun senggani

Gambar 22. Ekstrak Etanol Daun Senggani


Lampiran 5. Skema kerja uji pendahuluan penetapan selang waktu pemotongan kaki mencit setelah injeksi karagenin karagenin 1 %

Dua belas ekor mencit dibagi dalam 4 kelompok

Kelompok I 1 jam setelah injeksi karagenin1%

Kelompok II 2 jam setelah injeksi karagenin1%

Kelompok III 3 jam setelah injeksi karagenin1%

Mencit dikorbankan , kedua kaki bagian belakang dipotong pada sendi torsocrural Ditimbang

Kelompok IV 4 jam setelah injeksi karagenin 1%


Lampiran 6. Hasil Dan Analisis Hasil Uji Pendahuluan Rentang Waktu Pemotongan Setelah Injeksi Karagenin 1%

Bobot udema kaki mencit pada uji pendahuluan rentang waktu tertentu setelah injeksi karagenin 1 % subplantar Bobot udema mencit (gram) pada rentang waktu N

Keterangan

o

(g)

1

2

3

(jam) setelah injeksi karagenin 1% 1

2

3

4

Kaki kiri

0,1896

0,1964

0,2405

0,2534

Kaki kanan

0,1524

0,1535

0,1477

0,1556

Bobot udema

0,0372

0,0429

0,0928

0,0978

Kaki kiri

0,1905

0,2032

0,2418

0,2513

Kaki kanan

0,1509

0,1555

0,1514

0,1574

Bobot udema

0,0396

0,0477

0,0904

0,0939

Kaki kiri

0,1917

0,2044

0,2427

0,2498

Kaki kanan

0,1538

0,1630

0,1511

0,1556

Bobot udema

0,0397

0,0414

0,0916

0,0942

Rata-rata bobot udema

0,0382

0,0440

0,0916

0,0953

±

±

±

±

±

SE

0,0007

0,0019

0,0007

0,0013

Keterangan : bobot udema = kaki kiri – kaki kanan


NPar Tests One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test N Normal Parameters a,b Most Extreme Differences

udem 12 ,067283 ,0275083 ,300 ,262 -,300 1,038 ,231

Mean Std. Deviation Absolute Positive Negative

Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) a. Test distribution is Normal. b. Calculated from data.

Oneway Descriptives udem

N 1 jam 2 jam 3 jam 4 jam Total

3 3 3 3 12

Mean Std. Deviation ,038233 ,0012342 ,044000 ,0032909 ,091600 ,0012000 ,095300 ,0021703 ,067283 ,0275083

Std. Error ,0007126 ,0019000 ,0006928 ,0012530 ,0079410

95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum ,035167 ,041299 ,0372 ,0396 ,035825 ,052175 ,0414 ,0477 ,088619 ,094581 ,0904 ,0928 ,089909 ,100691 ,0939 ,0978 ,049805 ,084761 ,0372 ,0978

Test of Homogeneity of Variances udem Levene Statistic 2,387

df1

df2 3

Sig. ,145

8

ANOVA udem

Between Groups Within Groups Total

Sum of Squares ,008 ,000 ,008

df 3 8 11

Mean Square ,003 ,000

F 597,136

Sig. ,000


Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: udem Scheffe

(I) waktu 1 jam

2 jam

3 jam

4 jam

(J) waktu 2 jam 3 jam 4 jam 1 jam 3 jam 4 jam 1 jam 2 jam 4 jam 1 jam 2 jam 3 jam

Mean Difference (I-J) -,0057667 -,0533667* -,0570667* ,0057667 -,0476000* -,0513000* ,0533667* ,0476000* -,0037000 ,0570667* ,0513000* ,0037000

Std. Error ,0017561 ,0017561 ,0017561 ,0017561 ,0017561 ,0017561 ,0017561 ,0017561 ,0017561 ,0017561 ,0017561 ,0017561

Sig. ,066 ,000 ,000 ,066 ,000 ,000 ,000 ,000 ,292 ,000 ,000 ,292

*. The mean difference is significant at the .05 level.

Homogeneous Subsets udem a

Scheffe waktu 1 jam 2 jam 3 jam 4 jam Sig.

N 3 3 3 3

Subset for alpha = .05 1 2 ,038233 ,044000 ,091600 ,095300 ,066 ,292

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000.

95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -,011900 ,000367 -,059500 -,047233 -,063200 -,050933 -,000367 ,011900 -,053733 -,041467 -,057433 -,045167 ,047233 ,059500 ,041467 ,053733 -,009833 ,002433 ,050933 ,063200 ,045167 ,057433 -,002433 ,009833


Lampiran 7. Skema kerja uji pendahuluan pemberian Natrium diklofenak dalam tiga peringkat dosis

Sembilan ekor mencit dibagi dalam tiga kelompok

Kelompok I Natrium diklofenak dosis 9,75 mg/kgBB

Kelompok II Natrium diklofenak dosis 10,79 mg/kgBB

Kelompok III Natrium diklofenak dosis 11,79 mg/kgBB

Diberi natrium diklofenak peroral sesuai dosis 30 menit sesudahnya Injeksi karagenin 1% sub plantar pada kaki kiri sedangkan kaki kanan hanya disuntik tanpa karagenin 1% 3 jam sesudahnya Mencit dikurbankan, kedua kaki bagian belakang dipotong pada sendi torsocrural

Ditimbang


Lampiran 8. Hasil Dan Analisis Hasil Uji Pendahuluan Dosis Efektif Natrium Diklofenak

Bobot udema kaki mencit pada uji pendahuluan dosis efektif Natrium Diklofenak Bobot kaki mencit (gram) akibat pemberian Keterangan No

Natrium Diklofenak (mg/kgBB) (g)

1

2

3

9,75

10,79

11,95

Kaki kiri

0,2073

0,1960

0,2058

Kaki kanan

0,1695

0,1660

0,1698

Bobot udema

0,0378

0,0300

0,0360

Kaki kiri

0,2121

0,2090

0,2097

Kaki kanan

0,1764

0,1616

0,1687

Bobot udema

0,0357

0,0474

0,0410

Kaki kiri

0,2147

0,2106

0,1972

Kaki kanan

0,1723

0,1637

0,1668

Bobot udema

0,0424

0,0469

0,0304

Rata-rata bobot udema

0,0386

0,0414

0,0358

±

±

±

±

SE

0,0019

0,0057

0,0031



NPar Tests One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test udem N Normal Parameters a,b Most Extreme Differences

9 ,038622 ,0063594 ,126 ,124 -,126 ,377 ,999




N 9,75mg/ml 10,79mg/ml 11,95mg/ml Total

3 3 3 9

Mean Std. Deviation Std. Error ,038633 ,0034269 ,0019785 ,041433 ,0099047 ,0057185 ,035800 ,0053028 ,0030616 ,038622 ,0063594 ,0021198

95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum ,030121 ,047146 ,0357 ,0424 ,016829 ,066038 ,0300 ,0474 ,022627 ,048973 ,0304 ,0410 ,033734 ,043510 ,0300 ,0474


df1

df2 2

Sig. ,127

6

ANOVA udem



df 2 6 8


F ,518

Sig. ,620



(I) dosis 9,75mg/ml 10,79mg/ml 11,95mg/ml

(J) dosis 10,79mg/ml 11,95mg/ml 9,75mg/ml 11,95mg/ml 9,75mg/ml 10,79mg/ml

Mean Difference (I-J) -,0028000 ,0028333 ,0028000 ,0056333 -,0028333 -,0056333

Std. Error ,0055371 ,0055371 ,0055371 ,0055371 ,0055371 ,0055371

Sig. ,882 ,880 ,882 ,620 ,880 ,620


Scheffe

dosis 11,95mg/ml 9,75mg/ml 10,79mg/ml Sig.

N 3 3 3

Subset for alpha = .05 1 ,035800 ,038633 ,041433 ,620


95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -,020559 ,014959 -,014926 ,020592 -,014959 ,020559 -,012126 ,023392 -,020592 ,014926 -,023392 ,012126


Lampiran 9. Skema kerja uji pendahuluan waktu pemberian Natrium diklofenak dosis efektif (9,75 mg/kgBB)

Dua belas ekor mencit dibagi dalam empat kelompok Diberi Natrium diklofenak dosis 9,75 mg/kgBB secara per oral

Kelompok I 15 menit sesudahnya

Kelompok II 30 menit sesudahnya

Kelompok III 45 menit sesudahnya

Injeksi karagenin 1% sub plantar pada kaki kiri sedangkan kaki kanan hanya disuntik tanpa karagenin 1% 3 jam sesudahnya Mencit dikorbankan, kedua kaki bagian belakang dipotong pada sendi torsocrural

Ditimbang

Kelompok IV 60 menit sesudahnya


Lampiran 10. Hasil Dan Analisis Hasil Uji Pendahuluan Waktu Pemberian Natrium Diklofenak Dengan Dosis Efektif

Bobot udema kaki mencit pada uji pendahuluan waktu pemberian Natrium Diklofenak dengan dosis efektif yaitu 9,75 mg/kgBB Bobot kaki mencit (g) akibat pemberian Natrium Keterangan

Diklofenak (menit) dengan selang waktu tertentu

(g)

sebelum injeksi karagenin 1 %

No

1

2

3

15’

30’

45’

60’

Kaki kiri

0,2030

0,2114

0,2242

0,2284

Kaki kanan

0,1616

0,1647

0,1686

0,1693

Bobot udema

0,0414

0,0467

0,0556

0,0591

Kaki kiri

0,2094

0,2017

0,2102

0,2310

Kaki kanan

0,1684

0,1696

0,1694

0,1744

Bobot udema

0,0410

0,0321

0,0408

0,0566

Kaki kiri

0,2119

0,2002

0,216

0,2132

Kaki kanan

0,1667

0,1598

0,1670

0,1632

Bobot udema

0,0452

0,0404

0,0456

0,0500

Rata-rata bobot

0,0425

0,0397

0,0473

0,0552

udema ±

±

±

±

±

SE

0,0013

0,0042

0,0044

0,0027



NPar Tests One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test N Normal Parameters a,b

udem 12 ,046208 ,0079239 ,148 ,145 -,148 ,514 ,954


Most Extreme Differences Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed)

a. Test distribution is Normal. b. Calculated from data.


N 15 menit 30 menit 45 menit 60 menit Total


3 3 3 3 12

Std. Error ,0013383 ,0042278 ,0043594 ,0027144 ,0022874



df1

df2 3

Sig. ,394

8

ANOVA udem



df 3 8 11


F 4,001

Sig. ,052



(I) waktu 15 menit

30 menit

45 menit

60 menit

(J) waktu 30 menit 45 menit 60 menit 15 menit 45 menit 60 menit 15 menit 30 menit 60 menit 15 menit 30 menit 45 menit

Mean Difference (I-J) ,0028000 -,0048000 -,0127000 -,0028000 -,0076000 -,0155000 ,0048000 ,0076000 -,0079000 ,0127000 ,0155000 ,0079000

Std. Error ,0047978 ,0047978 ,0047978 ,0047978 ,0047978 ,0047978 ,0047978 ,0047978 ,0047978 ,0047978 ,0047978 ,0047978

Homogeneous Subsets udem Scheffe Subset for alpha = .05 waktu

N

1

30 menit

3

,039733

15 menit

3

,042533

45 menit

3

,047333

60 menit

3

,055233

Sig.

,070

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000.

Sig. ,950 ,802 ,150 ,950 ,511 ,070 ,802 ,511 ,481 ,150 ,070 ,481

95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -,013957 ,019557 -,021557 ,011957 -,029457 ,004057 -,019557 ,013957 -,024357 ,009157 -,032257 ,001257 -,011957 ,021557 -,009157 ,024357 -,024657 ,008857 -,004057 ,029457 -,001257 ,032257 -,008857 ,024657


Lampiran 11. Skema kerja uji pendahuluan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani

Dua belas ekor mencit dibagi dalam empat kelompok Diberi ekstrak etanol daun senggani dosis 1670 mg/kgBB secara per oral

Kelompok I 15 menit sesudahnya

Kelompok II 30 menit sesudahnya

Kelompok III 45 menit sesudahnya

Injeksi karagenin 1% sub plantar pada kaki kiri sedangkan kaki kanan hanya disuntik tanpa karagenin 1% 3 jam sesudahnya Mencit dikorbankan, kedua kaki bagian belakang dipotong pada sendi torsocrural

Ditimbang

Kelompok IV 60 menit sesudahnya


Lampiran 12. Hasil Dan Analisis Hasil Uji Pendahuluan Waktu Pemberian Ekstrak Etanol Daun Senggani

Bobot udema kaki mencit pada uji pendahuluan waktu pemberian ekstrak etanol daun senggani Bobot kaki mencit (g) akibat pemberian Natrium Keterangan

Diklofenak (menit) dengan selang waktu tertentu

(g)

sebelum injeksi karagenin 1 %

No

1

2

3

15’

30’

45’

60’

Kaki kiri

0,2532

0,2320

0,2353

0,2327

Kaki kanan

0,1627

0,1666

0,1530

0,1646

Bobot udema

0,0907

0,0654

0,0823

0,0681

Kaki kiri

0,2594

0,2362

0,2675

0,2198

Kaki kanan

0,1688

0,1686

0,1884

0,1444

Bobot udema

0,0906

0,0676

0,0791

0,0754

Kaki kiri

0,2525

0,2139

0,2517

0,2065

Kaki kanan

0,1703

0,1419

0,1729

0,1388

Bobot udema

0,0822

0,0720

0,0788

0,0677

0,0878

0,0683

0,0801

0,0704

±

±

±

±

0,0028

0,0019

0,0011

0,0025

Rata-rata bobot udema ± SE




udem 12 ,076658 ,0087916 ,168 ,168 -,110 ,583 ,886





N 15 menit 30 menit 45 menit 60 menit Total


3 3 3 3 12

Std. Error ,0028168 ,0019402 ,0011200 ,0025027 ,0025379



df1

df2 3

Sig. ,262

8

ANOVA udem



df 3 8 11


F 16,997

Sig. ,001



(I) waktu 15 menit

30 menit

45 menit

60 menit

(J) waktu 30 menit 45 menit 60 menit 15 menit 45 menit 60 menit 15 menit 30 menit 60 menit 15 menit 30 menit 45 menit

Mean Difference (I-J) Std. Error ,0195000* ,0030997 ,0077667 ,0030997 ,0174333* ,0030997 -,0195000* ,0030997 -,0117333* ,0030997 -,0020667 ,0030997 -,0077667 ,0030997 ,0117333* ,0030997 ,0096667 ,0030997 -,0174333* ,0030997 ,0020667 ,0030997 -,0096667 ,0030997

Sig. ,002 ,180 ,004 ,002 ,034 ,928 ,180 ,034 ,081 ,004 ,928 ,081



Scheffe

waktu 30 menit 60 menit 45 menit 15 menit Sig.

N 3 3 3 3

Subset for alpha = .05 1 2 3 ,068333 ,070400 ,070400 ,080067 ,080067 ,087833 ,928 ,081 ,180


95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound ,008674 ,030326 -,003060 ,018593 ,006607 ,028260 -,030326 -,008674 -,022560 -,000907 -,012893 ,008760 -,018593 ,003060 ,000907 ,022560 -,001160 ,020493 -,028260 -,006607 -,008760 ,012893 -,020493 ,001160


Lampiran 13. Skema kerja perlakuan hewan uji Tiga puluh lima ekor mencit dibagi dalam 7 kelompok

Kel. I

Kel. II

Kel. III

Kel. IV

Kel. V

Kel. VI

Kel. VII

Diberi ekstrak etanol daun senggani secara per oral 30 menit sesudahnya Injeksi karagenin 1 % sub plantar pada kaki kiri sedangkan kaki kanan hanya disuntik tanpa karagenin 1 % 3 jam sesudahnya Mencit dikorbankan, kedua kaki bagian belakang dipotong pada sendi torsocrural

Ditimbang Keterangan : Kelompok I Kelompok II Kelompok III Kelompok IV

: : : :

kelompok kontrol negatif karagenin 1% kelompok kontrol negatif CMC-Na 1% kelompok kontrol positif Natrium diklofenak dosis 9,75 mg/kgBB kelompok perlakuan pemberian ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kgBB Kelompok V : kelompok perlakuan pemberian ekstrak etanol daun senggani dosis 1000 mg/kgBB Kelompok VI : kelompok perlakuan pemberian ekstrak etanol daun senggani dosis 1330 mg/kgBB Kelompok VII : kelompok perlakuan pemberian ekstrak etanol daun senggani dosis 1670 mg/kgBB


Lampiran 14. Hasil Dan Analisis Hasil Bobot Udema Kaki Mencit Akibat Pemberian Ekstrak Etanol Daun Senggani Dalam Empat Peringkat Dosis Dan Kontrolnya

No

Bobot (g) Kaki kiri

Karagenin 1% 0,2558

Kontrol CMC-Na 1% 0,2542

Diklofena-Na 0,2012

4 Peringkat Dosis Ekstrak Etanol Daun Senggani (mg/kgbb) 850 1000 1330 1670 0,2633 0,2378 0,2190 0,2232

Kaki kanan

0,1638

0,1621

0,1598

0,1812

0,1602

0,1507

0,1564

Bobot udema

0,0920

0,0921

0,0414

0,0821

0,0776

0,0683

0,0668

Kaki kiri

0,2497

0,2550

0,2109

0,2667

0,2371

0,2230

0,2260

Kaki kanan

0,1623

0,1635

0,1660

0,1877

0,1506

0,1652

0,1546

Bobot udema

0,0874

0,0915

0,0449

0,0790

0,0865

0,0578

0,0714

Kaki kiri

0,2645

0,2607

0,1875

0,2482

0,2359

0,2109

0,2253

Kaki kanan

0,1670

0,1675

0,1511

0,1681

0,1513

0,1485

0,1514

Bobot udema

0,0975

0,0932

0,0364

0,0801

0,0846

0,0624

0,0739

Kaki kiri

0,2627

0,2610

0,1911

0,2651

0,2290

0,2267

0,2268

Kaki kanan

0,1648

0,1682

0,1536

0,1828

0,1489

0,1686

0,1617

Bobot udema

0,0979

0,0926

0,0375

0,0823

0,0801

0,0581

0,0651

Kaki kiri

0,2498

0,2457

0,1955

0,2583

0,2374

0,2205

0,2051

Kaki kanan

0,1533

0,1563

0,1568

0,1699

0,1581

0,1564

0,1365

Bobot udema

0,0865

0,0894

0,0387

0,0884

0,0793

0,0641

0,0686

0,0923 ± 0,0024

0,0918 ± 0,0007

0,0398± 0,0015

0,0824 ± 0,0016

0,0816 ± 0,0017

0,0621 ± 0,0019

0,0692 ± 0,0016

1

2

3

4

5

−

X bobot udema ± SE


NPar Tests One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test N Normal Parameters a,b Most Extreme Differences

udem 35 ,074163 ,0179668 ,149 ,093 -,149 ,881 ,419




N kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% kontrol Diklofenak-N dosis 850mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB Total

5 5 5 5 5 5 5 35

Mean ,092260 ,091800 ,039780 ,082380 ,081620 ,062140 ,069160 ,074163

95% Confidence Interval for Mean Std. Deviation Std. Error Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum ,0053882 ,0024097 ,085570 ,098950 ,0865 ,0979 ,0014916 ,0006671 ,089948 ,093652 ,0894 ,0932 ,0034142 ,0015269 ,035541 ,044019 ,0364 ,0449 ,0036383 ,0016271 ,077862 ,086898 ,0790 ,0884 ,0037599 ,0016815 ,076951 ,086289 ,0776 ,0865 ,0043878 ,0019623 ,056692 ,067588 ,0578 ,0683 ,0035303 ,0015788 ,064777 ,073543 ,0651 ,0739 ,0179668 ,0030369 ,067991 ,080335 ,0364 ,0979


df1

df2 6

Sig. ,241

28

ANOVA udem



df 6 28 34


F 120,862

Sig. ,000



(I) kelompok (J) kelompok kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% kontrol Diklofenak-Na dosis 850mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB kontrol CMC-Na 1% kontrol karagenin 1% kontrol Diklofenak-Na dosis 850mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB kontrol Diklofenak-Na kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% dosis 850mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB dosis 850mg/kgBB kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% kontrol Diklofenak-Na dosis 1000mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% kontrol Diklofenak-Na dosis 850mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% kontrol Diklofenak-Na dosis 850mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% kontrol Diklofenak-Na dosis 850mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB

Mean Difference (I-J) ,0004600 ,0524800* ,0098800* ,0106400* ,0301200* ,0231000* -,0004600 ,0520200* ,0094200* ,0101800* ,0296600* ,0226400* -,0524800* -,0520200* -,0426000* -,0418400* -,0223600* -,0293800* -,0098800* -,0094200* ,0426000* ,0007600 ,0202400* ,0132200* -,0106400* -,0101800* ,0418400* -,0007600 ,0194800* ,0124600* -,0301200* -,0296600* ,0223600* -,0202400* -,0194800* -,0070200 -,0231000* -,0226400* ,0293800* -,0132200* -,0124600* ,0070200


Std. Error ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143 ,0024143

95% Confidence Interval Sig. Lower Bound Upper Bound 1,000 -,008788 ,009708 ,000 ,043232 ,061728 ,030 ,000632 ,019128 ,015 ,001392 ,019888 ,000 ,020872 ,039368 ,000 ,013852 ,032348 1,000 -,009708 ,008788 ,000 ,042772 ,061268 ,043 ,000172 ,018668 ,023 ,000932 ,019428 ,000 ,020412 ,038908 ,000 ,013392 ,031888 ,000 -,061728 -,043232 ,000 -,061268 -,042772 ,000 -,051848 -,033352 ,000 -,051088 -,032592 ,000 -,031608 -,013112 ,000 -,038628 -,020132 ,030 -,019128 -,000632 ,043 -,018668 -,000172 ,000 ,033352 ,051848 1,000 -,008488 ,010008 ,000 ,010992 ,029488 ,001 ,003972 ,022468 ,015 -,019888 -,001392 ,023 -,019428 -,000932 ,000 ,032592 ,051088 1,000 -,010008 ,008488 ,000 ,010232 ,028728 ,003 ,003212 ,021708 ,000 -,039368 -,020872 ,000 -,038908 -,020412 ,000 ,013112 ,031608 ,000 -,029488 -,010992 ,000 -,028728 -,010232 ,246 -,016268 ,002228 ,000 -,032348 -,013852 ,000 -,031888 -,013392 ,000 ,020132 ,038628 ,001 -,022468 -,003972 ,003 -,021708 -,003212 ,246 -,002228 ,016268



Scheffe

kelompok kontrol Diklofenak-Na dosis 1330mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB dosis 850mg/kgBB kontrol CMC-Na 1% kontrol karagenin 1% Sig.

N 5 5 5 5 5 5 5

1 ,039780

Subset for alpha = .05 2 3

4

,062140 ,069160 ,081620 ,082380

1,000

,246


1,000

,091800 ,092260 1,000


Lampiran 15. Hasil Perhitungan Dan Analisis Hasil Persen (%) Efek Anti Inflamasi Pemberian Ekstrak Etanol Daun Senggani Dalam Empat Peringkat Dosis Dan Kontrolnya Persen (%) Efek Anti inflamasi 4 Peringkat Dosis Ekstrak Etanol Kontrol No

Daun Senggani (mg/kgBB) Karagenin

CMC-

Natrium

1%

Na 1%

Diklofenak

850

1000

1330

1670

1

0,00

0,22

55,15

11,05

15,93

26,00

27,63

2

0,00

0,87

51,35

14,41

6,28

37,38

22,64

3

0,00

-0,97

60,56

13,22

8,34

32,39

19,93

4

0,00

-0,54

59,37

10,83

13,22

37,05

29,47

5

0,00

3,14

58,07

4,23

14,08

30,55

25,68

X %efek

0,00

0,54

56.90

10,75

11,57

32,67

25,07

−

Dari hasil penimbangan berat kedua kaki belakang hewan uji untuk masing-masing peringkat dosis bisa dicari persentase anti inflamasi, dengan persamaan : % efek anti inflamasi =

⎡U − D ⎤ ⎢ U ⎥ X 100% ⎣ ⎦



Contoh perhitungan persentase efek anti inflamasi : Nilai bobot udema karagenin rata-rata (U) = 0,0923g 1. CMC-Na1% Data replikasi no 1 bobot udema (D) = 0,0921g ⎡ 0,0923 − 0,0921⎤ % efek anti inflamasi = ⎢ ⎥ X 100% 0,0923 ⎣ ⎦ = 0,22% 2. Natrium Diklofenak Data replikasi no 5 bobot udema (D) = 0,0387g ⎡ 0,0923 − 0,0387 ⎤ % efek anti inflamasi = ⎢ ⎥ X 100% 0,0923 ⎣ ⎦ = 58,07% 3. Dosis Ekstrak Etanol Daun Senggani 850 mg/kgBB Data replikasi no 2 bobot udema (D) = 0,0790g ⎡ 0,0923 − 0,0790 ⎤ % efek anti inflamasi = ⎢ ⎥ X 100% 0,0923 ⎣ ⎦ = 14,41% 4. Dosis Ekstrak Etanol Daun Senggani 1000 mg/kgBB Data replikasi no 4 bobot udema (D) = 0,0801g ⎡ 0,0923 − 0,0801⎤ % efek anti inflamasi = ⎢ ⎥ X 100% 0,0923 ⎣ ⎦ = 13,22% 5. Dosis Ekstrak Etanol Daun Senggani 1330 mg/kgBB Data replikasi no 3 bobot udema (D) = 0,0641g ⎡ 0,0923 − 0,0641⎤ % efek anti inflamasi = ⎢ ⎥ X 100% 0,0923 ⎣ ⎦ = 32,39% 6. Dosis Ekstrak Etanol Daun Senggani 1670 mg/kgBB Data replikasi no 2 bobot udema (D) = 0,0714g ⎡ 0,0923 − 0,0714 ⎤ % efek anti inflamasi = ⎢ ⎥ X 100% 0,0923 ⎣ ⎦ = 22,64%



persendaya 35 19,6437 19,36797 ,149 ,149 -,144 ,884 ,416




Oneway Descriptives persendaya

N kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% kontrol diklofenak-N dosis 850mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB Total

5 5 5 5 5 5 5 35

Mean Std. Deviation ,0000 ,00000 ,5440 1,61382 56,9000 3,69900 10,7480 3,94028 11,5700 4,07582 32,6740 4,75474 25,0700 3,82786 19,6437 19,36797

Std. Error ,00000 ,72172 1,65424 1,76215 1,82276 2,12638 1,71187 3,27379

95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum ,0000 ,0000 ,00 ,00 -1,4598 2,5478 -,97 3,14 52,3071 61,4929 51,35 60,56 5,8555 15,6405 4,23 14,41 6,5092 16,6308 6,28 15,93 26,7702 38,5778 26,00 37,38 20,3171 29,8229 19,93 29,47 12,9906 26,2968 -,97 60,56

Test of Homogeneity of Variances persendaya Levene Statistic 2,746

df1

df2 6

Sig. ,032

28

ANOVA persendaya


Sum of Squares 12411,285 342,741 12754,026

df 6 28 34

Mean Square 2068,547 12,241

F 168,989

Sig. ,000


Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: persendaya Scheffe

(I) kelompok (J) kelompok kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% kontrol diklofenak-Na dosis 850mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB kontrol CMC-Na 1% kontrol karagenin 1% kontrol diklofenak-Na dosis 850mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB kontrol diklofenak-Na kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% dosis 850mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB dosis 850mg/kgBB kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% kontrol diklofenak-Na dosis 1000mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% kontrol diklofenak-Na dosis 850mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% kontrol diklofenak-Na dosis 850mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% kontrol diklofenak-Na dosis 850mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB

Mean Difference (I-J) Std. Error -,54400 2,21276 -56,90000* 2,21276 -10,74800* 2,21276 -11,57000* 2,21276 -32,67400* 2,21276 -25,07000* 2,21276 ,54400 2,21276 -56,35600* 2,21276 -10,20400* 2,21276 -11,02600* 2,21276 -32,13000* 2,21276 -24,52600* 2,21276 56,90000* 2,21276 56,35600* 2,21276 46,15200* 2,21276 45,33000* 2,21276 24,22600* 2,21276 31,83000* 2,21276 10,74800* 2,21276 10,20400* 2,21276 -46,15200* 2,21276 -,82200 2,21276 -21,92600* 2,21276 -14,32200* 2,21276 11,57000* 2,21276 11,02600* 2,21276 -45,33000* 2,21276 ,82200 2,21276 -21,10400* 2,21276 -13,50000* 2,21276 32,67400* 2,21276 32,13000* 2,21276 -24,22600* 2,21276 21,92600* 2,21276 21,10400* 2,21276 7,60400 2,21276 25,07000* 2,21276 24,52600* 2,21276 -31,83000* 2,21276 14,32200* 2,21276 13,50000* 2,21276 -7,60400 2,21276


Sig. 1,000 ,000 ,006 ,002 ,000 ,000 1,000 ,000 ,010 ,004 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,006 ,010 ,000 1,000 ,000 ,000 ,002 ,004 ,000 1,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,104 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,104

95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -9,0196 7,9316 -65,3756 -48,4244 -19,2236 -2,2724 -20,0456 -3,0944 -41,1496 -24,1984 -33,5456 -16,5944 -7,9316 9,0196 -64,8316 -47,8804 -18,6796 -1,7284 -19,5016 -2,5504 -40,6056 -23,6544 -33,0016 -16,0504 48,4244 65,3756 47,8804 64,8316 37,6764 54,6276 36,8544 53,8056 15,7504 32,7016 23,3544 40,3056 2,2724 19,2236 1,7284 18,6796 -54,6276 -37,6764 -9,2976 7,6536 -30,4016 -13,4504 -22,7976 -5,8464 3,0944 20,0456 2,5504 19,5016 -53,8056 -36,8544 -7,6536 9,2976 -29,5796 -12,6284 -21,9756 -5,0244 24,1984 41,1496 23,6544 40,6056 -32,7016 -15,7504 13,4504 30,4016 12,6284 29,5796 -,8716 16,0796 16,5944 33,5456 16,0504 33,0016 -40,3056 -23,3544 5,8464 22,7976 5,0244 21,9756 -16,0796 ,8716


Homogeneous Subsets persendaya a

Scheffe

kelompok kontrol karagenin 1% kontrol CMC-Na 1% dosis 850mg/kgBB dosis 1000mg/kgBB dosis 1670mg/kgBB dosis 1330mg/kgBB kontrol diklofenak-Na Sig.

N 5 5 5 5 5 5 5

1 ,0000 ,5440

Subset for alpha = .05 2 3

4

10,7480 11,5700 25,0700 32,6740 1,000

1,000


,104

56,9000 1,000


Lampiran 16. Hasil Perhitungan Potensi Relatif Efek Anti inflamasi Pemberian Ekstrak Etanol Daun Senggani Dalam Empat Peringkat Dosis

Kontrol Dan Perlakuan

% Efek Anti inflamasi

% Potensi relatif efek anti inflamasi

56,90

100

10,75

18,89

11,57

20,33

32,67

57,42

25,07

44.06

Natrium Diklofenak Dosis 9,75 mg/kgBB Pemberian Ekstrak Etanol Daun Senggani Dosis 850 mg/kgBB Pemberian Ekstrak Etanol Daun Senggani Dosis 1000 mg/kgBB Pemberian Ekstrak Etanol Daun Senggani Dosis 1330 mg/kgBB Pemberian Ekstrak Etanol Daun Senggani Dosis 1670 mg/kgBB

⎛ DAp ⎞ Potensi relatif efek anti inflamasi = ⎜ ⎟ x 100 % ⎝ DAd ⎠

Keterangan : DAp = % rata-rata efek anti inflamasi kelompok perlakuan pemberian Ekstrak Etanol Daun Senggani DAd = % rata-rata efek anti inflamasi kelompok kontrol Natrium Diklofenak

Contoh Perhitungan : Potensi relatif efek anti inflamasi kelompok perlakuan pemberian Ekstrak Etanol Daun Senggani Dosis 1330 mg/kgBB Potensi relatif efek anti inflamasi

=

32,67 x 100 % 56,90

= 57,42 %


Lampiran 21. Certificateof Analysis


Lampiran 22. Surat Pernyataan Pengambilan Dan Determinasi Dari BPTO


EFEK ANTI INFLAMASI EKSTRAK ETANOL DAUN SENGGANI (Melastoma polyanthum Bl.) PADA MENCIT PUTIH BETINA SKRIPSI

Recommend Documents