UJI EFEK ANALGESIK EKSTRAK ETANOL DAUN SENGGANI (Melastoma polyanthum Bl.) PADA MENCIT PUTIH BETINA SKRIPSI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

UJI EFEK ANALGESIK EKSTRAK ETANOL DAUN SENGGANI (Melastoma polyanthum Bl.) PADA MENCIT PUTIH BETINA

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.) Program Studi Ilmu Farmasi

Oleh: Galuh Nindya Tyas Tusthi NIM: 038114001

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2007

i


ii


iii


HALAMAN PERSEMBAHAN

Bukankah Kami telah melapangkan untukmu dadamu? dan Kami telah menghilangkan daripadamu bebanmu, yang memberatkan punggungmu ? Karena sesungguhnya sesudah kesulitan itu ada kemudahan. Maka apabila kamu telah selesai (dari suatu urusan), kerjakanlah dengan sungguh-sungguh (urusan) yang lain, dan hanya kepada Allah hendaknya kamu berharap.

(Q.S: Al Insyiraah: 1-8)

Kupersembahkan karyaku kepada... Allah SWT yang telah memberikan rahmatNya kepadaku... Bapak (alm), Ibu (almh), mas Danang, dan dek Yoga yang aku sayangi dan selalu menjadi semangat dalam hidupku... Sahabat-sahabat yang selalu menemaniku dan memberi dorongan kepadaku... I Love U all... Allah akan membalas semua yang pernah kalian berikan padaku...

Almamaterku tercinta...

iv


v


PRAKATA

Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas berkat dan karunia-Nya sehingga penyusun dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul: “Uji Efek Analgesik Ekstrak Etanol Daun Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Mencit Putih Betina”, sebagai salah satu syarat untuk menyelesaikan pendidikan strata satu. Dalam menyusun skripsi ini penyusun banyak mendapat bantuan berupa bimbingan, dorongan, sarana, maupun finansial dari berbagai pihak. Untuk itu penyusun mengucapkan banyak terima kasih kepada 1. Rita Suhadi, M.Si., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. 2. dr. Luciana Kuswibawati, M.Kes., selaku Dosen Pembimbing Utama atas bimbingan, pengarahan, dan dukungannya selama penelitian sampai penyusunan skripsi ini. 3. Drs. Mulyono, Apt., selaku Dosen Penguji yang telah memberikan masukan, kritik,dan saran untuk kesempurnaan skripsi ini. 4. Erna Tri Wulandari, M.si., selaku Dosen Penguji yang telah memberikan masukan, kritik, dan saran untuk kesempurnaan skripsi ini. 5. Kepala BPTO Tawangmangu yang telah membantu dalam penyediaan senggani sebagai tanaman yang diteliti. 6. Mas Heru, Mas Parjiman, Mas Kayat, Mas Wagiran dan Mas Ottok yang telah membantu dalam terlaksananya penelitian ini.

vi


7. Teman-teman “seperjuangan” di Laboratorium, Ningrum, Prita, dan Aan, yang banyak membantu saat penelitian. 8. Keluarga besarku yang selalu mendukung dan memberi semangat hidup untukku. 9. Sahabat-sahabatku

Ningrum_ndutz

ku

dan Prita_imut ku yang selalu

menemaniku di saat senang maupun susah. 10. Teman-teman kos Poncowati: mba’ Erlyn, Dona_tebo, Mareya, Dixie, Anjar, Produs, Ranee, Tika, Maria, Eva, ‘n Mayang 11. Teman KKN angkatan XXXIII dusun Ceporan: Arip, papi Eko, Citra, mami Erline, jeng Windoetz, eM_eM, Olive, Candra, thanks yaa supportnya... 12. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu per satu yang telah membantu penyelesaian skripsi ini. Penyusun menyadari bahwa penelitian yang telah dilakukan untuk penyusunan skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan. Walaupun demikian penyusun berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi masyarakat dan perkembangan ilmu pengetahuan.

Yogyakarta, Februari 2007

Penyusun

vii


DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL ......................................................................................

i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .............................................

ii

HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................

iii

HALAMAN PERSEMBAHAN .....................................................................

iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .........................................................

v

PRAKATA .....................................................................................................

vi

DAFTAR ISI ..................................................................................................

viii

DAFTAR TABEL ..........................................................................................

xii

DAFTAR GAMBAR ......................................................................................

xv

DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................

xvii

INTISARI ......................................................................................................

xix

ABSTRACT .....................................................................................................

xx

BAB I. PENGANTAR ..................................................................................

1

A. Latar Belakang ..........................................................................................

1

B. Permasalahan .............................................................................................

3

C. Keaslian Penelitian ....................................................................................

3

D. Manfaat Penelitian ....................................................................................

5

1. Manfaat teoritis ..................................................................................

5

2. Manfaat praktis ..................................................................................

5

E. Tujuan Penelitian .......................................................................................

6

1. Tujuan umum .....................................................................................

6

viii


2. Tujuan khusus ...................................................................................

6

BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ..........................................................

7

A. Tanaman Senggani ...................................................................................

7

1. Klasifikasi tumbuhan Senggani ........................................................

7

2. Morfologi ..........................................................................................

7

3. Sinonim .............................................................................................

8

4. Nama daerah ......................................................................................

8

5. Kandungan kimia ..............................................................................

9

6. Khasiat dan kegunaan Senggani .......................................................

16

B. Metode Penyarian .....................................................................................

16

C. Radikal Bebas dan antioksidan ................................................................

19

1. Radikal bebas ....................................................................................

19

2. Antioksidan .......................................................................................

21

D. Nyeri .........................................................................................................

23

E. Analgetika .................................................................................................

29

F. Asetosal ....................................................................................................

34

G. Metode Pengujian Efek Analgesik ...........................................................

36

H. Landasan Teori .........................................................................................

40

I. Hipotesis ..................................................................................................

42

BAB III. METODOLOGI PENELITIAN A. Jenis Rancangan Penelitian ......................................................................

43

B. Metode Penelitian .....................................................................................

43

C. Variabel Operasional .................................................................................

44

ix


1. Variabel .............................................................................................

44

2. Definisi operasional .........................................................................

44

D. Bahan Penelitian ......................................................................................

46

E. Alat atau Instrumen Penelitian ................................................................

47

F. Tata Cara Penelitian .................................................................................

48

1. Pengumpulan bahan ..........................................................................

48

2. Pembuatan ekstrak etanol daun senggani .........................................

48

3. Pembuatan CMC-Na 1% ..................................................................

49

4. Pembuatan suspensi asetosal 0,5% dalam CMC-Na 1% ..................

49

5. Pembuatan asam asetat 1% ...............................................................

49

6. Pembuatan suspensi ekstrak etanol daun senggani 5% dalam CMC-Na 1% .....................................................................................

49

7. Penetapan kriteria geliat ....................................................................

49

8. Penetapan kadar dan dosis asam asetat .............................................

50

9. Penetapam kontrol negatif ................................................................

51

10. Penetapan selang waktu pemberian rangsang ...................................

51

11. Penetapan dosis dan kadar asetosal ...................................................

51

12. Penetapan dosis dan kadar ekstrak etanol daun senggani .................

52

13. Seleksi hewan uji ..............................................................................

53

14. Perlakuan hewan uji ...........................................................................

53

G. Analisis Hasil ............................................................................................

54

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .....................................................

56

A. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Senggani ..............................................

56

x


B. Uji Pendahuluan .............................................................................

57

1. Penentuan kriteria geliat ...................................................................

58

2. Penetapan dosis asam asetat ..............................................................

58

3. Penetapan kontrol negatif .................................................................

61

4. Penetapan selang waktu pemberian rangsang ...................................

63

5. Penetapan dosis asetosal ...................................................................

65

B. Pengujian Efek Analgesik Ekstrak Etanol Daun Senggani ......................

68

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ......................................................

85

A. Kesimpulan ..............................................................................................

85

B. Saran .........................................................................................................

85

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................

86

LAMPIRAN ..................................................................................................

90

BIOGRAFI PENULIS ..................................................................................

122

xi


DAFTAR TABEL Halaman Tabel 1.

Rata-rata jumlah kumulatif geliat hewan uji pada penetapan dosis efektif asam asetat .............................................................

Tabel 2.

Ringkasan analisis variansi satu arah pada penetapan dosis efektif asam asetat ......................................................................

Tabel 3.

60

Rata-rata jumlah kumulatif geliat hewan uji pada penetapan kontrol negatif ............................................................................

Tabel 5.

59

Hasil analisis uji Scheffe pada penetapan dosis efektif asam asetat ...........................................................................................

Tabel 4.

58

61

Rata-rata jumlah kumulatif geliat hewan uji dan % penghambatan terhadap geliat pada penetapan selang waktu pemberian rangsang .........................................................

Tabel 6.

Ringkasan analisis variansi satu arah % penghambatan terhadap geliat pada penetapan selang waktu pemberian rangsang ..........

Tabel 7.

63

Hasil analisis uji Scheffe % penghambatan terhadap geliat pada penetapan selang waktu pemberian rangsang ............................

Tabel 8.

63

64

Rata-rata jumlah kumulatif geliat hewan uji dan % penghambatan terhadap geliat pada penetapan dosis asetosal ..............................................................................

Tabel 9.

65

Ringkasan analisis variansi satu arah % penghambatan terhadap geliat pada penetapan dosis asetosal ..........................................

xii

66


Tabel 10. Hasil analisis uji Scheffe % penghambatan terhadap geliat pada penetapan dosis asetosal .............................................................

66

Tabel 11. Rata-rata jumlah kumulatif geliat hewan uji dan % penghambatan terhadap geliat pada kelompok perlakuan ..................................

69

Tabel 12. Ringkasan analisis variansi satu arah % penghambatan terhadap geliat pada kelompok perlakuan ................................................

71

Tabel 13. Hasil analisis uji Scheffe % penghambatan terhadap geliat pada kelompok perlakuan ...................................................................

71

Tabel 14. Persen perubahan daya analgesik kelompok perlakuan dibandingkan asetosal dosis 91 mg/kgBB ..................................

75

Tabel 15. Ringkasan analisis variansi satu arah % perubahan daya analgesik .....................................................................................

76

Tabel 16. Hasil analisis uji Scheffe % perubahan daya analgesik ..............

77

Tabel 17. Jumlah geliat hewan uji pada penetapan dosis efektif asam asetat ...........................................................................................

95

Tabel 18. Jumlah geliat hewan uji pada penetapan kontrol negatif ...........

98

Tabel 19. Jumlah geliat hewan uji pada penetapan selang waktu pemberian ..................................................................................

100

Tabel 20. Data % penghambatan terhadap jumlah geliat pada penetapan selang waktu pemberian .............................................................

103

Tabel 21. Jumlah geliat hewan uji pada penetapan dosis efektif asetosal ..

105

Tabel 22. Data % penghambatan terhadap jumlah geliat pada penetapan dosis efektif asetosal ..................................................................

xiii

108


Tabel 23. Data jumlah geliat hewan uji setelah pemberian asam asetat pada semua kelompok perlakuan ...............................................

110

Tabel 24. Data % penghambatan terhadap jumlah geliat pada semua kelompok perlakuan ...................................................................

114

Tabel 25. Data % Perubahan daya analgesik terhadap kontrol positif .......

117

xiv


DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1.

Kerangka flavonoid (1a) dan sistem penomoran turunan flavonoid (1b) ..........................................................................

9

Gambar 2.

Struktur kimia kuersetin ..........................................................

11

Gambar 3.

Struktur kimia rutin .......................................................................

11

Gambar 4.

Struktur kimia quercitrin .........................................................

12

Gambar 5.

Struktur umum steroid ............................................................

14

Gambar 6.

Struktur kimia β-sitosterol ......................................................

14

Gambar 7.

Struktur kimia α-amyrin .........................................................

15

Gambar 8.

Pembagian kualitas nyeri berdasarkan lokalisasi ....................

24

Gambar 9.

Mediator yang dapat menimbulkan rangsang nyeri setelah kerusakan jaringan ..................................................................

27

Gambar 10. Terjadinya nyeri; penghantaran impuls; lokalisasi dan rasa nyeri serta inhibisi nyeri endogen ..........................................

28

Gambar 11. Diagram perombakan asam arakidonat ...................................

33

Gambar 12. Struktur molekul Asetosal .......................................................

34

Gambar 13. Skema kerja penelitian ..................................................................

55

Gambar 14. Diagram batang rata-rata jumlah kumulatif geliat pada penetapan dosis efektif asam asetat ........................................................

59

Gambar 15. Diagram batang rata-rata jumlah kumulatif geliat pada penetapan kontrol negatif .........................................................................

xv

62


Gambar 16. Diagram batang rata-rata % penghambatan terhadap geliat pada penetapan selang waktu pemberian rangsang .........................

63

Gambar 17. Diagram batang rata-rata % penghambatan terhadap geliat pada penetapan dosis asetosal..................................................

67

Gambar 18. Diagram batang rata-rata % penghambatan terhadap geliat pada kelompok perlakuan ................................................................

70

Gambar 19. Diagram batang rata-rata % perubahan daya analgesik terhadap kontrol positif ..........................................................................

76

Gambar 20. Diagram batang perbandingan daya analgesik dengan daya antiinflamasi ekstrak etanol daun senggani ..................................

78

Gambar 21. Perbandingan daya analgesik ekstrak etanol daun senggani dengan daya analgesik ekstrak petroleum eter daun senggani pada mencit putih betina .........................................................

80

Gambar 22. Rangkuman daya analgesik dan daya anti-inflamasi ekstrak etanol daun senggani dan ekstrak petroleum eter daun senggani ...................................................................................

82

Gambar 23. Tumbuhan senggani ................................................................

91

Gambar 24. Daun senggani .........................................................................

92

Gambar 25. Serbuk daun senggani .............................................................

92

Gambar 26. Ekstrak etanol daun senggani ..................................................

94

xvi


DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1.

Surat pernyataan pengambilan simplisia senggani (Melastoma polyanthum Bl.) ................................................

Lampiran 2.

Foto tumbuhan, daun, serbuk daun senggani dan ekstrak etanol daun senggani ............................................................

Lampiran 3.

103

Data jumlah geliat hewan uji dan hasil analisis variansi satu arah pada penetapan dosis efektif asetosal ...........................

Lampiran 8.

100

Data % penghambatan terhadap jumlah geliat dan hasil analisis statistik pada penetapan selang waktu pemberian ..

Lampiran 7.

98

Data jumlah geliat hewan uji dan hasil analisis statistik pada penetapan selang waktu pemberian .....................................

Lampiran 6.

95

Data jumlah geliat hewan uji dan hasil analisis variansi satu arah pada penetapan kontrol negatif ...................................

Lampiran 5.

91

Data jumlah geliat hewan uji dan hasil analisis variansi satu arah pada penetapan dosis efektif asam asetat .....................

Lampiran 4.

90

105

Data % penghambatan terhadap jumlah geliat dan hasil analisis variansi satu arah pada penetapan dosis efektif asetosal .................................................................................

Lampiran 9.

108

Data jumlah geliat hewan uji setelah pemberian asam asetat dan hasil analisis variansi satu arah pada semua kelompok perlakuan ..............................................................................

xvii

110


Lampiran 10. Data % penghambatan terhadap jumlah geliat dan hasil analisis statistik pada semua kelompok perlakuan ...............

114

Lampiran 11. Data % perubahan daya analgesik terhadap kontrol positif .

117

Lampiran 12. Cara perhitungan % penghambatan jumlah geliat terhadap kontrol negatif dan % perubahan daya analgesik terhadap kontrol positif .......................................................................

xviii

121


INTISARI

Tumbuhan senggani merupakan salah satu tumbuhan obat yang sering dimanfaatkan masyarakat sebagai pereda demam (antipiretik), penghilang nyeri (analgesik), peluruh kencing (diuretik), menghilangkan pembengkakan, dan lain-lain. Penelitian yang dilakukan bertujuan untuk mengetahui khasiat dan besarnya prosentase daya analgesik ekstrak etanol daun senggani. Penelitian ini termasuk dalam penelitian eksperimental murni dengan rancangan penelitian acak, lengkap, pola satu arah. Metode yang digunakan adalah metode induksi kimia. Tiga puluh ekor mencit betina, galur Swiss, berat badan antara 20-30 gram, umur 2-3 bulan, dibagi secara acak dalam 6 kelompok yaitu: I) kontrol negatif diberi CMC-Na 1%, II) kontrol positif diberi asetosal dosis 91 mg/kg BB, III) sampai VI) diberi perlakuan ekstrak etanol daun senggani secara per oral dalam 4 peringkat dosis berturut-turut sebesar 850 mg/kgBB; 1000 mg/kgBB; 1330 mg/kgBB; dan 1670 mg/kgBB. Sepuluh menit kemudian mencit diinduksi asam asetat 1% dosis 50 mg/kg BB secara intraperitonial. Geliat yang timbul diamati dan dicatat tiap 5 menit selama 60 menit. Jumlah kumulatif geliat diubah ke dalam bentuk prosentase penghambatan terhadap geliat. Data yang diperoleh dianalisis secara statistik dengan One-way ANOVA dilanjutkan dengan uji Scheffe dengan taraf kepercayaan 95%. Hasil penelitian yang diperoleh berupa % penghambatan terhadap geliat ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kgBB; 1000 mg/kgBB; 1330 mg/kgBB; dan 1670 mg/kgBB berturut-turut sebesar 88,06 %; 83,42 %, 68,26 %, dan 44,56 %.

Kata kunci: analgesik, ekstrak etanol daun senggani

xix


ABSTRACT

Senggani plants is one of medicinal plants which often used by people to decrease fever (antipyretic) and pain (analgesic), urinate shedding (diuretic), to lose udema, etc. The aim of the research that was done is to know the effect and percentage of amount analgesic potency from ethanol extract of senggani’s leaves. The genre of this research is pure experimental in which the program of this research is random research plan, complete, and one-direction pattern. The method used in this research is chemical induction method. The research uses 30 female mice of Swiss groove, it weights 20-30 grams, and the age is 2-3 months. The 30 mices are divided into 6 groups based on its treatment, i.e.: I) the group of negative control is given CMC-Na 1%; II) the group of positive control is given acetyl salicylic acid dosage 91 mg/kg BB; III) trough VI) the treatment is given extract ethanol of senggani leaves per orally in four different various dosage respectively, i.e.: 850 mg/kgBB; 1000 mg/kgBB; 1330 mg/kgBB; and 1670 mg/kgBB. Ten minutes after the treatment, the mice is induced by acetate acid 1% with dosage 50 mg/kg BB intra peritoneally. The wriggles are watched closely and booked every 5 minutes in 60 minutes. The accumulation numbers of the wriggles are transferred into the form of resistance percentage toward the wriggles. The data which is got from the calculation, later, is analyzed statistically with one-way ANOVA test, then, the step is continued with Shceffe with interval 95%. The result showing that ethanolic extract of senggani’s leaves at 850 mg/kgBW; 1000 mg/kgBW; 1330 mg/kgBW; and 1670 mg/kgBW, respectively, 88,06 %; 83,42 %, 68,26 %, and 44,56 %.

Key words : analgesic, ethanolic exstract of senggani’s leaves

xx

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI 1

BAB I PENGANTAR

A. Latar Belakang Sejak zaman dahulu tumbuh-tumbuhan sudah banyak dikenal sebagai sumber pengobatan yang ampuh. Mulai dari akar tumbuhan, berbagai umbi-umbian, batang dan kulit pohon, daun, bahkan bunga dan biji suatu tumbuhan yang sederhana pun dapat digunakan sebagai obat. Indonesia merupakan negara yang kaya akan hasil alam salah satunya adalah tumbuh-tumbuhan. Budaya bangsa Indonesia yang berkaitan dengan pemanfaatan alam, khususnya untuk pemeliharaan kesehatan dan pengobatan penyakit dilaksanakan berdasarkan pengalaman secara turun-temurun. Pengalaman tersebut dikembangkan dan diwariskan, sehingga obat tradisional dapat dimanfaatkan sampai sekarang sebagai sarana perawatan kesehatan masyarakat (Soedibyo, 1998). Dalam Undang-Undang No. 23 tahun 1992 tentang kesehatan, Departemen Kesehatan Republik Indonesia (Depkes RI) mendefinisikan obat tradisional sebagai bahan atau ramuan bahan yang berupa bahan-bahan tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan galenik, atau campuran dari bahan tersebut yang secara turuntemurun telah digunakan untuk pengobatan berdasarkan pengalaman (Anonim, 1992). Nyeri merupakan suatu gejala yang umum dan sering terjadi mengikuti salah satu atau lebih penyakit. Hampir sebagian besar penyakit memberi gejala nyeri yang dimanifestasikan dalam bentuk rasa sakit pada organ atau jaringan pada tubuh


(Anonim, 1991). Nyeri merupakan perasaan sensoris dan emosional yang tidak enak dan yang berkaitan dengan (ancaman) kerusakan jaringan. Salah satu tumbuhan yang dapat digunakan sebagai obat tradisional yaitu senggani (Melastoma polyanthum Bl.). Tumbuhan yang memiliki kandungan saponin, flavonoid, dan tanin ini berkhasiat sebagai pereda demam (antipiretik), penghilang nyeri (analgesik), peluruh kencing (diuretik), menghilangkan pembengkakan, melancarkan aliran darah dan penghenti perdarahan (hemostatis). Flavonoid berkhasiat sebagai anti-inflamasi anti alergi, antithrombolik, vasoprotektif sebagai penghambat promotor tumor dan untuk proteksi pada mukosa saluran cerna atau gastrik. Efek-efek tersebut berhubungan dengan pengaruh flavonoid pada metabolisme asam arakhidonat (Trease and Evans, 2002). Di antara senyawa flavonoid yang telah lama dikenal dan merupakan suatu kelompok antioksidan yaitu kelompok polifenol (Sitompul, 2003). Seberapa besar prosentase efek analgesik tumbuhan senggani sampai sekarang belum diketahui. Untuk itu dalam penelitian ini akan dilakukan uji efek analgesik dari

ekstrak etanol daun senggani pada mencit betina. Penggunaam

tanaman senggani biasanya diseduh atau dilarutkan dalam air. Menurut literatur, flavonoid umumnya larut dalam air dan dapat diekstraksi dengan etanol 70% (Harborne, 1984). Oleh karena itu pada penelitian ini akan dilihat khasiat tumbuhan senggani sebagai analgetika jika dilarutkan dalam pelarut polar selain air, yaitu etanol, dan juga akan dibandingkan seberapa besar efek analgesik daun senggani jika dilarutkan dalam pelarut yang polar dan pelarut yang non polar.


B. Permasalahan 1. Apakah ekstrak etanol daun senggani memiliki efek analgesik terhadap mencit putih betina? 2. Seberapa besar prosentase daya analgesik yang dimiliki ekstrak etanol daun senggani?

C. Keaslian Penelitian Sepengetahuan penulis penelitian mengenai uji efek analgesik ekstrak etanol daun senggani terhadap mencit betina belum pernah dilakukan di Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Adapun penelitian tentang tumbuhan senggani yang pernah dilakukan adalah sebagai berikut: 1.

Daya Antifertilitas dan Efek Toksik Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Tikus Betina (Christina, 2000). Hasil menunjukkan bahwa ekstrak etanol akar senggani pada dosis 54,98 mg/kg BB dan 219,92 mg/kg BB memberikan efek antifertilitas dan efek toksik pada tikus betina timbul pada dosis 54,98 mg/kg BB.

2.

Teratogenisitas Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Tikus Putih (Japri, 2001). Hasil menunjukkan bahwa akstrak etanol akar senggani berpotensi memberi efek teratogenik pada dosis 34,362 mg/kg BB; 103,086 mg/kg BB; dan 309,258 mg/kg BB ditandai dengan penurunan bobot plasenta, peningkatan jumlah resorpsi awal, kelainan tulang sternum, dan cacat mikroskopis.


3.

Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) terhadap Jaringan Hati, Ginjal, Ovarium, dan Uterus Tikus Betina (Phin, 2001). Hasil menunjukkan bahwa ekstrak etanol akar senggani memiliki efek toksik pada jaringan organ tersebut pada dosis 54,08 mg/kg BB; 109,62 mg/kg BB;dan 219,92 mg/kg BB.

4.

Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma Polyanthum Bl.) terhadap Spermatogenitas Tikus Putih (Yosef, 2001). Hasil menunjukkan bahwa ekstrak etanol akar senggani pada dosis 34,98 mg/kg BB; 103,14 mg/kg BB; dan 309,42 mg/kg BB secara per orar selama 22 hari dapat menghambat spermatogenesis pada lumen tubulus seminiferis, menurunkan jumlah sperma yang motil, tidak menurunkan bobot testis, namun dapat menurunkan berat badan tikus.

5.

Toksisitas Akut Infus Daun Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Mencit (Wiwin, 2002). Hasil menunjukkan bahwa ekstrak etanol akar senggani memiliki LD50 semu > 15,356 g/kg BB, sehingga dapat dikatakan praktis tidak toksik.

6.

Uji Daya Antifungus Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) terhadap Candida albicans secara in vitro (Katarina, 2002). Hasil menunjukkan bahwa ekstrak etanol akar senggani mengandung flavonoid, tanin , dan steroid serta memiliki efek antifungus Candida albicans.


7.

Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Tikus Jantan dan Betina (Ismirawati, 2002). Hasil menunjukkan bahwa ekstrak etanol akar senggani memiliki LD50 semu, yaitu lebih dari 3518,72 mg/kg BB. Gejala toksik yang muncul yaitu berupa penurunan aktivitas lokomotor, penurunan sesitivitas, serta sering menggosok hidung. Hasil pemeriksaan histopatologi menunjukkan adanya kelainan pada hati, ginjal, usus, lambung, sedangkan pada limpa normal.

8.

Uji Daya Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Senggani (Melastoma affine D. Don.) terhadap Bakteri Gram Positif dan Bakteri Gram Negatif (Toba, 2003). Hasil menunjukkan bahwa ekstrak etanol akar senggani memiliki aktivitas antibakteri Staphylococcus aureus dan Shigella dysentriae.

D. Manfaat Penelitian

1. Manfaat teoritis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi yang berguna tentang penggunaan tumbuhan obat tradisional sebagai analgesik. 2. Manfaat praktis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi kepada masyarakat tentang kegunaan daun senggani sebagai analgesik.


E. Tujuan Penelitian Tujuan pengujian efek analgesik ekstrak etanol daun senggani terhadap mencit putih betina adalah sebagai berikut ini. a. Tujuan Umum Untuk menambah informasi mengenai khasiat daun senggani. b. Tujuan Khusus Untuk mengetahui kemampuan ekstrak etanol daun senggani sebagai analgetika dan untuk mengetahui besarnya efek analgesik yang dimiliki terhadap mencit putih betina.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A. Tumbuhan senggani (Melastoma polyanthum Bl.) Senggani dapat tumbuh liar pada tempat yang cukup mendapat sinar matahari, seperti lereng gunung, semak belukar, lapangan yang tidak terlalu gersang, atau di daerah objek wisata sebagai tumbuhan hias. Tumbuhan ini bisa ditemukan sampai ketinggian 1.650 m dari permukaan laut (Dalimartha, 1999). 1. Klasifikasi tumbuhan senggani Divisio

: Spermatophyta

Subdivisio

: Angiospermae

Clasis

: Dicotyledoneae

Subclasis

: Dialypetalae

Ordo

: Mytales

Familia

: Melastomaceae

Genus

: Melastoma

Spesies

: Melastome polyathum Bl.

(Van Steenis, 1975; Tjitrosoepomo, 1989) 2. Morfologi Senggani termasuk tumbuhan perdu, tinggi 0,5-4 m. Cabang yang muda bersisik. Daun bertangkai, berhadapan, memanjang atau bulat telur memanjang dengan ujung runcing, bertulang daun 3,2-20 kali 1-8 cm, kedua belah sisi berbulu.


Bunga bersama-sama 5-18, pada ujung dan di ketiak daun yang tertinggi, berbilang 5 (4-6). Tabung kelopak berbentuk lonceng, bersisik, taju dengan sejumlah gigi kecil. Daun pelindung bersisik, langsing, 5 kali 2 mm, tidak menutupi kuncup. Daun mahkota bulat telur terbalik, panjang 2-3 cm, ungu merah, jarang putih. Benang sari 10 (8-12), memanjang dari penghubung sari di bawah ruang sari pada benang sari yang panjang 6-16 mm, pada yang pendek 2-7 mm. Bakal buah beruang 5 (4-6), dihubungkan oleh bingkai terhadap tabung kelopak. Buah buni berbentuk periuk, membuka melintang secara tidak teratur, dimana terlepas bingkai biji yang merah tua. Biji berbentuk kerang. Senggani dapat tumbuh di padang rumput, semak hutan kecil, 5-2000 m (Van Steenis, 1975). 3. Sinonim Tumbuhan ini sering disebut tidak tepat sebagai Melastoma malabathicum Bl. (Van Steenis, 1975). Sinonim senggani yaitu: Melastoma malabathicum L., Melastoma candidum D. Don. (Melastoma septemnervium Lour., non Jacq.), Melastoma dodecandum Lour. (Melastoma repens Desr.), Melastoma sanguineum Sims. (Melastoma decemfidum Roxb.), dan Melastoma affine D. Don. (Melastoma polyanthum Bl.) yang umumnya paling banyak digunakan di Indonesia (Lily, 1980). 4. Nama Daerah Nama daerah dari tumbuhan senggani antara lain: Senggani, Kluruk, Sengganen (Jawa), Senduduk (Melayu), Harendong (Sunda), Kemaden (Madura) (Dalimartha, 1999).


5. Kandugan Kimia Kandungan kimia tumbuhan senggani pada bagian daun adalah flavonoid, steroid/ triterpenoid, tanin 4,3 % (Anonim, 1995). Daun mengandung saponin (Dalimartha, 1999). Menurut Sulaiman, et al. (2004), pada analisis phytochemical dari ekstrak daun dan akar senggani mengandung β-sitosterol, α-amyrin, sitosterol 3-O-β-Dglucopiranoside, kuersetin, kuersitrin, dan rutin. a. Flavonoid Flavonoid merupakan kandungan khas tumbuhan hijau dan sebenarnya terdapat pada semua bagian tumbuhan termasuk daun, akar, kayu, kulit, tepungsari, nektar, bunga, buah buni, dan biji (Markham, 1982). Kerangka dasar flavonoid dan sistem penomoran untuk turunan flavonoid terlihat pada gambar1. 8 7

C

C

2

C

3 5

3'

1' 4'

B

A 6

1a

2'

1

O

6'

5'

4

1b

Gambar 1. Kerangka flavonoid (1a) dan sistem penomoran turunan flavonoid (1b) (Robinson, 1995)

Flavonoid sangat dimungkinkan dalam sejumlah pengobatan tradisional yang substansinya belum diketahui akan tetapi menunjukkan isi zat aktifnya flavonoid. Flavonoid berkhasiat sebagai anti-inflamasi anti alergi, antithrombolik, vasoprotektif sebagai penghambat promotor tumor dan untuk proteksi pada mukosa saluran cerna atau gastrik. Efek-efek tersebut berhubungan dengan pengaruh flavonoid pada metabolisme asam arakhidonat (Evans, 2002).


Aglikon flavonoid adalah polifenol, sehingga mempunyai sifat kimia senyawa fenol yaitu bersifat agak asam maka dapat larut dalam basa (Markham, 1982). Di antara senyawa flavonoid yang telah lama dikenal dan merupakan suatu kelompok antioksidan yakni, kelompok polifenol memiliki kemampuan sebagai scavenger superoksida, oksigen singlet, dan radikal peroksi lipid (Sitompul, 2003). Beberapa penelitian melaporkan bahwa aktivitas antioksidan flavonoid ditentukan oleh gugus tertentu dalam struktur flavonoid tersebut. Karakteristik struktur flavonoid yang mampu memberikan efek antioksidan antara lain karena adanya (1) gugus katekol (O-dihidroksi) pada cincin B yang mempunyai sifat sebagai donor proton, (2) gugus pirogalol (trihidroksi) pada cincin B, (3) gugus 4-oxo pada cincin heterosiklik, (4) gugus 3-OH pada cincin heterosiklik, serta (5) gugus 5-OH dan 7-OH yang potensial pada keadaan tertentu (Middleton dkk, 2000 cit Ladoangin, 2004). Ketika senyawa-senyawa ini bereaksi dengan radikal bebas maka terbentuk radikal baru yang distabilisasi oleh efek resonansi inti aromatik (Cuvelier, 1991 cit Hertiani, 2000). Daun senggani mengandung kuersetin yang merupakan salah satu zat aktif kelas flavonoid yang secara biologis memiliki manfaat yang amat kuat. Flavonol kuersetin memiliki aktivitas antioksidan yang amat potensial (Anonim, 2005). Kuersetin memiliki aktivitas antioksidan yang kuat karena memiliki ciri pada strukturnya, yaitu 3’4’-dihidroksi pada cincin B; 2,3-ikatan rangkap pada cincin C; sebuah gugus 3-hidroksil pada cincin C; dan sebuah gugus 5-hidroksil pada cincin A (Sibuea, 2004).


OH

OH

B HO

O

A

C OH

OH

O

Gambar 2. Struktur kimia kuersetin (Anonim, 1989)

Dilihat dari struktur kimianya, kuersetin memiliki aktivitas kuat sebagai pemberi hidrogen (hidrogen donating) karena kandungan hidroksilasi cukup, yakni 5 gugus OH dan empat diantaranya terdapat pada sisi aktif (C5, C7, C3’, dan C4’). Selain itu kuersetin memiliki struktur yang mampu sebagai pengkelat logam, yakni gugus karbonil pada C4 dan gugus hidroksil pada C3 dan C5 (Sibuea, 2004). Selain untuk menghambat oksidasi dan sitotoksisitas LDL-teroksidasi, kuersetin juga dapat menghambat siklooksigenase yang berperan pada metabolisme asam arakhidonat, sehingga dapat menurunkan agregrasi platelet (Sitompul, 2003). Daun Senggani juga mengandung rutin. Rutin (kuersetin 3-rutinosida) merupakan glikosida flavonol paling umum dan juga penting dalam bidang farmasi karena digunakan untuk mengobati kerapuhan pembuluh kapiler pada manusia. Struktur kimia rutin dapat dilihat pada gambar 3. OH

O

HO

OH

O OH

Glk

O

Ram

O

Gambar 3. Struktur kimia rutin (Harborne, 1984)


Rutin merupakan antioksidan kuat. Rutin juga memproduksi perusak radikal oksigen. Rutin dapat membantu dalam menghentikan edema pada vena yang mana merupakan gejala awal dari penyakit vena kronik pada kaki. Rutin juga mempunyai efek anti-inflamasi, efek pencegahan dan penyembuhan, menghambat kanker dan kondisi pre-kanker. Selain itu, dapat mencegah atherosklerosis,

mereduksi

sitotoksisitas

oksidasi

LDL-kolesterol,

dan

menurunkan resiko penyakit jantung. Selain itu senggani juga mengandung kuersitrin yang juga termasuk dalam golongan flavonoid. Kuersitrin sudah diuji mempunyai aktivitas sebagai antiinflamasi akut dan kronis pada tikus terinduksi trinitrobenzenesulfonic-acid. Pemberian kuersitrin secara peroral dengan dosis 1-5 mg/kgBB dapat menurunkan tingkat myeloperoksida dan alkalin fosfat. Peningkatan atau penurunan dosis flavonoid ditandai dengan menurunnya efek. Efek anti-inflamasi akut kuersetin tidak berpengaruh terhadap pengrusakan fungsi netrofil atau penghambatan lipoksigenase. Hal ini mungkin disebabkan oleh adanya proteksi mukosa atau peningkatan perbaikan mukosa sekunder untuk kenaikan pertahanan melawan oksidatif berbahaya dan perbaikan fungsi usus normal. Akibatnya dapat menurunkan resiko terjadinya kerusakan usus pada saat terjadi diare. Berikut ini adalah struktur kimia kuersitrin.

Gambar 4. Struktur kimia quercitrin ( de Medina, Galvez,Romero, dan Zarzuelo, 1996)


Flavonoid umumnya larut dalam air dan dapat diekstraksi dengan etanol 70%. Pada penyarian lebih lanjut digunakan petroleum eter, etanol 80%, dan pelarut organik lain, tetapi flavonoid tetap berada dalam lapisan air (Harborne, 1984). b. Tanin Tanin merupakan substrat kompleks yang biasanya terjadi sebagai campuran polifenol yang sulit diseparasi karena tidak dapat dikristalkan. Tanin dapat tersebar luas dalam tumbuhan berpembuluh dalam angiospermae khususnya dalam jaringan kayu. Dalam dunia kesehatan tanin digunakan sebagai astringen yang mengakibatkan pengurangan bengkak (edema), radang, dan sekresi pada gastrointestinal dan pada abrasi kulit (Harborne, 1984). Secara kimiawi terdapat dua jenis utama tanin yaitu tanin terkondensasi (flavolan) secara biosintesis dapat dianggap terbentuk dengan cara kondensasi katekin tunggal yang membentuk senyawa dimer dan oligomer yang lebih tinggi (Harborne, 1984). Tanin yang terhidrolisis dapat dihidrolisis oleh asam atau enzim seperti tannase (Evans, 2002). Tanin terhidrolisiskan dan glikosida dapat diekstraksi dengan air panas atau campuran etanol-air (Robinson, 1995). c. Steroid/ triterpenoid Steroid merupakan lemak yang dikarakteristikkan mempunyai kerangka karbon yang dihubungkan dengan empat cincin (Anonim, 2006).


242

21 20

12 19

C 9

2

8

13 14

10 A 4

3

D 15

B 7

5

24

17

11

1

241

22

18

23

26 25

16 27

30

6 28

29

Gambar 5. Struktur umum steroid (Anonim, 2006).

Dahulu sterol terutama dianggap sebagai senyawa satwa (sebagai hormon kelamin, asam empedu, dan lain-lain), namun pada tahun-tahun terakhir ini makin banyak senyawa tersebut ditemukan dalam jaringan tumbuhan. Tiga senyawa ‘fitosterol’ yang mungkin terdapat dalam tiap tumbuhan tinggi tersebut yaitu sitosterol (dahulu dikenal sebagai β-sitosterol), stigmasterol, dan kampestrol. Et

HO

Gambar 6. Struktur kimia β-sitosterol (Harborne, 1984).

Triterpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari 6 satuan isoprena. Triterpenoid dapat dibagi menjadi 4 golongan senyawa yaitu triterpenoid sebenanya, steroid, saponin, dan glikosida jantung. Banyak triterpena yang dikenal dalam tumbuhan. Sampai saat ini hanya beberapa saja yang diketahui tersebar luas. Senyawa tersebut adalah triterpena pentasiklik α-amyrin dan β-amyrin serta asam turunannya, yaitu asam ursolat dan asam oleanolat.


Me Me H Me

Me H

HO Me

Me Me

Me

Gambar 7. Struktur kimia α-amyrin (Harborne, 1984).

Sebagian besar senyawa steroid dan terpenoid adalah senyawa non polar, karena itu dapat dipisahkan dari komponen tumbuhan yang polar dengan mengekstraksi menggunakan pelarut seperti benzena atau eter (Robinson, 1995). d. Saponin Saponin adalah glikosida triterpena dan sterol dan telah terdeteksi dalam lebih dari 90 suku tumbuhan. Saponin merupakan senyawa aktif permukaan dan bersifat seperti sabun, serta dapat dideteksi berdasarkan kemampuannya membentuk busa dan menghemolisis sel darah. Pencarian saponin dalam tumbuhan telah dipicu oleh kebutuhan akan sumber sapogenin yang mudah diperoleh dan dapat diubah di laboratorium menjadi sterol hewan yang berkhasiat penting (misalnya, kortison, estrogen kontraseptik, dll) (Harborne, 1987). Saponin merupakan surfaktan alami, atau detergent yang banyak ditemukan pada beberapa jenis tumbuhan. Ekstrak dari tumbuhan ini biasa digunakan sebagai foaming agent pada banyak minuman. Sifat biokimianya juga memiliki aplikasi komersial di bidang industri dan banyak digunakan pada beberapa produk kosmetik dan shampo (Anonim, 2004).


Senyawa glikosida seperti saponin dan glikosida jantung tidak larut dalam pelarut non polar. Senyawa ini paling cocok diekstraksi dari tumbuhan memakai etanol atau metanol panas 70-95% (Robinson, 1995). 6. Khasiat dan Kegunaan Penggunaan tumbuhan senggani sebagai obat tradisional mengalami banyak perkembangan, sejak awalnya digunakan hanya sebagi anti diare tetapi sekarang berbagai macam khasiat. Adanya rasa pahit dari senggani dapat berkhasiat sebagai pereda demam (antipiretik), penghilang nyeri (analgesik), peluruh kencing (diuretik), menghilangkan pembengkakan, melancarkan aliran darah, dan penghentian pendarahan (hemostatis). Umumnya senggani digunakan masyarakat untuk mengobati keputihan, gangguan pencernaan makanan, disentri, diare, sariawan, dan pendarahan rahim (Dalimartha, 1999). Menurut Sudibyo (1998), tumbuhan senggani berkhasiat untuk astringen, desentri, keputihan, mencret, wasir, obat kumur, sakit perut, dan borok (obat luar).

B. Metode Penyarian Penyarian merupakan peristiwa pemindahan massa. Zat aktif yang semula berada di dalam sel ditarik oleh cairan penyari, sehingga terjadi larutan zat aktif dalam cairan penyari tersebut. Secara umum penyarian dapat dibedakan menjadi infudasi, maserasi, dan perkolasi (Anonim, 1986). Infudasi merupakan proses penyarian yang umumnya digunakan untuk menyari zat kandungan aktif larut dalam air dari bahan-bahan nabati. Penyarian dengan cara ini menghasilkan sari yang tidak stabil dan mudah terserang oleh kuman


dan kapang. Oleh sebab itu, sari yang diperoleh tidak boleh disimpan lebih dari 24 jam. Cara ini sangat sangat sederhana dan sering digunakan oleh perusahaan obat tradisional. Infus adalah sediaan cair yang dibuat dengan mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 90° C selama 15 menit (Anonim, 1986). Maserasi merupakan cara penyarian sederhana. Maserasi dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif, zat aktif akan larut dan karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dengan yang di luar sel, maka larutan yang terpekat didesak ke luar. Peristiwa tersebut berulang, sehingga terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam sel. Maserasi digunakan untuk penyarian simplisia yang mengandung zat aktif yang mudah larut dalam cairan penyari. Cairan penyari yang digunakan dapat berupa air, etanol, air-etanol atau pelarut lain (Anonim, 1986). Perkolasi adalah cara penyarian yang dilakukan dengan mengalirkan melalui serbuk simplisia yang telah dibasahi. Prinsip perkolasi adalah sebagai berikut: serbuk simplisia ditempatkan dalam suatu bejana silinder yang bagian bawahnya diberi sekat berpori. Cairan penyari dialirkan dari atas ke bawah melalui serbuk tersebut, sehingga cairan penyari

akan melarutkan zat aktif sel-sel yang dilalui sampai

mencapai keadaan jenuh. Gerak ke bawah disebabkan oleh kekuatan gaya beratnya sendiri dan cairan di atasnya, dikurangi dengan daya kapiler yang cenderung untuk menahan (Anonim, 1986).


Cara perkolasi lebih baik daripada dengan cara maserasi karena: 1. aliran cairan penyari menyebabkan adanya pergantian larutan yang terjadi dengan larutan yang konsentrasinya lebih rendah, sehingga meningkatkan derajat perbedaan konsentrasi, 2. ruangan di antara butir-butir serbuk simplisia membentuk saluran tempat mengalir cairan penyari. Karena kecilnya saluran kapiler tersebut maka kecepatan pelarut cukup untuk mengurangi lapisan batas sehingga dapat meningkatkan perbedaan konsentrasi (Anonim,1986). Alat yang digunakan untuk perkolasi disebut perkolator, cairan yang digunakan untuk menyari disebut cairan penyari atau menstrum, larutan zat aktif yang keluar dari perkolator disebut perkolat atau sari, sedangkan sisa setelah penyarian disebut ampas atau sisa perkolasi (Anonim, 1986). Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode perkolasi. Cairan penyari yang digunakan dalam penelitian ini adalah etanol 70%. Etanol digunakan sebagai penyari karena lebih selektif, kapang/kuman sulit tumbuh dalam etanol di atas 20%, tidak beracun, bersifat netral, absorpsinya baik, dapat bercampur dengan air, panas yang digunakan untuk pemekatan lebih sedikit, selain itu etanol mudah diperoleh dan hanya untuk meningkatkan kemampuan penyariannya hanya perlu ditambah air dengan perbandingan tergantung bahan yang disari (Anonim, 1986).


C. Radikal Bebas dan Antioksidan 1. Radikal Bebas Radikal bebas adalah suatu spesies yang mempunyai jumlah elektron ganjil atau elektron yang tidak berpasangan tunggal pada lingkaran luarnya. Elektron tidak berpasangan tersebut menyebabkan instabilasi dan bersifat reaktif. Radikal bebas akan merusak molekul yang elektronnya ditarik oleh radikal bebas tersebut sehingga menyebabkan kerusakan sel, gangguan fungsi sel, bahkan kematian sel. Molekul utama di dalam tubuh yang dirusak oleh radikal bebas yaitu DNA, lemak, dan protein (Setiati, 2003). Radikal bebas diproduksi secara eksogen dan secara endogen. Secara endogen, radikal bebas diproduksi oleh mitokondria, membran plasma, lisosom, retikulum endoplasma, dan intisel. Sedangkan secara eksogen, radikal bebas berasal dari asap rokok, polutan radiasi, obat-obatan, dan pestisida sumber utama reaksi radikal bebas pada mamalia adalah pada rantai pernafasan, fagositosis, sintesis prostaglandin, sistem sitokrom P-450, reaksi enzimatik O2, dan radiasi ion (Setiati, 2003). Radikal bebas

yang

berlebihan

akan

menyebabkan

kerusakan

jaringan

sehingga

menimbulkan nyeri. Dalam proses peradangan, radikal bebas terbentuk ketika asam arakhidonat dikonversikan menjadi peroksida baik melalui jalur siklooksigenase maupun lipoksigenase. Ketika terjadi kerusakan jaringan organ, jumlah radikal bebas meningkat seiring dengan peningkatan produksi peroksida, padahal tubuh memproduksi antioksidan endogen yang terbatas contohnya yaitu superoksida dismutase (SOD), katalase, dan glutation peroksidase (GSH Px) yang bekerja menstabilkan radikal bebas. Apabila jumlah radikal bebas makin banyak, antioksidan


endogen tak mampu lagi melumpuhkannya secara efektif sehingga harus ada tambahan antioksidan dari luar (eksogen) yang berasal dari bahan makanan (Sibuea, 2004). Pengrusakan radikal bebas reaktif didahului oleh kerja kerusakan membran sel, dengan terjadinya rangkaian proses sebagai berikut: a. terjadi ikatan kovalen antara radikal bebas dengan komponen-komponen membran (enzim-enzim membran, komponen karbohidrat membran plasma), sehingga terjadi perubahan struktur dan fungsi reseptor; b. oksidasi gugus tiol pada komponen membran oleh radikal bebas yang menyebabkan proses transpor lintas membran terganggu; c. reaksi peroksidasi lipid dan kolesterol membran yang mengandung asam lemak tak jenuh. Hasil peroksidasi lipid membran oleh radikal bebas berefek langsung terhadap kerusakan membran sel, antara lain dengan mengubah fluiditas, crosslinking, struktur dan fungsi membran; dalam keadaan yang lebih ekstrim akhirnya akan menyebabkan kematian sel. (Gitawati, 1995). Kerusakan struktur subseluler secara langsung mempengaruhi pengaturan metabolisme.

Sebagai

contoh

yaitu

disrupsi/kerusakan

membran

lisosom

menyebabkan pelepasan enzim-enzim hidrolitik lisosom yang selanjutnya mampu memperantarai pengrusakan intraseluler, dan memperkuat kemampuan radikal bebas dalam menginduksi kerusakan sel (Gitawati, 1995). Dengan bertambahnya usia, radikal bebas yang terbentuk selama metabolisme normal dapat merusak DNA dan makromolekul lain sehingga terjadi


penyakit-penyakit degeneratif, keganasan kematian sel-sel vital tertentu, yang pada akhirnya akan menyebabkan proses penuaan dan kematian bagi individu tersebut (Gitawati, 1995). Ada beberapa zat yang dapat mengurangi reaksi radikal bebas dengan memutuskan rantai reaksi, yaitu antara lain (1) enzim antioksidan (superoksid dimutase (SOD), katalase, glutation peroksidase, dan SOD mimics), (2) spin trap, dan (3) komponen yang memutuskan rantai (Setiati, 2003).

2. Antioksidan Antioksidan adalah senyawa yang dalam kadar lebih rendah dibanding bahan yang dapat dioksidasi, sangat memperlambat atau menghambat oksidasi dari bahan tersebut. Antioksidan dapat berperan sebagai spesies oksigen reaktif radikal bebas bergabung dengan zat lain untuk menimbulkan kerusakan pada sel-sel tubuh. Secara alamiah tubuh memproduksi antioksidan yang mampu melindungi sel dari radikal bebas (Sibuea, 2004). Peningkatan spesies oksigen reaktif ini juga dapat menimbulkan berbagai bentuk kerusakan jaringan, padahal spesies oksigen reaktif ini bertanggung jawab terhadap aksi xenobiotik tubuh (Middleton dkk, 2000 cit Ladoangin, 2004). Beberapa efek merugikan yang ditimbulkan akibat peningkatan spesies oksigen reaktif yaitu pada sistem biologi meliputi peroksidasi membran lipid, bahaya oksidasi asam nukleat dan karbohidrat, serta oksidasi sulfhidril dan bagian lain dari protein. Pertahanan terhadap spesies oksigen reaktif dilakukan secara enzimatik maupun non enzimatik. Antioksidan enzimatik meliputi superoksid dismutase (SOD),


catalase, dan glutation peroksidase. Antioksidan non enzimatik umumnya dapat menangkap radikal bebas, baik organik maupun anorganik (Middleton dkk, 2000 cit Ladoangin, 2004). Menurut Setiati (2003), antioksidan dibedakan menjadi antioksidan eksogen dan antioksidan endogen. Antioksidan endogen atau sering disebut antioksidan primer terdiri atas enzim-enzim dan berbagai senyawa yang disintesis dalam tubuh yang bekerja dengan cara mencegah pembentukan radikal bebas baru. Antioksidan eksogen atau yang dikenal juga sebagai antioksidan sekunder karena menangkap radikal dan mencegah reaksi berantai. Contohnya adalah vitamin E (tokoferol), vitamin C (askorbat), karoten, asam urat bilirubin, dan albumin. Selain itu terdapat juga antioksidan tersier yang memperbaiki kerusakan biomolekuler yang disebabkan oleh radikal bebas, contohnya enzim yang memperbaiki DNA dan metionin sulfoksida reduktase. Menurut tempat aksinya pada fase air ataupun lipofil dari membran, antioksidan dibagi menjadi water-soluble dan lipid-soluble. Vitamin C dan urate termasuk dalam antioksidan hidrofil. Sedangkan retinoid, karotenoid, flavonoid, dan vitamin A termasuk dalam antioksidan lipofil (Middleton dkk, 2000 cit Ladoangin, 2004). Flavonoid telah dikenal dan merupakan suatu kelompok antioksidan polifenol yang banyak terdapat pada sayuran, buah-buahan, dan beberapa minuman seperti teh hijau dan anggur merah. Di dalam keluarga polifenol, flavonoid ternyata mempunyai sifat antioksidan yang amat kuat yang mencapai 20 kali sifat antioksidan vitamin E (Sitompul, 2003).


Secara umum dapat dikatakan bahwa senyawa turunan flavonoid mampu memberikan efek antioksidan antara lain karena adanya gugus fenolik dalam struktur molekulnya. Ketika senyawa-senyawa ini bereaksi dengan radikal bebas maka terbentuk radikal baru yang distabilisasi oleh efek resonanasi inti aromatik (Cuvelier, 1991 cit Hertiani, 2000).

D. Nyeri Nyeri (pain) merupakan suatu gejala yang umum dan sering terjadi mengikuti salah satu atau lebih penyakit. Hampir sebagian besar penyakit memberi gejala nyeri yang dimanifestasikan dalam bentuk rasa sakit pada organ atau jaringan pada tubuh (Anonim, 1991). Nyeri merupakan respon langsung terhadap kejadian/ peristiwa yang tidak menyenangkan yang berhubungan dengan kerusakan jaringan, seperti, luka, inflamasi, atau kanker (Rang, et al, 2003) Menurut Tjay dan Raharja (2002), nyeri adalah perasaan sensoris dan emosional yang tidak enak dan yang berkaitan dengan (ancaman) kerusakan jaringan. Keadaan psikis sangat mempengaruhi nyeri, misalnya emosi dapat menimbulkan rasa sakit (kepala) atau memperhebatnya, tetapi dapat pula menghindarkan sensasi rangsangan nyeri. Nyeri dikatakan pula sebagai suatu perasaan pribadi dimana ambang toleransi nyeri berbeda-beda bagi setiap orang. Ambang nyeri didefinisikan sebagai tingkat (level) dimana nyeri dirasakan untuk pertama kali. Sedangkan menurut Guyton dan Hall (1996), nyeri merupakan suatu mekanisme pertahanan tubuh, yang timbul bila ada jaringan yang rusak. Hal ini menyebabkan individu bereaksi dengan cara memindahkan stimulus nyeri.


Menurut tempat terjadinya, nyeri terbagi atas nyeri somatik dan nyeri dalaman (viseral). Dikatakan nyeri somatik apabila rasa nyeri berasal dari kulit, otot, persendian, tulang, atau dari jaringan ikat. Nyeri somatik dibagi atas 2 (dua) kualitas yaitu nyeri permukaan dan nyeri dalam. Disebut nyeri permukaan apabila rangsang bertempat di dalam kulit, sedangakan disebut nyeri dalam apabila rangsang berasal dari otot, prsendian tulang dan jaringan ikat. Nyeri dalam (viseral) atau nyeri perut mirip dengan nyeri dalam sifat menekannya dan reaksi vegetatif yang menyertainya. Nyeri ini terjadi antara lain pada tegangan organ perut, kejang otot polos, aliran darah kurang dan penyakit yang disertai radang (Mutschler, 1986). Pembagian kualitas nyeri berdasarkan lokalisasi dapat dilihat pada gambar 8. Nyeri I Nyeri permukaan

kulit

Contoh Tusukan jarum, cubitan

Nyeri II

Nyeri somatik

Nyeri dalaman

Nyeri viseral

Otot Jaringan ikat Tulang Sendi perut

Contoh Kejang otot, Sakit kepala Contoh Kolik kantung empedu, Nyeri luka lambung

Gambar 8. Pembagian kualitas nyeri berdasarkan lokalisasi (Mutschler, 1986)

Bedasarkan perjalanannya, nyeri dapat dibedakan menjadi nyeri yang sifatnya akut dan kronis. Pada nyeri yang sifatnya akut umumnya terjadi beberapa


saat setelah terjadinya lesi atau trauma jaringan, berlangsung singkat dan biasanya cepat membaik bila diberi obat pengurang rasa nyeri (analgetika). Bila diberikan stimulus nyeri, maka rasa nyeri akan timbul dalam waktu kira-kira 0,1 detik. Rasa sakit akut juga digambarkan dengan banyak nama pengganti, seperti rasa sakit tajam, rasa tertusuk, rasa sakit cepat, rasa sakit elektrik, dan sebagainya (Anonim, 1991; Guyton dan Hall, 1996). Nyeri yang kronik umumnya berhubungan dengan terjadinya lesi jaringan yang bersifat permanen, atau dapat sebagai kelanjutan dari nyeri akut yang tidak ditangani dengan baik. Nyeri kronik ini biasanya berlangsung lama, atau biasanya terjadi selama lebih dari 6 bulan. Rasa sakit kronik timbul setelah satu detik atau lebih dan kemudian rasa sakit ini secara perlahan bertambah untuk selama beberapa detik dan kadang kala sampai beberapa menit. Rasa sakit kronik diberi banyak nama tambahan seperti rasa sakit terbakar, rasa sakit pegal, rasa sakit berdenyut-denyut, rasa sakit mual, dan rasa sakit lambat. (Anonim, 1991; Guyton dan Hall, 1996). Nyeri timbul jika rangsang mekanik, termal, kimia, atau listrik melampaui suatu nilai ambang tertentu (nilai ambang nyeri) dan karena itu menyebabkan kerusakan jaringan dengan pembebasan yang disebut senyawa nyeri. Seperti telah disebutkan, rangsang yang cukup untuk menimbulkan rasa nyeri ialah kerusakan jaringan atau gangguan metabolisme jaringan. Di sini senyawa tubuh sendiri dibebaskan dari sel-sel yang rusak, yang disebut zat nyeri (mediator nyeri), yang menyebabkan perangsangan reseptor nyeri (Mutschler, 1986). Mediator nyeri yang kini juga disebut autacoida, terdiri dari antara lain histamin, serotonin, bradikinin, leukotrien, dan prostaglandin. Bradikinin adalah


polipeptida (rangkaian asam amino) yang dibentuk dari protein plasma. Prostaglandin mirip strukturnya dengan asam lemak dari protein plasma. Struktur prostaglandin mirip dengan asam lemak dan terbentuk dari asam arakhidonat. Menurut perkiraan, zat-zat ini meningkatkan kepekaan ujung saraf sensoris bagi rangsangan nyeri yang diakibatkan oleh mediator lainnya. Berhubung kerja dan inaktivasinya pesat dan bersifat lokal, maka juga dinamakan hormon lokal (Tjay dan Raharja, 2002). Yang termasuk “zat nyeri” yang potensinya kecil adalah ion hidrogen. Pada penurunan nilai pH di bawah 6 selalu terjadi rasa nyeri yang meningkat pada kenaikan konsentrasi ion H+ lebih lanjut. Kerja lemah yang mirip dimiliki juga oleh ion kalium yang keluar dari ruang intrasel setelah terjadi kerusakan jaringan dan dalam interstisium pada konsentrasi >20 mmol/L menimbulkan rasa nyeri. Demikian pula berbagai neurotransmiter bekerja sebagai zat nyeri pada kerusakan jaringan. Histamin pada konsentrasi relatif tinggi (10-8 gram/L) terbukti sebagai zat nyeri. Asetilkolin pada konsentrasi rendah mensensibilisasi reseptor nyeri terhadap zat nyeri lain sehingga senyawa ini bersama-sama dengan senyawa yang dalam konsentrasi yang sesuai secara sendiri tidak berkhasiat dapat menimbulkan nyeri. Pada konsentrasi tinggi, asetilkolin bekerja sebagai zat nyeri yang berdiri sendiri. Serotonin merupakan senyawa yang menimbulkan nyeri yang paling efektif dari kelompok transmiter. Sebagai kelompok senyawa penting lain dalam hubungan ini adalah kinin, khususnya bradikinin yang termasuk penyebab nyeri terkuat. Prostaglandin yang dibentuk lebih banyak dalam peristiwa nyeri mensensibilitas reseptor nyeri dan di samping itu menjadi penentu dalam nyeri lama (Mutschler,


1986). Prostaglandin merupakan turunan asam lemak yang dibentuk endogen dengan efek fisiologi yang besar. Biosintesisnya telah dibuktikan dalam setiap organ utama tubuh manusia, walaupun dalam tingkat bervariasi. Rangsangan atau noksius

Kerusakan jaringan

Pembentukan Kinin (misalnya: bradikinin) Prostaglandin

Pembebasan: H+(pH < 6) K+ (> 20 mmol/L) Asetikolin Serotonin Histamine

Sensibilitas reseptor

Nyeri pertama

Nyeri lama

Gambar 9. Mediator yang dapat menimbulkan rangsang nyeri setelah kerusakan jaringan (Mutschler, 1986)


Rasa nyeri Penilaian nyeri

Lokalisasi nyeri

Reaksi pertahanan terkoordinasi

korteks

Sistem Limbik

Otak kecil

Thalamus optikus

Formatio reticularis

Reaksi vegetatif

Sumsum tulang

Refleks pertahanan

Reseptor nyeri

Pembebasan zat mediator

Rangsang nyeri Impuls penghantar nyeri yang meningkat Reaksi nyeri Inhibisi nyeri endogen

Gambar 10. Terjadinya nyeri; penghantaran impuls; lokalisasi dan rasa nyeri serta inhibisi nyeri endogen (Mutschler, 1986)


E. Analgetika Analgetika adalah senyawa yang dalam dosis terapeutik dapat meringankan atau menekan rasa nyeri, tanpa memiliki kerja anestesi umum (Mutschler, 1986). Sedangkan Djamhuri (1996) mengatakan behwa analgetika adalah obat yang dapat menghilangkan rasa nyeri dengan cara meningkatkan nilai ambang nyeri di sistem saraf pusat (SSP) tanpa menekan kesadaran. Obat-obat analgetika adalah kelompok obat yang memiliki aktivitas menekan atau mengurangi rasa nyeri. Efek ini dapat dicapai dengan berbagai cara, seperti menekan kepekaan reseptor terhadap rangsang nyeri mekanik, termik, listrik, atau kimiawi di pusat atau dengan cara menghambat pembentukan prostalglandin sebagai mediator nyeri (Anonim, 1991). Pengobatan atau terapi untuk nyeri juga dapat dilakukan secara non farmakologi yaitu antara lain dengan pengompresan dengan air panas, megalihkan perhatian pasien dari penyakit atau rasa nyeri yang dideritanya, atau bisa juga dilakukan terapi stimulasi. Transcutaneus electrical nerve stimulation (TENS) telah terbukti berhasil dalam terapi nyeri akibat pembedahan atau sesudah operasi, traumatik, nyeri oral-facial. Selain itu juga dapat dilakukan pendekatan psikologi. Namun teknik psikologi untuk treatment nyeri akut tidak digunakan secara luas. Teknik psikologi lain yang berhasil meliputi latihan relaksasi, imagery, dan hipnotis (Dipiro, et al, 2005).


Secara umum analgetika dibagi menjadi tiga tipe (Turner, 1965), yaitu: 1. analgetika perifer, seperti asam salisilat digunakan sebagai analgetika untuk radang jaringan, obat ini menekan suhu dan edema. 2. analgetika hipotalamus, seperti aminopirin, digunakan sebagai analgetika normal dan radang jaringan, obat ini menekan suhu dan edema. 3. analgetika narkotika, digunakan sebagai analgetika normal dan radang jaringan, obat ini mungkin mempunyai pengaruh yang kuat pada penghilangan nyeri dan pada kejiwaan. Obat ini tidak mempunyai efek pada suhu dan kejiwaan. Menurur Mutschler (1986), berdasarkan potensi kerja, mekanisme kerja dan efek samping analgetika dibedakan dalam dua kelompok, yaitu: 1. analgetika yang berkhasiat kuat, bekerja pada pusat (hipnoanalgetika, ‘kelompok Opiat’), 2. analgetika yang berkhasiat lemah (sampai sedang), bekerja terutama pada perifer dengan sifat antipiretika kebanyakan juga mempunyai sifat antiinflamasi dan antireumatik. Berdasarkan kerja farmakologisnya, Tjay dan Rahardja (2002) membagi analgetika dalam dua kelompok besar, yakni: 1. analgetika perifer (non-narkotik), yang terdiri dari obat-obat yang tidak bersifat narkotik dan tidak bekerja sentral. 2. analgetika narkotik khusus digunakan untuk menghalau rasa nyeri hebat, seperti pada fractura dan kanker.


1. Analgetika narkotik Analgetika narkotik, kini disebut juga opioida (= mirip opiat), adalah zat yang bekerja terhadap reseptor opiod khas di SSP, hingga persepsi nyeri dan respons emosional terhadap nyeri berubah (dikurangi) (Tjay dan Rahardja, 2002). Analgetika kuat diindikasi pada kondisi nyeri yang sangat kuat yang jika tidak, tak cukup untuk dipengaruhi. Di sini terutama nyeri akibat kecelakaan, nyeri setelah operasi, dan nyeri tumor (Mutschler, 1986). 2. Analgetika non narkotika Analgetika jenis ini, yang juga disebut analgetika yang bekerja perifer atau ‘kecil’, memiliki spektrum kerja farmakologi yang mirip walaupun struktur kimianya berbeda. Di samping kerja analgetika, senyawa-senyawa ini menunjukkan kerja antipiretika dan juga komponen kerja antiflogistika dengan kekecualian turunan asetilanilida. Sebaliknya senyawa-senyawa ini tidak mempunyai sifat-sifat psikotropik dan sifat sedasi dari hipnoanalgetika. Akibat spektrum kerja ini, pemakaian luas dan karena itu termasuk pada bahan-bahan obat yang paling banyak digunakan (Mutschler, 1986). Istilah ‘analgetika berkhasiat lemah’ tidak benar untuk sifat-sifat dari kelompok obat ini karena beberapa senyawa ini memiliki efek analgetik lebih kuat jika dibandingkan hipnoanalgetika lemah. Walaupun demikian, untuk membedakan dari hipnoanalgetika, pengertian ini telah diambil (Mutschler, 1986). Obat ini mampu meringankan atau menghalau rasa nyeri, tanpa mempengaruhi SSP atau menurunkan kesadaran, juga tidak menimbulkan ketagihan. Kebanyakan zat ini juga berdaya antipiretis dan/ atau antiradang. Oleh


karena itu, obat ini tidak hanya digunakan sebagai obat antinyeri, melainkan juga pada gangguan demam (infeksi virus/kuman, selesma, pilek) dan peradangan, seperti rema dan encok. Obat ini banyak digunakan pada nyeri ringan sampai sedang, yang penyebabnya beraneka ragam, misalnya nyeri kepala, gigi, otot atau sendi (rema dan encok), perut, nyeri haid (dysmenorroe), nyeri akibat benturan, atau kecelakaan (trauma) ( Tjay dan Rahardja, 2002). Obat analgetika antipiretika serta obat anti-inflamasi nonsteroid (AINS) merupakan suatu kelompok obat yang heterogen, bahkan beberapa obat sangat berbeda secara kimia. Walaupun demikian obat-obat ini ternyata memiliki banyak persamaan dalam efek terapi maupun efek samping. Prototip obat golongan ini adalah aspirin (Wilmana, 1995). Kemajuan penelitian dalam dasawarsa terakhir ini memberi penjelasan mengapa kelompok heterogen tersebut memiliki kesamaan efek terapi dan efek samping. Ternyata sebagian besar efek terapi dan efek sampingnya berdasarkan atas penghambatan biosintesis prostaglandin (PG) (Wilmana, 1995). Untuk mengerti kerja dan efek samping analgetika berkhasiat lemah, penemuan Vane bahwa senyawa ini bekerja mempengaruhi proses sintesis prostaglandin terbukti bermanfaat. Senyawa-senyawa ini menghambat sistem siklooksigenase yang menyebabkan asam arakhidonat dan asam-asam C20 tak jenuh lain menjadi endoperoksida siklik. Endoperoksida siklik merupakan prazat dari prostaglandin, serta prazat dari tromboksan A2 dan prostasiklin (Mutschler, 1986). Perombakan asam arakidonat dapat dilihat pada gambar 11.


Rangsangan

Gangguan membran sel

Fosfolipida Glukokortikoid (menginduksi terbentuknya lipocortin)

Fosfolipase A2

Lyso-glyseril fosforilkolin Asam arakhidonat

PAF OAINS Penghambat lipoksigenase

siklooksigenase

Vasodilatasi, kemotaksis

Lipooksigenase

leukotrien

Antagonis PAF

prostaglandin

tromboksan prostasiklin

mediator nyeri

nyeri

Gambar 11. Perombakan Asam Arakhidonat (Rang, et al, 2003)

Keterangan: : menghambat

: proses pembentukan

Kerusakan sel yang terkait dengan inflamasi berpengaruh pada selaput membran sel yang menyebabkan leukosit mengeluarkan enzim-enzim liposomal, arachidonic acid kemudian dilepaskan dari persenyawaan-persenyawaan terdahulu,


dan berbagai eicosanoid disintesis. Pada jalur cyclooxygenase (COX) dari metabolisme

arakhidonat

menghasilkan

prostaglandin-prostaglandin,

yang

mempunyai berbagai efek pada pembuluh darah, ujung saraf, dan pada sel-sel yang terlibat dalam inflamasi. Penemuan isoform-isoform COX (COX-1 dan COX-2) menjurus pada konsep bahwa isoform COX-1 yang konstitutif cenderung menjadi homeostatis dalam fungsinya, sedangkan COX-2 diinduksi selama inflamasi dan digunakan untuk memfasilitasi respons inflamasi (Katzung, 2002). Jalur lipoxygenase dari metabolisme arakhidonat menghasilkan leukotrine yang mempunyai efek kemotaksis yang kuat pada eosinofil, neutrofil, dan makrofag serta meningkatkan bronkokonstriksi dan perubahan-perubahan dalam permeabilitas dalam pembuluh darah (Katzung, 2002).

F. Asetosal COOH

COOCH3

Gambar 12. Struktur molekul Asetosal

Asetosal memiliki pemerian hablur putih, umumnya seperti jarum atau lempengan tersusun, atau serbuk hablur putih, tidak berbau atau berbau lemah. Asetosal stabil di udara kering, di dalam udara lembab secara bertahap terhidrolisa menjadi asam salisilat dan asam asetat. Asetosal sukar larut dalam air, mudah larut dalam etanol, larut dalam kloroform dan eter, agak sukar larut dalam eter mutlak (Anonim, 1995).


Asetosal adalah obat anti-nyeri tertua yang hingga kini paling banyak digunakan di seluruh dunia (Tjay dan Rahardja, 2002). Asam salisilat yang lebih dikenal sebagai asetosal atau aspirin adalah analgetika antipiretika dan anti-inflamasi yang sangat luas banyak digunakan dan digolongkan dalam obat bebas. Selain sebagai prototip, obat ini merupakan standar dalam menilai efek obat sejenis (Wilmana, 1995). Salisilat bermanfaat untuk mengobati nyeri yang tidak spesifik misalnya sakit kepala, nyerisendi, nyeri haid, neuralgia dan mialgia. Aspirin dosis terapi bekerja cepat dan efektif sebagai antipiretik (Wilmana, 1995). Asetosal bekerja dengan menghambat aktivitas prostaglandin G/H sintetase atau yang dikenal lazim sebagai enzim siklooksigenase. Enzim siklooksigenase merupakan katalisator pada tahap pertama pembentukan prostaglandin dan tromboksan dari asam arakhidonat. Enzim siklooksigenase terdiri dari isoenzim yaitu siklooksigenase I dan siklooksigenase II. Asetosal relatif lebih selektif terhadap enzim siklooksigenase tipe I. Pada enzim siklooksigenase tipe I, asetosal bekerja dengan mengasetilasi gugus hidroksil serin pada posisi 529 dari rantai polipeptida sehingga dapat menghambat masuknya substrat dari sisi enzim akibat rintangan sterik sehingga menyebabkan hilangnya aktivitas enzim secara irreversibel. Dengan hilangnya aktivitas enzim sklooksigenase maka pembentukan mediator nyeri dapat dihambat sehingga nyeri yang dirasakan dapat berkurang. Asetosal juga dapat menghambat aktivitas enzim siklooksigenase tipe II dengan cara berbeda yaitu dengan cara mengubah produk asam arakhidonat yang seharusnya Prostaglandin G1 menjadi asam 15 hidroksieisosatetraenoik (Dollery, 1999).


G. Metode Pengujian Efek Analgesik Metode-metode pengujian aktivitas analgetika dilakukan dengan menilai kemampuan zat uji untuk menekan atau menghilangkan rasa nyeri yang diinduksi pada hewan percobaan (mencit, tikus, marmot), yang meliputi induksi secara makanik, termik, elektrik dan secara kimia. Metode pengujian dengan induksi nyeri secara mekanik atau termik lebih sesuai untuk mengevaluasi obat-obat analgetika kuat. Pada umumnya daya kerja analgetika dinilai pada hewan dengan mengukur besarnya peningkatan stimulus nyeri yang harus diberikan sampai ada respon nyeri atau jangka waktu ketahanan hewan terhadap stimulus nyeri atau jtga peranan frekuensi respon nyeri (Anonim, 1991). Secara umum, pengujian aktivitas analgetika dilakukan secara in vitro dan in vivo. Uji in vitro lebih banyak dilakukan untuk menguji aktivitas analgetika sentral yaitu dengan menguji kemampuan suatu zat uji dalam menduduki atau berikatan dengan reseptor (Vogel, 2002). Berdasarkan jenis analgetika, metode pengujian efek analgesik dibagi menjadi 2 (Turner, 1965), yaitu: 1. golongan analgetika narkotika a. metode jepitan ekor Metode ini dilakukan dengan cara meletakkan mencit yang sudah diberi senyawa uji dengan dosis tertentu secara subkutan atau intravena 30 menit sebelumnya pada jepitan arteri yang dilapisi karet tipis selama 30 detik. Mencit yang tidak diberi analgetika akan berusaha terus untuk melepaskan


diri dari kekangan tersebut, sedangkan mencit yang diberi analgetika akan mengabaikan kekangan tersebut. b. metode rangsang panas Metode ini dilakukan dengan cara menempatkan mencit yang sudah diberi senyawa uji di atas pelat panas (hot plate) yang bersuhu 50º-55º C. Mencit memberikan respon berupa mengangkat, menjilat telapak kakinya, melompat. Hewan uji yang dibutuhkan tiap kelompok yaitu 5 ekor. Metode ini paling sederhana dan efisien. Evaluasi: efek analgesik dinyatakan positif jika waktu reaksi setelah pemberian obat lebih besar dari 30 detik yang tejadi paling sedikitnya satu kali, atau apabila paling sedikitnya tiga kali pembacaan memperlihatkan waktu reaksi yang sama dengan atau lebih besar dari 3 kali rata-rata waktu reaksi kelompok kontrol negatif (Anonim, 1991). c. metode pengukuran tekanan Alat yang digunakan pada metode ini menggunakan dua buah syringe yang dihubungkan pada kedua ujungnya, bersifat elastis, fleksibel, serta terdapat pipa plastik yang diisi dengan cairan. Sisi dari pipa dihubungkan dengan manometer. Syringe yang pertama diletakkan dengan posisi vertikal dengan ujungnya menghadap ke atas. Ekor tikus diletakkan di bawah penghisap syringe. Ketika tekanan diberikan pada syringe kedua, maka tekanan akan terhubung pada sistem hidrolik pada syringe yang pertama lalu pada ekor tikus. Tekanan sama pada syringe kedua akan meningkatkan tekanan pada ekor tikus, sehingga akan menimbulkan respon dan akan terbaca pada


manometer. Respon tikus yang pertama adalah meronta-ronta kemudian akan mengeluarkan suara (mencicit) sebagai tanda kesakitan. d. metode potensi petidin Metode ini dilakukan dengan cara menyuntikkan petidin dengan dosis 2,4 mg/kg BB dan 8 mg/kg BB secara berturut-turut pada suatu kelompok hewan uji dan petidin dosis tunggal, senyawa lain dan substansi lain yang akan diteliti dengan dosis 25% dari LD50 pada kelompok hewan uji yang lain. Persen daya analgesik dihitung dengan metode rangsang panas. Metode ini memerlukan hewan uji yang cukup banyak. e. metode antagonis nalorfin Metode ini dilakukan dengan cara memberikan senyawa uji dengan dosis toksik dan diikuti pemberian nalorpin dengan dosis 0,5-10,0 mg/kg BB secara intravena pada hewan uji berupa mencit, tikus, atau anjing. Segera setelah itu efek puncak dapat diamati. Nalorpin dapat menggantikan ikatan morfin dengan reseptornya sehingga meniadakan efek analgesik morfin dan obat analgesik lain yang mempunyai makanisme karja yang sama. f. metode kejang oksitosin Oksitosin merupakan hormon yang dihasilkan oleh kelenjar pituitori posterior, yang dapat menyebabkan kontraksi uterin sehingga menimbulkan kejang pada tikus. Hewan uji yang digunakan yaitu tikus betina dengan berat badan 120-140 mg, diberi estrogen dengan penanaman 15 mg dietilstilbestrol secara subkutan pada paha hewan uji. Setelah 10 minggu, hewan uji siap untuk tes daya analgesik. Senyawa yang akan diuji diberikan secara subkutan 15 menit


sebelum pemberian secara intraperitonial 2 unit oksitosin (dosis ED50). Persen penurunan kejang dideterminasi dan ED50 dapat diperkirakan. g. metode pencelupan pada air panas Metode ini dilakukan dengan cara mencelupkan ekor mencit pada air bertemperatur 580C, dimulai 15 menit setelah diinjeksikan substansi yang diuji secara intraperitonial. Pencelupan diulang setiap 30 menit. Respon mencit terlihat pada sentakan ekornya untuk menghindari air panas. 2. golongan analgetika non narkotika a. metode induksi kimia Pada metode ini digunakan rangsang kimia berupa zat kimia yang secara intraperitonial pada mencit yang sudah diberi senyawa uji secara oral pada selang waktu tertentu. Zat kimia yang biasa digunakan untuk memberikan respon berupa nyeri yaitu fenilkuinon. Respon nyeri pada mencit adalah geliat berupa kontraksi perut disertai tarikan kedua kaki belakang dan perut menempel pada lantai. Geliat diamati setiap 5 menit selama 1 jam. Pemberian analgesik akan mengurangi rasa nyeri sehingga jumlah geliat yang terjadi berkurang. Penelitian ini menggunakan metode rangsang kimia sebagai mentode pengujian efek analgesik karena metode ini sederhana, mudah dilakukan, dan cukup peka untuk pengujian senyawa-senyawa yang memiliki daya analgesik lemah. Daya analgesik dapat dievaluasi menggunakan persen penghambatan terhadap geliat, yaitu:


% penghambatan terhadap geliat = 100 – [(P/K) x 100] Keterangan: P = jumlah kumulatif geliat hewan uji setelah pmberian obat yang telah ditetapkan K = jumlah rata-rata geliat hewn uji kelompok kontrol

b. metode pedolorimeter Metode ini dilakukan dengan cara menempatkan mencit yang sudah diberi senyawa uji pada tempat yang sudah berarus listrik dengan tegangan 20 volt. Respon mencit yang ditimbulkn berupa suara mencicit. Pengukuran dialkukan setiap 10 menit selama 1 jam. Senyawa uji yang mempunyai daya analgesik dapat menaikkan tegangan untuk dapat menimbulkan teriakan mencit. c. metode rektodolometer Pada metode ini hewan uji tikus diletakkan dalam sebuah kandang yang dibuat khusus dengan menggunakan alas tembaga yang kemudian dihubungkan dengan sebuah gulungan yang berfungsi sebagai penginduksi. Ujung lain dari gulungan tersebut dihubungkan dengan silinder elektroda tembaga. Pada gulungan bagian atas terdapat suatu konduktor yang dihubungkan dengan suatu voltmeter yang sensitif untuk dapat mengubah 0,1 volt. Respon berupa suara teriakan tikus dapat ditimbulkan dengan pemberian teganagn sebesar 1 sampai 2 volt.

H. Landasan Teori Menurut Tjay dan Raharja (2002), nyeri adalah perasaan sensoris dan emosional yang tidak enak dan yang berkaitan dengan (ancaman) kerusakan jaringan.


Hampir sebagian besar penyakit memberi gejala nyeri yang dimanifestasikan dalam bentuk rasa sakit pada organ atau jaringan pada tubuh (Anonim, 1991). Kandungan kimia tumbuhan senggani pada bagian daun adalah flavonoid, steroid/ triterpenoid, tanin 4,3 % (Anonim, 1995). Daun mengandung saponin (Dalimartha, 1999). Sedangkan menurut Sulaiman, et al. (2004), pada analisis fitokimia dari ekstrak daun dan akar senggani mengandung β-sitosterol, α-amyrin, sitosterol 3-O-β-D-glucopiranoside, kuersetin, kuersitrin, dan rutin. Radikal bebas adalah suatu spesies yang mempunyai jumlah elektron ganjil atau elektron yang tidak berpasangan tunggal pada lingkaran luarnya. Elektron tidak berpasangan tersebut menyebabkan instabilasi dan bersifat reaktif. Radikal bebas akan merusak molekul yang elektronnya ditarik oleh radikal bebas tersebut sehingga menyebabkan kerusakan sel, gangguan fungsi sel, bahkan kematian sel (Setiati, 2003). Antioksidan adalah senyawa yang dalam kadar lebih rendah dibanding bahan yang dapat dioksidasi, sangat memperlambat atau menghambat oksidasi dari bahan tersebut (Sibuea, 2004). Flavonoid telah dikenal dan merupakan suatu kelompok antioksidan polifenol yang mempunyai sifat antioksidan yang amat kuat mencapai 20 kali sifat antioksidan vitamin E (Sitompul, 2003). Flavonoid umumnya larut dalam air dan dapat diekstraksi dengan etanol 70%. Selain flavonoid, zat kimia dalam tumbuhan yang dapat larut dalam etanol yaitu saponin dan tanin (Harborne, 1984). Sehingga pada penelitian ini diharapkan senyawa aktif yang terkandung dalam daun senggani dapat terekstraksi dengan baik dan dapat memberi efek analgesik.


I. Hipotesis Ekstrak etanol daun senggani memiliki efek analgesik terhadap mencit putih betina.


BAB III METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini merupakan jenis penelitian eksperimental murni dengan menggunakan rancangan acak lengkap pola satu arah.

B. Metode Penelitian Metode pengujian efek analgesik yang digunakan pada penelitian ini yaitu metode rangsang kimia. Pada metode ini digunakan rangsang kimia berupa asam asetat yang diberikan secara intraperitoneal pada mencit yang sudah diberi senyawa uji secara per oral pada selang waktu tertentu. Respon nyeri pada mencit adalah geliat berupa kontraksi perut disertai tarikan kedua kaki belakang dan perut menempel pada lantai. Geliat diamati setiap 5 menit selama 1 jam. Pemberian analgesik akan mengurangi rasa nyeri sehingga jumlah geliat yang terjadi berkurang. Daya analgesik dapat dievaluasi menggunakan persen penghambatan terhadap geliat, yaitu: % penghambatan terhadap geliat = 100 – [(P/K) x 100] Keterangan: P = jumlah kumulatif geliat hewan uji setelah pemberian obat yang telah ditetapkan K = jumlah rata-rata geliat hewn uji kelompok kontrol

Metode ini dipilih karena metode ini sederhana, mudah dilakukan, serta peka untuk pengujian senyawa-senyawa yang memiliki daya analgesik lemah.


C. Variabel Operasional 1. variabel Variabel penelitian ini meliputi: a. variabel bebas

: dosis ekstrak etanol daun senggani per kg berat

badan mencit putih betina. b. variabel tergantung

: prosentase daya analgesik ekstrak etanol daun

senggani terhadap mencit putih betina. c. variabel pengacau terkendali : 1) subyek uji

: mencit betina galur Swiss

2) umur subyek

: 2-3 bulan

3) berat badan

: 20-30 gram

4) keadan subyek uji

: sehat

5) asal tanaman senggani

: BPTO Tawangmangu, Solo, Jawa Tengah

6) proses isolasi senyawa kimia daun senggani menggunakan penyari etanol 70% dengan metode perkolasi dimana proses ekstraksi dihentikan sampai ekstrak yang keluar berwarna putih bening d. variabel pengacau tak terkendali

:

1) suhu pemanasan saat proses penguapan ekstrak etanol daun senggani 2) kemampuan absorbsi mencit terhadap ekstrak etanol daun senggani 2. definisi operasional a. dosis ekstrak etanol daun senggani Dosis diperoleh dengan cara mencari konsentrasi maksimum ekstrak etanol daun senggani dalam CMC-Na 1% yaitu sebesar 5%, sehingga


didapat dosis maksimum. Kemudian dibuat empat peringkat dosis dengan mengalikan dengan satu bilangan tertentu sehingga didapat suatu deret ukur. b. daya analgesik daya analgesik menunjukkan seberapa besar suatu zat tertentu dalam memberi efek analgesik, yang ditunjukkan dengan besarnya nilai persen penghambatan terhadap respon (geliat). c. uji daya analgesik uji daya analgesik menggunakan metode rangsang kimia yaitu suatu metode uji analgesik yang menggunakan rangsang kimia berupa zat kimia yang diberikan secara intraperitoneal pada mencit yang sudah diberi senyawa uji secara oral pada selang waktu tertentu. Respon nyeri pada mencit adalah geliat berupa kontraksi perut disertai tarikan kedua kaki belakang dan perut menempel pada lantai. Geliat diamati setiap 5 menit selama 1 jam. d. ekstrak etanol ekstrak etanol diperoleh dengan cara mengekstraksi bahan, yaitu daun senggani, dalam pelarut etanol dengan menggunakan metode perkolasi. Sehingga didapat ekstrak etanol daun senggani.


D. Bahan Penelitian 1. Bahan a. Hewan uji Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini berupa mencit betina, galur Swiss, berat 20-30 gram, umur 2-3 bulan, yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. b. Daun Senggani Bahan uji yang digunakan berupa daun senggani (Melastoma polyanthum, Bl.) yang diperoleh dari Badan Penelitian Tanaman Obat, Tawangmangu, Kabupaten Karang Anyar, Jawa Tengah pada bulan Mei 2006.

2. Bahan Kimia a. Asetosal

: berupa hablur tidak berwarna atau serbuk hablur putih;

tidak berbau atau hampir tidak berbau; rasa asam. Khasiat dan penggunaan sebagai analgetikum, antipiretikum (Anonim, 1979). Asetosal yang digunakan dalam penelitian diproduksi oleh Brataco Chemika dengan kualitas farmasetis. b. CMC Na

: berupa serbuk halus atau berbentuk granul berwarna putih,

bersifat higroskopis (Anonim, 1995), diproduksi oleh Brataco Chemika dengan kualitas farmasetis.


c. Asam asetat

: berupa cairan jernih; tidak berwarna; bau khas, tajam jika

diencerkan dengan air; rasa asam (Anonim, 1979), diproduksi oleh Merck dengan kualitas teknis.

E. Alat atau Instrumen Penelitian Peralatan yang digunakan seperti di bawah ini: 1. Alat Ekstraksi a. Seperangkat alat gelas berupa bekker glass, erlenmeyer, gelas ukur, labu ukur, cawan porselen, pipet tetes, batang pengaduk. b. Perkolator c. Waterbath d. Neraca merek mettler Toledo 2. Alat Uji Geliat a. kotak kaca tempat pengamatan geliat b. stopwatch c. jarum yang digunakan untuk pemberian per oral, berupa jarum yang ujungnya berbentuk bulat dan berlubang di bagian tengah d. spuit injeksi yang memiliki ujung runcing dan digunakan untuk pemberian secara intraperitoneal dengan merek Terumo 3. Lain-lain a. neraca analitik merek Mettler Toledo b. timbangan merek Mettler Toledo c. pemanas merek Ika Combimag Net


F. Tata Cara Penelitian Penelitian ini dilakukan menurut tata cara sebagai berikut: 1. Pengumpulan bahan a. bahan uji yang digunakan yaitu daun senggani yang diperoleh dari Badan Penelitian Tanaman Obat, Tawangmangu, Kabupaten Karanganyar, Jawa Tengah pada bulan Mei 2006. b. Bahan kimia yang digunakan yaitu: etanol, asetosal, CMC Na, dan asam asetat yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi, aquadest yang diproduksi oleh Laboratorium Kimia Organik, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 2. Pembuatan ekstrak etanol daun senggani Daun senggani yang sudah dikeringkan, diblender sampai halus. Seratus lima puluh gram serbuk daun senggani yang telah dibasahi terlebih dahulu dengan etanol 70% dimasukkan ke dalam perkolator, kemudian direndam dengan etanol 70% sampai mencapai ketinggian 1,5 cm di atas permukaan serbuk selama 24 jam. Kran perkolator dibuka dan kecepatan aliran diatur sehingga tiap 1 menit didapat perkolat sebanyak 20 tetes. Selama proses perkolasi berlangsung tinggi etanol di atas permukaan serbuk harus tetap 1-1,5 cm. Perkolat ditampung dalam erlenmeyer. Ekstraksi dihentikan jika perkolat yang keluar berwarna bening. Perkolat yang diperoleh diuapkan di atas waterbath hingga diperoleh perkolat yang kental (pekat). Ekstrak pekat kemudian disimpan di dalam lemari pendingin (kulkas).


3. Pembuatan larutan CMC Na 1% Larutan CMC Na 1% dibuat dengan cara menimbang dengan seksama 250 mg serbuk CMC Na kemudian ditaburkan di atas air panas sedikit demi sedikit hingga mengembang sambil diaduk. Setelah terbentuk larutan kemudian dimasukkan dalam labu ukur 25 mL dan ditambah aquadest hingga 25 mL lalu digojog. 4. Pembuatan suspensi asetosal 0,5% dalam CMC Na 1% Asetosal yang digunakan sebagai kontrol positif ditimbang seksama sebanyak 125 mg dan disuspensikan ke dalam suspensi CMC Na 1% volume 25 mL. 5. Pembuatan asam asetat 1% Larutan asam asetat ini dibuat dari larutan asam asetat glasial 100% v/v dengan pengenceran menggunakan rumus volume1 x konsentrasi1 = volume2 x konsentrasi2. Sebanyak 0,25 mL asam asetat 100% diencerkan dengan aquadest hingga volume 25,0 mL menggunakan labu ukur 25 mL. 6. Pembuatan suspensi ekstrak etanol daun senggani 4% dalam CMC Na 1% Ekstrak etanol daun senggani ditimbang seberat 400,0 mg kemudian dilarutkan dalam CMC Na 1%. Setelah itu, ditambahkan larutan CMC Na 1% sampai volume 10,0 mL. 7. Penetapan kriteria geliat Respon yang diamati pada uji daya analgesik ini berupa geliat. Kriteria geliat perlu ditetapkan untuk mendapatkan geliat yang hampir sama. Pedoman


gerakan mencit yang dianggap sebagai geliat adalah apabila mencit menarik kedua kaki belakang ke belakang dengan mengempiskan perutnya sehingga permukaan perut menempel pada alas tempat berpijak mencit itu, yaitu alas pada kotak kaca tempat pengamatan. Respon geliat yang timbul merupakan akibat dari pemberian asam asetat yang bersifat mengiritasi jaringan dan diberikan secara intraperitoneal. Adanya jaringan yang rusak mengakibatkan timbulnya rasa sakit dan mencit memberikan respon geliat. 8. Penetapan kadar dan dosis asam asetat Menurut Williamson (1996) asam asetat kadar 1-3 % digunakan sebagai iritant yang menyebabkan nyeri pada pengujian daya analgesik dengan metode geliat. Sumber lain menyebutkan bahwa asam asetat 1% sudah dapat menimbulkan geliat yang cukup banyak selama pengamatan (Putra, 2004). Penetapan dosis asam asetat menggunakan tiga peringkat dosis, yaitiu 25 mg/kg BB, 50 mg/kg BB, dan 100 mg/kg BB. Sebanyak sembilan ekor hewan uji, mencit betina, galur Swiss, berat 20-30 gram, umur 2-3 bulan yang telah dipuasakan ± 18-22 jam dibagi ke dalam 3 kelompok. Masing-masing kelompok terdiri dari 3 ekor mencit diinjeksi secara intraperitoneal dengan asam asetat 1% berturut-turut dengan dosis 25 mg/kg BB, 50 mg/kg BB, dan 100 mg/kg BB untuk tiap kelompoknya. Setelah itu diamati geliatnya selama 60 menit dan dicatat jumlah geliat tiap 5 menit. Kelompok dosis yang menunjukkan jumlah geliat paling banyak digunakan sebagai kontrol negatif, yaitu yang memberikan jumlah geliat yang tidak terlalu sedikit dan tidak terlalu banyak akan menyulitkan pengamatan.


9. Penetapan kontrol negatif Penetapan kontrol negatif ini bertujuan untuk mengetahui zat yang tidak memiliki daya analgesik, sehingga dapat digunakan untuk membandingkan dengan zat uji. Kontrol negatif yang digunakan untuk pembanding yaitu aquadest dan CMC Na 1%. Dua senyawa tersebut diberikan pada hewan uji dengan menghitung volume pemberian sesuai dengan berat badan hewan uji. Jika kedua kelompok tersebut tidak menunjukkan perbedaan yang bermakna maka digunakan kelompok CMC Na% untuk perhitungan daya analgesik, yang pada penelitian ini digunakan sebagai pensuspensi zat uji. 10. Penetapan selang waktu pemberian rangsang Penetapan

selang

waktu

pemberian

rangsang

bertujuan

untuk

mengetahui waktu zat uji memberikan efek analgesik secara optimal. Rentang waktu yang diujikan adalah 5, 10, dan 15 menit. Sebanyak sembilan ekor hewan uji, mencit betina, galur Swiss, berat 20-30 gram, umur 2-3 bulan yang telah dipuasakan ± 18-22 jam dibagi ke dalam 3 kelompok. Masing-masing kelompok terdiri dari 3 ekor mencit diinjeksi secara intraperitoneal dengan asam asetat 1% menggunakan dosis efektif asam asetat yang diperoleh dari penetapan dosis asam asetat dengan selang waktu 5, 10, dan 15 menit. 11. Penetapan dosis dan kadar asetosal Dosis asetosal yang digunakan dalam penelitian ini adalah dosis lazim 0,5 g. Jika dikonversikan pada mencit maka dosisnya dihitung sebagai berikut: Berat badan manusia Indonesia adalah 50 kg. Faktor konversi dengan pedoman manusia Eropa 70 kg adalah 70/50 kg = 0,7 g atau 700 mg. Konversi


dari manusia ke mencit adalah 0,0026 x 700 mg = 1,82 mg. Maka dosis asetosal adalah: 1000/ 20 x 1,82 mg/kg BB yaitu 91 mg/kg BB. Untuk menetapkan dosis asetosal digunakan tiga peringkat dosis yaitu 68,25 mg/kg BB, 91 mg/kg BB, dan 113,75 mg/kg BB. Dalam penetapan dosis asetosal digunakan 9 ekor mencit yang dibagi dalam tiga kelompok. Masing-masing kelompok terdiri dari 3 ekor mencit, galur Swiss, berat 20-30 gram, umur 2-3 bulan yang telah dipuasakan ± 18-22 jam sebelumnya. Tiap- tiap kelompok diberi suspensi asetosal dengan tiga peringkat dosis. Kemudian mencit diinjeksi dengan asam asetat secara intraperitoneal dengan selang waktu yang paling efektif dari penetapan waktu waktu pemberian asam asetat yaitu 10 menit dan menggunakan dosis yang paling efektif dari penetapan dosis asam asetat yaitu 50 mg/kg BB. Geliat mencit yang timbul diamati selama 60 menit dengan dicatat jumlah geliatnya tiap 5 menit. Kelompok dosis yang paling efektif digunakan sebagai kontrol positif. Kadar asetosal yang digunakan sebesar 0,5% dengan mengikuti penelitian terlebih dahulu yang telah melakukan orientasi menggunakan berbagai kadar tertentu. 12. Penetapan dosis dan kadar ekstrak etanol daun senggani Penetapan dosis dan kadar berdasarkan orientasi dimulai dari dosis 1 g/kg BB (Williamson et al., 1996). Kadar ekstrak etanol daun senggani dibuat 5 % agar dalam pemberiannya tidak melebihi volume pemberian


maksimum mencit per oral, yaitu 1 mL. Dari hasil orientasi dosis dan kadar tersebut ternyata memberikan efek analgesik sehingga dari dosis awal tersebut kemudian ditetapkan tiga peringkat dosis dengan cara menentukan kelipatannya. Dalam penelitian ini digunakan angka kelipatan sebesar 1,26 kalinya, sehingga didapatkan 3 peringkat dosis lainnya yaitu : 1330 mg/kg BB (1,26 x dosis 1000 mg/kg BB), 1670 mg/kg BB (1,26 x dosis 1330 mg/kg BB), 850 mg/kg BB (dosis 1000 mg/kg BB dibagi 1,26). 13. Seleksi hewan uji Hewan uji yang digunakan yaitu mencit putih betina galur Swiss, berat 20-30 gram, umur 2-3 bulan. Semua hewan uji dipelihara dengan kondisi perlakuan yang sama meliputi: pakan, minum, kandang, dan alasnya. Sebelum digunakan dalam percobaan, semu hewan uji diadaptasikan terlebih dahulu dengan kondisi yang sama. Bila akan digunakan dalam perlakuan, hewan uji dipuasakan terlebih dahulu selama ± 18-22 jam tanpa diberi makan, tetapi tetap diberi minum. Hal ini bertujuan untuk mengurangi variasi akibat adanya makanan. 14. Perlakuan hewan uji Hewan uji yang digunakan dalan penelitian ini dibagi menjadi dua kelompok, yaitu kelompok orientasi dan kelompok perlakuan. Pada kelompok perlakuan, hewan uji dibagi secara acak menjadi enam kelompok meliputi: kelompok I yaitu kelompok kontrol negatif diberi CMC Na 1%, kelompok II yaitu kelompok kontrol positif diberi asetosal 91 mg/kg BB, kelompok III-VI yaitu kelompok perlakuan diberi ekstrak etanol daun senggani dengan empat


peringkat dosis berturut-turut yaitu 850 mg/kg BB, 1000 mg/kg BB, 1330 mg/kg BB, dan 1670 mg/kg BB secara per oral. Sepuluh menit sesudah perlakuan, hewan uji diinjeksi dengan asam asetat 1% dosis 50 mg/kg BB secara intraperitoneal. Penentuan daya analgesik atau penghambatan terhadap geliat dilakukan dengan pengamatan respon nyeri berupa geliat pada hewan uji akibat pemberian asam asetat tersebut. Pengamatan dilakukan tiap 5 menit selama 60 menit. Data yang diperoleh berupa jumlah kumulatif geliat kemudian dihitung persen penghambatan terhadap geliat, yaitu: % penghambatan terhadap rangsang = 100 – [(P/K) x 100] Keterangan: P = jumlah kumulatif geliat hewan uji setelah pmberian obat yang telah ditetapkan K = jumlah rata-rata geliat hewn uji kelompok kontrol

Perubahan persen penghambatan geliat terhadap asetosal dosis 91 mg/kg BB sebagai kontrol positif pada tiap kelompok perlakuan dihitung dengan rumus: % perubahan penghambatan rangsang =

( P − Kp ) x 100 Kp

Keterangan: P = % penghambatan terhadap geliat pada setiap kelompok perlakuan Kp = rata-rata % penghambatan terhadap geliat pada kelompok kontrol positif

G. Analisis Hasil Data awal dianalisis dengan uji distribusi Kolmogorof-Smirnov. Setelah diketahui distribusi normal dilanjutkan dengan analisis statistik ANOVA satu arah untuk melihat adanya perbedaab antar kelompok perlakuan. Untuk menguji


adanya perbedaan nyata antara kelompok satu dengan yang lain dilakukan uji Scheffe dengan taraf kepercayaan 95%. Pada penetapan kontrol negatif digunakan analisis Independent-Samples T-test dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui adanya perbedaan di antara kedua perlakuan. Skema kerja penelitian dapat dilihat pada gambar 13. Hewan uji (5 ekor/ kelompok) Diberi perlakuan secara oral

Kontrol negatif (CMC Na 1%)

Kontrol positif (Asetosal 19 mg/kg BB)

Ekstrak Senggani 850 mg/kg BB




↓ Injeksi dengan asam asetat 1% dosis 50 mg/kg BB secara intraperitoneal ↓ Hitung jumlah geliat tiap 5 menit selama 60 menit ↓ Hitung % penghambatan terhadap geliat ↓ Hitung analisis statistik ANOVA satu arah dilanjutkan dengan uji Scheffe dengan taraf kepercayaan 95%

Gambar 13. Skema kerja penelitian


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Senggani Pembuatan ekstrak etanol daun senggani dilakukan dengan metode perkolasi. Metode perkolasi dipilih sebagai metode penyarian karena dengan metode ini senyawa lebih mudah terekstrak, sehingga diharapkan senyawa yang terekstrak lebih banyak. Pelarut yang digunakan dalam proses penyarian yaitu etanol 70%. Sebelum dilakukan ekstraksi, daun senggani diserbuk terlebih dahulu. Hal ini bertujuan agar kandungan fitokimia yang terkandung dalam daun Senggani lebih mudah terekstrak karena luas permukaan serbuk yang kontak dengan pelarut semakin besar. Serbuk daun senggani sebanyak 300 gram direndam dengan menggunakan pelarut etanol 70% di dalam erlenmeyer selama 24 jam. Perendaman ini bertujuan agar senyawa kimia yang terkandung dalam tumbuhan dapat larut dalam pelarut. Setelah perendaman selama 24 jam, campuran serbuk daun senggani dan petroleum eter dimasukkan ke dalam perkolator. Kran perkolator dibuka dan kecepatan penetesan larutan penyari adalah 3 ml permenit. Selama proses perkolasi berlangsung, tinggi pelarut harus tetap 1-2 cm di atas permukaan serbuk. Perkolat ditampung dalam erlenmeyer. Perkolasi dihentikan jika perkolat yang diperoleh sudah tidak berwarna lagi (bening). Perkolat yang diperoleh diuapkan di atas waterbath hingga diperoleh perkolat yang kental (pekat).

56


Ekstrak etanol daun senggani yang didapat memberikan ciri organoleptis sebagai berikut ini. Bentuk

: ekstrak kental

Warna

: coklat kehitaman

Bau

: khas

Rasa

: pahit

Untuk uji-uji selanjutnya ekstrak etanol daun senggani ini disuspensikan dalam larutan CMC-Na1%. Dari hasil orientasi dipilih konsentrasi ekstrak etanol daun senggani dalam CMC-Na sebesar 5%, karena konsentrasi ini merupakan konsentrasi maksimum suspensi ini dapat dimasukkan dan dikeluarkan dari spuit oral 1 mL.

B. Uji Pendahuluan Sebelum dilakukan pengujian efek analgesik dari ekstrak etanol daun senggani,

sebelumnya

dilakukan

terlebih

dahulu

uji

pendahuluan.

Uji

pendahuluan ini bertujuan untuk menetapkan hal-hal yang akan dilakukan pada pengujian sebenarnya, agar didapat hasil yang lebih valid dan akurat. Adapun uji pendahuluan tersebut meliputi penetapan kriteria geliat, penetapan dosis asam asetat, penentuan kontrol negatif, penetapan selang waktu pemberian rangsang, dan penentuan dosis asetosal. Pada uji pendahuluan ini digunakan subyek uji dengan ketentuan yang sama dengan subyek uji yang digunakan pada uji yang sebenarnya yaitu mencit betina, galur Swiss, umur 2-3 bulan, dan berat badan 20-

57


30 gram. Semua hewan uji dipuasakan terlebih dahulu ± 18-22 jam, tidak diberi pakan namun tetap diberi minum. 1. Penentuan kriteria geliat Penentuan kriteria geliat perlu dilakukan agar geliat yang diamati dapat sama atau seragam sehingga pengamatan menjadi lebih mudah dan spesifik serta data yang didapat menjadi lebih valid. Pedoman gerakan mencit yang dianggap sebagai geliat adalah apabila mencit menarik kedua kaki belakang ke belakang dengan mengempiskan perutnya sehingga permukaan perut menempel pada alas tempat berpijak mencit itu, yaitu alas pada kotak kaca tempat pengamatan. Respon geliat yang timbul merupakan akibat dari pemberian asam asetat 1% dengan dosis 50 mg/kg BB yang bersifat mengiritasi jaringan dan diberikan secara intraperitonial. Adanya jaringan yang rusak mengakibatkan timbulnya rasa sakit dan mencit memberikan respon geliat. 2. Penetapan dosis asam asetat Penelitian ini menggunakan metode induksi kimia, dimana hewan uji diberi zat kimia berupa asam asetat yang dapat menimbulkan rasa nyeri. Adanya ion H+ akan mengiritasi jaringan lokal sehingga muncul rasa nyeri. Asam asetat diberikan pada subyek uji secara intraperitonial. Penentuan dosis asam asetat ini bertujuan untuk mengetahui dosis efektif asam asetat yang dapat memberikan geliat pada mencit, sehingga geliat yang teramati tidak terlalu banyak dan tidak terlalu sedikit. Jika geliat yang muncul terlalu banyak dapat menyulitkan dalam pengamatan, namun juga tidak terlalu sedikit supaya cukup untuk diamati selama 1 jam.

58


Pada penetapan dosis asam asetat digunakan tiga peringkat dosis yaitu 25 mg/kgBB; 50 mg/kgBB; dan 100 mg/kgBB, sedangkan konsentrasi asam asetat yang digunakan yaitu 1% karena pada penelitian-penelitian terdahulu dakatakan bahwa konsentrasi 1% asam asetat sudah dapat memnberikan rangsang nyeri pada mencit (subyek uji). Masing-masing dosis diujikan pada 3 ekor hewan uji dengan rute pemberian intraperitoneal kemudian respon geliat diamati tiap 5 menit selama 60 menit. Data jumlah geliat pada penetapan dosis asam asetat serta hasil analisis statistiknya dapat dilihat pada lampiran 2 serta ringkasannya dapat dilihat pada tabel I. Tabel I. Rata-rata jumlah kumulatif geliat hewan uji pada penetapan dosis efektif asam asetat Dosis asam asetat (mg/kgBB) 25 50 100

Rata-rata jumlah kumulatif geliat (X ± SE) 45,67 ± 10,67 124 ± 7,77 145 ± 11,72

Rata-rata kumulatif geliat yang muncul pada penetapan dosis efektif asam asetat dapat pula disajikan dalam bentuk diagram batang seperti pada gambar 14.

rata-rata jumlah kumulatif geliat

160 140 120 100 80 60 40 20 0 25

50

100

dosis asam asetat (mg/kgBB)

Gambar 14. Diagram batang rata-rata jumlah kumulatif geliat pada penetapan dosis efektif asam asetat

59


Ringkasan data statistik analisis variansi satu arah pada penetapan dosis efektif asam asetat dapat dilihat pada tabel II. Tabel II. Ringkasan analisis variansi satu arah pada penetapan dosis efektif asam asetat Sumber variansi Antar perlakuan Error percobaan (dalam kelompok)

Jumlah kuadrat 16444,222

Derajat bebas 2

Rata-rata kuadrat 8222,111

F hitung

Probabilitas

1868,67

6

311,444

26,400

0,001

Dari hasil statistik tersebut diperoleh probabilitasnya lebih kecil dari 0,05 (p < 0,05) yaitu 0,001, yang menunjukkan bahwa terdapat perbedaan antara ketiga kelompok tersebut. Selanjutnya data diuji lagi dengan menggunakan uji Scheffe dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan yang bermakna di antara ketiganya. Hasil analisisnya dapat dilihat pada tabel III. Tabel III. Hasil analisis uji Scheffe pada penetapan dosis efektif asam asetat Dosis asam asetat 25 50 100 (mg/kgBB) 25 bb bb 50

bb

-

tb

100

bb

tb

-

Keterangan : bb tb

: Berbeda bermakna ( p< 0,05 ) : Berbeda tidak bermakna ( p> 0,05 )

Hasil pengujian menunjukkan bahwa asam asetat dosis 25 mg/kgBB berbeda bermakna dengan dosis 50 mg/kgBB dan 100 mg/kgBB, sedangkan dosis 50 mg/kg berbeda tidak bermakna dengan dosis 100 mg/kgBB. Dari hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa asam asetat dosis 50 mg/kgBB sudah dapat memberikan rangsang nyeri yang cukup baik, yang ditunjukkan dari respon geliat yang

60


dihasilkan. Geliat yang dihasilkan pada dosis ini tidak terlalu banyak dan tidak terlalu sedikit. Oleh karena itu, asam asetat dosis 50 mg/kgBB dipilih sebagai rangsang nyeri untuk percobaan selanjutnya. 3. Penetapan kontrol negatif Uji pendahuluan yang selanjutnya yaitu penetapan kontrol negatif. Penetapan kontrol negatif bertujuan untuk mengetahui zat pembanding yang tidak memberikan efek terhadap daya analgesik zat uji. Uji ini juga bertujuan membuktikan bahwa pelarut yang digunakan benar-benar tidak memiliki efek farmakologis, khususnya efek analgesik, sehingga jika terdapat efek analgesik pada suspensi zat uji benar-benar merupakan efek dari zat uji. Penetapan ini dilakukan dengan membandingkan jumlah geliat yang timbul setelah pemberian aquadest dan CMC-Na 1%. Jumlah geliat yang dihasilkan pada kedua perlakuan dianalisis menggunakan t-test untuk mengetahui adanya perbedaan antara dua kelompok tersebut. Data jumlah geliat pada penetapan kontrol negatif serta hasil analisis statistiknya dapat dilihat pada lampiran 4 serta ringkasannya dapat dilihat pada tabel IV. Tabel IV. Rata-rata jumlah kumulatif geliat hewan uji pada penetapan kontrol negatif Kelompok perlakuan

Jumlah kumulatif geliat (X ± SE)

Probabilitas

Aquadest CMC Na 1%

118,00 ± 4,53 112,20 ± 6,89

0,208

Dari hasil statistik tersebut diperoleh probabilitasnya lebih besar dari 0,05 (p > 0,05), yaitu 0.208, yang menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang

61


bermakna antara kedua kelompok tersebut. Probabilitas yang lebih besar berarti Ho diterima, sehingga diasumsikan bahwa kedua zat tersebut tidak memiliki efek analgesik. Jumlah geliat yang ditimbulkan pada kedua kelompok tersebut cukup besar karena hewan uji tidak diberi analgetika yang dapat menekan nyeri akibat pemberian asam asetat. Aquadest merupakan senyawa yang tidak memiliki efek farmakologi sehingga diasumsikan tidak mempengaruhi daya analgesik zat uji, sehingga dapat disimpulkan bahwa CMC-Na 1% juga tidak memiliki efek analgesik. CMC-Na 1% digunakan sebagai suspending agent pada pembuatan suspensi zat uji karena zat uji tidak larut dalam aquadest. Pada penelitian selanjutnya, CMC-Na 1% dipilih sebagai kontrol negatif. Rata-rata jumlah kumulatif geliat pada penetapan kontrol negatif dapat pula disajikan dalam bentuk diagram batang seperti pada gambar 15.

118

rata-rata jumlah kumulatif geliat

118 117 116 115 114

112,2

113 112 111 110 109 aquadest

CMC-Na 1%

Gambar 15. Diagram batang rata-rata jumlah kumulatif geliat pada penetapan kontrol negatif

62


4. Penetapan selang waktu pemberian rangsang Selang waktu pemberian rangsang adalah selang waktu antara pemberian zat uji secara per oral dengan pemberian asam asetat sebagai rangsang nyeri secara intraperitoneal. Penetapan selang waktu pemberian asam asetat bertujuan mengetahui berapa lama waktu zat uji memberikan efek analgesik secara optimal. Zat uji yang digunakan dalam orientasi penetapan selang waktu pemberian asam asetat adalah asetosal dosis 91 mg/kgBB. Rentang waktu yang diujikan adalah 5, 10, dan 15 menit. Data jumlah geliat pada penetapan selang waktu pemberian rangsang serta hasil analisis statistiknya dapat dilihat pada lampiran 5 dan 6 serta ringkasannya dapat dilihat pada tabel V. Tabel V. Rata-rata jumlah kumulatif geliat hewan uji dan % penghambatan terhadap geliat pada penetapan selang waktu pemberian rangsang Selang waktu pemberian (menit)

Rata-rata jumlah kumulatif geliat (X ± SE)

Rata-rata % penghambatan terhadap geliat (X ± SE)

5 10 15

80,33 ± 6,98 57,67 ± 6,17 96 ± 6,36

28.4 ± 6,23 48,29 ± 6,08 14,44 ± 5,66

Rata-rata % penghambatan terhadap geliat pada penetapan selang waktu pemberian rangsang dapat pula disajikan dalam bentuk diagram batang seperti pada gambar 16.

63


rata-rata % penghambatan

60 50 40 30 20 10 0 5

10

15

selang waktu (menit)

Gambar 16. Diagram batang rata-rata % penghambatan terhadap geliat pada penetapan selang waktu pemberian rangsang

Ringkasan analisis variansi satu arah % penghambatan terhadap geliat pada penetapan selang waktu pemberian rangsang dapat dilihat pada tabel VI. Tabel VI. Ringkasan analisis variansi satu arah % penghambatan terhadap geliat pada penetapan selang waktu pemberian rangsang Sumber variansi Antar perlakuan Error percobaan (dalam kelompok)


Derajat bebas 2


F hitung

Probabilitas

646,560

6

107,760

8,056

0,020

Data % penghambatan terhadap geliat pada setiap selang waktu diuji secara statistik variansi satu arah untuk mengetahui terdapat perbedaan atau tidak. Ringkasan data statistik analisis variansi satu arah pada penetapan selang waktu pemberian rangsang dapat dilihat pada tabel VII.

64


Tabel VII. Hasil analisis uji Scheffe % penghambatan terhadap geliat pada penetapan selang waktu pemberian rangsang Selang waktu 5 10 15 pemberian (menit) 5 tb tb 10

tb

-

bb

15

tb

bb

-

Keterangan : bb tb

: Berbeda bermakna ( p< 0,05 ) : Berbeda tidak bermakna ( p> 0,05 )

Hasil pengujian menunjukkan bahwa terdapat perbedaan bermakna pada tiap-tiap kelompok selang waktu. Dari hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa adanya perbedaan selang waktu pemberian asam asetat memberikan perbedaan yang bermakna pada kemampuan penghambatan geliat. Selang waktu yang dipilih adalah 10 menit karena pada selang waktu ini respon geliat yang diperoleh paling sedikit, sehingga diasumsikan bahwa pada selang waktu ini zat uji memberikan efek analgesik secara optimal. Selain itu, pemilihan selang waktu 10 menit ini bertujuan untuk efisiensi waktu pengamatan. 5. Penetapan dosis asetosal Pada penelitian ini, asetosal digunakan sebagai kontrol positif karena uji daya analgesik dengan metode rangsang kimia ini termasuk dalam uji golongan analgesik non-narkotika, sehingga kontrol positif yang digunakan juga harus obat paten yang mempunyai daya analgesik dan termasuk dalam golongan obat analgesik non-narkotika. Kontrol positif berfungsi sebagai pembanding terhadap kelompok perlakuan dengan zat uji sehingga dapat diketahui pada dosis berapa zat uji memiliki efek analgesik yang setara dengan asetosal biasa digunakan sebagai standar dalam menilai efek obat sejenis.

65


Dosis asetosal yang digunakan dalam penelitian ini adalah dosis terapi yang biasa digunakan manusia yaitu 500 mg. Pada orientasi dosis asetosal digunakan tiga peringkat dosis yang diperoleh dengan menaikkan dan menurunkan dosis tersebut ¼ kalinya. Jadi, peringkat dosis yang digunakan adalah 375 mg, 500 mg, dan 625 mg. Ketiga dosis tersebut dikonversikan ke mencit sehingga diperoleh dosis 68,25 mg/kg BB, 91 mg/kg BB, dan 113,75 mg/kg BB. Secara teoritis, semakin tinggi dosis analgetika yang digunakan, maka kemampuan untuk menekan nyeri juga semakin besar, respon geliat yang ditimbulkan semakin sedikit. Data jumlah geliat pada penetapan dosis asetosal serta hasil analisis statistiknya dapat dilihat pada lampiran 7 dan 8 serta ringkasannya dapat dilihat pada tabel VIII. Tabel VIII. Rata-rata jumlah kumulatif geliat hewan uji dan % penghambatan terhadap geliat pada penetapan dosis asetosal Dosis asetosal ( mg/kgBB)


Rata-rata % penghambatan terhadap geliat (X ± SE)

68,25 91 113,75

74,67 ± 9,21 34,00 ± 3,06 20,33 ± 2,40

32,12 ± 8,23 69,69 ± 1,86 81,88 ± 1,97

Data % penghambatan terhadap geliat pada setiap dosis diuji secara statistik variansi satu arah untuk mengetahui terdapat perbedaan yang bermakna atau tidak antar dosis asetosal tersebut. Ringkasan data statistik analisis variansi satu arah pada penetapan dosis asetosal dapat dilihat pada tabel IX.

66


Tabel IX. Ringkasan analisis variansi satu arah % penghambatan terhadap geliat pada penetapan dosis asetosal Sumber variansi Antar perlakuan Error percobaan (dalam kelompok)


Derajat bebas 2


474,162

6

79,027

F hitung

Probabilitas

23,919

0,001

Dari hasil statistik tersebut diperoleh probabilitasnya lebih kecil dari 0,05 (p < 0,05), yaitu 0.001, yang menunjukkan bahwa terdapat perbedaan antara ketiga kelompok tersebut. Selanjutnya data diuji lagi dengan uji Scheffe dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan yang bermakna di antara ketiganya. Hasil analisisnya dapat dilihat pada tabel X. Tabel X. Hasil analisis uji Scheffe % penghambatan terhadap geliat pada penetapan dosis asetosal Dosis asetosal 68,25 91 113,75 (mg/kgBB) 68,25 bb bb 91 bb tb 113,75 bb tb Keterangan : bb tb

: Berbeda bermakna ( p< 0,05 ) : Berbeda tidak bermakna ( p> 0,05)

Hasil pengujian menunjukkan bahwa dosis 68,25 mg/kgBB berbeda bermakna dengan dosis 91 mg/kgBB dan 113,75 mg/kgBB, sedangkan dosis 91 mg/kgBB berbeda tidak bermakna dengan dosis 113,75 mg/kgBB. Dari hasil analisis tersebut dipilih asetosal dosis 91 mg/kgBB karena pada dosis tersebut % daya analgesik yang diperoleh sudah cukup tinggi yaitu sebesar 69,69%. Persen daya analgesik pada dosis ini juga memenuhi syarat aktivitas analgetika menurut

67


Anonim (1991) yaitu adanya aktivitas analgetika dinyatakan oleh jumlah terjadinya geliat pada hewan uji lebih sedikitnya ≥ 50% dari kelompok kontrol. Rata-rata % penghambatan terhadap geliat pada penetapan dosis asetosal dapat pula disajikan dalam bentuk diagram batang seperti pada gambar 17.

rata-rata % penghambatan

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 68,25

91

113,75

dosis asetosal (mg/kg BB)

Gambar 17. Diagram batang rata-rata % penghambatan terhadap geliat pada penetapan dosis asetosal

C. Pegujian Efek Analgesik Ekstrak Etanol Daun Senggani Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui ada tidaknya efek analgesik pada ekstrak etanol daun senggani dan seberapa besar daya analgesik tersebut. Metode yang digunakan dalam penelitian adalah metode rangsang kimia. Metode ini dipilih dari beberapa metode pengujian daya analgesik yang lain karena metode ini cukup sederhana dan mudah dilakukan. Subyek uji berupa mencit betina yang diinjeksi dengan zat kimia yang berfungsi sebagai perangsang nyeri yaitu asam asetat. Asam asetat dapat menyebabkan nyeri karena menurunkan pH jaringan akibat pembebasan ion H+. Penurunan pH inilah yang menimbulkan iritasi pada jaringan lokal. Respon yang

68


timbul berupa geliat menunjukkan bahwa mencit merasakan nyeri. Pemberian senyawa yang mempunyai efek analgesik akan menekan atau mengurangi rasa nyeri yang timbul sehingga gerakan geliat yang muncul semakin sedikit. Respon geliat diamati tiap 5 menit selama 60 menit setelah pemberian asam asetat. Data yang diperoleh berupa jumlah kumulatif geliat pada tiap kelompok perlakuan. Jumlah kumulatif geliat diubah ke dalam bentuk % penghambatan terhadap geliat menurut persamaan Handerson-Forsaith dan dianalisis secara statistik dengan variansi satu arah (Oneway-ANOVA) kemudian dilanjutkan uji Scheffe dengan taraf kepercayaan 95%. Pengujian efek analgesik zat uji yaitu ekstrak etanol daun senggani dilakukan sesuai ketentuan yang diperoleh saat uji pendahuluan. Asam asetat sebagai perangsang nyeri yang digunakan yaitu dosis 50 mg/kgBB konsentrasi 1%. Menurut Williamson et al (1996) asam asetat konsentrasi 1-3 % digunakan sebagai iritant yang menyebabkan nyeri pada pengujian daya analgesik dengan metode geliat. Sumber lain menyebutkan bahwa asam asetat 1% sudah dapat menimbulkan geliat yang cukup banyak selama pengamatan (Putra, 2004). Kontrol negatif yang digunakan adalah CMC-Na 1%, sedangkan kontrol positif adalah asetosal dosis 91 mg/kgBB konsentrasi 0,5 %. Dosis zat uji yang digunakan berturut-turut 850, 1000, 1330, dan 1670 mg/kgBB dengan konsentrasi 5 %. Kadar zat uji dibuat 5 % agar dalam pemberiannya tidak melebihi volume pemberian maksimum mencit per oral, yaitu 1 ml, dan memungkinkan untuk dapat dimasukkan dalam spuit injeksi.

69


Data jumlah kumulatif geliat semua kelompok perlakuan dan % penghambatan terhadap geliat serta hasil analisis statistiknya dapat dilihat pada lampiran 9 dan 10 serta ringkasannya dapat dilihat pada tabel XI. Tabel XI. Rata-rata jumlah kumulatif geliat hewan uji dan % penghambatan terhadap geliat pada kelompok perlakuan Kelompok perlakuan


I II III IV V VI Keterangan : X SE I II III IV V VI

112,20 ± 6,89 32,8 ± 1,86 13,4 ± 1,12 18,6 ± 1,72 35,6 ± 3,83 62,2 ± 4,31

Rata-rata % penghambatan terhadap geliat (X ± SE) 0,00 ± 6.14 70,76 ± 1,65 88,06 ± 1,00 83,42 ± 1,53 68,26 ± 3,41 44,56 ± 3,84

: rata-rata : standard error : kontrol negatif (CMC Na 1%) : kontrol positif (asetosal 91 mg/kgBB) : ekstrak etanol daun senggani 850 mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1000 mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1330 mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1670 mg/kgBB

Rata-rata % penghambatan terhadap geliat pada kelompok perlakuan dapat pula disajikan dalam bentuk diagram batang seperti pada gambar 18. 90 % hambat terhadap geliat

80 70 60 50 40 30 20 10 0 I

II

III

IV

V

VI

kelompok perlakuan

Gambar 18. Diagram batang rata-rata % penghambatan terhadap geliat pada kelompok perlakuan

70


Keterangan : I II III IV V VI

: kontrol negatif (CMC Na 1%) : kontrol positif (asetosal 91 mg/kgBB) : ekstrak etanol daun senggani 850 mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1000 mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1330 mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1670 mg/kgBB

Dari data tersebut dapat terlihat bahwa jumlah geliat berbanding terbalik dengan % penghambatan terhadap geliat. Semakin banyak geliat berarti semakin kecil daya penghambatan terhadap geliat atau daya analgesiknya. Pada kelompok kontrol negatif memiliki jumlah geliat paling banyak dibandingkan kelompok lainnya. Pada kelompok kontrol positif dan kelompok yang diberi zat uji mengalami penurunan jumlah geliat dibandingkan kelompok kontrol negatif. Data % penghambatan terhadap geliat pada setiap kelompok perlakuan diuji secara statistik variansi satu arah untuk mengetahui terdapat perbedaan atau tidak. Ringkasan data statistik analisis variansi satu arah pada kelompok perlakuan dapat dilihat pada tabel XII. Tabel XII. Ringkasan analisis variansi satu arah % penghambatan terhadap geliat pada kelompok perlakuan Sumber variansi Antar perlakuan Error percobaan (dalam kelompok)

Jumlah kuadrat

Kuadrat rata-rata

F hitung

Probabilitas

29493.469

Derajat bebas 5

5898.694

100.995

0,000

1401.742

24

58.406

Dari hasil statistik tersebut diperoleh probabilitasnya lebih kecil dari 0,05 (p < 0,05) yang menunjukkan bahwa terdapat perbedaan antar kelompok tersebut. Selanjutnya data diuji lagi dengan uji Scheffe dengan taraf kepercayaan 95%

71


untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan yang bermakna di antara ketiganya. Hasil analisisnya dapat dilihat pada tabel XIII. Tabel XIII. Hasil analisis uji Scheffe % penghambatan terhadap geliat pada kelompok perlakuan Kelompok I II III IV V VI perlakuan I bb bb bb bb bb II

bb

-

tb

tb

tb

bb

III

bb

tb

-

tb

b

b

IV

bb

tb

tb

-

tb

bb

V

bb

tb

bb

tb

-

bb

VI

bb

bb

bb

bb

bb

-

Keterangan : bb : Berbeda bermakna ( p< 0,05 ) tb : Berbeda tidak bermakna ( p> 0,05 ) I : kontrol negatif (CMC Na 1%) II : kontrol positif (asetosal 91 mg/kgBB) III : ekstrak etanol daun senggani 850 mg/kgBB IV : ekstrak etanol daun senggani 1000 mg/kgBB V : ekstrak etanol daun senggani 1330 mg/kgBB VI : ekstrak etanol daun senggani 1670 mg/kgBB

Hasil pengujian menunjukkan bahwa kelompok kontrol negatif berbeda bermakna dengan kelompok kontrol positif, kelompok perlakuan ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kgBB, 1000 mg/kgBB, 1330 mg/kgBB, dan 1670 mg/kgBB. Sehingga dapat dikatakan bahwa kelompok kontrol positif dan kelompok perlakuan ekstrak etanol daun senggani pada keempat peringkat dosis betul-betul memiliki daya analgesik, karena % penghambatannya jauh lebih besar dibanding kontrol negatif. Sementara itu kelompok perlakuan ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kgBB, 1000 mg/kgBB, dan 1330 mg/kgBB berbeda tidak bermakna dengan kelompok kontrol positif. Hal ini berarti kelompok perlakuan ekstrak etanol daun

72


senggani pada dosis tersebut diasumsikan memiliki daya penghambatan terhadap jumlah geliat dan memberikan proteksi yang sama besar dengan asetosal dosis 91 mg/kgBB. Sedangkan pada kelompok perlakuan ekstrak etanol daun senggani dosis 1670 mg/kgBB berbeda bermakna dengan kelompok kontrol negatif maupun kelompok kontrol positif, sehingga dapat diasumsikan bahwa ekstrak etanol daun senggani pada dosis ini berpotensi dalam menghambat jumlah geliat yang muncul namun tidak sebesar asetosal dosis 91 mg/kgBB. Kelompok perlakuan ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kgBB, 1000 mg/kgBB, 1330 mg/kgBB, dan 1670 mg/kgBB masing-masing memiliki % penghambatan terhadap geliat berturut-turut sebesar 88,06 %; 83,42 %, 68,26 %, dan 44,56 %. Asetosal telah lama digunakan sebagai analgesik sehingga jumlah geliat pada kelompok ini mengalami penurunan yang bermakna dan hasil % penghambatan terhadap geliatnya yaitu sebesar 70,76 %. Hasil analisis statistik menunjukkan bahwa kelompok perlakuan ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kgBB, 1000 mg/kgBB, dan 1330 mg/kgBB berbeda tidak bermakna dengan kelompok kontrol positif. Hal ini berarti bahwa ekstrak etanol daun senggani pada dosis tersebut memiliki kemampuan menghambat geliat. Sedangkan kelompok perlakuan ekstrak etanol daun senggani dosis 1670 mg/kgBB berbeda bermakna dengan kelompok kontrol positif dan nilai % hambatnya di lebih kecil daripada kelompok kntrol positif, sehingga dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol daun senggani dosis 1670 mg/kgBB kurang mampu dalam menghambat geliat.

73


Menurut prosedur evaluasi Anonim (1991) mengenai aktivitas analgetika pada metode rangsang kimia, dikatakan bahwa adanya aktivitas analgetika dinyatakan oleh jumlah terjadinya geliat pada hewan uji lebih sedikitnya ≥ 50% dari kelompok kontrol negatif. Kelompok perlakuan ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kgBB, 1000 mg/kgBB, dan 1330 mg/kgBB memiliki aktivitas analgetika karena jumlah terjadinya geliat pada hewan uji > 50% dari kelompok kontrol negatif. Sedangkan kelompok perlakuan ekstrak etanol daun senggani dosis 1670 mg/kgBB ini tidak memiliki aktivitas analgetika karena jumlah terjadinya geliat pada hewan uji < 50% dari kelompok kontrol negatif. Sumber lain menyatakan bahwa pada metode rangsang kimia, suatu zat dikatakan mempunyai aktivitas analgetika maksimal jika dapat menghambat jumlah geliat pada hewan uji > 70%, sedangkan zat yang dapat menghambat jumlah geliat < 70% dikatakan mempunyai aktivitas analgesik minimal (Vogel, 2002). Jika berdasarkan prosedur evaluasi ini, maka ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kgBB dan 1000 mg/kgBB dinyatakan mempunyai aktivitas analgesik maksimal, sedangkan ekstrak etanol daun senggani dosis 1330 mg/kgBB dinyatakan memiliki aktivitas analgesik minimal. Secara alamiah tubuh memproduksi antioksidan yang mampu melindungi sel dari radikal bebas (Sibuea, 2004). Radikal bebas yang berlebihan akan menyebabkan kerusakan jaringan sehingga menimbulkan nyeri. Dalam proses peradangan, radikal bebas terbentuk ketika asam arakhidonat dikonversikan menjadi peroksida baik melalui jalur siklooksigenase maupun lipoksigenase. Ketika terjadi kerusakan jaringan organ produksi peroksida meningkat seiring

74


dengan peningkatan jumlah radikal bebas, padahal tubuh memproduksi antioksidan endogen yang terbatas. Apabila jumlah radikal bebas makin banyak, antioksidan endogen tak mampu lagi melumpuhkannya secara efektif sehingga harus ada tambahan antioksidan dari luar (eksogen) yang berasal dari bahan makanan (Sibuea, 2004). Pada penelitian ini diharapkan antioksidan eksogen dapat berasal dari ekstrak etanol daun senggani, karena ekstrak etanol daun senggani mengandung kuersetin yang merupakan salah satu zat aktif kelas flavonoid. Kuersetin memiliki aktivitas kuat sebagai peberi hidrogen (hidrogen donating) karena kandungan hidroksilasi cukup, yakni 5 gugus OH dan empat diantaranya terdapat pada sisi aktif (C5, C7, C3’, dan C4’) (Sibuea, 2004). Berdasarkan hal tersebut, efek analgesik yang ditimbulkan oleh ekstrak etanol daun senggani diduga disebabkan karena adanya flavonoid yaitu kuersetin. Kemungkinan flavonoid ini dapat menghambat enzim siklooksigenase pada pembentukan prostaglandin. Dengan terhambatnya pembentukan prostaglandin, respon nyeri yang muncul dapat dikurangi. Dari hasil penelitian dapat dilihat bahwa daya analgesik menurun seiring dengan meningkatnya dosis. Hal ini diduga karena peringkat dosis yang digunakan dalam penelitian ini sudah melampaui dosis efektif ekstrak etanol daun senggani sebagai analgetika. Perlu diingat, bahwa reaksi penangkapan radikal bebas oleh flavonoid tetap menghasilkan radikal bebas walaupun aktivitasnya rendah. Keberadaan radikal bebas yang berlebihan serta reaktivitas flavonoid yang berlebihan inilah yang mungkin menyebabkan ekstrak etanol daun senggani

75


menjadi bersifat prooksidan sehingga aktivitasnya sebagai analgetika justru menjadi berkurang. Berdasarkan hasil perhitungan % penghambatan terhadap geliat dapat dihitung % perubahan daya analgesik zat uji terhadap kontrol positif yaitu asetosal dosis 91 mg/kgBB. Data % daya analgesik zat uji terhadap kontrol positif serta hasil analisis statistiknya dapat dilihat pada lampiran 11 serta ringkasannya dapat dilihat pada tabel XIV. Tabel XIV. Persen perubahan daya analgesik kelompok perlakuan dibandingkan asetosal dosis 91 mg/kgBB Kelompok perlakuan

% Perubahan daya analgesik (X ± SE)

I II III IV V VI

-106,30 ± 8,68 0,006 ± 2,34 24,45 ± 1,42 17,77 ± 2,08 -3,52 ± 4,82 -37,02 ± 5,42

Keterangan : I : kontrol negatif (CMC Na 1%) II : kontrol positif (asetosal 91 mg/kgBB) III : ekstrak etanol daun senggani 850 mg/kgBB IV : ekstrak etanol daun senggani 1000 mg/kgBB V : ekstrak etanol daun senggani 1330 mg/kgBB VI : ekstrak etanol daun senggani 1670 mg/kgBB

% perubahan daya analgesik

40 20 0 -20 -40 -60 -80 -100 -120 I

II

III

IV

V

VI

kelompok perlakuan

Gambar 19. Diagram batang rata-rata % perubahan daya analgesik terhadap kontrol positif

76


Keterangan : I II III IV V VI

: kontrol negatif (CMC Na 1%) : kontrol positif (asetosal 91 mg/kgBB) : ekstrak etanol daun senggani 850 mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1000 mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1330 mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1670 mg/kgBB

Data % perubahan daya analgesik diuji secara statistik variansi satu arah untuk mengetahui terdapat perbedaan atau tidak. Ringkasan data statistik analisis variansi satu arah pada % perubahan daya analgesik dapat dilihat pada tabel XV. Tabel XV. Ringkasan analisis variansi satu arah % perubahan daya analgesik Sumber variansi Antar perlakuan Error percobaan (dalam kelompok)


Derajat bebas 5


2794.435

24

116,435

F hitung

Probabilitas

101,108

0,000

Dari hasil statistik tersebut diperoleh probabilitasnya lebih kecil dari 0,05 (p < 0,05) yang menunjukkan bahwa terdapat perbedaan antar kelompok tersebut. Selanjutnya data diuji lagi dengan uji Scheffe dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan yang bermakna di antara kelompokkelompok tersebut. Hasil analisisnya dapat dilihat pada tabel XVI. Tabel XVI. Hasil analisis uji Scheffe % perubahan daya analgesik Kelompok I II III IV V perlakuan I bb bb bb bb II bb tb tb tb III bb tb tb bb IV bb tb tb tb V bb tb bb tb VI bb bb bb bb bb

77

VI bb bb bb bb bb -


Keterangan : bb

tb I II III IV V VI

: Berbeda bermakna ( p< 0,05 ) : Berbeda tidak bermakna ( p> 0,05 ) : kontrol negatif (CMC Na 1%) : kontrol positif (asetosal 91 mg/kgBB) : ekstrak etanol daun senggani 850mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1000 mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1330 mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1670 mg/kgBB

Dari data terlihat bahwa % perubahan daya analgesik ekstrak etanol daun senggani terhadap kontrol positif pada keempat peringkat dosis berturut-turut adalah 24,45 %; 17,77 %; -3,52 %; dan -37,02 %. Pada kelompok kontrol negatif dibandingkan dengan kontrol positif menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna. Hal ini menunjukkan tidak terjadinya perubahan daya analgesik terhadap kontrol positif, ditunjukkan dengan perubahan yang bernilai negatif dan sangat jauh selisihnya dengan kontrol positif. Pada ekstrak etanol daun senggani dosis 1330 mg/kgBB berbeda tidak bermakna dengan kontrol positif namun nilainya lebih kecil dibandingkan kontrol positif. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak dosis 1330 mg/kgBB kurang efektif dibandingkan kontrol positif. Sedangkan ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kgBB dan 1000 mg/kgBB juga berbeda tidak bermakna dengan kontrol positif tetapi nilainya lebih besar dibandingkan dengan kontrol positif. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun senggani pada dosis 850 mg/kgBB dan 1000mg/kgBB lebih efektif sebagai analgetika dibanding kontrol positif. Selain pengujian efek analgesik, juga dilakukan uji efek anti inflamasi ekstrak etanol daun senggani. Perbandingan efek analgesik dan efek anti-inflamasi ekstrak etanol daun senggani dapat dilihat dalam gambar 20.

78


90 80 70 % efek

60 50

% efek analgesik EEDS

40 % efek anti-inflamasi EEDS

30 20 10 0 I

II

III

IV

kelompok perlakuan

Gambar 20. Diagram batang perbandingan efek analgesik dengan efek anti-inflamasi ekstrak etanol daun senggani. Keterangan : I II III IV

: ekstrak etanol daun senggani 850 mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1000 mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1330 mg/kgBB : ekstrak etanol daun senggani 1670 mg/kgBB

Hasil pengujian potensi daya anti-inflamasi menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kgBB; 1000 mg/kgBB; 1330 mg/kgBB; dan 1670 mg/kgBB menghasilkan potensi daya antiinflamasi berturut-turut sebesar 10,75%; 11,57%; 32,67%; dan 25,07%. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun senggani mempunyai potensi daya antiinflamasi, khususnya pada dosis 1330 mg/kgBB (Prianingrum, 2006). Jika dibandingkan dengan daya anti-inflamasi ekstrak etanol daun senggani, daya analgesik ekstrak etanol daun senggani nilainya jauh lebih besar. Hal ini diduga karena peringkat dosis yang digunakan tidak mencukupi untuk memberi efek anti-inflamasi, sehingga efek yang muncul kecil dan daya antiinflamasi yang didapatkan semakin sedikit. Terkadang ada beberapa obat yang membutuhkan dosis lebih besar dari normal untuk dapat memberi efek anti-

79


inflamasi, seperti pada asetosal. Untuk berfungsi sebagai analgetika dibutuhkan dosis 300-900 mg tiap 4-6 jam atau maksimum 4 gram/hari (Anonim, 2000). Namun sebagai anti radang akibat gagalnya sintesa Prostaglandin-E (PgE2) dibutuhkan dosis di atas 5 gram/hari (Tjay dan Raharja, 2002). Jika dilihat dari diagram, seiring dengan peningkatan dosis daya antiinflamasi yang diberikan semakin besar. Namun pada dosis 1670 mg/kg BB daya anti-inflamasi yang ditimbulkan sedikit menurun. Sehingga perlu dilakukan penelitian lebih lanjut efek anti-inflamasi pada dosis 1000 mg/kg BB sampai 1330 mg/kg BB untuk melihat adanya fenomena efek tidak tergantung dosis. Pada penelitian ini juga dibandingkan daya analgesik dan anti-inflamasi dari daun senggani jika dilarutkan atau diekstrak dalam pelarut lain yang lebih non polar yaitu pelarut petroleum eter (PE). Perbandingan daya analgesik dari ekstrak etanol daun senggani dengan ekstrak petroleum eter daun senggani dapat dilihat dalam gambar 21. 100

% efek analgesik

80 60 40 % efek analgesik EEDS

20 0

% efek analgesik EPEDS

-20 -40 -60 I

II

III

IV

kelompok perlakuan

Gambar 21. Diagram batang perbandingan efek analgesik ekstrak etanol daun sengganidengan efek analgesik ekstrak petroleum eter daun senggani pada mencit putih betina.

80


Keterangan : I : ekstrak etanol/petroleum eter daun senggani 850 mg/kgBB II : ekstrak etanol/petroleum eter daun senggani 1000 mg/kgBB III : ekstrak etanol/petroleum eter daun senggani 1330 mg/kgBB IV : ekstrak etanol/petroleum eter daun senggani 1670 mg/kgBB

Hasil pengujian potensi daya analgesik ekstrak petroleum eter daun senggani dosis 850 mg/kgBB; 1000 mg/kgBB; 1330 mg/kgBB; dan 1670 mg/kgBB berturut-turut sebesar -32,75%; -44,72%; -0,35%; dan 80,28% (Riadiani, 2006). Dari diagram tersebut dapat dilihat bahwa pada dosis 850 mg/kgBB; 1000 mg/kgBB; dan 1330 mg/kgBB ekstrak petroleum daun senggani tidak memberi efek analgesik ditunjukkan dengan nilai negatif pada % penghambatan terhadap geliat. Hal ini diduga karena pada dosis tersebut kandungan zat aktif yang terdapat pada ekstrak belum cukup memberi efek analgesik. Dari diagram juga dapat dilihat bahwa terjadi perubahan daya analgesik yang sangat besar antara dosis 1330 mg/kgBB dan 1670 mg/kgBB. Diduga pada rentang dosis tersebut terdapat dosis efektif ekstrak petroleum eter, sehingga diperlukan penelitian lebih lanjut tentang daya analgesik ekstrak petroleum eter pada rentang dosis tersebut. Selain itu diduga ekstrak petroleum daun senggani sebagai analgetika memiliki rentang dosis atau jendela terapi yang sempit. Pada penelitian daya anti-inflamasi ekstrak petroleum eter daun senggani didapat % daya anti-inflamasi ekstrak petroleum eter daun senggani pada dosis 850 mg/kgBB; 1000 mg/kgBB; 1330 mg/kgBB; dan 1670 mg/kgBB berturut-turut sebesar 16,03%; 19,39%; 29,36%; dan 43,34% (Sudarto, 2006). Daya antiinflamasi yang dihasilkan ekstrak petroleum eter daun senggani lebih besar dibandingkan dengan daya anti-inflamasi ekstrak etanol daun senggani. Efek yang

81


lebih besar ini diduga juga dipicu karena pelarut yang digunakan untuk membuat sediaan suspensi, yaitu minyak goreng, sudah memberi efek anti-inflamasi terlebih dahulu yaitu sebesar kurang lebih 7%. Sehingga efek anti-inflamasi yang muncul tidak hanya berasal dari ekstrak petroleum eter tetapi juga berasal dari minyak goreng. Rangkuman daya analgesik dan daya anti-inflamasi ekstrak etanol daun senggani dan ekstrak petroleum eter daun senggani ditunjukkan pada gambar 22.

100

% efek

80 60

% efek analgesik EEDS

40

% efek anti-inflamasi EEDS

20

% efek analgesik EPEDS

0

% efek anti-inflamasi EPEDS

-20 -40 -60 I

II

III

IV

kelompok perlakuan

Gambar 22. Diagram batang rangkuman efek analgesik dan efek anti-inflamasi ekstrak etanol daun senggani dan ekstrak petroleum eter daun senggani. Keterangan : I II III IV

: ekstrak etanol/petroleum eter daun senggani 850 mg/kgBB : ekstrak etanol/petroleum eter daun senggani 1000 mg/kgBB : ekstrak etanol/petroleum eter daun senggani 1330 mg/kgBB : ekstrak etanol/petroleum eter daun senggani 1670 mg/kgBB

Pada ekstrak etanol daun senggani, kandungan kimia yang diduga larut dan dapat memberi efek analgesik dan anti-inflamasi adalah flavonoid yang berfungsi sebagai antioksidan (Sitompul, 2003) yang dapat menangkap radikal

82


bebas. Radikal bebas akan merusak molekul yang elektronnya ditarik oleh radikal bebas tersebut sehingga menyebabkan kerusakan sel, gangguan fungsi sel, bahkan kematian sel. Sedangkan pada ekstrak petroleum eter daun senggani, kandungan kimia yang diduga larut dan dapat memberi efek analgesik dan anti-inflamasi adalah steroid. Peran utama steroid dalam sistem kehidupan sebagai hormon (Anonim, 2006). Pada umumnya steroid dapat bermanfaat untuk mengurangi inflamasi dan sebagai obat kontrasepsi oral. Berdasarkan hal tersebut diduga mekanisme ekstrak etanol daun senggani dan ekstrak petroleum eter daun senggani sebagai analgetika dan anti-inflamasi memiliki jalur yang berbeda, sehingga efek analgesik dan anti-inflamasi yang dihasilkan juga berbeda.

83


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan Dari hasil uji efek analgesik ekstrak etanol daun senggani secara per oral pada mencit betina dapat disimpulkan bahwa: 1. ekstrak etanol daun senggani mempunyai efek analgesik terhadap mencit betina. 2. daya analgesik ekstrak etanol daun senggani pada dosis dosis 850 mg/kg BB, 1000 mg/kg BB, 1330 mg/kg BB, dan 1670 mg/kg BB berturut-turut adalah 88,06%; 83,42%, 68,26%, dan 44,56%.

B. Saran 1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai senyawa apa yang bertanggung jawab terhadap daya analgesik dari ekstrak etanol daun senggani ini. 2. Perlu dilakukan penelitian daya analgesik pada dosis di bawah 850 mg/kg BB. 3. Perlu dilakukan uji daya analgesik ektrak etanol daun senggani dengan metode lain.


DAFTAR PUSTAKA

Anonim, 1986, Sediaan Galenik, 8-25, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Anonim, 1991, Penapisan Farmakologi Pengujian Fitokimia dan Pengujian Klinik, 49, Yayasan Pengembangan Obat Bahan Alami Pyitomedika, Jakarta. Anonim, 1992, Undang-Undang Republik Indonesia No. 23 Tahun 1992 Tentang Kesehatan, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Anonim, 1995, Farmakope Indonesia, edisi IV, 31, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta Anonim, 2000, Informatorium Obat Nasional Indonesia, 184, 357, Departemen Kesehatan Republik Indonesia Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta. Anonim, 2004, Saponin, http://www.molecullarexpressionsphytochemicalgalleysaponin.htm Anonim, 2005, Kuersetin ,http://www.pikiran-rakyat.com/cetak/0904/23/utama 02.htm Anonim, 2006, Steroid, http://en.wikipedia.org/wiki/Steroid, diakses pada tanggal 25 Juli 2006. Christina, 2000, Daya Antifertilitas dan Efek Toksik Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Tikus Betina, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Dalimartha, S, 1999, Atlas Tanaman Obat Indonesia, Jilid I, 130-132, Trubus Agriwidya, Jakarta. De Medina, F.S., Galvez, J., Romero, J.A., Zarzuelo, A., 1996, Effect of Quersitrin on Acute and Chronic Experimental in the Rat, http://www.JournalOfPharmacologyAndExperimentalTherapeutics.htm Djamhuri, 1996, Sinopsis Farmakologi, 45, Penerbit Hipokratis, Jakarta. Dollery, C., 1999, Therapeutic Drugs, 2nd Edition, A216-A218, Churchill Livingstone, London.


Evans, W.C., 2002, Trease and Evans Pharmacognosy, 15th Edition, 214-252, ELBS, Oxford. Gitawati, R., 1995, Radikal Bebas-Sifat dan Peran dalam Menimbulkan Kerusakan atau Kematian Sel, Cermin Dunia Kedokteran, No. 102, 3335. Guyton, A.C., and Hall, 1996, Text book of Medical Phsycology, diterjemahkan oleh Tengadi, I., Santosa, A., Edisi 9, Bagian II, 76, Penerbit Buku Kedoteran EGC, Jakarta. Harborne, J.B., 1984, Phytochemical Methods, diterjemahkan oleh Padmawinata, K.dan Soediro, (1987), Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan, terbitan kedua, 84-92, 147-151, Penerbit ITB, Bandung. Hertiani, T., 2000, Isolasi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid dari Daun Plantago mayor L., Tesis, Universitas Gajah Mada, Yogyakarta. Irwan,Y.D.P.S., 2001, Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma Polyanthum Bl.) terhadap Spermatogenitas Tikus Putih, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Ismirawati,Y., 2002, Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Tikus Jantan dan Betina, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Japri, A., 2001, Uji Teratogenisitas Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Tikus Putih, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Katarina, S. K., 2002, Uji Daya Antifungus Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) terhadap Candida albicans secara in vitro, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Katzung, B.G., 2002, Basic and Clinical Pharmacology, diterjemahkan oleh Bagian Farmasi Kedokteran UNAIR edisi VIII, Jilid 2, Penerbit Salemba Medika, Jakarta. Ladoangin, A., 2004, Efek Hepatoprotektif Jus Buah Apel Hijau (Pyrus malus L.) pada Mencit Jantan (Mus muscullus) Terinduksi Parasetamol, Skripsi, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Lily, M.P., 1980, Medical Plant of East and Southeast Asia, 258-259, The MIT Press, Cambridge, Massachusetts, and London, England.


Markham, K.R., 1982, Techniques of Flavonoid Identification, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, (1988), Cara Mengidentifikasi Flavonoid, 1-34, Penerbit ITB, Bandung. Mutschler, E.,1986, Arieneimittelwirkungen, Edisi V, diterjemahkan oleh Mathilda B., Widyanto dan Ranti, A.S., Dinamika Obat, 177-180, ITB, Bandung. Phin, K, 2001, Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Akar Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) terhadap Jaringan Hati, Ginjal, Ovarium, dan Uterus Tikus Betina, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Prianingrum, E.D., 2006, Daya Anti-inflamasi Ekstrak Etanol Daun Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Mencit Putih Betina, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Putra, A.D.K., 2004, Daya Analgesik Air Perasan Umbi Wortel (Daucus carota L.) pada Mencit Putih Betina, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Rang, H.P., Dale, M.M., Ritter, J.M., Moore, P.K., 2003, Pharmacology, edisi V, 232, Churchill Livingstone Riadiani, R.P., 2006, Daya Analgesik Ekstrak Petroleum Eter Daun Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Mencit Putih Betina, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta Robinson, Trevor, 1995, Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi, terjemahkan oleh Kosasi Padmawinata, 192, ITB, Bandung Setiati, 2003, Radikal Bebas, Antioksidan, dan Proses Menua, Medika, No. 6, 366-369, Jakarta. Sibuea,

P., 2004, Kuersetin, Senjata Pemusnah Radikal Bebas, http://www.kompas.com/kompas.cetak/0402/10/humaniora/840926.htm

Sitompul, B., 2003, Antioksidan dan Penyakit Aterosklerosis, Medika, No. 6, 373377, Jakarta. Soedibyo, M.B.R.A., 1998, Alam Sumber Kesehatan, Mnfaat dan Kegunaan, Cetakan ke-1, 148, Balai Pustaka, Jakarta. Sudarto, A., 2006, Daya Anti-inflamasi Ekstrak Petroleum Eter Daun Senggani (Melastoma polyanthum Bl.) pada Mencit Putih Betina, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.


Sulaiman, M.R., Somchit, M.N., Israf, D.A., ahmad, Z., moin, S., Antinociceptive effect of Melastoma malabathricum ethanolic extract in mice, http://www.elsevier.com/locate/fitote Tjay, T.H., dan Rahardja,K, 2002, Obat-Obat Penting : Khasiat penggunaan dan Efek-Efek Sampingnya, Edisi V, Cetakan ke-2, 295-310, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Tjitrosoepomo, G., 1989, Taksonomi Tumbuhan Spermatophyta, Gadjah Mada University Press, Yogyakarta. Toba, M.S., 2003, Uji Daya Antibakteri Ekastrak Etanol Akar Senggani (Melastoma affine D. Don.) terhadap Bakteri Gram Positif dan Bakteri Gram Negatif , Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Turner, R.A., 1965, Screening Method in Pharmacology, Vol I, 160, Academic Press, New York. Van Steenis, C.G.G.J, 1975, Flora Untuk Sekolah di Indonesia, 328-330, PT. Pradya Paramita, Jakarta. Vogel, H.G., 2002, Drug Discovery and Evaluation : Pharmacological Assays, Second Edition , 726-769, Spinger Verlag Berlin Heidelberg, New York. Wilmana, P.F., 1995, Analgesik Anti inflamasi Non Steroid dan Obat Pirai dalam Ganiswara, S.G., 1995, Farmakologi dan Terapi, Edisi IV, 210-212, Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta. Williamson, E. M., 1996, Selection Preparation and Pharmacological Evaluation of Plant Material, 131, 142-145, John Willey and Sons, England. Wiwin, F., 2002, Toksisitas Akut Infus Daun Senggani (Melastoma polyanthum BL.) pada Mencit, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.


Lampiran 1. Surat determinasi simplisia senggani (Melastoma polyanthum Bl.)


Lampiran 2. Foto tumbuhan, daun, serbuk daun senggani dan ekstrak etanol daun senggani

Gambar 23. Tumbuhan Senggani


Gambar 24. Daun senggani

Gambar 25. Serbuk daun senggani


a


b Gambar 26. Ekstrak etanol daun senggani, (a) ekstrak cair, (b) ekstrak kental

Lampiran 3. Data jumlah geliat hewan uji dan hasil analisis variansi satu arah pada penetapan dosis efektif asam asetat


Tabel XVII. Jumlah geliat hewan uji pada penetapan dosis efektif asam asetat Waktu (mnt) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Total X ± SE

Dosis 25 mg/kg BB A B C 13 12 2 7 13 9 8 8 3 3 15 3 3 10 7 0 3 3 0 1 2 0 2 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 3 5 35 67 35 45,67 ± 10,67

Dosis 50 mg/kg BB A B C 20 12 0 20 19 16 13 12 17 14 13 19 17 14 13 12 12 12 10 9 13 10 7 9 9 5 6 5 5 5 5 4 5 4 1 5 139 113 120 124 ± 7,77

Asam Asetat NPar Tests One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test geliat N Normal Parameters a,b Most Extreme Differences

Mean Std. Deviation Absolute Positive Negative

Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) a. Test distribution is Normal. b. Calculated from data.

Oneway

9 104,8889 47,84466 ,234 ,150 -,234 ,702 ,708

Dosis 100 mg/kg BB A B C 1 10 2 15 27 21 29 20 14 21 15 13 18 17 9 12 17 10 20 8 9 16 27 21 10 10 15 4 4 5 0 3 2 3 5 2 149 163 123 145 ± 11,72


Descriptives geliat

N dosis 25 mg/kg BB dosis 50 mg/kg BB dosis 100 mg/kg BB Total

Mean 45.6667 124.0000 145.0000 104.8889

3 3 3 9

Std. Deviation 18.47521 13.45362 20.29778 47.84466

Std. Error 10.66667 7.76745 11.71893 15.94822

95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound -.2283 91.5616 90.5793 157.4207 94.5775 195.4225 68.1122 141.6655

Minimum 35.00 113.00 123.00 35.00

Maximum 67.00 139.00 163.00 163.00

Test of Homogeneity of Variances geliat Levene Statistic .377

df1

df2 2

Sig. .701

6

ANOVA geliat

Between Groups Within Groups Total

Sum of Squares 16444.222 1868.667 18312.889

df 2 6 8

Mean Square 8222.111 311.444

F 26.400

Sig. .001

Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: geliat Scheffe

(I) dosis dosis 25 mg/kg BB dosis 50 mg/kg BB dosis 100 mg/kg BB

(J) dosis dosis 50 mg/kg BB dosis 100 mg/kg BB dosis 25 mg/kg BB dosis 100 mg/kg BB dosis 25 mg/kg BB dosis 50 mg/kg BB

Mean Difference (I-J) -78.33333* -99.33333* 78.33333* -21.00000 99.33333* 21.00000

*. The mean difference is significant at the .05 level.

Homogeneous Subsets

Std. Error 14.40936 14.40936 14.40936 14.40936 14.40936 14.40936

Sig. .005 .001 .005 .403 .001 .403

95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -124.5479 -32.1188 -145.5479 -53.1188 32.1188 124.5479 -67.2145 25.2145 53.1188 145.5479 -25.2145 67.2145


geliat a

Scheffe

dosis dosis 25 mg/kg BB dosis 50 mg/kg BB dosis 100 mg/kg BB Sig.

N 3 3 3

Subset for alpha = .05 1 2 45.6667 124.0000 145.0000 1.000 .403

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000.


Lampiran 4. Data jumlah geliat hewan uji dan hasil analisis variansi satu arah pada penetapan kontrol negatif

Tabel XVIII. Jumlah geliat hewan uji pada penetapan kontrol negatif Waktu (mnt) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Total X ± SE

A 0 9 14 15 17 18 11 15 17 5 4 9 134

Aquadest B C D 0 1 1 6 11 10 11 13 21 20 17 24 13 9 15 15 9 10 12 8 9 14 10 6 11 13 8 7 7 5 5 5 3 7 5 3 121 108 115 118,00 ± 4,53

E 3 15 15 13 15 17 9 7 9 6 2 1 112

A 3 9 10 8 8 9 8 13 12 6 10 8 104

CMC-Na 1% B C D 4 5 0 27 23 17 23 17 11 17 17 15 19 17 11 10 13 10 10 15 13 6 10 9 5 5 7 7 4 2 3 6 3 0 3 3 131 135 101 112,20 ± 6,89

KONTROL NEGATIF NPar Tests One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test N Normal Parameters a,b Most Extreme Differences



negatif 10 1,5000 ,52705 ,329 ,329 -,329 1,039 ,230

E 9 21 10 13 14 9 8 5 13 7 3 3 115


T-Test Group Statistics

geliat

negatif aquadest CMC-Na 1%

N

Mean 118.0000 117.2000

5 5

Std. Deviation 10.12423 15.40130

Std. Error Mean 4.52769 6.88767

Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances

F geliat

Equal variances assumed Equal variances not assumed

1.874

Sig. .208

t-test for Equality of Means

t

df

Sig. (2-tailed)

Mean Difference

Std. Error Difference

95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper

.097

8

.925

.80000

8.24257 -18.20741

19.80741

.097

6.913

.925

.80000

8.24257 -18.74040

20.34040


Lampiran 5. Data jumlah geliat hewan uji dan hasil analisis statistik pada penetapan selang waktu pemberian

Tabel XIX. Jumlah geliat hewan uji pada penetapan selang waktu pemberian Waktu (mnt) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Total X ± SE

A 0 10 14 10 11 13 5 4 1 2 4 2 76

5 menit B C 1 2 13 16 10 15 10 15 4 11 12 9 3 4 1 3 7 9 3 2 4 5 3 3 71 94 80,33 ± 6,98

A 0 14 8 9 5 0 3 4 0 3 1 1 48

10 menit B C 0 1 13 23 11 14 4 8 6 5 6 0 6 4 1 1 4 7 1 1 1 4 2 1 55 69 57,67 ± 6,17

SELANG WAKTU NPar Tests One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test waktu N Normal Parameters a,b Most Extreme Differences



9 2,0000 ,86603 ,209 ,209 -,209 ,628 ,826

A 7 14 12 15 12 7 8 0 2 4 0 4 85

15 menit B 8 21 18 16 18 8 7 4 6 3 3 2 96 96 ± 6,36

C 6 20 18 10 15 9 7 5 6 5 3 3 107


Oneway Descriptives geliat

N 5 menit 10 menit 15 menit Total

Mean 80.3333 57.3333 96.3333 78.0000

3 3 3 9

Std. Deviation 12.09683 10.69268 11.01514 19.58954

Std. Error 6.98411 6.17342 6.35959 6.52985

95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound 50.2831 110.3835 30.7713 83.8954 68.9702 123.6965 62.9421 93.0579

Minimum 71.00 48.00 85.00 48.00

Maximum 94.00 69.00 107.00 107.00

Test of Homogeneity of Variances geliat Levene Statistic .079

df1

df2 2

Sig. .925

6

ANOVA geliat


Sum of Squares 2306.000 764.000 3070.000

df 2 6 8

Mean Square 1153.000 127.333

F 9.055

Sig. .015


(I) waktu 5 menit 10 menit 15 menit

(J) waktu 10 menit 15 menit 5 menit 15 menit 5 menit 10 menit

Mean Difference (I-J) 23.00000 -16.00000 -23.00000 -39.00000* 16.00000 39.00000*

Std. Error 9.21352 9.21352 9.21352 9.21352 9.21352 9.21352


Sig. .118 .295 .118 .016 .295 .016

95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -6.5501 52.5501 -45.5501 13.5501 -52.5501 6.5501 -68.5501 -9.4499 -13.5501 45.5501 9.4499 68.5501


Homogeneous Subsets geliat a

Scheffe

waktu 10 menit 5 menit 15 menit Sig.

N 3 3 3

Subset for alpha = .05 1 2 57.3333 80.3333 80.3333 96.3333 .118 .295



Lampiran 6. Data % penghambatan terhadap jumlah geliat dan hasil analisis statistik pada penetapan selang waktu pemberian Tabel XX. Data % penghambatan terhadap jumlah geliat pada penetapan selang waktu pemberian Kelompok Selang waktu perlakuan 5 menit 10 menit 15 menit 1 32,26 57,22 24,24 2 36,72 50,98 14,44 3 16,22 36,67 4,64 X ± SE 28.4 ± 6,23 48,29 ± 6,08 14,44 ± 5,66

% DA SELANG WAKTU Oneway Descriptives DA

N 5 menit 10 menit 15 menit Total

Mean 28.4000 48.2900 14.4400 30.3767

3 3 3 9

Std. Deviation 10.78134 10.53578 9.80000 17.25861

Std. Error 6.22461 6.08284 5.65803 5.75287

95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound 1.6177 55.1823 22.1177 74.4623 -9.9045 38.7845 17.1105 43.6428

Minimum 16.22 36.67 4.64 4.64

Test of Homogeneity of Variances DA Levene Statistic .088

df1

df2 2

Sig. .917

6

ANOVA DA


Sum of Squares 1736.316 646.560 2382.876

df 2 6 8

Mean Square 868.158 107.760

F 8.056

Sig. .020

Maximum 36.72 57.22 24.24 57.22


Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: DA Scheffe

(I) waktu 5 menit 10 menit 15 menit

(J) waktu 10 menit 15 menit 5 menit 15 menit 5 menit 10 menit

Mean Difference (I-J) -19.89000 13.96000 19.89000 33.85000* -13.96000 -33.85000*

Std. Error 8.47585 8.47585 8.47585 8.47585 8.47585 8.47585

Sig. .142 .327 .142 .020 .327 .020


Homogeneous Subsets DA a

Scheffe

waktu 15 menit 5 menit 10 menit Sig.

N 3 3 3

Subset for alpha = .05 1 2 14.4400 28.4000 28.4000 48.2900 .327 .142


95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -47.0742 7.2942 -13.2242 41.1442 -7.2942 47.0742 6.6658 61.0342 -41.1442 13.2242 -61.0342 -6.6658


Lampiran 7. Data jumlah geliat hewan uji dan hasil analisis variansi satu arah pada penetapan dosis efektif asetosal

Tabel XXI. Jumlah geliat hewan uji pada penetapan dosis efektif asetosal Dosis 68,25 mg/kg Dosis 113,75 mg/kg Waktu Dosis 91 mg/kg BB BB BB (menit) A B C A B C A B C 5 13 6 0 0 0 7 0 4 4 10 10 14 12 0 0 3 4 4 5 15 5 10 15 10 10 3 1 3 4 20 9 8 15 7 7 2 0 3 2 25 5 7 11 0 2 4 0 0 1 30 4 7 8 4 5 5 4 0 1 35 5 2 5 3 4 4 2 1 3 40 11 3 1 0 5 4 0 0 3 45 7 0 0 0 0 1 1 2 1 50 8 0 7 3 3 4 0 1 1 55 9 0 5 0 0 3 5 0 0 60 2 0 0 1 0 2 0 1 0 Total 88 57 79 28 36 38 17 19 25 X ± SE 74,67 ± 9,21 34,00 ± 3,06 20,33 ± 2,40

ASETOSAL NPar Tests One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test N Normal Parameters a,b Most Extreme Differences



asetosal 9 2,0000 ,86603 ,209 ,209 -,209 ,628 ,826



3 3

95% Confidence Interval for Mean Mean Std. Deviation Std. Error Lower Bound Upper Bound Minimum 74.6667 15.94783 9.20748 35.0501 114.2833 57.00 34.0000 5.29150 3.05505 20.8552 47.1448 28.00

3

20.3333

4.16333

2.40370

9.9910

30.6756

17.00

25.00

9

43.0000

25.96151

8.65384

23.0442

62.9558

17.00

88.00

N asetosal 68,25 mg/kg BB asetosal 91 mg/kg BB asetosal 113,75 mg/kg BB Total

Maximum 88.00 38.00

Test of Homogeneity of Variances geliat Levene Statistic 3.855

df1

df2 2

Sig. .084

6

ANOVA geliat


Sum of Squares 4792.667 599.333 5392.000

df 2 6 8

Mean Square 2396.333 99.889

F 23.990

Sig. .001


(I) dosis (J) dosis asetosal 68,25 mg/kg BB asetosal 91 mg/kg BB asetosal 113,75 mg/kg BB asetosal 91 mg/kg BB asetosal 68,25 mg/kg BB asetosal 113,75 mg/kg BB asetosal 113,75 mg/kg asetosal 68,25 mg/kg BB BB asetosal 91 mg/kg BB

Mean Difference Std. Error (I-J) 40.66667* 8.16043


Sig. .007

95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 14.4941 66.8393

54.33333*

8.16043

.002

28.1607

80.5059

-40.66667*

8.16043

.007

-66.8393

-14.4941

13.66667

8.16043

.316

-12.5059

39.8393

-54.33333* -13.66667

8.16043 8.16043

.002 .316

-80.5059 -39.8393

-28.1607 12.5059



Scheffe

dosis asetosal 113,75 mg/kg BB asetosal 91 mg/kg BB asetosal 68,25 mg/kg BB Sig.

Subset for alpha = .05 1 2

N 3

20.3333

3 3

34.0000 .316

74.6667 1.000



Lampiran 8. Data % penghambatan terhadap jumlah geliat dan hasil analisis variansi satu arah pada penetapan dosis efektif asetosal Tabel XXII. Data % penghambatan terhadap jumlah geliat pada penetapan dosis efektif asetosal Kelompok Dosis asetosal perlakuan 68,25 mg/kg BB 91 mg/kg BB 113,75 mg/kg BB 1 21,57 75,04 84,85 2 49,20 67,91 83,07 3 29,59 66.13 77,72 X ± SE 32,12 ± 8,23 69,69 ± 1,86 81,88 ± 1,97

% DA ASETOSAL Oneway Descriptives DA

3 3

95% Confidence Interval for Mean Mean Std. Deviation Std. Error Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum 33.4533 14.21437 8.20667 -1.8571 68.7638 21.57 49.20 69.6933 4.71511 2.72227 57.9804 81.4063 66.13 75.04

3

81.8800

3.71097

2.14253

72.6614

91.0986

77.72

84.85

9

61.6756

23.13844

7.71281

43.8898

79.4613

21.57

84.85

N asetosal 68,25 mg/kg B asetosal 91 mg/kg BB asetosal 113,75 mg/kg BB Total

Test of Homogeneity of Variances DA Levene Statistic 3.856

df1

df2 2

Sig. .084

6

ANOVA DA


Sum of Squares 3806.994 476.104 4283.098

df 2 6 8

Mean Square 1903.497 79.351

F 23.988

Sig. .001


Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: DA Scheffe Mean Difference (I) asetosal (J) asetosal Std. Error (I-J) asetosal 68,25 mg/kg B asetosal 91 mg/kg BB -36.24000* 7.27327 asetosal 113,75 mg/kg -48.42667* 7.27327 BB asetosal 91 mg/kg BB asetosal 68,25 mg/kg B 36.24000* 7.27327 asetosal 113,75 mg/kg -12.18667 7.27327 BB asetosal 113,75 mg/kg asetosal 68,25 mg/kg B 48.42667* 7.27327 BB asetosal 91 mg/kg BB 12.18667 7.27327 *. The mean difference is significant at the .05 level.

Homogeneous Subsets DA a

Scheffe

asetosal asetosal 68,25 mg/kg BB asetosal 91 mg/kg BB asetosal 113,75 mg/kg BB Sig.

3 3

Subset for alpha = .05 1 2 33.4533 69.6933

3

81.8800

N

1.000


.316

95% Confidence Interval Sig. Lower Bound Upper Bound .007 -59.5672 -12.9128 .002

-71.7539

-25.0994

.007

12.9128

59.5672

.316

-35.5139

11.1406

.002 .316

25.0994 -11.1406

71.7539 35.5139


Lampiran 9. Data jumlah geliat hewan uji setelah pemberian asam asetat dan hasil analisis variansi satu arah pada semua kelompok perlakuan Tabel XXIII. Data jumlah geliat hewan uji setelah pemberian asam asetat pada semua kelompok perlakuan Asetosal 91 mg/kg Senggani BB 850 mg/kg BB 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 3 4 5 0 9 0 0 7 0 0 0 0 0 1 10 9 27 23 17 21 0 0 3 6 4 3 2 4 1 15 10 23 17 11 10 10 10 3 4 3 9 4 2 0 20 8 17 17 15 13 7 7 2 3 5 1 2 2 4 25 8 19 17 11 14 0 2 4 2 3 0 1 1 5 30 9 10 13 10 9 4 5 5 7 5 0 0 3 3 35 8 10 15 13 8 3 4 4 1 2 0 0 0 0 40 13 6 10 9 5 0 5 4 7 2 0 0 0 0 45 12 5 5 7 13 0 0 1 0 4 0 0 1 0 50 6 7 4 2 7 3 3 4 0 0 0 0 0 0 55 10 3 6 3 3 0 0 3 1 0 0 0 0 0 60 8 0 3 3 3 1 0 2 1 2 0 0 0 0 Total 104 131 135 101 115 28 36 38 32 30 13 10 13 14 X ± SE 112,20 ± 6,89 32,8 ± 1,86 13,4 ± 1,12

Waktu (menit)

CMC Na 1%

Senggani Senggani Senggani 1000 mg/kg BB 1330 mg/kg BB 1670 mg/kg BB 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 2 4 0 1 0 0 5 1 0 3 0 4 10 0 5 0 2 14 6 14 0 4 5 6 6 3 3 10 10 2 10 15 4 2 4 4 4 3 3 5 6 6 2 8 7 8 8 8 2 0 3 0 4 4 7 8 4 7 7 8 11 7 15 7 0 0 1 0 3 8 5 6 4 7 11 9 3 5 5 7 0 0 2 0 3 1 9 9 0 2 6 8 2 7 4 13 1 0 0 1 0 2 7 0 0 6 2 2 2 4 3 2 3 0 0 1 0 2 0 0 0 0 7 5 1 3 4 5 1 0 0 0 0 0 1 4 0 1 0 5 2 2 1 6 0 0 0 2 0 0 0 0 1 0 0 8 1 1 0 4 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 2 3 3 0 6 1 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 3 2 1 2 17 20 16 19 14 24 43 40 21 36 38 69 55 52 60 75 18,6 ± 1,72 35,6 ± 3,83 62,2 ± 4,31


PERLAKUAN NPar Tests One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test N Normal Parameters a,b Most Extreme Differences

perlakuan 30 3,5000 1,73702 ,139 ,139 -,139 ,764 ,604




N CMC-Na 1% asetosal 91 mg/kg BB senggani 850 mg/kg BB senggani 1000 mg/kg B senggani 1330 mg/kg B senggani 1670 mg/kg B Total

Mean Std. Deviation 5 117.2000 15.40130 5 32.8000 4.14729 5 13.4000 2.50998 5 18.6000 3.84708 5 35.6000 8.56154 5 62.2000 9.62808 30 46.6333 36.62153

Std. Error 6.88767 1.85472 1.12250 1.72047 3.82884 4.30581 6.68615

Test of Homogeneity of Variances geliat Levene Statistic 5.239

df1

df2 5

24

Sig. .002

95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum 98.0768 136.3232 101.00 135.00 27.6505 37.9495 28.00 38.00 10.2834 16.5166 10.00 17.00 13.8232 23.3768 14.00 24.00 24.9694 46.2306 21.00 43.00 50.2452 74.1548 52.00 75.00 32.9586 60.3080 10.00 135.00


ANOVA geliat


Sum of Squares 37126.967 1766.000 38892.967

df 5 24 29

Mean Square 7425.393 73.583

F 100.911

Sig. .000

Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: geliat Scheffe Mean Difference (I) perlakuan (J) perlakuan Std. Error (I-J) CMC-Na 1% asetosal 91 mg/kg BB 84.40000* 5.42525 senggani 850 mg/kg BB 103.80000* 5.42525 senggani 1000 mg/kg BB 98.60000* 5.42525 senggani 1330 mg/kg BB 81.60000* 5.42525 senggani 1670 mg/kg BB 55.00000* 5.42525 asetosal 91 mg/kg BB CMC-Na 1% -84.40000* 5.42525 senggani 850 mg/kg BB 19.40000 5.42525 senggani 1000 mg/kg BB 14.20000 5.42525 senggani 1330 mg/kg BB -2.80000 5.42525 senggani 1670 mg/kg BB -29.40000* 5.42525 senggani 850 mg/kg BB CMC-Na 1% -103.80000* 5.42525 asetosal 91 mg/kg BB -19.40000 5.42525 senggani 1000 mg/kg BB -5.20000 5.42525 senggani 1330 mg/kg BB -22.20000* 5.42525 senggani 1670 mg/kg BB -48.80000* 5.42525 senggani 1000 mg/kg BB CMC-Na 1% -98.60000* 5.42525 asetosal 91 mg/kg BB -14.20000 5.42525 senggani 850 mg/kg BB 5.20000 5.42525 senggani 1330 mg/kg BB -17.00000 5.42525 senggani 1670 mg/kg BB -43.60000* 5.42525 senggani 1330 mg/kg BB CMC-Na 1% -81.60000* 5.42525 asetosal 91 mg/kg BB 2.80000 5.42525 senggani 850 mg/kg BB 22.20000* 5.42525 senggani 1000 mg/kg BB 17.00000 5.42525 senggani 1670 mg/kg BB -26.60000* 5.42525 senggani 1670 mg/kg BB CMC-Na 1% -55.00000* 5.42525 asetosal 91 mg/kg BB 29.40000* 5.42525 senggani 850 mg/kg BB 48.80000* 5.42525 senggani 1000 mg/kg BB 43.60000* 5.42525 senggani 1330 mg/kg BB 26.60000* 5.42525 *. The mean difference is significant at the .05 level.

95% Confidence Interval Sig. Lower Bound Upper Bound .000 64.7614 104.0386 .000 84.1614 123.4386 .000 78.9614 118.2386 .000 61.9614 101.2386 .000 35.3614 74.6386 .000 -104.0386 -64.7614 .054 -.2386 39.0386 .270 -5.4386 33.8386 .998 -22.4386 16.8386 .001 -49.0386 -9.7614 .000 -123.4386 -84.1614 .054 -39.0386 .2386 .966 -24.8386 14.4386 .020 -41.8386 -2.5614 .000 -68.4386 -29.1614 .000 -118.2386 -78.9614 .270 -33.8386 5.4386 .966 -14.4386 24.8386 .121 -36.6386 2.6386 .000 -63.2386 -23.9614 .000 -101.2386 -61.9614 .998 -16.8386 22.4386 .020 2.5614 41.8386 .121 -2.6386 36.6386 .003 -46.2386 -6.9614 .000 -74.6386 -35.3614 .001 9.7614 49.0386 .000 29.1614 68.4386 .000 23.9614 63.2386 .003 6.9614 46.2386



Scheffe

perlakuan senggani 850 mg/kg BB senggani 1000 mg/kg BB asetosal 91 mg/kg BB senggani 1330 mg/kg BB senggani 1670 mg/kg BB CMC-Na 1% Sig.

N 5 5 5 5 5 5

1 13.4000 18.6000 32.8000


4

18.6000 32.8000 35.6000 62.2000

.054


.121

1.000

117.2000 1.000


Lampiran 10. Data % penghambatan terhadap jumlah geliat dan hasil analisis statistik pada semua kelompok perlakuan

Tabel XXIV. Data % penghambatan terhadap jumlah geliat pada semua kelompok perlakuan Kelompok perlakuan

CMC Na 1%

1 2 3 4 5 X ± SE

7,31 -16,76 -20,32 9,98 -2,50 0,00 ± 6.14

Asetosal 91 mg/kg BB 75,04 67,91 66,13 71,48 73,26 70,76 ± 1,65

% penghambatan terhadap jumlah geliat Senggani Senggani Senggani 850 mg/kg BB 1000 mg/kg BB 1330 mg/kg BB 88,41 82,18 61,68 91,09 85,74 64,35 88,43 83,07 81,28 87,52 87,52 67,91 84,85 78,61 66,13 88,06 ± 1,00 83,42 ± 1,53 68,26 ± 3,41

Senggani 1670 mg/kg BB 38,50 50,98 53,65 46,52 33,16 44,56 ± 3,84


% DA PERLAKUAN Oneway Descriptives DA

N CMC-Na 1% asetosal 91 mg/kg BB senggani 850 mg/kg BB senggani 1000 mg/kg B senggani 1330 mg/kg B senggani 1670 mg/kg B Total

5 5 5 5 5 5 30

Mean -4.4580 70.7640 88.0600 83.4240 68.2640 44.5620 58.4360

95% Confidence Interval for Mean Std. Deviation Std. Error Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum 13.72696 6.13888 -21.5023 12.5863 -20.32 9.98 3.69615 1.65297 66.1746 75.3534 66.13 75.04 2.23808 1.00090 85.2811 90.8389 84.85 91.09 3.42741 1.53278 79.1683 87.6797 78.61 87.52 7.61551 3.40576 58.8081 77.7199 61.68 81.25 8.57860 3.83647 33.9103 55.2137 33.16 53.65 32.63973 5.95917 46.2481 70.6239 -20.32 91.09

Test of Homogeneity of Variances DA Levene Statistic 5.244

df1

df2 5

Sig. .002

24

ANOVA DA


Sum of Squares 29493.469 1401.742 30895.211

df 5 24 29

Mean Square 5898.694 58.406

F 100.995

Sig. .000


Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: DA Scheffe

(I) perlakuan CMC-Na 1%

asetosal 91 mg/kg BB

senggani 850 mg/kg BB




(J) perlakuan asetosal 91 mg/kg BB senggani 850 mg/kg BB senggani 1000 mg/kg BB senggani 1330 mg/kg BB senggani 1670 mg/kg BB CMC-Na 1% senggani 850 mg/kg BB senggani 1000 mg/kg BB senggani 1330 mg/kg BB senggani 1670 mg/kg BB CMC-Na 1% asetosal 91 mg/kg BB senggani 1000 mg/kg BB senggani 1330 mg/kg BB senggani 1670 mg/kg BB CMC-Na 1% asetosal 91 mg/kg BB senggani 850 mg/kg BB senggani 1330 mg/kg BB senggani 1670 mg/kg BB CMC-Na 1% asetosal 91 mg/kg BB senggani 850 mg/kg BB senggani 1000 mg/kg BB senggani 1670 mg/kg BB CMC-Na 1% asetosal 91 mg/kg BB senggani 850 mg/kg BB senggani 1000 mg/kg BB senggani 1330 mg/kg BB

Mean Difference (I-J) -75.22200* -92.51800* -87.88200* -72.72200* -49.02000* 75.22200* -17.29600 -12.66000 2.50000 26.20200* 92.51800* 17.29600 4.63600 19.79600* 43.49800* 87.88200* 12.66000 -4.63600 15.16000 38.86200* 72.72200* -2.50000 -19.79600* -15.16000 23.70200* 49.02000* -26.20200* -43.49800* -38.86200* -23.70200*

Std. Error 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346 4.83346

Sig. .000 .000 .000 .000 .000 .000 .054 .270 .998 .001 .000 .054 .966 .019 .000 .000 .270 .966 .120 .000 .000 .998 .019 .120 .003 .000 .001 .000 .000 .003

95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -92.7184 -57.7256 -110.0144 -75.0216 -105.3784 -70.3856 -90.2184 -55.2256 -66.5164 -31.5236 57.7256 92.7184 -34.7924 .2004 -30.1564 4.8364 -14.9964 19.9964 8.7056 43.6984 75.0216 110.0144 -.2004 34.7924 -12.8604 22.1324 2.2996 37.2924 26.0016 60.9944 70.3856 105.3784 -4.8364 30.1564 -22.1324 12.8604 -2.3364 32.6564 21.3656 56.3584 55.2256 90.2184 -19.9964 14.9964 -37.2924 -2.2996 -32.6564 2.3364 6.2056 41.1984 31.5236 66.5164 -43.6984 -8.7056 -60.9944 -26.0016 -56.3584 -21.3656 -41.1984 -6.2056


Homogeneous Subsets DA Scheffe

a

perlakuan CMC-Na 1% senggani 1670 mg/kg BB senggani 1330 mg/kg BB asetosal 91 mg/kg BB senggani 1000 mg/kg BB senggani 850 mg/kg BB Sig.

N 5 5 5 5 5 5

1 -4.4580


4

44.5620 68.2640 70.7640 83.4240 1.000


1.000

.120

70.7640 83.4240 88.0600 .054


Lampiran 11. Data % perubahan daya analgesik terhadap kontrol positif

Tabel XXV. Data % Perubahan daya analgesik terhadap kontrol positif Kelompok perlakuan

CMC Na 1%

1 2 3 4 5

-89,67 -123,69 -128,72 -85,90 -103,53

X ± SE

-106,30 ± 8,68

Perubahan % daya analgesik terhadap kontrol positif Asetosal 91 Senggani 850 Senggani 1000 Senggani 1330 mg/kg BB mg/kg BB mg/kg BB mg/kg BB 6,05 24,94 16,14 -12,83 -4,03 28,73 21,17 -9,06 -6,54 24,97 17,40 14,87 1,02 23,69 23,05 -4,03 3,53 19,91 11,09 -6,54

Senggani 1670 mg/kg BB -45,59 -27,95 -24,18 -34,26 -53,14

0,006 ± 2,34

-37,02 ± 5,42

24,45 ± 1,42

17,77 ± 2,08

-3,52 ± 4,82


% PERUBAHAN DA Oneway Descriptives perubahan 5% Confidence Interval fo Mean N Mean Std. DeviationStd. ErrorLower BoundUpper Bound Minimum Maximum 5 106.3020 19.40012 8.67600 -130.3904 -82.2136 -128.72 -85.90 5 .0060 5.22293 2.33577 -6.4791 6.4911 -6.54 6.05 5 24.4480 3.16299 1.41453 20.5206 28.3754 19.91 28.73 5 17.7700 4.65979 2.08392 11.9841 23.5559 11.09 23.05 5 -3.5180 10.78124 4.82152 -16.9047 9.8687 -12.83 14.87 5 -37.0240 12.12484 5.42239 -52.0790 -21.9690 -53.14 -24.18 30 -17.4367 46.10971 8.41844 -34.6543 -.2190 -128.72 28.73

CMC-Na 1% asetosal 91 mg/kg BB senggani 850 mg/kg senggani 1000 mg/kg senggani 1330 mg/kg senggani 1670 mg/kg Total

Test of Homogeneity of Variances perubahan Levene Statistic 5.300

df1

df2 5

Sig. .002

24

ANOVA perubahan


Sum of Squares 58862.608 2794.435 61657.043

df 5 24 29

Mean Square 11772.522 116.435

F 101.108

Sig. .000


Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: perubahan Scheffe Mean Difference (I) perlakuan (J) perlakuan Std. Error (I-J) CMC-Na 1% asetosal 91 mg/kg BB -106.30800* 6.82451 senggani 850 mg/kg BB -130.75000* 6.82451 senggani 1000 mg/kg BB-124.07200* 6.82451 senggani 1330 mg/kg BB-102.78400* 6.82451 senggani 1670 mg/kg BB -69.27800* 6.82451 asetosal 91 mg/kg BB CMC-Na 1% 106.30800* 6.82451 senggani 850 mg/kg BB -24.44200 6.82451 senggani 1000 mg/kg BB -17.76400 6.82451 senggani 1330 mg/kg BB 3.52400 6.82451 senggani 1670 mg/kg BB 37.03000* 6.82451 senggani 850 mg/kg BB CMC-Na 1% 130.75000* 6.82451 asetosal 91 mg/kg BB 24.44200 6.82451 senggani 1000 mg/kg BB 6.67800 6.82451 senggani 1330 mg/kg BB 27.96600* 6.82451 senggani 1670 mg/kg BB 61.47200* 6.82451 senggani 1000 mg/kg BB CMC-Na 1% 124.07200* 6.82451 asetosal 91 mg/kg BB 17.76400 6.82451 senggani 850 mg/kg BB -6.67800 6.82451 senggani 1330 mg/kg BB 21.28800 6.82451 senggani 1670 mg/kg BB 54.79400* 6.82451 senggani 1330 mg/kg BB CMC-Na 1% 102.78400* 6.82451 asetosal 91 mg/kg BB -3.52400 6.82451 senggani 850 mg/kg BB -27.96600* 6.82451 senggani 1000 mg/kg BB -21.28800 6.82451 senggani 1670 mg/kg BB 33.50600* 6.82451 senggani 1670 mg/kg BB CMC-Na 1% 69.27800* 6.82451 asetosal 91 mg/kg BB -37.03000* 6.82451 senggani 850 mg/kg BB -61.47200* 6.82451 senggani 1000 mg/kg BB -54.79400* 6.82451 senggani 1330 mg/kg BB -33.50600* 6.82451 *. The mean difference is significant at the .05 level.

95% Confidence Interval Sig. Lower Bound Upper Bound .000 -131.0117 -81.6043 .000 -155.4537 -106.0463 .000 -148.7757 -99.3683 .000 -127.4877 -78.0803 .000 -93.9817 -44.5743 .000 81.6043 131.0117 .054 -49.1457 .2617 .276 -42.4677 6.9397 .998 -21.1797 28.2277 .001 12.3263 61.7337 .000 106.0463 155.4537 .054 -.2617 49.1457 .963 -18.0257 31.3817 .019 3.2623 52.6697 .000 36.7683 86.1757 .000 99.3683 148.7757 .276 -6.9397 42.4677 .963 -31.3817 18.0257 .124 -3.4157 45.9917 .000 30.0903 79.4977 .000 78.0803 127.4877 .998 -28.2277 21.1797 .019 -52.6697 -3.2623 .124 -45.9917 3.4157 .003 8.8023 58.2097 .000 44.5743 93.9817 .001 -61.7337 -12.3263 .000 -86.1757 -36.7683 .000 -79.4977 -30.0903 .003 -58.2097 -8.8023


Homogeneous Subsets perubahan a

Scheffe

perlakuan CMC-Na 1% senggani 1670 mg/kg BB senggani 1330 mg/kg BB asetosal 91 mg/kg BB senggani 1000 mg/kg BB senggani 850 mg/kg BB Sig.

N 5 5 5 5 5 5

1 -106.3020


4

-37.0240 -3.5180 .0060 17.7700 1.000


1.000

.124

.0060 17.7700 24.4480 .054


Lampiran 12. Cara perhitungan % penghambatan jumlah geliat terhadap kontrol negatif dan % perubahan daya analgesik terhadap kontrol positif

Contoh : 1. Perhitungan % penghambatan jumlah geliat terhadap kontrol negatif pada kelompok perlakuan ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kg BB (subyek uji no.1) % penghambatan jumlah geliat = 100 - [ (P/K) x 100 ] Jumlah geliat subyek uji (P) = 76 Rata-rata jumlah geliat kelompok kontrol negatif (K) = 112,20 Cara : % penghambatan jumlah geliat = 100 - [ ( 76 / 112,20 ) x 100 = 32,26 %

2. Perhitungan % perubahan daya analgesik terhadap kontrol positif kelompok perlakuan ekstrak etanol daun senggani dosis 850 mg/kg BB (subyek uji no.1) % perubahan penghambatan terhadap geliat =

( P − Kp ) Kp

x 100

% penghambatan jumlah geliat perlakuan (P) = 88,41 Rata- rata % penghambatan jumlah geliat kontrol positif (Kp) = 70,76 Cara : % perubahan daya analgesik terhadap kontrol positif =

(88,41 − 70,76) ×100 70,76

= 24,94 %

pada


UJI EFEK ANALGESIK EKSTRAK ETANOL DAUN SENGGANI (Melastoma polyanthum Bl.) PADA MENCIT PUTIH BETINA SKRIPSI

Recommend Documents