Célzott terápiás diagnosztika Semmelweis Egyetem I.sz. Pathologiai és Kísérleti Rákkutató Intézet, Budapest Tamási Anna, Dr. Krenács Tibor
KROMAT – Dako szeminárium 2017.
Napjainkban egyre nagyobb teret kapnak a daganatok kezelésében a célzott terápiás eljárások. Ezek a kezelések a hagyományostól abban különböznek, hogy egy meghatározott molekuláris célpontra irányulnak. Ez lehet egy hibásan működő, vagy kórosan felszaporodott fehérje molekula, amely a daganat növekedés, proliferáció, illetve túlélés jelátviteli útvonalainak fontos eleme.
Er
Pr
A hormonterápia a hormonreceptor pozitív, azaz a női nemi hormon hatására érzékeny daganatok kezelésének egyik lehetősége. Női nemi hormonokon az ösztrogént és a progeszteront értjük. Az ösztrogén és a progeszteron a daganatsejtek felszínén ún. hormonreceptorokon keresztül fejti ki hatását. Két alapvető mechanizmuson alapul: a hormon szervezetbeli mennyiségének csökkenésén, illetve a hormon receptorának blokkolásán, a hormonhatás kialakulásának megakadályozásán.
Her2 A HER2 (human epidermális növekedési faktor receptor 2-es típusa) az összes emberi sejt felszínén megtalálható receptor. Az emlőben normális körülmények között fontos szerepük van a tejelvezető csatornák kifejlődésében azáltal, hogy a sejteknek üzeneteket küldve, növekedésre és szaporodásra késztetik őket. Ha valamilyen hiba folytán túl sok ilyen receptor alakul ki a sejtek felszínén (a normálisan előforduló tízezres nagyságrend helyett milliós számban), akkor emlődaganat kifejlődésének
lehetünk szemtanúi.
Daganat.hu
A HER2-receptorok kimutatásának jelentőségét az adja, hogy létezik HER2ellenes célzott ellenanyag terápia. Ez a kezelés specifikusan képes gátolni a HER2 receptorok működését, ezáltal csökkentve a daganatos sejtek túlszaporodását. A kezelés további előnye, hogy mivel célzottan ellenanyagot juttatnak a szervezetbe, közvetett módon aktiválni tudják a beteg immunrendszerét a daganatsejtek ellen. Ez úgy történik, hogy a beadott ellenanyagok megkeresik a daganatsejtek felszínén lévő HER2-receptorokat, hozzájuk kötődve mintegy hidat képeznek az immunrendszer sejtjei és a daganatsejt között. A folyamat végeredménye, hogy a célzott ellenanyag terápia segítségével az immunrendszer mozgósított sejtjei elpusztítják a daganatos sejteket.
Daganat.hu
A GIST sejtjei tirozinkináz aktivitású növekedésfaktor-jelfogóval (c-kit) rendelkeznek. Ez a jelfogó a CD-117 (KIT) immunhisztokémiai vizsgálattal mutatható ki. A stromalis daganat szövettani értékelése során a CD-117 pozitivitás immunhisztokémiai bizonyítása a GIST legfontosabb és legspecifikusabb kórjelző feltétele.
CD117(c-kit; SCF-R) Proto-oncogén, tirozin kináz - növekedési faktor receptor Lokalizáció: sejtmembrán + cytoplazma NORMÁL •Hízósejtek •Melanocyták •Cajal-sejtek
Hámsejtek Emlő, vese, izzadság m. pajzsmirígy follikuláris Intestitiális sejtek Here, ovárium Idegsejtek Éretlen myeloid sejtek…stb
Negatív kontroll enterocyták simaizom
• Vastagbéldaganatok esetében régóta törzskönyvezett gyógyszerek szolgálják az EGFR-nek nevezett növekedési faktor receptor blokkolását, ám egy ideig nem volt válasz arra, miért csak a betegek kisebb hányadában hat a kezelés. Kiderült: a daganatban van egy KRAS nevű gén, ami ha mutálódik, tehát genetikai szerkezete megváltozik, akkor megakadályozza az EGFR-gátló gyógyszer működését. Később arra is fény derült, nemcsak a KRAS, hanem egy ritkább elváltozás, az NRAS gén mutációja is megakadályozza a gyógyszer eredményes használatát
EGFR
EGFR Vastagbéldaganat
Májáttét
A BRAF – amely egy gén és az általa termelt fehérje neve is egyben – a KRAS-hoz hasonlóan szintén egy protoonkogén, amely ha bizonyos mutációk miatt onkogénné válik, kóros BRAF fehérjét kezdi el termelni. A BRAF fehérje a sejtek jelátviteli folyamataiban játszik szerepet, többek között a sejtnövekedés szabályozásában. A kóros BRAF fehérjéről 2002ben sikerült kimutatni, hogy szerepet játszik bizonyos daganattípusok kialakulásában
Az immunrendszer T-sejtjeinek felszínén egy PD-1 (programozott sejthalál-1) nevű receptor található, a tumorsejtek pedig képesek olyan molekulákat (PD-L1 és PD-L2 ligandumokat) kifejezni, amelyek hozzákötődnek ezekhez a receptorokhoz, és ezzel inaktiválják a megsemmisítésükért felelős T-sejteket.A PD-1-blokkolók hatásmechanizmusa, hogy eltorlaszolják a receptort, így a ligandumok nem tudnak megkötődni a T-sejtek felszínén. A PD-L1-gátlók célpontja pedig nem a receptor, hanem maga a ligandum, ezeket blokkolva tartják fenn a T-sejt aktivitását.
PD-L1 Clone: 22C3
Diagnosztikus Immunhisztokémia javaslat • • • • • • • • • •
Rögzítés Méret Víztelenítés HIER Primer Ab Jelzőrendszer Előhívás Kontrollok +/Interpretálás (Automatizálás)
> 24h < 3 mm teljes erőteljes (T/E) szelekció (pl. Web) nem-biotinos, polimer DAB kit belső/külső Web adatbázisok
Immunhisztokémia eredményessége Pree-analitika Rögzítés módja Időtartama Beágyazás Metszés
Post-analitika
Analitika Antigénfeltárás Reagens minőség/affinitás Jelző-/előhívó-rendszer Reagens-hígítás Inkubációs idő hőmérséklet
KONTROLLOK!!!
A reakció értékelése Értelmezése
Automatizálás (Standard kit-ek)
Célzott terápia hatékonysága = betegkiválasztás hatékonysága pl. 50%-os reprodukálhatóság mellett a felére csökken !!! Elégtelen célcsoport szelekció Késedelem a betegek adeqát kezelésében – állapot romlás, egészségkockázat- gyógyszermellékhatás Felesleges plusz költségek – betegbiztosító (gyógyszer, kezelési költség) A diagnosztika/klinikus/gyógyszerelőállító hitelvesztése A CÉLCSOPORT PONTOS KIVÁLASZTÁSA KÖZÖS ÉRDEK !
A patológia szerepe a célzott terápiás eljárások indikálásában jelentősen felértékelődött a megfelelő célpontok azonosításában, illetve mennyiségi meghatározásában. A célpontok kimutatása szigorúan szabályozott protokollok szerint kell, hogy történjen, akár nukleinsav alapú (in situ hibridizáció, gén szekvenálás), akár fehérjeszintű (immunhisztokémia) módszerekről van szó.
Köszönöm a figyelmet! Köszönet: Prof.Dr.KovalszkyIlonának Dr. Krenács Tibornak Paulusz Mónikának
