Parasit. Hung. 10. 1977.
Az indirekt hemagplutináció, a komplementkötési reakció és a m i k r o p r e c i p i t á c i ó a l k a l m a z á s a a t r i c h i n e l l o s i s s z e r o d i a g n o s z t i k á j á b a n Dr. BÁNKI György — SZTOJKOVNÉ Dr. MISLÓCZKY Margit
Budapest Fővárosi Közegészségügyi-járványügyi Állomás, Budapest " E x p e r i e n c e s w i t h i n d i r e c t h a e m a g g l u t i n a t i o n , c o m p l e m e n t f i x a t i o n r e a c t i o n and m i c r o p r e c i p i t a t i o n i n the d i a g n o s i s of h u m a n t r i c h i n e l l o s i s . " - B á n k i , G y . Sztojkovné M i s l ó c z k y M . - P a r a s i t . Hung. 10. 2 9 - 3 5 . 1977. A B S T R A C T . S e r o l o g i c e x a m i n a t i o n o f 554 p a t i e n t s r e v e a l e d 82 c a s e s o f v e r i f i e d t r i c h i n e l l o s i s . D i a g n o s t i c e f f i c i e n c y of the I H A t e s t was s u p e r i o r t o b o t h C F R and M P t e s t s . S e r o c o n v e r s i o n w a s d e t e c t a b l e by I H A , M P a n d C F R f r o m the 2nd, 3 r d 5 t h a n d 4 t h - 5 t h w e e k p o s t i n f e c t i o n , r e s p e c t i v e l y , by t h e e n d o f t h e 5 t h w e e k a l l t e s t s s h o w e d e q u a l l y h i g h d i a g n o s t i c c a p a c i t y . R e l i a b l e r e s u l t s w e r e o b t a i n e d Tby M P f o r 6 - 1 2 m o n t h s a n d by I H A f o r 9 - 1 8 m o n t h s p o s t i n f e c t i o n . 12 c a s e s c o u l d be d e t e c t e d s o l e l y by I H A , i n d i c a t i n g t h a t s e n s i t i v i t y o f t h i s t e s t i s s u p e r i o r t o t h a t of the o t h e r s . O n the o t h e r h a n d , i n some. i n s t a n c e s a s p e c i f i c p o s i t i v e I H A r e a c t i o n s w e r e d e t e c t e d by t h e h a e m a g g l u t i n a t i o n i n h i b i t i o n t e s t . P a r a l l e l a p p l i c ation of d i f f e r e n t s e r o l o g i c t e s t s and different k i n d s of antigens is r e c o m m e n d e d . #
A t r i c h i n e l l o s i s hazánkban - a világ s z á m o s országához hasonlóan - szinte évenként jelentke z i k , k i s e b b - n a g y o b b "járványok f o r m á j á b a n . A megbetegedettek valódi s z á m a feltehetően na gyobb, m i n t a járványügyi összefüggés alapján vizsgált és diagnosztizált esetek s z á m a . A t r i c h i n e l l o s i s egyike annak a k e v é s p a r a z i t á s f e r t ő z é s n e k , amely e m b e r b e n jellegzetes heveny b e t e g s é g s y n d r o m á t h o z h a t l é t r e , s e b b e n a s t á d i u m b a r i az e x i t u s l e t h a l i s s z a l i s s z á m o l n u n k k e l l . A betegség egyes tünetei - d i a r r h o e a , izomfájdalmak, láz, t o x i k u s - a l l e r g i á s j e l e n s é g e k , E K G e l v á l t o z á s o k , a r c - s z e m h é j o e d e m a - m e g t é v e s z t ő e k l e h e t n e k , s az o r v o s t m á s k ó r i s m e felé orientálhatják. R e n d s z e r i n t a v é r k é p b e n é s z l e l t e o s i n o p h i l i a - igen g y a k r a n h y p e r e o s i n o philia - kelti fel a t r i c h i n e l l o s i s gyanúját. A korai diagnózis, s a gyógykezelés korai megkez d é s e döntő f o n t o s s á g ú l e h e t a beteg k ö z v e t l e n vagy k é s ő b b i s o r s a s z e m p o n t j á b ó l . Az elmondottakból következik, hogy a t r i c h i n e l l o s i s szerodiagnosztikájában a l k a l m a z o t t mód s z e r e k k e l s z e m b e n a l a p v e t ő i g é n y a s p e c i f i t á s é s .az é r z é k e n y s é g . E z u t ó b b i t é n y e z ő j e l e n t ő sége kettős. R é s z i n t a s z e r o k o n v e r z i ó k o r a i megállapítását, tehát a k o r a i diagnózist, r é s z i n t a fertőzöttek közel teljes körének k i s z ű r é s é t teszi lehetővé. K ö z i s m e r t e n n a g y f o k ú é r z é k e n y s é g e ( 9 , 2 1 , 6) m i a t t v e z e t t ü k be a z i n d i r e k t h e m a g g l u t i n á c i ó s p r ó b á t ( I H A ) a h a z á n k b a n m á r k o r á b b a n a l k a l m a z o t t m i k r o p r e c i p i t á c i ó ( M P ) (11) é s a k o m p l e m e n t k ö t é s i r e a k c i ó ( K K R ) (12) m e U e t t . A k ö v e t k e z ő k b e n e h á r o m s z e r o d i a g n o s z t i k a i m ó d s z e r r e l 554 s z e m é l y e n n y e r t r ő l és tapasztalatainkról számolunk be.
eredményeink
A n vag és m ó d s z e r Törzsfenntartás.
1 5 - 2 0 g-os e g e r e k e t fertőzünk g y o m o r s z o n d á n át 5 0 0 - 6 0 0 l á r v á v a l .
L á r v a i z o l á l á s . E r r e a l e g a l k a l m a s a b b i d ő s z a k a f e r t ő z é s u t á n i 2 - 2 1/2 h ó n a p . A z á l l a t o k a t é t e r n a r k ó z i s s a l v a l ó e l ö l é s , m a j d d e k a p i t á c i ó , n y ú z á s , e v i s c e r á l á s u t á n m e g d a r á l j u k , vagy* a z i z o m z a t o t f e l a p r í t j u k . A n y e r t a n y a g o t 1:40 a r á n y b a n 1% p e p s z i n t é s 0, 5% a. l t . s ó s a v a t t a r t a l m a z ó i z o t ó n i á s s ó o l d a t b a n i n k u b á l j u k 3 7 ° C - o n 1 6 - 1 8 ó r a h o s s z a t . E k ö z b e n az a n y a g o t több ízben rázatjuk. A m e s t e r s é g e s e m é s z t é s s e l szabaddá tett lárvákat izotóniás sóoldatban, m a j d 0,15 M - p H 7 , 4 f o s z f á t - p u f f e r o l t s ó o l d a t b a n ( P B S ) t ö r t é n ő t ö b b s z ö r i m o s á s u t á n h a s z náljuk f e l t ö r z s f e n n t a r t á s r a vagy a n t i g é n k é s z í t é s r e .
Antigén. A M P - b a n élő, a fenti módon izolált l á r v á k , i l l . ezek u n . m e t a b o l i k u s vagy funkcio n á l i s a n t i g é n j e i v e s z n e k r é s z t a r e a k c i ó b a n (18, 13, .17), A K K R - b a n N E M E S É R I é s V I Z Y (12) által l e í r t módon szárított, porított lárvák ecetsavas - sós e x t r a c t i ó j a révén n y e r t antigént h a s z n á l t u k . A z I H A - b a n a l k a l m a z o t t a n t i g é n T A N N E R é s G R E G O R Y (20) m ó d s z e r é v e l k é s z ü l t , k i s e b b t e c h n i k a i m ó d o s í t á s o k k a l . A z e l j á r á s s o r á n 4 g n e d v e s l á r v a m a s s z á t 50 m l P B S - b e n , S O R V A L L homogenizátor "Microhomogenizer Attachement"-jével, kvarchomok hozzáadása u t á n , m a x i m á l i s f o r d u l a t s z á m m a l (40 000 r p m ) 15 p e r c i g h o m o g e n i z á l u n k j é g f ü r d ő b e n . 4 ° C - o n t ö r t é n ő 24 ó r á s e x t r a c t i ó után. a z - a r i y a g o t 10 0 0 0 r p m - e l 20 p e r c i g c e n t r i f u g á l j u k , s a s z ú p e r natanst használjuk antigénként (TSE). A z antigén f e h é r j e t a r t a l m a 2 charge-ban biuret-módi l l . 3, 6 m g / m l v o l t . s z e r r e l m e g h a t á r o z v a 3,2, A M P é s K K R k i v i t e l e é s é r t é k e l é s e N E M E S É R I é s V I Z Y (12) m á r i d ë z e t t k ö z l e m é n y é b e n l e í r t módon történik. A z • I H A teszthez a b i r k a v ö r ö s v é r s e j t e k (SRBC) csersavas k e z e l é s é t és szenzibilizálását B O Y D E N m ó d s z e r é n e k (1) S T A V I T S K Y s z e r i n t i m ó d o s í t á s á v a l (19) v é g e z t ü k . A z e l j á r á s l é n y e g e a k ö v e t k e z ő : M o s o t t S R B C - t 2 , 5 % - o s s z u s z p e n z i ó b a n i n k u b á l u n k 3 7 ° C - o n 10 p e r c i g ä ä m e n n y i s é g ű 1:40 000 c s e r s a v o l d a t t a l , m a j d m o s s u k p H 7, 2 P B S - s e l . 1 v o l . 2 , 5 % - o s c s e r savval kezelt SRBC szuszpenziót elegyítünk 4 v o l . szenzibilizáló oldattal. A szenzibilizáló oldat 0,15 M - p H 6,4 PBS és titrait m e n n y i s é g ű TSE elegye. A z antigén (TSE) optimális m e n n y i s é g e 100 m l c s e r s a v a z o t t S R B C s z u s z p e n z i ó r a á l t a l á b a n 10 m l - n e k b i z o n y u l t , ez f e h é r j e t a r t a l o m b a n 0, 30 - 0 , 35 m g / m l é r t é k n e k f e l e l m e g . A s z e n z i b i l i z á l á s i n k u b á c i ó s i d e j e 30 p e r c s z o b a h ő n . A z e z t k ö v e t ő m o s á s t 1:200 h í g í t á s ú i n a k t i v á l t n y ú l s a v ó t t a r t a l m a z ó P B S s e l ( P B S - R ) v é g e z z ü k , s a S R B C r e s z u s z p e n d á l á s a i s e b b e n t ö r t é n i k 2, 5%-os v é g k o n c e n t r á ciőban.
Az IHA kivitele és é r t é k e l é s e . T A K Á T S Y " M i k r o t i t r á t o r " V - l e m e z e i n az i n a k t i v á l t v i z s g á landó savókból 0,025 m l - e s . k a c s o k k a l 2-2 p a r a l l e l higitási s o r t készitünk. A higitó folyadék P B S - R , m e l y b ő l 1:2 h í g í t á s i s o r k é s z í t é s e k ö r " l - l c s e p p e t (0, 0 2 5 m l - t ) , 1:3 h í g í t á s i s o r e s e tében pedig 2-2 cseppet (0,05 m l - t ) mérünk a titráló l e m e z e k V lyukaiba. A diagnosztikus v i z s g á l a t o k a t r e n d s z e r e s e n 1:2 h í g í t á s i s o r r a l v é g e z t ü k . M a g a s t i t e r ü a g g l u t i n á c i ó e s e t é n a v é g t i t e r m e g á l l a p í t á s a 1:3 h í g í t á s i s o r r a l t ö r t é n t . - M i n d e n s z e r o l ó g i a i v i z s g á l a t a l k a l m á v a l l e g a l á b b 1 n e g a t í v é s 1 p o z i t í v s a v ó k o n t r o l l t , é s egy n y ú l s a v ó s - s ó k o n t r o l l t ( P B S - R k o n t r o l l t ) k e l l b e á l l í t a n i . A negatív é s pozitív s a v ó k b ó l ugyanúgy h í g í t á s i s o r t k é s z í t ü n k , m i n t a v i z s g á l a n d ó s a v ó k b ó l , a P B S - R k o n t r o l l k é s z í t é s e k o r p e d i g 2 p a r a l l e l V l y u k b a l - l c s e p p ( i l l . 1:3 hígítási sor e s e t é n 2-2 csepp) hígító folyadékot cseppentünk. E z u t á n v a l a m e n n y i l y u k b a l - l csepp s z e n z i b i l i z á l t SRBC s z u s z p e n z i ó t m é r ü n k , s ezt.a l e m e z e k enyhe ütögetéséyel é s r á z ó gatásával egyenletesen eloszlatják. Egy-egy szenzibilizált SRBC charge készítésekor a cser savazott nem s z e n z i b i l i z á l t v ö r ö s v é r t e s t e k a l a k i s a j á t s á g a i t , spontán agglutinációra'való haj l a m á t , ü l e p e d é s ! k é s z s é g é t i s m e g k e l l v i z s g á l n u n k . A m e n n y i b e n az így k e z e l t v ö r ö s v é r t e s t e k c s i l l a g alakúak, zsugorodottak, vagy a t i t r á l ó l e m e z V lyukaiban nem alkotnak j ó l körülírt, g o m b s z e r ú ü l e d é k e t , e s e t l e g r é s z l e g e s l i z i s t é s z l e l ü n k , úgy e z e k n e m a l k a l m a s a k az I H A e l végzésére. 1 ó r á s 3 7 ° C - o n t ö r t é n ő i n k u b á c i ó után az e r e d m é n y l e o l v a s h a t ó , i l l . a p o z i t í v s a v ó k o n t r o l l megfelelő e r e d m é n y e , és a többi k o n t r o l l negatívitása esetén é r t é k e l h e t ő . Negatív esetben a V lyuk c s ú c s á b a n k i s , é l e s határú, t ö m ö r , v ö r ö s gomb alakjában látjuk a leülepedett v ö r ö s vértesteket, t , +, -H-, + + + , + + + + p o z i t í v i t á s e s e t é n a v ö r ö s v é r t e s t e k t ö b b é - k e v é s b é , i l l . t e l j e s e n s z é t t e r ü l n e k . A s a v ó t i t e r e az u t o l s ó h a t á r o z o t t p o z i t í v i t á s t m u t a t ó (+) h í g í t á s .
H e m a g g l u t i n á c i ó g á t l á s ( H A G ) . A pozitív s a v ó k egy r é s z é v e l e l v é g e z t ü k a H A G p r ó b á t . Á T S E antigén hígítási s o r á n a k m i n d e n egyes tagjához adimk l - l cseppet a vizsgálandó s a v ó olyan h í g í t á s á b ó l , a m e l y a t e l j e s a g g l u t i n á l ó t i t e r ( u t o l s ó + + + + a g g l u t i n á c i ó ) 2, i l l . 4 - s z e r e s é t t a r t a l m a z z a . 1 ó r a i 3 7 ° C - o n t ö r t é n ő i n k u b á l á s u t á n c s e p p e n t j ü k be a s z e n z i b i l i z á l t S R B C s z u s z p e n z i ó t , s ú j a b b 1 ó r a i á l l á s u t á n o l v a s h a t ó l e az e r e d m é n y . A h í g í t á s i s o r e l s ő t a g j a i b a n é s z l e l h e t ő n e g a t í v e r e d m é n y é r t é k e l h e t ő p o z i t í v g á t l á s k é n t , s t i t e r e az u t o l s ó h a t á r o z o t t g á t l á s t mutató antigén hígítás.
30
Eredmények A z ö s s z e s e n v i z s g á l t 5 5 4 s z e m é l y k ö z ü l 390 a k u t v a g y k r ó n i k u s t r i c h i n e l l o s i s g y a n ú j á v a l k e r ü l t v i z s g á l a t r a . K ö z ü l ü k 82 s z e m é l y v o l t k l i n i k a i é s s z e r o l ó g i a i v a g y j á r v á n y t a n i é s s z e r o l ó giai alapon igazolhatóan a t r i c h i n e l l o s i s v a l a m e l y i k stádiumában. A t r i c h i n e l l o s i s esetek j e l e n t ő s r é s z é t t ö b b í z b e n v i z s g á l t u k . 150 s z e m é l y e g y é b p a r a z i t á s f e r t ő z ö t t s é g g y a n ú j a m i a t t k e r ü l t v i z s g á l a t r a , de t r i c h i n e l l o s i s s z e r o d i a g n o s z t i k a i p r ó b á t i s V é g e z t ü n k n á l u k . E b b e n a c s o p o r t b a n 4 i g a z o l t E c h i n o c o c c u s g r a n u l o s u s f e r t ő z ö t t s é g , 25 v i s c e r a l i s l a r v a m i g r a n s e s e t , l ' c y s t i c e r c o s i s , 8 T r i c h u r i s t r i c h i u r a , 13 A s c a r i s l u m b r i c o i d e s é s 3 S t r o n g y l o i d e s s t e r c o r a l i s f e r t ő z ö t t s é g s z e r e p e l t . Néhány v é r m i n t a egyéb t e r m é s z e t ű k l i n i k a i m e g b e t e g e d é s b ő l ( m o nonucleosis inf., egyéb vírusfertőzés, L Ö F F L E R c a r d i t i s , febris rheumatica, m y o s i t i s , tisz tázatlan l á z a s , eoisnophiliával j á r ó állapotok) származott. • 1.
táblázat Az elvégzett szerodiagnosztikai vizsgálatok összefoglalása Az alkalmazott szerodiagnosztikai módszer mikro precipitáció
indirekt hemagglutináció
komplement kötési reakció
494
386
168
554
Igazolt trichinellosis esetek
82
44
38
82
Specifikusan szeropozitív esetek s z á m a
70
43
38
82
_
5
_
13
Vizsgált személyek
száma
Aspecifikus pozitív esetek száma . Egy r e a k c i ó b a n pozitív esetek s z á m a
•
_
1
S* 12
Összesen
hemagglutináció gátlási próbával negatív
L e g a l á b b k é t s z e r o l ó g i a i m ó d s z e r p a r a l l e l a l k a l m a z á s á v a l m i n d a 82 v e r i f i k á l t e s e t p o z i t í v n a k b i z o n y u l t ( 1 . t á b l á z a t ) . A z I H A n a g y f o k ú é r z é k e n y s é g é t m u t a t j a , h o g y 12 e s e t e t c s a k e z z e l a m ó d s z e r r e l l e h e t e t t k i m u t a t n i . A M P d i a g n o s z t i k u s h a t á s f o k a az ö s s z e s í t e t t e r e d m é n y e k a l a p j á n v a l a m i v e l a l a t t a m a r a d az I H A - n a k , i l l . a K K R - n a k . A M P é s K K R s z i g o r ú a n s p e c i f i k u s n a k b i z o n y u l t , az I H A é r t é k e l é s e s o r á n v i s z o n t n é h á n y e s e t b e n n e m s p e c i f i k u s p o z i t í v i tást is észleltünk a H A G próba negatív e r e d m é n y e alapján. N e m specifikus I H A pozitívitást 1 strongyloidosis, 1 visceralis larva migrans, 1 mononucleosis infectiosa és 2 tisztázatlan hátterű esetben észleltünk. A t r i c h i n e l l o s i s akut stádiumában m e g f i g y e l t betegeken m e g k í s é r e l t ü k i s m é t e l t vizsgálatok k a l t i s z t á z n i , - h o g y az a l k a l m a z o t t s z e r o d i a g n o s z t i k a i m ó d s z e r e k m e n n y i r e h a s z n á l h a t ó k a s z e r ó k o n v e r z i ó d i n a m i k á j á n a k a m e g á l l a p í t á s á r a ( 2 , t á b l á z a t ) . L e g é r z é k e n y e b b n e k az I H A mutatkozott, m e l l y e l a s z e r ó k o n v e r z i ó m á r a 2 . - 4 , héten kimutatható. Hasonló arányú pozi tívitást M P - v a l a 3 . - 5 . héttől, K K R a l k a l m a z á s a k o r pedig a - 4 . - 5 . héttől lehet k i m u t a t n i . A z 5. h é t v é g é r e m i n d h á r o m m ó d s z e r g y a k o r l a t i l a g e g y f o r m á n a l k a l m a s n a k l á t s z i k a s z e r e konverzió felderítésére. A z I H A - v a l k a p o t t t i t e r é r t é k e k az a k u t s t á d i u m c s ú c s á n , a z 5 . - 8 . h é t e n ' i g e n m a g a s a k , elér h e t i k a z 1:540' 000 é r t é k e t i s . A k u t t r i c h i n e l l o s i s b a n a t i t e r é r t é k e k á t l a g a 1 : 2 187 (1 : 32 1 : 59 0 0 0 ) . A K K R á t l a g t i t e r e u g y a n e b b e n a k a t e g ó r i á b a n 1 : 3 2 0 ( 1 : 8 0 - 1 : 2 5 6 0 ) . A d i a g n o s z t i k u s t i t e r é r t é k e t az I H A t e s z t b e n n e h é z m e g h a t á r o z n i , t a p a s z t a l a t a i n k s z e r i n t a k u t trichinel-
2.
táblázat A szerodiagnosztikai vizsgálatok eredménye akut t r i c h i n e l l o s i s b a n
Az alkalmazott szerodiagnosztikai módszer
Pozitív/vizsgált vérsavók száma héten 2.
4.
3.
5.
6.
Mikroprecipitáció
1/9
40/49
19/23
39/42
10/11
Indirekt
4/9
20/21
23/23
14/14
9/9
-
0/28
-
28/28
-
hemagglutináció
Komplementkötési reakció
l o s i s b a n a k é t s z e r e s h í g í t á s i s o r e l s ő 3 - 4 t a g j á b a n l é t r e j ö v ő + + + + e r ő s s é g ű , l e g a l á b b 1:32 t i t e r ú r e a k c i ó k ó r j e l z ő é r t é k ű . A K K R d i a g n o s z t i k u s t i t e r é r t é k e 1:80. M i n d k é t r e a k c i ó b a n a z alacsony, vagy a diagnosztikus é r t é k körüli t i t e r ű pozitívitás esetén a v i z s g á l a t o t 2 hét múlva m e g k e l l i s m é t e l n i , s a t i t e r j e l e n t ő s e m e l k e d é s e az a k u t t f i c h i n e l l o s i s t i g a z o l j a . A t r i c h i n e l l o s i s k é s ő b b i s t á d i u m a i b a n a j e l z e t t e k n é l k i s e b b t i t e r ű h a t á r o z o t t (+++, ++++ e r ő s s é g ű ) s z e r o p o z i t í v i t á s i s k ó r j e l z ő é r t é k ű l e h e t . A z 1 . , i l l . 2 . h í g í t á s b a n g y a k o r i a g y e n g e (+, + + e r ő s s é g ű ) nem specifikus r e a k c i ó . A M P csak k v a l i t a t i v próba, a r e a k c i ó e r ő s s é g é t azonban b e c s l é s s e l megállapíthatjuk és k e r e s z t e k k e l jelölhetjük a precipitátumok keletkezésének idő beli lefolyása, m e n n y i s é g e , v a l a m i n t a hólyagok nagysága és falvastagsága alapján.
3.
táblázat A*szerodiagnosztikai vizsgálatok eredménye krónikus trichinellosisban
Az alkalmazott szerodiagnosztikai módszer
Pozitív/vizsgált vérsavók a f e r t ő z é s utáni . . 6-12 12-18
száma
hónapban 24
összesen
Mikroprecipitáció
18/24
3/11
1/23
22/58
Indirekt hemagglutináció
21/24
9/11
12/23
42/58
A két próbával
22/24
10/11
13/23
45/58
együttvéve
A trichinellosis krónikus stádiumában a szeropozitívitás dinamikáját eddig csak a M P - v a l és a z I H A - v a l v i z s g á l t u k ( 3 . t á b l á z a t ) . A M P a f e r t ő z é s u t á n i 6 - 1 2 h ó n a p i g , az I H A 9-18 h ó n a p i g adott megbízható eredményeket.
Megbeszélés V i z s g á l a t a i n k m e g e r ő s í t i k K A G A N (5) m e g á l l a p í t á s á t , h o g y a t r i c h i n e l l o s i s s z e r o d i a g n o s z t i k a i m ó d s z e r e k s p e c i f i k u s a k , é s s z e n z i t i v i t á s u k v á l t o z ó u g y a n , de m é g a l e g é r z é k e n y e b b e k i s negatívak lehetnek a fertőzés e l s ő 2 hetében. A parazita komplex antigénszerkezetú, s a gaz daszervezet nem m i n d e g y i k antigénkomponens ellen t e r m e l egyöntetűen ellenanyagot, e z é r t is szükséges különféle antigének p a r a l l e l alkalmazása. A M P tesztben a lárva metabolikus anti g é n j é t h a s z n á l t u k . E z az a n t i g é n v a l ó s z í n ű l e g n a g y r é s z t a z o n o s a D E S P O M M I E R é s M Ü L L E R á l t a l (2) a s t i c h o s o m a s e j t j e i b ő l i z o l á l t g r a n u l á r i s f r a k c i ó v a l , m i v e l m i n d k e t t ő b ő l z ö m m e l ugyanazokat a savanyú hidrolázokat lehetett k i m u t a t n i . A precipitáció C independens, e z é r t a r e a k c i ó k o m p l e m e n t tartalmú vagy inaktívált savóval is elvégezhető. A mikroprecipitátum o k i m m u n f l u o r e s c e n c i á v a l igazolhatóan specifikus antitesteket t a r t a l m a z n a k (4), A z i m m u n válasz esetenkénti antigénspecificitására érdekes példa egyik szubkrónikus esetünk ( 1 . táblá J
ra
z a t ) , a m e l y c s a k M P - v e l v o l t k o n z e k v e n s e n , e r ő s e n p o z i t í v . A K K R - b a n é s az I H A p r ó b á b a n szomatikus kivonatantigéneket alkalmaztunk. Ezek közül a TSE i m m u n e l e k t r o f o r e t i k u s v i z s g á l a t o k s z e r i n t 11 k o m p o n e n s t t a r t a l m a z ( 2 0 ) . Több m ó d s z e r egyidejű a l k a l m a z á s a s z ü k s é g e s a z é r t i s , m e r t a különféle r e a k c i ó k nem szük s é g k é p p e n u g y a n a z t az a n t i t e s t e t d e t e k t á l j á k . A f e r t ő z ő b e t e g s é g e k k e z d e t é n á l t a l á b a n a z I g M típusú e l l e n a n y a g o k s z i n t j e nő, é s ezt c s a k k é s ő b b k ö v e t i az I g G s z i n t n ö v e k e d é s e . G O L I N S K A é s M A S L O W S K I v i z s g á l a t a i s z e r i n t (3) t r i c h i n e l l o s i s b a n i s a z e l s ő 6 h é t b e n az I g M g l o b u l i n o k d o m i n á l n a k , s r é s z b e n ez m a g y a r á z h a t j a az I H A a l k a l m a s s á g á t a k o r a i s z e r o k o n v e r z i ó k i m u t a t á s á r a , v a l a m i n t a m a g a s e l l e n a n y a g t i t e r e k e t . A z I H A r e a k c i ó b a n u g y a n i s az I g M m o l e k u l á k i g e n h a t é k o n y a k , a K K R p e d i g z ö m m e l az I g G k i m u t a t á s á r a a l k a l m a s , A M P - t - bár számos laboratórium mellőzte alkalmazását - specificitása, biztonsága m i a t t i g e n j ó m ó d s z e r n e k t a l á l t u k e l s ő s o r b a n a j á r v á n y g ó c o k f e l d e r í t é s é b e n . L A M I N A (8) " m e t h o d of c h o i c e " - n a k t a r t j a , s a f e r t ő z é s utáni 14. n a p t ó l a 7. hónapig t e r j e d ő i d ő s z a k b a n j ó e r e d ménnyel alkalmazta. A K K R s p e c i f i c i t á s b a n a M P - v a l e g y e n r a n g ú n a k t e k i n t h e t ő , é r z é k e n y s é g b e n az I H A é s a M P k ö z ö t t á l l . E n n e k e l l e n é r e az e m l í t e t t o k o k m i a t t - a n t i g é n s z e r k e z e t , e l l e n a n y a g t í p u s o k - a k o r a i d i a g n ó z i s s z e m p o n t j á b ó l r o s s z h a t á s f o k ú . M a g u n k a K K R - b a n a s z e r o k o n v e r z i ó t az 5. h é t e n t a p a s z t a l t u k , s t ö b b s z e r z ő i s ( 7 , 3, 21) h a s o n l ó a d a t o k a t k ö z ö l . U g y a n a k k o r a K K R i g e n j ó e r e d m é n n y e l a l k a l m a z h a t ó a b e t e g s é g k é s ő b b i s t á d i u m á b a n (8, 10). A z I H A a nagy r e a k c i ó f e l ü l e t n e k i s k ö s z ö n h e t i s z e n z i t i v i t á s á t . P R I C E é s W E I N E R s z e r i n t (16) é r z é k e n y s é g e 100-szorosa a K K R - é n a k , és 300-szorosa a M P - é n a k , azaz ilyen arányban k i sebb a n t i t e s t m e n n y i s é g k i m u t a t á s á r a a l k a l m a s . E b b ő l a s z e m p o n t b ó l az i m m u n f l u o r e s c e n s m ó d s z e r t is felülmúlhatja (21), K é t s é g t e l e n h á t r á n y a i v i s z o n t a f i r s s S R B C - v e l végzett I H A nak, hogy a különböző s z e n z i b i l i z á l t SRBC c h a r g e - o k k a l a t i t e r e k r o s s z u l reprodukálhatók, f e n n á l l az a s p e c i f i k u s r e a k c i ó k l e h e t ő s é g e é s több h i b a l e h e t ő s é g g e l k e l l s z á m o l n i . M e g f e l e l ő k o n t r o l l o k a l k a l m a z á s á v a l az S R B C - b ő l , az a l k a l m a z o t t c s e r s a v m i n ő s é g é b ő l , a n y ú l s a v ó b ó l s az e g y é b f e l h a s z n á l t a n y a g o k b ó l s z á r m a z ó h i b á k k i k ü s z ö b ö l h e t ő k . A H A G k i e g é s z í t ő a l k a l m a z á s a j e l e n t ő s e n növeli a s p e c i f i c i t á s t . E z e n kívül s z ü k s é g e s s é válhat a vizsgált savók, i U . a nyúlsavó S R B C - v e l történő k i m e r í t é s e . A t i t e r e k reprodukálhatóságát fokozhatjuk i s m e r t titerű pozitív savókkal végzett antigéntitrál á s s a l . A szenzibilizáló elegy optimális antigénkoncentrációja csak egyedileg határozható meg, s a különböző technikával készült antigének összehasonlítása csak közelítőleg l e h e t s é ges (15). A z I H A - t a t r i c h i n e l l o s i s v i z s g á l a t á b a n e l s ő k é n t a l k a l m a z ó K A G A N é s B A R G A I (6) n y u l a k b a n a 6 , - 1 5 , n a p o n , patkányokban a 15. naptól é s z l e l t e a s z e r o k o n v e r z i ó t . G O L I N S K A é s M A S L O W S K I (3) t r i c h i n e l l o s i s j á r v á n y b a n n y e r t a d a t a i s z e r i n t e m b e r b e n e z a 3 . - 4 . h é t r e e s i k . E z e k az a d a t o k é s m á s s z e r z ő k v i z s g á l a t a i ( 9 , 14) i s i g a z o l j á k , h o g y az e g y e s á l l a t f a j o k o n n y e r t e r e d m é n y e k e t n e m l e h e t m i n d e n t o v á b b i n é l k ü l a m á s i k r a , v a g y az e m b e r r e v o n a t k o z tatni.
Összefoglalás A s z e r o l ó g i a i t a n u l m á n y s o r á n v i z s g á l t 5 5 4 s z e m é l y k ö z ü l 82 b i z o n y u l t t r i c h i n e l l a - f e r t ő z ö t t n e k . A z ö s s z e s í t e t t e r e d m é n y e k a l a p j á n a l e g j o b b d i a g n o s z t i k u s h a t á s f o k o t az I H A m u t a t t a , e z t a K K R , m a j d a M P követi. A z I H A a f e r t ő z é s utáni 2. héttől, a M P a 3 . - 5 . héttől, a K K R a 4 . - 5 . h é t t ő l j e l e z t e a s z e r o k o n v e r z i ó t , a m e l y a z 5. h é t v é g é r e g y a k o r l a t i l a g m i n d h á r o m m ó d s z e r r e l 100%-ban kimutathatóvá vált. A z akut esetek titerértékeinek átlaga I H A tesztben 1 : 2 1 8 7 , K K R - b a n 1 : 320 v o l t . A M P a f e r t ő z é s u t á n i 6 - 1 2 h ó n a p i g , a z I H A 9 - 1 8 h ó n a p i g adott megbízható eredményeket. A K K R - r e l i l y e n j e l l e g ű vizsgálat nem történt. A z I H A bizo n y u l t a l e g é r z é k e n y e b b n e k : 12 e s e t e t c s a k e z z e l l e h e t e t t k i m u t a t n i , S p e c i f i c i t á s a v i s z o n t g y e n gébb, m i n t a m á s i k két m ó d s z e r é . Egyes r e a k c i ó k aspecifikus voltát hemagglutináció g á t l á s -
s a l l e h e t e t t i g a z o l n i . A d i a g n o s z t i k a b i z t o n s á g á t f o k o z z a , ha többféle - m e t a b o l i k u s é s tikus - antigént, v a l a m i n t többféle szerológiai m ó d s z e r t alkalmazunk egyidejűleg.
szoma
Irodalom
1 . B O Y D E N , S . V . (1951): T h e a d s o r p t i o n of p r o t e i n s on e r y t h r o c y t e s t r e a t e d w i t h t a n n i c a c i d a n d s u b s e q u e n t h e m a g g l u t i n a t i o n by a n t i p r o t e i n s e r a . - J . e x p e r . M e d . , 9 3 . 1 0 7 - 1 2 0 . 2. D E S P O M M I E R , D . D . - M Ü L L E R , M . (1969): P a r t i c l e - a s s o c i a t e d , f u n c t i o n a l a n t i g e n s o f T r i c h i n e l l a s p i r a l i s l a r v a e and i m m u n i t y i n m i c e . - W i a d . P a r a z y t . , 15. 612. 3. G O L I N S K A , Z . - M A S L O W S K I , W . ( 1 9 7 4 ) : I m m u n o d i a g n o s t i c i n v e s t i g a t i o n s i n a f o c u s o f t r i c h i n e l l o s i s . - W i a d . P a r a z y t . , 20. 101-106. 4. J A C K S O N , G . J . (1959): F l u o r e s c e n t antibody s t u d i e s of T r i c h i n e l l a s p i r a l i s i n f e c t i o n s . J. i n f e c t . D i s . , 105. 9 7 - 1 1 7 .
-
5. K A G A N , I . G . ( 1 9 6 5 ) : Evaluation of routine serologic testing for parasitic diseases. A m e r . J . P u b l . H e a l t h , 55^ 1 8 2 0 - 1 8 2 9 .
-
6. K A G A N , I . G . - B A R G A I , U . ( 1 9 5 6 ) : Studies on the s e r o l o g y of t r i c h i n o s i s w i t h h e m a g g l u t i n a t i o n , agar d i f f u s i o n tests and p r e c i p i t i n r i n g t e s t s . - J . P a r a s i t . , 42. 2 3 7 - 2 4 5 . 7. K O Z A R , Z . - K O Z A R , M . ( 1 9 6 8 ) : D y n a m i c s a n d p e r s i s t e n c e o f a n t i b o d i e s i n t r i c h i n e l l o sis. - Wiad. Parazyt., LL_ 171-185. 8. L A M I N A , J . ( 1 9 7 0 ) : Z u r Diagnostik einer Infektion m i t T r i c h i n e l l a spiralis. (Experi mentelle Ergebnisse und Erfahrungen bei der T r i c h i n e n e p i d e m i e i n D i e z / L a h n i n S p ä t s o m m e r 1967.) - W i e n e r T i e r ä r z t l i c h e M o n a t s c h r i f t , 57. 137-145. 9. L A R S H ,
J.E.
Jr.,
(1963):
Experimental trichinellosis. -
Advances in Parasitology,
1.
213-286. 10. N A U M A N N , G . (1967): D i e S e r o d i a g n o s t i k d e r T r i c h i n e l l o s e . - A n g e w . P a r a s i t . ,
5^ 6 0 - 6 7 .
1 1 . N E M E S É R I , L . (1952): I m m u n b i o l ó g i a i e l j á r á s o k a t r i c h i n e l l o s i s m e g á l l a p í t á s á r a . gyar Állatorvosok Lapja, 178-181.
- Ma
12. N E M E S É R I , L . - V I Z Y , L . (1958): A t r i c h i n e l l o s i s m e g á l l a p í t á s a m i k r o p r e c i p i t á c i ó s k o m p l e m e n t k ö t é s i p r ó b á v a l . - M a g y a r Á l l a t o r v o s o k L a p j a , 1_3. 2 3 0 - 2 3 2 . 13. O L I V E R - G O N Z Á L E Z , J . (1940): T h e i n v i t r o a c t i o n of i m m u n e s e r u m a d u l t s o f T r i c h i n e l l a s p i r a l i s . - J. i n f e c t . D i s . , 67^ 2 9 2 - 3 0 0 .
on the l a r v a e
és
and
14. O T T E S E N , E . A . - S M I T H , T . K . - K I R K P A T R I C K , C _ H . (1975): I m m u n e r e s p o n s e to T r i c h i n e l l a s p i r a l i s i n the r a t . I . D e v e l o p m e n t of c e l l u l a r and h u m o r a l r e s p o n s e s d u r i n g c h r o n i c i n f e c t i o n . - I n t . A r c h . A l l e r g y a p p l . I m m u n o l . , 4 9 . 39 6 - 4 1 0 . 15. P L O N K A , W . S . - G A N C A R Z , Z . - J E D R Z E J E W S K A , B . (1974): S i m p l e h e m a g g l u t i n a t i o n test i n diagnosis of t r i c h i n e l l o s i s i n m a n . - W i a d . P a r a z y t . , 20. 89-93. 16. P R I C E , S . G . - W E I N E R , L . M . (1956): U s e o f h e m a g g l u t i n a t i o n i n the d i a g n o s i s o f t r i c h i n o s i s . - A m e r . J . c l i n . P a t h . , 26^ 1 2 6 1 - 1 2 6 5 . 17. R O T H , H . (1941): T h e i n v i t r o a c t i o n of t r i c h i n a l a r v a e i n i m m u n e s e r u m : a new p r e c i p i t i n t e s t i n t r i c h i n o s i s . - A c t a p a t h , et m i c r o b i o l . S c a n d , , 1 8 . 1 6 0 - 1 6 7 . 18. S A R L E S , M . P . (1938): T h e i n v i t r o a c t i o n o f i m m u n e r a t s e r u m on the n e m a t o d e , s t r o n g y l u s m u r i s . - J . i n f e c t . D i s . , 62^_ 3 3 7 - 3 4 8 .
Nippo-
19. S T A V I T S K Y , A . B . ( 1 9 5 4 ) : M i c r o m e t h o d s f o r the study of p r o t e i n s a n d a n t i b o d i e s . I . P r o c e d u r e and g e n e r a l a p p l i c a t i o n s of h e m a g g l u t i n a t i o n and h e m a g g l u t i n a t i o n - i n h i b i t i o n reactions with tannic acid and p r o t e i n - t r e a t e d r e d blood c e l l s . - J. I m m u n o l . , 72. 360-367.
2 0 . T A N N E R , C h . E . - G R E G O R Y , J . (1961): I m m u n o c h e m i c a l study of the antigens of T r i c h i n e l l a s p i r a l i s . I . I d e n t i f i c a t i o n and e n u m e r a t i o n of a n t i g e n s . - C a n a d . J , M i c r o b i o l . , 7j_ 4 7 3 - 4 8 1 . 21.
Z A W A D Z K A - J E D R Z E J E W S K A , B . - G A N C A R Z , Z . - P L O N K A , W . S. ( 1 9 7 2 ) : E v a l u a t i o n of the p a s s i v e h e m a g g l u t i n a t i o n t e s t f o r the d i a g n o s i s of t r i c h i n e l l o s i s i n m a n . - A c t a P a r a s i t . P o l o n . , 20. 421-427.
Érkezett:
1976. n o v e m b e r
25. SZTOJKOVNÉ dr.
D r . BÁNKI, Gy. MISLÓCZKY, M .
Budapest Fővárosi K Ö J Á L H - 1 1 3 8 B u d a p e s t , V á c i út 1 7 4 .
