Diagnostika genetických změn u papilárního karcinomu štítné žlázy Vlasta Sýkorová Oddělení molekulární endokrinologie Endokrinologický ústav, Praha
Nádory štítné žlázy
folikulární buňka
papilární (PTC) Konference DNA analýza V
folikulární (FTC)
parafolikulární buňka
anaplastický (ATC)
medulární (MTC) 4. 6. 2008
Papilární karcinom ¾ Nejčastější karcinom štítné žlázy (80-85 %) ¾ 4. – 6. dekáda ¾ Nízká agresivita ¾ Lokální růst nebo infiltrativní šíření do tkání a okolních orgánů ¾ Časté metastázy v regionálních lymfatických uzlinách, vzdálené metastázy vzácně (plíce) ¾ Příznivá prognóza (80-95% pacientů přežívá déle než 10 let) Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Černobylská havárie ¾ 26. duben 1986 ¾ Zvýšený výskyt PTC ¾ Radioaktivní jód ¾ Vliv ionizujícího záření • Zlomy v DNA • Trvalá genomická instabilita
Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Incidence nádorů štítné žlázy v ČR
Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Diagnostika PTC ¾ Laboratorní vyšetření hladin thyreoidálních hormonů a/nebo jejich volných frakcí (T3,T4,fT3,fT4,TSH) ¾ Sonografie štítné žlázy ¾ Aspirační biopsie tenkou jehlou cytologické vyšetření ¾ Pooperační histologické vyšetření Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Diagnostika PTC ¾ Papilární struktura
Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Typické jaderné znaky PTC Matnicová jádra
Psamomatózní tělíska
Intranukleární inkluze
Jaderné zářezy
Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Folikulární varianta PTC ¾ Jaderné znaky PTC + folikulární růst
Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Terapie PTC ¾ Lobektomie, subtotální a totální tyreoidektomie ¾ Radioaktivní jód
131I
¾ Hormonální supresivní léčba L-thyroxinem ¾ Doživotní dispenzarizace
Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
BRAF proto-onkogen ¾ Nejčastější mutace (29 – 83%) u PTC ¾ Cytoplasmatická serin/threoninová proteinkináza ¾ Buněčná proliferace, diferenciace a programovaná buněčná smrt ¾ RET-RAS-RAF-MEK-MAPK signalizační dráha ¾ Substituce T1799A v 15. exonu (Val600Glu) ¾ Zvýšení aktivity BRAF, která je nezávislá na RAS stimulaci ¾ Agresivnější forma nádoru, horší prognóza, lokální metastázy Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Cíl ¾ Zjištění výskytu BRAF mutace v české populaci ¾ Porovnání genotypu s fenotypem ¾ Retrospektivní studie pro zjištění vlivu černobylské havárie na vývoj PTC v České republice
Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Studovaný materiál ¾ Čerstvé zamražené tkáně PTC pacientů z ORL 2.LF UK a FN Motol ¾ Parafinové bločky • Fingerlandův ústav patologie, Hradec Králové • Ústav patologie 1.LF UK, Praha • Ústav patologie LF UP, Olomouc
¾ Vzorky biopsií z Endokrinologického ústavu
Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Soubor Papilární karcinom (249): • čerstvé tkáně – 100 • parafinové bločky – 141 • biopsie – 8 Medulární karcinom (20): • čerstvé tkáně – 5 • parafinové bločky - 15 Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Detekce BRAF mutace Izolace DNA: ¾ Trizolová izolace DNA (biopsie, čerstvé tkáně) ¾ QIAamp DNA Blood Mini Kitu (parafinové bločky) Detekce mutace: ¾ PCR ¾ SSCP (single strand conformation polymorphism) ¾ Přímá fluorescenční sekvenace (gelová, kapilární) (CEQ 8000, Beckman Coulter) Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
SSCP detekce
BRAF WT BRAF V600E
BRAF WT BRAF V600E BRAF V600E
Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Sekvenace BRAF mutace Bez mutace
BRAF mutace
Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Klinicko-patologické parametry ¾ Pohlaví ¾ Věk ¾ Velikost nádoru ¾ Varianty PTC ¾ Invaze ¾ Metastázy v lymfatických uzlinách ¾ Multifokalita ¾ Opouzdření nádoru ¾ Angioinvaze
Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Výsledky ¾ BRAF mutace u 84 z 249 PTC (33,7 %) ¾ Jeden homozygot, ostatní heterozygoti ¾ Větší velikost nádoru u pacientů s BRAF mutací (p=0,038) ¾ Vyšší věk u pacientů s BRAF mutací (p=0,068) ¾ MTC - žádná mutace
Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Výskyt BRAF mutace ¾ Před černobylskou havárií – 5,3 % ¾ Po roce 1986 – 36,1 % 100 18
Výskyt BRAF mutace (%)
80
60
23
51
61
10 6 40 5
7 31
11
20
25
1
Konference DNA analýza V
-2 00 7 20 06
-2 00 5 20 01
-2 00 0 19 96
-1 99 5 19 91
19 86
-1 99 0
0
4. 6. 2008
BRAF mutace u variant PTC ¾ Vzácná u folikulární varianty
Výskyt mutace (%)
100
44
80
29
21
60
29 14
40
21
14
20
4
0 Folikulární
p = 0,0004
Konference DNA analýza V
Folik. a klasická
Klasická BRAF WT
Ostatní varianty BRAF V600E
4. 6. 2008
Závěr ¾ BRAF mutace nalezena u 33,7 % PTC ¾Zvýšený výskyt po černobylské havárii ¾Vzácná u folikulární varianty ¾Větší velikost nádoru u pacientů s BRAF mutací ¾Žádná BRAF mutace u MTC – genetický marker pro PTC Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Poděkování Endokrinologický ústav RNDr. B. Bendlová, CSc. RNDr. Š. Dvořáková, Ph.D. Mgr. E. Václavíková MUDr. Z. Novák, CSc. Fingerlandův ústav patologie, Hradec Králové Prof. MUDr. A. Ryška, CSc., MUDr. J. Laco Ústav patologie a molekulární medicíny, 1. LF UK a FNM Prim. MUDr. D. Kodetová Ústav patologie 1. LF UK a VFN, Praha Doc. MUDr. J. Dušková, CSc. Klinika ORL a chirurgie hlavy a krku, 1. LF UK a FNM Doc. MUDr. J. Astl, CSc., MUDr. J. Veselý Chirurgická klinika, 2. LF UK a FNM Prof. MUDr. Jiří Hoch, CSc., MUDr. S. Smutný Klinika nukleární medicíny a endokrinologie, 2. LF UK a FNM Doc. MUDr. P. Vlček, CSc. Ústav patologie LF UP, Olomouc MUDr. A. Hlobilková, Ph.D. Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
Děkuji za pozornost
[email protected] Endokrinologický ústav Praha Konference DNA analýza V
4. 6. 2008
