CHORUS. RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS IgG

CHORUS

RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS IgG 81036

(36 testů)

Výrobce: DIESSE Diagnostica Senese Via delle Rose 10 53035 Monteriggioni (Siena) – Itálie

CHORUS Respiratory Syncytial Virus IgG

CZ

OBSAH 1

Úvod ................................................................................................................ 3

2

Princip testu ..................................................................................................... 3

3

Složení soupravy .............................................................................................. 5

4

Další potřebné vybavení k provedení testu ...................................................... 6

5

Skladování a stabilita komponent .................................................................... 7

6

Bezpečnost práce ............................................................................................. 7

7

Technické připomínky ...................................................................................... 8

8

Vzorky a jejich skladování ................................................................................ 9

9

Pracovní postup. .............................................................................................. 9

10 Validita testu.................................................................................................... 9 11 Hodnocení výsledků ....................................................................................... 10 12 Interpretace výsledků..................................................................................... 10 13 Charakteristika soupravy ................................................................................ 11 14 Literatura ....................................................................................................... 12 15 Vysvětlení symbolů ........................................................................................ 17

2/17

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


CZ

Kvalitativní stanovení IgG protilátek proti respiračně syncytiálnímu viru v lidském séru na přístrojích Chorus a Chorus TRIO pomocí jednorázového testovacího zařízení 1

Úvod

Respirační syncytiální virus (RSV) patří mezi hlavní původce akutní respirační infekce kojenců a malých dětí. K většině infekcí způsobených RSV dochází během prvních 6 až 12 měsíců života. Epidemie mohou mít sezónní charakter [1, 2]. RSV virus lze považovat agens s nejvyšší mírou úmrtností v raném dětství. Onemocnění probíhá pod obrazem závažné bronchitidy nebo pneumonie a může mít až letální průběh, zejména u jedinců s jinými patologickými stavy. Primární infekce probíhá jako běžné nachlazení, bronchitida s různým stupněm závažnosti až pneumonie. Onemocnění trvá zpravidla 7 až 12 dní. [3] RSV je unikátní tím, že je to jediný virový agens, který může způsobit závažné onemocnění během prvních týdnů (měsíců) života jedince, ačkoliv jsou séru novorozence stále ještě přítomny mateřské protilátky proti RSV. [4, 5] U dětí se infekce často opakují, nicméně opakující se infekce mají mírnější symptomy jako tracheobronchitida nebo infekce horních cest dýchacích. U dospělých osob má průběh onemocnění středně závažný charakter. Symptomy jsou horečka, apatie, zánět nosohltanu a kašel. RSV svůj název dostal od místa svého infekčního působení, ale i podle typu tkáňové kultury na které je kultivován. Taxonomicky se virus člení do čeledi Paramyxoviridae. RSV se vyskytuje ve dvou antigenních typech (A a B), které mají odlišné antigenní vlastnosti. [6, 7, 8] Na základě studie nukleotidové sekvence bylo prokázáno, že se liší zejména v povrchovém glykoproteinu G. [9] RSV se celosvětově rozšířen a infekce které u dětí způsobuje, mají ve všech klimatických pásmech podobnou symptomatologii. Každoroční epidemie mají náhlý nástup, poměrně rychlý průběh a lze predikovat jejich postup. [10] Zpravidla se objevují v zimních měsících (prosinec až duben) s kulminací v únoru nebo březnu. V tropických oblastech k těmto epidemiím dochází v období dešťů. V době těchto epidemií lze až 80 % všech bronchitid přičíst na vrub RSV. Několik epidemiologických studií prokázalo, že během epidemie cirkulují oba antigenní typy současně, ale s různým zastoupením v závislosti na sezóně a oblasti. Někteří autoři spojují antigenní typ A s vážnějším průběhem onemocnění. [11, 12] Průkaz specifických IgG protilátek umožňuje nejen sledování epidemiologického typu, ale potvrdí přítomnost probíhající infekce. Vysoký titr specifických IgG protilátek nebo zvýšení titru mezi dvěma po sobě jdoucími odběry (v časovém sledu 14 dní) potvrzuj probíhající infekci. Na druhé straně průkaz specifických IgG protilátek u dětí nemá klinický význam, zejména v jejich prvním roce života (přetrvávají mateřské protilátky). V případě akutní infekce u dětí jsou zpravidla 3/17

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


CZ

pozorovány specifické IgA protilátky (u akutní infekce má 87 % dětí má zvýšené titry IgA protilátek, pouze 20 % dětí má zvýšené titry IgG protilátek). [13]

2

Princip testu

Jednorázový test připravený k použití na přístrojích Chorus umožňuje stanovení IgG protilátek proti RSV. Test je založen na principu ELISA (Enzyme linked Immunosorbent Assay). Antigen složený purifikovaného a inaktivovaného RSV se naváže na pevnou fázi. V průběhu inkubace vzniká vazba mezi specifickými protilátkami vyšetřovaného séra a imobilizovaným antigenem. Po promytí, která eliminují nenavázané proteiny, se provádí inkubace s konjugátem. Konjugát je roztok s obsahem monoklonálních protilátek proti lidskému IgG značených křenovou peroxidázou. Po další sérii promytí, které odstraní nenavázaný konjugát, se přidá substrát reagující s peroxidázou. Intenzita modrého zbarvení, které vznikne, je přímo úměrné koncentraci specifických protilátek přítomných v testovaném lidském séru. Jednorázový test obsahuje všechny reagencie nutné k provedení testu na přístrojích Chorus. Výsledek je vyjádřen jako INDEX (poměr mezi naměřenou hodnotou absorbance testovaného vzorku a CUT-OFF hodnotou).

4/17

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


3

CZ

Složení soupravy

Souprava umožňuje provést 36 stanovení. Testovací jednotka

6 × 6 ks

6 samostatných balení po 6 jednotlivých jednorázových testech Kalibrátor

1 × 175 µl

Roztok lidského séra o známé koncentraci protilátek, obsahující Proclin a Gentamicin, v pracovním ředění Pozitivní kontrola

1 × 425 µl

Roztok lidského séra o známé koncentraci protilátek, obsahující Proclin a Gentamicin, v pracovním ředění Pracovní návod

1 ks

Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu a ze samostatných balení odeberte stanovený počet jednorázových testů pro vlastní analýzu. Zbylé jednorázové testy vraťte zpět do obalu se sušidlem (silikagel – gel obsahující oxid křemičitý), vytlačte vzduch a hermeticky uzavřete stisknutím uzávěru. Skladujte při +2 °C až +8 °C.

5/17

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


CZ

Obrázek 1 Schéma jednorázového testu

Pozice 8

Místo pro štítek s čárovým kódem

Pozice 7

Prázdná pozice

Pozice 6

Mikrotitrační jamka s potaženým antigenem purifikovaný a inaktivovaný RSV

Pozice 5

Nepotažená mikrotitrační jamka

Pozice 4

TMB Substrát

0,35 ml

Tetrametylbenzidin 0,26 mg/ml a 0,01% H2O2 stabilizovaný v 0,05 mol/l citrátového pufru (pH 3,8) Pozice 3

Ředicí roztok vzorků

0,35 ml

Proteinový roztok obsahující 0,05% fenol, 0,02% Bronidox a indikátor přítomnosti séra Pozice 2

Konjugát

0,35 ml

Roztok monoklonálních protilátek značených peroxidázou ve fosfátovém pufru obsahujícím 0,05% fenol a 0,02%Bronidox Pozice 1

Prázdná jamka Do této jamky se přidá neředěné vyšetřované sérum

4

Další potřebné vybavení k provedení testu

Tyto reagencie nejsou součástí balení. Promývací roztok 83606 Čistící roztok 2000 83609 Sanitační roztok 83604 –83608 Ředicí roztok vzorků/ Negativní kontrola 83607 Přístroj Chorus/ Chorus Trio Destilovaná nebo deionizovaná voda Běžné laboratorní sklo: odměrné válce, zkumavky atd. Mikropipety na přesný odběr 50 až 200 μl roztoku Jednorázové rukavice Roztok chlornanu sodného (5 %) Nádoby na potenciálně infekční materiál 6/17

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


5

CZ

Skladování a stabilita komponent

Reagencie se musí skladovat při teplotě +2 °C až +8 °C. V případě skladování při nesprávné teplotě se musí zopakovat kalibrace a validovat test pomocí kontrolního séra (viz 10, Validita testu). Datum exspirace je uvedeno na každé komponentě a na štítku soupravy. Po otevření mají reagencie omezenou stabilitu.  Jednorázový test – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C  Pozitivní kontrola – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C  Kalibrátor – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C

6

Bezpečnost práce

Souprava je určena pouze pro diagnostické účely in vitro. Tato souprava obsahuje materiály lidského původu, které byly testovány a vykázaly negativní výsledky při použití metod schválených FDA pro stanovení přítomnosti HbsAg a anti-HIV-1, anti-HIV-2 a anti-HCV protilátek. Protože však žádný diagnostický test nemůže poskytnout úplnou záruku, že infekční agens nejsou přítomna, je třeba s veškerým materiálem lidského původu zacházet tak, jako by byl potenciálně infekční. Při zacházení s materiálem lidského původu je nutné dodržovat všechny místní předpisy týkající se bezpečnosti práce. Likvidace zbytků pro provedení testu S použitými vzorky sér, kalibrátory, jednorázovými testy je třeba zacházet jako s potenciálně infekčním materiálem a likvidovat je v souladu s platnou legislativou. Zdravotní a bezpečnostní informace 1. Nepipetujte ústy. Používejte rukavice na jedno použití a ochranu očí. Po umístění jednorázového testu do přístroje Chorus si důkladně umyjte ruce. 2. Některé reagencie obsahují nízké koncentrace škodlivých nebo dráždivých látek Pokud se některá s těchto reagencií dostane do kontaktu s kůží nebo očima, důkladně omyjte dané místo vodou.  Konjugát obsahuje fenol  TMB Substrát je roztok kyseliny 3. Neutralizované kyseliny nebo jiný tekutý odpad by se měl dekontaminovat přidáním dostatečného množství chlornanu sodného tak, aby konečná koncentrace dosahovala minimálně 1,0 %. Pro zajištění účinné dekontaminace ponechejte tento odpad 30 minut v 1% chlornanu sodném. 4. Rozlitý potenciálně infekční materiál je třeba okamžitě odstranit pomocí absorpčního papírového ručníku a kontaminovanou oblast umýt, například 1,0% chlornanem sodným, a to předtím, než budete v práci pokračovat. Chlornan 7/17

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


CZ

sodný nepoužívejte na rozlité tekutiny s obsahem kyseliny, ty musíte nejprve otřením vysušit. 5. Materiály použité k čištění potřísněných povrchů, včetně rukavic, se musí likvidovat jako potenciálně životu nebezpečný odpad. Materiály obsahující chlornan sodný nevkládejte do autoklávu.

7

Technické připomínky

Pro získání spolehlivých výsledků je nutné přesné dodržování návodu. Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu (+18 °C až +30 °C) a test proveďte do 60 minut. Zkontrolujte a dodržujte následující informace:  Substrát obsažený v pozici 4 je bezbarvý. Nepoužívejte jednorázové testy, které toto nesplňují.  Testovaný vzorek je dokonale na dně jamky rozprostřen.  Zkontrolujte zda-li všechny reagencie v testu jsou přítomny a jestli není jednorázový test poškozen. Nepoužívejte testy, které nemají reagencie.  Jednorázové testy jsou určeny pro použití na přístroji Chorus. Důkladně dodržujte pokyny pro použití a řiďte se návodem k obsluze přístroje.  Chorus přístroj správně nastavený (viz návod k obsluze).  Neměňte čárový kód umístěný na držadle jednorázového testu. Nepoužívejte testy s poškozenými štítky s čárovými kódy.  Defektní čárové kódy lze vložit do přístroje manuálně.  Během skladování a použití nevystavujte jednorázové testy silnému světlu ani výparům chlornanu.  Použití silně hemolytických vzorků nebo vzorků s mikrobiální kontaminací může vést k nereprodukovatelným výsledkům.  Než vložíte jednorázový test do přístroje, zkontrolujte, že reakční jamka neobsahuje cizí tělesa.  Pipetujte sérum (50 µl) do pozice 1 jednorázového testu (viz obrázek 1).  Nepoužívejte jednorázový test po uplynutí expiračního data.  Ujistěte se, že na přístroj je napojen Promývací roztok 83609.

8/17

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


8

CZ

Vzorky a jejich skladování

Jako vzorek k vyšetření může být použito sérum, získané odběrem žilní krve. Zachází se s ním v souladu se všemi opatřeními předepsanými správnou laboratorní praxí. Čerstvé sérum lze skladovat 4 dny při +2 °C až +8 °C. Séra je možné uchovávat při -20 °C a lze je rozmrazit maximálně 3krát. Neskladujte vzorky v mrazácích s funkcí vlastního rozmrazování. Rozmrazené vzorky je potřeba před použitím důkladně protřepat. Kvalita vzorku může být vážně narušena kontaminací, která vede k chybným výsledkům. Nepoužívejte silně lipemické, ikterické, hemolytické nebo kontaminované vzorky. Test nelze použít na lidskou plazmu.

9

Pracovní postup.

1. Otevřete balení, vyjměte požadovaný počet jednorázových testů a zbytek uzavřete zpět do sáčku poté, co vytlačíte vzduch. 2. Zkontrolujte stav jednorázového testu (viz 7 Technické připomínky). 3. Pipetujte 50 μl neředěného séra do pozice 1 každého testu. Při každé změně šarže soupravy použijte jednorázový test pro kalibraci. 4. Jednorázový test umístěte do přístroje. Proveďte kalibraci (je-li nutná) a vlastní stanovení podle pokynů uvedených v návodu k obsluze Chorus přístroje.

10 Validita testu Pomocí kontrolního séra ověřte správnost získaných výsledků. Použijte je v souladu s instrukcemi uvedenými v návodu na obsluhu. Pokud test ukáže, že se hodnota kontrolního séra pohybuje mimo přijatelné rozmezí, kalibraci je třeba opakovat. Předchozí výsledky budou automaticky opraveny. Pokud je výsledek kontrolního séra i nadále mimo přijatelné rozmezí, kontaktujte prosím technologickou podporu: Tel: +39-0577-587121 Fax +39-0577-587122 e-mail [email protected]

9/17

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


CZ

11 Hodnocení výsledků Přístroj Chorus vyjadřuje výsledky jako INDEX (je to poměr mezi naměřenou hodnotou absorbance testovaného vzorku a CUT-OFF hodnotou). Hodnocení výsledků je popsáno v tabulce (Tabulka 1). Tabulka 1 Hodnocení výsledků INDEX

Hodnocení

menší než 0,9

negativní

0,9 až 1,1

hraniční

větší než 1,1

pozitivní

V případě hraničního výsledku zopakujte test. Pokud zůstává test nadále hraniční, je vhodné opakovat z nového odběru, který bude proveden s určitým časovým odstupem (1 až 2 týdny.)

12 Interpretace výsledků Test nelze použít jako jediné kritérium pro stanovení klinické diagnózy. Negativní výsledek testu nevylučuje probíhající infekci. Vzorky sér odebrané v průběhu akutní fáze infekce mohou vykazovat negativní výsledky, protože sérokonverze může trvat 3 až 4 týdny, než se projeví. V případě pozitivních výsledků se doporučuje analyzovat druhý vzorek odebraný za 8 až 14 dní, testovat jej souběžně s prvním odběrem a stanovit tak nárůst titru IgG protilátek. Serologický nález je třeba vždy interpretovat pouze v kontextu s výsledky ostatních laboratorních testů a s klinickým obrazem pacienta.

10/17

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


CZ

13 Charakteristika soupravy 13.1 Analytická specifita Bylo testováno 7 vzorků obsahující potenciálně interferující látky:  Triglyceridy (2 vzorky)  C-reaktivní protein (2 vzorky)  Revmatoidní faktor (2 vzorky)  Bilirubin (1 vzorek) Bylo zjištěno, že přítomnost specifických IgG protilátek neovlivní výsledek testu. 13.2 Diagnostická citlivost a specifita Pro stanovení citlivosti a specifity bylo využito srovnání výsledků na jiné referenční soupravě. Při srovnání bylo testováno 104 vzorků. Výsledky srovnání jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 2). Tabulka 2 Výsledky srovnání zařazení testovaných vzorků Referenční souprava DIESSE

Pozitivní

Negativní

Celkem

Pozitivní

69

3

72

Negativní

1

31

32

Celkem

70

34

104

Souprava vykazuje 98,6% specifitu (CI95% 92,3 až 99.8) a 91,2% citlivost (CI95% 77 až 99). 13.3 Přesnost měření  Intra-assay: testované vzorky byly změřeny 16krát (na 3 různých šaržích); průměr naměřených hodnot, směrodatná odchylka a variační koeficient (%) u všech tří šarží jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 3). Tabulka 3 Intra-assay stanovení

11/17

Šarže

Opakování vzorku

Průměr naměřených hodnot

Směrodatná odchylka

Variační koeficient (%)

617-S

16

1,6

0,13

8,1

618-S

16

1,5

0,16

10,7

619-S

16

1,5

0,14

9,3

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


CZ

 Inter-assay a návaznost mezi šaržemi: testované vzorky byly analyzovány v třech po sobě jdoucích dnech (na 3 různých šaržích); průměr naměřených hodnot, směrodatná odchylka a variační koeficient (%) každého vzorku jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 4). Tabulka 4 Inter-assay stanovení a návaznost mezi šaržemi Šarže

617-S

618-S

619-S

Vzorek

Průměr naměřených hodnot (INDEX)

Průměrná hodnota

Směrodatná odchylka

Variační koeficient (%)

Den 1

Den 2

Den 3

1

0,2

0,2

0,2

0,2

0

-

2

1

1,1

0,9

1

0,1

10

3

1,6

2

1,8

1,8

0,2

11,1

1

0,2

0,

0,3

0,3

0,06

20

2

1

1,1

1,1

1,1

0,06

5,5

3

1,7

2,2

1,9

1,9

0,25

13,2

1

0,2

0,2

0,3

0,2

0,06

30*

2

0,9

0,9

1,1

1

0,12

12

3

1,7

1,7

1,9

1,8

0,12

6,7

*Artefakt způsobený známou chybou variačního koeficientu, který je extrémně citlivý i na velmi malou změnu v průměrné hodnotě, pokud je průmětná hodnota blízko nule.

12/17

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


CZ

14 Literatura 1. K. Krasinski. 1985. Severe respiratory syncytial virus infection: clinical features, nosocomial acquisition and outcome. Pediatr. Infect. Dis. 4: 250-257. 2. W.V. La Via, M.I. Marks, H.R. Stutman. 1992 Respiratory syncytial virus puzzle: clinical features, pathophysiology, treatment and prevention. J. Pediatr. 121: 503-510. 3. C.B.Hall, R.G. Douglas, J.M. Geiman. 1976. Respiratory syncytial virus infection in infants: quantitation and duration of shedding. J. Pediatr. 89:11-15. 4. T.M. De Sierra, M. Kumar, E.T. Wasser, R.B. Murphy, E.K. Subbarrao. 1993. Respiratory syncytial virus-specific immunoglobulins in preterm infants. J. Pediatr. 122: 787-791. 5. B.R. Murphy, D.W. Alling, M.H. Snyder, E.E. Walsh.1986. Effect of age and preexisting antibody on serum antiboby response of infants and children to the F and G glycoproteins during respiratory syncytial virus infection. J. Clin. Microb. 24 : 894.898. 6. L..J. Anderson, J.C. Hierholzer, C. Tsou. 1985. Antigenic characterization of respiratory syncytial virus strains with monoclonal antibodies. J. Infect. Dis. 151 : 626-632 7. H.B. Gimenez, P. Cash, T. Melvin. 1984. Monoclonal antibodies to human respiratory syncytial virus and their use in comparison of different virus isolates. J. Gen. Virol. 65 :963-971. 8. M.A. Mufson, C. Orwell, B. Rafner. 1985. Two distinct subtype of human respiratory virus. J. Gen. Virol. 66 :2111-2114 9. P.R. Johnson, P.L. Collins.1990. Sequence comparison of the phosphoprotein mRNAs of antigenic subgroups A and B of human respiratory syncytial virus identifies a higly divergen domain inthe predicted protein. J. Gen. Virol. 71 :481485. 10. W.P. Glezen, F.W. Denny F.W. 1973. Epidemiology of acute lower respiratory disease in children. N. Engl.J. Med. 288 :498-50 11. C.B. Hall, E.E. Walsh, K.C. Schnabel. 1990. The occurrence of group A and B of respiratory syncytial virus over 15 years : the associated epidemiologic and clinical characteristics in hospitalized And ambulatory children. J. infect. Dis. 162 :1283 :1290 12. K.M. Mc Connochie, C.B. Hall, E.E. Walsh. 1990. Variation in severity of respiratory syncytial virus infection with subtype. J. Pediatr. 117 :52-62. 13. MJ. Meddens, P. Herbrink,n J. Lindeman, WC van Dijk. 1990. Serodiagnosis of respiratory syncytial virus (RSV) infection in children as measured by detection

13/17

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


CZ

of RSV-specific immunoglobulins G, M and immunosorbent assay. J Clin Microbiol 28(1):152-5

14/17

A

with

enzyme-linked

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


CZ

Poznámky

15/17

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


CZ

Poznámky

16/17

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014


CZ

15 Vysvětlení symbolů Datum výroby Použít do data Nepoužívat opakovaně Čtěte přiložené dokumenty Výrobce Počet testů Skladovací teplota Čtěte návod k použití Biologická rizika Katalogové číslo Diagnostický zdravotnický prostředek in vitro Číslo šarže

Diesse Diagnostica Senese Via delle Rose 10 53035 Monteriggioni (Siena) – Italy Tel. 0577-587111 17/17

Rif. IO-09/251-C; IFU 81036 – Ed. 31.07.2014

CHORUS. RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS IgG

Recommend Documents