8
BAB II METODE PENELITIAN A. Kategori Penelitian Penelitian ini dilakukan dengan metode eksperimental
B. Variabel Penelitian 1.
Variabel bebas dalam penelitian ini adalah variasi konsentrasi minyak atsiri nilam.
2.
Variabel tergantung dalam penelitian ini adalah daya proteksi repelan dan stabilitas fisik sediaan krim (organoleptik, uji viskositas, daya sebar, pH dan daya lekat).
3.
Variabel kendali dalam penelitian ini adalah asal tanaman nilam, jenis nyamuk Aedes aegypti, bobot sediaan krim yang dioleskan, dan luas area pengolesan. C. Alat dan Bahan
1.
Alat Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Viskosimeter (Rion
VT-04), piknometer, alat-alat gelas (pyrex), stopwatch, mortir, gelas objek, pH meter (HANA Instruments), neraca analitik (AdventurerTM OHAUS). 2.
Bahan Bahan yang digunakan adalah minyak atsiri nilam (UD. Sedah Sari Boyolali),
metil paraben, gliserin, asam stearat, setil alkohol, stearil alkohol, trietanolamin, dan akuades dari Laboratorium Fakultas Farmasi UMS bagian Formulasi, nyamuk Aedes aegypti (B2P2VRP Salatiga).
D. Tempat penelitian Formulasi sediaan krim dilakukan di Laboratorium Formulasi Sediaan Non Solid Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Uji aktivitas repelan dilakukan di Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Vektor dan Reservoir Penyakit (B2P2VRP), Salatiga. 8
9
E. Jalannya Penelitian 1.
Destilasi Minyak Atsiri Nilam Tanaman nilam didapatkan dari UD. Sedah Sari, Boyolali. Minyak atsiri
nilam didestilasi dengan cara penyulingan air dan uap (water and steam distillation) menggunakan alat ketel stainless. 2.
Uji Sifat Fisik Minyak Atsiri Nilam Pengujian sifat fisik minyak atsiri dilakukan di LPPT 1 Universitas Gadjah
Mada Yogyakarta yang meliputi pengukuran bobot jenis, penetapan indeks bias, dan identifikasi kandungan senyawa. Pengukuran bobot jenis dilakukan dengan menggunakan piknometer. Mula-mula piknometer dibersihkan dahulu, kemudian ditimbang piknometer kosong. Minyak atsiri ditambahkan hingga penuh dan ditutup. Piknometer direndam dalam air dingin hingga suhunya 2ºC kemudian diangkat dan suhu dibiarkan naik perlahan-lahan hingga tercapai suhu ruang. Air atau minyak yang masih menempel pada dinding piknometer sebelumnya dilap terlebih dahulu kemudian ditimbang (Guenther, 1987). Penetapan indeks bias minyak atsiri dilakukan dengan menggunakan refraktometer dan untuk melihat kandungan senyawa tertinggi dari minyak atsiri nilam dilakukan dengan menggunakan kromatografi gas. 3.
Pembuatan Krim Repelan tipe M/A Formula krim dibuat dengan mengacu pada formula vanishing cream dari
The Theory and Practice of Industrial Pharmacy (Idson dan Lazarus, 2008). Modifikasi dilakukan dengan mengganti kalium hidroksida dengan trietanolamin 2 g, pengawet yang digunakan hanya metil paraben 0,2 g serta dilakukan pula modifikasi konsentrasi bahan-bahan lain yang digunakan. Formula sebelum dimodifikasi dapat dilihat pada tabel 2 dan formula setelah dimodifikasi dapat dilihat pada tabel 3. Tabel 2. Rancangan formula krim (Idson dan Lazarus, 2008) Bahan (g) Formula 1 Metil paraben 0,1 Propil paraben 0,05 Asam Stearat 13 Setil alkohol 1 Stearil alkohol 1 Gliserin 10 Kalium hidroksida 0,9 Akuades ad 100
10
Tabel 3. Rancangan formula krim repelan tipe M/A yang dimodifikasi Bagian
Bahan (g)
A
Minyak Nilam Asam Stearat Setil alcohol Stearil alkohol
F1 0 24 3 2
F2 4 24 3 2
B
Metil paraben Gliserin TEA Akuades ad
0,4 28 2 200
0,4 28 2 200
Formula F3 8 24 3 2 0,4 28 2 200
F4 12 24 3 2
F5 16 24 3 2
0,4 28 2 200
0,4 28 2 200
Formula terdiri dari dua bagian yaitu bagian A dan B. Bagian A asam stearat, setil alkohol, dan stearil alkohol dilelehkan pada suhu 70ºC, sedangkan bagian B trietanolamin, gliserin, metil paraben, akuades ditempatkan pada wadah yang berbeda dan dipanaskan pada suhu 70ºC. Minyak nilam dicampurkan dalam fase minyak yang telah dilelehkan. Fase air ditambahkan pada fase minyak perlahan-lahan sembari diaduk. Pencampuran kedua fase menggunakan mortir panas hingga homogen dan terbentuk masa krim yang baik. Krim dimasukkan dalam wadah dan ditutup rapat. 4.
Evaluasi Sediaan Krim Repelan
a.
Uji Organoleptis Uji organoleptis dilakukan dengan mengamati secara visual terhadap
warna, bau, dan bentuk dari kelima formula krim. b.
Uji Viskositas Uji viskositas krim dilakukan dengan menggunakan alat viskometer (Rion
Rotor VT-04). Rotor yang telah dipasangkan pada viskometer diletakkan ke dalam wadah berisi krim. Viskometer dihidupkan maka rotor akan berputar dan jarum bergerak ke kanan ditunggu hingga stabil. Jarum pada viskometer menunjukkan angka viskositas untuk sediaan krim (Marchaban dan Sulaiman, 2014). c.
Uji Daya Sebar Krim ditimbang 0,5 gram pada cawan petri yang telah diberi skala,
kemudian cawan petri yang lain ditimbang bobotnya dan ditempatkan diatas olesan krim, dicatat diameternya. Beban seberat 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350
11
dan 400 g ditambahkan di atas cawan petri. Tiap penambahan beban didiamkan 1 menit dan dicatat diameter penyebaran krim. Penambahan beban dilakukan hingga didapat diameter penyebaran yang konstan (Marchaban dan Sulaiman, 2014). d.
Uji Derajat Keasaman (pH) Uji derajat keasaman pH dilakukan menggunakan pH meter. Sebelum
digunakan pH meter dikalibrasi terlebih dahulu menggunakan larutan dapar pH 7 dan pH 4. Elektroda dimasukkan dalam wadah berisi krim. Angka yang tertera pada pH meter menunjukkan pH sediaan krim. e.
Uji daya lekat Krim ditimbang 0,25 gram dan diletakkan pada gelas objek. Gelas obyek
lain ditambahkan diatas krim. Beban seberat 1 kg ditambahkan diatas gelas obyek dan didiamkan 5 menit. Gelas obyek dipasangkan pada alat pengujian daya lekat. Beban seberat 80 g dilepaskan dan dicatat waktu pelepasan kedua gelas objek (Marchaban dan Sulaiman, 2014). 5. Uji Aktivitas Anti nyamuk Pengujian aktivitas nyamuk menggunakan kedua tangan probandus. Tangan kiri probandus dioleskan krim percobaan 1 gram dan tangan kanan probandus sebagai kontrol tidak dioleskan krim. Kedua tangan probandus sebelum dioleskan krim harus bebas dari kotoran dan zat kimia, maka dibersihkan dengan sabun kemudian didiamkan. Nyamuk betina sejumlah 50 ekor dalam kondisi lapar ditempatkan pada kandang berbentuk kubus dengan salah satu sisinya diberi 2 lubang. Suhu kandang diatur yaitu 24 - 32ºC dan kelembaban kandang yaitu 6070%. Tangan probandus dimasukkan pada lubang kandang nyamuk. Uji dilakukan pada jam pertama hingga jam ketiga dengan waktu pemaparan 5 menit/periode. Nyamuk diganti baru tiap perlakuan 3 periode efektif (Buwono dan Busri, 2009). Jumlah gigitan nyamuk pada kulit dihitung selama 5 menit baik kontrol maupun perlakuan, kemudian dikonversikan dalam rumus daya proteksi: DP =
x 100 % …………………………………………………………. (1) Keterangan : A = jumlah nyamuk yang hinggap pada tangan kiri dan B =
jumlah nyamuk yang hinggap pada tangan yang diberi krim repelan.
12
6. Uji Stabilitas Krim Uji stabilitas krim dilakukan dengan mendiamkan krim selama 2 bulan pada suhu ruang. Pengamatan sifat fisik dilakukan tiap minggu dengan memperhatikan organoleptis, pH, viskositas, daya lekat, dan daya sebar sediaan krim. F. Teknik Analisis Evaluasi sifat fisik dan stabilitas fisik krim yang meliputi daya sebar, daya lekat, dan pH serta aktivitas repelan dianalisis menggunakan anova satu jalan yang kemudian dilanjutkan dengan uji t-LSD dengan taraf kepercayaan 95 %. Pengujian viskositas krim menggunakan analisis non parametrik yaitu kruskalwallis test dan kemudian dilanjutkan dengan Mann Whitney test. Analisis akan memberikan hasil yang signifikan apabila p < 0,05.
