32 BAB 6 RINGKASAN PENELITIAN Validasi metode analisis merupakan suatu proses untuk menentukan keabsahan dan pertanggungjawaban suatu hasil percobaan di laboratorium, tetapi dalam proses dan perhitungannya membutuhkan waktu yang tidak sedikit serta membutuhkan tingkat akurasi perhitungan yang baik, maka seiring dengan perkembangan teknologi informasi dibuat suatu perangkat lunak komputer yang bernama Sistem Validasi Metode Analisis Kromatografi (SVMAK) yang dapat menghitung validasi metode lebih cepat dan akurat. Dalam proses validasi ini, perangkat lunak SVMAK dirancang dengan metode analisis komparatif dengan menggunakan kurva kalibrasi yang berdasarkan pada tiga jenis penggunaan metode baku, yaitu baku luar, baku dalam, dan baku tinambah. tahapan validasi dihitung berdasarkan ketiga jenis metode baku tersebut. Perangkat lunak dibangun dan diuji sistem dan keakuratan perhitungannya dengan sistem black box testing sesuai dengan spesifikasi perangkat lunak validasi yang diharapkan dengan menggunakan perangkat lunak pemograman Microsoft Visual Basic 6.0 dan Microsoft Access sebagai media penyimpanan data. Dari hasil perancangan ini diperoleh perangkat lunak SVMAK yang dapat menghitung tahapan validasi dengan lebih cepat dan menunjukkan kesesuaian hasil perhitungan dengan data uji hasil penelitian yang telah divalidasi serta hasil perhitungan manual. Adapun saran untuk pembuatan perangkat lunak SVMAK ini adalah diperlukannya pengembangan perangkat lunak SVMAK ini sehingga diperoleh perangkat lunak yang memiliki cakupan yang lebih luas selain dari kromatografi, perhitungan yang lebih akurat dan meminimalisir kesalahan atau cacat program.
33 PUSTAKA
Snyder. L.R, Joseph J.K and Joseph L.G, 1997, Practical HPLC Method Development, 2nd ed., John Willey and sons, Inc., New York, 654 – 664, 687 – 706 Schelfler, William C., 1978, Statistika untuk Biologi, Farmasi, kedokteran, dan ilmu yang bertautan, Penerbit ITB, Bandung, 168 – 191 Swartz, M.E, and Ira S, Krull, 1997, Analytical Method Development and Validation, Marcel Dekker, Inc., New York, 53 – 71 Novian, Agung, 2004, Panduan Microsoft Visual Basic, Penerbit Andi, Bandung, 1-5 Ibrahim, Slamet, 2007, Makalah Pengembangan dan Validasi Metode Analisis, Sekolah Farmasi – ITB, Bandung, 1 – 15. Johnson, E.L., and Stevenson, R., 1991, Dasar Kromatografi Cair, Terjemahan, K. Padmawinata, Penerbit ITB, Bandung, 232 – 236, 244 – 250. Aptech Worldwide, 2002, Database Design with MS Access 2000, Aptech Worldwide, New Jersey, 3 - 8. The United States Pharmacopeial Convention, 1999, The United States Pharmacopeia, 24th Ed., United States Pharmacopeial Convention Inc., Rockville, 2149 – 2152.
LAMPIRAN A PERSYARATAN VALIDASI DAN KRITERIA PENERIMAAN KARAKTERISTIK VALIDASI
Tabel 1.1 Tabel Persyaratan Validasi untuk Tiap Jenis Metode Analisis Metode Pengujian / Analisis
Parameter Validasi
Kategori I
Kategori II
Kategori II
Kategori
Kategori
(Kuantitatif)
(Uji Batas)
III
IV
Linieritas
Ya
Ya
Tidak
Ya
Tidak
Akurasi
Ya
Ya
*
Ya
Tidak
Presisi
Ya
Ya
Tidak
Ya
Tidak
Rentang
Ya
Ya
*
Ya
Tidak
Spesifisitas
Ya
Ya
Ya
Ya
Ya
Tidak
Ya
Ya
*
Tidak
Tidak
Ya
Ya
*
Tidak
Ya
Ya
Ya
*
Tidak
Batas Deteksi Batas Kuantisasi Robustness
* Dapat dipersyaratkan tergantung sifat metode
Keterangan : Kategori I
Metode analisis untuk penetapan kadar komponen utama dalam bahan baku obaat atau bajhan aktif (termasuk pengawet) dalam produk farmasi Metode analisis untuk penetapan cemaran dalam bahan baku obat atau
Kategori II
hasil degradasi dalam produk farmasi, metode ini terdiri dari penetapan kuantitatif dan uji batas
Kategori III Kategori IV
Metode analisis untuk penetapan karakteristik sediaan (disolusi, pelepasan obat, dll) Metode Analisis untuk identifikasi
34
LAMPIRAN A (Lanjutan)
Tabel 1.2 Tabel Kriteria Penerimaan Linieritas dan Rentang Uji Penetapan bahan baku obat dan sediaan Farmasi
Level
Rentang 20 sampai 120 %
6
R ≥ 0,999 %y intercept ≤ 2,0 % Vxo ≤ 2,0 %
10 – 80 % Disolusi
Kriteria Penerimaan
5-8
R ≥ 0,99 %y intercept ≤ 5,0 % Vxo ≤ 5,0 %
Cemaran
5
Cleaning Validation
5
LOQ sampai 2 %
R ≥ 0,98 Vxo ≤ 5,0 %
LOQ sampai 20 %
R ≥ 0,98 Vxo ≤ 5,0 %
Keterangan : R = Koefisien korelasi Vxo = Koefisien Variansi garis regresi %y intercept = y-intercept / respon detektor x 100 %
35
LAMPIRAN A (Lanjutan)
Tabel 1.3 Tabel Kriteria Penerimaan Akurasi (Kecermatan) Uji
Level
Rentang
Kriteria Penerimaan
Konsentrasi Penetapan kadar bahan 3 dengan 3 kali baku obat dan sediaan
70, 100, 130 %
pengujian
102,0 %) rata-rata
Farmasi Disolusi
Cemaran
± 2 % ( 98,0 % untuk setiap sampel
3 dengan 3 kali
20 – 30 %
± 5 % ( 95,0 % -
pengujian
50 – 80 %
105,0 %) rata-rata
100 – 130 %
untuk setiap sampel
1 dengan 3 kali
LOQ - 1 % (kadar
± 20 % ( 80,0 % -
pengujian
analit)
120,0 %) rata-rata untuk setiap sampel
Cleaning Validation
3 dengan 3 kali
LOQ – 20 kali
± 50 % ( 50,0 % -
pengujian
LOQ
150,0 %) rata-rata untuk setiap sampel
ICH merekomendasikan, menganalisis sampel menggunakan 9 kali penentuan, minimal 3 kali level konsentrasi ( 3 x 3 pengujian)
36
LAMPIRAN A (Lanjutan) Tabel 1.4 Tabel Kriteria Penerimaan Presisi (Keseksamaan) Pengujian
Repeatabilitas dan Presisi Antara Level dan Rentang
Kriteria
Penetapan kadar /
3 level 3 kali 70, 100, 130 %
RSD ≤ 2,0 %
keseragaman kandungan
atau 6 penetapan pada 100 %
Disolusi
12 sampel kadar rendah
RSD ≤ 20,0 %
Cemaran (kadar rendah)
6 Replikat pada LOQ
RSD ≤ 20,0 %
Cleaning Validation
6 Replikat pada 10 LOQ
RSD ≤ 20,0 %
Keterangan : RSD = Relatif Standard Deviation atau Simpangan Baku Relatif LOQ = Limit of Quantitation
37
LAMPIRAN B PERANCANGAN TAMPILAN DAN STRUKTUR PERANGKAT LUNAK SVMAK
Gambar 3.1 Tampilan Antarmuka Perangkat Lunak SVMAK Secara Garis Besar
LAMPIRAN B
38
LAMPIRAN B (Lanjutan)
Gambar 3.2 Struktur Modul Perangkat Lunak SVMAK
39
LAMPIRAN B (Lanjutan)
Gambar 3.26 Diagram Alur Validasi Linieritas Metode Kalibrasi Baku Luar
40
LAMPIRAN B (Lanjutan)
Gambar 3.27 Diagram Alur Validasi Akurasi Presisi Metode Kalibrasi Baku Luar
41
LAMPIRAN B (Lanjutan)
Gambar 3.28 Diagram Alur Validasi Linieritas Metode Kalibrasi Baku Dalam
42
LAMPIRAN B (Lanjutan)
Gambar 3.29 Diagram Alur Validasi Akurasi Presisi Metode Kalibrasi Baku Dalam
Start
N=0 Sigma C = 0 Sigma R = 0
Masukkan CB dan RB
Masukkan C dan R
N=N+1
Ya
Sigma R/RB = Sigma R/RB + R/RB Sigma C = Sigma C + C
Ada tambahan data?
N=1
Perhitungan nilai Rasio Respon (k)
Tidak N >1 Perhitungan Statistika
k = (R/RB) / (C/CB) Data Perhitungan Statistika
R/RB Hasil Pengukuran
Perhitungan C berdasarkan nilai k
Persamaan Garis regresi Linier
Konsen (Cu) Hasil pengukuran
% Recovery Cu / Cs x 100%
% Recovery
Simpangan Baku dari % Recovery
Koefisien Variansi (Kv) = S / X^ x100%
Apakah K <= 21 - log C
Tidak
Ya
Valid
End
43
Tidak Valid
LAMPIRAN B (Lanjutan)
Gambar 3.30 Diagram Alur Validasi Spesifisitas Start
Waktu Retensi (t) dan Lebas Alas Puncak (W)
Faktor Kapasitas k` = (tR - t 0) / t 0
Resolusi =2(tR1 - tR2) / W1 - W2
Angka Lempeng (N) Faktor Selektivitas
α = k`1 / k`2
Apakah N > 2000
Apakah Rs > 1.5?
Ya
Ya
Apakah
α > 1?
Tidak Tidak
Ya
Tidak
Baik
Buruk
End
44
LAMPIRAN C PENGUJIAN DAN UJI STABILITAS PERANGKAT LUNAK SVMAK
Tabel 3.1 Tabel Pengujian Perangkat Lunak SVMAK pada Modul Introduksi No 1
2
Langkah Pengujian
Hasil yang Diharapkan
Hasil Pengujian
Memasukkan hanya nama
Proses dihentikan dan ditampilkan
Proses dihentikan dan ditampilkan pesan
proyek tanpa nama
pesan kesalahan untuk memasukkan
kesalahan untuk memasukkan nama
percobaan atau sebaliknya
nama proyek atau percobaan
proyek atau percobaan
Memasukan nama proyek
Pilihan jenis percobaan yang
Pilihan jenis percobaan yang tersedia
dan nama percobaan yang
tersedia menjadi tidak bisa dirubah
menjadi tidak bisa dirubah
Memasukkan nama proyek
Proses dilanjutkan ke form input
Proses dilanjutkan ke form input data
dan nama percobaan yang
data sesuai dengan jenis percobaan
sesuai dengan jenis percobaan yang
sudah tersimpan
yang dipilih
dipilih
Status OK
OK
sudah tersimpan 3
45
OK
LAMPIRAN C (Lanjutan)
Tabel 3.2 Tabel Pengujian Perangkat Lunak SVMAK pada Modul Input Data
No 1
2
3 4.
Langkah Pengujian
Hasil yang Diharapkan
Hasil Pengujian
Memasukan nilai nol pada
Data tidak dapat dimasukkan
Data tidak dapat dimasukkan kedalam
semua parameter
kedalam tabel, proses dihentikan
tabel, proses dihentikan dan ditampilkan
dan ditampilkan pesan kesalahan
pesan kesalahan
Memasukan nilai yang
Data tidak dapat dimasukkan
Data tidak dapat dimasukkan kedalam
berupa huruf
kedalam tabel, proses dihentikan
tabel, proses dihentikan dan ditampilkan
dan ditampilkan pesan kesalahan
pesan kesalahan
Memasukan nilai yang
Data nilai dimasukkan kedalam tabel Data nilai dimasukkan kedalam tabel yang
berupa angka
yang sesuai
sesuai
Memasukan data untuk
Proses tidak dapat dilanjutkan dan
Proses tidak dapat dilanjutkan dan
kurva kalibrasi dan akurasi
ditampilkan pesan kesalahan
ditampilkan pesan kesalahan
Memasukan data
Proses tidak dapat dilanjutkan dan
Proses tidak dapat dilanjutkan dan
keberulangan kurang dari 3
ditampilkan pesan kesalahan
ditampilkan pesan kesalahan
Memasukkan data interday
Proses tidak dapat dilanjutkan dan
Proses tidak dapat dilanjutkan dan
kurang dari 3 hari dan 3 data
ditampilkan pesan kesalahan
ditampilkan pesan kesalahan
Status OK
OK
OK OK
kurang dari 6 pengukuran 5
OK
pengukuran 6.
46
OK
No
Langkah Pengujian
Hasil yang Diharapkan
Hasil Pengujian
7.
Menekan tombol kembali
Data yang telah dimasukkan dalam
Data yang telah dimasukkan dalam form
dan batal
form tidak tersimpan dalam
tidak tersimpan dalam database
Status OK
database 8.
Menekan tombol Kembali
Data yang telah dimasukkan dalam
Data yang telah dimasukkan dalam form
dan Simpan
form tersimpan dalam database
tersimpan dalam database
47
OK
LAMPIRAN C (Lanjutan)
Tabel 3.3 Tabel Pengujian Perangkat Lunak SVMAK pada Modul Output Data No
Langkah Pengujian
Hasil yang Diharapkan
Hasil Pengujian
1
Pemanggilan data hasil input
Data yg tersimpan dapat ditampilkan Data yg tersimpan ditampilkan kembali
data kedalam tabel di output
kembali pada tabel output data
pada tabel output data
Perhitungan oleh SVMAK sesuai
Perhitungan oleh SVMAK sesuai dengan
dengan perhitungan secara manual
perhitungan secara manual
Menekan Tombol Grafik
Membuka Microsoft Excel dan
Microsoft Excel Terbuka otomatis dan
Regresi
menampilkan Grafik Regresi linier
ditampilkan grafik regresi linier dari data
Status OK
data 2 3
Validasi Perhitungan
data
48
OK OK
LAMPIRAN C (Lanjutan)
Tabel 3.4 Tabel Pengujian Perangkat Lunak SVMAK pada Modul Validasi dan Printout
No 1
2 3 4.
5.
Langkah Pengujian
Hasil yang Diharapkan
Hasil Pengujian
Status OK
Pemanggilan data input dan
Data yg tersimpan dapat ditampilkan
Data yg tersimpan ditampilkan kembali
output data kedalam tabel
kembali kedalam tabel pada form
kedalam tabel pada form validasi
pada form validasi
validasi
Validasi perhitungan
Perhitungan oleh SVMAK sesuai
Perhitungan oleh SVMAK sesuai
dengan perhitungan secara manual
dengan perhitungan secara manual
Kesimpulan sesuai dengan hasil
Kesimpulan sesuai dengan hasil
perhitungan
perhitungan
Proses dilanjutkan dengan membuka
Proses dilanjutkan dengan membuka
form Printout sesuai dengan jenis
form Printout sesuai dengan jenis form
form validasi
validasi
Menekan tombol interday
Proses dilanjutkan dengan membuka
Proses dilanjutkan dengan membuka
pada form akurasi
form output interday sesuai dengan
form output interday sesuai dengan jenis
jenis percobaannya
percobaannya
Validasi Kesimpulan Menekan tombol Cetak
49
OK OK OK
OK
LAMPIRAN C (Lanjutan)
Tabel 3.5 Tabel Uji Stabilitas Perangkat Lunak SVMAK
No 1
Sistem Operasi Windows 98
Hasil Pengujian Perangkat lunak SVMAK berjalan
Status OK
dengan baik 2 3
Windows XP Profesional Edition
Perangkat lunak SVMAK berjalan
Servis Pack 1
dengan baik
Windows XP Profesional Edition
Perangkat lunak SVMAK berjalan
Service Pack 2
dengan baik
50
OK OK
LAMPIRAN D
VALIDASI PERHITUNGAN
Tabel 3.6 Tabel Validasi Perhitungan Perangkat Lunak SVMAK Menggunakan Data Kurva Kalibrasi Lisinopril dengan Metode Baku Luar Hasil Perhitungan No.
Parameter
Perangkat Lunak
Hasil
Perhitungan
Microsoft
SVMAK
Penelitian
Manual
Excel XP
1.
Slope (b)
29785.29
29688,10
29785
29785
2.
Intercept (a)
110972.1
113306,17
110973
110973
3.
Koef. Korelasi
0,9997
0,9997
0.9997
0,9997
SB thd Regresi
120104.23
-
120103.9
-
2.52
-
2.52
-
12.097
12,80
12.10
-
40.323
42,67
40.32
-
4. 5. 6.
(Sy/x) Koef. Variasi Regresi (Vx0) Batas Deteksi (LOD) Batas
7.
Kuantitasi (LOQ)
51
LAMPIRAN D (Lanjutan)
Tabel 3.7 Tabel Validasi Perhitungan Perangkat Lunak SVMAK Menggunakan Data Kurva Kalibrasi Lisinopril -
Enalapril Maleat dengan Metode
Baku Dalam Hasil Perhitungan No.
Parameter
Perangkat Lunak
Hasil
Perhitungan
Microsoft
SVMAK
Penelitian
Manual
Excel XP
1.
Slope (b)
0.0288
0,0287
0,0288
0.0288
2.
Intercept (a)
0.1687
0,1672
0,1687
0.1649
3.
Koef. Korelasi
0.9993
0,9994
0,9993
0,9993
SB thd Regresi
0,2268
-
0,2268
-
4,9215
-
4,92
-
23,625
16,92
23,625
-
78,75
56,40
78,75
-
4. 5. 6. 7.
(Sy/x) Koef. Variasi Regresi (Vxo) Batas Deteksi (LOD) Batas Kuantitasi (LOQ)
52
LAMPIRAN E TAMPILAN ANTAR MUKA PERANGKAT LUNAK SVMAK
Gambar 3.3 Tampilan Antarmuka Form Introduksi
53
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.4 Tampilan Antarmuka Form Input Data Kalibrasi Metode Baku Luar
54
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.5 Tampilan Antarmuka Form Input Data Kalibrasi Metode Baku Dalam
55
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.6 Tampilan Antarmuka Form Input Data Kalibrasi Metode Baku Tinambah
56
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.7 Tampilan Antarmuka Form Input Data Interday Kalibrasi Metode Baku Luar
57
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.8
Tampilan Antarmuka Form Input Data Akurasi Presisi Interday Baku Dalam
58
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.9
Tampilan Antarmuka Form Input Data Akurasi Presisi Interday Metode Baku Tinambah
59
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.10 Tampilan Antarmuka Form Input Data Spesifisitas
60
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.11 Tampilan Antarmuka Form Output Data Kalibrasi Metode Baku Luar
61
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.12 Tampilan Antarmuka Form Output Data Kalibrasi Metode Baku Dalam
62
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.13 Tampilan Antarmuka Form Output Data Kalibrasi Metode Baku Tinambah
63
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.14 Tampilan Antarmuka Form Validasi Linieritas Metode Baku Luar
64
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.15 Tampilan Antarmuka Form Printout Validasi Linieritas Metode Baku Luar
65
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.16 Tampilan Antarmuka Form Validasi Akurasi Presisi Metode Baku Luar
66
LAMPIRAN E (Lanjutan) Gambar 3.17 Tampilan Antarmuka Form Printout Validasi Akurasi Presisi Metode Baku Luar
67
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.18 Tampilan Antarmuka Form Validasi Akurasi Presisi Interday Metode Baku Luar
68
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.19 Tampilan Antarmuka Form Printout Validasi Akurasi Presisi Interday Metode Baku Luar
69
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.20 Tampilan Antarmuka Form Output Spesifisitas
70
LAMPIRAN E (Lanjutan)
Gambar 3.21 Tampilan Antarmuka Form Printout Output Spesifisitas
71
LAMPIRAN E (LANJUTAN)
Gambar 3.22 Tampilan Antarmuka Form Single Data Metode Baku Luar
72
LAMPIRAN E (LANJUTAN)
Gambar 3.23 Tampilan Antarmuka Form Single Data Metode Baku Dalam
73
LAMPIRAN E (LANJUTAN)
Gambar 3.24 Tampilan Antarmuka Form Single Data Metode Baku Tinambah
74
LAMPIRAN E (LANJUTAN)
Gambar 3.25 Tampilan Antarmuka Grafik Regresi Linier Metode Baku Luar
75
