AKTIVITAS ANTIINFLAMASI EKSTRAK BAWANG MERAH HUTAN (Elutherine palmifolia (L) Merr) PADA KAKI TIKUS PUTIH (Ratus norwegiens)
KARYA TULIS ILMIAH
OLEH PUNGKAS NUR HALIMA DIAN ASEPTA NIM 12.035
AKADEMI ANALIS FARMASI DAN MAKANAN PUTRA INDONESIA MALANG JULI 2015
AKTIVITAS ANTIINFLAMASI EKSTRAK BAWANG MERAH HUTAN (Elutherine palmifolia (L) Merr) PADA KAKI TIKUS PUTIH (Ratus norwegiens)
KARYA TULIS ILMIAH Diajukan kepada Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam menyelesaikan program D-3 bidang Farmasi
OLEH PUNGKAS NUR HALIMA DIAN ASEPTA NIM 12.035
AKADEMI ANALIS FARMASI DAN MAKANAN PUTRA INDONESIA MALANG JULI 2015
PERSEMBAHAN
Dengan segala kerendahan hati kuucapkan syukur Alhamdulillah kepada Allah SWT yang telah memberikan kesehatan jasmani dan rohani,sehingga aku dapat menyelesaikan Karya Tulis Ilmiah ini tepat pada waktunya. Karya Tulis Ilmiah ini kupersembahkan kepada orang-orang yang kusayang dan banyak membantuku dalam penyelesaiannya, mereka adalah : 1. Kedua orang tuaku yang sangat aku sayangi, yang telah memberikan
dukungan moril maupun materil, serta tak pernah putus doanya untukku. 2. Kakakku
tersayang,
Jamaliya
Agustiningsih,
A.Md.
yang
selalu
memberikan semangat dan doa untukku. 3. Dosen pembimbingku, Bu Misgiati, M.Pd yang telah sabar membatu dalam
penulisan Karya Tulis Ilmiah ini. 4. Seseorang yang selalu kusayang, Abdul Kadir Jaelani, A.Md. yang selalu
mendampingiku dan memberikan dukungan serta doanya untuku. 5. Teman-teman Akafarma ’12 yang telah menemaniku selama ini, serta
pihak-pihak yang telak membatu dalam penyelesaian Karya Tulis Ilmiah ini yang tidak dapat aku sebutkan satu per satu. Terima kasih atas semua yang telah diberikan kepadaku selama ini, sehingga aku dapat menyelesaikan Karya Tulis Ilmiah ini tepat pada waktunya.
ABSTRAK
Asepta, Pungkas Nur 2015. Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Bawang Merah Hutan (Eleutherine palmfolia (L) Merr) pada kaki tikus. Karya Tulis Ilmiah. Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang. Pembimbing: Dr.Misgiati, A.Md, M.Pd Kata kunci: Bawang Merah Hutan (Eleutherine palmifolia (L) Merr), aktivitas antiinflamasi, Metode Udem
Bawang Merah Hutan (Eleutherine palmfolia) merupakan salah satu tanaman yang dimanfaatkan oleh masyarakat sebagai radang. Bawang merah hutan memiliki kandungan senyawa aktif di dalamnya. Senyawa ini meliputi alkoloid, steroid, glikosida, flavonoid, fenolik, tanin, dan saponin. Beberapa kandungan tersebut bertujuan untuk mengetahui aktivitas ekstrak bawang merah hutan sebagai anti radang. Ekstrak bawang merah hutan kemudian di uji pada kaki tikus dengan terlebih dahulu diberikan karagenin 1% secara subkutan pada kaki tikus dengan selang waktu 1 jam diberikan ekstrak bawang merah hutan secara oral setelah itu dilakukan pengukuran volume udem menggunakan alat plestimometer. Hasil dari pengujian terhadap hewan uji yaitu ekstrak aktif bawang merah hutan memiliki aktivitas antiinflamasi yang dibuktikan dengan pengurangan volume udem dalam kisaran 0,05 sampai 0,15 ml. Berdasarkan hasil pengamatan yang didapatkan, sebaiknya dilakukan pemberian dosis dengan konsentrasi yang lebih banyak untuk dilanjutkan pada hewan uji sebagai antiinflamasi. Penelitian ini diharapkan dapat diterima dan mendapatkan hasil pengujian yang lebih maksimal.
i
KATA PENGANTAR Puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah memberikan rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan Karya Tulis Ilmiah yang berjudul “Uji Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Bawang Hutan (Eleutherine palmifolia) Pada Kaki Tikus (Ratus Norwegiens)” ini tepat pada waktunya. Adapun tujuan Karya Tulis Ilmiah ini adalah sebagai persyaratan untuk menyelesaikan program Diploma III di Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang. Sehubungan dengan selesainya penulisan Karya Tulis Ilmiah ini, penulis mengucapkan terima kasih kepada : 1.
Dra. Wigang Salondjari selaku Direktur Akademi Analis Farmasi dan
Makanan Putra Indonesia Malang. 2.
Dr. Misgiati, A.Md.,M.Pd selaku Dosen Pembimbing.
3.
Erna Susanti, M.Biomed selaku Dosen Penguji.
4.
Fitri Eka Lestari, S.Gz selaku Dosen Penguji.
5.
Bapak dan Ibu Dosen Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia
Malang serta semua staff. 6.
Orang tua yang memberikan do’a dan motivasi dalam menuntut ilmu.
7.
Teman-teman mahasiswa, dan semua pihak yang telah memberikan
bimbingan,
bantuan, serta arahan secara langsung maupun secara tidak
langsung. Penulis menyadari sepenuhnya bahwa Karya Tulis Ilmiah ini masih mempunyai beberapa kekurangan. Oleh karena itu, kritik dan saran akan sangat diharapkan. Semoga Karya Tulis Ilmiah ini dapat berguna dan bermanfaat.
Malang, 31 Juli 2015
Penulis
ii
DAFTAR ISI
ABSTRAK .................................................................................................................i KATA PENGANTAR ...............................................................................................ii DAFTAR ISI ..............................................................................................................iii DAFTAR TABEL ......................................................................................................v DAFTAR GAMBAR .................................................................................................vi DAFTAR LAMPIRAN ..............................................................................................vii BAB I PENDAHULUAN .........................................................................................1 1.1 Latar Belakang .....................................................................................................1 1.2 Rumusan Masalah ................................................................................................3 1.3 Tujuan Penelitian .................................................................................................3 1.4 Manfaat Penelitian ...............................................................................................3 1.5 Asumsi Penelitian.................................................................................................3 1.6 Ruang Lingkup dan Keterbatasan Penlitian .........................................................4 1.7 Definisi Istilah. .....................................................................................................4 BAB II TINJAUAN PUSTAKA ..............................................................................5 2.1 Determinasi Tanaman ..........................................................................................5 2.2 Bawang Merah Hutan (Eleutherine palmifolia) ...................................................6 2.3 Ekstraksi ...............................................................................................................7 2.4 Faktor-Faktor yang mempengaruhi ......................................................................10
iii
2.5 Hewan Uji Coba ...................................................................................................10 2.6 Metode Pengujian Antiinflamasi..........................................................................11 2.7 Metode Uji Udem.................................................................................................13 2.8 Kandungan Senyawa Pada Tumbuhan .................................................................22 2.9 Kerangka Konsep .................................................................................................25 2.10 Kerangka Teori...................................................................................................25 2.11 Hipotesis Penelitian............................................................................................26 BAB III METODE PENELITIAN .........................................................................27 3.1 Rancangan Penelitian ...........................................................................................27 3.2 Populasi dan Sampel ............................................................................................27 3.3 Lokasi dan Waktu Penelitian ...............................................................................27 3.4 Instrumen Penelitian.............................................................................................28 3.5 Definisi Operasional.............................................................................................28 3.6 Pengumpulan Data ...............................................................................................29 3.7 Analisis Data ........................................................................................................31 BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ........................................32 4.1 Determinasi Tanaman ..........................................................................................32 4.2 Pembuatan Simplisia dan Hasil Ekstraksi ............................................................32
iv
4.3 Pengujian Terhadap Hewan Uji ...........................................................................33 BAB V PENUTUP ....................................................................................................36 5.1 Kesimpulan ..........................................................................................................36 5.2 Saran.....................................................................................................................36 DAFTAR PUSTAKA ...............................................................................................37
v
DAFTAR TABEL
Tabel 3.5 Variabel Terkait ......................................................................................28 Tabel 4.2 Hasil Penimbangan Simplisia dan Hasil Ekstraksi ..............................33 Tabel 4.4 Hasil Pengujian Terhadap Hewan Uji Dalam Satuan ml ....................34 Tabel 4.5 Hasil Penurunan Volume Udem ............................................................34
vi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Bawang Merah Hutan (Eleutherine palmifoia) ......................................6
vii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Gambar Praktikum..................................................................................38 Lampiran 2 Determinasi Tanaman .............................................................................41 Lampiran 3 Perhitungan Dosis ...................................................................................41 Lampiran 4 Hasil Ekstraksi ........................................................................................42 Lampiran 5 Hasil Perhitungan Menggunakan One-Way Anova ...............................43
viii
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Kesehatan secara umum merupakan salah satu kebutuhan utama setiap manusia disamping, kebutuhan sandang dan pangan. Tetapi gangguan kesehatan dapat dialami oleh semua kalangan masyarakat dari usia dini sampai usia lanjut. Hal tersebut sering menyebabkan timbulnya gangguan dalam kesehatan seperti anemia, asma, bronkhitis, batu ginjanl, herpes, kanker, antiinflamasi, dan lainlain. Salah satunya yaitu inflamasi atau yang biasa di kenal dengan radang. Inflamasi sering dijumpai pada semua kelompok populasi dan umur, tetapi jumlah penderita meningkat karena trauma (pukulan, benturan, kecelakaan) dan inflamasi setelah operasi (operasi tulang dan gigi), selain itu juga inflamasi bisa disebabkan oleh bakteri. Keadaan ini dapat membatasi aktivitas fisik sehari-hari dan penderita menjadi lebih tergantung pada bantuan orang lain (Anonim,2002). Inflamasi terjadi apabila membran sel mengalami kerusakan oleh suatu rangsangan kimiawi, fisik, atau mekanik, maka enzim fosfolipase diaktifkan untuk mengubah fosfolipida menjadi asam arachidonat. Asam lemak poli-tak jenuh ini sebagian di ubah oleh enzim cyclo-oxygenase menjadi asam endoperoksida dan menjadi zat prostagladin sehingga terjadilah inflamasi dan nyeri. Inflamasi yang sering disebut orang awam radang atau bengkak dan nyeri (Himawan, 1973).
1
2
Pada umumnya pengobatan inflamasi menggunakan senyawa sintesis, penggunaan obat-obatan dari senyawa sintetis ini khususnya inflamasi dapat menimbulkan efek samping yang tidak di inginkan yaitu nyeri lambung dan harganya relatif mahal. Sehingga di harapkan pengobatan alternatif dari bahan alam dapat di pilih dan di gunakan sebagai tanaman obat yang digunakan untuk mengobati inflamasi atau radang yaitu dengan dua siung bawang merah hutan. Bawang merah Hutan (Eleutherine palmfolia (L) Merr) merupakan tumbuhan asli Amerika Selatan yang dijumpai tumbuh pula di Jawa, Kalimantan, dan Sumatera. Bawang merah hutan memiliki banyak khasiat selain sebagai antiinflamsi juga dapat berkhasiat sebagai radang usus, hipertensi, kolesterol, sembelit, disentri, diabetes melitus, liver dan masih banyak kegunaan lainnya (Arung, et al, 2009). Bawang merah hutan merupakan tanaman yang banyak memiliki kandungan senyawa aktif di dalamnya. Senyawa ini meliputi alkoloid, steroid, glikosida, flavonoid, fenolik, tanin, dan saponin. Berdasarkan pengalaman emipis, bawang merah hutan umumnya dikonsumsi dengan cara direbus (15-25g) untuk diminum (Galingging, et al, 2009). Salah satu penelitian yang saya lakukan yaitu tentang ekstrak bawang merah hutan yang memberikan efek antiinflamasi pada kaki tikus putih dengan menggunakan metode udema pada kaki tikus. 1.2 Rumusan Masalah Apakah ekstrak bawang merah hutan memiliki aktivitas antiinflamsi pada kaki tikus?
3
1.3 Tujuan Penelitian 1.3.1
Tujuan umum penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas ekstrak bawang merah hutan sebagai antiinflamasi atau radang
1.3.2
Tujuan khusus penelitian ini adalah untuk : 1. Melakukan ekstraksi dari bawang merah hutan. 2. Melakukan pengujian antiinflamasi terhadap hewan uji.
1.4 Manfaat Penelitian 1. Dapat mengetahui ada tidaknya aktivitas ekstrak bawang merah hutan sebagai antiinflamasi 2. Dapat menentukan aktivitas bawang merah hutan sebagai antiinflamasi 3. Dapat memberikan pengetahuan tentang aktivitas ekstrak bawang merah sebagai antiinflamasi
1.5 Asumsi Penelitian 1. Bawang merah hutan merupakan tanaman yang mengandung senyawa flavonoid yang digunakan sebagai antiinflamasi 2. Tikus putih digunakan sebagai hewan uji untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi ekstrak bawang merah hutan 3. Metode udema pada telapak kaki tikus putih dapat digunakan untuk menentukan aktivitas antiinflamasi ekstrak bawang merah hutan
4
1.6 Ruang Lingkup dan Keterbatasan Penelitian Ruang lingkup dalam penelitian ini adalah determinasi tanaman, menetapkan metode ekstraksi, menetapkan teknik pengujian antiinflamasi, pemilihan hewan uji dan perlakuan terhadap hewan uji. Sedangkan keterbatasan dalam penelitian ini adalah kurang lamanya Proses pembuatan ekstrak yang kurang maksimal, Dosis yang diberikan tidak efektif.
1.7 Definisi Istilah Beberapa istilah yang didefinisikan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut : 1. Anti-inflamasi adalah obat-obatan yang mengurangi tanda-tanda dan gejala peradangan. 2. Udem adalah penimbunan cairan secara berlebihan diantara sel-sel tubuh atau berbagai rongga tubuh. 3. Maserasi adalah suatu cara penyarian simplisia dengan cara merendam simplisia tersebut dalam pelarut (Syamsuni,2006) dengan beberapa kaki pengocokan atau pengadukan pada temperatur kamar, sedangkan remaserasi adalah pengulangan penambahan pelarut seelah dilakukan penyaringan maserat pertama dan seterusnya (Ditjen POM, 2000).
BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Determinasi Tanaman Melakukan
identifikasi
tumbuhan
berarti
mengungkapkan
atau
menetapkan identitas suatu tumbuhan, yang dalam hal ini tidak lain daripada “menentukan namanya yang benar dan tempatnya yang tepat dalam sistem klasifikasi”. Untuk istilah identifikasi sering juga digunakan istilah “determinasi” (yang diambil dari bahasa Belanda : determinatie = penentuan). Tumbuhan yang ada dibumi ini, yang beraneka ragam dan besar jumlahnya, tentu ada yang telah dikenal dan ada pula yang tidak dikenal. Dengan demikian setiap orang akan mengidentifikasikan suatu tumbuhan selalu menghadapi dua kemungkinan : 1.Tumbuhan yang diidentifikasi itu belum dikenal oleh dunia ilmu pengetahuan, jadi belum ada ilmiahnya, juga belum ditentukan tumbuhan itu berturut-turut dimasukkan dalam kategori yang mana. 2. Tumbuhan yang akan diidentifikasikan itu sudah dikenal oleh dunia ilmu pengetahuan, sudah ditentukan nama dan te,patnya yang tepat dalam system klasifikasi. Untuk mengidentifikasi tumbuhan yang telah dikenal oleh dunia ilmu pengetahuan dapat dilakukan dengan mencocokkan ciri-ciri yang terdapat pada tumbuhan yang akan diidentifikasikan dengan ciri-ciri tumbuhan yang telah dikenal pada kunci identifikasi dalam identifikasi tumbuhan. Kunci identifikasi merupakan serentetan pertanyaan-pertanyaan yang jawabannya harus ditemukan pada specimen (bahan) yang akan diidentifikasikan. Apabila semua peryanyaan 5
6
berturut-turut dalam kunci identifikasi itu ditemukan jawabannya, berarti tumbuhan yang akan diidentifikasikan sama dengan salah satu yang telah dibuat kucinya, dan nama serta tempatnya dalam system klasifikasi akan diketahui setelah semua pertanyaan dalam kunci dapat dijawab. Selain itu dapat juga dilakukan
dengan
cara
mencocokkan
specimen
tumbuhan
yang
akan
diidentifikasikan dengan lembar identifikasi jenis. Lembar identifikasi jenis adalah sebuah gambar suatu jenis tumbuhan yang disertai dengan nama dan klasifikasi jenis yang bersangkutan. 2.2 Bawang Merah Hutan (Eleuntherine palmifolia (L.) Merr)
Gambar 2.1 2.2.1
Anatomi Bawang Merah Hutan Kingdom
: Plantae
Devisi
: Spermatophyta
Kelas
: Monocotyledoneae
Ordo
: Liliales
Fahmili
: Liliales
Genus
: Elutherine
Spesies
: Eluetherine palmifolia (L.) Merr.
7
2.2.2
Kandungan Kimia Bawang merah hutan mengandung senyawa-senyawa yang meliputi
alkaloid, glikosida, flavonoid, fenolik, triterpenoid/steroid dan antrakuinon (Galingging,2009; Ifesan, et al.,2009).
2.2.3
Manfaat Bawang merah hutan dapat digunakan sebagai antiinflamasi, sembelit,
disuria, radang usus, disentri, liver, penyembuh luka, penyakit kelamin (Ogata, 1995; Heyne, 1987), diabetes melitus, hipertensi, menurunkan kolesterol, kanker payudara (Galingging, 2009), antimelanogenesis dan sebagai antioksidan (Arung, et al., 2009).
2.3 Ekstraksi Ekstraksi merupakan proses pemisahan bahan dari campurannya dengan menggunakan pelarut. Jadi, ekstrak adalah sediaan yang diperoleh dengan cara ekstraksi tanaman obat dengan ukuran partikel tertentu dan menggunakan medium pengektraksi (menstrum) yang tertentu pula. (Agoes 21:2007)
2.3.1
Metode Ekstraksi menurut Parameter Standar Umum Ekstraksi Tumbuhan Obat Terdapat banyak metode ekstraksi. Namun secara ringkas dapat dibagi
berdasarkan penggunaan panas sehingga ada metode ekstraksi dengan cara panas, serta tanpa panas. Metode panas digunakan jika senyawa-senyawa yang
8
terkandung sudah dipastikan tahan panas. Metode ekstraksi yang membutuhkan panas antara lain:
1.
Refluks Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya
dalam jangka waktu tertentu (Ditjen POM, 2000) dimana pelarut akan terkondensasi menuju pendingin dan kembali ke labu (Mayo, et al., 1955; Landgrebe, 1982). 2.
Sokletasi Sokletasi adalah ekstraksi kontinu menggunakan alat soklet (Ditjen POM,
2000), dimana pelarut akan terkondensasi dari labu menuju pendingin, kemudian jatuh membasahi sampel dan mengisi bagian tengah alat soklet. Tabung sifon juga terisi dengan larutan ekstraksi dan ketika mencapai bagian atas tabung sifon, larutan tersebut akan kembali ke dalam labu (Mayo, et al., 1955; Landgrebe, 1982). 3.
Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada
temperatur yang lebih tinggi dari temperatur kamar (Ditjen POM, 2000), o
umumnya dilakukan pada suhu 40-60 C (Syamsuni, 2006). 4.
Infundasi o
Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur 90 C selama 15-20 menit (Ditjen POM, 2000; Syamsuni, 2006; Anief, 2000).
9
5.
Dekoktasi o
o
Dekok adalah ekstraksi pada suhu 90 C- 98 C menggunakan pelarut air selama 30 menit (Ditjen POM, 2000; Agoes, 2007). 6.
Destilasi Uap Destilasi uap adalah ekstraksi senyawa kandungan menguap (minyak atsiri)
dari bahan (segar atau simplisia) dengan uap air
Metode ekstraksi dingin dilakukan ketika senyawa yang terdapat dalam simplisia tidak tahan terhadap panas atau belum diketahui tahan atau tidaknya, antara lain:
1.
Maserasi Maserasi adalah suatu cara penyarian simplisia dengan cara merendam
simplisia tersebut dalam pelarut (Syamsuni, 2006) dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur kamar, sedangkan remaserasi adalah pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat pertama dan seterusnya (Ditjen POM, 2000). Keuntungan metode maserasi adalah prosedur dan peralatannya sederhana (Agoes, 2007; Depkes, 1986). 2.
Perkolasi Perkolasi adalah suatu cara penyarian simplisia menggunakan perkolator
dimana simplisianya terendam dalam pelarut yang selalu baru (Syamsuni, 2006) dan umumnya dilakukan pada temperatur kamar. Prosesnya terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya
10
(penetesan/penampungan ekstrak) terus-menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) (Ditjen POM, 2000).
2.4 Faktor-faktor yang mempengaruhi ekstraksi 1.Ukuran partikel 2. Temperatur 3. Pilihan Pelarut Ekstraksi
2.5 Hewan Uji Coba Pada percobaan ini digunakan tikus putih jantan sebagai binatang percobaan karena tikus putih jantan dapat memberikan hasil penelitian yang lebih stabil karena tidak dipengaruhi oleh adanya siklus menstruasi dan kehamilan seperti pada tikus putih betina. Tikus putih jantan juga mempunyai kecepatan metabolisme obat yang lebih cepat dan kondisi biologis tubuh yang lebih stabil dibanding tikus betina (Sugiyanto, 1995). 1.
Sistematika hewan percobaan
Tikus
putih
dalam
sistematika
diklasifikasikan sebagai berikut: Filum : Chordata Subfilum : Vertebrata Classis : Mammalia Subclassis : Placentalia Ordo : Rodentia Familia : Muridae
hewan
percobaan
(Sugiyanto,1995)
11
Genus : Rattus Species : Rattus norvegicus
b. Karakteristik utama hewan percobaan Tikus putih sebagai hewan percobaan relatif resisten terhadap infeksi dan sangat cerdas. Tikus putih tidak begitu bersifat fotofobik seperti halnya mencit dan kecenderungan untuk berkumpul dengan sesamanya tidak begitu besar. Aktifitasnya tidak terganggu oleh adanya manusia di sekitarnya. Ada dua sifat yang membedakan tikus putih dari hewan percobaan yang lain, yaitu bahwa tikus putih tidak dapat muntah karena struktur anatomi yang tidak lazim di tempat esofagus bermuara ke dalam lubang dan tikus putih tidak mempunyai kandung empedu (Mangkoewidjojo, 1988).
Tikus laboratorium jantan jarang berkelahi seperti mencit jantan. Tikus putih dapat tinggal sendirian dalam kandang dan hewan ini lebih besar dibandingkan dengan mencit, sehingga untuk percobaan laboratorium, tikus putih lebih menguntungkan daripada mencit (Mangkoewidjojo, 1988).
2.6 Metode Pengujian Inflamasi Inflamasi merupakan suatu respon protektif normal terhadap luka jaringan yang disebabkan oleh trauma fisik, zat kimia yang merusak, atau zat-zat mikrobiologik (Mycek, 2001:404).Respon peradangan terjadi dalam tiga fase yang berbeda, masing-masing tampak diperantarai oleh mekanisme yang berbeda: fase singkat, yang ditandai oleh vasodilatasi lokal dan peningkatan permeabilitas kapiler; fase subakut lambat, tanda yang paling menonjol berupa infiltrasi sel
12
leukosit dan sel fagosit; fase proliferative kronik, pada fase ini terjadi kerusakan jaringan dan fibrosis (Hardman, 2008:667). Radang adalah suatu rangkaian reaksi pada jaringan yang menyebabkan musnahnya agens yang membahayakan jaringan atau yang mencegah agens ini menyebar lebih luas. Reaksi-reaksi ini kemudian juga menyebabkan jaringan yang cedera diperbaiki atau diganti dengan jaringan baru (Himawan, 1973:43).
2.6.1
Mekanisme Terjadinya Inflamasi Bila jaringan cedera misalnya karena terbakar, teriris atau karena infeksi
oleh kuman, maka pada jaringan ini akan terjadi rangkaian reaksi yang menyebabkan musnahnya agens yang membahayakan jaringan atau yang mencegah agen ini menyebar lebih luas. Reaksi-reaksi ini kemudian juga menyebabkan jaringan yang cedera diperbaiki atau diganti dengan jaringan baru. Rangkaian reaksi yang terjadi pada tempat jaringan cedera ini disebut radang (Himawan, 1973:46). 2.6.2
Tanda-tanda Utama Radang (makroskopik)
1. Warna merah (rubor): terjadi karena jaringan yang meradang mengandung banyak darah akibat kapiler-kapilernya melebar dan kapiler-kapiler yang tadinya kosong menjadi berisi darah juga. 2. Panas (calor): juga akibat sirkulasi darah yang meningkat. 3. Pembengkakan (tumor): disebabkan sebagian oleh hiperemi dan sebagian besar oleh eksudat yang terjadi pada radang. 4. Rasa nyeri (dolor): agaknya disebabkan pengaruh zat pada ujung saraf perasa yang membengkak.
13
2.6.3
Mekanisme Obat Antiinflamasi Pada inflamasi prostaglandin berperan dalam menyebabkan vasodilatasi
dan meningkatkan permeabilitas vaskular, akan tetapi, inhibisi sintetis prostaglandin oleh OAINS mengurangi inflamasi daripada menghilangkannya karena obat ini tidak menghambat mediator inflamasi lainnya. Meskipun demikian, pada sebagian besar pasien dengan artritis reumatoid, efek antiinflamasi OAINS yang relatif ringan mengurangi nyeri, kekakuan dan pembengkakan. Namun, OAINS tidak mengubah perjalanan penyakit. (Mery, 2006:70). 2.7 Metode Uji Udem Udem merupakan salah satu gejala kardial pada inflamasi. Perubahan struktur jaringan pada proses inflamasi diawali dengan kontriksi arteriol yang diikuti dengan vase dilatasi, sehingga terjadi perubahan volume darah kapiler dan venul yang menjadi penuh sehingga pembuluh darah meregang dan menjadi lebih permiabel. Akibatnya, protein plasma keluar dan terjadi penumpukan cairan interstisiil di dalam jaringan yang dikenal dengan udem, atau dalam istilah inflamasi dikenal sebagai radang (Lucia, 2011). Alat yang digunakan untuk mengukur volume udem pada kaki belakang tikus adalah pletismometer atau pletismometer modifikasi. Alat tersebut terdiri dari tiga tabung kaca, masing-masing adalah tabung berskala untuk membaca volume udem; tabung indikator yang berisi metilenbiru; dan tabung air raksa yang digunakan untuk mencelupkan telapak kaki tikus. Hewan uji yang dapat digunakan pada metode ini adalah tikus putih Ratus norwegiensi dengan bobot badan 150-250 gram, sebanyak 12 ekor untuk masing –
14
masing kelompok. Galur yang dapat digunakan antara lain galur wistar atau galur spraque dawley. Pada pelaksanaan pengujian khasiat obat antiinflamasi metode volume udem maka hewan uji diperlakukan sebagai berikut: 1. Mula-mula semua hewan dipuasakan 6-8 jam. Pengosongan lambung bermanfaat terhdap proses absorpsi obat. Keberadaan makanan dalam gastric seringkali mengganggu proses absorpsi, sehingga terjadi manipulasi efek obat.
2. Selanjutnya, salah satu kaki belakang tikus diberi tanda, kemudian diukur volumenya dengan cara mencelupkannya ke dalam tabung air raksa pada alat pletismometer, sampai dengan batas tersebut.
3. Kemudian, pada grup kontrol diberikan air suling, kepada grup uji diberikan bahan uji. Bahan-bahan tersebut diberikan secara oral menggunakan sonde modifikasi, dengan volume maksimum 5 ml.
4. Selang 10-15 menit, kemudian kepada masing-masing tikus diberikan bahan penginduksi udem secara subkutan kepada bagian dorsal kaki yang sama.
5. Setelah itu, volume kaki tikus tersebut diukur kembali pada setiap interval waktu 10 menit sampai efek udemnya hilang.
6. Data-data yang perlu dicatat adalah mula kerja dan durasi aksi bahan penginduksi serta mula kerja dan durasi aksi obat antiinflamasi.
15
2.7.1 Metode Bobot Udem Pada dasarnya eksperimen uji antiinflamasi metode bobot udem adalah serupa dengan metode volume udem. Sebagai parameter uji pada eksperimen ini bukan volume bobot udem kaki tikus. Cara menghitung bobot udem sama halnya dengan cara menghitung volume udem (Lusia, 2011). Alat yang digunakan pada eksperimen ini hanya timbangan gram. Sebagai hewan uji dapat digunakan mencit atau tikus. Prinsip perlakuan hewan uji pada metode ini, yaitu : 1.Sejumlah tikus yang telah memenuhi persyaratan pengujian kemudian dipuasakan makan selama 6-8jam. 2. Setelah itu, kepada grup kontrol diberi air suling dan kepada grup uji diberi bahan uji. Bahan uji diberikan degan dosis yang sama dengan pada metode volume udem semua hewan diberi bahan uji sebanyak 2kali dengan selang waktu 30 menit, secara subkutan dibagian tengkuk. 3. Kepada semua tikus, kemudian diberi penginduksi radang larutan karagenin 1% sebanyak 0,1-0,5 ml secara subkutan dibagian dorsal, pada salah satu kaki belakangnya. Sedangkan kaki belakangnya yang lain diberi larutan salin normal NaCl 0,9% dengan cara yang sama. 4. Setelah 60-90 menit, tikus dimatikan secara euthanasia menggunakan eter. Kaki belakangnya tikus kemudian dipotong dan ditimbang pada timbangan analitik. Bobot udem dihitung sebagai selisih antara bobot kaki yang diberi penginduksi radang dengan bobot kaki kontrol yang hanya diberi injeksi salin.
16
2.7.2 Metode Eritema Eritema adalah kemerahan yang abnormal pada kulit akibat dilatasi kapiler pada respon inflamasi. Eritema atau rubor merupakan salah satu gejala cardinal inflamasi. Eritema dapat disebabkan oleh perubahan suhu yang ekstrim termasuk radiasi sinar matahari. Eritema akibat paparan sinar ultraviolet yang berlebihan menyebabkan dilatasi pembuluh darah dan kenaikan aliran darah dermis, tepat dibawah kulit yang terpapar sinar (Lusia, 2011). Parameter uji yang diamati antara lain gradasi warna eritema akibat sinar UV, luar area eritema dan, persentase perubahan luas area eritema. Parameter uji diamati setiap jam gradasi warna eritema dinyatakan dengan skor 0-4 dengan ketentuan sebagai berikut : 0: Normal atau tidak terjadi eritema 1: intensitas warna merah tipis/samar-samar 2: Intensitas warna merah agak tebal 3: Warna merah agak jelas,tebal atau intens. Namun demikian rentang skor ini sifatnya fleksibel bergantung pada kondisi eksperimen. Alat yang digunakan pada eksperimen uji eritema ini adalah alat UV modifikasi, ang terdiri dari UV A dan UV B, ang merupakan penginduksi eritema pada kulit hewan. Hewan uji pada metode ini dapat digunakan marmot cavia parera atau tikus putih Rattus norwegiens.
17
Pelaksanaan pengujian pada metode ini yaitu : 1. Marmot kelompok kontrol diberi aquadem 10 ml/kg bb melalui sonde oral yang dimasukkan melalui kayu berlubang yang ditempatkan dibelakang gigi. Secara perlahan sonde dimasukkan melalui kerongkongan ke dalam lambung.
2. Hewan kelompok uji diberi bahan uji dengan jumlah volume dan cara pemberian yang sama dengan kelompok kontrol.
3. Setelah ditunggu selama 15-30 menit kemudian punggung hewan diinduksi sinar UV B (panjang gelombang 290-320 nm) pada jarak 10 cm, selama 30 menit. Parameter uji yang diaati antara lain gradasi warna eritema akibat sinar UV, luas area eritema dan persentase perubahan luas area eritema. 4. Perlakuan terhadap marmot dilakukan berulang setiap 5 jam. Parameter uji diamati setiap jam. Gradasi warna eritema dinyatakan dengan skor.
5. Selanjutnya hewan kontrol diberi salin NaCl 0,9% dan hewan uji diberi bahan uji secara oral. Volum maksimum lambung marmot ±10 ml. Untuk eksperimen ini volume pemberian sediaan adalah 5 ml/marmot atau 2 ml/tikus.
6. Setelah 30 menit,bagian yang telah dicukur bulunya ditutup dengan circular plate atau disc yang berlubang dengan diameter 6 mm. Hewan diradiasi UV selama ± 20 detik. Sebelum digunakan lampu UV dihidupkan terlebih dahulu selama 30 menit. Apabila durasi 20 detik tersebut belum mencukupi, maka dapat diperpanjang hingga 30 detik.
7. Setelah ditunggu selama 30 menit hingga 1 jam, kualitas eritema dicatat dam bentuk skor. Pada eksperimen ini skor ditentukan 0 sampai 2.
18
2.7.3 Metode Eksudasi Dasar pemikiran pada eksperimen uji antiinflamasi metode eksudasi ini adalah memasukkan benda asing dengan berat dan volume tertentu secara subkutan. Injeksi subkutan pada tikus dilakukan melalui tengkuknya. Pada hamster dilakukan melalui superfused cheekpouch preparation. Selanjutnya benda asing tersebut akan berakibat kerusakan jaringan. Eksudat menandung komponen seluler, dan terjadi akibat fase dilatasi dan peningkatan pemeabilitas vaskuler selama proses peradangan atau antiinflamasi. Perubahan volum darah di dalam arteriol dan venul menyebabkan penmbuluh darah penuh, sehingga sel-sel endotelnya meregang satu terhadap yang lain, dengan demikian menjadi lebih permeabel. Akibatnya, protein plasma melintas keluar melalui dinding pembuluh dan ekstravariasi cairan interstisiil di dalam jaringan, yang dikenal dengan jaringan eksudat. Jumlah cairan eksudat dalam hal ini berkaitan dengan tingkat keparahan kerusakan jaringan atau besarnya respon inflamasi yang terjadi. Dengan demikian volume atau bobot cairan eksudat dapat dijadikan parameter uji untuk metode ini (Lusia,2011). Proses eksperimen pada uji antiinflamasi metode eksudasi, dilakukan sebagai berikut : 1. Setelah dipuasakan makan 6-8 jam, masing-masing tikus diinjeksi udara 25 ml secara subkutan di bagian tengkuknya.
2. Setelah 10-15 menit diberi penginduksi radang subkuran.
19
3. Setelah 24 jam, udara dikeluarkan kembali dengan cara disedot vakum dengan menggunakan spet injeksi 25 ml. 4. Selanjutnya ditunggu 24 jam, kemudian dikompres dengan air es agar tidak terjadi adhesions atau perlekatkan kulit pada rongga inflamasi. Bahan uji diberikan satu kali sehari, selama 5 -7 hari.
5. Pada kelompok kontrol diberi perlakuan yang sama, hanya bahan uji diganti dengan aqua pro injeksi.
6. Setelah itu, semua tikus dimatikan secara euthanasia menggunakan eter. Area radang di bagian tengkuk tersebut dibedah dan cairan eksudat diambil dengan kapas, yang sebelumnya tlah ditimbang dan disterilkan. Bobot kapas yang digunakan umumnya 200-250 mg.
7. Bobot eksudat adalah selisih antara bobot kapas yang mengandung eksudat dengan bobot kapas awal kering, yang tidak mengandung eksudat. 8. Selain diambil dengan kapas, cairan eksudat juga dapat disedot menggunakan spet injeksi.
2.7.4 Metode Granuloma Granuloma adalah sekumpulan makrofag dalam jumlah besar dan membentuk noduler yang terjadi akibat proses peradangan. Pada metode ini sebagai penginduksi radang antara lain karagen, kaolin, formalin, dekstran, ovalbumin, ragi dan CMC Na. Zat tersebut diinduksikan ke bagian dorsal punggung tikus melalui implantasi subkutan pada bagian grain dan axilla, dengan
20
menggunakan kapas steril sebagai mediannya. Akibat proses peradangan maka akan terbentuk eksudat yang banyak mengandung granuloma. Bobot granuloma menunjukkan kualitas inflamasi atau radang yang terjadi. Makin besar bobot granuloma, berarti respon inflamasinya juga makin besar atau makin parah. Yang dimaksud dengan bobot granuloma dalam hal ini adalah jumlah granuloma yang terbentuk selama proses peradangan, yang diukur atas dasar perbedaan atau pertambahan berat kapas setelah implantasi dibandingkan dengan berat kapas awal, sebelum dilakukan implantasi. Dengan demikian bobot granuloma ini selanjutnya dijadikan oarameter uji pada eksperimen ini (Lusia, 2011). Hewan uji yang dapat digunakan pada metode ini adalah tikus,marmot atau kelinci. Dapat juga menggunakan mencit, tetapi terlalu kecil sehingga akan sulit pada pengamatannya. Prosedur pengujian dalam penelitian ini yaitu : 1. Hewan uji dikelompokkan menjadi dua yaitu kontrol dan uji. Masing-masing kelompok terdiri 12 ekor.
2. Setelah dipuasakan makan selama 16-18 jam, bulu di keempat bagian dorsal punggung tikus (2 dibagian grain 2 dibagian axilla kiri dan kanan) dicukur dan dilakukan anaestesi inhalasi pada hewan dengan menggunakan eter.
3. Kemudian dilaksanakan implantasi pellet atau butiran kapas steril seberat 10-15 mg. Kapas terlebih dahulu dicelupkan ke dalam larutan CMC-Na 1%. Kapas disterilkan dengan autoklaf.
21
4. Setelah ditunggu 2 jam, kelompok uji diberi bahan uji dan kelompok kontrol diberi air suling atau larutan PGA 3% masing-masing secara oral sehari 1-2 kali, selama 5-7 hari. 5. Kemudian tikus dimatikan secara euthanasia dan kapas yang mengandung eksudat dikeluarkan dari punggung tikus, selanjutnya dikeringkan dalam oven 5060ºC sampai diproleh bobot yang konstan. Pertambahan bobot kapas dibandingkan dengan bobot awal adalah dicatat sebagai bobot granuloma yang terbentuk pada proses inflamasi selama 7 hari. 2.7.5 Metode Migrasi Leukosit Migrasi leukosit merupakan respon vaskuler terhadap kasus inflamasi atau radang. Cidera jaringan menyebabkan pelepasan mediator,aksi kemhemotaksis dan perubahan tekanan osmosis akibat perubahan permiabilitas memberan sel. Hal ini menimbulkan peningkatan aliran leukosit kelokansi jaringan cedera. Apabila jaringan recovery maka aliran migrasi leukosit menjadi normal kembali. Dengan demikian maka migrasi leukosit dapat dijadikan parameter uji bagi obat dengan aksi antiinflamasi (Lusia, 2011). Prosedur pengujian dalam metode ini yaitu : 1. Setelah dipuasakan 2-8 jam, kepada hewan kelompok kontrol diberikan bahan pelarut atau air suling,hewan kelompok uji diberikan bahan uji, sedangkan kelompok pembanding diberikan asetosal dengan dosis 1,5 g/50 kg bb. Semua perlakuan diberikan secara oral, baik dalam bentuk larutan maupun bentuk suspense dengan volume maksimum 5ml/tikus.
22
2. Setelah ditunggu 15-30 menit, semua hewan diberi penginduksi radang secara subkutan dibagian tengkuknya. Volume injeksi 0,5 ml/tikus. 3. Selanjutnya diambil darahnya sebanyak 2 ml melalui intravena atau intrakardiak. Jumlah leukosit diukur pada interval waktu tertentu, sesuai dengan kebutuhan atau disesuaikan dengan data orientasi. 2.8 Kandungan Senyawa Pada Tumbuhan 2.8.1
Definisi Flavonoid Flavonoid merupakan senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada
tanaman hijau kecuali alga. Flavonoid merupakan kandungan khas tumbuhan hijau dengan mengecualikan alga (Markham, 1981). Flavonoid digolongkan berdasarkan penambahan rantai oksigen dan perbedaan distribusi dari gugus hidroksil antara lain flavon, isoflavon, flavonol (landyyun, 2008). Senyawa flavonoid mengandung 15 atom karbon dalam inti dasarnya, yang tersusun dalam konfigurasi C6-C3-C6, yaitu duan cincin aromatik yang dihubungkan oleh satuan tiga karbon yang dapat atau tak dapat membentuk cincin ketiga flavanon, khalkon, dan auron. Flavonoid merupakan senyawa polifenol dan karena itu mempunyai sifat kimia senyawa fenol, yaitu bersifat agak asam sehingga dapat larut dalam basa. Namun dibiarkan dalam larutan basa, dan disamping itu terdapat oksigen, banyak yang akan terurai. Karena flavonoid mempunyai sejumlah gugus hidroksil yang tak tersulih, atau suatu gula. Flavonoid merupakan senyawa polar seperti etanol, methanol, butanol, aseton, dimetilsulfoksida, dimetilformamida, air, dan lain lain.
23
Adanya gula yang terikat pada flavonoid (bentuk yang umum ditemukan) cenderung menyebabkan flavonoid lebih mudah larut dalam air. Sebaliknya aglikon yang kurang polar seperti isoflavon, flavanon, dan flavon serta flavonol yang termetoksilasi cenderung lebih mudah larut dalam pelarut seperti eter dan kloroform. Flavonoid sering terdapat sebagai glikosida. Flavonoid mencakup banyak pigmen yang paling umum dan terdapat pada seluruh dunia tumbuhan mulai dari fungus sampai angiospermae (Markham, 1988). Flavonoid tertentu merupakan komponen aktif tumbuhan yang digunakan secara tradisional untuk mengobati gangguan fungsi hati, efektif menangkal radikal bebas, selain itu flavonoid yang ada kebanyakan sebenarnya adalah metabolit flavonoid yang berfungsi sebagai antioksidan sehingga ampuh mencegah
dan
mengatasi
kanker
dengan
menginaktifasi
karsinogen
penghambatan siklus sel dan induksi apoptosis . Menurut Kiranmai, flavonoid adalah antioksidan ampuh dan telah membangkitkan minat baru karena efek potensial mereka menguntungkan pada kesehatan manusia dalam memerangi penyakit. flavonoid untuk bertindak sebagai antioksidan tergantung pada struktur molekul mereka. Gugus hidroksil dan fitur lainnya dalam struktur kimia flavonoid yang penting bagi mereka antioksidan dan aktivitas radikal bebas. Flavonoid adalah antioksidan kuat karena memiliki semua fitur struktural yang tepat untuk radikal bebas. 2.8.2 Definisi Saponin Saponin adalah senyawa aktif permukaan yang kuat yang menimbulkan busa jika dikocok dalam air. Beberapa saponin bekerja sebagai antimikroba. Pada
24
beberapa tahun terahir ini saponin tertentu menjadi penting karena dapat diperoleh dari beberapa tumbuhan dengan hasil yang baik dan digunakan sebagai bahan baku untuk sintesis hormone steroid yang digunakan dalam bidang kesehatan. 2.8.3 Definisi alkoloid Yang disebut alkaloid tidak mewakili golongan yang dari segi kimia bersifat homogen, sehingga setiap rampatan mengenainya pasti mengandung terkecualian. Semuanya mengandung nitrogen dan sering kali terdapat dalam cincin heterosiklik, dan banyak, tetapi tidak semuanya, bersifat basa seperti ditunjukkan oleh namanya. Alkaloid sebagai golongan dibedakan dari sebagian besar komponen tumbuhan lain berdasarkan sifat basanya (kation). Oleh karena itu senyawa ini biasanya terdapat dalam tumbuhan sebagai garam berbagai asam organic dan sering ditangani di laboratorium sebagai garam dengan asan hidroklorida dan asam sulfat. Alkaloid berfungsi sebagai hasil buangan nitrogen seperti urea dan asam urat pada hewan. Alkaloid dapat melindungi tumbuhan dari serangan parasit atau pemangsa tumbuhan.
25
2.9 Kerangka Konsep
Bawang Merah Hutan
Pengujian Terhadap Hewan Uji
Manfaat Ekstraksi Kandungan (alkoloid, steroid,, glikosida, flavonoid, fenolik, tanin dan saponin)
2.10 Kerangka Teori Dalam menguji khasiat antiinflamasi dari bawang merah hutan, dilakukan identifikasi terlebih dahulu untuk menetapkan kebenaran bawang merah hutan yang digunakan. Dalam hal ini, peneliti menggunakan metode determinasi, yaitu dengan mencocokkan morfologi tanaman bawang merah hutan yang digunakan pada kunci identifikasi sehingga ditemukan family dari tanaman tersebut. Dengan ditemukannya famili, maka dapat ditemukan klasifikasi tanaman bawang merah hutan dari kingdom sampai spesies. Setelah itu dilanjutkan dengan melakukan ekstraksi. Ekstraksi ditujukan untuk menarik ekstrak kasar dari bawang merah hutan tersebut. Ekstraksi dalam pengujian ini menggunakan metode maserasi untuk
26
mencegah kejenuhan dari pelarut yang digunakan. Dalam metode ini peneliti menggunakan pelarut etanol 70% karena zat aktif yang akan diambil larut dalam air dan untuk mencegah timbulnya mikroba. Hasil dari ektraksi ini adalah ekstrak kasar yang terdiri dari beberapa zat bercampur dengan pelarut etanol 70%, karena itu perlu dilakukan penguapan untuk menghilangkan pelarut etanol 70% tersebut. Dalam metode ini karena yang terambil semua zat yang terdapat dalam bawang merah hutan, Setelah mendapatkan ekstrak bawang merah hutan selanjutnya diujikan terhadap tikus putih. Dalam pengujian terhadap hewan uji, dilakukan dengan metode volume udem karena hasilnya lebih mudah diamati. Dalam metode ini digunakan karagenin sebagai penginduksi karena tidak terlalu merusak sel dan hasilnya cepat terlihat. Tikus putih diberikan karagenin secara subkutan selang waktu 1jam diberikan ekstrak bawang merah hutan secara oral. Selanjutnya diamati hasilnya dengan menggunakan alat pletismometer.
Setelah melakukan semua tahapan tersebut, dilakukan pengumpulan data dan dan mengamati hasilnya sehingga didapatkan kesimpulan.
2.11 Hipotesis Penelitian
Hipotesis dalam penilitian ini adalah adanya perbedaan efek antiinflamasi pada ekstrak bawang merah hutan dengan berbagai dosis yang digunakan secara empiris.
BAB III METODE PENELITIAN
3.1 Rancangan Penelitian Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek antiinflamasi terhadap penurunan pembengkakan kaki tikus yang telah dibengkakan. Metode yang digunakan adalah metode eksperimen. Adapun tahap penelitian ini meliputi tahap persiapan, pelaksanaan dan tahap akhir. Tahap pertama, yaitu tahap yang meliputi persiapan alat dan bahan, determinasi, ekstraksi bawang merah hutan. Tahap yang kedua yaitu tahap pelaksanaan yang terdiri dari pengujian terhadap kaki tikus dengan pemberian ekstrak bawang merah hutan secara oral serta pengamatan pembengkakan pada kaki tikus sebelum dan sesudah perlakuan uji. Tahap yang terakhir adalah dilakukan pengamatan dan pengumpulan data sehingga diperoleh hasil. 3.2 Populasi dan Sampel Populasi dalam penelitian ini adalah bawang merah hutan, sedangkan sampel yang digunakan adalah ekstrak bawang merah hutan.
3.3 Lokasi dan Waktu Penelitian Penelitian dilakukan di Laboratorium Farmakognosi “Putra Indonesia Malang”
dan
Laboratorium
Farmakologi
Kedokteran
“Universitas
Muhammadiyah Malang . Waktu penelitian yang akan digunakan ± 1 bulan setelah proposal disetujui.
27
28
3.4 Instrumen Penelitian Instrumen penelitian adalah alat dan bahan yang akan digunakan untuk pengumpulan data. Alat-alat yang digunakan dalam praktikum antara lain beaker glass, gelas ukur, evaporator vakum, pletismometer air raksa, spuit dan sonde. Sedangkan bahan-bahan yang diperlukan antara lain hasil ekstrak bawang merah hutan, karagenin, aquadest, etanol 70%.
3.5 Definisi Operasional Pada penelitian ini terdapat dua variabel yaitu ekstrak bawang merah hutan yang akan diujikan sebagai variabel bebas, dan volume udem pada kaki tikus sebagai variabel terikat. Tabel 3.5 Tabel varian terkait Variabel
Sub variabel
Definisi
Alat ukur
Hasil ukur
Plestismometer
Pengurangan
operasional variabel Aktivitas
Penentuan
Uji volume udem
antiinflamasi
volume
adalah uji
volume udem
ekstrak
udem
dengan
kaki tikus
bawang
membandingan
merah hutan
atau menghitung volume udem kaki tikus.
29
3.6 Pengumpulan Data 3.6.1
Penentuan Objek Penelitian Objek penelitian ini adalah hasil ekstraksi bawang merah hutan yang akan
diujikan terhadap tikus putih sebanyak 12 ekor masing-masing delapan untuk uji dan empat ekor untuk kontrol. 3.6.2 Tahap persiapan 3.6.2.1 Determinasi Bawang Merah Hutan Langkah pertama dalam melakukan determinasi adalah menyiapkan tanaman yang akan dideterminasikan yaitu tanaman bawang merah hutan. Selanjutnya dicatat bentuk dan sususnan tubuh tanaman bawang merah hutan tersebut sebagai data. Dicocokkan data yang sudah diproleh dengan kunci determinasi tumbuhan sehingga ditemukan familli. Dari familli diproleh species, dan dilanjutkan ke atas sehingga diproleh kingdom.
3.6.2.2 Pembuatan Simplisia Bawang merah hutan yang sudah disiapkan dicuci selanjutnya dirajang untuk mempercepat proses pengeringan dengan cara diangin-anginkan sampai benar-benar kering. Bawang merah hutan yang sudah kering lalu diblender sampai menjadi serbuk selanjutnya, diayak dengan ayakan 20 mesh untuk mempermudah pengambilan ekstrak. 3.6.2.3 Pengambilan ekstrak bawang merah hutan dengan metode maserasi Langkah pertama dalam pembuatan ekstrak adalah dengan merendam simplisia dengan pelarut etanol 70% selama 2 x 24 jam dalam wadah tertutup
30
rapat agar tidak ada rongga ketika melakukan maserasi dan agar hasil yang didapatkan lebih baik. Setelah mengendap di lakukan penyaringan. Etanol 70% yang bercampur dengan ekstrak diuapkan dengan evaporator pada suhu tidak lebih dari 500C hingga konsistensi yang dikehendaki. 3.6.3 Tahap pelaksanaan Perlakuan untuk Hewan Uji : 1. Hewan uji dibagi menjadi 4 kelompok, masing – masing kelompok 3 ekor tikus.
3. Salah satu kaki belakang tikus diberi tanda dan diukur volumenya dengan cara mencelupkannya ke dalam tabung air raksa pada alat pletismometer sampai batas tersebut
4. Selang 10 menit, pada masing-masing tikus diberikan karagenin 0,5 ml 1 % secara subkutan pada bagian dorsal kaki yang sama.
5. Kemudian pada kelompok kontrol diberikan aquades, Selang waktu 1 jam pada kelompok uji diberikan hasil ekstrak bawang merah hutan. Bahan-bahan tersebut diberikan secara oral menggunakan sonde modifikasi 2. Semua hewan uji dipuasakan selama 6-8 jam
6. Setelah itu, volume kaki tikus diukur kembali pada setiap interval waktu 10 menit
31
7. Diukur volume kaki tikus dengan rumus : 1
C=B–A
2
F=D–E
3
A=C–F
Keterangan : A = Volume kaki awal B = Volume setelah diberi karagenin C = Volume udem kaki kontrol D = Volume setelah diberi karagenin E = Bahan uji F = Volume udem kaki uji
3.7 Analisis Data Pada Penelitian ini analisis data dilakukan dengan menguji aktivitas antiinflamasi ekstrak bawang merah hutan yang meliputi determinasi tanaman, pembuatan simplisia, pengambilan ekstrak bawang merah hutan, dan pengujian pada hewan uji. Data yang dikumpulkan dari pembuatan simplisia kemudian di hitung aktivitas yang terjadi pada kaki tikus dengan menggunakan one-way anova.
BAB IV HASIL PENELITIAN
3.1 Determinasi Tanaman
Bawang merah hutan (Eleutherine palmifolia) adalah tanaman setinggi 30–40 cm. Bawang merah hutan membutuhkan syarat hidup pada ketinggian antara 600 – 1400 m dpl. Tanamannya sendiri memiliki ciri daunnya berbentuk pita sepanjang 15-20 cm, lebar 3-5 cm mirip palem dengan tulang daun sejajar. Bunga berwarna putih dengan kelopak berjumlah lima. Bagian yang dapat dimanfaatkan pada tanaman ini adalah umbinya (Hariana, 2004). Berdasarkan hasil determinasi diperoleh Kunci determinasi dapat dilihat di lampiran 1 Determinasi Tanaman.
3.2 Pembuatan Simplisia dan Hasil Ekstraksi
Dalam pembuatan simplisia, dilakukan dengan cara mengeringkan bawang merah yang sudah dicuci dan dirajang kemudian dikeringan tanpa pemanasan untuk mencegah kerusakan zat aktif. Setelah mendapatkan simplisia, dilanjutkan dengan pembuatan ekstrak. Dalam pembuatan ekstrak dilakukan menggunakan metode maserasi dengan mengekstrak tiga macam dosis yang diambil secara empiris yaitu 15 gram, 20 gram, 25 gram. Ekstrak yang didapatkan dari dosis-dosis tersebut yaitu :
32
33
Tabel 4.2 Hasil Penimbangan Simplisia dan Hasil Ekstraksi Berat Bawang Merah Hutan 30 gram 40 gram 50 gram
Berat Simplisia
Hasil Ekstraksi
15,12 gram 20,15 gram 25,20 gram
4,5 ml 6 ml 7,5 ml
Dalam pembuatan ekstrak dilakukan dengan metode maserasi karena zat aktif yang akan diekstrak tidak tahan terhadap pemanasan dan prosedur yang digunakan sangat sederhana. Dalam hal ini, peneliti menggunakan etanol 70% sebagai pelarutnya karena sifat kelarutan senyawa larut dalam pelarut polar dan harganya yang relatif murah. Dapat dilihat pada lampiran tabel perhitungan hasil ekstraksi. Hasil maserasi kemudian diuapkan dengan evaporator untuk mendapatkan ekstrak kental dengan suhu 500 C.
Hasil ekstrak kental dari proses evaporasi kemudian diuji pada tikus dengan terlebih dahulu menghitung dosis yang akan di berikan kepada tikus dengan cara dikonversikan dengan dosis untuk manusia yang sudah diketahui secara empiris dan didapatkan dosis masing-masing kelompok uji yaitu 0,27 ml ; 0,36 ml dan 0,45 ml dapat dilihat pada lampiran perhitungan dosis.
3.3 Pengujian Terhadap Hewan Uji Dalam penelitian ini pengujian terhadap hewan uji dilakukan dengan menggunakan metode volume udem. Alat yang digunakan untuk mengukur penurunan udemnya yaitu plestismometer.
34
Tabel 4.4 Hasil pengujian terhadap hewan uji dalam satuan ml
Perlakuan Tikus
Air Suling ( 5 ml ) Ekstrak (dosis 15gram) Ekstrak (dosis 20gram) Ekstrak (dosis 25gram)
1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
Sebelum diinduksi penurunan udem (ml) 1,1 1,1 1,1 1,1 1,1 1,2 1,1 1,1 1,2 1,1 1,1 1,1
Setelah diinduksi penurunan udem (ml) 1,85 1,87 1,87 1,90 1,85 1,90 1,85 1,85 1,85 1,85 1,87 1,85
Tabel 4.5 Hasil Penurunan Volume Udem Penurunan Volume Udem No
1.
2.
3.
4.
Perlakuan
Air Suling ( 5 ml ) Ekstrak (dosis 15gram) Ekstrak (dosis 20gram) Ekstrak (dosis 25gram)
(ml)
Tikus
1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
10’
20’
30’
40’
50’
60’
1,85 1,87 1,87 1,90 1,85 1,90 1,85 1,85 1,85 1,85 1,85 1,85
1,85 1,87 1,87 1,90 1,85 1,90 1,85 1,85 1,85 1,85 1,85 1,85
1,85 1,87 1,87 1,85 1,85 1,85 1,85 1,85 1,80 1,85 1,80 1,80
1,85 1,87 1,87 1,85 1,80 1,85 1,80 1,80 1,75 1,80 1,80 1,80
1,85 1,87 1,87 1,80 1,80 1,85 1,80 1,80 1,75 1,75 1,75 1,80
1,85 1,87 1,87 1,80 1,75 1,80 1,80 1,80 1,70 1,75 1,75 1,80
35
Dari dosis yang diperoleh dilanjutkan ke tahap pengujian terhadap hewan uji dengan menggunakan eksrak bawang merah hutan yang di sonde kepada tikus putih yang terlebih dahulu disuntikkan karagenin pada kaki tikus putih. Selanjutnya di ukur pembengkakannya menggunakkan plestimometer. Hasil yang didapatkan dari pengukuran anova memiliki aktivitas antiinflamasi yang dibuktikan pada dosis ke dua yaitu 15gram dengan hasil 0,1 karena aktivitas yang dihasilkan lebih stabil.
BAB V PENUTUP
5.1 Kesimpulan Berdasarkan hasil penelitian tersebut dapat disimpulkan bahwa ekstrak bawang merah hutan memiliki aktivitas antiinflamasi yang dibuktikan dengan pengurangan volume udem pada dosis ke dua yaitu 15gram dengan hasil 0,1 karena aktivitas yang dihasilkan lebih stabil.
5.2 Saran Berdasarkan hasil pengamatan yang didapatkan, sebaiknya dilakukan pemberian dosis dengan konsentrasi yang lebih banyak ntuk dilanjutkan pada hewan uji sebagai antiinflamasi. Penelitian ini diharapkan dapat diterima dan mendapatkan hasil pengujian yang lebih maksimal.
36
DAFTAR PUSTAKA
Agoes, Goeswin. 2007. Teknologi Bahan Alam. Bandung: Penerbit ITB Backer, C. A. 1963. Flora Of Java. Leyden: Published Under The Auspices Of The Rijksherbarium. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1986. Sediaan Galenika. Jakarta: Departemen Kesehatan. DepartemenKesehatan Republik Indonesia. 2001.MateriaMedika Indonesia Jilid II. Jakarta: Departemen Kesehatan K.R, Markham. 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Bandung : ITB Mycek, Mary J. 1995. Farmakologi Ulasan Bergambar. Edisi II. Jakarta: Widya Medika. Neal, M.J. 2006. At A Glace Farmakologi Medis. Edisi V. Jakarta: Erlangga. Sugiyanto, 1995. Petunjuk Praktikum Farmasi Edisi IV. Laboratorium Farmasi dan Taksonomi UGM, pp : 11-12. Tilaar, Dr.Martha, dkk. 2010. The Green Science Of Jamu. Jakarta: Dian Rakyat Tjay, Tan Hoan dan Kirana Rahardja. 2002. Obat-Obat Penting. Edisi V. Jakarta: Gramedia. Tjitrosoepomo, Gembong. 2009. Morfologi Tumbuhan. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. W, E, Lucia. 2011. Eksperimen farmakologik. Surabaya: Sandira
37
38
Lampiran 1 Gambar Praktikum
Gambar 1. Penyaringan menggunakan vacum
Gambar 2.Ekstrak cair
Gambar 3.Evaporator
39
Gambar 4. Hasil Ekstrak Kental
Gambar 11.Plestimometer
40
Lampiran 2 Determinasi Tanaman Kunci determinasi : 2b – 3b – 4b – 6b – 7b – 9b – 10b – 11b – 12b – 13b – 14a – 15b – 197a – 200b – 103b – 204b -205b – 206b - 207a.-3a – 4b – 5b – 6b – 7a – 8a Lampiran 3 Perhitungan Dosis Dosis 1
15gram x 0,018 = 0,27 gram = 0,27 gram x 1 masa enis air = 0,27 ml
Dosis 2
20 gram x 0,018 = 0,36 gram = 0,36 gram x 1 masa enis air = 0,36 ml
Dosis 3
25gram x 0,018 = 0,45 gram = 0,45 gram x 1 masa enis air = 0,45 ml
41
Lampiran 4 Hasil Ekstraksi No
Sampel
Perhitungan ( mL) 200 gram = 60 ml 15 gram = a ml 15gram x 60 ml = 200 gram x a
1.
Dosis 15gram ml 900 gram/ml = 200 gram x a ml = 4,5 ml 200 gram = 60 ml 20 gram = a ml 20 gram x 60 ml = 200 gram x a
2.
Dosis 20gram
ml 1200 gram/ml = 200 gram x a ml = 6 ml 200 gram = 60 ml 25 gram = a ml 25 gram x 60 ml = 200 gram x a
3.
Dosis 25gram
ml 1500 gram/ml = 200 gram x a ml = 7,5 ml
Lampiran 5. Hasil Perhitungan Mengunakan One – way Anova
42
