ADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA SK RIPSI LILIK LESTYO BUDI UTOMO. ( Allium sativum L. ) F A K U L T A S FARMASI UN IVER SITAS AIR LAN G G A

ADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

7>DAM^H

O&AT

SK R I P S I LILIK

LESTYO

BUDI

UTOMO

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK BAWANG PUTIH ( Allium sativum L . )

TERHAOAP TOKSISITAS KARBON TETR A KLORIDA PADA HEPATOSIT TIKUS TERISOLASI DENGAN PARAMETER ENZIM GPT

f f U /o

M1LIK PERFUSI A k A A N ’UNIVERS1TAS A 1RJ.ANCCA"

SURABAYA

F A K U L T A S FARM ASI U N IV E R S IT A S A IR L A N G G A SURABAYA 1989

SKRIPSI

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK BAWANG PUTIH......

LILIK LESTYO BUDI UTOMO


PENGARUH

PEMBERIAN

EKSTRAK

BAWANG

PUTIH

{Allium sativum L.)

TERHADAP

T0 K 3 ISITA S

PADA

KARBON

HEPATOSIT

DENGAN

TIKUS

PARAMETER

TETRA

KLORIDA

TERISOLASI

ENZIM

GPT

SKRIPSI DIBUAT UNTUK MEMENUHI SYARAT MENCAPAI GELAR SARJANA FARMASI PADA FAKULTAS

FARMASI

UNIVERSITAS

AIRLANGGA

1989

Oleh : LILIK LESTYO BUDI UTOMO

050410655

Disetujui oleh Pembimbing

AHMAD FUAD. M.S

SKRIPSI




KATA PEN

aNTAR

Dengan mengucapkan puji syukur kepada Tahan Yang Maha Esa atas Rahmat dan Karunianya, sehingga kami dapat menyelesaikan skripsi ini untuk memenuhi

tugas

akhir

sebagai

salah satu syarat untuk mencapai gelar sarjana farmasi pa da fakultas Farmasi Unuversitas Airlangga. Terima kasih kami

sampaikan

kepada

Almamater

cinta, Fakultas Farmasi Universitas Airlangga

yang

ter— telah

memberi kesempatan kepada kami untuk belajar selama ini. Tidak lupa pad^ kesempatan ini

kami

sampaikan

pula

rasa terima kasih yang setulus-tulusnya kepada : - Bapak Drs. Ahmad Fuad, MS dari Laboratorium Fitokimia Fakultas Farmasi Unair. - Bapak Drs. Wahjo Dyatmiko Apt, dari Laboratorium

Fi

tokimia Fakultas Farmasi Unair. - Bapak DR. Mulya Hadi Santosa dari

Laboratorium

Bio-

teknologi Fakultas Farmasi Unair, yang telah memberikan

bimbingan,

saran,

pengarahan

dan semangat serta dorongan moral yang sangat berha'r— ga dalam pelaksanaan hingga selesainya skripsi ini. - Bapak DR. Gunawan Indrayanto sebagai Kepala Laborato rium Bioteknologi Farmasi Universitas Airlangga. - Bapak DR. Noor Cholies sebagai Ketua Jurusan

Biologi

Farmasi Universitas Airlangga.

,

ivi I L I iv •UNIVEMT&® AlftkANGtjA S U I A B A Y A _ -- I

SKRIPSI




- Laboratorium Medis Selamat Sejahtera Jember yang

te

lah memberikan fasilitas sehingga terse 1esainya tugas ini . - Bapak dan ibu dosen penguji yang telah berkenan menerima dan memeriksa skripsi ini. - Bapak dan ibu serta Saudara kami tercinta tuan baik moril maupun material

sehingga

atas

ban-

tugas

ini

- Rekan-rekan mahasiswa dan semua pihak yang tidak

da

dapat terselesaikan.

pat kami sebutkan satu persatu yang telah

memberikan

bantuan baik secara langsung maupun tidak langsung. Semoga Tuhan Yang Maha Esa berkenan melimpahkan Rakhmat dan Hidayahnya kepada kita semua. Amin. Akhirnya dengan segala kerendahan hati kami semoga skripsi yang kami buat ini

dapat

berharap

bermanfaat

bagi

ilmu pengetahuan, khususnya dunia ke-farmasian.

Surabaya, Desember 1989

Penyusun

2Xi

SKRIPSI




D A F T A R

I S I

ha1aman KATA P E N G A N T A R ....................................

ii

DAFTAR ISI ........................................

iv

DAFTAR GAMBAR .....................................

vi

DAFTAR L A M P I R A M ...................................

viii

BAB BAB

BAB

I . P E K D A H U L U A N ............................. II . TINJAUAN P U S T A K A .......................

1 4

1. Tinjauan tentang tanaman Allium sa tivum Linn......................... .

4

2. Tinjauan tentang karbon tetra klo rida .................................

7

3. Model percobaan in vitro pada hepar..

10

4. Uji hepatoprotektif .................

15

5. Enzim Glutamat Piruvat Transferase ..

IB

6. Uji Alanin Aminotransferase ........

19

III. BAHAN, ALAT dan METODE PENELITIAN .....

20

1. Bahan penelitian ....................

20

2. Alat-alat yang digunakan ...... .

21

3. Metode penelitian ...................

21

1. Persiapan alat ..................

21

2. Persiapan tikus .................

22

3. Pelaksanaan preparasi ...........

22

4. Pensuspensian dan pencucian hepa tosit ...........................

Ji

5. Penghitungan hepatosit dan test vitalitas .......................

34

6. Pembuatan ekstrak bawang putih...

36

7. Pembuatan CCl

39

0,4 mM ...........

8. Model percobaan yang dilakukan ..

39

9. Uji hambatan aktivitas enzim GPT.

41

10. Pemeriksaan aktivitas enzim GPT..

41

iv

m i l i k PERPUSTAKAAN

•’UNmiX.-jiT/ut Am LAN6flAB SKRIPSI

____S U RLILIK A , LESTYO s A YBUDI A UTOMO



BAB

IV. HASIL PENELITIAN ...................... .....43 1. Hasil preparasi hepatosit .......... ..... 43 2. Hasil percobaan inkubasi sel dengan karbon tetra klorida ................ ..... 44 3. Hasil percobaan inkubasi sel dengan ekstrak bawang putih ................ ..... 46 4. Hasil percobaan inkubasi sel pada tikus 1 .............................. ..... 47 5. Hasil percobaan inkubasi sel pada tikus 2 ................................... 50 6. Hasil percobaan inkubasi sel pada tikus 3 ................................... 53 7. Hasil uji aktivitas enzimGPT oleh ekstrak bawang putih ......... ........... 56

BAB

V. P E M B A H A SA N ................................... 58

BAB

VI. KESIMPULAN ................................... 61

BAB

VII. SARAN-SARAN .................................. 62

DAFTAR P U S T A K A .................................. ..... 63 R IN G K A S A N .....................................

SKRIPSI


......... 67



D A F T A R

G A M B A R

Gambar 1.

halaman Irisan berbentuk huruf U pada dinding peritonial

2.

.....................................

23

Masuknya sistem perfusi pada vena porta dan vena cava ..................................

24

3.

Posisi tangan dan hewan ...................

25

4.

Situasi hewan dan alat

perfusi

untuk

re-

sirkulasi media perfusi pada preparasi

he—

patosi t ........... . ....................... 5.

Skema situasi hewan dan alat perfusi resirkulasi media

perfusi

pada

29

untuk

preparasi

hepatosit ..................................

30

6.

Cara pensuspensian hepatosit ..............

32

7.a.

Penyaringan hepatosit .................... .

7.b.

Pemisahan hepatosit .......................

34

8.

Bidang-bidang dan garis dalam Neubauer ....

35

9.

Hepatosit tikus

secara

mikroskopi

dengan

pewarnaan Trypan blue (perbesaran 75 kali). 10.

Kurva selisih pelepasan suspensi

hepatosit

pada

GPT

dalam

Kurva selisih pelepasan

penambahan

suspensi

hepatosit

pada

GPT

CCl^

dalam


penambahan

GPT

dalam

suspensi hepatosit pada penambahan

44

medium CCl

0,4 mM dan 0,8 mM ......................... 12.

43

medium

0,2 mM ..................................... 11.

33

45

medium ekstrak

bawang putih ...............................

46

vi

SKRIPSI




13.


GPT

dalam

medium

suspensi hepatosit pada tikus 1 .......... 14.


hepatosit

GPT

dalam

medium

pada ' penambahan

0,4 mM dan CCl^ 0,4 mM yang 1 jam

CCl^

sebelum-

nya diberi ekstrak bawang putih 0,1875pl/ml 15.


GPT

dalam


hepatosit

pada

GPT

dalam

CCl^

sebelum-

nya diberi ekstrak bawang putih 0,1875pl/ml 17.


GPT

dalam


hepatosit

pada

GPT

dalam

52

medium


51

medium

penambahan

0,4 mM dan CCl^ 0,4 mM yang 1 jam

49

medium


48

54

medium

penambahan

CCl^

0,4 mM dan CCl

0,4 mM yang 1 jam sebelum4 nya diberi ekstrak bawang putih 0,1875/jl/ml 19.

Grafik prosentase hambatan aktivitas GPT pada berbagai konsentrasi

55

enzim

ekstrak

ba

wang putih .................................

56

vi 1

SKRIPSI




D A F T A R

L A M P I R A N

lampiran 1.

halaman Komposisi media perfusi hepar tanpa pengi68

2.

Komposisi media perfusi hepar dengan peng ikat ion kalsium ...................

69

3.

Komposisi larutan Seglen-3 .....

70

4.

Komposisi kit GPT optimized UV -* test dari 71

Boehringen Mannheim GmBh ....... 5.

Data hasil percobaan inkubasi CC1

6.

4

dengan

sel

72

..... ..........................

Data hasil percobaan inkubasi

dengan

sel

73

ekstrak bawang putih ............... 7.

Data hasil

percobaan

inkubasi

se 1

pada 74

tikus 1 ......................... 8.

Data hasil

percobaan

inkubasi

sel

pada 76

tikus 2 ......................... 9.

Data hasil

percobaan

inkubasi

se 1

pada 78

10.

Data hasil uji

hambatan

aktivitas

enzim 80

GPT oleh ekstrak bawang putih ... 11 .

Spektrogram ekstrak bawang putih

konsen81

vi i i

SKRIPSI




BAB I

P E N D A H U L U A N

Pembangunan kesehatan yang merupakan bagian

integral

dari pembangunan nasional dilaksanakan dengan tujuan

ter—

capainya kemampuan untuk hidup sehat

penduduk

agar

dapat mewujudkan derajat kesehatan yang optimal (1).

Obat

tradisonal yang merupakan warisan nenek moyang

atau

obat

dari bahan alam saat ini tetap digunakan

masyarakat

secara luas. Oleh karena itu dalam

bagi

oleh

upaya

pembangunan

di

bidang obat harus pula mencakup pembangunan obat di bidang obat tradisional atau obat dari bahan alam. Kenyataan menunjukkan bahwa pembangunan obat tradisi onal atau obat dari bahan alam akhir— akhir

ini

peningkatan. Sebagai contoh telah beredarnya

mengalami

Soft

Capsul

dari ekstrak bawang putih {Allium sativum L). Azizawati dkk (2) menyebutkan bahwa Bawang putih ngandung senyawa-senyawa organik tidak jenuh nyai gugus fungsional sulfhidril dan

yang

jembatan

me-

mempu—

disulfida,

seperti dialil disulfida, propil alii disulfida, glutation sistein, sistin dan asam tioktat. Sedang obat - obat

yang

digunakan sebagai anti hepatotoksik adalah senyawa-senyawa yang mempunyai gugus fungsional

sulfhidril

dan

jembatan

disulfida, seperti sistein, metionin, homosistein dan glu tation .

1

SKRIPSI




Ekstrak bawang putih (Alliun sativum L) mempunyai kegunaan sebagai penurun kadar kolesterol dalam

tubuh,

di-

samping itu juga mempunyai kegunaan lain diantaranya,

pe

nurun tekanan darah, penurun gula darah (2). HD Reuter (3) menyebutkan bahwa bawang putih juga da pat menghambat aktivitas enzim SGOT, SGPT, LDH, dan kolin— esterase dalam tubuh dan juga mempengaruhi membran plasma. Dengan latar belakang

zat

kandungan

dan

aktivitas

biologis yang telah dilakukan peneliti diatas, maka

dila

kukan penelitian secara in vitro (tingkat seluler) terhai dap ekstrak bawang putih untuk mengetahui aktivitas biologisnya terhadap toksisitas CCl^ dengan

menggunakan

model

percobaan memakai suspensi hepatosit tikus terisolasi Model percobaan memakai suspensi hepatosit tikus ter— isolasi dipergunakan karena model percobaan ini

mempunyai

keuntungan antara lain : 1. Lebih efektif dibanding percobaan in vivo jika ditinjau dari jumlah hewan

yang

diperlukan,

yaitu

dengan satu organ hepar (satu hewan percobaan) da pat diperoleh suspensi sel (hepatosit) dalam

jum

lah yang cukup untuk satu rancangan percobaan (peneli tian) . 2. Vitalitas dan kapasitas enzim

pemetabolisme

sus

pensi sel (hepatosit) dapat diukur setiap saat ji ka dibanding percobaan tingkat organ atau an jaringan.

SKRIPSI

potong-

(4,5)




3

Perfusi in situ organ hepar dengan cairan

fisiologis

yang mengandung enzim kolagenase atau ion pengikat kalsium akan dengan mudah mensuspensikan sel hepar dalam suatu me dia dan sel tetap dipertahankan hidup untuk percobaan

se-

bagai sistem suspensi atau kultur sel. Pada penelitian ini digunakan model percobaan memakai suspensi hepatosit

ti

kus terisolasi [5,6]. Penambahan karbon tetra klorida sebagai

hepatotoksik

pada sistem suspensi atau kultur akan menyebabkao

terjadi

peningkatan aktivitas enzim GOT dan GPT (enzyme

leakage).

Pada kondisi percobaan

aktivitas

yang

sama

peningkatan

enzim GPT selalu lebih besar bila dibandingkan dengan

ak

tivitas enzim GOT, sehingga dalam penelitian ini digunakan parameter enzim GPT. C7] Ekstrak bawang putih akan diuji pengaruhnya pada efek rembesan (enzyme leakage) enzim GPT yang CCl^. Aktivitas enzim GPT ditentukan meter pada panjang

gelombang 340

nm

disebabkan

dengan

oleh

spektrofoto-

dengan

menggunakan

suatu pereaksi baku (kit) GPT. Dengan hasil penelitian ini akan diketahui lebih lanjut aktivitas biologis tingkat seluler

bawang

putih

dan

dapat menambah informasi ilmiah bagi pemakaian tradisional bawang putih di dunia kesehatan.

SKRIPSI




BAB U

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Tinjauan tentang tanaman Allium sativum Linn. C3,B,9,10,11,12,13,14 3. 2.1.1. Klasifikasi tanaman. Divisi

Spermatopyta

Anak divisi

Angiospermae

Kelas

Monocotyledonae

Bangsa

Li 1iales

Suku

Li 1iaceae

Marga

All ium

Jenis

Allium, sativum linn.

Nama nasional Indonesia

Bawang putih

Malaysia

Bawang'puti h

F i 1ipina

Bawang

Thailan

Kratein

Nama InaoriS'

Garlic

Nama daerah Sumatra

:

lasuma

(Gayo),

bawang

mentar

(Alas), lasuma (Batak karo /Bataktoba), pasuma (Batak - simalungun), bawang

(Melayu),

bawang

putieh,

dasun (Minangkabau), bawang hendak (Lampung)

SKRIPSI




5

Kalimantan

:

Bawang

basihong

(Dayak

ngaju),

uduh bawang (Kenya), Bawang

puteh

(Bu1ungan), bawangpu1ak (Tarakan). Jawa

: Bawang bodas, bawang

putih

(Sun-

da), bhabang pote (Madura), bawang (Jawa). Nusa Tenggara : Kesuma

(Bali),

langsuma,

lesune

(Sasak), neune (Bima), lansuna manura

(Sangi),

laisoma

mabotiek

(Roti), balpeofoleae (Timor). Sulawesi

: Yantuna mapusi (Mongondo’w ), lesuma bado (Tonsoro), pia maputi (Gorontalo), lasuma kebo (Makasar),

le

suma pute (Bugis). Maluku

:

Kasai

bati

(uru),

(Halmahera), bawa

bawa

babudo

davare (Terna-

te), bawaiso (Tidore). 2.1.2. Morfologi tanaman. Tanaman herba dengan tinggi 30 - 60 cm, banyak ditanam diladang di daerah

pegunungan

mendapat sinar matahari. Tumbuhan

berumpun

umbi batang yang disebut bulbus. Tiap bungkus kulit tipis.

Daunnya

yang

cukup dengan

bulbus

berbentuk

pita

ter— dan

berakar serabut, bunganya berwarna putih. Kalau ba wang putih itu diiris-iris, baunya sangat tajam dan amat menandai (khas).

SKRIPSI




6

2.1.3. Kandungan tanaman. - Minyak atsiri

(allil disulfida, allil propil

di

sulfida) 0,1-0,9 7.. - Allisin. - A11iin. - Enzim alliinase, mirosinase. - Karbohidrat 0,2 */.. - Protein,

lemak, vitamin A, B1 dan C.

- Kalsium, fosfor, besi, belerang, dan selenium. - Koline 0,7 7.. - Inulin. 2.1.4. Aktivitas biologis. - Anti bakteri. - Anti mikotik. - Anti virus (propi1aksis). - Anti tumor. - Anti trombosis. - Menurunkan tekanan darah. - Menurunkan kaar gula darah. - Mempengaruhi aktivitas enzim SGOT, SGPT, LDH dan kolin esterase. - Antelmintik. - Hemorrhoid. 2.1.5. Simplisia yang digunakan. - Bulbus segar dan bulbus kering. 2.1.6. Toksisitas. - Jika digunakan secara topikal

dapat

/" I lenyebabkan

iritasi kulit.

SKRIPSI




7

- Jika

digunakan

secara

oral

dapat

menyebabkan

iritasi lambung.

2.2. Tinjauan tentang karbon tetra klorida Nama kimia

: Karbon tetra klorida.

Rumus molekul

: CC14.

Berat molekul

: 1 53 ,8 .

2.2.1. Sifat fisika kimia karbon tetra klorida.[153 Karbon tetra klorida berupa cairan yang berat, jernih, tidak berwarna, tidak mudah terbakar. Berat jenis : 1,592 - 1,595. Kelarutan

: 1 : 1500 air, larut dalam

lemak

dan

minyak menguap, bercampur dengan kloroform, eter, dan light petro- levm.. 2.2.2. Absorbsi dan nasibnya dalam tubuh.[15} Karbon tetra klorida segera diabsorbsi setelah inhalasi, dan juga diabsorbsi dari saluran

pencer—

naan. Karbon tetra klorida diekskresi secara perlahan-lahan melalui paru-paru, urin dan faeses. 2.2.3. Pengaruh karbon tetra klorida terhadap kultur

ja-

ringan sel hepar.[73 Bahan yang bersifat sitotoksis nyai efek yang tidak

spesifik

sering

dalam

permeabi1itas membran sel terhadap

mempu-

meningkatkan

komponen-kompo-

nen dari sel tersebut. Sebagai contoh

meningkatnya

aktivitas enzim SGOT dan SGPT dalam peredaran darah yang berasal dari hepar pada pemberian karbon tetra klorida pada binatang percobaan seperti pada dan anjing.

M I L I K. PERPUSTAKAAN I

SKRIPSI

tikus

SUTvABAY A




a

Metode kultur j a n n g a n sel gunakan untuk mDnentukan

e +ek

hepar, dari

dapat

karbon

tetra

klorida dengan bertambahnya pengeluaran enzim

yang

berasal dari sel hepar. Enzim GOT dan GPT akan sekresi secara normal pada

medium

di —

kultur,

di —

dimana

dengan penambahan karbon tetra klorida akan meningkatkan sekresi kedua enzim

tersebut

yang

berasal

dari sel hepar ke dalam medium kultur karena penga— ruh karbon tetra klorida terhadap membran sel

ter—

sebut.' Sebagai catatan bahwa peningkatan enzim

GPT

selalu lebih besar dari pada enzim GOT pada kondisi percobaan yang sama [73. Pada percobaan dengan Hepatic

Tissue

Culture

Cell dengan penambahan sebanyak 0,2 mM karbon tetra klorida dalam medium kultur selama tidak lebih dari 48 jam akan menyebabkan peningkatan enzim

GOT

dan

GPT yang berasal dari sel hepar. Kawaguchi dkk. telah melaporkan

bahwa

adanya

penurunan enzim dalam hepar (GOT dan GPT) dan

ada

nya peningkatan enzim GOT dan GPT dalam serum

pada

pemberian karbon tetra klorida secara intra ler pada pengamatan selama 24 jam

sampai

musku120

jam

pada tikus. Sifat toksik dari karbon tetra klorida karena terbentuknya

radikal

bebas.

Pada

diduga mulanya

terjadi pemisahan ikatan karbon — klorida yang akan membentuk ion (°CC1

SKRIPSI

3

klorida

). Adanya 0

2

dan

trihlorometi1

radikal

(oksigen) menyebabkan te>rbentuk-




9

nya triklorometil dioksida

(triklorometi1

radikal). Kemampuan bentuk

radikal

peroksi

mengikat

hidrogen dari ikatan lerak tidak jenuh akan

atom menye-

babkan integritas membran hilang sehingga sel hepar mengalami mikrosis (mati) L16, 17}. Disamping itu karbon tetra klorida

juga

mem-

pengaruhi membran dari mitokondria, dan membran da ri retikulum endoplasma pada struktur lemaknya. Or— gan sel lain yang dipengaruhi adalah ditandai den'gan pelepasan enzim dalam pensi karena adanya

hambatan

lisosom

yang

medium

sus

penggabungan

leucin

membentuk protein (18). Mekanisme kematian sel oleh karbon tetra

klo

rida : CCl karbon tetra klorida

CCl

°CC1

3

trikloro metil radikal

3

COO

trikloro metyl

Cl CO 2

fosgen

peroksi radikal

dengan lemak peroksidasi

sel mati

SKRIPSI




to 2.3. Model percobaan in vitro pada hepar.[A ,27] 2.3.1. Macam model percobaan in vitro pada hepar di

dalam

praktek dan penelitian pengenbangan antara lain : 2.3.1.1.

Model

percobaan

menggunakan

fraksi

mikrosoma

hepar. Fraksi mikrosoma hepar adalah salah satu frak si homogenitas jaringan hepar yang banyak mwngandung enzim

pemetabolisme.

Untuk

itu

dilakukan

isolasi hepar dari tubuh hewan yang terbius, mudian hepar dipotong kecil-kecil lalu kan dengan homogenisator, sehingga

ke-

dihancur-

akan

didapat

suspensi fragmen sel (fraksi-fraksi subseluler). Pemakaian fraksi mikrosoma ini

mempunyai

ko-

relasi dengan kondisi in vivo yang kuramg sekali. tetapi sifatnya sederhana dan mudah

dalam

tahap

penyiapan dan perlakuan selanjutnya

untuk

pene-

1i tian. 2.3.1.2. Model

percobaan

menggunakan

potongan

jaringan

hepar. Pemakaian

potongan

suatu model percobaan in

jaringan vitro

hepar

sebagai

merupakan

suatu

usaha pendekatan in vivo, yaitu masih adanya

ko-

ordinasi dan kooperasi antar sel-sel,. Te*api

mo

del ini mempunyai kekurangan yaitu mudah terjadinya nekrosa sel pada bagian

dalam

potongan

ja

ringan karena tidak cukupnya konsumsi zat asam.

SKRIPSI




ii

Dapat diduga bahwa kualitas dan reproduksibilitas hasil dari percobaan memakai potongan jari ngan hepar ini kurang baik dan sangat

tergantung

pelaksana percobaan, sehingga model percobaan ini jarang dipakai. 2.3.1.3. Model percobaan menggunakan organ

hepar

terper—

fusi. Pada model percobaan ini dibuat sirkulasi tertutup

(resirkulasi)

suatu

sistim

melalui

organ

hepar yang dipisahkan dari tubuh hewan

percobaan

(terisolasd). Korelasi dengan kondisi in vivo ba ik sekali karena

selama

percobaan,

keseluruhan

organ hepar masih intact, termasuk hepatosit

be-

serta sistem kapiler hepar di dalamnya. Kekurangannya adalah bahwa dengan satu hepar (satu

hewan

percobaan) hanya dapat dilakukan penelitian untuk satu perlakuan, vitalitas preparat (hepar terisolasi) selama percobaan sulit diperiksa dan dengan satu preparat hanya dapat digunakan terbatas

be-

berapa jam saja. 2.3.1.4. Model percobaan menggunakan hepatosit terisolasi. Adalah suatu

keberhasilan

pengetahuan selama dekade

besar

terakhir

dalam bahwa

ilmu dapat

dilakukan preparasi (isolasi) hepatosit (sel

pa-

renkim hepar) yang masih intact dalam jumlah yang cukup untuk tujuan penelitian jangka pendek serta untuk kultur sel. ^f v> • • SKRIPSI


.. . a g o /."1 LILIK LESTYO BUDI UTOMO


ta

Ada banyak cara preparasi yang bervariasi pada pada prinsip dan teknik isolasi sel dari jaringan yang dapat dipakai sebagai metode preparasi/ iso lasi hepatosit dari hepar. Umumnya preparasi dilakukan dengan

cara

per—

fusi tertutup (resirkulasi) organ hepar secara in situ dengan cairan fisiologis simulasi

yang

me

ngandung enzim proteolitik (kolagenase) atau

se

nyawa pengikat ion

kalsium

Setelah perfusi selesai dan

(EDTA,

Na

sitrat).

organ

hepar

nampak

telah terdisintegrasi, selanjutnya

hepar

diiso-

lasi dari hewan dan sel-sel

tanpa

banyak

hepar

kesulitan dapat tersuspensi setelah kapsula hepar dapat dirobek-robek. Vitalitas dan kapasitas

he

patosit yang diperoleh dapat diukur setiap saat. Dari satu organ hepar (satu

hewan

percobaan)

dapat diperoleh hepatosit dalam jumlah cukup sar sesuai dengan besar hewan percobaan.

be-

Umumnya

yang sering dipakai hewan percobaan adalah tikus. 2.3.1.5. Model percobaan menggunakan kultur hepatosit. Model percobaan memakai kultur

sel

kelanjutan dari percobaan dengan

merupakan

suspensi

hepa

tosit terisolasi. Pemakaian kultur hepatosit dimaksudkan agar : - dapat dilakukan percobaan yang lebih lama. - setiap akan melakukan percobaan tidak perlu se tiap kali dilakukan preparasi

SKRIPSI

hepatosit


cukup



13

memakai/mengambi1 dari

kultur

sel

yang

ter—

sedia. 2.3.2. Prinsip cara preparasi hepatosit terisolasi.[4,5] 1. Prinsip disintegrasi mekanis. 2. Prinsip memakai zat pengikat ion kalsium (chelator). 3. Prinsip memakai enzim proteolitik. Disintegrasi mekanik adalam cara

konvensional

yang sudah jarang dipakai. Jaringan hepar

dipaksa-

kan (mekanik).melalui suatu kasa/filter dengan dia meter 100 pm, baik terbuat dari logam Dapat diduga bahwa kualitas hasil

atau

nilon.

preparasi

tidak

baik dan jumlah sel yang didapat sangat sedikit. Pemakaian zat pengikat ion EDTA, dipakai atas dasar

bahwa

bervalensi dua men-jadi jembatan

kalsium, ion

misalnya

kalsium

ikatan

yang

antar

sel

hepar. Dengan hilangnya ion kalsium maka sel —

sel

hepar terdisintegrasi. Enzim proteolitik, bekerja pada

matrik

misalnya

antar

sel

kolagenase didalam

akan

jaringan

hepar, sehingga sel-sel hepar terdisintegrasi. 2.3.3. Teknis pelaksanaan prinsip pemakaian chelator

atau

enzim proteolitik.[4,5] 1. Cara dispersi inkubasi. 2. Cara disintegrasi perfusi.

SKRIPSI




14

2.3.3.1. Dispersi inkubasi. Dilakukan inkubasi terhadap

potongan-potongan

kecil jaringan hepar dalam media enzim

atau

zat

pengikat ion kalsium pada kondisi dan selama wak tu tertentu. Dengan demikian diperlukan pengadukan dan media

disentegrasi

sering

diganti

yang

baru. Cara dispersi inkubasi mulai

ditinggalkan

o-

rang karena cara disentegrasi perfusi lebih efektif dalam arti lebih banyak

diperoleh ' hepatosit

dengan vitalitas yang tinggi pula. 2.3.3.2. Disintegrasi perfusi. Perfusi artinya suatu proses pemasukan

cairan

ke dalam suatu sistem (hepar) secara kontinu

de

ngan kecepatan yang teratur. Perfusi hepar

dila

kukan dengan memasukkan cairan lewat

porta

dan keluar melalui vena

hepatica.

memerlukan alat pen.ting yaitu pompa

vena Cara

perfusi

paristaltik.

Pompa ini mampu menyalurkan media dengan kecepat an yang dapat diatur. Hal penting selama

dilaku

kan preparasi hepatosit terisolasi adalah kondisi simulasi fisologis untuk mempertahankan vitalitas sel. Kondisi ini selain meliputi komposisi yang berkaitan dengan tonisitas dan pH, juga

media me

liputi faktor temperatur.

SKRIPSI




15

2.4. Uji hepatoprotektif

L4,19,20,21,22,23,24]

Dengan bertambahny«: ia.poran adanya kasus samping bahan obat dan bahan kimia berupa sisitas (toksik terhadap hepar dan

efek

hepatotok-

fungsinya),

maka

penelitian uji hepatoprotektif menjadi makin intensif mencari bahan alam atau senyawa yang mempunyai

akti

vitas melindungi (protektif) hepar dari bahan hepatotoksik. Hepatotoksisitas dapat disebabkan

oleh

fak-

tor— faktor antara lain: 1. Kondisi non fisiologis misalnya : konsentrasi yang tinggi, perubahan pH atau tonisitas, yang

merupa

kan awal dari kematian sel. 2. Sifar merusak terhadap hepatosit. Kerusakan

plasma membran

membran

sel

merupakan

dari

penyebab

awal dari kematian sel. 3. Sifat menghambat dan merusak terhadap reaksi intra seluler beserta zat

yang

terlibat

dalam

reaksi

Bahan hepatotoksik bekerja baik secara

ekstra

tersebut. 4. Sifat merusak terhadap inti sel.

seluler atau intra seluler, dapat berupa bahan exogen atau metabolit dari bahan obat, antara lain : 1. Zat kimia exogen : karbon tetra klorida, samin, phalloidine, TOX (tertiary-buty1

galaktodydroper—

oxide). 2. Bahan obat atau metabolitnya : Hidrazin (metabolit INH) .

SKRIPSI




16

Untuk menguji aktivitas hepatoprotektif diper— lukan pengetahuan tentang parameter pengukur

hepato-

toksisitas. Parameter tersebut tercakup pada

metode-

metode sebagai berikut : 1. Integritas membran plasma, yaitu uji vitalitas sel dengan pewarnaan trypan blue, uji aktivitas

enzim

LDH, GOT dan GPT. 2- Fungsi metabolisme, yaitu aktivitas sintetis albu min atau gllserol,

uji

aktivitas

enzim

pemeta-

bolisme sitokrom P—450, uji kandungan GSH (reduced gJutation). 3- Mutagenicity Testing, yaitu mengukur efek terhadap kromosom/DNA dan manifestasi perubahannya. Uji hepatoprotektif tidak lain adalah meneliti pengaruh zat yang diuji terhaap

aktivitas

(toksisi—

tas) zat hepatotoksik tertentu meXalui parameter yang sesuai. Jenis parameter ini menentukan

jenis

inter—

pretasi sifat hepatoprotektif. Apakah protektif

ter—

hadap kerusakan membran plasma, atau

ter—

hadap fungsi— fungsi metabolisme

protektif

hepar

ataupun

pro

tektif terhadap mutagenitas. Uji hepatoprotektif

dapat

dilakukan

melalui

uji in vivo atau in vitro. Uji in vitro memakai hepa tosit terisolasi sebagai

SKRIPSI

percobaan

tingkat

seluler

mempunyai kelebihan bahwa secara spontan dapat

dike—

tahui aktivitas Jangsung pada sel

serta

(hepatosit)




17

langsung mengukur parameter hepatoprotektif. Percoba an uji hepatoprotektif menggunakan hepatosit kan dengan melakukan inkubasi bahan uji hepatotoksik dalam sistein suspensi

dilaku

bersama

(untuk

zat

percobaan

jangka waktu 1—4 jam) atau dalam sistem kultur

hepa-

tosit (untuk jangka waktu lebih dari 24 jam). Telah banyak diketahui atau diketemukan

pene-

liti bahan—bahan yang bersifat hepatoprotektif. Seba gai contoh

beberapa zat hepatoprotektif yang

dibagi

dalam dua golongan : 1. Bahan sintetis, contoh : Asam amino, misalnya cistein dan metionin (karena kandungan senyawa dipeptida, orniti1—aspartat,

misalnya

:

:

SH)

;

arginil-aspartat,

arginil—ketoglutarat

sebagai aktifator siklus urea) ; tida,misalnya

gugus

(zat

senyawa

glisin-histidin-1isin

ini

tripep(sebagai

liver growth faktor). 2. Bahan alam, yang merupakan metabolit sekunder naman. Saat ini sedang banyak

ta

dilaporkan

tentang

berkhasiatnya beberapa metabolit sekunder

tanaman

sebagai hepatoprotektif. Misalnya

tanaman

Allium

sativum, Liquidambar formosana, Eliptica alba, Mu sa acuminata9 Rehmania glutinosa, Casia tora9 Capparis spinosa. Metode pendekatan pencarian tanaman berkhasiat hepatoprotektif dapat melalui

pendekatan

kognosi (indikasi pemakaian dalam

SKRIPSI

etnofarma-

masyarakat


secara



ts traditional yang dapat dikaitkan dengan obat/jamu untuk hati) atau pendekatan kemotaksonomi dan SAR

(di-

cari tanaman yang mengandung metabolit sekunder sejenis atau mirip dengan zat yang telah

diketahui

mem-

punyai aktivitas). Belum ada cara baku untuk rancangan uji toprotektif. Yang umum dicoba

peneliti

cangan inkubasi bersama

hepatotoksik

(zat

hepa-

adalah

ran

dan

zat

yang diuji) atau rancangan penambahan zat yang

diuji

sebelum dan sesudah inkubasi zat hepatotok&ik.

Inku

basi dapat pada sistem suspensi hepatosit atau sistem ku1tur. 2.5. Enzim GPT (25) Dikenal dua jenis enzim transferase yang lazim dipakai untuk menilai adanya gangguan fungsi sel hati yaitu aspartat amino

transferase

dan

transferase. Alanin amino transferase amino alanin ke asam alfa

ketoglutarat

alanin

amino

membawa

gugus

menghasilkan

asam glutamat dan asam piruvat, sehingga lebih

dike-

nal dengan nama glutamat piruvat transferase (GPT). Enzim GPT mengkatalis reaksi sebagai berikut : COOH CH

CDOH

I

CH

3

HCNH

2

COOH

CH

2

GPT

CH

I

3

I

2

I

c=o

SKRIPSI

Asam a-ketog 1utara t

2

i

C = 0

CH

CQOH

CH-NH

COOH Alanin

CH

2

COOH Asam piruvat


Asam glutamat



19

GpT terutama terdapat dalam hati

dan

terdepat daiam ginjal dan otot

bergaris,

larut dalam

karena

sitoplasma.

Oleh

aktivitas enzim dalam serum

lebih

yang

itu

khas

sedikit ter-

kenaikan

menunjukkan

adanya gangguan sel-sel hati. Pada gangguan yang ringan pada membran sel ha ti, enzim sitoplasma akan merembes

ke

dalam

serum,

terutama GPT. Oleh karena itu GPT sangat cocok mengenal terjadinya gangguan sel

hati

untuk

walaupun

de—

rajat gangguannya ringan. 2.6. Uji Alanin amino transferase (ALT/GPT) [263 Metode

: Ultra violet, Kinetik, GSCC

Prinsip : ALT/GPT Alanin + 2-0xoglutarat ----.» Piruvat + Glutamat Piruvat

+

NADH

+ H

+

ldh

--------- =•♦ 1-Lactat + NAD

Kecepatan penurunan absorbansi pada

334,

340,

+ atau

365 nm karena terbentuknya NAD yang berasal dari ter— bentuknya piruvat dan ini digunakan sebagai pengukur— an aktivitas ALT/GPT.

SKRIPSI




BAB

III

BAHAN, A L A I. d*n METODE PENELITIAN

3.1. Bahan nenelitian — Bawang putih (A 1 1ium sativum Linn..) — Karbon tetra klorida (CCl^) — Dapar A. Sebelum digunakan dapar ini dongan gas 02 : CO^ = 95 :

5.

diseimbangkan

Komposisi

kimianya

tertera pada lampiran 1. — Dapar B. Sebelum digunakan dapar ini dengan gas 0 2 s CO 2 = 95 s

5.

% diseimbangkan

Komposisi

kimianya

tertera pada lampiran 2. — Seglen-3. Komposisi kimianya tertera pada lampiran 3. — Trypan blue. — Ether. — HC1 0,1 N. — NaOH 0,1 N. — Dapar NaCl pH 7,00. — Kit GPT dari Boehringer Mannhein. Komposisi

kimia

nya tertera pada lampiran 4. — Heparin 5000 IU/ml. — Serum kontrol untuk u j 1 pereaksi kit GPT optimized— UV test.

SKRIPSI




at

- Hewan percobaan : Hewan

: Tikus putih.

strain

: Wistar.

berat badan

: 150 - 300 gram,

jenis kelamin : jantan. Umur

: ± 5 bulan (dewasa).

Hewan diperoleh'dari Laboratorium Hewan Universitas Indonesia. 3.2. Alat-alat vano digunakan - Seperangkat alat operasi hewan. - Pompa peristaltik. - pH-meter. - Behring Elisa Photometer. - Hemasitometer : Improve Neubauer. - Mikroskop. - Seperangkat alat untuk perfusi hepar. - Shaker Water Bath. - Alat penghitung (counting clock). - Alat suntik 'Terumo syringe

disposable/steri 1

non

pyrogenic' ukuran 1,0 ml. - Surflo IV catheter sterile, Terumo 16 G x 2. - Surflo IV catheter sterile, Terumo 20 G x 2. 3.3. Metode Penelitian [5,6] 3.3.1. Persiapan alat Disiapkan susunan

peralatan

tampak pada gambar 4 dan gambar

SKRIPSI

perfusi

seperti

media

perfusi

5,




->r<

hepar sebelum digunakan dialiri dengan gas 0

: CO

2

2

- 95 s 5 v/v dan suhu media dibuat 37 °C. Tikus dianestesi dengan ether. Selama

melaku-

kan anestesi ketenangan tikus perlu dijaga,

misal-

nya cara

(tidak

memegang

tikus

harus

hati-hati

terlalu kasar) sehingga tidak terjadi

stress

tikus.

bila

Stress

menjadi

pada

gelisah

dan

tikus

terlihat

bahkan

sampai

pada tikus

terkencing-

kencing, karena stress pada tikus dapat menyebabkan vasokonstriksi pada pembuluh darah

khususnya

hepar.

pada

'

3.3.2. Persiaoan tikus Tikus dipuasakan selama sehari

(tidak

diberi

makan tapi masih diberi minum), Hal ini dimaksudkan agar

pada

hari

isolasi,

hepatosit

kondisi metabolisms nonhiperaktif.

tikus

dalam

Kemudian

tikus

tersebut ditimbang. 3.3.3. Pelaksanaan preoarasi Tikus

yang . telah

teranestesi

diletakkan

terlentang pada papan operasi hewan dengan

keempat

kakinya diikatkan pada papan operasi tersebut. Pada daerah ventral dilakukan sterilisasi alkohol 70

lokal

dengan

Disuntikkan secara intravena 0,25

larutan Heparin 5000 IU/ml pada

ekornya.

Hal

ml ini

ditujukan untuk menghindari pembekuan darah. Dilakukan pembukaan rongga peritonial, irisan bentuk huruf U. Mula-mula

SKRIPSI

dilakukan


dibuat penge-



23

lupasan kulit, baru kemudian dilakukan irisan dinding peritonial.

Cara

pembuatan

irisan

pada dapat

dilihat pada gambar 1.

Gambar 1. Irisan berbentuk peritonial.

huruf

Irisan dinding

diangkat

peritonial

U

diikatkan pada tempat operasi. Maka

pada ke

dinding atas

seluruh

dan organ

di dalam rongga peritonial akan nampak. Selanjutnya dilakukan penyisihan organ usus dan lainnya ke arah sebelah kiri, sehingga nampak jelas pembuluh

darah

porta dan vena cava inferior. Dibuat beberapa ligatur (simpul

ikatan)

yang

longgar {tampak pada gambar 2) yaitu : - vena porta, dibuat dua buah dan

berjarak

serta 10 mm dari hepar (pangkal vena

porta

5

mm, pada

hepar).

SKRIPSI




24

~ e.rt e n

8bflominahs untuk

mencegah

aliran

darah

ciasuK ke usus. - vena cava inferior, pada posisi sesudah (ke

arah

jantung) vena renal is. Ligatur dibuat dari benang berwarna

putih

setebal

0,5 mm dan sepanjang 20 cm.

Gambar 2. Masuknya sistem perfusi pada vena dan keluar melalui vena cava.

porta

Disiapkan aliran media perfusi dengan kecepatan pelan (10 ml/menit),

kanula

No.

20

disiapkan

sehingga dengan cepat dapat diletakkan pada stabii sedemikian

sehingga

dapat

mencapai

posisi tepat

pada vena porta.

SKRIPSI




25

Telunjuk kiri diletakkan di bawah vena sedangkan ibL jari

menjepit

dua

pcrta,

benang

ligatur,

narrpak jelas vena porta di sebelah ibu jari. Dengan posisi ini diharapkan pada

waktu

dilakukan

peng-

ikatan ligatur pada vena porta setelah kanula dapat dimasukkan, cukup dilakukan ligatur

lainnya

dengan

pinset). Posisi tangan

penarikan

tangan dan

dua

kanan

hewan

benang (memakai

seperti

tampak

pada gambar 3 :

Gambar 3. Posisi tangan dan hewan Tangan kanan dengan memakai perlahan (robekan

kecil)

vena

gunting cava

memotong

pada

posisi

sebelum (ke arah jantung) vena renalis, selanjutnya segera pula dilakukan pemotongan posisi 2 mm sebelum (ke arah akhir, kemudian gunting

vena

hepar)

segera

porta ligatur

vena

porta

yang

kanula masuk sejauh 2 mm setelah

SKRIPSI

2

mm

ambil

porta

terpotong, ligatur

tetapi tidak sampai menembus hepar. bahwa kanula masuk sampai

tef—

dilepaskan,

kanula, masukkan dengan benar pada vena lalui posisi

pada

sampai pertama,

Setelah

melebihi

me-

jelas ligatur

f./lir'V. LESTYO BUDI UTOMO PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK BAWANG PUTIH...... LILIK


26

pertama (hal ini dapat dilihat dengan

adanya

per-

ubahan warna hepar dari merah coklat menjadi coklat muda yang menunjukkan telah terjadinya perfusi

he

par walaupun belum dilakukan pengikatan kedua ligatur pada vena

porta).

Posisi

kanula

distabilkan

tanpa harus dipegang tangan kanan (kedudukan stabil kanula beserta pipa saluran

media

perfusi

penting), segera dilakukan pengikatan ngan tangan kanan dengan

bantuan

sangat

ligatur

pinset.

Setelah

ligatur diikat, barulah tangan kiri melepaskan gangan pada posisi dibawah

vena

porta.

de

pe-

Pelepasan

ini harus hati-hati, yakin bahwa tidak akan

menye

babkan keluarnya kembali kanula

porta.

dari

vena

Lalu dilakukan ikatan kedua kalinya pada kedua

li

gatur vena porta dan pangkal kanula (atau pipa

sa

luran perfusi) difiksir pada hewan dan tempat

ope

rasi untuk

menstabilkan

posisi

kanula.

Hal

ini

untuk mencegah keluarnya kanula dari vena porta ka rena pergerakan kanula.

Sampai

disini

tahap perfusi hepar dengan memasukkan

selesailah cairan

per

fusi melalui vena porta dan keluar melalui vena ca va inferior. Dilakukan pembukaan rongga dada. Mula-mula di lakukan perobekan kulit ke arah leher, kemudian di buat irisan dari arah ventral ke arah kranial

sam

pai leher. Juga dilakukan perobekan sebagian

SKRIPSI




27

diafragma, sehingga nampak. semua dada

terutama

jantung

dan

organ

vena

di

cava

rongga

inferior.

Dibuat ligatur dengan ikatan longgar pada vena cava inferior sejauh 10 mm dari pertemuan vena

hepatica

dengan vena cava inferior, disiapkan kanula dengan pipa saluran sepanjang minimal 30 posisi yang stabil sehingga nantinya

cm.

dapat

cepat dan mudah kanula masuk pada vena rior di rongga dada dan

No

kedudukannya

16 Cari

dengan

cava

infe

mudah

untuk

difiksir agar stabil. Tangan

kiri

memegang

satu

benang

ligatur,

tangan kanan mengambil gunting dan membuat k.ecil pada bilik kanan

jantung,

robekan

gunting

dilepas,

ambil kanula, masukkan pada vena cava inferior lalui lubang

robekan

pada

bilik

kanan

Setelah yakin bahwa kanula

masuk

pada

inferior sampai

hepar

(atau

mendekati

me

jantung. vena

cava

pertemuan

vena cava inferior dan vena hepatica), benang liga tur yang lain ditarik

dengan

tangan

membuat ikatan pada ligatur. Dibuat

kanan ikatan

untuk sekali

lagi, kemudian sisa benang difiksirkan pada pangkal kanula. Hal ini

untuk

dari vena cava inferior

mencegah kalau

keluarnya terjadi

kanula

pergerakan

pada kanula. Dilakukan pengikatan erat ligatur pada vena cava inferior sesudah vena

renalis

(ke

posisi arah

jantung) dengan tujuan menyumbat aliran keluar per—

SKRIPSI




2S

fusi melalui posisi penambahan

tersebut.

kecepatan

Kemudian

aliran

dilakukan

perfusi

sampai

50 ml/menit, maka akan tampak terjadi aliran keluar perfusi dari hepar

melalui

kanula

yang

dipasang

pada vena cava inferior dalam rongga dada. Aliran keluar

perfusi

dapat

ditampung

labu erlenmeyer 50 ml dan dari sini disirkulasikan kembali masuk ke dalam diaan media perfusi dengan pompa

dapat

perse-

peristaltik.

De

disedia-

Jika

tidak

memakai

sistem resirkulasi, maka dibutuhkan

media

perfusi

sejumlah 3 liter

liter.

dihisap

labu

ngan sistem perfusi resirkulasi ini cukup' kan larutan perfusi 1

pada

dengan

perhitungan

50

ml/menit

dikalikan 60 menit perfusi. Perfusi hepar dengan

pengikatan

ion

kalsium

dilakukan sebagai berikut : Mula-mula menggunakan media perfusi hepar yang dak mengandung pengikat ion kalsium.

Setelah

parasi berhasil dengan baik baru dilakukan

ti pre-

perfusi

dengan menggunakan media perfusi hepar yang mengan dung pengikat ion glisin). Perfusi

kalsium hepar

(EDTA

dengan

-

Na

sitrat

menggunakan

media

yang mengandung pengikat ion kalsium dilakukan 30 40 menit tergantung pengamatan apakah semua hepar telah terdesintegrasi. Hal

ini

bagian

nampak

jika

dilakukan penekanan pada hepar dengan spatel,

maka

jika spatel diangkat kembali akan tampak bahwa

SKRIPSI


ja-



29

ringan hepar telah lunak, tidak

kenyal

lagi,

tampak j a n n g a n telah terdispersi di dalam

dan

selaput

hepar. Situasi hewa'n serta alat perfusi untuk kulasi media perfusi dapat dilihat

pada

resir-

gambar

4

dan gambar 5 berikut.

Gambar 4. Situasi hewan serta alat perfusi untuk resirkulasi media perfusi pada preparasi hepatosit.

SKRIPSI




30

Gambar 5. Skema situasi hewan dan alat perfusi untuk resirkulasi media perfusi pada preparasi hepatosi t . Keterangan gambar 5 : A. Media perfusi hepar dalam suatu labu yang berada dalam

inkubator air. Media

ngan gas □ :C0 y

a

2

= 95 :

5

disetimbangkan

v/v

dan

de

suhu

media

mengalirkan

media

2

dibuat 37 °C. B. Pompa peristaltik yang mampu dari bejana A ke

arah

hewan

percobaan

dengan

kecepatan yang dapat diatur sampai 50 ml/menit.

SKRIPSI




31

C. Posisi ligatur pada vena porta

tempat

masuknya

kanula dan media perfusi menuju hepar. D. Posisi pemotongan vena cava inferior. E. Posisi ligatur pada vena

cava

tempat

masuknya

kanula dan keluarnya media perfusi. F. Posisi ligatur pada

vena

cava

untuk

mencegah

aliran keluar. G. Posisi ligatur

pada

arteri

abdominalis

untuk

mencegah aliran masuk. H. Pemanas. I. Tabung gas 0^ : C0z = 95 : 5 v/v. S. Pengaduk. W. Inkubator air. T. Beker glass sebagai penampung media perfusi. 3.3.4. Pensuspensian dan pencucian hepatosit Hepar yang telah didesintegrasikan secara

pe

ngikatan ion kalsium dengan EDTA - Na sitrat - glisin diisolasi dari tikus

secepat

menggunakan pinset di tangan

mungkin.

kiri

hepar

Dengan dipegang

pada bagian vena porta ( bekas kanula 1 ), direndam dalam media Seglen-3 sambil dirobek - robek selaput (kapsula) heparnya memakai pisau (atau ujung

gun

ting). Hepar digerakkan naik-turun dengan pinset di dalam media untuk mencoba secara mekanis mensuspensikan hepatosit (lihat gambar 6). Selama pelaksanaan pensuspensian

hepatosit

Seglen-3 harus 0 - 4

°C,

ini

yang

temperatur dapat

media

dipersiapkan

dengan membuat campuran es batu dan air.

SKRIPSI




Gambar 6. Cara pensuspensian hepatosit. Setelah dirasa cukup mensuspensikan semua patosit yang artinya

hanya

tersisa

sedikit

he saja

jaringan ikat yang terpegang pada pinset, maka suspensi hepatosit kita lewatkan kasanilan 100 m, perti dalam gambar 7.a. Penyaringan

dapat

lagi dengan kasanilon 50 m. Setelah tahap ngan ini selesai,

maka

dalam

suspensi

se-

diulang penyari hepatosit

terdapat komponen sebagai berikut : — Hepatosit yang vital. — Sel non parenk.im. — Sel—sel yang mati. — Fragmen sel. Semua komponen

ini

terdapat

dalam

suspensi

dengan berbagai ukuran dan masa jenis. Jumlah terbesar adalah

hepatosit

yang

vital.

yang

Hepatosit

yang vital ini kemudian dipisahkan dengan cara

de-

kantasi, lihat gambar 7.b.

SKRIPSI




33

Cara dekantasi adalah cara yang sederhana. Se lama 10 menit hepatosit yang vital akan tersedimentasi di dasar labu sehingga dengan penghisapan pernatan akan dip’ e roleh fraksi hepatosit dasar labu. Hal ini dapat dilakukan

vital

sebanyak

sudi tiga

kali untuk mencuci suspensi hepatosit.

PEN'.'ftRIN‘3AN ntF'ftTOi IT

---)

Gambar 7.a.

SKRIPSI

Penyaringan hepatosit.




34

AIR ES Gambar 7.b.

Pemisahan hepatosit.

3.3.5. Penghitungan hepatosit dan tes vitalitas - Dari 50 ml suspensi hepatosit, diambil -500 fjl dan dipindahkan pada tabung reaksi kecil. - Ditambahkan larutan trypan blue 0,4 */. dalam fisiologis (0,9 V.) sebanyak 500 ^1 ke

dalam

NaCl ta

bung reaksi tersebut. - Di pipet, diletakkan

di

at'as

Neubauer

yang telah disiapkan, yaitu gelas

Chamber

penutup

dile

takkan di atas kamar penghitung sehingga menutupi kedua daerah penghitung. Cara meletakkan pipet ditempatkan pada tepi gelas penutup dan larutan dikeluarkan. - Kamar penghitung diletakkan dan

penghitungan

dilakukan

di

bawah

dengan

mikroskop menggunakan

obyektif 10 kali.

SKRIPSI




35

3.3.5.1. Cara menahituna hepatosit.

-1 Bidang

Gambar 8,

Bidang-bidang dan garis dalam Neubauer

1. Daerah penghitung tersebut

mempunyai

panjang

Z mm, lebar 3 mm dan dalam 0,1 mm. Dihitung jumlah hepatosit yang terdapat

dalam

16 bidang pada sudut Neubauer Chamber. Luas satu bidang » 0,25 mm x 0,25 mm = 0,0625 mm2Luas 16 bidang

*= 16 x 0,0625 mm

Volume 16 bidang * 1 mm

2

x 0,1 mm

i

— 1 mm

*

- 0,1 mm

9

= 10"“ m l .

' 1 CO/ - 1 SKRIPSI




36

2. Misalnya jumlah hepatosit yang terdapat 16 bidang = N, sedangkan volume

16

dalam

bidang

10 4 ml, maka jumlah hepatosit dalam

1

ml

= =

(1 s 10~4 ) x N = 104 N sel. Jadi jumlah hepatosit - N x 104 sel/ml. 3. Sel-sel yang terletak

dan

menyinggung

batas sebelah kiri dan atas dihitung,

garis sedang

kan sel-sel yang terletak dan menyinggung ris batas sebelah kanan dan

bawah

tak

tung, atau sebaliknya. Hal ini untuk dari terjadinya penghitungan ulang

ga dihi

menghindari

sel.

Cara menghitung sel-sel juga harus sistematik. 3.3.5.2. Tes vitalitas Sel-sel

yang

menyerap

warna

adalah sel—sel yang mati, karena

Trypan

pada

sel

mati akan didapatkan membran sel yang rusak, hingga membran sel akan lebih permeabel. yang hidup menolak zat

warna

dan

Blue yang se

Sel-sel

nampak

tidak

terwarnai. . ... jumlah sel hidup ... .. /. sel hidup ^— r---r r x 100 /. ^ = 1 jumlah seli— total 3.3.6. Pembuatan ekstrak bawano outih — Timbang lOO gram bawang putih. — Gerus dalam mortir sedikit demi sedikit. — Kumpulkan hasil gerusan dalam kasa penyaring, ke— mudian diperas. — Filtrat dikumpulkan dalam wadah (erlemeyer),

ke-

mudian ditutup dan disimpan di tempat yang dingin.

SKRIPSI




37

3.3.6.1. Pembuatan ekstrak bawang putih 250 p 1/ml. - pipet 500 p 1 ekstrak bawang putih. - tambahkan 500 pi Seglen-3. - diencerkan dengan supernatan

hepatosit

dengan

volume sama. 3.3.6.2. Pembuatan ekstrak bawang putih 63,3 pl/ml. - pipet 500 pi ekstrak bawang putih. - tambahkan 2.5 ml Seglen-3. - diencerkan dengan supernatan

hepatosit

dengan

volume sama. 3.3.6.3. Pembuatan ekstrak bawang putih 45.55 pi/ml. - pipet 500 pi ekstrak bawang putih. - tambahkan 5 ml Seglen-3. - diencerkan dengan supernatan

hepatosit

dengan

volume sama. 3.3.6.4. Pembuatan ekstrak bawang putih 31,8 pl/ml. - pipet 700 pi ekstrak bawang putih pada

konsen-

trasi 45,55 pl/ml. - tambahkan 300 pi seglen-3. 3.3.6.5. Pembuatan ekstrak bawang putih 22,75 pl/ml. - pipet 500 pi ekstrak bawang putih pada

konsen-

trasi 45,55 pl/ml. - tambahkan 500 pi Seglen-3. 3.3.6.6. Pembuatan ekstrak bawang putih 7,5 pl/ml. - pipet 300 pi ekstrak bawang putih . - tambahkan seglen-3 ad 20 ml.

SKRIPSI




38

- diencerkan dengan supernatan

hepatosit

dengan

volume sama. 3.3.6.7. Pembuatan ektrak bawang putih 0,1875 jil/ml. - Pipet 0,03 ml ektrak bawang putih. - Larutkan dalam Seglen-3 20 ml. - Pipet larutan tersebut 2,5 ml. - Encerkan dengan larutan Seglen-3

sampai

volume-

nya 20 m l . 3.3.7. Pembuatan CCl

4

0,4 mM. ’

- Buat larutan jenuh CCl^ dalam larutan Seglen-3. - Pipet dari larutan jenuh tersebut i,84 ml. - Encerkan larutan ini dengan

menambahkan

larutan

Seglen-3 sampai volumenya 20 ml. 3.3.8. Model percobaan yang dilakukan 3.3.8.1. Dengan CCl

4

0,4 mM

- Dipipet CCl^ 1,84 ml dari larutan jenuh CCl^. - Tambahkan hepatosit dari hasil preparasi

seba-

nyak 4,0 ml dalam erlemeyer 100,0 ml. - Tambahkan serum darah tikus 0,2 ml dan

larutan

Seglen-3 sampai volume total 20 ml. - Kocok, dipipet 1,5

ml

dalam

tabung

venoject

untuk diperiksa aktifitas enzim GP.T-nya. - Kemudian diinkubasi pada shaker water bath pada suhu 37 °C dengan dialiri gas 0 *

2

- Dipipet sebanyak 1,5 ml dengan

: CO

2

= 75 : 5

interval

satu jam (60 menit) sebanyak tiga

kali

waktu (menit

ke-60, menit ke-120 dan menit ke-lBO).

SKRIPSI




39

- Tentukan aktifitas enzim GPT-nya. 3.3.8.2. Dengan bawang putih 0,1875 pl/ml. - Dipipet dari hasil pengenceran 0,03 ml

ekstrak

bawang putih sebanyak 2,5 ml, kemudian masukkan dalam erlemeyer 100 ml. - Tambahkan hepatosit dari hasil preparasi

seba

nyak 4,0 ml. - Tambah serum darah tikus

0,2

ml

dan

larutan

Seglen-3 sampai volume total 20,0 ml. - Kocok, d’ ipipet 1,5 ml ke dalam tabung

venoject

untuk diperiksa aktifitas enzim GPT-nya. - Kemudian diinkubasi pada shaker water bath pada suhu 37 °C dengan dialiri gas □ s CO = 95 : 5 * 2 Z - Dipipet sebanyak 1,5 ml dengan

interval


kali

waktu (menit

ke-60, menit ke-120 dan menit ke-180). - Tentukan aktifitas enzim GPT-nya. 3.3.8.3. Dengan bawang putih 0,1875 pl/ml dan CCl^ 0,4 mM - Model percobaan ini dibagi dalam dua bagian. -

Bagian

pertama,

dilakukan

percobaan

dengan

bawang putih dan CCl^ sebagai berikut : - Dipipet dari hasil

pengenceran

trak bawang putih sebanyak 2,5

0,03 ml

ml

dan

eks masuk

kan dalam erlemeyer 100 ml. - Tambahkan larutan CC1 - Tambahkan

larutan

4

0,4 mM.

tersebut

dengan

hepatosit

hasil preparasi sebanyak 4,0 ml.

SKRIPSI




40

- Tambahkan serum darah tikus 0,2 ml

dan

larut

an Seglen-3 sampai volume total 20,0 ml. - Kocok, dipipet 1,5 ml untuk

diperiksa

aktifi-

tas enzim GPT-nya. - Suspensi diinkubasi pada shaker water bath pada suhu 37 °C dengan dialiri gas 0

s CO

2

- Dipipet sebanyak 1,5 ml dengan

2

= 95:5.

interval


waktu

kali

(menit

ke-60, menit ke-120 dan menit ke-180). - Tentukan aktifitas enzim GPT-nya. - Bagian kedua dilakukan percobaan dengan ekstrak yang diinkubasi selama satu jam. - Dipipet 1,5 ml (pemipetan

dilakukan

pada

me

nit ke-0 dan menit ke-60). - Diperiksa aktifitas enzim GPT-nya. -

Inkubasi

dilanjutkan

dengan

ditambah

CCl^

0,4 mM. - Pada menit ke-120, menit ke-180 dan

menit

ke-

240 dipipet 1,5 ml. - Tentukan aktifitas enzim GPT-nya. 3.3.8.4. Dengan hepatosit - Dipipet 4,0 ml hepatosit hasil preparasi. - Ditambah serum darah tikus 0,2 ml

dan

larutan

Seglen-3 sampai volume total 20,0 ml. - Dikocok, dipipet 1,5 ml dalam tabung venoject. - Tentukan aktifitas enzim GPT-nya.

SKRIPSI




41

- Suspensi diinkubasi pada shaker water bath pada suhu 37 °C dengan dialiri gas 0^ : CO^ = 95 : 5 - Dipipet sebanyak 1,5 ml dengan

interval


kali

waktu (menit

ke-60, menit ke-120 dan menit ke-180). - Tentukan aktifitas enzim GPT-nya. 3.3.9. Uji hambatan aktivitas

enzim

GPT

dengan

ekstrak

bawang putih. - sel hepatosit yang telah disimpan

selama

satu

ha-

ri dalam alm^ri pendingin disentrifuge -

supernatan dikumpulkan (aktivitas enzim GPT tinggi)

-

dipipet 1 ml supernatan

-

dipipet 1 ml ekstrak

sel hepatosit

bawang

putih

sesuai

dengan

konsentrasi yang diinginkan -

tentukan aktivitas enzim GPT nya.

3.3.10. Pemeriksaan aktifitas enzim GPT.

(26,28)

A l a t

: Behring Elisa Photometer.

Panjang gelombang

: 340 nm.

Faktor koreksi

: 1905.

S u h u

: 30 °C

Cara pemeriksaan : - Hasil pemipetan 1,5 ml dalam tabung venoject di sentrifuge selama lima menit. - Ambil supernatannya dan pindahkan

dalam

tabung

venoject lain. - Lakukan pemeriksaan sebagai berikut :

SKRIPSI




42

Dipipet ke dalam kuvet Larutan Reagen

500

Sampel percobaan

50 Vl

Dicampur dan diinkubasi satu menit pada

30 °c

Larutan alfa-oksoglutarat

50 Vi

Dicampur kemudian dimasukkan ke dalam alat

Behring

Elisa Photometer dan catat hasilnya (unit/1iter).

SKRIPSI




43 BAB IV

H A S I L

4.1.

P E N E L I T I A N

H a sil p re p a ra si h e p a t o s it . Pada penelitian ini dilakukan tiga kali preparasi

tikus)

dengan

jumlah

sel

dan

vitalitas

tertera

(3 pada

tabel 1. TABEL 1 JUMLAH D A N VITALITAS SEL

C

r r* \

Gambar 9. Pengamatan hepatosit secara mikroskopi dengan perbesaran 75 kali a. hepatosit vital. b. hepatosit yang terwarnai oleh trypan blue.

SKRIPSI




44

4.2.Hasil

percobaan

inkubasi

sel

dengan

dari

hasil

karbon

tetra

klorida. Aktivitas

enzim

GPT

inkubasi

sel

dengan CCl^ pada tiga macam konsentrasi yaitu 0,2

mM,

0,4 mM, dan 0,8 mM, terlihat pada gambar 10 dan 11.

B

18G u H I T

160 140

120 P E 100 R SO

60 40

20 0 0

1.5 WftK

OamJbar

10

U (JAM)

Kurva selisih pelepasan GPT dalam medium suspensi hepatosit terisolasi pada penambahan CCl^ 0,2 mM.

Keterangan

: A = Hepatosit tanpa penambahan zat lain {Kontrol) B = Hepatosit + CCl^ 0,2 mM. A dan B data pada

SKRIPSI

lampiran 5




45

*D c

400 U N 350 I T 300

*=■ A /

/'

p 250

/

_V

I 200 R 150 L I 100 T E 50 R n

•

I

:#:/

*

.*

; /

fc*

0

r

,w f *

.**

/

S'

! 0 1 ll! i 2 1 1 3 I WflKTU (JflM)

»

Gambar

> 11.

Kurva

selisih

suspensi

pelepasan

hepatosit

GPT

terisolasi

dalam

medium

padapenambahan

CCl^ 0,4 mM dan 0,8 mM. Keterangan

:

A

=

Hepatosit lain

tanpa

penambahan

(kontrol)

C = Hepatosit +

0,4 mM

D = Hepatosit +

0,8 mM

A, C, dan D data pada

SKRIPSI

zat


lampiran 5



46

4.3. Hasil percobaan inkubasi sel

dengan

ekstrak

bawang

putih. Aktivitas enzim dengan ekstrak bawang

GPT

dari

putih

hasil

pada

inkubasi

0,375

pl/ml

sel dan

0,1875 pl/ml, terlihat pada gambar 12.

E U 90 N I

80

T 70 P 60 E 50 R 40 30 I

T 20 E 10 R 0

0.5 HflKTU (JAM)

gambar

/«?.

Kurva • selisih

pelepasa

GPT

dalam

suspensi hepatosit terisolasi pada

medium

penambahan

ekstrak bawang putih Keterangan : E = Hepatosit tanpa penambahan zat lain (kontrol) P - Hepatosit + ekstrak bawang putih 0,375 pl/ml G - Hepatosit + ekstrak bawang putih 0,1875 pl/ml E, F, G, data pada lampiran &

SKRIPSI




47 4.4.

H a s il

p e rco b a a n

in k u b a s i

sel

pada t i k u s

1.

Aktivitas enzim GPT dari hasil inkubasi sel pada tikus 1 dengan 4

macam

perlakuan

aktivitas

enzim

digambarkan

pada

gambar 13. Sedangkan

GPT

dari

hasil

inkubasi sel pada tikus 1 pada penambahan CCl^ mM dan CCl^ 0,4 mM yang satu jam sebelumnya

diberi

ekstrak

bawang putih 0,1875 pl/ml digambarkan pada gambar 14.

SKRIPSI




46

B'

u 80 N I 70 T 60 P 50 E R 40

afc.--

30 L I 20 T E 10 R 0

f

..•-'at. *

8

3J

0

WflKTU (JAM) 1

J Gambar

t3.

Kurva

selisih

pelepasan

GPT

dalam

medium

suspensi terisolasi hepatosit pada tikus 1. Keterangan

: A' = Hepatosit

tanpa

penambahan

zat

lain (kontrol), B' = Hepatosit + CCl^ 0,4 mM C

= Hepatosit + e b p 0,1875 pl/ml

E' = Hepatosit + e b p 0,1875 pl/ml bersama-sama CCl^ 0,4 mM e b p = ekstrak bawang putih A , B ' , dan C' data ada

SKRIPSI

pada lampiran 7




49

B

> =

1*

u 8B N I

7

0

1

-

1

T 60

y

P 50 E R 40

y / / .£?r.

L 30 D

I 20 T E 10 R

*

n

‘

1

*

i i—

0

-—

!a

>

,-------------

------------

,------------,

7 1i WfiKTU (JflM)

Gambar t4. Kurva selisih pelepasan GPT dalam

-medium

i

sus

pensi hepatosit terisolasi pada penambahan CCl^ 0,4 mM CB ') dan CC14 0,4 mM yang

1

jam

sebe-

lumnya diberi ekstrak bawang putih 0,1875 pl/ml (D’), data pada lampiran 7

SKRIPSI




50 4.5.

H a s il

p e rco ba an in k u b a s i

sel

pada t i k u s

2.

Aktivitas enzim GPT dari hasil inkubasi sel pada tikus 2 dengan 4

macam

perlakuan

digambarkan

pada

gambar 15. Sedangkan aktivitas enzim GPT dari

hasil

inku

basi sel pada tikus 2 pada penambahan CCl^ mM dan CCl^ 0,4 mM yang satu jam sebelumnya

diberi

ekstrak

bawang putih 0,1875 pl/ml digambarkan pada gambar 16.

SKRIPSI




5t

m

u 40 N I 35 T 30 P 25 E R 20 15 L I 10 T E 5 R 0

^ B ii CD E -■

ti

rF'

ii

-• ..

0"

-• -• J. -•

G

0

dAKTU (JAM)

Gambar

15.

Kurva

selisih

pelepasan

GPT

dalam

medium

suspensi hepatosit terisolasi pada tikus 2. Keterangan : A" = Hepatosit

tanpa

penambahan

zat

lain (kontrol). B*’ = Hepatosit + CC1

0,4 mM

C" = Hepatosit + e b p 0,1875 pl/ml E" = Hepatosit + e b p 0,1875 pl/ml bersama-sama CCl^ 0,4 mM e b p = ekstrak bawang putih A",

SKRIPSI

B", C", E ” = data pada lampiran g




52

WflKTU (JAM)

Gambar t6. Kurva selisih pelepasan GPT dalam

medium

sus

pensi hepatosit terisolasi pada penambahan CCl^ 0,4 mM

(B") dan CCl^ 0,4 mM yang i

jam

sebe-

lumnya diberi ekstrak bawang putih 0,1875 fj1/ml (D"), data pada lampiran8

SKRIPSI




55 4.6.

H a s il

p e rco ba a n in k u b a s i

sel

pada

tik u s

3.

Aktivitas enzim 6PT dari hasil inkubasi sel pada tikus 3 dengan 4

macam

perlakuan

digambarkan

pada

gambar 17. Sedangkan aktivitas enzim GPT dari

hasil

inku

basi sel pada tikus 3 pada penambahan CCl^ 0,4 mM dan CCl^ 0,4 mM yang satu jam sebelumnya diberi

ekstrak-

bawang putih 0,1875 fj1/ml digambarkan pada gambar 18.

SKRIPSI




54

Gambar 17. Kurva selisih pelepasan GPT dalam

medium

sus-

pensi hepatosit terisolasi pada tikus 3. Keterangan

: A"' = Hepatosit

tanpa

penambahan

zat

lain (kontrol). B"' = Hepatosit + CCl^ 0,4 mM C"' = Hepatosit + e b p 0,1875 pi/ml E"' = Hepatosit + e b p 0,1875 pl/ml bersama-sama CCl^ 0,4 mM e b p = ekstrak bawang putih A"',

SKRIPSI

B"',

C ” ', E"'

= data pada lampiran 9




55

B"

68

U 55 N 50 I T 45 40 P 35 E 30 R 25 L 20 I 15 T 10 E 5 R

D

,Wt

0

WflKTU (JflM)

Gambarld.

Kurva

selisih

pelepasan

suspensi hepatosit terisolasi CCl^ 0,4 mM

GPT

dalam

pada

penambahan

(B"') dan CCl^ 0,4 mM yang

sebelumnya diberi ekstrak bawang

medium

putih

1

jam

0,1875

/j1/ml (D"‘), data pada lampiran g

SKRIPSI




56

4.7.

Hasil

uji

hambatan

aktivitas

enzim

GPT

oleh

ekstrak bawang putih. Karena adanya dugaan bahwa ekstrak bawang putih mampu menghambat aktifitas enzim

GPT,

maka

diper—

kan uji prosentase hambatan aktivitas enzim GPT

se-

perti terlihat pada gambar 19.

100 90 80 l

70 H A

60

H 50 B 0 40 30

20 10

0 fl I B ii C II D 11 E 11 F H fi I H KONSENTRfiSI

Gambar

t9.

Grafik

prosentase

enzim

GPT

pada

hambatan berbagai

aktivitas macam

konsentrasi ekstrak bawang putih .

SKRIPSI




57

Keterangan : A - Hambatan 100 7, B = Ekstrak bawang putih 250 p/l/ml C = Ekstrak bawang putih 83,33 /^1/ml D = Ekstrak bawang putih 45,55 pl/ml E = Ekstrak bawang putih 31,8 fjl/ml F = Ekstrak bawang putih 22,75 jjl/ml G = Ekstrak bawang putih 7,5 /jl/ml H = Ekstrak bawang putih 0,1875 pl/ml Data dapat dilihat pada lampiran 10.

SKRIPSI




BAB V

P E M B A H A S A N

Penambahan karbon tetra

klorida

dengan

0,2 mM (gambar 10) menunjukkan aktivitas

konsentrasi

enzim

GPT

mempunyai profil kurva yang mirip dengan keadaan

suspensi

hepatosit tanpa penambahan zat lain. Efek dari karbon tra klorida 0,2 mM pada suspensi hepatosit

yang

baru

te

terlihat

pada menit ke-90. Peningkatan konsentrasi

karbon

tetra

klorida

dari

0,2 mM menjadi 0,4 mM dan 0,8 mM dengan tujuan agar

dida-

pat perbedaan aktivitas enzim GPT dengan

enzim

GPT pada kontrol

aktivitas

(A). Pada gambar 11 terlihat adanya perbe

daan profil kurva pada A (kontrol) dengan 0,4 mM) dan D (CCl

4

kurva

C

(CCl^

0,8 m M ).

Pada keadaan C dan D terjadi pelepasan enzim GPT yang lebih banyak dari pada keadaan A.

Ini

disebabkan

karena

terbentuknya radikal bebas dar?i terlepasnya ikatan karbonklorida pada CCl^. Bentuk radikal ini akan mengadakan ika tan kovalen dengan membran mikrosomal

lemak

dan

disamping itu bentuk radikal ini dapat mengikat

protein, atom

hi-

drogen dari ikatan lemak tidak jenuh. Organ sel yang dipengaruhi seperti lisosom akan melepaskan enzim dalam medium suspensi (16, 17, 18). Pelepasan enzim pada keadaan C dan D menunjukkan pro fil kurva yang hampir sama, karena dengan penambahan

kon-

58

SKRIPSI




59

sentrasi CCl^ yang lebih

tinggi

akan

menyebabkan

hambatan sintesa protein pada jaringan sehingga

peng-

akan

me-

nurunkan aktivitas dari enzim GPT, dan pada penelitian ini digunakan CCl^ dengan konsentrasi 0,4 mM 118). Penambahan ekstrak bawang putih sejumlah 0,375 (F) dan 0,1875 pl/ml (G) pada suspensi

hepatosit

pl/ml teriso-

lasi (gambar 12) menggambarkan bahwa pada aktivitas GPT pada kurva F lebih rendah

daripada

kurva

G,

enzim sedang

kurva E sebagai kontrol (E). Dengan demikian ekstrak bawang putih diduga mempunyai kemampuan memberikah kondisi yang lebih baik

melalui

pe-

ngaruhnya pada membran sel atau ekstrak bawang putih aienghambat aktivitas enzim GPT, sehingga pada kurva nyai kondisi yang lebih baik untuk digunakan

G

mempu

pada

perco

baan ini. Hasil percobaan preparasi hepatosit terisolasi dengan menggunakan tikus 1, 2, 3 terlihat

pada

gambar

Pada pemberian CCl^ 0,4 mM (kurva B gambar

15,

17),

menunjukkan aktivitas enzim GPT yang paling

tinggi.

Pada

pemberian bersama-sama ekstrak bawang putih

0,1875

dan CCl^ 0,4 mM (kurva E gambar 13,

15,

13,

13 - 18.

17)

pl/ml

menunjukkan

bahwa aktivitas enzim GPT berada di antara kurva B

dan

A

(kontrol). Pada pemberian CCl^ 0,4 mM yang didahului dengan pem berian ekstrak bawang putih 0,1875 pl/ml selama (kurva D gambar 14 ,16, dan 18) menunjukkan bahwa

60

menit aktivi

tas enzim GPT lebih rendah bila dibanding dengan pemberian CCl^ 0,4 mM (kurva B gambar 14, 16, 18). M I L I K

SKRIPSI

PERPUSTAKAAN *«NJVEV.S)TAS AIRLANGGA”


S U R A BLILIK A YLESTYO A BUDI UTOMO


60

Hasil percobaan terakhir ini sekali lagi

menunjukkan

bahwa pada pemberian ekstrak bawang putih ditemukan vitas enzim GPT dalam medium lebih

rendah

akti-

daripada

disebabkan oleh CCl^. Efek antihepatotoksik ini masih

yang me-

merlukan pembuktian lebih lanjut, karena

mungkin

bawang putih dapat menghambat enzim

(enzim

bloking)

ini

dilakukan

GPT

sesuai yang dikutip H.D. Reuter (3). Untuk

ekstrak

percobaan berikutnya yaitu uji pengaruh ekstrak bawang pu tih pada aktivitas enzim GPT in vitro. Hasil uji pengaruh bawang putih berbagai

konsentrasi

pada aktivitas enzim GPT secara in vitro dapat dilihat pa da gambar 19. Hambatan pada aktivitas enzim GPT mulai ter— lihat pada konsentrasi 7.5 pl/ml

(G), yaitu sebesar 3,55 ’ /.

Sedangkan pada konsentrasi jauh lebih kecil, yaitu sebesar 0,1875 fj1/ml, tidak menunjukkan hambatan (hambatan sebesar 0,99 */.). Konsentrasi terakhir ini adalah konsentrasi

yang

terpakai untuk uji pengaruhnya pada toksisitas CCl 4

(kon-

sentrasi ekstrak bawang putih 10 mg/ml sudah ada

hambatan

[3] ). Dengan demikian,

hasil

bahwa pada pemberian ekstrak

percobaan bawang

atau pada pemberian CCl^ 1 jam setelah bawang putih (lihat

gambar

13-18),

yang

putih

menunjukkan bersama

pemberian ditemukan

CCl^

ekstrak aktivitas

enzim GPT yang lebih rendah daripada yang disebabkan

oleh

CC 1^, tidak dapat ditelusuri atau dikaitkan sebabnya melalui efek hambatan enzim GPT. Masih ada

kemungkinan

ekstrak bawang putih mempengaruhi membran

plasma

bahwa hepato

sit. (3)

SKRIPSI




B A B

VI

K E S 1 M P U L A N

Dari hasil penelitian yang telah dilakukan, maka

da-

pat disimpulkan sebagai berikut : 1. Ekstrak bawang menghambat cara

putih

aktivitas

sejumlah enzim

0,1875

GPT pada

pl/ml

tidak

percobaan se

in vitro.

2. Ekstrak bawang putih sejumlah 0,1875 pl/ml dapat nekan rembesan enzim GPT yamg disebabkan oleh

me-

karbon

tetra klorida konsentrasi 0,4 mM.

61

SKRIPSI




8 A B VII

S A R A N

-

S A R A N

Dari hasil penelitian yang telah dilakukan,

disaran-

kan : - Perlu diadakan penelitian

lebih

jauh

dengan

meng

gunakan kultur hepatosit. - Digunakan zat hepatotoksik selain CCl^ dan

parameter

selain S P T .

62

SKRIPSI




I

D A F T A R

P U S T A K A

1. Departemen Kesehatan Republik

Indonesia,

1985,

Cara

Pembuatan Simplisia, hal. iii. 2. Azizawati, Chairul Anwar, Moh. Sadikin, 1989, Pengaruh Bawang putih (Xi lilum. sativtun Linn.) terhadap Zat Hepatotoksik

Karbon

Tetra

Klorida,

Proceeding

Kongres

Nasional XIII & Kongres IImiah VII ISFI. 3. Reuter, H.D., Knoblauch pharmacologesche

sativum.), 1986,

Ergebnisse

einer

uralten

Neue-

Arzneip-

flanze, Zeitschrift fiir Phytotherapie 7, hal. 99-106. 4. Santosa, M.H., 1989, Hepatosit Isolasi dan Penggunaannya, Laboratorium Bioteknologi, Fakultas Farmasi

Uni-

versitas Airlangga, Surabaya. 5. Seglen P.O., 1976, Preparation of isolated

Rat

Liver

Cells, Mett. Cells Biol. vol. XIII, hal. 29 - 64. 6. Wang, S e_t al. , 1985, with EDTA and

Their

Isolation Metabolic

of

Rat

Function

Hepatocytes in

Primary

Culture, In Vitro Cellular and Developtment Biol., 21, hal. 526 - 527. 7. Watiinabe, A. et. al_. , 1977,

Transaminases

of

Culture Cells and the Effect of Carbon Tetra or Their Leakage, Chem. Pharm. Bull. 25,

Hepatic Chloride

hal.

1089 -

8. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1981,

Peman-

1093

faatan Tanaman Obat, Edisi II, hal. 56 & 77.

63

SKRIPSI




64

Sudarman, M. dan

Harsono,

R.M.,

1975,

Cabe

Puyang

Warisan Nenek Moyang I, Cetakan kedua, PT. Karya Wreda, hal. 13 - 14. 10.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Tanaman

Obat

Indonesia, Jilid I. 1 1 . Guierrez, Hermes,

1980, An Illustrated Manual of

Phi

lippines Materia Medica, National Research Counsil

of

Philippines, hal. 35 - 36. 1 2 . Concha, S, 1982, Philippines National

Formulary,

Na

tional Science and Tecnology Authority, hal. 30. 13. British Herbal

Pharmacopoeia,

1983,

British

Herbal

Medicine Assosiation, hal. 20. 14. Backer C.A. and R.C. Bakhuizen van Den Brink Jr., 1968, Flora of Java, vol. IIIj Noordhaff NV - Groningen - The Netherlands, hal. 130 - 132. 15. Reynold J.E.F., 1982, Martindale, The Extra poeia, 28th Ed.,

The

Pharmaceutical

Pharmaco

Press,

London,

hal. 89. 16. Rikans L.E., 1989, Influence of

Aging

on

Chemically

Induced Hepatotoxicity ; Role of Age - Related Changed in Metabolism, Drug Metabolism

Reviews,

20(1),

hal.

101 - 107. 17. Forber J.L., Gerson R.J., Injury

With

Hepatotoxic

1984,

Mechanisms

Chemicals,

of

Cell

Pharmacological

Reviews, 36(2), hal 71.S - 75S.

M r.\ SKRIPSI

J Lf R

r.rrrv

'. I.,/:/:, / LESTYO BUDI UTOMO PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK BAWANG i PUTIH...... LILIK


65 18. Gabriel L Plaa, 1980, Toxicology The

Basic

Toxic

Respons

Science

of

The

Poisons,

Muller Pub. Co Inc, New York, Cahapter

II

Liver, ed,

10,

Mac

hal

206,

211 - 217. 19. Lin C.N., Gan K.H., 1989,

Antihepatotoxic

Principles

of Solanum capsicastrum, Planta Medica, 55, hal 48-50. 20. Tamai M, e^ a_l_. , 1989, New Hepatoprotective

Triterpe-

nes, from Canarium album, Planta Medica, 55, hal 44-47 21. Noda A, et. aX» > 1987, Metabolism and Hidrazine in Isplated Rat

Cytotoxicity

Hepatocytes,

Chem.

of

Pharm.

Bull 35, hal 2538 - 2544. 22. Tanbouly N.E., e_t al_« j 1988, Antihepatotoxic Effect of Aqueous Extract from Caparis spinosa, Planta Medica 65 hal 95. 23. Wong S.M., e_t al_* » 1988,

Hepatoprotec ti ve

Activities

of Coumestans Anthraquinones, Naphtopyrone

Glycosides

and Iridoid Glycosides, Planta Medica, 54. 24. Konno Y., et a K , 1988, Anthepatotoxic

Principles

Liquidambar Farmosana Fruits, Planta Medica,

54,

of hal

417 - 419. 25. Yusetyani L., 1985, Pemberian Infus Daun Katu pus androgynus Merr.) Terhadap Aktifitas

Enzim

SG0T dan SGGT Tikus Putih (Rattus norvegicus) Skripsi,

Fakultas

Farmasi

(Saura-

Universitas

SGPT, Betina,

Airlangga,

Surabaya, hal. 14 - 15. 26. Sigma Diagnostics, 1987, Catalog, Sigma Chemical

Co.,

St. Louis.

SKRIPSI




66

27. Muller-Wellensiek A, 1987,

Anwendung

der

Induzierten Zell Fusion

und

Herstedlung

metabolisierendrer

Frendstoff

systeme, Dissertation,

Kryokan

Universitaet

Elektrisch

Servierung in

Tuebingen,

zur vitro West

Germany, hal. 1 - 11, 23. 28. Boehringer Mannheim GmbH, Diagnostica, January,

1987,

Automated Analysis Boehringer Mannheim ALAT/A l T/GPT.

SKRIPSI




R I N G K A S A N

Preparasi

hepatosit

terisolasi

dari

hepar

tikus

strain Wistar dengan berat 150 - 300 gram dilakukan dengan cara resirkulasi menggunakan media

pengikat

yaitu campuran EDTA, Na Sitrat dan Glysin

ion

kalsium

yang

berfungsi

untuk disintegrasi jaringan. Kemudian dilakukan

penghitu-

ngan sel dan uji vitalitas sel.

dilakukan

Uji

vitalitas

dengan pewarnaan Trypan blue. Untuk mengetahui efek dari ekstrak bawang putih

ter-

hadap toksisitas karbon tetra klorida pada hepatosit isolasi, maka dari suspensi sel

yang

didapat

selama waktu 0 - 180 menit dengan penambahan wang putih dan CCl^. Untuk mengetahui

ter—

diinkubasi ekstrak

hasilnya

ba

dilakukan

uji aktifitas dari enzim GPT yang dikeluarkan ke dalam me dium oleh sel hepar yang diinkubasi tersebut dengan

spek-

trofotometer pada panjang gelombang 340 nm. Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa ekstrak bawang putih dapat menahan pelepasan enzim GPT pada pembe rian karbon tetra klorida. Karena masih banyak kekurangan-kekurangan dalam pene litian ini, maka perlu digunakan metode

lain

yang

lebih

baik (kultur hepatosit) demi untuk perbaikan • dalam

pene-

1itian ini.

67

SKRIPSI




L a m p ira n

K O M P O S IS I

M E D IA P E R F U S I

1

H E P A R TA N P A P E N G I K A T

IO N Ca

(dapar A)

KOMPONEN

KONSENTRASI (g/1)

NaCl

8,180

KC1

0,370

Na HPO 2

K HPO 2

0,280

4

0,050

4

NaHCO

2 ,10 6

3

Larutan dapar A ini dibuat pada pH 7,4.

68

SKRIPSI




L a m p ira n

K O M P O S IS I M E D IA P E R F U S I

2

HEPAR DENGAN P E N G I K A T

IO N C a

(dapar B)

KOMPONEN

KONSENTRASI (g/1)

NaCI

8*180

KC1

0,370

Na HPO 2

K HPO 2

0,280

4

0,050

4

NaHCO 9

2,100 *

Na EDTA.2H 0 2

0,630

2

Na Sitrat.2H 0

2,350

Glysin

1,000

2

a

Larutan dapar B ini dibuat pada pH 7,4.

SKRIPSI




L a m p ira n

K O M P O S IS I

3

LARUTAN S E 6 L E N -3

KOMPONEN

KONSENTRASI
NaCl

4,000

KC1

0,400

CaCl .2H 0 2 2

0,180

MgCl .6H 0 2 2

0,130

KH PO

0,150

2

Na SO 2

4

0,100

4

Hepes

7,200 '

Tes

6,900

Tricine

6,500 52,500 ml/1

NaOH

Larutan Seglen-3 ini dibuat pada pH 7,6.

70

SKRIPSI




L a m p ira n

K O M P O S IS I 6 P T O P T I M I Z E D UV -

TEST

4

d a r i B O E H R IN G EN MANNHEIM

— Larutan buffer yang mengandung :

- tris—buffer (pH = 7,5)

120 mmol/I

- L—alanin

600 mmol/1

— Enzim/ko-enzim yang mengandung :

- LDH

1,44

- NADH

0,216 mmol/1

- NaHCO

u/(nl

12 mmol/I

9

180 mmol/1

— Alfa-oksoglutarat

71

SKRIPSI




Lampi ran 5

Hasil pengamatan aktivitas enzim GPT Cu/ID pada penambahan CCl

4

Hepatosit n

0, 2 mM

C C 1 4 0, 2 mM

W a k \ uc o

«4

tn

•*■> i c

menxt

tn

tn-ti

1

0

790,6

0

743,0

0

2

60

019,2

28,6

763,9

20,9

3

90

923,9

133,3

925,8

182,8

.

Hasil pengamatan aktivitas enzim GPT Cu/1) pada penambahan CCl

n

Waktur . menit

4

Hepatosit t n

t n —1

0, 4 mM dan 0, 8 mM

CCl

4

t n

1

<) , 4 mM

CCl

t n-t l

tn

4

<) , 8 mM tn-tl

■1

0

226,3

0

192,4

0

232,8

0

2

■60

300,0

73,7

358, 1

165,7

419,9

187,1

3

120

406,9

180,6

519 , 3

326,9

536,4

303,6

4

180

553,2

326,9

572,6

380, 2

640, 1

407,3

72

SKRIPSI




Lampiran 6

H a s il

pe ngam atan a k t i v i t a s

pe nam bah an Bawang P u t i h

n

Waktur ^ menit

e n z im GPT C u / 'l)

0 ,1 8 7 5 p l/ m l

Hepatosit

pada

dan 0 ,3 7 5 p l/ m l

BP 0, 1875 pl/ml BP 0,375 pl/ml

tn

tn - ti

tn

tn ~ 1 1

tn

tn — tl

1

30

915,5

0

940,7

0

925,4

0

2

120

984, 5

69,0

978,0

37,3

940,3

14,9

3

180

1014

98, 5

1013

72,3

985,3

59,9

BP = ekstrak bawang putih

73

M SKRIPSI


r L

T !T



Lampiran 7

Hasil pengamatan aktivitas enzim GPT (u/1) pada tikus 1 1. Hasil pengamatan aktivitas enzim 6PT (u/1) pada hepatosit Hepatosit CA) Hepatosit CB) Rata-rata A + B

Waktu menit

tn

tn-tl

tn

tn-tl

tn — 11 2

0

0

1

0

33,1

0

26,7

2

60

37,3

4,2

41 ,5

14,8

9,5

3

120

47,1

14 ,0

70,8

44,1

29 ,1

4

180

53,3

20,2

74,4

47,7

33,9

Hasil pengamatan aktivitas enzim GPT (u/1

n

CCl < CD) i

CCl 1 CC? 4

Waktu menit

tn

tn-t 1

tn

pada CCl^ 0,4 m Rata-rata C •+ D

tn-tl

tn — tl 2

1

0

31,2

0

27,1

0

2

60

57,9

26,7

51 ,4

24 ,4

25, 5

3

120

72,4

41,1

63,6

36,6

38,9

4

180

102, 5

71 ,3

130,0

103,0

87,1

0

3. Hasil pengamatan aktivitas enzim GPT (u/1) pada bawang

pu

tih 0,1075^1/ml

n

Waktu.,. menit.

B P CF)

B P C E) tn

tn-t 1

tn

tn* ti

tn — 1 1 2

1

0

30. 5

0

34,7

2

60

51, 1

20,6

49,2

14, 5

17,5

3

120

58, 3

27,8

60,2

25, 5

26,7

4

180

60, 5

30, 1

71,3

36 6

33,3

B P = ekstrak bawang

putih 0,1875

0

Rata-rata E + F

0

/ml

74

SKRIPSI




75

4. Hasil

pengamatan aktivitas enzim GPT

tih 0,1875 pl/ml

n

pada bawang pu

1 jam kemudiam ditambah CCl^ 0,4 mM

BP + CCl

tn-t2

CH) Rata-rata G + H

4

tn

N

tn

C G) BP + CCl

4

• P 1 1 c ■ p j

Waktu , . menit

(u/1)

tn — t2 2

1

1

0

35,8

-

37,0

-

-

2

60

65,8

0

47,6

0

0

3

120

70, 3

4,4

67, 1

20,0

12,2

4

180

78,9

13,0

71,3

23,6

19,3

5

240

8k, 9

23,0

81, 2

33,6

28,3

5. Hasil pengamatan aktivitas enzim GPT (u/1) pada bawang pu tih 0,1875 pl/ml dan C C 1

n

SKRIPSI

BP + CCl Wakt“ (t) menit

0,4 mM

(I) BP + CCl

4

(J> Rata-rata I + J

4

tn

tn-tl

tn

tn-tl

t n — tl 2

0

0

1

0

37,7

0

30,5

2

60

60,6

22,8

55,6

25,2

24,0

3

120

69,3

31,6

72,8

42,3

37,0 '

4

180

84,6

46,9

80,8

50,3

48,6




Lampiran 8

Hasil pengamatan aktivitas enzim GPT Cu/1) pada tikus 2 1. Hasil pengamatan aktivitas enzim GPT (u/1) pada hepatosit

Waktu, menit

,

Hepatosit CA) Hepatosit CB> Rata-rata A + B 1

n

*4 1 c

tn

tn

tn-t 1

tn — 1 1 2

1

0

69,3

0

59,4

0

0

2

60

75,1

5,6

68,6

9,1

7,4

3

120

97,2

27,8

81 ,9

22,5

25,1

4

180

101,0

31,7

90,3

30,9

31,3

2. Hasil pengamatan aktivitas enzim OPT (u/1) pada CCl^.0,4 »W

Waktu menit*

n

CCl 4 CC) i J

CCl

4

CD)

Rata-rata C + D

tn

tn—t 1

tn

tn-tl

tn — 1 1 2

0

54,6

0

0

1

0

57,2

2

60

72,0

14,9

73,5

19,0

16,9

3

120

88,1

31,0

92,6

38,3

34, 5

4

180

95,3

38,2

104, 4

49,9

44,0


pu-

tih 0,1875 pl/ml

n

BP C F)

BP CE)

Waktu menit

Rata-rata E + F

tn

tn-t l

tn

tn-t 1

tn — tl 2

1

0

67.4

0

64,0

0

0

2

60

71,4

4,0

60,2

4,2

4,1

3

120

85,3

17,9

82,7

18,7

18,3

4

180

102,5

35, 1

94,9

30,7

33,0

0 P = ekstrak

bawang putih 0,1875 /jl/ml

76

SKRIPSI




77

4. Hasil

pengamatan aktivitas enzim GPT

tih 0,1875 pl/ml

Waktu menit

pada bawang

pu

1 jam kemudiam ditambah CCl^ 0,4 mM

BP + CCl

CG3 BP 4 CCl

A

<

CIO Rata-rata G + H

tn

tn~t 2

tn

tn-t2

tn — 1 2 2

0

68,2

-

72,8

-

-

2

60

74,7

0

80,0

0

0

3

120

83, 1

8,4

86,5

6,5

7,4

4

180

90,7

16,0

11,8

13,9

5

240

98,7

24,0

160,6

20,6

22,3

-0

1

CD

n

(u/1)


pu

tih 0,1875 pl/ml dan CCl^ 0,4 mM

SKRIPSI

BP + CCl A (I) BP + CCl 4 (jy Rata-rata I + J tn - ti tn t n—1 1 tn tn-tl 2

n

Waktu menit

1

0

59,4

2

60

75,4

16,0

83,4

14,9

15,4

3

120

87,6

28,2

90,7

22, 1

25,1

4

180

101 ,3

41,9

106,3

37,7

39,8

0

68,6

0


0



Lampiran 9

Hasil pengamatan aktivitas enzim GPT ( u / D

pada tikus 3

1. Hasil pengamatan aktivitas enzim GPT (u/1) pada hepatosit

Hepatosit CA) Hepatosit CB) Rata-rata A 4 B Wakt“ (t) menit

tn

tn-t 1

tn

tn-tl

tn — 1 1 2

1

0

67,4

0

63 ,3

0

0

2

60

96,0

29,3

88,0

24,8

27,0

3

120

107, 1

39,7

102, 5

39,3

39, 5

4

1B0

114,3

46,9

111,3

40, 1

47, 5

Hasil pengamatan aktivitas enzim GPT (u/1 CCl

Waktu , menit

pada CCl^.0,4 m

CO

CCl

tn

t n-t 1

tn

tn-t 1

tn — 1 1 2 0

»

4

A

CD)

Rata-rata C 4 D

1

0

70,9

0

69,3

0

2

60

107,0

36,9

105, 5

36,2

36,6

3

120

121 ,2

50, 3

120,8

51,5

50,9

4

100

132,7

61 ,8

127,6

58,3

60,0

3. Hasil pengamatan aktivitas enzim GPT (u/1) pada bawang pu tih 0,1075 pl/ml BP CE) n

Wakt^(t) menit

Rata-rata E 4 F

BP CF)

tn

tn-t 1

tn

tn—1 1

tn — 1 1 2

0

0

1

0

72.4

0

77,7

2

60

107,7

30,3

109 ,3

31 ,6

30,9

3

120

113,2

40,8

121 ,5

43,8

42,3

.4

180

120,4

48,0

130, 5

52,8

50,4

B P = ekstrak

bawang putih 0 , 1B75 pl/ml

7B

SKRIPSI




79

4. Hasil pengamatan aktivitas enzim GPT (u/1) pada bawang pu tih 0,1875 pi/ml 1 jam kemudiam ditambah CCl

BP + CCl n

Wakt“ me rut ( D

4

C G) b p +

0,4 mM

cci 4 crc> Rata-rata G + H

tn

tn-tz

tn

tn-t2

tn — 1 2 2

1

0

79,6

-

79,3

-

-

2

60

119,3

0

102,5

0

0

3

120

119,6

0,3

5,2

2,7

4

180

126,1

6,8

113,3

8,8

7,8

5

240

127,3

8,0

127,1

24,6

16,3

107,7


pu

tih 0,1875 fj1/ml dan CCl^ 0,4 mM

n

BP + CCl (I) 4

BP + CCl 4 (JD

t n-t 1

tn 73, 1

f t

tn

Rata-rata I + J

«-> l c •p

Waktu menit

tn — 1 1 2

1

0

70,2

0

2

60

106,6

36,4

105,2

32, 1

34,3

3

120

113,3

43,2

109,8

36,7

40,0

4

180

127,2

57,1

126,4

53,3

55,2

SKRIPSI

, 0


0



Lampiran

H a s il

n

u ji

ha m batan a k t i v i t a s

Konsentrasi BP pi/'ml

10

GPT o le h e k s t ra k

Aktivitas GPT u/1

Kontrol u/1

bawang p u t i h

X Hambatan

1

250,00

19,40

344,6

94 ,40

2

83,30

7,15

266,4

97,35

3

45,45

12,30

254, 1

95 ,14

4

31 ,80

185,30

262,9

29,54

5

22,72

229,40

262,9

12,76

6

7,5

335,30

347,6

3, 55

7

0, 1875

183,5

185,3

0,99

X Hambatan

=

100 X

-

[

Control ° ~

x 100 X ]

80

SKRIPSI




Lampiran

PANJANG

11

GELOMBANG

Spektrogram ekstrak

bawang putih 10 pl/ml.

91

SKRIPSI



ADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA SK RIPSI LILIK LESTYO BUDI UTOMO. ( Allium sativum L. ) F A K U L T A S FARMASI UN IVER SITAS AIR LAN G G A

Recommend Documents