A medvehagyma (Allium ursinum) kardioprotektív hatásainak vizsgálata magas koleszterin tartalmú diétán tartott New Zealand nyúl modellen
Zilinyi Rita
DE ÁOK Klinikai Laboratóriumi Kutató
2. éves MSc hallgató
Témavezető: Dr. Juhász Béla Docens DE Gyógyszerésztudományi Kar Gyógyszerhatástani Tanszék, 2015
BEVEZETŐ
*WHO adatai
RIZIKÓFAKTOROK HIPERTÓNIA
DOHÁNYZÁS
DISZLIPIDÉMIÁ K
Allium ursinum Flavonoid glikozidok: -kaempferol 3-O-flneohesperidoside7-O-[2-O-(trans-p-coumaroyl)]-fl-D-
glucopyranoside, -kaempferol 3-O-fl-neohesperidoside-7-O-[2O-(trans-feruloyl)]-fl-D-glucopyranoside, -kaempferol 3-O-fl-neohesperidoside-7-O-[2O-(trans-p-coumaroyl)-3-O-flD-glucopyranosyl-1-fl-D-glucopyranosid
Trombocita aggregáció-gátló
GALACTOLIPID -1,2-di-O-α- linolenoyl-3-O-β-Dgalactopyranosyl-sn-glycerol * Sabha et al. Pharmacology, 2012;89(5-6):260-9
Allium ursinum
SH patkányok SBP HDL chol
5 LO, COX TA = ACE gátló
CÉLKITŰZÉS Kutatócsoportunk célul tűzte ki a medvehagyma szívfunkciós paraméterekre, vérlipid-szintekre, valamint a hemoxigenáz-1 fehérje expressziójára kifejtett hatásainak vizsgálatát hiperkoleszterinémiás nyúl modellen.
KÍSÉRLETI ELRENDEZÉS A vizsgálat során hím New Zealand nyulakat 3 csoportra osztottunk (n=6): • I. csoport: normál táp (C) • II. csoport: 2% koleszterinnel dúsított táp (HC) • III. csoport: 2% koleszterinnel és 2% medvehagyma liofilizátummal dúsított táp (HCM), melyet az állatok 8 héten keresztül kaptak ad libitum.
MÓDSZEREK Munkánk során a következő vizsgálatokat végeztük el: I. Szérum paraméterek mérése II. Szívfunkciós paraméterek meghatározása III. Plakkok méretének meghatározása IV. Hemoxigenáz-1 fehérje expressziójának vizsgálata
SZÉRUM PARAMÉTEREK 1)
Lipid paraméterek
- ApoA
- ApoB
- LDL
- HDL
- Koleszterin
- Triglicerid
2) Atherogenezis fázisát jelző prognosztikus marker
- CRP 3) Miokardiális nekrózis markerei
- CK
- LDH
- GOT
Langendorff készülék
afterload
F lo w m ét e r
preload
Szívfunkciós paraméterek
95 % O2+ 5% CO2
transzducer
pumpa
95% O2+ 5% CO2 pumpa
Koronária átáramlás
SZÍVFUNKCIÓS PARAMÉTEREK Izolált dolgozó szív perfúziós készülék – aorta nyomás (AoP) – aorta kiáramlás (AF) – koronária átáramlás (CF) 30min
10 min
perfúzió
30 min
iszkémia mérés
60min
90min
120 min
120 min
reperfúzió mérés
mérés
Ateroszklerotikus plakkok területének meghatározása • • • • • • •
Aorta thoracica kimetszése Az ér kipreparálása Mosás Fixálás Inkubálás: Sudan-III Mosás Területek meghatározása (Scion for Windows Densitometry Image version Alpha 4.0.3.2 (Scion Corporation, Maryland, USA) programmal)
Hemoxigenáz-1 expressziója
• Citoplazma frakció izolálása miokardiumból • Fehérjekoncentráció mérés • Western blot analízis
Eredmények és következtetések I.
*
Ábráinkon *-gal jelöltük a HC vc. HCM csoportot
Eredmények és következtetések I. *
* *
Eredmények és következtetések I. *
* *
Eredmények és következtetések II.
Szívfunkciós paraméterek
*
Eredmények és következtetések III.
Ateroszklerotikus plakkok kiterjedése
*
Eredmények és következtetések IV.
Western blot analízis
*
HO-1 !
32 kDa
GAPDH !
36 kDa
Összefoglalás
Lipid paraméterek
Myocardium
Összkoleszterin
LDH, GOT, CK
Atheromás plakk
LDL
HO-1
ApoB ApoA
Aorta kiáramlás
KÖSZÖNETNYÍLVÁNÍTÁS •
• • •
Szeretném megköszönni Dr. Tósaki Árpád professzor úrnak, a Gyógyszerhatástani Tanszék vezetőjének, hogy lehetőséget biztosított számomra a TDK munkám elkészítéséhez. Köszönettel tartozom Dr. Juhász Béla témavezetőmnek, hogy támogatott és segített a laborban. Továbbá köszönettel tartozom Dr. Bombicz Mariannak és Dr. Priksz Dánielnek, hogy segítséget és támogatást nyújtottak nekem. Továbbá köszönöm Hohmann Juditnak a Szegedi Tudományi Egyetem, Gyógyszerésztudományi Kar, Farmakognóziai Tanszék munkatársának, hogy liofilizációs eljárással előállított növényi kivonatot biztosított számunkra. A kutatás az OTKA 104017, OTKA 78223, TÁMOP-4.2.4.A/2-11-1-2012-0001(T.Á.), Debreceni Egyetem (KUTEGY), TÁMOP-4.2.2.A-11/1/KONV-2012-0045 kereteiből valósult meg.
FÜGGELÉK Önállóan végzett munkák: -Kísérleti állatok gondozása -Krebs-oldat készítése -Izolált szív funkciós paraméterek -Fehérje izolálás -Koncentráció mérés -Western blot analízis
Segítséggel végzett munkák: -Medvehagyma liofilizátummal dúsított táp készítése -Izolált szív perfúziós készülék használata -Plakk festése Sudan-III-mal -Eredmények kiértékelése, statisztika
