Validasi Metode dan Analisis Penetapan Kadar Sibutramin HCl Pada Jamu Pelangsing dengan KCKT Fase Terbalik

50 Jurnal Pharmascience, Vol 2, No. 1, Februari 2015, hal: 50 – 57 ISSN : 2355 – 5386 Research Article

Validasi Metode dan Analisis Penetapan Kadar Sibutramin HCl Pada Jamu Pelangsing dengan KCKT Fase Terbalik *Liling Triyasmono, Rahmi Safitri, Malikhatun Ni’mah Prodi Farmasi FMIPA Universitas Lambung Mangkurat *Email: [email protected] Abstrak Sibutramin hidroklorida (sibutramin HCl) merupakan bahan kimia obat yang sering ditambahkan pada jamu pelangsing. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi dan memvalidasi metode penetapan kadar sibutramin HCl pada jamu pelangsing di Banjarmasin dengan menggunakan RP HPLC dengan detektor UV-Vis. Kondisi analisis menggunakan kolom Eurospher (5 µm, 250mm x 4,6 mm), fase gerak campuran dari kalium dihidrogen fosfat 50 mM dengan asetonitril (pH 5,5 dengan menambahkan asam ortofosfat 10%) (30:70 v/v), kecepatan alir 1 mL/menit pada panjang gelombang 225 nm. Waktu retensi dari sibutramin HCl adalah 4,69 menit. Hasil validasi metode dari linieritas, akurasi dan presisi telah sesuai dengan persyaratan validitas. Linieritas memperoleh koefisien korelasi (r)= 0,998 pada kisaran konsentrasi analisis 100 ppm sampai 300 ppm. Akurasi memperoleh nilai 99,02% hingga 103,73%, dan presisi 3,34% hingga 6,84%. Batas deteksi (LOD) dan batas kuantifikasi (LOQ) masing-masing 16 ppm dan 53 ppm. Hasil menunjukan bahwa metode validasi ini akurat dan baik diaplikasikan untuk penetapan kadar sibutramin HCl pada jamu pelangsing. Metode penetapan kadar menunjukkan bahwa jamu pelangsing merek A dan merek B mengandung sibutramin HCl dengan kadar masing-masing 15,39 mg/kapsul dan 12,83 mg/kapsul. Kata Kunci: KCKT, Fase Terbalik, validasi metode, sibutramin HCl Abstract Sibutramine hydrochloride (sibutramine HCl) is usually found in slimming traditional medicine as adulterant. The aims of this study were identification and validation method of quantitative determination of sibutramine HCl in slimming traditional medicine in Banjarmasin by reverse phase HPLC (High performance liquid chromatography) with UV-Vis detector. Condition analysis were used a Eurospher column (5 µm, 250 mm x 4,6 mm), mobile phase mixed buffer potassium dihydrogen phosphate 50 mM with acetonitrile (pH 5,5 adjusted with 10% Orthophosphoric acid) (30:70v/v), flow rate 1 mL/minute in 225 nm wave length. The retention time of sibutramine HCl was 4,69 minutes.Validation method result on linierity, accuracy, precision, limit of detection and quantification were effectively performed. The linierity was obtained with a correlation coefficient of 0.998 for analitycal range from 100 ppm to 300 ppm. Accuracy was 99.02% to 103.73%, and precision 3.34% to 6.84%. Limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) were found to be 16 ppm and 53 ppm. The results indicated that this validation method were accurate and successfully applied for quantitative determination of sibutramine HCl in slimming traditional medicine. Quantitative determination method showed the slimming traditional medicine brand A and brand B contain sibutramine HCl of 15.39 mg/capsule and 12.83 mg/capsule respectively. Keywords: RP HPLC, method validation, sibutramine hydrochloride. Volume 2, Nomor 1 (2015)

Jurnal Pharmascience

51 I.

makan, rasa haus berlebihan, insomnia, mediatris

PENDAHULUAN

Obat tradisional adalah bahan atau ramuan berupa bahan tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan sarian atau campuran dari bahan

gangguan kardiovaskular, serangan jantung dan stroke (Jung et al., 2006). Masih

tingginya

peredaran

jamu

yang

tersebut, yang secara tradisional telah digunakan

mengandung BKO dan besarnya bahaya yang

untuk pengobatan berbagai macam penyakit. Syarat

ditimbulkan, maka penelitian dilakukan dengan

obat tradisional menurut Permenkes RI No. 007

tujuan untuk mengetahui secara kualitatif dan

Tahun

kuantitatif BKO sibutramin HCl dalam jamu

2012

obat

mengandung

bahan

Riskesdas

2010

tradisional kimia

obat.

tidak

boleh

Berdasarkan pelangsing. Menurut Permata (2012), suatu metode

persentasi

masyarakat

analisis secara kualitatif dan kuantitatif penting

pengkonsumsi jamu setiap tahunnya semakin

untuk dilakukan validasi metode analisis. Hal ini

meningkat. Meningkatnya penggunaan jamu dari

bertujuan untuk menjamin bahwa metode analisis

tahun ke tahun di masyarakat mendorong semakin mampu memberikan hasil analisis yang akurat, banyak industri obat tradisional dan jamu yang

spesifik, dan reprodusibel. Jika validasi metode

bermunculan. Banyaknya industri obat tradisional

telah memenuhi

tersebut membuat pemerintah kesulitan dalam

metode dapat dikatakan akurat untuk menganalisis

melakukan pengawasan terhadap kualitas dan

kandungan sibutramin HCl dalam jamu pelangsing.

peredarannya. melakukan

Hal

ini

kecurangan

mendorong untuk

produsen

meningkatkan

Mengingat masih tingginya peredaran jamu yang mengandung

penjualan dari produknya, salah satunya yaitu pengawasan dengan menambahkan bahan kimia obat (BKO) sibutramin

BKO,

Sibutramin

Hidroklorida

(Sibutramin

menganalisis HCl)

pelangsing.

maka

terhadap HCl,

dalam jamu agar dapat menimbulkan efek yang mengembangkan cepat (instan) (Firdaus and Utami, 2009).

persyaratan parameter maka

penyalahgunaan

beberapa metode

sibutramin Metode

sebagai

upaya BKO

peneliti

telah

kromatografi

untuk

HCl

dalam

jamu

dengan

KLT

analisis

merupakan BKO yang sering ditambahkan dalam (Phattanawasin et al., 2012), KLT-KT (Kamil & jamu pelangsing. Adanya kandungan sibutramin

Naji, 2011) dan KCKT (Ariburnu et al., 2012; Jung

HCl

efek

et al., 2006) dikembangkan untuk mendapatkan

penurunan berat badan yang ditimbulkan akan

metode yang lebih sederhana, cepat, selektif dan

semakin cepat. Sibutramin HCl yang ditambahkan

akurat dalam mendeteksi adanya sibutramin HCl

dalam jamu dapat menyebabkan timbulnya pusing,

dalam obat tradisional. Menurut Ariburnu et

dalam

jamu

pelangsing membuat

mual, diare, meningkatkan denyut jantung, palpitasi, al.(2012), metode KLT dan KLT-KT merupakan meningkatkan tekanan darah, hilangnya nafsu

Volume 2, Nomor 1 (2015)

metode kromatografi yang lebih sederhana, cepat


52 dan akurat dibandingkan KCKT akan tetapi matrik UV-Vis, injektor manual, kolom Eurospher® 100-5 dalam jamu dapat menggangu proses elusidasi

C-18 (4,6 x 250mm), komputer, pompa, wadah fase

sibutramin HCl sehingga memicu terjadinya tailing

gerak, ultrasonikator (Bandelin® Sonorex Digitec),

(berekor). Oleh karena itu, KCKT dipilih agar dapat

pipet volume (Pyrex®), neraca analitik (Adam®),

mengatasi masalah tersebut. Analisis sibutramin

vortex mixer (JEIO® Tech VM 98B), pH meter

HCl

(Jenway® 370), dan alat-alat gelas.

pada

jamu

pelangsing

dengan

KCKT

sebelumnya telah dilakukan dengan menggunakan beberapa jenis detektor terbaru seperti detektor B. Cara Kerja flouresensi (Ariburnu et al., 2012) dan detektor

1. Pembuatan fase gerak

photodiode array (Jung et al., 2006). Namun, pada

Sebanyak 3,4005g kalium dihidrogen fosfat

metode analisis tersebut detektor yang digunakan

ditambahkan ke dalam labu ukur 500mL kemudian

tidak selalu terdapat di semua laboratorium. Pada

ditambahkan akuabides sampai tanda batas, lalu

penelitian ini dilakukan metode analisis yang lebih

diultrasonikasi (Suneetha & Rao, 2011). Asetonitril

sederhana yaitu dengan meggunakan detektor dicampurkan dengan buffer kalium dihidrogen KCKT yang umum digunakan yaitu detektor UV- fosfat (70:30v/v) dan membuat pH nya 5,5 dengan Vis. Penelitian ini diharapkan mampu memberikan

asam ortofosfat 10%. Kemudian diultrasonikasi dan

hasil analisis yang akurat dan cepat yang tidak jauh

disaring

berbeda dengan metode sebelumnya walaupun

(Radhakrishna et al., 2000; Suneetha & Rao, 2011;

menggunakan detektor yang lebih sederhana yaitu

Suthar et al., 2009).

dengan

membran

filter

0,45

µm

detektor UV-Vis. 2. Preparasi larutan baku standar II. METODE PENELITIAN A. Bahan dan Alat

Sebanyak 50 mg sibutramin HCl ditimbang kemudian dilarutkan dengan 10 mL fase gerak

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian

sebagai pelarut, kemudian divortex selama satu

ini dua merek dagang jamu pelangsing, Akuabides,

menit dengan kecepatan 2500 rpm dan ditambahkan

kalium dihidrogen fosfat (analytical grade, Merck),

pelarut hingga 50 mL, hingga didapatkan larutan

asetonitril (HPLC grade, Merck), asam ortofosfat

baku induk 1000 ppm. Selanjutnya dilakukan

(analytical grade, Merck), sibutramin HCl (99,63%, pembuatan larutan baku kerja dengan penambahan baku pembanding Farmakope), nilon membran

fase gerak menjadi 100, 150, 200, 250 dan 300 ppm

filter 0,45µg (Wathman®).

dari larutan baku standar. Sebelum dilakukan

Alat yang digunakan adalah seperangkat alat KCKT (Knauer® Isokratik) terdiri dari detektor


analisis

dengan

KCKT,

semua

analit

harus

diultrasonikasi selama 15 menit dengan suhu 25°C


53 dan disaring dengan membran filter 0,45 µm. 5. Kondisi KCKT yang digunakan Larutan baku standar dapat disimpan dalam suhu

Kondisi KCKT untuk analisis sibutramin HCl

5°C yang terlindung dari cahaya (Ariburnu et al., adalah menggunakan detektor UV-Vis dengan 2012).

panjang gelombang 225 nm dan volume injeksi sebanyak 20 µL. Waktu analisis adalah 9,5 menit

3. Preparasi sampel

untuk satu kali pembacaan kromatogram dengan

Sampel yang digunakan adalah dua macam merek

jamu

pelangsing

yang

paling

sering

diperjualbelikan di Banjarmasin. Secara seksama

elusi isokratik. Kolom menggunakan Eurospher C18 (5 µm, 4,6 x 250 mm) dan suhu kolom 25°C dengan kecepatan alir 1

mL

/menit (Suneetha & Rao,

bobot rata-rata dari masing-masing sampel yang 2011; Suthar et al., 2009). sebelumnya telah homogen dengan menimbang serbuk jamu dari 10 kapsul. Kemudian rata-rata 6. Linieritas bobot sampel tiap kapsul dilarutkan dengan fase

Larutan baku kerja dibuat dengan rentang

gerak dan dimasukkan dalam labu ukur 50 mL dan

konsentrasi 100, 150, 200, 250 dan 300 ppm

ditambahkan lagi fase gerak sampai tanda batas.

masing-masing sebanyak 20 µL ke dalam sistem

Kemudian

dan

KCKT, dilakukan tiga kali pengukuran. Selanjutnya

diultrasonikasi, lalu disaring menggunakan kertas

ditetapkan kurva linier: y=bx+ a, dimana a adalah

saring dengan dua kali penyaringan, dan dilakukan

intersept (perpotongan dengan garis dengan sumbu

penyaringan ketiga dengan membran filter 0,45 µm

y) dan b adalah slope (kemiringan garis regresi),

(Ariburnur et al., 2012).

kelinieran

larutan

sampel

divortex

kurva

ditentukan

dengan

cara

menghitung koefesien korelasi (r) (Ariburnu et al., 4. Preparasi sampel 80%, 100% dan 120% spiked Larutan standar 300 ppm dipipet dengan

2012). Linieritas diterima apabila nilai r ≥ 0,997 (Ahuja & Rasmussen, 2007).

volume masing-masing sebanyak 2,7 mL, 3,35 mL, dan 4 mL untuk sampel jamu merek A dan 1,6 mL,

7. Akurasi

2,0 mL dan 2,4 mL untuk sampel jamu merek B ke

Akurasi dilakukan bersamaan dengan uji

dalam labu ukur 10 mL kemudian ditambahkan 5

presisi yaitu terhadap larutan sampel yang telah

mL larutan sampel terhadap masing-masing spiked dibuat sebelumnya dengan konsentrasi 80%, 100% ditambahkan fase gerak sampai tanda batas

dan 120%, lalu menyuntikkan masing-masing

(Ariburnu et al., 2012).

sebanyak 20 µL ke dalam sistem KCKT dengan tiga kali pengukuran tiap konsentrasi. Kemudian menghitung nilai % perolehan kembali (% recovery)



54 dari hasil didapatkan dari pembacaan. Akurasi

(Singh, 2013).

diterima jika memenuhi kriteria nilai % recovery 90-107% (Gonzales et al., 2010).

10. Penetapan kadar sibutramin HCl dalam jamu pelangsing

8. Presisi

Melakukan pengulangan pada masing-masing

Presisi dilakukan yaitu dengan keterulangan

sampel yang telah dibuat sebelumnya sebanyak 3

(repeatability) dengan tahap intraday. Caranya

kali. Menyuntikkan masing-masing larutan uji

menyuntikkan masing-masing sebanyak 20 µL tersebut ke dalam sistem KCKT sesuai prosedur larutan

sampel

recovery

yang

telah

dibuat

yang telah dipilih pada uji optimasi. Sebelum

sebelumnya ke dalam sistem KCKT. Uji intraday melakukan penyuntikan, sampel harus melalui adalah melakukan pengulangan tiga kali pada tiap

penyaring terlebih dahulu dengan menggunakan

konsentrasi dan melakukannya pada satu hari yang

membran filter 0,45 µm. Mengamati hasil dari

sama (Ariburnu et al., 2012). Kemudian melakukan kromatogram dan menghitung kadar sibutramin evaluasi hasil yang didapat dengan regresi data HCl dalam jamu pelangsing dengan menggunakan linier dan kemudian menentukan standar deviasi

kurva kalibrasi (Ariburnu et al., 2012).

(SD) dan persentase standar deviasi relatif (%RSD). Presisi

diterima

bila

memenuhi

kriteria

nilai %RSDH ≤ 8,63% (Gonzales et al., 2010).

III. HASIL DAN PEMBAHASAN Penetapan kadar sibutramin HCl pada dua jamu pelangsing dilakukan dengan menggunakan KCKT.

9. Batas deteksi dan batas kuantitas

Kondisi KCKT yang digunakan adalah dengan

Uji penentuan batas deteksi (LOD) dan

kolom C-18 dan detektor UV-Vis dengan panjang

batas kuantitas (LOQ) adalah dengan menghitung

gelombang 225 nm, volume injeksi sebanyak 20 µL,

secara statistik melalui garis regresi linier dari

suhu kolom 25°C, kecepatan alir 1

kurva kalibrasi. Nilai pengukuran akan sama

waktu analisis selama 9,5 menit untuk satu kali

mL

/menit dan

dengan nilai b pada persamaan garis linier y=a +bx, pembacaan kromatogram dan elusi isokratik. sedangkan

dengan

Sebelum penelitian lebih lanjut dilakukan yaitu

simpangan baku residual (Sy/x) (Harmita, 2004).

penetapan kadar sibutramin HCl dalam jamu

Menghitung nilai LOD dan LOQ berdasarkan garis

pelangsing, metode harus divalidasi terlebih dahulu.

regresi linier dari kurva kalibrasi adalah sebagai

Validasi metode dilakukan dengan tujuan untuk

berikut.

memastikan bahwa metode tersebut akurat dan

LOD =

simpangan

dan LOQ =


baku

sama

spesifik, dan reprodusibel. Validasi metode analisis


55 yang dilakukan adalah penentuan linieritas, batas

digunakan

adalah

deteksi dan batas kuantitas, akurasi dan presisi.

Sedangkan

nilai

pada presisi

rentang berdasarkan

90-107%. tetapan

Horwitz harus berada pada %RSDH ≤ 8,63%. Dari hasil yang didapatkan dari kedua uji menunjukan bahwa metode analisis yang digunakan memenuhi kriteria untuk suatu metode analisis yang akurat dan teliti. Hasil dari parameter validasi metode analisis yakni linieritas, batas deteksi dan batas kuantifikasi, akurasi dan presisi yang telah dilakukan secara keseluruhan telah memenuhi persyaratan yang Gambar 1. Kurva kalibrasi larutan standar ditetapkan. Hal ini menunjukan bahwa metode sibutramin HCl analisis sibutramin HCl dalam jamu pelangsing Tabel I. Hasil pengujian linieritas dengan tiga kali dapat memberikan hasil yang akurat dan dapat replikasi digunakan untuk penetapan kadar. Tabel II. Hasil uji akurasi dan presisi dengan spiked 80%, 100% dan 120% dari larutan baku standar 300 ppm terhadap sampel Menutut Ahuja dan Rasmussen (2007), nilai keberterimaan hasil linieritas adalah r ≥ 0,997. Dari hasil

koefisien

menunjukan

korelasi

bahwa

dari

metode

tiga telah

replikasi memenuhi

persyaratan linieritas. Berdasarkan hasil pengujian

Metode penetapan kadar sibutramin HCl pada

linieritas dapat ditentukan nilai batas deteksi (LOD)

jamu pelangsing dilakukan pada dua merek jamu dan batas kuantifikasi (LOQ). Pada metode ini nilai pelangsing yang masih banyak diperjualbelikan di batas deteksi dan batas kuantifikasi adalah 0,016 pasaran di wilayah Banjarmasin. Dari kedua sampel µg/L dan 0,53 µg/L. Batas deteksi dan batas

jamu, dinyatakan untuk jamu merk A merupakan

kuantifikasi

statistik

jamu yang telah dicabut izin edarnya oleh BPOM

melalui garis regresi linier dari kurva kalibrasi

sedangkan untuk jamu merk B merupakan jamu

(Singh, 2013).

yang mencantumkan nomor izin palsu (fiktif).

didasarkan

perhitungan

Menurut Gonzales et al. (2010), nilai %recovery yang dapat diterima untuk konsentrasi yang



56 samping dan kontraindikasi. Hal ini disebabkan karena kebanyakan ditambahkan tanpa takar yang jelas sehingga jika jamu dikonsumsi secara rutin Tabel III. Hasil perolehan kadar sibutramin HCl maka akan sangat membahayakan konsumen. pada tiap kapsul dari sampel Jamu Pelangsing IV. KESIMPULAN Validasi metode penetapan kadar sibutramin HCl dalam jamu pelangsing menggunakan KCKT (Kromatografi Cair Kinerja Tinggi) memberikan hasil LOD dan LOQ dengan nilai 16 ppm dan 53 Hasil analisis dilakukan dengan membandingkan

ppm, akurasi dengan nilai 99,02-103,73% dan

waktu retensi dan spektrum yang terdeteksi pada

presisi

sampel terhadap larutan standar sibutramin HCl.

menunjukan bahwa metode yang digunakan telah

Sampel dikatakan positif mengandung sibutramin

memenuhi persyaratan syarat validitas. Hasil dari

HCl, bila waktu retensi dari sampel sama dengan

analisis penetapan kadar kedua sampel merek jamu

larutan standar sibutramin HCl. Dari analisis kedua

pelangsing yang digunakan mengandung sibutramin

merk jamu tersebut diperoleh adanya puncak pada

HCl dengan kadar tiap kapsulnya masing-masing

daerah

sebesar 15,39 mg untuk merek jamu A dan 12,83

waktu

menunjukkan

retensi bahwa

4,69

menit.

kedua

Hal

jamu

ini

tersebut

dengan

nilai

3,34-6,84%.

Hasil

ini

mg untuk merek jamu B.

mengandung BKO (Bahan Kimia Obat) sibutramin HCl. Kadar sibutramin HCl yang terhitung pada jamu merk A adalah sebesar 15,39 mg tiap kapsul sedangkan jamu merk B adalah sebesar 12,83 mg tiap kapsulnya. Adanya kandungan sibutramin HCl dalam jamu tersebut menyatakan bahwa kedua jamu tersebut tidak sesuai dengan persyaratan obat tradisional dari Permenkes RI No. 007 Tahun 2012. Adanya kandungan BKO pada jamu sangat berbahaya

karena

kebanyakan

BKO

yang

ditambahkan tergolong obat keras yang dalam pemakaian harus dengan resep dokter sehingga akan

timbul efek bahaya karena adanya efek


DAFTAR PUSTAKA Ahuja, S & H. Rasmussen. 2007. HPLC Method Development for Pharmaceuticals: Volume 8 of Separation Science and Technology- Elsevier Academic Press. United Kingdom. Ariburnu, E., M. F. Uludag, H. Yalcinkaya & E. Yesilada. 2012. Comparative Determination of Sibutramine as an Adulterant in Natural Slimming Products by HPLC and HPTLC Densitometry. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 65: 77-81. Firdaus, M. I. & P. I. Utami. 2009. Analisis Kualiatif Paracetamol Pada Sediaan Jamu Serbuk Pegal Linu yang Beredar Di Porwokerto. Pharmacy. 06: 1 González B. G., M. Á.Herrador, A. & G. Asuero. 2010. Intra-laboratory Assessment of Method


57 Accuracy (Trueness and Precision) by Using Validation Standards. Talanta. 82: 1995-1008. Jung, J., M. H. Clausen., & W.W. Weinmann. 2006. Anoretic Sibutramin Detected in a Chinese Herbal Drug for Weight Loss. Forensic Science International. 161 : 211-222.30 Kamil, M. & M.A. Naji. 2009. Determination of Undeclared Chemicals in Herbal Slimming Medicines using HPTLC. VIVECHAN-IJR.02: 1417. Permata, D. 2012. Optimasi Metode Identifikasi Antalgin dan Klofeniramin Maleat Secara KCKT Photoidiode Array setelah Pemisahan dengan Solid Phase Extraction pada Sediaan Serbuk Obat Tradisional. Skripsi Program S-1, Universitas Indonesia, Depok. Permenkes RI, 2012. Permenkes RI : No.007 Tahun 2012 Tentang Registrasi Obat Tradisional. Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta. Radhakrishna, T., Ch. L. Narayana, D. S. Rao., K. Vyas & G. O. Reddy. 2000. LC Method for The Determination of Assay And Purity Of Sibutramine Hydrochloride And Its Enantiomers by Chiral Chromatography. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analyisis. 22: 627-639. Singh, R. 2013. HPLC Method Development and Validation- an Overview. Journal Pharmacy Education Research. 4: 26-33. Suneetha, D & A. L. Rao. 2011. A Stability Indication HPLC Method for The Determination of Sibutramine Hydrochloride in Bulk and Commercial Formulations. International Journal of Research in Pharmacy and Chem. 01: 1-6. Suthar, A.P., S. A. Dubey & S. R. Patel. 2009. A Validated Spesific Reverse Phase HPLC for Estimation of Sibutramine Hidrochloride Monohydrate in Bulk Drug and Capsule Dosage Forms. International Journal of ChemTech Research. 01: 793-801.



Validasi Metode dan Analisis Penetapan Kadar Sibutramin HCl Pada Jamu Pelangsing dengan KCKT Fase Terbalik

Recommend Documents