UJI TOKSISITAS SUBKRONIS KOMBINASI EKSTRAK ETANOL BUAH MENGKUDU (Morinda citrifolia Linn.) DAN RIMPANG JAHE GAJAH (Zingiber officinale Rosc.) PADA TIKUS WISTAR
KARYA ILMIAH YANG TIDAK DIPUBLIKASIKAN
RINI HENDRIANI, M.Si. NIP. 132317750
UNIVERSITAS PADJADJARAN FAKULTAS FARMASI JATINANGOR 2007
UJI TOKSISITAS SUBKRONIS KOMBINASI EKSTRAK ETANOL BUAH MENGKUDU (Morinda citrifolia Linn.) DAN RIMPANG JAHE GAJAH (Zingiber officinale Rosc.) PADA TIKUS WISTAR
KARYA ILMIAH YANG TIDAK DIPUBLIKASIKAN
Oleh: RINI HENDRIANI, M.Si. NIP. 132317750
Jatinangor, Oktober 2007 Mengetahui dan menyetujui
Dekan Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran
Prof. Dr. Anas Subarnas, M.Sc. NIP. 131479508
Kepala Laboratorium Farmakologi Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran
Ahmad Muhtadi, M.S. NIP.131626235
DAFTAR ISI
Halaman PENDAHULUAN...................................................................................................
1
I.
TINJAUAN PUSTAKA .............................................................................
2
I.1 I.2 I.3
Tinjauan Botani …………………………………………………... Toksisitas …………………………………………………………. Evaluasi Uji Toksisitas ……………………………………………
2 3 6
II.
METODE PENELITIAN …………………………………………………
10
III.
PERCOBAAN ……………………………………………………………. 3.1 Bahan, Alat dan Hewan Uji ………………………………………. 3.2 Penyiapan Bahan …………………………………………………. 3.3 Pengolahan Bahan............................................................................ 3.4 Pembuatan Ekstrak Tanaman …………………………………….. 3.5 Pemeriksaan Karakteristik Ekstrak ………………………………. . 3.6 Pembuatan Sediaan Uji ……………………………………………. 3.7 Penyiapan Hewan Uji ……………………………………………... 3.8 Dosis dan Cara Pemberian Sediaan Uji …………………………… 3.9 Pengamatan Perilaku dan Aktivitas Motorik ……………………… 3.10 Pengamatan Bobot Badan …………………………………………. 3.11 Pemeriksaan Parameter Urin ……………………………………… 3.12 Pengamatan Parameter Darah ……………………………………... 3.13 Pengamatan Fungsi Hati dan Ginjal ………………………………. 3.14 Pengamatan makroskopik Organ ………………………………….. 3.15 Pengamatan mikroskopik Organ …………………………………...
12 12 12 13 13 13 17 17 17 18 18 19 19 19 20 20
IV.
HASIL PERCOBAAN DAN BAHASAN …………………………………
21
V.
SIMPULAN DAN SARAN ………………………………………………..
32
DAFTAR PUSTAKA ………………………………………………………………
33
LAMPIRAN ………………………………………………………………………...
35
PENDAHULUAN Indonesia sebagai negara yang berada di daerah tropis mempunyai keanekaragaman hayati yang sangat besar, kaya akan bahan baku obat, sehingga fitofarmaka merupakan suatu pilihan pengobatan yang menarik dan dapat terus dikembangkan. Salah satu tumbuhan obat yang berpotensi untuk dikembangkan ke arah yang lebih modern adalah mengkudu dan jahe. Pengobatan tradisional di Indonesia, menggunakan bahan-bahan yang terdapat di alam sekitar, merupakan bagian dari kebudayaan bangsa yang turun temurun. Secara tradisional masyarakat Asia percaya mengkudu dan jahe mampu mengobati berbagai penyakit. Seluruh bagian tanaman mengkudu mempunyai khasiat obat. Akar mengkudu dimanfaatkan untuk mengobati kejang-kejang dan tetanus, obat demam dan sebagai tonikum. Kulit batang mengkudu digunakan sebagai tonikum, antiseptik pada pembengkakan kulit, borok, dan luka. Daun mengkudu dimanfaatkan untuk mengobati disentri, kejang usus, pusing, muntah, dan demam. Bunga mengkudu digunakan untuk mengobati kudis, bisul dan sakit kerongkongan. Buah mengkudu untuk obat asma, menormalkan tekanan darah, gangguan pernafasan, TBC, dan radang (Heyne, 1987; Bangun, 2002). Jahe digunakan antara lain sebagai obat batuk dan penghangat badan, juga untuk obat sakit kepala, rematik, masuk angin, antiemetik, keseleo, bengkak, demam, antituberkulosis, nyeri dada, dan diare (Heyne, 1987; Farry, 2005). Dari penelitian sebelumnya diketahui mengkudu dan jahe mempunyai aktivitas anti TBC. Ekstrak etanol mengkudu dan jahe menunjukkan hasil yang paling baik karena dapat menghambat pertumbuhan Mycobacterium tuberculosis galur yang sensitif (H37Rv) maupun galur resisten (No. 552) pada konsentrasi 10
g/mL
(Sugihartina, 2004). Ekstrak etanol mengkudu dapat menghambat pertumbuhan M. tuberculosis galur H37Rv, 552 dan 223 pada konsentrasi 10 g/mL. Kombinasi mengkudu dan jahe gajah (7,5;7,5 g/mL) dapat menghambat M. tuberculosis galur H37Rv, 552 dan 223 (Agusta, 2005). Ekstrak etanol rimpang jahe gajah dapat menghambat pertumbuhan M. tuberculosis galur H37Rv dan 552 dengan konsentrasi hambat minimum (KHM) 5 g/mL, tetapi tidak dapat menghambat galur 223 pada konsentrasi hingga 1000 g/mL (Surya, 2005). Penelitian ini dilakukan untuk menguji ekstrak buah mengkudu dan rimpang jahe gajah tunggal serta kombinasi keduanya. Dalam penggunaan obat tradisional, simplisia atau sediaan galeniknya untuk kesehatan perlu diperhatikan keamanannya.
1
2
Oleh karena itu dilakukan berbagai penelitian antara lain pengujian terhadap toksisitas dan efek samping yang dapat ditimbulkannya. Perlu dilakukan penelitian toksisitas yang bersifat akut dan yang bersifat kronis. Penggunaan dalam jangka waktu yang lama mendorong perlunya penentuan toksisitas subkronis, karena meskipun dianggap aman, tetapi belum diketahui adanya kemungkinan efek yang tidak diharapkan pada tubuh akibat pemakaian lama. Pada penelitian ini dilakukan pengujian terhadap efek toksik ekstrak etanol mengkudu dan jahe gajah tunggal maupun kombinasinya dengan perbandingan (1:1), diberikan setiap hari selama 90 hari dan kelompok satelit tetap dipelihara selama 30 hari setelah pemberian sediaan uji dihentikan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek toksik subkronis kombinasi ekstrak etanol buah mengkudu dan rimpang jahe gajah pada tikus Wistar. Selain informasi toksisitas, hasil penelitian juga diharapkan dapat menggambarkan efek terhadap organ-organ dalam tubuh sehingga dapat memberikan petunjuk jenis penelitian khusus lainnya yang perlu dilakukan.
I
TINJAUAN PUSTAKA
Tinjauan pustaka yang berhubungan dengan penelitian ini meliputi tinjauan botani tanaman mengkudu dan jahe gajah, serta tinjauan tentang toksisitas. 1.1
Tinjauan Botani
Pada penelitian ini dilakukan tinjauan botani terhadap dua jenis tanaman yang digunakan yaitu mengkudu dan jahe gajah. 1.1.1 Tanaman Mengkudu (Morinda citrifolia Linn.) Mengkudu merupakan tumbuhan tropis. Jenis mengkudu yang banyak ditemukan di Indonesia yaitu Morinda citrifolia yang berdaun lonjong besar berwarna hijau mengkilap dan Morinda elliptica yang berdaun jorong meruncing. Spesies mengkudu lain misalnya M. braceata, M. speciosa, M elliptica, M. tinctoria, dan M.oleifera (Ditjen POM, 1997; Bangun, 2002). Secara umum mengkudu memiliki ciri-ciri berupa pohon dengan tinggi 1-6 m, bunga berwarna putih, daun bebrbentuk lonjong lebar mengkilat. Buah mengkudu berbentuk bulat lonjong, panjangnya 5-8 cm, permukaan seperti terbagi dalam sel-sel poligonal (bersegi banyak) yang berbintik-bintik dan berkutil.
3
Kandungan buah mengkudu antara lain skopoletin, morindin, morindon, asam oktanoat, kalium, terpenoid, alkaloid, antrakuinon,
-sitosterol, karoten, glikosida
flavon, asam linoleat, alizarin, asam amino, akubin, L-asperulosid, asam kaproat, asam kaprilat, asam ursolat glukosa, dan eugenol. Penggunaan buah mengkudu antara lain sebagai anthelmintik, pelembut kulit, ekspektoran, antipiretik, antiseptik, antituberkulosis, dan antihipertensi. (Ditjen POM, 1997; Heyne, 1987; Bangun, 2002) 1.1.2 Tanaman Jahe Gajah (Zingiber officinale Rosc.) Tanaman jahe dikenal dalam tiga varietas yaitu jahe gajah (Zingiber officinale Rosc.), jahe merah (Zingiber officinale Rosc. Var sunti val), dan jahe emprit (Zingiber officinale var. Amarum). Ketiganya dapat dibedakan berdasarkan karakteristik morfologinya (Ditjen POM, 1997; Heyne 1987; Farry, 2005). Jahe gajah berupa terna berbatang semu, tinggi 0,3 – 1 m, rimpang bila dipotong berwarna kuning. Daun semprit, panjang 15-23 mm, lebar 8-15 mm, berbentuk lidah dan memanjang. Rimpang jahe gajah lebih besar dan mengembung dari pada varietas lainnya, aromanya kurang tajam dan rasanya kurang pedas. Gambar dapat dilihat pada Lampiran A, Gambar 1.3. Kandungan utama dari jahe adalah gingerol, zingiberol, zingiberen, zingeron, terpen, felandren, dekstrokamfen, seskuiterpen zingiberen, resin, dan amilum. Jahe banyak digunakan oleh masyarakat Indonesia karena khasiatnya yang banyak antara lain sebagai obat sakit kepala, rematik, masuk angin, antiemetik, keseleo, bengkak, demam, antituberkulosis, nyeri dada, batuk, dan diare (Heyne, 1987; Farry, 2005). 1.2
Toksisitas Salah satu tujuan terpenting toksikologi ialah memberikan keterangan sehingga
kerugian kesehatan manusia dan lingkungan akibat senyawa beracun dapat dicegah atau dibatasi (Koeman, 1987). 1.2.1 Latar Belakang Sejarah Seiring perkembangan zaman, manusia semakin sadar tentang pentingnya kesehatan diri, maka keamanan bahan-bahan yang dikonsumsi perlu diperhatikan. Toksikologi merupakan kajian tentang hakikat dan mekanisme efek toksik berbagai 3
4
bahan terhadap makluk hidup dan sistem biologi lainnya. Tosikologi lebih ditujukan untuk mendeteksi resiko keracunan pada manusia baik resiko yang telah diketahui maupun yang masih menjadi dugaan. Uji toksisitas sangat penting untuk mencegah resiko akibat pemaparan senyawa tertentu pada manusia. Faktor penting yang mempengaruhi keamanan suatu senyawa adalah jumlah dosisnya, maka dilakukan suatu penelitian hubungan antara dosis (kadar) tertentu dan respon biologi yang dihasilkannya. 1.2.2 Jenis Uji Toksisitas Pada umumnya metode uji toksisitas dapat dibagi menjadi 2 golongan yaitu, uji toksisitas yang dirancang untuk mengevaluasi seluruh efek umum suatu senyawa, dan uji yang dirancang untuk mengevaluasi secara rinci tipe toksisitas spesifik (Hayes 2001; Loomis, 1987; Lu, 1995). Uji toksisitas umum meliputi : a. Uji toksisitas akut. Uji Toksisitas akut dilakukan dengan memberi senyawa yang sedang diuji sebanyak satu kali atau beberapa kali dalam jangka waktu 24 jam, kemudian diamati selama 14 hari. Penelitian ini dirancang untuk menentukan dosis letal median (LD50), selain juga dapat menunjukkan organ sasaran yang mungkin dirusak dan efek toksik spesifiknya, serta memberikan petunjuk tentang dosis yang sebaiknya digunakan dalam pengujian yang lebih lama. Senyawa yang mempunyai toksisitas akut yang rendah, tidak diperlukan penentuan (LD50) secara tepat, cukup informasi bahwa dosis yang cukup besar menyebabkan hanya sedikit kematian, atau bahkan tidak menyebabkan kematian (EPA,1988). Pandangan ini diterima oleh Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives (WHO, 1966). b. Uji Toksisitas Subkronis Uji toksisitas subkronis dilakukan untuk mengevaluasi efek senyawa, apabila diberikan kepada hewan uji secara berulang-ulang. Biasanya diberikan senyawa uji setiap hari selama kurang lebih 10% dari masa hidup hewan, yaitu 3 bulan untuk tikus dan 1-2 tahun untuk anjing.
5
Uji toksisitas sub kronis menyangkut evaluasi seluruh hewan untuk mengetahui efek patologi kasar dan efek histologi. Uji ini dapat menghasilkan informasi toksisitas zat uji yang berkaitan dengan organ sasaran, efek pada organ itu, dan hubungan dosis efek dan dosis respons. Informasi tersebut dapat memberi petunjuk jenis penelitian khusus lainnya yang perlu dilakukan. c. Uji Toksisitas Kronis Uji toksisitas kronis dilakukan dengan memberikan senyawa uji berulangulang selama masa hidup hewan uji atau sebagian besar masa hidupnya, misalnya 18 bulan untuk mencit, 24 bulan untuk tikus, dan 7-10 tahun untuk anjing dan monyet. Pada uji toksisitas kronis ini dilakukan evaluasi patologi lengkap. Uji toksisitas selektif antara lain : a. Uji Teratogenitas Uji teratogenitas adalah suatu pengujian untuk memperoleh informasi adanya abnormalitas fetus yang terjadi karena pemberian suatu zat dalam masa perkembangan embrio. Informasi tersebut termasuk abnormalitas bagian luar, jaringan lunak dan kerangka fetus. Pada pengujian ini senyawa uji dalam beberapa tingkat dosis diberikan kepada beberapa kelompok hewan percobaan selama paling sedikit masa organogenesis dari kehamilan, satu dosis untuk satu kelompok. Sesaat sebelum waktu melahirkan, uterus diambil dan dilakukan evaluasi terhadap fetus. b. Uji Mutagenitas Uji mutagenitas adalah uji yang dilakukan untuk memperoleh informasi mengenai kemungkinan terjadinya efek mutagenik suatu senyawa. Efek mutagenik merupakan efek yang menyebabkan terjadinya perubahan pada sifat genetika sel tubuh makhluk hidup. c. Uji Karsinogenitas Uji karsinogenitas dilakukan untuk memperoleh informasi mengenai efek korsinogenik suatu senyawa pada hewan percobaan. Suatu senyawa bersifat
6
karsinogenik jika senyawa tersebut dapat menginduksi karsinoma (pembentukan tumor). Uji ini memerlukan biaya yang banyak dan waktu yang lama. 1.3
Evaluasi Uji Toksisitas Penelitian jangka pendek yang menyeluruh akan memberikan informasi
toksisitas senyawa uji dalam kaitannya dengan organ sasaran, efek pada organ tersebut dan hubungan dosis – efek dan dosis – respons. Evaluasi hasil uji toksisitas dilakukan pengamatan umum, pengamatan parameter klinik, dan pemeriksaan setelah kematian. 1.3.1 Pengamatan Umum Secara umum dilakukan pengamatan pada penampilan, perilaku dan aktivitas motorik, serta semua abnormalitas hewan uji sebelum dan sesudah proses uji toksisitas. Berat badan dan konsumsi makanan selama proses uji toksisitas perlu diperhatikan. Berkurangnya pertambahan berat badan merupakan indeks efek toksik yang sederhana namun cukup sensitif. Konsumsi makanan yang nyata berkurang dapat memperberat manifestasi toksik senyawa uji. 1.3.2 Pengamatan Parameter Klinik Hasil pengujian di laboratorium klinik diperlukan untuk membantu membuat diagnosis dan memantau toksisitas yang terjadi. Pada penelitian ini dilakukan pemeriksaan hematologi meliputi parameter kadar hemoglobin, jumlah sel eritrosit, leukosit, dan trombosit, serta hematokrit. Dilakukan pula uji biokimia darah dan analisis urin. a. Hematologi Pemeriksaan hematologi dapat memberikan informasi efek yang disebabkan senyawa uji terhadap darah dan jaringan pembentuk darah. Darah terdiri atas sel-sel dan cairan yang terdapat dalam sistem sirkulasi tertutup, mengalir secara teratur dalam satu arah, didorong terutama oleh kontraksi jantung yang berirama. Darah terdiri dari sel darah merah (eritrosit), sel darah putih (leukosit), dan trombosit, serta plasma yang merupakan cairan tempat sel-sel darah itu terendam. Jika darah dikeluarkan dari sistem sirkulasi, darah akan membeku dan cairan kuning bening yang disebut serum memisah dari koagulum. Darah yang ditampung dan dicegah pembekuan dengan
7
menambahkan antikoagulan akan memisah bila disentrifuga membentuk lapisanlapisan. Hematokrit adalah perkiraan volume eritrosit padat per satuan volume darah. Volume hematokrit normal tikus 36-50,6%. Sedangkan volume darah normal tikus 60 mL/kg. (Zutphen, 1993; Mitruka, 1981). Eritrosit tidak mempunyai inti, mengandung hemoglobin yang merupakan protein pembawa oksigen. Anemia adalah kondisi patologis yang ditandai oleh konsentrasi hemoglobin darah di bawah normal, berhubungan dengan pengurangan jumlah sel darah merah. Atau dapat pula jumlah sel normal namun jumlah kandungan hemoglobinnya kurang (anemia hipokrom). Anemia dapat disebabkan pendarahan atau produksi sel darah merah oleh sum-sum tulang tidak cukup. Penetapan kadar hemoglobin dapat dilakukan dengan metoda Sahli. Metoda ini menggunakan cara kolorimetrik visual. Hemoglobin dalam hemometer diubah menjadi hematin asam dengan penambahan HCl 0,1N, kemudian warna yang terjadi dibandingkan secara visual dengan standard pada alat tersebut. Kadar hemoglobin normal tikus adalah 11-20 g/100 mL (Zutphen, 1993; Mitruka, 1981). Jumlah sel darah merah dihitung menggunakan hemositometer dan mikroskop. Darah diencerkan dengan natrium sitrat 0,1M, kemudian dimasukkan ke dalam kamar hitung. Jumlah eritrosit dihitung dalam volume tertentu, dengan menggunakan faktor konversi jumlah eritrosit dapat diperhitungkan. Jumlah sel darah merah normal tikus 6,76-9,20 x106/mm3 (Mitruka, 1981). Sel darah putih (leukosit) bukan merupakan komponen dengan jumlah yang selalu tetap dalam darah. Sel darah putih bermigrasi ke jaringan tempat melakukan berbagai fungsinya. Leukosit berperan dalam pertahanan selular dan humoral dari organisme
terhadap
materi
asing.
Jumlah
leukosit
dihitung
menggunakan
hemositometer dan mikroskop. Darah diencerkan menggunakan larutan Turk yang mengandung asam asetat dan gentian violet membentuk warna ungu muda. Gentian violet berguna untuk memberikan warna pada inti dan granula leukosit. Jumlah leukosit normal tikus 6,60-12,60 x106/mm3 (Mitruka, 1981). Jumlah trombosit dihitung menggunakan hemositometer dan mikroskop. Darah diencerkan dengan larutan ammonium oksalat 1%, yang ditujukan untuk melisiskan eritrosit. Jumlah trombosit normal tikus 1,5-4,6 x106/mm3 (Mitruka, 1981).
8
b. Uji Biokimia Darah Laju distribusi ke setiap organ tubuh berhubungan dengan aliran darah. Volume aliran darah di hati dan ginjal paling tinggi, sehingga organ tersebut paling banyak terpapar senyawa toksikan. Selain itu, fungsi metabolisme dan eksresi pada organ tersebut besar, sehingga keduanya lebih peka terhadap toksikan. Dengan mengetahui biokimia darah maka dapat diketahui keadaan organ tubuh terutama fungsi hati dan ginjal. Pada penelitian ini uji biokimia darah yang dilakukan adalah penentuan kadar glukosa, kreatinin, BUN, SGOT, SGPT, LDL, trigliserida, HDL, protein total, albumin, dan kolesterol. c. Urinalisis Urin merupakan jalur utama eksresi sebagian besar senyawa toksikan, sehingga ginjal mempunyai volume aliran darah yang tinggi, mengkonsentrasi toksikan pada filtrat dan membawa toksikan melalui sel tubulus. Karena itu ginjal merupakan organ sasaran utama dari efek toksik. Pemeriksaan urin selain dapat memberikan data mengenai ginjal dan saluran urin, juga mengenai fungsi berbagai organ dalam tubuh seperti hati, saluran empedu, pankreas, korteks adrenal dan lainlain. Perlu diperhatikan waktu pengumpulan sampel urin. Urin kumpulan sepanjang 24 jam mempunyai susunan yang tidak banyak berbeda dari susunan urin 24 jam berikutnya. Tetapi sampel urin yang diambil pada saat tertentu di waktu siang atau malam, dapat memberikan susunan urin yang berbeda. Analisis urin meliputi warna, berat jenis, pH, dan suhu. 2.3.3 Pemeriksaan Setelah Kematian Pada akhir pengujian semua hewan uji dikorbankan dan diperiksa patologinya secara makroskopis, jika keadaan jaringan memungkinkan, dilakukan pula pemeriksaan histologi. Selain itu, berat beberapa organ, baik dalam nilai absolut maupun relatif terhadap berat badan harus diukur, karena ini merupakan indikator yang berguna bagi toksisitas. Pemeriksaan ini akan menghasilkan informasi toksisitas senyawa uji dalam kaitannya dengan efek pada organ sasaran. Informasi tersebut dapat memberikan petunjuk tentang jenis penelitian khusus lainnya yang perlu dilakukan.
9
a. Organ Sasaran Toksikan tidak mempengaruhi semua organ secara merata, karena dipengaruhi oleh kepekaan suatu organ, juga tingginya kadar senyawa atau metabolitnya di organ sasaran. Kadar ini selain bergantung pada dosis yang diberikan juga pada derajat absorbsi, distribusi, pengikatan, dan eksresi. Senyawa uji yang diberikan secara oral, absorbsi terjadi di saluran cerna. Lambung merupakan tempat penyerapan yang penting, terutama untuk senyawa yang bersifat asam lemah. Dalam usus, senyawa yang bersifat basa lemah akan mudah diserap. Setelah senyawa tersebut diserap dan memasuki darah, maka akan didistribusikan dengan cepat ke seluruh tubuh. Kadarnya dalam organ tergantung mudah atau tidaknya senyawa melewati dinding kapiler dan membran sel, serta afinitas komponen organ terhadap senyawa tersebut. Pengikatan suatu senyawa dalam jaringan dapat menyebabkan kadarnya menjadi tinggi. Hati dan ginjal memiliki kapasitas yang lebih tinggi untuk mengikat senyawa asing. Hal ini berhubungan dengan fungsi metabolik dan eksretorik. b. Histologi Organ Pada pemeriksaan setelah kematian hewan uji perlu dilakukan pemeriksaan histologi organ untuk mengetahui hubungan antara gejala yang terjadi dengan struktur organ yang mengalami paparan senyawa uji. Pada penelitian ini organ yang ditimbang dan diperiksa secara histologis yaitu hati, ginjal, anak ginjal, jantung, limpa, pankreas, paru-paru, otak, testes dan vesika seminalis (jantan), uterus dan ovarium (betina). Lambung diperiksa secara makroskopis. Hati adalah organ terbesar dan memberikan proses metabolisme paling kompleks di dalam tubuh. Organ ini terlibat dalam metabolisme zat makanan serta sebagian besar obat dan toksikan. Pada pemeriksaan patologi makroskopik hati, warna dan penampilan sering dapat menunjukkan sifat toksisitas, seperti perlemakan hati atau sirosis. Berat organ merupakan petunjuk yang sangat peka dari pengaruh zat uji pada hati. Pada pemeriksaan mikroskopik hati, dapat dideteksi berbagai kelainan histologi seperti perlemakan, nekrosis, sirosis, nodul hiperplastik dan neoplasia, selain juga dapat mendeteksi perubahan dalam berbagai struktur subsel. Data tersebut
10
digabungkan dengan data uji biokimia sehingga dapat menggambarkan cara kerja toksikan. Ginjal merupakan organ sasaran utama dari efek toksik selain hati. Ginjal mempunyai kemampuan kompensasi yang luar biasa. Uji fungsi ginjal selain dilakukan analisis urin dan darah, juga pemeriksaan secara morfologis dan histologis. Pada pemeriksaan makroskopis ditentukan berat ginjal. Perubahan berat organ, bila dibandingkan dengan hewan pembanding, dapat menunjukkan lesi ginjal. Pemeriksaan histopatologi dapat mengungkapkan tempat, luas, dan sifat morfologik lesi ginjal. Sebagai suatu bagian vital dalam tubuh, susunan saraf dilindungi dari toksikan dalam darah oleh suatu mekanisme protektif sawar darah otak. Meskipun demikian, susunan saraf rentan dari berbagai jenis toksikan. Susunan saraf terdiri atas dua bagian utama yaitu susunan saraf perifer dan susunan saraf pusat (SSP) yang mencakup otak dan sum-sum tulang belakang. Pada uji toksisitas perlu juga dilakukan pemeriksaan histologi otak. Jantung adalah suatu organ yang vital dalam tubuh, meskipun bukan sasaran utama, organ ini dapat dirusak oleh berbagai senyawa, juga sistem reproduksi, testis dan vesika seminalis atau ovarium dan uterus, serta pankreas yang merupakan bagian sistem endokrin. Oleh karena itu perlu dilakukan pula pemeriksaan histologi pada organ-organ tersebut. II
METODE PENELITIAN Dalam penelitian ini dilakukan pengujian toksisitas subkronis ekstrak etanol
buah mengkudu dan rimpang jahe gajah tunggal serta kombinasinya. Pada tahap penelitian dilakukan penyiapan ekstrak tumbuhan obat dimulai dengan pengumpulan bahan segar berupa buah mengkudu yang cukup matang dan rimpang jahe gajah, kemudian di determinasi. Buah mengkudu dan rimpang jahe gajah dicuci dan diiris kemudian dijemur di bawah sinar matahari langsung sampai kering. Simplisia yang telah kering dihaluskan dan diayak. Setelah itu diekstraksi menggunakan pelarut etanol 96% kemudian diuapkan sampai kental. Dilakukan penetapan karakteristik ekstrak. Sediaan obat dibuat dengan melarutkan ekstrak dalam air menggunakan tragakan 1%.
11
Uji toksisitas sub kronis dilakukan menggunakan hewan tikus putih jantan dan betina galur Wistar. Diuji dengan dosis bertingkat 50, 400, 1000 mg/kg bb kombinasi ekstrak etanol buah mengkudu dengan rimpang jahe gajah (1:1) dan ekstrak etanol buah mengkudu tunggal 50 mg/kg bb juga ekstrak etanol rimpang jahe gajah tunggal 50 mg/kg bb. Pemberian sediaan dilakukan secara oral setiap hari selama 90 hari. Kelompok satelit tetap dipelihara sampai 120 hari tanpa pemberian zat uji lagi setelah pemberian sediaan selama 90 hari. Evaluasi hasil uji toksisitas dilakukan pengamatan umum, pengamatan parameter klinik, dan pemeriksaan setelah kematian. Pada pengamatan
umum
dilakukan pengamatan pada penampilan, perilaku dan aktivitas motorik, serta semua abnormalitas hewan uji sebelum dan sesudah proses uji toksisitas. Berat badan dan konsumsi makanan selama proses uji toksisitas perlu diperhatikan. Konsumsi makanan yang berkurang secara nyata dapat memperberat manifestasi toksik zat uji. Hasil pengujian di laboratorium klinik diperlukan untuk membantu membuat diagnosis dan memantau toksisitas yang terjadi. Pada penelitian ini dilakukan pemeriksaan hematologi pada darah yang diambil dari ekor tikus pada hari ke 91 dan untuk kelompok satelit pada hari ke 121, kemudian diamati jumlah sel darah merah, sel darah putih, trombosit, hemoglobin dan angka hematokrit yaitu perbandingan endapan sel dengan volume darah. Nilai parameter darah kelompok yang diberi sediaan uji dibandingkan terhadap kelompok kontrol. Dilakukan pula uji biokimia darah yang meliputi penentuan kadar glukosa, kreatinin , BUN, SGOT, SGPT, LDL, trigliserida, HDL, protein total, albumin, dan kolesterol. Analisis urin meliputi warna, berat jenis, dan pH. Pada akhir pengujian semua hewan uji yang hidup dikorbankan dan dilakukan isolasi terhadap organ-organ tertentu untuk diperiksa patologinya secara makroskopis, dilakukan pula pemeriksaan histologi. Lambung diperiksa secara makroskopis menggunakan kaca pembesar. Pada penelitian ini organ yang ditimbang dan diperiksa secara histologis yaitu hati, ginjal, kelenjar adrenal, jantung, limpa, paru-paru, otak, testes dan vesika seminalis (jantan) dan uterus dan ovarium (betina).
12
III
PERCOBAAN
3.1
Bahan, Alat dan Hewan Uji
3.1.1 Bahan Buah mengkudu (Morinda citrifolia Linn.), rimpang jahe gajah (Zingiber officinale Rosc.), tragakan, etanol 96%, air destilasi, larutan Turk 0,1%, larutan natrium sitrat 2%, larutan asam hidroklorida 0,1N, larutan dapar formalin, pereaksi biokimia darah, etanol absolut, xylol, paraffin padat, dan pewarna Hematoksilin Eosin (HE). 3.1.2 Alat Alat refluks, alat penguap vakum putar, cawan penguap, penangas air, timbangan analitik, timbangan tikus, mortir dan stampler, jarum oral tikus, spuit 3cc, kandang metabolisme, alat uji perilaku, tabung eppendorf, alat sentrifuga eppendorf, tabung kapiler hematokrit, mikrosentrifuga, mikropipet, hemositometer, mikroskop, alat penghitung, tabung sahli, alat bedah, spektrofotometer ultra violet visibel (Fotometer 4020 Hitachi), kaca pembesar, kamera, mikrotom, kaca objek, kaca penutup, dan peralatan gelas yang umum digunakan di laboratorium. 3.1.3 Hewan Uji Tikus putih jantan dan betina galur Wistar usia 2-3 bulan dengan bobot 100200 gram. Hewan diperoleh dari laboratorium hewan Farmakologi dan Toksikologi Sekolah Farmasi Institut Teknologi Bandung dan Pusat Antar Universitas ITB. 3.2
Penyiapan Bahan Bahan yang digunakan adalah buah mengkudu yang diperoleh dari daerah
Bandung, dan rimpang jahe gajah yang diperoleh dari daerah kadungora kabupaten garut, kemudian dilakukan determinasi tanaman di Herbarium Bandungense, Departemen Biologi Institut Teknologi Bandung. Dari hasil determinasi diperoleh data mengkudu tersebut termasuk spesies Morinda Citrifolia Linn. dan jahe gajah spesies Zingiber officinale Rosc.
13
3.3
Pengolahan Bahan Buah mengkudu dan rimpang jahe gajah segar dicuci dan dibersihkan
kemudian diiris dengan ketebalan lebih kurang 0,5 cm dan dijemur dibawah sinar matahari langsung sampai kering. Simplisia yang telah kering dihaluskan menggunakan alat penghancur, kemudian diayak, sehingga diperoleh serbuk simplisia yang siap digunakan untuk proses selanjutnya. 3.4
Pembuatan Ekstrak Tanaman Ekstrak dibuat dengan menggunakan alat refluks dengan pelarut etanol 96%.
Serbuk simplisia ditimbang 100 gram, dimasukkan ke dalam labu bundar dan diekstraksi menggunakan 500 mL etanol 96%, direfluks selama 2 jam, kemudian disaring panas-panas menggunakan kain flanel, dan disaring lagi menggunakan kertas saring sehingga didapatkan filtrat yang bening tanpa endapan. Residu diekstraksi lagi 2 kali masing-masing menggunakan 500 mL etanol 96%, dan filtratnya disatukan. Seluruh filtrat yang diperoleh diuapkan menggunakan alat penguap vakum berputar sampai volumenya lebih kurang 100 mL, kemudian ekstrak diuapkan diatas penangas air pada suhu 50 oC sampai diperoleh ekstrak kental dengan bobot konstan. Bagan ekstraksi dapat dilihat pada Lampiran B, Gambar 3.4. 3.5
Pemeriksaan Karakteristik Ekstrak Pengujian ekstrak kental meliputi parameter non spesifik yaitu susut
pengeringan, bobot jenis, kadar air, kadar abu, kadar abu yang tidak larut dalam asam. Pengujian parameter spesifik meliputi organoleptik ekstrak, senyawa terlarut dalam pelarut tertentu dan kandungan kimia ekstrak termasuk flavonoid, saponin, kuinon, tanin, alkaloid, steroid/triterpenoid. 3.5.1 Parameter Susut Pengeringan Ekstrak ditimbang sebanyak 2 gram dan dimasukkan ke dalam botol timbang dangkal bertutup yang sebelumnya telah dipanaskan pada suhu 105 oC selama 30 menit dan telah ditara. Sebelum ditimbang, ekstrak diratakan dalam botol timbang, dengan menggoyangkan botol, hingga merupakan lapisan setebal lebih kurang 5-10 mm, kemudian masukkan ke dalam ruang pengering, buka tutupnya, keringkan pada
14
suhu 105 oC hingga bobot tetap. Sebelum setiap pengeringan, biarkan botol dalam keadaan tertutup mendingin dalam eksikator hingga suhu kamar. 3.5.2. Parameter Bobot Jenis Digunakan piknometer bersih, kering dan telah dikaliberasi dengan menetapkan bobot piknometer pada suhu 25 oC dan bobot air yang baru dididihkan. Atur hingga suhu ekstrak cair lebih kurang 20 oC, kemudian masukkan ke dalam piknometer. Atur suhu piknometer yang telah diisi hingga suhu 25 oC, buang kelebihan ekstrak cair dan ditimbang. Kurangkan bobot piknometer kosong dari bobot piknometer yang telah diisi. Bobot jenis ekstrak cair adalah hasil yang diperoleh dengan membagi bobot ekstrak dengan bobot air, dalam piknometer pada suhu 25 oC. 3.5.3 Parameter Kadar Air Penetapan kadar air menggunakan cara destilasi, menggunakan toluen yang telah dikocok dengan sedikit air, biarkan memisah dan buang lapisan air suling. Ke dalam labu kering dimasukkan 5 gram ekstrak kemudian dimasukkan 200 mL toluen ke dalam labu, lalu dihubungkan dengan alat destilasi. Dituangkan toluen ke dalam tabung penerima melalui alat pendingin, kemudian labu dipanaskan dengan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluen mulai mendidih, dilakukan penyulingan dengan kecepatan lebih kurang 2 tetes tiap detik, hingga sebagian air tersuling, kemudian kecepatan penyulingan dinaikkan 4 tetes tiap detik. Setelah semua air tersuling, bagian dalam pendingin dicuci dengan toluen, sambil dibersihkan dengan sikat tabung yang disambungkan pada sebuah kawat tembaga yang telah dibasahi dengan toluen. Selanjutnya penyulingan dilakukan selama 5 menit dengan tabung penerima pendingin dibiarkan dingin pada suhu kamar. Jika ada tetes air yang melekat pada tabung pendingin pertama, dilakukan penggosokkan dengan karet yang diikatkan pada sebuah kawat tembaga dan dibasahi dengan toluen sampai tetesan turun. Setelah air dan toluen memisah sempurna dilakukan pembacaan volume air. Kemudian dilakukan penghitungan kadar air dalam persen. 3.5.4 Parameter Kadar Abu Pada penetapan kadar abu, 2 gram ekstrak ditimbang saksama, dimasukkan ke dalam krus silikat yang telah dipijarkan dan ditara, ratakan. Pijarkan perlahan-lahan
15
hingga arang habis, dinginkan, dan timbang. Jika cara ini arang tidak dapat dihilangkan, tambahkan air panas, saring melalui kertas saring bebas abu. Masukkan filtrat ke dalam krus, uapkan, pijarkan hingga bobot tetap, timbang. Hitung kadar abu terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara. Pada penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam, abu yang diperoleh pada penetapan kadar abu, didihkan dengan 25 mL asam sulfat encer P selama 5 menit, kumpulkan bagian yang tidak larut dalam asam, saring melalui krus kaca masir atau kertas saring bebas abu, cuci dengan air panas, pijarkan hingga bobot tetap, timbang. Hitung kadar abu yang tidak larut dalam asam terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara. 3.5.5 Parameter Organoleptik Ekstrak Pemeriksaan parameter organoleptik ekstrak merupakan pengenalan awal yang sederhana dilakukan seobyektif mungkin meliputi bentuk, warna, rasa, dan bau. Ekstrak etanol buah mengkudu berbentuk cairan kental, warna coklat, rasa pahit dan agak asam serta berbau aromatik. Ekstrak etanol rimpang jahe gajah berbentuk cairan kental, warna coklat, rasa pedas dan berbau aromatik khas. 3.5.6 Parameter Senyawa Terlarut dalam Pelarut Tertentu Pada penentuan kadar senyawa yang larut dalam air, maserasi 5 gram ekstrak selama 24 jam dengan 100 mL air kloroform LP menggunakan labu bersumbat sambil sekali-kali dikocok selama 6 jam pertama dan kemudian dibiarkan selama 18 jam. Saring, uapkan 20 mL filtrat hingga kering dalam cawan dangkal berdasar rata yang telah ditara, panaskan residu pada suhu 105 oC hingga bobot tetap. Hitung kadar dalam persen senyawa yang larut dalam air, dihitung terhadap ekstrak awal. Pada penetapan senyawa yang larut dalam etanol, maserasi sejumlah 5 gram ekstrak selama 24 jam dengan 100 mL etanol (95%), menggunakan labu bersumbat sambil sekali-kali dikocok selama 6 jam pertama dan kemudian dibiarkan selama 18 jam. Saring cepat dengan menghindarkan penguapan etanol, kemudian uapkan 20 mL filtrat hingga kering dalam cawan dangkal berdasar rata yang telah ditara, panaskan residu pada suhu 105 oC hingga bobot tetap. Hitung kadar dalam persen senyawa yang larut dalam etanol (95%), dihitung terhadap ekstrak awal.
16
3.5.7 Parameter Golongan Kandungan Fitokimia Pada pemeriksaan kandungan fitokimia, sebanyak 1 gram ekstrak ditambah 100 mL air panas, kemudian dididihkan selama 5 menit dan di saring. Filtrat yang diperoleh digunakan untuk pemeriksaan flavonoid, saponin, kuinon dan tanin. a. Pemeriksaan Flavonoid Sebanyak 5 mL filtrat ditambah serbuk magnesium dan 1 mL klorida pekat, dikocok kuat-kuat dengan 5 mL amil alkohol, kemudian di biarkan memisah. Warna merah atau jingga yang terbentuk pada lapisan amil alkohol menunujukkan adanya senyawa flavonoid. b. Pemeriksaan Saponin Sebanyak 10 mL filtrat dikocok tegak selama 10 detik kemudian didiamkan dan diamati busa yang terbentuk. Adanya saponin ditunjukkan dengan timbulnya busa yang stabil setelah penambahan satu tetes asam klorida 2N. c. Pemeriksaan Kuinon Sebanyak 5 mL filtrat dari pemeriksaan flavonoid ditambah dengan beberapa tetes natrium hidroksida 1N. Adanya kuinon ditunjukkan dengan terbentuknya warna merah. d. Pemeriksaan Tanin Sebagian filtrat dari pemeriksaan flavonoid direaksikan dengan larutan besi(III)klorida 1%. Adanya tanin ditunjukkan dengan terbentuknya warna hijau atau biru. Pada sebagian filtrat dari pemeriksaan flavonoid ditambah 15 mL pereaksi Steasny (campuran 2 bagian formalin 30%v/v dengan 1 bagian asam klorida pekat), dipanaskan pada tangas air suhu 90 oC. Adanya tanin katekat ditunjukkan dengan terbentuknya endapan merah muda. Hasil pemeriksaan tanin katekat disaring kemudian filtrat dijenuhkan dengan penambahan natrium asetat dan beberapa tetes besi(III)klorida 1%. Terbentuknya warna biru atau hitam menunjukkan adanya tanin galat
17
e. Pemeriksaan Alkaloid Sebanyak 1 gram ekstrak dilembabkan dengan 5 mL amonia 50% dan digerus dalam mortar, ditambah 20 mL kloroform, digerus kuat dan disaring. Filtrat yang terdiri dari larutan senyawa organik digunakan untuk percobaan selanjutnya (larutan A). Larutan A diekstraksi dengan asam klorida 2N (larutan B). Larutan A diteteskan pada kertas saring kemudian ditetesi pereaksi Dragendorff. Adanya alkaloid ditunjukkan dengan terbentuknya warna merah atau kuning pada kertas saring. Ke dalam masing-masing 5 mL larutan B dalam tabung reaksi ditambahkan beberapa tetes pereaksi Dragendorff atau Mayer. Reaksi positif terjadi jika terbentuknya endapan warna merah bata atau endapan warna putih pada penambahan pereaksi Mayer. f. Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid Sejumlah ekstrak dimaserasi dengan 20 mL eter selama 2 jam kemudian disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap kemudian residu direaksikan dengan pereaksi Lieberman-Bouchard. Terbentuk warna merah, biru atau violet menunjukkan adanya senyawa terpenoid/steroid. 3.6
Pembuatan Sediaan Uji Senyawa uji berupa ekstrak kental etanol buah mengkudu dan jahe gajah
tunggal dan kombinasi (1:1) sesuai dosis. Sediaan dibuat dengan melarutkannya dalam air menggunakan tragakan 1% dan untuk kontrol, dibuat tragakan 1% tanpa senyawa uji. Sediaan diberikan secara oral setiap hari selama 90 hari. 3.7
Penyiapan Hewan Uji Sebelum pengujian dimulai, hewan diadaptasikan di dalam ruangan percobaan
selama lebih kurang tujuh hari. Hewan diamati kesehatan dan tingkah lakunya. Hewan yang digunakan dalam percobaan adalah hewan yang sehat, tidak terjadi penurunan bobot badan melebihi 10% dan tidak menunjukkan kelainan tingkah laku dan penyimpangan dari keadaan normal. 3.8
Dosis dan Cara Pemberian Sediaan Uji Hewan dikelompokkan secara acak sedemikian rupa sehingga penyebaran
bobot badan merata pada semua kelompok. Hewan dikelompokkan dalam 8 kelompok
18
tikus jantan dan 8 kelompok tikus betina, masing-masing kelompok terdiri dari 10 ekor, sehingga masing-masing dosis terdiri dari 10 ekor jantan dan 10 ekor betina. Kelompok tersebut terdiri dari: - Kelompok I
: Dosis 50 mg /kg bb ekstrak etanol jahe gajah (Dosis rendah tunggal).
- Kelompok II
: Dosis 50 mg /kg bb ekstrak etanol mengkudu (Dosis rendah tunggal).
- Kelompok III
: Dosis 50 mg /kg bb ekstrak etanol mengkudu-jahe gajah (1:1) (Dosis rendah kombinasi).
- Kelompok IV
: Dosis 400 mg /kg bb ekstrak etanol mengkudu-jahe gajah (1:1) (Dosis tengah kombinasi).
- Kelompok V
: Dosis 1000 mg /kg bb ekstrak etanol mengkudu-jahe gajah (1:1), (Dosis atas kombinasi).
- Kelompok VI
: Kontrol (diberi tragakan 1%)
- Kelompok VII
: Satelit kontrol (diberi tragakan 1%)
- Kelompok VIII : Satelit dosis 1000 mg /kg bb ekstrak etanol mengkudu-jahe gajah (1:1), (Satelit dosis atas kombinasi).
3.9
Pengamatan Perilaku dan Aktivitas Motorik Perilaku dan aktivitas motorik diamati sebelum dan sesudah pemberian
pertama, sesudah pemberian 90 hari (pada hari ke 91) dan kelompok satelit setelah 30 hari sediaan uji berhenti diberikan (hari ke 121). Untuk melihat pengaruh pemberian sediaan uji dilakukan pengamatan rasa ingin tahu (jumlah jengukan pada platform), aktivitas motorik, straub, piloereksi, ptosis, refleks pineal, refleks kornea, lakrimasi, midriasis, katalepsi, sikap tubuh, menggelantung, retablismen, fleksi, respons tertutup induksi sakit (uji Hafner), kolik, mortalitas, grooming, defekasi, urinasi, pernapasan, salivasi, vokalisasi, tremor, writing (menggeliat). 3.10
Pengamatan Bobot Badan Penimbangan bobot badan tikus dilakukan setiap hari selama 91 hari untuk
kelompok uji dan 121 hari untuk kelompok satelit. Pertambahan bobot badan kelompok uji selama 90 hari dan pertambahan bobot badan selama 120 hari untuk kelompok satelit dibandingkan terhadap kelompok kontrol.
19
3.11
Pemeriksaan Parameter Urin Pemeriksaan parameter urin pada akhir pengujian yaitu hari ke 91 bagi
kelompok uji sedangkan kelompok satelit dilakukan pada hari ke 121. Urin ditampung sepanjang lebih kurang 16 jam, hewan dipuasakan dan ditempatkan dalam kandang metabolisme. Dilakukan pemeriksaan urin yang meliputi warna dan kekeruhan, berat jenis dan pH. 3.12
Pengamatan Parameter Darah Darah diambil dari ekor tikus pada hari ke 91 sedangkan untuk kelompok
satelit pada hari ke 121. Darah tikus yang ditampung dan dicegah pembekuannya dengan penambahan antikoagulan akan memisah bila disentrifuga membentuk lapisanlapisan. Hematokrit adalah perkiraan volume eritrosit padat per satuan volume darah. Penetapan kadar hemoglobin dapat dilakukan dengan metoda Sahli. Metoda ini menggunakan cara kolorimetrik visual. Hemoglobin dalam hemometer diubah menjadi hematin asam dengan penambahan HCl 0,1N, kemudian warna yang terjadi dibandingkan secara visual dengan standard yang ada pada alat tersebut. Jumlah sel darah merah dihitung menggunakan hemositometer dan mikroskop. Darah diencerkan dengan natrium sitrat 0,1M, kemudian dimasukkan ke dalam kamar hitung. Jumlah eritrosit dihitung dalam volume tertentu, dengan menggunakan faktor konversi jumlah eritrosit dapat diperhitungkan. Jumlah leukosit dihitung menggunakan hemositometer dan mikroskop. Darah diencerkan menggunakan larutan Turk yang mengandung asam asetat dan gentian violet membentuk warna ungu muda. Gentian violet berguna untuk memberikan warna pada inti dan granula leukosit. Jumlah trombosit dihitung menggunakan hemositometer dan mikroskop. Darah diencerkan dengan larutan ammonium oksalat 1%. 3.13
Pengamatan Fungsi Hati dan Ginjal Pengamatan fungsi hati dan fungsi ginjal dilakukan terhadap hewan uji
menggunakan plasma darah dan urin yang telah ditampung sebelum dikorbankan pada hari ke 91 sedangkan kelompok satelit dilakukan pada hari ke 121. Penentuan secara kuantitatif dilakukan dengan menghitung kadar biokimia darah menggunakan
20
alat spektrofotometer Clinicon dengan pereaksi dari Rajawali Nusindo. Pengamatan fungsi ginjal meliputi kreatinin dan BUN, sedangkan fungsi hati meliputi SGOT, SGPT, HDL, LDL, kolesterol total, protein total, albumin, dan trigliserida. 3.14
Pengamatan Makroskopik Organ Pada penelitian ini organ yantg diamati secara makroskopik dan bobotnya
ditimbang meliputi hati, limpa, ginjal, kelenjar adrenal, jantung, paru-paru, pankreas, otak, testes dan vesika seminalis (jantan), uterus dan ovarium (betina). Perbandingan bobot organ dengan bobot badan dihitung sehingga diperoleh indeks organ dalam %. Indeks organ kelompok yang diberi sediaan uji dan kelompok satelit dibandingkan terhadap indeks organ kelompok kontrol. Kondisi mukosa lambung diperiksa secara makroskopis dan diamati dibawah kaca pembesar untuk melihat bila ada tukak, jumlah dan lebar tukak. 3.15
Pengamatan Mikroskopik Organ Pada pemeriksaan setelah kematian hewan uji, dilakukan pemeriksaan
histologi organ untuk mengetahui hubungan antara gejala yang terjadi dengan struktur organ yang mengalami paparan senyawa uji. Pada penelitian ini organ yang diperiksa secara histologis yaitu hati, ginjal, kelenjar adrenal, jantung, limpa, paru-paru, otak, testes dan vesika seminalis (jantan), uterus dan ovarium (betina). Preparat histologi dibuat dengan mengiris organ menggunakan mesin pemotong khusus (mikrotom) kemudian diletakan diatas kaca objek, setelah itu dilakukan prosedur pewarnaan menggunakan Hematoksilin-Eosin (HE), kemudian ditutup dengan kaca penutup objek dan dilem menggunakan entellan. Preparat diamati di bawah mikroskop dan dilakukan pemotretan.
21
IV
HASIL PERCOBAAN DAN BAHASAN Suatu bahan yang akan digunakan oleh manusia baik sintetis maupun bahan
alam yang berasal dari tanaman, selain diperlukan data efek farmakologi juga diperlukan data toksisitas, maka dilakukan penelitian ini untuk mengetahui toksisitas subkronis kombinasi ekstrak etanol buah mengkudu dan rimpang jahe gajah pada tikus Wistar. Pemeriksaan pendahuluan simplisia perlu dilakukan untuk menjamin kebenaran dan kualitasnya. Setelah buah mengkudu dan rimpang jahe gajah dikumpulkan, kemudian dilakukan determinasi untuk memastikan jenis tanaman tersebut. Dari hasil determinasi di Herbarium Bandungense, Departemen Biologi ITB diperoleh data mengkudu tersebut termasuk spesies Morinda citrifolia Linn. dan jahe gajah spesies Zingiber officinale Rosc. Pelarut untuk ekstraksi disesuaikan dengan sifat kandungan yang terdapat pada tanaman uji. Pada penelitian ini digunakan etanol 96% untuk ekstraksi menggunakan refluks sebanyak tiga kali agar dapat mengekstraksi sebanyak mungkin zat aktif. Hasil percobaan diperoleh ekstrak etanol mengkudu dan jahe gajah dengan rendemen masing-masing 16,14% dan 97%. Dilakukan pemeriksaan karakteristik ekstrak yang berupa sediaan kental diperoleh dengan mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia menggunakan pelarut etanol 96%, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa yang tersisa diperlukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan. Susut pengeringan ditentukan untuk memberikan batasan maksimal (rentang) tentang besarnya senyawa yang hilang pada proses pengeringan. Bobot jenis memberikan batasan massa per satuan volume yang merupakan parameter khusus ekstrak cair sampai ekstrak pekat (kental) yang masih dapat dituang. Nilai yang diperoleh terkait dengan kemurnian dan kontaminasi. Penentuan kadar air untuk memberikan batasan minimal atau rentang tentang besarnya kandungan air di dalam bahan. Penentuan kadar abu memberikan gambaran kandungan mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai akhir terbentuknya ekstrak. Parameter organoleptik ekstrak berguna sebagai pengenalan awal yang sederhana seobyektif mungkin, meliputi bentuk, warna, rasa dan bau. Penentuan parameter senyawa terlarut dalam pelarut tertentu dengan melarutkan ekstrak dalam air atau alkohol untuk ditentukan jumlah solut yang identik dengan jumlah senyawa kandungan secara gravimetri,
22
bertujuan memberikan gambaran awal jumlah senyawa kandungannya. Penentuan parameter golongan kandungan fitokimia bertujuan memberikan informasi adanya kandungan golongan kimia tertentu sebagai parameter mutu ekstrak dalam kaitannya dengan efek farmakologi. Tabel 4.1: Hasil Penetapan Karakteristik Ekstrak Etanol Buah Mengkudu dan Rimpang Jahe Gajah Pemeriksaan Organoleptik
Hasil (%b/b) Ekstrak etanol Ekstrak etanol Buah Mengkudu Jahe Gajah Bentuk : cairan kental Warna : coklat Rasa : pahit-asam Bau : Aromatik
36,35 Kadar sari larut air Kadar sari larut etanol 66,20 Kadar minyak atsiri Tidak ditentukan Susut Pengeringan 10.39 Bobot Jenis 1,3 Kadar air 10* Kadar abu 5,02 Kadar abu larut air 3,96 Kadar abu tidak larut asam 0,45 Keterangan : * dihitung dalam %v/b
Bentuk : cairan kental Warna : coklat Rasa : Pedas Bau : Aromatik 34,49 10,26 0,2* 34,90 1,07 7,5* 0,28 Tidak ditentukan Tidak ditentukan
Tabel 4.2: Hasil Penapisan Fitokimia Simplisia dan Ekstrak Ekstrak Etanol Ekstrak Etanol Buah Mengkudu Jahe Gajah Simplisia Ekstrak Simplisia Ekstrak Flavonoid + + Saponin Tanin katekat + + Tanin galat Kuinon Alkaloid + + + + Steroid/triterpenoid + + + + Keterangan : (+) menunjukkan adanya golongan senyawa (-) menunjukkan tidak adanya golongan senyawa Golongan Senyawa
Pengujian toksisitas dilakukan pada hewan uji yang sehat, hewan kontrol termasuk dalam penelitian dan mendapat perlakuan yang sama tetapi diberikan
23
sediaan blanko. Bentuk sediaan uji, tingkatan dosis dan lama pemberian sebanding dengan pemberian pada manusia. Faktor penting yang mempengaruhi keamanan suatu senyawa antara lain jumlah dosisnya. Pada penelitian ini digunakan dosis berdasarkan penelitian sebelumnya dan hasil uji tokisitas akut pada dosis bertingkat 5, 50, 500, 2000, dan 5000 mg/kg bb kombinasi ekstrak buah mengkudu dengan jahe gajah (1:1). Pengujian menggunakan hewan mencit putih jantan dan betina galur Swiss Webster, dan pemberian sediaan uji dilakukan secara oral. Pengamatan dilakukan selama 14 hari dan tidak ditemukan adanya kematian. Pada uji toksisitas subkronis ini digunakan dosis 50 mg/kg bb dan dua dosis yang lebih tinggi yaitu 400 mg/kg bb dan 1 gram/kg bb. Dilakukan pengamatan perilaku dan aktivitas motorik terhadap semua kelompok hewan uji. Pada hari pertama, satu jam setelah pemberian sediaan uji, umumnya dapat diamati adanya penurunan aktivitas motorik baik pada tikus jantan maupun pada tikus betina, juga pada kelompok kontrol yang diberi sediaan blanko. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian sediaan uji tidak mempengaruhi uji aktivitas motorik pada hari pertama pemberian. Hasil pengamatan perilaku dan aktivitas motorik dapat dilihat pada Lampiran C, Tabel 4.3 dan Tabel 4.4. Setelah pemberian sediaan uji 90 hari berturut-turut, profil aktivitas motorik tidak menunjukkan perbedaan dengan kelompok kontrol, demikian juga pada kelompok satelit baik pada tikus jantan ataupun betina. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian sediaan uji selama 90 hari berturut-turut dan penghentian pemberian sediaan uji selama 30 hari setelah pemberian selama 90 hari berturut-turut, tidak menunjukkan perubahan terhadap aktivitas motorik. Pada pengamatan terhadap defekasi dan urinasi pada hari pertama sebelum dan setelah pemberian, setelah pemberian sediaan uji selama 90 hari berturut-turut, serta pengamatan pada hari ke 121, tidak menunjukkan perbedaan variasi jumlah defekasi dan urinasi dibandingkan kelompok kontrol. Hal ini menunjukkan bahwa sediaan uji tidak mempengaruhi defekasi dan urinasi hewan uji. Dilakukan juga pengamatan terhadap sikap tubuh dan pernafasan, dan kemampuan kerja otot dengan menggelantung dan rentablismen, indentifikasi adanya straub, piloereksi, ptosis, refleks pineal dan korneal, midriasis, katalepsi, fleksi, respon tertutup induksi rasa sakit (uji hafner), kolik, mortalitas, grooming, tremor
24
dan writhing (menggeliat), juga aktifitas kelenjar salivasi dan lakrimasi tidak menunjukkan profil yang berbeda dengan kelompok kontrol. Hasil pengamatan bobot badan tikus menunjukkan profil perkembangan dan peningkatan bobot badan dengan profil yang hampir sama dengan semua kelompok dosis hewan uji dapat dilihat pada Lampiran D.. Peningkatan yang paling tinggi terjadi pada kelompok hewan yang diberi sediaan uji mengkudu dosis 50 mg/kg bb.
Tabel 4.7: Peningkatan Bobot Badan Tikus setelah Pemberian Sediaan Uji Kelompok
Jenis Kelamin
Peningkatan Bobot P Badan (g) Kontrol Jantan 47,4 ± 28,9 Betina 45,0 ± 19,7 Jahe Gajah 50 mg/kg bb 0,680 Jantan 47,6 ± 13,4 Betina 0,425 43,6 ± 21,5 Mengkudu 50 mg/kg bb Jantan 0,054 66,6 ± 27,1 0,918 Betina 47,4 ± 17,0 Jahe Gajah-Mengkudu Jantan 0,923 44,9 ± 29,6 50 mg/kg bb Betina 0,471 43,2 ± 22,2 Jahe Gajah-Mengkudu Jantan 0,468 57,3 ± 24,3 400 mg/kg bb 0,520 Betina 42,5 ± 15,6 Jahe Gajah-Mengkudu Jantan 0,055 53,0 ± 28,1 1000 mg/kg bb Betina 0,553 40,9 ± 16,9 0,329 Satelit Kontrol Jantan 75,0 ± 24,1 Betina 0,712 47,4 ± 26,5 Satelit Jahe Gajah-Mengkudu Jantan 0,350* 81,2 ± 29,1 1000 mg/kg bb 0,825* Betina 42,4 ± 19,5 Keterangan : n = 10, n satelit = 5, P : probabilitas, P < 0,05 dinyatakan bermakna, * : dibandingkan terhadap jahe gajah -mengkudu 1000 mg/kg bb.
Urin merupakan jalur utama ekskresi sebagian besar senyawa toksikan, sehingga ginjal yang mempunyai volume aliran darah tinggi mengkonsentrasi toksikan pada filtrat dan membawa toksikan melalui sel tubulus. Karena itu ginjal merupakan organ sasaran utama dari efek toksik. Pemeriksaan urin dilakukan secara organoleptik yang meliputi warna dan kekeruhan, berat jenis, dan pH. Profil urin tikus jantan dan betina yang diberi sediaan uji tidak menunjukkan profil urin yang berbeda bermakna secara statistik dibanding kelompok kontrol.
25
Tabel 4.8 : Pengamatan Bobot Jenis dan pH Urin Kelompok Kontrol Jahe Gajah 50 mg/kg bb Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 400 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb Satelit Kontrol
Urin
Jenis Kelamin
Bobot Jenis (g/ml)
P
pH
P
Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina
1,0812 ± 0,0415 1,1153 ± 0,0518 1,1617 ± 0,2316 1,1360 ± 0,1384 1,0975 ± 0,1016 1,0864 ± 0,0314 1,1043 ± 0,0519 1,0912 ± 0,0244 1,1127 ± 0,0582 1,1026 ± 0,0834 1,1198 ± 0,0565 1,1271 ± 0,0293 1,1133 ± 0,0355 1,1052 ± 0,0236 1,1200 ± 0,0710 1,0924 ± 0,0378
0,160 0,547 0,774 0,390 0,684 0,472 0,579 0,705 0,498 0,726 0,630 0,813 0,473* 0,972*
7,22 ± 0,93 7,35 ± 0,96 7,06 ± 0,89 7,20 ± 1,17 7,57 ± 1,00 7,33 ± 1,31 7,00 ± 1,07 7,16 ± 1,01 7,32 ± 1,13 7,37 ± 0,95 7,00 ± 0,47 7,20 ± 0,92 7,40 ± 0,55 7,25 ± 0,50 7,20 ± 0,45 7,20 ± 0,45
0,730 0,767 0,437 0,962 0,637 0,706 0,827 0,976 0,641 0,760 0,732 0,872 0,685 * 0,827 *
Satelit Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb Keterangan : n = 10, n satelit = 5, P = probabilitas, P < 0,05 dinyatakan bermakna, * : dibandingkan terhadap jahe gajah -mengkudu 1000 mg/kg bb.
Pada pengamatan parameter darah yang meliputi hematokrit, hemoglobin, sel darah merah, sel darah putih, dan trombosit menunjukkan profil yang hampir sama dengan kelompok kontrol. Perbedaan yang bermakna terjadi pada jumlah sel darah putih tikus jantan pada pemberian senyawa uji dosis 400 mg/kg bb (p= 0,029). Hal tersebut belum tentu akibat pemberian sediaan uji, karena hanya terjadi pada sebagian dari satu kelompok dosis dan sel darah putih/leukosit berperan dalam pertahanan tubuh terutama terhadap infeksi, dalam keadaan radang leukosit dapat terbentuk lebih banyak. Fungsi hati dan ginjal dapat dilihat dari pengujian biokimia darah. Pada pengujian serum trasaminase asam glutamat oksaloasetat (SGOT) dan transaminase asam glutamat piruvat (SGPT), aktifitas enzim SGPT dan SGOT tikus jantan pada dosis 50 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 1000 mg/kg bb menunjukkan aktifitas yang menurun dibandingkan kelompok kontrol. Pada pemberian ekstrak kombinasi jahe gajah dan mengkudu dosis 50 dan 400 mg/kg bb, aktifitas enzim SGPT lebih rendah dari kontrol dan menunjukkan perbedaan yang bermakna secara statistik (p= 0,015
26
dan p= 0,042). Aktifitas SGPT dan SGOT berkaitan erat dengan kondisi patologi hati, penurunan aktifitas enzim tersebut menunjukkan adanya perbaikan fungsi hati. Aktifitas enzim SGPT pada kelompok satelit dosis 1000 mg/kg bb kembali menunjukkan aktifitas yang meningkat mendekati kelompok kontrol. Sedangkan aktifitas enzim SGPT dan SGOT tikus betina pada umumnya tidak menunjukkan aktifitas yang berbeda secara statistik dibanding kelompok kontrol, hanya pada kelompok pemberian mengkudu 50 mg/kg bb aktifitas SGPT meningkat.
Tabel 4.11 : Kadar SGPT dan SGOT Tikus Jantan
10 10 10
Kadar SGPT (U/L) p 29,10 ± 14,55 0,102 22,30 ± 8,30 0,884 29,70 ± 9,38
Kadar SGOT (U/L) p 82,70 ± 25,82 0,419 74,90 ± 21,39 1,000 82,70 ± 15,59
10
18,90 ± 8,24
0,015
79,10 ± 24,44
0,708
10
20,60 ± 7,09
0,042
90,60 ± 26,52
0,413
10
21,00 ± 8,42
0,052
69,50 ± 17,84
0,173
5
19,40 ± 2,51
0,057
79,40 ± 15,71
0,779
5
24,60 ± 6,07
0,476*
73,00 ± 12,19
0,766*
Kelompok
n
Kontrol Jahe Gajah 50 mg/kg bb Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 400 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb Satelit Kontrol Satelit Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb
Tabel 4.12 : Kadar SGPT dan SGOT Tikus Betina Kadar SGPT Kadar SGOT Kelompok n (U/L) p (U/L) p Kontrol 10 16,20 ± 4,64 84,90 ± 12,10 Jahe Gajah 50 mg/kg bb 10 0,750 0,452 17,00 ± 5,87 89,80 ± 15,20 Mengkudu 50 mg/kg bb 10 0,020 22,20 ± 8,16 85,20 ± 16,16 0,963 Jahe Gajah-Mengkudu 10 0,525 0,701 17,80 ± 3,68 82,40 ± 14,38 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 10 0,500 17,90 ± 5,74 82,30 ± 15,27 0,690 400 mg/kg bb Kadar SGPT Kadar SGOT Kelompok n (U/L) p (U/L) p Jahe Gajah-Mengkudu 10 0,251 19,10 ± 5,36 74,20 ± 14,54 0,104 1000 mg/kg bb Satelit Kontrol 5 0,509 14,00 ± 3,16 83,50 ± 16,26 0,871 Satelit Jahe Gajah-Mengkudu 5 0,136* 62,20 ± 9,98 15,00 ± 5,05 0,186* 1000 mg/kg bb
27
Keterangan : n = Jumlah Hewan, U/l = Unit per Liter, p < 0,05 dinyatakan bermakna, * : dibandingkan dengan kelompok jahe gajah-mengkudu 1000 mg/kg bb, SGPT = serum glutamat piruvat transaminase, SGOT = serum glutamat oksaloasetat transaminase.
Kadar kreatinin darah tikus jantan dan betina pada semua kelompok hewan uji menunjukkan kadar yang sebanding dengan kelompok kontrol. Kreatinin merupakan suatu metabolit kreatin dan diekskresikan dalam urin melalui glomerulus ginjal. Kadar kreatinin kelompok hewan uji menunjukkan profil yang tidak berbeda bermakna secara statistik dibandingkan dengan kelompok kontrol, merupakan indikasi fungsi ginjal masih baik. Tabel 4.13 : Kadar Kreatinin Darah Tikus Jantan dan Betina Kelompok
n
Kontrol Jahe Gajah 50 mg/kg bb Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe gajah-Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 400 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb Satelit Kontrol Satelit Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb
10 10 10
Jantan Kreatinin p (mg/dl) 0,43 ± 0,18 0,655 0,51 ± 0,22 0,250 0,22 ± 0,25
Betina Kreatinin p (mg/dl) 0,36 ± 0,99 0,746 0,45 ± 0,29 0,670 0,49 ± 0,30
10
0,73 ± 0,70
0,079
0,22 ± 0,16
0,643
10
0,54 ± 0,32
0,619
0,86 ± 0,99
0,064
10
0,52 ± 0,28
0,606
0,30 ± 0,25
0,898
5
0,34 ± 0,28
0,679
0,32 ± 0,01
0,847
5
0,51 ± 0,35
0,960*
0,52 ± 0,38
0,373*
Keterangan : n = Jumlah Hewan, p= probabilitas, p < 0,05 dinyatakan bermakna, * : dibandingkan dengan kelompok jahe gajah-mengkudu 1000 mg/kg bb
Pada pemeriksaan nitrogen urea darah (BUN), kadar BUN darah tikus jantan dan betina menunjukkan profil yang setara dengan kelompok kontrol, tetapi terlihat pada hanya tikus jantan kelompok kombinasi dosis 50 mg/kg bb menunjukkan peningkatan yang berbeda bermakna, hal ini menunjukkan adanya gangguan organ ginjal. Tetapi hal tersebut belum tentu karena pemberian sediaan uji karena hanya terjadi pada satu kelompok dosis.
28
Kadar glukosa darah tikus jantan dan betina menunjukkan peningkatan yang berbeda bermakna secara statistik pada pemberian sediaan uji dosis 1000 mg/kg bb, tikus jantan p= 0,033 dan tikus betina p= 0,010 (Lampiran G). Penyimpangan kadar glukosa darah dari normal dapat diakibatkan perubahan kecepatan oksidasi glukosa. Kadar glukosa darah naik akibat dari pengaruh glukagon dan adrenalin melalui pembebasan glukosa dari cadangan. Pembebasan glukagon dan adrenalin dikontrol oleh hipotalamus. Terjadinya kenaikan glukosa darah pada tikus jantan dan betina pada pemberian sediaan uji dosis tinggi kombinasi menunjukkan adanya ganguan penganturan gula darah. Kadar total protein darah tikus jantan menunjukkan kadar yang setara dengan kelompok kontrol. Kadar total protein darah tikus betina menunjukkan kadar yang cenderung meningkat dibanding kelompok kontrol. Tetapi hanya pada dosis 400 mg/kg bb yang menunjukkan perbedaan bermakna ( p= 0,020). Profil kolesterol darah (trigliserida, kolesterol total, HDL dan LDL) tikus jantan dan betina menunjukkan profil yang setara dengan kelompok kontrol. Tetapi hanya pada kolesterol HDL tikus betina kelompok dosis 1000 mg/kg bb menunjukkan peningkatan yang berbeda bermakna dibanding kelompok kontrol (p= 0,019). Pada pengamatan makroskopik organ, setelah hewan uji dibedah, diisolasi beberapa organ yaitu hati, limpa, ginjal, kelenjar adrenal, jantung, paru-paru, pankreas, otak, testes dan vesika seminalis (jantan), uterus dan ovarium (betina), serta lambung. Masing-masing organ diamati keadaannya dan ditimbang, organ yang berpasangan ditimbang bersama (Lampiran H). Pada hasil pengamatan tidak menunjukkan adanya kelainan organ secara makroskopik, juga tidak ditemukan terjadinya tukak dilambung hewan uji. Pengamatan secara mikroskopik dengan histologi organ tertentu dilakukan untuk mengetahui hubungan antara gejala yang terjadi dengan struktur organ yang mengalami paparan senyawa uji. Dilakukan pemeriksaan histologi terhadap organ hati, limpa, ginjal, kelenjar adrenal, jantung, paru-paru, otak, testes dan vesika seminalis (jantan), uterus dan ovarium (betina). Pada pemeriksaaan histologi hati kelompok hewan uji kombinasi dosis 1000 mg/kg bb paling banyak mengalami degenerasi sel hati hal ini menunjukkan
29
pemberian sediaan uji dosis tinggi dapat merusak sel hati lebih banyak. Pada kelompok dosis kombinasi 50 mg/kg bb ditemukan adanya peningkatan yang cukup tinggi jumlah sel kupffer dibanding kontrol. Sel kupffer merupakan sel makrofag fagositik bentuk fagosit mononukleus, peningkatan jumlah sel ini kemungkinan karena adanya sifat imunostimulan.
(1)
(2)
(5) (4)
(3)
Gambar 4.7 Histologi hati tikus jantan setelah pemberian kombinasi jahe gajah-mengkudu 50 mg/kg bb selama 90 hari. Keterangan : (1)= vena sentralis, (2)= hepatosit, (3)= endotel sinusoid, (4)= sinusoid, (5)= sel Kupffer.
30
Pada pemeriksaan histologi ginjal ditemukan degenerasi sel tubulus dan penebalan kapiler darah pada glomerulus tetapi tidak ditemukan perbedaan mencolok dengan kelompok kontrol.
(2)
(3)
(1)
(4)
Gambar 4.9 Histologi ginjal tikus jantan satelit kontrol. Keterangan: (1)= glomerulus, (2)= ruang Bowman, (3)= kapsula Bowman pars parietalis, (4)= tubulus.
Pada pemeriksaan histologi limpa, ditemukan adanya pelebaran pulpa putih pada semua kelompok hewan uji dibanding kontrol. Pelebaran pulpa putih paling besar terdapat pada kelompok uji kombinasi dosis 50 mg/kg bb juga ditemukan jumlah sel megakariosit paling banyak. Pulpa putih merupakan jaringan limfoid yang menyelubungi arteri sentralis terutama adalah limfosit T dan membentuk selubung limfatik periarteri. Megakariosit berhubungan dengan kemampuannya dalam regenerasi sel-sel darah (ekstramedulari hematopoiesis).
31
(3) (2) (1)
Gambar 4.11 Histologi limpa tikus jantan setelah pemberian kombinasi jahe gajah-mengkudu 50 mg/kg bb selama 90 hari. Keterangan : (1)= arteri folikularis / arteri (2) sentralis, (2)= folikel pulpa putih / limfonodulus, (3)= folikel pulpa merah. (1) Pemeriksaan histologi paru-paru, jantung, kelenjar adrenal, otak, testes dan vesika seminalis (jantan), uterus dan ovarium (betina) tidak ditemukan perbedaan mencolok pada hewan kelompok uji dan kelompok kontrol.
32
V
SIMPULAN DAN SARAN
5.1
Simpulan Ekstrak etanol buah mengkudu (Morinda citrifolia Linn.) dan rimpang jahe
gajah (Zingiber officinale Rosc.) tunggal pada dosis masing-masing 50 mg/kgbb serta kombinasinya dengan perbandingan (1:1) dengan dosis 50, 400, dan 1000 mg/kg bb pada tikus Wistar tidak menyebabkan toksisitas berarti, terlihat dengan tidak adanya perbedaan bermakna kelompok hewan yang diberi sediaan uji dibanding kelompok kontrol pada perilaku, perkembangan bobot badan, parameter darah, indeks dan makroskopik organ. Pada organ hati dan ginjal tidak ditemukan toksisitas berarti terlihat pada pemeriksaan kadar biokimia darah yang meliputi
SGOT, SGPT, HDL, LDL,
kolesterol total, protein total, albumin, dan trigliserida, juga kreatinin dan BUN. Pada pengamatan histologi organ hati ditemukan adanya peningkatan yang cukup tinggi jumlah sel kupffer pada kelompok uji kombinasi dosis 50 mg/kg bb. Pada limpa ditemukan adanya pelebaran pulpa putih pada semua kelompok dosis dibanding kontrol dan pelebaran yang paling besar terdapat pada kelompok uji kombinasi dosis 50 mg/kg bb. Hal ini terjadi kemungkinan karena ada efek imunostimulan. 5.2
Saran Pada penelitian selanjutnya dapat dilakukan uji toksisitas kronis yang dapat
mengevaluasi sediaan uji lebih lama sehingga dapat diambil kesimpulan yang lebih baik, juga dilakukan evaluasi mikroskopik dan histologi organ yang lebih mendalam dengan meneliti lebih banyak organ dari tikus percobaan yang lebih banyak. Setelah dilakukan pengujian toksisitas subkronik ini dan dihasilkan data bahwa kombinasi mengkudu dan jahe gajah tidak menyebabkan toksisitas berarti, maka penelitian dapat dilanjutkan dengan uji klinik pada manusia sehingga dihasilkan komposisi obat yang tepat dan dapat berguna bagi kehidupan manusia.
32
35
LAMPIRAN A KARAKTERISTIK TANAMAN UJI
a
b
c
Gambar 1.1 (A) Makroskopik daun (a), bunga (b), dan pohon (c) tumbuhan mengkudu.
Gambar 1.1 (B) Makroskopik buah mengkudu
a
b
c
Gambar 1.2 Makroskopik varietas jahe, emprit (a), gajah (b), dan merah (c).
35
50
LAMPIRAN I HASIL PENGAMATAN HISTOLOGI ORGAN
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
(7)
(8)
Gambar 4.8 Histologi hati tikus jantan kontrol (1), jahe gajah 50 mg/kg bb (2), mengkudu 50 mg/kg bb (3), jahe gajah-mengkudu 50 mg/kg bb (4), jahe gajah-mengkudu 400 mg/kg bb (5), jahe gajah-mengkudu 1000 mg/kg bb (6), satelit kontrol (7), satelit jahe gajah-mengkudu 1000 mg/kg bb (8), setelah pemberian sediaan uji.
51 LAMPIRAN I (lanjutan) HASIL PENGAMATAN HISTOLOGI ORGAN
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
(7)
(8)
Gambar 4.10 Histologi ginjal tikus betina kontrol (1), jahe gajah 50 mg/kg bb (2), mengkudu 50 mg/kg bb (3), jahe gajah-mengkudu 50 mg/kg bb (4), jahe gajahmengkudu 400 mg/kg bb (5), jahe gajah-mengkudu 1000 mg/kg bb (6), satelit kontrol (7), satelit jahe gajah - mengkudu 1000 mg/kg bb(8), setelah pemberian sediaan uji.
52
LAMPIRAN I (lanjutan) HASIL PENGAMATAN HISTOLOGI ORGAN
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
(7)
(8)
Gambar 4.12 Histologi limpa tikus jantan kontrol (1), jahe gajah 50 mg/kg bb (2), mengkudu 50 mg/kg bb (3), jahe gajah-mengkudu 50 mg/kg bb (4), jahe gajah-mengkudu 400 mg/kg bb (5), jahe gajah-mengkudu 1000 mg/kg bb (6), satelit kontrol (7), satelit jahe gajah-mengkudu 1000 mg/kg bb (8), setelah pemberian sediaan uji.
53
LAMPIRAN I (lanjutan) HASIL PENGAMATAN HISTOLOGI ORGAN
(1)
(2)
(3)
Gambar 4.13 Histologi jantung tikus betina setelah pemberian kombinasi jahe gajah-mengkudu 50 mg/kg bb selama 90 hari. Keterangan: (1)=serat otot jantung, (2)= nukleus (3)= diskus interkalaris.
(3)
(1)
(1) (2)
Gambar 4.14 Histologi paru-paru tikus betina satelit kontrol. Keterangan: (1)= lumen alveolus, (2)= sel-sel alveolus (sel septal), (3)= septum interalveolar.
54
LAMPIRAN I (lanjutan) HASIL PENGAMATAN HISTOLOGI ORGAN
(2)
(1) Gambar 4.15 Histologi testes tikus jantan setelah pemberian kombinasi jahe gajah-mengkudu 1000 mg/kg bb selama 90 hari. Keterangan: (1)= sel interstisial, (2)= tubulus seminiferus.
Gambar 4.16 Histologi vesika seminalis tikus jantan setelah pemberian kombinasi jahe gajah-mengkudu 400 mg/kg bb selama 90 hari.
55
LAMPIRAN I (lanjutan) HASIL PENGAMATAN HISTOLOGI ORGAN
(4)
(2) (3) (1)
Gambar 4.17 Histologi ovarium tikus betina setelah pemberian kombinasi jahe gajah-mengkudu 400 mg/kg bb selama 90 hari. Keterangan: (1)= folikel ovarium, (2)= oosit, (3)= antrum, (4)= sel-sel granulosa.
(1) (2)
Gambar 4.18 Histologi uterus tikus betina setelah pemberian kombinasi jahe gajah-mengkudu 50 mg/kg bb selama 90 hari. Keterangan: (1)= endometrium, (2)= kelenjar berkelok dan bergelombang.
56
LAMPIRAN I (lanjutan) HASIL PENGAMATAN HISTOLOGI ORGAN
(A)
Gambar 4.19 Histologi otak tikus betina setelah pemberian kombinasi jahe gajah-mengkudu 1000 mg/kg bb selama 90 hari. Keterangan: (A)= Neuron.
Gambar 4.20 Histologi kelenjar adrenal tikus jantan setelah pemberian kombinasi jahe gajah-mengkudu 400 mg/kg bb selama 90 hari.
LAMPIRAN D HASIL PENGAMATAN BOBOT BADAN Tabel 4.5: Perkembangan Bobot Badan Tikus Jantan Bobot Badan Tikus (gram) Kelompok Jantan
H0
H7
H14
H21
H28
H35
H42
H49
H56
H63
H70
H77
H84
H91
167,7 (28,9) 167,3 (40,9) 165,3 (24,3)
180,1 (32,7) 178,1 (48,9) 177,1 (25,6)
185,2 (32,2) 184,4 (49,7) 185,1 (29,4)
189,9 (32,4) 190,9 (50,5) 193,3 (31,9)
193,1 (33,5) 192,1 (52,3) 198,5 (33,0)
191,7 (38,8) 193,6 (50,9) 203,6 (30,5)
199,1 (35,8) 194,6 (50,2) 208,4 (33,3)
198,2 (31,3) 195,8 (46,1) 208,4 (29,4)
207,7 (35,1) 200,6 (47,9) 223,8 (30,6)
209,7 (34,6) 198,3 (46,1) 224,8 (35,0)
215,9 (33,3) 212,6 (46,0) 231,4 (36,4)
222,3 (39,3) 220,2 (51,1) 237,5 (34,3)
219,4 (40,2) 218,4 (47,6) 234,4 (33,5)
215,1 (44,2) 214,9 (42,3) 231,9 (38,8)
172,4 (28,7)
179,5 (28,6)
174,1 (50,2)
188,2 (26,7)
192,1 (32,1)
194,5 (30,0)
194,1 (24,8)
191,9 (17,3)
204,0 (23,3)
207,2 (26,7)
213,5 (28,8)
220,5 (29,1)
219,2 (29,1)
217,3 (30,5)
-
165,2 (34,3)
172,8 (34,6)
182,7 (38,0)
187,4 (38,3)
189,1 (36,3)
192,2 (35,3)
194,9 (37,1)
195,5 (31,3)
206,3 (32,6)
204,3 (28,8)
212,3 (34,0)
220,8 (37,7)
219,8 (38,4)
218,2 (38,6)
-
175,0 (39,5)
187,6 (42,3)
181,1 (62,9)
196,2 (40,7)
200,5 (42,8)
204,5 (42,5)
205,2 (40,2)
209,9 (39,8)
223,5 (39,7)
219,9 (40,5)
233,4 (41,2)
238,6 (39,5)
245,8 (42,3)
232,3 (40,5)
-
Satelit Kontrol
163,6 (23,0)
174,2 (24,3)
182,4 (22,7)
188,0 (19,7)
192,0 (18,9)
194,8 (18,2)
197,0 (23,0)
197,8 (14,3)
209,0 (16,0)
212,6 (14,2)
218,8 (16,9)
224.6 (16,7)
226,6 (20,7)
236,0 (18,2)
238,6 (17,2)
Satelit Jahe GajahMengkudu 1000 mg/kg bb
169,2 (46,2)
180,0 (45,2)
182,8 (46,1)
187,4 (42,4)
188,6 (44,3)
195,2 (39,1)
194,2 (35,4)
197,0 (30,6)
211,6 (31,5)
212,8 (37,7)
218,8 (32,8)
223,6 (34,6)
224,6 (29,0)
229,2 (32,9)
250,4 (31,5)
Kontrol Jahe Gajah 50 mg/kg bb Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe GajahMengkudu 50 mg/kg bb Jahe GajahMengkudu 400 mg/kg bb Jahe GajahMengkudu 1000 mg/kg bb
Keterangan : n = 10, n satelit = 5, H = Waktu pengujian (hari), SD = Standar deviasi (ditulis di dalam kurung)
39
H121 -
LAMPIRAN D (lanjutan) HASIL PENGAMATAN BOBOT BADAN Tabel 4.6: Perkembangan Bobot Badan Tikus Betina Bobot Badan Tikus (gram) Kelompok Betina Kontrol Jahe Gajah 50 mg/kg bb Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 400 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb Satelit Kontrol Satelit Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb Keterangan :
H0
H7
H14
H21
H28
H35
H42
H49
H56
H63
H70
H77
H84
H91
123,7 (13,1) 125,8 (12,5) 134,1 (19,1) 128,3 (15,6) 126,0 (13,2) 131,4 (21,1) 114,0 (7,7)
133,9 (17,1) 135,5 (16,4) 145,4 (23,2) 135,9 (15,4) 135,2 (14,7) 138,7 (21,7) 122,8 (5,8)
137,9 (18,8) 141,4 (17,1) 151,2 (22,7) 140,9 (16,6) 141,1 (15,1) 145,1 (20,6) 128,0 (9,1)
144,1 (17,8) 146,5 (19,9) 158,4 (23,2) 146,0 (15,3) 148,8 (14,9) 149,9 (18,8) 133,6 (11,1)
147,7 (17,7) 149,9 (23,4) 161,4 (22,5) 148,0 (16,5) 151,5 (17,9) 154,1 (21,8) 136,4 (8,3)
150,6 (19,3) 150,9 (23,2) 163,4 (24,2) 150,8 (16,5) 152,4 (16,4) 155,5 (22,9) 140,4 (14,1)
151,8 (20,2) 153,8 (21,5) 161,1 (43,4) 153,7 (16,0) 154,5 (15,8) 155,7 (21,6) 139,0 (14,8)
155,0 (20,1) 155,2 (25,4) 166,9 (18,7) 155,2 (14,4) 156,2 (18,2) 159,5 (20,4) 141,0 (12,2)
159,8 (21,8) 156,7 (25,6) 173,7 (21,7) 160,4 (16,5) 162,5 (21,5) 166,1 (23,5) 147,4 (15,5)
163,7 (24,7) 161,7 (29,2) 174,1 (25,0) 160,9 (16,5) 164,5 (19,3) 165,9 (23,4) 151,0 (23,4)
166,5 (23,0) 164,4 (28,2) 176,7 (24,1) 166,3 (16,5) 167,8 (16,1) 170,5 (22,5) 155,6 (19,3)
169,2 (22,5) 165,9 (27,2) 180,2 (24,4) 167,4 (17,2) 168,8 (16,3) 170,7 (20,8) 157,8 (20,9)
170,1 (22,9) 167,1 (28,9) 181,4 (25,3) 170,2 (17,7) 168,5 (13,8) 173,6 (20,2) 158,0 (20,7)
168,7 (23,6) 169,4 (31,6) 181,5 (24,7) 171,5 (20,1) 168,5 (18,4) 172,3 (24,0) 159,8 (25,7)
159,8 (25,7)
129,8 (27,3)
138,0 (27,9)
142,0 (28,4)
146,4 (24,6)
150,8 (25,3)
152,8 (30,0)
148,2 (27,4)
153,8 (25,7)
160,0 (27,6)
159,8 (27,7)
166,6 (27,2)
166,8 (23,3)
170,6 (18,7)
167,2 (28,6)
172,2 (32,0)
n = 10, n satelit = 5, H = Waktu pengujian (hari), SD = Standar deviasi (ditulis di dalam kurung)
40
H121 -
Tabel 3.6 : Peningkatan Bobot BadanTikus Jantan setelah Pemberian Sediaan Uji Kelompok Kontrol Jahe Gajah 50 mg/kg bb Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 400 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb
Peningkatan Bobot Badan H91 (g)
P
Peningkatan Bobot Badan H121 /Satelit (g)
47,4 ± 28,9 47,6 ± 13,4 66,6 ± 27,1
0,680 0,054
75,0 ± 24,1 -
44,9 ± 29,6
0,923
-
57,3 ± 24,3
0,468
-
53,0 ± 28,1
0,055*
81,2 ± 29,1
Keterangan : n = 10, n satelit = 5, P : probabilitas, terhadap jahe gajah -mengkudu 1000 mg/kg bb.
P
P
0,329 0,350*
< 0,05 dinyatakan bermakna, * : dibandingkan
Tabel 3.7 : Peningkatan Bobot BadanTikus Betina setelah Pemberian Sediaan Uji Kelompok Kontrol Jahe Gajah 50 mg/kg bb Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 400 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb
Peningkatan Bobot Badan H91(g) 45,0 ± 19,7 43,6 ± 21,5 47,4 ± 17,0
0,425 0,918
Peningkatan Bobot Badan H121 /Satelit (g) 47,4 ± 26,5 -
43,2 ± 22,2
0,471
-
42,5 ± 15,6
0,520
-
40,9 ± 16,9
0,553*
42,4 ± 19,5
41
P
P
0,712 0,825*
Keterangan : n = 10, n satelit = 5, P : probabilitas, P < 0,05 dinyatakan bermakna, * : dibandingkan terhadap jahe gajah -mengkudu 1000 mg/kg bb.
Tabel 3.8 : Pengamatan Bobot Jenis dan pH Urin Kelompok Kontrol Jahe Gajah 50 mg/kg bb Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 400 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb Satelit Kontrol Satelit Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb
Urin
Jenis Kelamin
Bobot Jenis (g/ml)
P
pH
P
Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina
1,0812 ± 0,0415 1,1153 ± 0,0518 1,1617 ± 0,2316 1,1360 ± 0,1384 1,0975 ± 0,1016 1,0864 ± 0,0314 1,1043 ± 0,0519 1,0912 ± 0,0244 1,1127 ± 0,0582 1,1026 ± 0,0834 1,1198 ± 0,0565 1,1271 ± 0,0293 1,1133 ± 0,0355 1,1052 ± 0,0236 1,1200 ± 0,0710 1,0924 ± 0,0378
0,160 0,547 0,774 0,390 0,684 0,472 0,579 0,705 0,498 0,726 0,630 0,813 0,473* 0,972*
7,22 ± 0,93 7,35 ± 0,96 7,06 ± 0,89 7,20 ± 1,17 7,57 ± 1,00 7,33 ± 1,31 7,00 ± 1,07 7,16 ± 1,01 7,32 ± 1,13 7,37 ± 0,95 7,00 ± 0,47 7,20 ± 0,92 7,40 ± 0,55 7,25 ± 0,50 7,20 ± 0,45 7,20 ± 0,45
0,730 0,767 0,437 0,962 0,637 0,706 0,827 0,976 0,641 0,760 0,732 0,872 0,685 * 0,827 *
Keterangan : n = 10, n satelit = 5, P = probabilitas, terhadap jahe gajah -mengkudu 1000 mg/kg bb.
42
P
< 0,05 dinyatakan bermakna, * : dibandingkan
LAMPIRAN F HASIL PENGAMATAN PARAMETER DARAH
Tabel 4.9 : Parameter Darah Tikus Jantan Setelah Pemberian Ekstrak Buah Mengkudu dan Rimpang Jahe Gajah
Kelompok Perlakuan
n
Hematokrit (%)
P
Hemoglobin (g/dl)
P
Leukosit (x103/mm3)
P
Erithrosit (x106/mm3)
Trombosit (x105/mm3)
P
Kontrol Jahe Gajah 50 mg/kg bb Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 400 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb Satelit Kontrol Satelit Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb
10
51,87 ± 2,42
-
14,16 ± 1,56
-
6,49 ± 2,86
-
5,76 ± 1,88
6,36 ± 3,63
-
10
53,19 ± 6,62
0,507
14,10 ± 1,98
0,942
6,26 ± 3,20
0,963
5,79 ± 2,57
5,75 ± 1,96
0,883
10
51,24 ± 3,84
0,753
13,52 ± 1,99
0,441
16,21 ± 22,99
0,055
5,57 ± 1,61
4,91 ± 1,53
0,729
10
52,85 ± 5,29
0,622
13,92 ± 1,83
0,772
7,04 ± 2,93
0,913
5,07 ± 2,37
0,472
10,74 ± 11,04
0,244
10
50,89 ± 4,88
0,624
13,90 ± 2,02
0,754
17,60 ± 16,28
0,029
4,08 ± 2,02
0,083
5,25 ± 2,28
0,791
10
52,28 ± 2,36
0,835
14,58 ± 1,74
0,612
9,09 ± 3,82
0,604
5,48 ± 2,45
0,770
10,74 ± 11,04
0,244
5
47,92 ± 3,93
0,109
15,08 ± 1,10
0,366
8,16 ± 3,32
0,785
6,61 ± 1,43
0,462
7,24 ± 3,09
0,841
5
50,04 ± 3,87
0,455*
16,14 ± 2,18
0,054*
12,75 ± 5,31
0,309*
5,95 ± 1,90
0,869*
6,88 ± 2,31
0,906*
P
0,971 0,845
Keterangan : P = probabilitas, P < 0,05 dinyatakan bermakna, * : dibandingkan terhadap jahe gajah -mengkudu 1000 mg/kg bb.
43
LAMPIRAN F (lanjutan) HASIL PENGAMATAN PARAMETER DARAH
Tabel 4.10 : Parameter Darah Tikus Betina Setelah Pemberian Ekstrak Buah Mengkudu dan Rimpang Jahe Gajah Kelompok Perlakuan
n
Hematokrit (%)
P
Hemoglobin (g/dl)
P
Leukosit (x103/mm3)
P
Erithrosit (x106/mm3)
Kontrol Jahe gajah 50 mg/kg bb Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 400 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb Satelit Kontrol Satelit Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb
10
53,59 ± 5,86
-
13,90 ± 1,70
-
8,96 ± 3,98
-
6,40 ± 3,30
10
53,34 ± 8,71
0,923
14,52 ± 2,19
0,423
8,19 ± 6,52
0,712
6,05 ± 3,48
10
50,93 ± 6,51
0,311
14,86 ± 1,85
0,217
8,62 ± 5,77
0,870
6,44 ± 3,48
10
52,54 ± 5,37
0,688
14,52 ± 1,61
0,423
8,44 ± 2,62
0,802
6,17 ± 2,97
10
54,32 ± 4,10
0,778
13,52 ± 1,67
0,623
9,17 ± 4,73
0,922
10
51,55 ± 3,94
0,437
14,20 ± 1,81
0,698
8,86 ± 4,48
5
45,95 ± 3,99
0,030
13,70 ± 0,95
0,845
5
49,88 ± 4,78
0,249*
14,84 ± 0,26
0,322*
Trombosit (x105/mm3)
P
5,98 ± 1,85
-
4,98 ± 1,71
0,618
8,92 ± 6,64
0,150
0,855
4,32 ± 1,64
0,410
5,61 ± 2,05
0,529
6,90 ± 4,13
0,650
0,962
4,05 ± 2,05
0,064
8,63 ± 3,48
0,146
5,53 ± 1,84
0,219
6,09 ± 0,81
0,852
7,35 ± 3,09
0,544
7,51 ± 3,57
0,573*
7,34 ± 1,04
0,543*
6,31 ± 0,75
0,878*
P
0,780 0,975
Keterangan : P = probabilitas, P < 0,05 dinyatakan bermakna, * : dibandingkan terhadap jahe gajah -mengkudu 1000 mg/kg bb.
44
LAMPIRAN G HASIL PENGAMATAN BIOKIMIA DARAH Tabel 4.11 : Kadar SGPT dan SGOT Tikus Jantan
10 10 10
Kadar SGPT P (U/L) 29,10 ± 14,55 0,102 22,30 ± 8,30 0,884 29,70 ± 9,38
Kadar SGOT P (U/L) 82,70 ± 25,82 0,419 74,90 ± 21,39 1,000 82,70 ± 15,59
10
18,90 ± 8,24
0,015
79,10 ± 24,44
0,708
10
20,60 ± 7,09
0,042
90,60 ± 26,52
0,413
10
21,00 ± 8,42
0,052
69,50 ± 17,84
0,173
5
19,40 ± 2,51
0,057
79,40 ± 15,71
0,779
5
24,60 ± 6,07
0,476*
73,00 ± 12,19
0,766*
Kelompok
n
Kontrol Jahe Gajah 50 mg/kg bb Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 400 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb Satelit Kontrol Satelit Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb
Tabel 4.12 : Kadar SGPT dan SGOT Tikus Betina
10 10 10
Kadar SGPT P (U/L) 16,20 ± 4,64 0,750 17,00 ± 5,87 0,020 22,20 ± 8,16
Kadar SGOT P (U/L) 84,90 ± 12,10 0,452 89,80 ± 15,20 85,20 ± 16,16 0,963
10
17,80 ± 3,68
0,525
82,40 ± 14,38
0,701
10
17,90 ± 5,74
0,500
82,30 ± 15,27
0,690
10
19,10 ± 5,36
0,251
74,20 ± 14,54
0,104
5
14,00 ± 3,16
0,509
83,50 ± 16,26
0,871
5
15,00 ± 5,05
0,186*
62,20 ± 9,98
0,136*
Kelompok
n
Kontrol Jahe Gajah 50 mg/kg bb Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 400 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb Satelit Kontrol Satelit Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb
Keterangan : n = Jumlah Hewan, U/l = Unit per Liter, P< 0,05 dinyatakan bermakna, * : dibandingkan dengan kelompok jahe gajah-mengkudu 1000 mg/kg bb, SGPT = serum glutamat piruvat transaminase, SGOT = serum glutamat oksaloasetat transaminase.
45
LAMPIRAN G (lanjutan) HASIL PENGAMATAN BIOKIMIA DARAH Tabel 4.14 : Pengamatan Profil Lipoprotein Kelompok
Jenis Kelamin
Kolesterol (mg/dl)
Jantan Kontrol Betina Jahe Gajah 50 mg/kg bb
Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe GajahMengkudu 50 mg/kg bb Jahe GajahMengkudu 400 mg/kgbb Jahe GajahMengkudu 1000 mg/kg bb
Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina
68,85 (24,11) 73,79 (10,12) 64,34 (25,71) 70,24 (15,95) 71,42 (30,91) 75,27 (11,63) 61,66 (20,06) 85,82 (13,12) 65,69 (20,77) 68,82 (13,11) 59,85 (20,61) 82,19 (22,12)
P
0,664 0,603 0,805 0,829 0,489 0,081 0,761 0,415 0,388 0,220
HDL (mg/dl)
17,32 (5,81) 19,39 (5,43) 16,78 (5,63) 20,12 (8,.35) 16,51 (7,71) 20,47 (9,55) 18,17 (11,71) 24,90 (5,91) 18,25 (11,04) 16,97 (6,59) 16,26 (8,53) 25,41 (7,71)
LDL P
0,885 0,851 0,829 0,745 0,820 0,099 0,804 0,463 0,776 0,019
(mg/dl)
36,34 (20,03) 40,96 (9,14) 33,26 (19,82) 35,56 (11,45) 43,99 (32,47) 40,12 (13,61) 33,93 (23,19) 43,13 (17,71) 35,12 (24,39) 36,61 (11,84) 33,21 (23,31) 44,87 (19,78)
Total Protein (g/dl)
P
0,765 0,401 0,472 0,895 0,820 0,734 0,908 0,498 0,768 0,552
P
P
7,13 (1,35) 7,26 (1,20) 7,90 (1,42) 8,23 (1,44) 8,42 (2,05) 8,23 (2,16) 6,83 (1,18) 8,81 (2,48) 8,54 (2,32) 9,43 (2,83) 7,61 (1,32) 8,23 (1,42)
P
0,362 0,288 0,132 0,286 0,727 0,092 0,098 0,020 0,572 0,288
Glukosa (mg/dl)
98,24 (39,55) 85,47 (43,70) 114,98 (31,56) 79,17 (46,43) 102,84 (57,83) 91,15 (40,31) 109,10 (30,41) 101,37 (48,59) 97,51 (51,91) 90,61 (32,96) 138,00 (19,54) 135,62 (38,43)
BUN P
0,362 0,732 0,802 0,758 0,554 0,388 0,968 0,780 0,033 0,010
(mg/dl)
25,00 (11,19) 25,93 (5,32) 22,41 (4,70) 28,50 (5,45) 22,36 (3,47) 26,52 (5,23) 20,04 (2,92) 26,30 (6,50) 22,26 (3,16) 26,13 (3,96) 22,84 (3,16) 25,79 (3,48)
Trigliserida P
0,275 0,279 0,265 0,805 0,039 0,877 0,248 0,935 0,362 0,952
(mg/dl)
75,97 (25,14) 65,64 (17,37) 85,89 (19,49) 73,31 (23,86) 80,31 (32,43) 73,41 (17,32) 73,56 (18,18) 78,91 (34,04) 82,25 (26,50) 73,53 (19,11) 79,06 (26,86) 71,70 (17,19)
P
0,379 0,419 0,700 0,413 0,830 0,164 0,577 0,406 0,784 0,523
Keterangan : SD = Standar deviasi (ditulis di dalam kurung), = probabilitas, < 0,05 dinyatakan bermakna, HDL = high density lipoprotein, LDL = low density lipoprotein, BUN = blood urea nitrogen.
46
LAMPIRAN G (lanjutan) HASIL PENGAMATAN BIOKIMIA DARAH Tabel 4.14 (lanjutan) : Pengamatan Profil Lipoprotein
Kelompok
Satelit Kontrol Satelit Jahe GajahMengkudu 1000 mg/kg bb
Jenis Kelamin
(mg/dl) Jantan Betina Jantan Betina
HDL
Kolesterol
57,89 (9,99) 70,74 (15,11) 67,66 (20,48) 60,84 (11,79)
P
0,390 0,732 0,540* 0,011*
(mg/dl)
10,80 (3,15) 17,21 (4,02) 12,44 (5,77) 15,28 (5,04)
LDL P
0,157 0,613 0,763* 0,017*
(mg/dl)
29,34 (10,47) 41,71 (5,44) 37,23 (17,07) 33,91 (8,24)
Total Protein P
0,574 0,928 0,898* 0,430*
(g/dl)
10,69 (4,07) 8,97 (1,78) 7,54 (1,17) 7,97 (1,07)
P
0,001 0,153 0,541* 0,262*
Glukosa (mg/dl)
110,49 (32,25) 129,76 (4,38) 128,94 (49,75) 125,81 (39,75)
BUN P
0,585 0,072 0,687* 0,669*
(mg/dl)
20,93 (2,27) 26,87 (3,52) 20,41 (1,71) 28,40 (6,55)
Trigliserida P
0,163* 0,761* 0,296* 0,869*
(mg/dl)
88,98 (32,89) 59,10 (5,53) 89,94 (6,81) 58,31 (5,45)
Keterangan : * = dibandingkan terhadap jahe gajah-mengkudu 1000 mg/kg bb, SD = Standar deviasi (ditulis di dalam kurung), P = probabilitas, P < 0,05 dinyatakan bermakna, HDL = high density lipoprotein, LDL = low density lipoprotein, BUN = blood urea nitrogen.
47
P
0,346 0,602 0,430* 0,251*
LAMPIRAN H HASIL PENGAMATAN ORGAN Tabel 4.15 : Indeks Organ Tikus Jantan Setelah Pemberian Sediaan Uji Selama 90 Hari Kelompok Uji Jantan Kontrol Jahe Gajah 50 mg/kg bb Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 400 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb Satelit Kontrol Satelit Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb
Hati
Limpa
Ginjal
2,27 (0,32) 2,32 (0,25) 2,33 (0,30) 2,36 (0,31) 2,34 (0,28) 2,49 (0,28) 2,27 (0,11)
0,19 (0,04) 0,18 (0,03) 0,21 (0,06) 0,20 (0,02) 0,21 (0,04) 0,23 (0,09) 0,24 (0,04)
0,60 (0,08) 0,59 (0,08) 0,55 (0,06) 0,58 (0,05) 0,56 (0,06) 0,60 (0,05) 0,53 (0,02)
Indeks Organ Kelenjar Jantung Paru-paru Adrenal 0,016 0,33 0,87 (0,004) (0,05) (0,28) 0,016 0,31 0,74 (0,003) (0,03) (0,16) 0,015 0,31 0,81 (0,003) (0,02) (0,30) 0,014 0,33 0,75 (0,004) (0,04) (0,25) 0,014 0,32 0,78 (0,003) (0,03) (0,23) 0,015 0,32 0,73 (0,003) (0,03) (0,28) 0,014 0,34 0,91 (0,003) (0,04) (0,20)
2,33 (0,14)
0,29 (0,17)
0,58 (0,07)
0,015 (0,003)
Keterangan : n = 10, n satelit = 5, SD = Standar deviasi (ditulis di dalam kurung).
48
0,31 (0,01)
0,60 (0,15)
Pankreas
1,34 (0,46) 1,40 (0,23) 1,24 (0,18) 1,38 (0,21) 1,23 (0,17) 1,38 (0,15) 1,19 (0,07)
Vesika Seminalis 0,32 (0,10) 0,36 (0,12) 0,35 (0,17) 0,34 (0,15) 0,33 (0,12) 0,43 (0,13) 0,36 (0,10)
1,23 (0,22)
0,40 (0,04)
0,27 (0,05)
Testes
0,24 (0,11) 0,30 (0,05) 0,30 (0,09) 0,30 (0,07) 0,31 (0,08) 0,29 (0,05) 0,26 (0,11)
LAMPIRAN H (lanjutan) HASIL PENGAMATAN ORGAN Tabel 4.16 : Indeks Organ Tikus Betina Setelah Pemberian Sediaan Uji Selama 90 Hari
Kelompok Uji Betina Kontrol Jahe Gajah 50 mg/kg bb Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 50 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 400 mg/kg bb Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb Satelit Kontrol Satelit Jahe Gajah-Mengkudu 1000 mg/kg bb
Hati
Limpa
Ginjal
2,53 (0,27) 2,67 (0,32) 2,50 (0,25) 2,56 (0,22) 2,63 (0,22) 2,71 (0,22) 2,70 (0,14)
0,30 (0,16) 0,31 (0,15) 0,28 (0,14) 0,31 (0,15) 0,29 (0,11) 0,26 (0,04) 0,23 (0,03)
0,62 (0,20) 0,56 (0,05) 0,55 (0,06) 0,59 (0,09) 0,56 (0,07) 0,59 (0,05) 0,57 (0,03)
Kelenjar Adrenal 0,025 (0,002) 0,027 (0,007) 0,024 (0,003) 0,025 (0,004) 0,026 (0,005) 0,027 (0,003) 0,030 (0,003)
2,74 (0,21)
0,32 (0,08)
0,61 (0,05)
0,025 (0,004)
Indeks Organ Jantung
Paru-paru
Ovarium
Uterus
Pankreas
0,32 (0,03) 0,34 (0,03) 0,32 (0,02) 0,34 (0,02) 0,34 (0,02) 0,37 (0,03) 0,36 (0,02)
0,74 (0,22) 0,94 (0,22) 0,88 (0,29) 0,62 (0,23) 0,90 (0,16) 0,77 (0,31) 0,91 (0,20)
0,059 (0,007) 0,055 (0,007) 0,070 (0,061) 0,059 (0,011) 0,058 (0,015) 0,054 (0,009) 0,035 (0,009)
0,23 (0,16) 0,23 (0,06) 0,17 (0,06) 0,22 (0,08) 0,19 (0,05) 0,19 (0,07) 0,29 (0,19)
0,38 (0,15) 0,37 (0,11) 0,38 (0,10) 0,32 (0,13) 0,37 (0,06) 0,40 (0,09) 0,29 (0,09)
0,36 (0,03)
0,76 (0,06)
0,038 (0,010)
0,23 (0,08)
0,30 (0,13)
Keterangan : n = 10, n satelit = 5, SD = Standar deviasi (ditulis di dalam kurung).
49
LAMPIRAN H (lanjutan) HASIL PENGAMATAN ORGAN Tabel 4.17 : Evaluasi Statistik Indeks Organ Tikus
Jenis Kelamin
Jantan
Betina
Probabilitas (P) Indeks Organ Kelompok : Organ
Jahe Gajah 50 mg/kg bb
Mengkudu 50 mg/kg bb
Hati Limpa Ginjal Kel. Adrenal Jantung Paru-paru Testes Vesika seminalis Hati Limpa Ginjal Kel. Adrenal Jantung Paru-paru Ovarium Uterus
0,657 0,730 0,832 0,944 0,359 0,225 0,593 0,568 0,208 0,887 0,168 0,262 0,178 0,066 0,690 0,963
0,589 0,629 0,093 0,328 0,295 0,575 0,371 0,678 0,798 0,804 0,125 0,592 0,936 0,173 0,358 0,188
Jahe Gajah Mengkudu 50 mg/kg bb 0,458 0,918 0,595 0,295 0,948 0,296 0,724 0,822 0,770 0,901 0,432 0,957 0,204 0,230 0,972 0,798
Jahe Gajah Mengkudu 400 mg/kg bb 0,561 0,513 0,218 0,264 0,792 0,432 0,320 0,862 0,388 0,887 0,175 0,453 0,234 0,136 0,929 0,308
Jahe Gajah Mengkudu 1000 mg/kg bb 0,070 0,257 1,000 0,441 0,742 0,211 0,751 0,067 0,104 0,535 0,446 0,201 0,001 0,803 0,620 0,354
Keterangan : P = probabilitas, P<0,05 dinyatakan bermakna, * = dibandingkan terhadap jahe gajah-mengkudu 1000 mg/kg bb.
50
Satelit Kontrol 0,984 0,189 0,072 0,191 0,421 0,745 0,256 0,562 0,237 0,381 0,398 0,036 0,023 0,230 0,113 0,314
Satelit Jahe GajahMengkudu 1000 mg/kg bb* 0,072 0,392 0,967 1,000 0,742 0,227 0,201 0,246 0,624 0,357 0,669 0,201 0,557 0,934 0,198 0,354
51
52