18.11.2011
23.11.2011
prezentace OKMP
1
Zasílání vzorků na mikrobiologické vyšetření
Zásady,chyby a využití MVDr.Petr Ježek
Organizační členění OKMP. OKMP MVDr.Petr Ježek
ATB středisko MUDr.Romana Filová
Lab.klinická a močové infekce l.1572 Lab.vzdušných a střevních nákaz l.1538 Laboratoř TBC a mykobakterióz l.1633 Parazitlogie l.1633 Serologická laboratoř l.1523 Lab.molekulární bakteriologie l.1523
23.11.2011
prezentace OKMP
3
Obecné zásady
Výsledek mikrobiologického vyšetření závisí z velké části na kvalitě odběru materiálu!!! Dodržení zásad aseptického odběru Odběr z místa předpokládaného výskytu patogenů Použít vhodnou odběrovou soupravu Nekontaminovat vnější povrch a žádanku-pevně uzavírat Žádanku ukládat mimo zasílaný vzorek Správně a úplně vyplnit žádanku Včas dodat do laboratoře
23.11.2011
prezentace OKMP
4
Klasická bakteriologie
Anaeroby x aeroby Při odběru a transportu používat metody zajišťující anaerobní prostředí Na anaeroby pokud lze,vždy tekutý materiál! Označit na průvodce žádost o anaerobní kultivaci Vyplnit nejen hlavní dg, ale i dg související s důvodem kultivace Vyplňovat vždy ATB terapii Včas dodat do laboratoře 23.11.2011
prezentace OKMP
Aktinomyces israelii
Původce aktinomykózy
5
Močové infekce
URIKULT
Poučit pacienta o odběru Možno uchovávat i při pokojové teplote Nepoužívat expirovanésoupravy-vyschlé kult. půdy
Odběr do zkumavky
Méně komfortní způsob odběru Po odběru co nejdříve dodat do laboratoře-kvantita! Nutno uchovávat při 4°C-jen nouzově
23.11.2011
prezentace OKMP
6
Vzdušné nákazy
VK+VN není adekvátní vyšetření sinusitidy STPN,HAIN,MOCA-nejsou uznávanými primárními patogeny v těchto lokalitách STAU nosičství Při včasném dodání není nutná transportní půda
Sterptococcus pyogenes
Staphylococcus aureus
23.11.2011
prezentace OKMP
7
Střevní nákazy
Vždy na transportní půdě nebo vlhký výtěrový tampon! Stolice na susp. toxigenní inf. nutno označit na průvodce Kultivaci na yersinie nutno označit na žádance K vyš. na virologii odebírat dostatečné množství stolice cca 2ccm
Salmonella enteritidis
23.11.2011
prezentace OKMP
8
Parazitologie
Vyšetření stolice není určeno k vyšetření enterobiózu ani taeniázu Na stěry dle Grahama používat výhradně transparentní lepící pásky Vždy uvádět cestovatelskou anamnézu Ascaris lumbricoides-škrkavka
23.11.2011
prezentace OKMP
9
TBC a mykobakteriózy Mykobakterióza
1. 2. 3. 1. 2. 3. 4. 5.
Odebírat dostatečné množství materiálu (+ 3 sputa) Řádně označit požadované vyšetřeníBK nebo TBC kultivace Jiné mykobakteriózy Infekce akvaristů - M.marinum Infekce - M.kansasii Lymfadenitidy dětí - M.hemophilum Kdy pamatovat na mykobakteriózy: Běžná ATB léčba nezabírá Imunokompromitovaní pacienti Aplikace kortikosteriodů-dlouhodobě Anamnéza-akvarista,rybář…. Kožní projevy bez efektu ATB léčby – i imunokompetentní pacient
Infekce akvaristy M.marinum
23.11.2011
prezentace OKMP
10
Serologická vyšetření
Obecně:
1.
Určeno zejména pro pozdější fáze onemocnění Detekovatelné množství protilátek za 2-4týdny Dříve=zavádějící výsledky Srážlivá krev (sérum) Nekontaminovat povrch odběrové zkumavky a žádanky!
2.
3. 4. 5.
Detekce ASD
23.11.2011
prezentace OKMP
11
Nejčastější chyby v indikaci serologických vyšetření
LB:
1. 2.
Příliš časné odběry KO po léčbě-nevhodné
3.
Sazebník výkonů – WB pouze 1x ročně/pac.
H.pylori
1.
Serologie nepodá validní informaci o aktuální stavu Nevhodné jako kontrola po léčbě Vhodnější je vyšetření Ag ze stolice
2. 3.
23.11.2011
prezentace OKMP
12
Nejčastější chyby v indikaci serologických vyšetření
Chlamydiové infekce
Neznalost etiologie a patogeneze Indikovat vyš. dle klin.stavu a diagnozy pacienta Chl.pneumoniae-infekce respiračního traktu Chl.trachomatis-gynekolog.dg,STD,kloubní postižení… Chl.psittaci – pouze susp. ornitóza nebo psittakóza Nemá význam u akutních infekcí v příliš časné fázi od vzniku onemocnění – nejdříve za 14 dní! V časné fázi doporučejeme PCR
1. 2. 3.
23.11.2011
prezentace OKMP
13
Nejčastější chyby v indikaci serologických vyšetření
Herpetické viry- EBV,CMV,HSV
Často zkřížené reaktivity = problematické vyhodnocení Ovlivňují výsledky dalších serolog.vyšetření- např. EBV+,HAV+,toxoplasma+… Velké % populace = latentní infekce = IgG+ , Někteří pac. nemusí při reaktivaci vytvářet IgM=mohou uniknout serologické pozornosti V akutní fázi = doporučeno PCR
23.11.2011
prezentace OKMP
14
Nejčastější chyby v indikaci serologických vyšetření
EBV
OCH test (Ericson)=heterofilní protil.,jsou velmi specifické x jen krátkou dobu u primoinfekce! Negativní výsledek nevylučuje onemocnění EBV CMV 10% příp. mononukleózy HSV1+2 Serologie vhodná u dlouhodobých obtíží či chron. onemocnění V akutních případech do 14 dní od vzniku onemocnění je vhodnější indikovat PCR-např.sliny,gynekol.výtěry… Serologie-vhodná u případů,kde nelze odebrat adekvátní vzorek
23.11.2011
prezentace OKMP
15
Serologické metody a jejich praktické využití Pomalá aglutinace: Nejjednodušší serologická metoda Velmi spolehlivá Kvantitativní-hladina protilátek v titrech V časné fázi onemocnění = negativní Zoonózy: yersinióza, listerióza, tularemie…
23.11.2011
prezentace OKMP
+
-
Pomalá aglutinace
16
Serologické metody a jejich praktické využití
Hemaglutinačně inhibiční test
Jen detekce ASLO
Latexaglutinační testy
Většinou jen screeningově jako vyhledávací reakce Možnost využít semikvantitativně Malá citlivost
23.11.2011
Hemaglutinačně-inhibiční test
prezentace OKMP
17
Serologické metody a jejich praktické využití 1. 2.
Chromatografické metody Detekce Ag i Ab Nízká citlivost x relativně dobrá specifita
Ag- pnemokok,legionela v moči Ag-střevní viry
- rotaviry - adenoviry - noroviry (Norwalk like) - astroviry - enteroviry -význam zejména první 3 dny onemocnění, potom rychle klesá virová nálož ve stolici
23.11.2011
!
Imunochromatografický test
prezentace OKMP
18
Serologické metody a jejich praktické využití
ELISA
(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)
1. 2. 3.
4.
Velmi citlivá metoda Časté nespecifity V časné fázi onemocnění může být negativní Většina vyšetřovaných infekcí,trváli onemocnění alespoň 2-3týdny 23.11.2011
prezentace OKMP
ELISA
19
Serologické metody a jejich praktické využití
Western blot
1.
Citlivá metoda Málo nespecifických reaktivit Zejména konfirmační test (ale nejen) V časné fázi onemocnění může být negativní Většina vyšetřovaných infekcí trvá-li onemocnění alespoň 2-4 týdny
2. 3. 4. 5.
Western blot
23.11.2011
prezentace OKMP
20
Polymerase Chain Reaction (PCR)
Obecně
Vhodná v časných fázích onemocnění při prvním kontaktu s pacientem a tam kde lze odebrat adekvátní materiál s předpokládaným patogenem. Výsledek=DNA prokazovaného patogena prokázána nebo neprokázána Princip PCR
23.11.2011
prezentace OKMP
21
Příjem materiálu
Po – Pá So
7.00 - 15.00 7.00 - 12.00 Ne+svátek před prac.dnem 9.00 – 10.00
23.11.2011
prezentace OKMP
22
23.11.2011
prezentace OKMP
23
