2
PENDAHULUAN Pola makan masyarakat Papua yang banyak mengkonsumsi daging beresiko terhadap timbulnya Penyakit Jantung Koroner (PJK) yang fatal. Apalagi dengan fasilitas kesehatan di Papua yang umumnya belum cukup memadai dalam pengobatan maupun penanganan darurat. PJK juga merupakan salah satu penyebab utama kematian di Amerika Serikat, sedangkan di Indonesia, PJK menjadi masalah penyakit tidak menular ketiga terbesar baik pada pria maupun wanita. PJK terjadi karena adanya penyempitan pembuluh darah kecil yang memasok darah dan oksigen ke jantung oleh bahan lemak dan zat-zat lainnya sehingga membentuk plak pada dinding arteri. Hal ini dapat menyebabkan nyeri dada (angina stabil), sesak napas, serangan jantung, dan gejala lain, terutama ketika sedang beraktivitas (Yusri, 2011). Salah satu bahan yang dipercaya mampu mencegah penumpukan kolesterol adalah ekstrak Buah Merah (Pandanus conoideus Lam.). Komposisi kimia Buah Merah antara lain, total karotenoid 12.000 ppm, total tokoferol 11.000 ppm, beta karoten 700 ppm, asam oleat 58%, asam linoleat 8,8%, asam linolenat 7,8%, dan dekanoat 2,0% (Anonim, 2010). Tingginya kandungan asam lemak tak jenuh serta efek antioksidan yang tinggi dapat menurunkan kadar kolesterol yang merupakan penyebab utama PJK. Hal ini terjadi karena asam lemak tak jenuh dapat menurunkan kadar kolesterol LDL (Low Density Lipoprotein), sedangkan antioksidan berperan sebagai penangkal radikal bebas dalam tubuh. Dengan turunnya kadar kolesterol, diharapkan resiko terkena PJK pun rendah dan angka kematian akibat PJK pun dapat berkurang. Selama ini, masyarakat membuat minyak Buah Merah dengan cara pemanasan pada suhu tinggi, padahal, dengan adanya kandungan asam lemak tak jenuh, minyak Buah Merah tidak dapat diambil dengan metoda pemanasan, karena pemanasan dapat merusak kandungan asam lemak tak jenuh serta zat-zat aktif lainnya. Oleh sebab itu, perlu adanya terobosan baru untuk membuat minyak Buah Merah dan salah satu cara ekstraksi tanpa pemanasan adalah menggunakan enzim, misalnya enzim papain. Papain dapat memecah protein pada ikatan lipoprotein sehingga minyak Buah Merah akan keluar dengan sendirinya. Dengan demikian, kandungan asam lemak tak jenuh serta zat aktif lainnya dalam minyak Buah Merah dapat dijaga kualitasnya. Oleh sebab itu, penelitian ini bertujuan 1) optimasi metoda ekstraksi minyak Buah Merah
3
secara enzimatik, 2) menentukan angka iod minyak Buah Merah hasil ekstraksi enzimatis, 3) mengidentifikasi komponen asam lemak tak jenuh dengan Gas Chromatography/Mass Spectrometry (GC/MS), 4) menentukan penggunaan dosis yang berpengaruh terhadap penurunan kadar kolesterol total, trigliserida, dan LDL serta peningkatan kadar HDL dalam darah secara in vivo, dan 5) menentukan penggunaan dosis yang berpengaruh terhadap penurunan Atherogenic Index (AI) dan Coronary Risk Index (CRI).
METODE Bahan Sampel yang digunakan adalah Buah Merah (P. conoideus) berasal dari Wamena, dan minyak Buah Merah yang diperoleh dari Nabire, Buah Pepaya muda diambil dari perumahan di Kemiri 2, Salatiga, lemak sapi yang diperoleh dari Pasar Raya Salatiga, larutan pemutih pakaian, dan minyak kelapa sawit, sedangkan bahanbahan kimia yang digunakan antara lain pelarut n-Heksana (derajat teknis), etanol 96% (derajat teknis), Iod (PA, E-Merck, Germany), asam asetat (PA, E-Merck, Germany), larutan metilen klorida (PA, E-Merck, Germany), KI (Kimia Farma, Indonesia), Natrium Tiosulfat (PA, E-Merck, Germany), Carboxil Metyl Celulose (CMC) (derajat teknis), reagen pereaksi kolesterol DiaSys, reagen pereaksi trigliserida DiaSys, dan larutan pengendap dan standar HDL DiaSys.
Piranti Piranti yang digunakan antara lain timbangan digital (Mettler H80), Evaporator (Buchi Rotavapor R114, Switzerland), kertas saring, oven 550C (WTC Binder), inkubator 350C (WTC Binder), lemari Pendingin dengan suhu -40C (Panasonic NR-B20 KN), seperengkat alat sentrifugal (Swing Type Centrifuge Model C-40 N, Tomy Seiko CO., LTD, Tokyo, Japan), pH meter (Hanna HI 9812), pipet mikro, alat suntik 1 cc, spektrofotometer (Optizen 2120 UV ), dan peralatan gelas (kaca) lainnya.
4
Metode Optimasi Ekstraksi Minyak Buah Merah (Imama (2003)) Ekstraksi Papain Buah pepaya muda digores dengan pisau yang terbuat dari bambu, dengan kedalaman ± 1 cm dengan jarak antargoresan ± 2 cm. Getah buah pepaya ditampung dalam wadah plastik kemudian ditambah etanol 96% dengan perbandingan 4:3. Larutan disimpan dalam lemari pendingin (suhu -4oC) selama 2 jam. Endapan yang terbentuk disaring dan dioven pada suhu 550C selama 8 jam. Endapan berupa serbuk papain berwarna putih kekuningan. Optimasi Waktu Inkubasi Ekstraksi Minyak Buah Merah Buah merah ditimbang sebanyak 5 gram dan ditambah papain 1 mg (kadar papain 0,2 mg/g). Campuran diinkubasi pada temperatur 35oC, dengan waktu yang divariasikan, yaitu 5 menit, 15 menit, 30 menit, 60 menit, dan 24 jam. Setelah inkubasi, campuran ditambah pelarut n-heksana dan disentrifugasi selama 1 jam. Minyak yang sudah terlarut dalam n-heksana dipisahkan lalu n-heksana diuapkan. Minyak yang diperoleh ditimbang dan dihitung rendemennya. Optimasi Kadar Papain Ekstraksi Minyak Buah Merah Buah merah ditimbang sebanyak 5 gram dan ditambah papain dengan kadar yang divariasikan, yaitu 0; 0,2; 1; 2; 4; 6; 8; 10; dan 12 mg/g. Campuran diinkubasi pada temperatur 35oC, dengan waktu yang diperoleh dari langkah 2. Setelah inkubasi, campuran ditambah pelarut n-heksana dan disentrifugasi selama 1 jam. Minyak yang sudah terlarut dalam n-heksana dipisahkan lalu n-heksana diuapkan. Minyak yang diperoleh ditimbang dan dihitung rendemennya. Rendemen (% yield) perolehan minyak Buah Merah dihitung dengan menggunakan rumus:
Uji Kuantitatif Asam Lemak Tak Jenuh Untuk uji kuantitatif asam lemak tak jenuh, dilakukan pengujian dan penentuan angka iod.
5
Pembuatan larutan wijs (SNI 7381, 2008) Ditimbang iod sebanyak 1,3 gram lalu dilarutkan dalam asam asetat pekat dalam labu ukur 100 ml. Larutan dipindahkan dalam beaker glass kemudian ditimbang. Setelah itu, larutan dialiri gas klor, sehingga massa larutan bertambah 0,36 gram dan warnanya berubah dari coklat tua menjadi coklat kekuningan. Larutan wijs disimpan dalam tempat gelap pada suhu 250C. Pengujian angka iod (SNI 01-5009.12, 2001 Termodifikasi) Minyak Buah Merah ditimbang ± 1 gram, lalu ditambahkan 20 ml larutan metilen klorida dan 25 ml larutan wijs. Larutan dikocok hingga homogen dan disimpan ditempat gelap ± 30 menit (t= 250C ± 500C). Setelah 30 menit, larutan ditambahkan 25 ml larutan Kalium Iodida 10% dan diencerkan dengan akuades 100 ml. Larutan ditambahkan 1-2 ml indikator kanji lalu dititrasi menggunakan Larutan tiosulfat 0,5 M standar hingga warna biru tepat hilang. Pengujian angka iod dilakukan secara triplo lalu dihitung angka iod dengan rumus: bilangan Iod = Keterangan : V1
= volume titrasi contoh uji (ml).
V2
= volume titrasi blangko (ml).
M
= molaritas Na2S2O3 yang terstandardisasi.
W
= bobot contoh uji (gram).
12,69 = bobot setara bilangan iod.
Identifikasi Komponen Asam Lemak Tak Jenuh dengan GC/MS Untuk identifikasi komponen asam lemak tak jenuh dengan GC/MS, sampel uji dikerjakan di Fakultas MIPA, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Uji In Vivo Antikolesterol (Dachriyanus, dkk., 2007 Termodifikasi) Preparasi hewan percobaan Hewan percobaan yang digunakan adalah 24 ekor Mencit Galur Swiss dengan umur dua hingga tiga bulan dengan bobot 20-30 gram. Hewan percobaan dikelompokkan menjadi 6 kelompok dengan masing-masing kelompok terdiri dari 4
6
ekor mencit. Mencit diaklitimasi selama 7 hari. Hewan dianggap sehat apabila perubahan bobot badan tidak lebih dari 10% serta memperlihatkan perilaku normal. Perencanaan dosis Dosis ekstrak minyak buah Merah yang biasa dipakai manusia adalah 2 x 1 sendok makan per hari atau sekitar 2 x 5 ml/hari = 10 ml/hari (9225 mg/hari). Dosis pemakaian untuk mencit dapat dihitung dengan mengalikan dosis pemakaian pada manusia tersebut dengan faktor konversi manusia ke mencit, yaitu 0,0026, sehingga dosis pemakaian untuk mencit dengan berat badan 20 gram (Lampiran 1). Dengan demikian, dosis yang digunakan yaitu 599,625 (setengah dosis normal), 1199,25 (dosis normal), dan 2398,5 (dua kali dosis normal) mg/kg BB. Pembuatan sediaan uji (minyak buah Merah) Konsentrasi sedian uji dibuat dan dihitung dengan rumus:
Senyawa uji ditimbang berdasarkan konsentrasi masing-masing dosis, kemudian diemulsikan dengan Carboxil Metyl Celulose (CMC) 1% dalam air suling. Perlakuan hewan percobaan Sebelum diberi suspensi uji, mencit diberi Makanan Diet Lemak Tinggi (MDLT) yang terdiri dari campuran lemak sapi dan minyak kelapa sawit dengan perbandingan 5:1, kecuali kontrol negatif. Cara pembuatan MDLT diawali dengan penimbangan lemak sapi sesuai dengan yang dibutuhkan kemudian dicampur dengan minyak kelapa sawit dengan bantuan pemanasan. MDLT diberikan secara oral selama 7 hari untuk meningkatkan kadar kolesterol. Setelah 7 hari, mencit diberi perlakuan sesuai dengan kelompoknya selama 14 hari. Perlakuan enam kelompok mencit sebagai berikut: kelompok I (kontrol negatif) diberikan CMC 1% BB, kelompok II (kontrol positif) diberikan MDLT 2% BB, kelompok III (pembanding) diinduksi dengan MDLT 2 % BB dan minyak Buah Merah pasaran dengan dosis 1199,25 mg/kgBB, dosis 156 mg/kg BB, kelompok IV, V, dan V diberikan MDLT 2% BB dan minyak buah Merah dengan dosis 599,625, 1199,25, dan 2398,5 mg/kg BB.
7
Pengukuran Kadar Kolesterol Total, Kadar Trigliserida, Kadar HDL (High Density Lipoprotein), dan Kadar LDL (Low Density Lipoprotein) Setelah perlakuan pada mencit selama 14 hari, pada hari ke-15 dilakukan pengukuran untuk setiap parameter uji pada masing-masing kelompok. Darah mencit diambil pada jantung dengan alat suntik (cardiac puncture), lalu ditampung dalam tabung sentrifus. Setelah itu, dilakukan pengukuran untuk setiap parameter uji, yaitu kadar kolesterol total, kadar trigliserida, kadar HDL, dan kadar LDL. a. Pengukuran Kadar Kolesterol Total Darah yang ditampung didiamkan selama 15 menit lalu disentrifus selama 20 menit dengan kecepatan 3000 rpm. Setelah serum terpisah, dipipet dengan pipet mikro sebanyak 10 µl lalu dimasukkan dalam tabung reaksi. Serum ditambah dengan larutan pereaksi kolesterol sebanyak 1 ml lalu dikocok hingga homogen. Absorbansinya diukur pada panjang gelombang 500 nm terhadap blanko (pereaksi kolesterol 1 ml ditambah akuades 10 µl). Kadar kolesterol total dihitung dengan menggunakan rumus:
di mana: C
= kadar kolesterol total (mg/dl)
A = serapan Cst= kadar kolesterol standar (200 mg/dl) b. Pengukuran Kadar Trigliserida Darah yang ditampung didiamkan selama 15 menit lalu disentrifus selama 20 menit dengan kecepatan 3000 rpm. Setelah serum terpisah, dipipet dengan pipet mikro sebanyak 10 µl lalu dimasukkan dalam tabung reaksi. Serum ditambah dengan larutan pereaksi trigliserida sebanyak 1 ml lalu dikocok hingga homogen. Absorbansinya diukur pada panjang gelombang 500 nm terhadap blanko (pereaksi trigliserida 1 ml ditambah akuades 10 µl). Kadar trigliserida dihitung dengan menggunakan rumus:
di mana: C
= kadar trigliserida (mg/dl)
A = serapan Cst= kadar trigliserida standar (200 mg/dl)
8
c. Pengukuran Kadar HDL (High Density Lipoprotein) Darah yang ditampung, didiamkan selama 15 menit lalu disentrifus selama 20 menit dengan kecepatan 3000 rpm. Setelah serum terpisah, dipipet dengan pipet mikro sebanyak 0,02 ml dimasukkan dalam tabung reaksi lalu ditambah dengan 0,5 ml larutan pengedap. Campuran dikocok lalu dibiarkan selama 10 menit pada suhu kamar. Setelah itu, campuran disentrifus selama 20 menit dengan kecepatan 4500 rpm. 0,01 ml supernatan diambil, dimasukkan dalam tabung reaksi, lalu ditambah dengan pereaksi kolesterol sebanyak 1 ml. Campuran dikocok hingga homogen lalu dibiarkan selama 20 menit pada suhu kamar. Absorbansinya diukur pada panjang gelombang 500 nm terhadap blanko (pereaksi kolesterol 1 ml ditambah akuades 10 µl). Kadar HDL dihitung dengan menggunakan rumus:
di mana: C
= kadar HDL (mg/dl)
A = serapan Cst= kadar kolesterol standar (200 mg/dl) d. Pengukuran Kadar LDL (Low Density Lipoprotein) Kadar LDL dapat dihitung dengan menggunakan rumus:
Penentuan Atherogenic Index (AI) dan Coronary Risk Index (CRI) (Adeneye dan Olagunju, 2009) Penentuan AI dan CRI menggunakan rumus: dan CRI =
Analisis Data Data dianalisis menggunakan Rancangan Acak Kelompok (RAK) dengan 6 perlakuan dan 4 kali ulangan. Sebagai perlakuan adalah kelompok kontrol negatif (diberikan CMC 1% bb), kelompok kontrol positif (diberikan MDLT 2% bb), kelompok pembanding (diinduksi dengan MDLT 2 % bb dan minyak Buah Merah yang diperoleh dari pasaran dengan dosis 1199,25 mg/kgbb), dan kelompok yang diberikan MDLT 2%
9
bb dan minyak Buah Merah dengan dosis 599,625, 1199,25, dan 2398,5 mg/kgbb. Sebagai ulangan adalah waktu analisis. Untuk membandingkan purata antar perlakuan digunakan Uji Beda Nyata Jujur (BNJ) dengan tingkat kebermaknaan 5%.
HASIL DAN PEMBAHASAN Optimasi Ekstraksi Minyak Buah Merah Optimasi waktu inkubasi yang dilakukan dalam ekstraksi minyak Buah Merah disajikan dalam Gambar 1.
Gambar 1. Optimasi Waktu Inkubasi Ekstraksi Minyak Buah Merah
Dari Gambar 1 terlihat bahwa waktu optimum untuk ekstraksi minyak Buah Merah adalah 60 menit, sedangkan kadar ekstrak papain optimum yang diperoleh adalah 6 mg/g. Optimasi kadar ekstrak papain dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Optimasi Kadar Ekstrak Papain Ekstraksi Minyak Buah Merah
10
Hasil ini berbeda dengan hasil penelitian Imama (2003) dan Garbawati (2006). Menurut Imama (2003), proses penambahan enzim dikontrol oleh pH, kadar enzim, dan temperatur. Papain merupakan enzim yang stabil, tahan terhadap perubahan pH dan suhu yang besar, memiliki pH optimum 5-7 dan suhu optimum 350C. Dari penelitiannya dengan menggunakan sampel daging ikan bandeng, diperoleh waktu inkubasi optimum 15 menit, kadar papain optimum 0,1 mg/g, dan tanpa penambahan buffer, sedangkan pada penelitian Garbawati (2006), diperoleh kondisi optimum untuk mengekstrak minyak kelapa dari 100 ml santan adalah jumlah enzim 1,20 gram, pH santan 5,9, suhu inkubasi 550C, dan waktu inkubasi 20 jam. Berbeda dengan penelitian keduanya, waktu dan kadar papain optimum yang diperoleh dari penelitian ini adalah 60 menit dan 6 mg/g dengan suhu inkubasi 350C dan pH 4,4. Perbedaan ini terjadi karena aktivitas enzim dipengaruhi oleh konsentrasi substrat, jumlah enzim, pH, waktu kontak, dan suhu (Zusfahair dan Handayani, 2008). Buah Merah mengandung air, protein, dan lemak yang merupakan jenis emulsi dan protein sebagai emulgatornya. Sebagai emulgator, protein akan membungkus butiran-butiran minyak sehingga minyak tidak dapat bersatu, begitu juga dengan air (Hairi, 2010). Oleh sebab itu, metode ekstraksi minyak Buah Merah menggunakan enzim papain karena papain merupakan enzim proteolitik dan juga tergolong ke dalam endopeptidase, di mana papain dapat memecah protein pada tempat-tempat tertentu dalam molekul protein dan biasanya tidak mempengaruhi gugus yang terletak di ujung molekul (Sumarlin dkk., 2011). Hal inilah yang menyebabkan protein terdegeradasi, sehingga minyak dapat terpisah (Hairi, 2010).
Uji Kuantitatif Asam Lemak Tak Jenuh Uji kuantitatif asam lemak tak jenuh yang digunakan adalah uji bilangan iod dengan menggunakan metode Wijs. Bilangan iod menunjukkan banyaknya molekul iod yang dapat mengadisi ikatan rangkap pada minyak, dinyatakan dalam gram iod per 100 gram contoh minyak. Bilangan ini sangat penting dalam menentukan kualitas minyak berdasarkan banyaknya ikatan rangkap dalam asam lemaknya. Semakin besar bilangan iod, maka semakin banyak ikatan rangkap yang ada dalam asam lemak suatu minyak (Gustiani, 2008). Hasil uji bialangan iod dapat dilihat pada Tabel 1.
11
Tabel 1. Hasil Uji Bilangan Iod Minyak Buah Merah Hasil Ekstraksi
Bilangan Iod
Enzimatis Pemanasan (Pasaran)
3,33 0,8674
Pada Tabel 1, bilangan iod minyak Buah Merah hasil ekstraksi enzimatis adalah 3,33, sedangkan minyak Buah Merah yang diperoleh dari pasaran, hasil ekstraksi dengan pemanasan, memiliki bilangan iod sebesar 0,8674 per 1 gram sampel. Dengan demikian, sampel minyak Buah Merah hasil ekstraksi enzimatis memiliki bilangan iod sekitar 300 gram iod/100 gram. Bilangan ini lebih besar dibandingkan bilangan iod sampel minyak Buah Merah yang didapatkan dari pasaran, yaitu sekitar 90 gram iod/100 gram sampel. Dengan demikian, kandungan ikatan rangkap yang terdapat dalam minyak Buah Merah hasil ektraksi enzimatis lebih banyak dibanding kandungan ikatan rangkap pada minyak Buah Merah yang beredar di pasaran. Hal ini menunjukkan metode ekstraksi enzimatis dapat mempertahankan kualitas minyak Buah Merah.
Identifikasi Komponen Asam Lemak Tak Jenuh dengan GC/MS Untuk mengetahui kandungan asam lemak tak jenuh pada minyak Buah Merah hasil ektraksi enzimatis, dilakukan identifikasi dengan GC/MS. Hasil identifikasi asam lemak dengan GC/MS dapat dilihat pada Gambar 3 berikut.
Gambar 3 Hasil identifikasi Asam Lemak dengan GC/MS
Gambar 3 menunjukkan bahwa minyak Buah Merah hasil ekstraksi enzimatis tersusun dari 9 komponen yang ditampilkan sebagai 9 puncak. Selanjutnya, dilakukan
12
identifikasi setiap komponen dengan membandingkan spektrum massa puncak dengan pola spektra yang terdapat pada pustaka Wiley 229.LIB. berdasarkan indeks kemiripannya. Puncak kelima dengan kadar 67,14% setelah diidentifikasi ternyata serupa dengan spektra metil 9-oktadekenoat, seperti yang disajikan pada Gambar 4 berikut.
(a)
(b) Gambar 4. (a) Spektrum Massa Puncak kelima Minyak Buah Merah; (b) Spektrum Pustaka Wiley 229.LIB. Berdasarkan gambar di atas, dapat dipastikan bahwa puncak kelima adalah senyawa metil 9-oktadekenoat dengan struktur seperti yang ditampilkan pada Gambar 5 di bawah ini.
Gambar 5. Metil 9-Oktadekenoat
Selanjutnya, dengan cara yang sama dilakukan identifikasi untuk setiap puncak. Hasil identifikasi asam lemak penyusun sampel minyak Buah Merah dapat dilihat pada Tabel 2 berikut ini.
13
Tabel 2. Perbandingan Spektra Massa Asam Lemak Penyusun Sampel Minyak Buah Merah Peak Waktu Retensi BM/Rumus Nama Senyawa Area% no.
(menit)
1
17,638
2
18,523
Molekul 256/
metil ester, asam
C16H32O2
pentadekanoat
268/ C17H32O2
metil ester, asam 9-
0,21
1,69
heksadekenoat 3
18,845
270/ C16H34O2
metil ester, asam
27,82
heksadekanoat 4
19,408
284/ C18H36O2
etil ester, asam
0,18
heksadekanoat 5
20,623
296/ C19H36O2
metil 9-oktadekenoat
67,14
6
20,876
298/ C19H38O2
metil ester, asam
1,83
oktadekanoat 7
21,180
8
22,348
9
22,435
310/ C20H38O2
asam 9-oktadekenoat
Tidak teridentifikasi 312/ C19H36O3
10-Okso-metil ester,
0,71 0,21 0,20
asam oktadekanoat
Berdasarkan hasil perbandingan spektra sampel dan pustaka basis data dapat disimpulkan bahwa asam lemak penyusun minyak Buah Merah didominasi oleh asam lemak tak jenuh dengan persentase daerah, yaitu metil ester asam 9-heksadekenoat atau yang lebih dikenal dengan metil palmitat (1,69%), metil 9-oktadekenoat atau metil oleat (67,14%), dan asam 9-oktadekenoat atau etil ester asam oleat (0,71%), sedangkan sisanya merupakan asam lemak jenuh dengan persentase daerah, yaitu metil ester asam pentadekanoat (0,21%), metil ester asam heksadekanoat atau metil palmitat (27,82%), etil ester asam heksadekanoat atau etil ester asam palmitat (0,18%), metil ester asam oktadekanoat atau metil ester asam stearat (1,83%), dan 10-Okso-metil ester, asam oktadekanoat (0,20%). Dengan adanya asam lemak tak jenuh dalam jumlah banyak menyebabkan titik leleh minyak menjadi lebih rendah, sehingga cenderung mencair pada suhu rendah (Gustiani, 2008).
14
Uji In Vivo Antikolesterol Hasil pengukuran kadar kolesterol total darah mencit yang diperoleh dari penelitian tersaji dalam Tabel 3 dan Gambar 6 di bawah ini. Tabel 3. Rataan Kadar Kolesterol Darah Mencit
Xp ± SE W= 4,014
KN 4,4321 ± 1,3837
KP 6,6495 ± 0,9414
(a)
(a)
Perlakuan MPDN ME1/2DN 7,7580 ± 12,1308 ± 1,2382 2,2302 (a)
(b)
MEDN 15,3409 ± 1,2010
ME2DN 27,9646 ± 0,9414
(b)
(c)
Keterangan: • W = BNJ 5%. • KN = kontrol negatif (hanya diberi CMC 1%); KP= kontrol positif (hanya diberi MDLT); MPDN = pembanding (diberi minyak Buah Merah Pasaran dengan dosis 1199,25 mg/kgbb); ME1/2DN, MEDN, dan ME2DN = diberi minyak Buah Merah hasil ekstraksi enzimatis dengan dosis 599,625, 1199,25, dan 2398,5 mg/kgbb. Keterangan ini juga berlaku untuk Gambar 6-Gambar 10. • Angka yang diikuti huruf yang sama menunjukkan antar perlakuan tidak berbeda secara bermakna, sedangkan angka-angka yang diikuti oleh huruf yang berbeda menunjukkan antar perlakuan berbeda bermakna. Keterangan ini juga berlaku untuk Tabel 4 - Tabel 7.
Gambar 6. Kadar Kolesterol Total Darah Mencit
Tabel 3 dan Gambar 6 memperlihatkan bahwa rataan kadar kolesterol darah mencit berkisar antara 4,4321 ± 1,3837 mg/dl hingga 27,9646 ± 0,9414 mg/dl. Minyak Buah Merah hasil ekstraksi enzimatik berefek terhadap penurunan kadar kolesterol total darah mencit cukup dengan dosis 599,625 mg/kgbb (kelompok perlakuan ME1/2DN). Efek penurunan ini tidak berbeda dengan efek penurunan kadar kolesterol total darah mencit yang diberikan minyak Buah Merah yang diperoleh dari pasaran dengan dosis 1199,25 mg/kgbb (kelompok perlakuan MPDN). Akan tetapi, nilai ini terlihat berbeda
15
dengan efek penurunan kadar kolesterol total darah mencit yang diberikan minyak Buah Merah hasil ekstraksi enzimatis dengan dosis 1199,25 (kelompok perlakuan MEDN) dan 2398,5 mg/kgbb (kelompok perlakuan ME2DN). Selain menurunkan kadar kolesterol total, minyak Buah Merah juga menurunkan kadar trigliserida dan LDL darah mencit. Perbedaan penurunan kadar trigliserida begitu terlihat seiring dengan peningkatan dosis yang diberikan. Hasil pengukuran kadar trigliserida terdapat pada Tabel 4 dan Gambar 7. Tabel 4. Rataan Kadar Trigliserida Darah Mencit
Xp ± SE W= 3,76
KN 5,8965 ± 2,7650
KP 7,8825 ± 3,0253
(a)
(ab)
Perlakuan MPDN ME1/2DN MEDN ME2DN 10,9430 15,4961 ± 21,8475 ± 38,6576 ± ± 2,2193 2,4334 1,7194 3,9977 (b)
(c)
(d)
(e)
Gambar 7. Kadar Trigliserida Darah Mencit
Tabel 4 dan Gambar 7 menunjukkan bahwa rataan kadar trigliserida darah mencit berkisar antara 5,8965 ± 3,0253 mg/dl hingga 38,6576 ± 3,9977 mg/dl. Pemberian minyak Buah Merah dengan dosis 599,625 mg/kgbb (kelompok perlakuan ME1/2DN) lebih efektif terhadap penurunan kadar trigliserida darah mencit dibanding pemberian minyak Buah Merah yang diperoleh dari pasaran (kelompok perlakuan MPDN). Demikian pula, efek penurunan kadar trigliserida darah mencit yang diberikan dosis 1199,255 mg/kgbb (kelompok perlakuan MEDN) berbeda dengan efek penurunan
16
kadar trigliserida darah mencit
yang diberikan dosis 2398,5 mg/kgbb (kelompok
perlakuan ME2DN). Hasil pengukuran kadar LDL disajikan dalam Tabel 5 dan Gambar 8 berikut. Tabel 5. Rataan Kadar LDL Darah Mencit
Xp ± SE W= 3,172
KN 0,4157 ± 0,5932
KP 1,1544 ± 1,1675
(a)
(a)
Perlakuan MPDN ME1/2DN 2,5155 ± 5,2503 ± 1,7098 1,9681 (ab)
(bc)
MEDN 7,7854 ± 1,0715
ME2DN 18,0978 ± 5,3682
(c)
(d)
Gambar 8. Kadar LDL Darah Mencit
Berdasarkan tabel dan gambar tersebut, rataan kadar LDL berkisar antara 0,4157 ± 0,5932 mg/dl sampai 18,0978 ± 5,3682 mg/dl. Dosis 1199,25 mg/kgbb (kelompok perlakuan MEDN) dapat menurunkan kadar LDL yang tidak berbeda dengan dosis 2398,5 mg/kgbb (kelompok perlakuan ME2DN), sedangkan untuk dosis pemberian minyak Buah Merah 599,625 mg/kgbb (kelompok perlakuan ME1/2DN) tidak berbeda dengan dosis pemberian minyak Buah Merah yang diperoleh dari pasaran, yaitu 1199,25 mg/kgbb (kelompok perlakuan MPDN). Selain dapat
menurunkan kadar kolesterol total, trigliserida, dan LDL darah
mencit, minyak Buah Merah juga meningkatkan kadar HDL darah mencit. Hal ini dibuktikan dengan meningkatnya kadar HDL darah mencit seiring dengan peningkatan dosis minyak Buah Merah yang diberikan seperti Tabel 6 dan Gambar 9.
17
Tabel 6. Rataan Kadar HDL Darah Mencit
Xp ± SE W= 1,10
KN 0,3401 ± 1,0823
KP 2,2087 ± 0,9445
(a)
(a)
Perlakuan MPDN ME1/2DN 3,1860 ± 3,7813 ± 1,2568 1,4007 (bc)
(cd)
MEDN 4,4150 ± 0,6390
ME2DN 5,0545 ± 1,3392
(de)
(e)
Gambar 9. Kadar HDL Darah Mencit
Tabel 6 dan Gambar 9, menunjukkan bahwa rataan kadar HDL berkisar antara 0,3401 ± 1,0823 mg/dl hingga 5,0545 ± 1,3392 mg/dl dan dosis yang paling efektif meningkatkan kadar HDL adalah dosis 2398,5 mg/kgbb (kelompok perlakuan ME2DN), namun dengan dosis 599,625 mg/kgbb (kelompok perlakuan ME1/2DN) sudah dapat meningkatkan kadar HDL darah mencit. Hal ini disebabkan oleh kandungan asam lemak tak jenuh dalam minyak Buah Merah, karena asam lemak tak jenuh berfungsi untuk menurunkan kadar LDL dan meningkatkan kadar HDL yang pada akhirnya akan menyebabkan peningkatan metabolisme kolesterol dalam empedu sehingga dapat dikeluarkan dari tubuh (Juheini, 2002). Penelitian ini sebanding dengan penelitian Harini dkk. (2009) yang menggunakan Virgin Coconut Oil (VCO) sebagai sampel. Hasil penelitiannya menunjukkan bahwa pemberian VCO dengan dosis 1 dan 1,3 ml/270g bb pada tikus putih hiperkolesterolemik mengakibatkan penurunan kadar kolesterol total dan LDL, serta peningkatan HDL yang tidak berbeda dengan pemberian obat paten Simvastatin sebagai obat penurun kolesterol.
18
Selanjutnya dari hasil yang diperoleh, dilakukan perhitungan AI dan CRI. AI merupakan indikator untuk mengetahui resiko aterosklerosis yang merupakan salah satu penyebab utama penyakit jantung koroner (Pratiwi, 2008). Hasil yang diperoleh ditampilkan pada Tabel 7 dan Gambar 9 berikut ini. Tabel 7. Rataan nilai AI dan CRI
AI
Xp ± SE W= 1,518
CRI
Xp ± SE W= 1,536
Perlakuan MPDN ME1/2DN MEDN 0,2607 ± 1,4540 ± 2,5838 ± 0,2400 0,7953 1,2407
KN 0± 0
KP 0,0881 ± 0,1425
(a)
(a)
(a)
(ab)
(b)
(c)
0± 0
1,3306 ± 0,2082
1,7624 ± 0,2628
3,3139 ± 1,0901
5,0225 ± 1,8229
13,7247 ± 1,4486
(a)
(ab)
(b)
(c)
(d)
(e)
(a)
ME2DN 9,5252 ± 1,9530
(b)
Gambar 10. Pengaruh Pemberian Minyak Buah Merah terhadap Atherogenic Index (a) dan Coronary Risk Index (b) Berdasarkan Tabel 7 dan Gambar 10, rataan nilai AI berkisar antara 0 hingga 9,5252, sedangkan nilai rataan CRI berkisar antara 0 hingga 13,7247 dan terlihat tidak ada perbedaan nilai AI antara kontrol negatif dengan kelompok yang diberi minyak Buah Merah hasil ekstraksi enzimatis. Dengan kata lain, dengan dosis 599,625 mg/kgbb (kelompok perlakuan ME1/2DN) sudah dapat memperkecil resiko aterogenesis, sedangkan untuk CRI, dosis yang efektif menurunkan resiko terserang PJK adalah 1199,25 mg/dl (kelompok perlakuan MEDN). Selain itu juga, terlihat adanya perbedaan
19
antara kelompok kontrol dan kelompok yang diberi perlakuan, di mana perbedaan indeks aterogenik ini sangat berarti karena setiap point penurunan indeks aterogenik memiliki makna penurunan resiko aterosklorosis. Begitu juga dengan CRI. Kedua nilai ini sangat tergantung pada kadar HDL. Semakin tinggi kadar HDL, semakin rendah nilai indeks AI dan CRI (Suryani, 2008).
KESIMPULAN 1.
Waktu inkubasi dan kadar ekstrak papain optimum yang diperlukan untuk mengekstrak minyak Buah Merah secara enzimatik adalah 60 menit dan 6 mg/g.
2.
Metode enzimatik dapat mempertahankan kualitas minyak Buah Merah yang dibuktikan dengan tingginya angka iod minyak Buah Merah hasil ekstraksi enzimatik, yaitu 3,33/gram sampel.
3.
Berdasarkan identifikasi komponen asam lemak dengan GC/MS, senyawa yang paling dominan adalah metil-9-oktadekenoat yang merupakan senyawa asam lemak tak jenuh.
4.
Dosis optimum pemberian minyak Buah Merah hasil ekstraksi enzimatis yang dapat menurunkan kadar kolesterol total, trigliserida, dan LDL, serta meningkatkan kadar HDL darah mencit adalah 1199,25 mg/kgbb mencit.
5.
Dosis optimum pemberian minyak Buah Merah hasil ekstraksi enzimatis yang dapat menurunkan nilai AI dan CRI adalah 1199,25 mg/kgbb mencit.
SARAN 1.
Perlu dilakukan purifikasi ekstrak papain untuk mengekstrak minyak Buah Merah.
2.
Metode ekstraksi minyak Buah Merah perlu diperbaharui, yaitu dengan melakukan metode pemancingan dengan menggunakan minyak Buah Merah itu sendiri, karena penggunaan pelarut heksana berbahaya bagi manusia.
DAFTAR PUSTAKA Anonim. 2010. Buah Merah Buah Khas Papua. http://papuabarat.litbang.deptan.go.id/ind/index.php?option=com_content&vie w=article&id=1:buah-merah-buah-khas-papua&catid=4:info-aktual&Itemid=5. Diakses Rabu, 29 Februari 2012
20
Adeneye, A. A. and J. A. Olagunju. 2009. Preliminary Hypoglycemic and Hypolipidemic Activities of The Aqueous Seed Extract of Carica Papaya Linn. in Wistar Rats. Biology and Medicine, Vol. 1 (1): 1-10, hal. 3 Dachriyanus, D. O. Katrin, R. Oktaria, O. Ernas, Suhatri, dan M. Husni Mukhtar. 2007. Uji Efek A-Mangostin terhadap Kadar Kolesterol Total, Trigliserida, Kolesterol HDL, dan Kolesterol LDL Darah Mencit Putih Jantan serta Penentuan Lethal Dosis 50 (LD50). J. Sains Tek. Far., 12(2) 2007, hal. 2-4 Garbawati, E. B., 2006. Ekstraksi Minyak Kelapa secara Enzimatik Menggunakan Ekstrak Kasar, hal. 1 Gustiani, S. H., 2008. Studi Ekstraksi dan Analisis Minyak Biji Lengkeng. Skripsi Universitas Indonesia. Jakarta, hal. 16-17 Hairi, M., 2010. Pengaruh Umur Buah Nanas dan Konsentrasi Ekstrak Kasar Enzim Bromelin pada Pembuatan Virgin Coconut Oil dari Buah Kelapa Typical (Cocos nucifera L.). Skripsi Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim. Malang, hal. 30 Harini, M. dan O. Astirin. 2009. Kadar Kolesterol Darah Tikus Putih (Rattus norvegicus) Hiperkolesterolemik Setelah Perlakuan VCO. ISSN: 0216-6887, hal. 7 Imama, N., 2003. Pengambilan minyak ikan bandeng (Chanos-chanos) menggunakan n-heksana dengan bantuan papain. http://eprints.undip.ac.id/30919/. Diakses Rabu, 29 Februari 2012 Juheini. 2002. Pemanfaatan Herba Seledri (Apium graveolens L.) untuk Menurunkan Kolesterol dan Lipid dalam Darah Tikus Putih yang Diberi Diit Tinggi Kolesterol dan Lemak. Makara, Sains, Vol. 6, No. 2, hal. 4 Pratiwi, S., 2008. Profil Kolesterol dan Trigliserida Darah Tikus Putih yang Diberi Pakan Daging yang Difermentasi Lactobacillus plantarum 1B1. Skripsi Institut Pertanian Bogor, hal. 52 SNI 01-5009.12. 2001. Gondorukem. http://www.dephut.go.id/Halaman/STANDARDISASI_&_LINGKUNGAN_K EHUTANAN/SNI/Gondorukem.htm. Diakses Rabu, 29 Februari 2012 SNI 7381. 2008. Minyak kelapa Virgin (VCO). http://bbihp.kemenperin.go.id. Diakses Rabu, 29 Februari 2012 Sumarlin, La Ode, Siti Nurbayti, dan Syifa Fauziah. 2011. Penghambatan Enzim Pemecah Protein (Papain) oleh Ekstrak Rokok, Minuman Beralkohol dan Kopi secara In Vitro. ISSN: 1978-8193, hal. 2 Yusri. 2011. Penyakit Jantung Koroner. http://www.kesehatan123.com/910/penyakitjantung-koroner/. Diakses Rabu, 29 Februari 2012 Zusfahair dan S. N. Handayani. 2008. Pemanfaatan Kulit Batang Ubi Kayu sebagai Sumber Enzim Peroksidase Untuk Penurunan Kadar Fenol. Seminar Nasional Aplikasi Sains dan Teknologi 2008-IST AKPRIND Yogyakarta, hal. 2
