The Antioxidant Activity of African Leaves (Vernonia amygdalina) Extract using 1,1- Dipheny l-2-picrylhydrazyl (DPPH)

Antioxidant, March 2016 The Antioxidant Activity of African Leaves (Vernonia amygdalina) Extract using 1,1Dipheny l-2-picrylhydrazyl (DPPH) Joshua H. L. Tobing1, Donn R. Ricky2, Desi Natalia Sari3 Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Department of Biology Universitas Advent Indonesia (UNAI), Jl. Kolonel Masturi no. 288, Parongpong, West Bandung 40559, Indonesia

ABSTRACT This study was conducted to test the antioxidant activity of African leaves (Vernonia amygdalina) extract using free radical method of 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH). Isolation of active compound Africa leaves was carried out by extraction, maceration and fractionation. The phytochemical testing shows the existence of flavonoids, alkaloids, quinone, saponin, monoterpenes and sesquiterpenes. Extracts methods used are ethanol extract, acid fraction, and dichloromethane fraction with concentration of variations of 10, 20, 50, 100, 200, 500, and 1000 ppm. Analysis of the activity of the test was done by using spectrophotometer and measuring the absorbance of the sample data (percent inhibition) at a wavelength of 515 nm. The findings of the study show a significant differences in antioxidant activity in Ethanol extract (p = 0.000 <α = 0.05, where H0 1 is rejected), acid fraction (p = 0.000 <α = 0.05, where H0 2 is rejected) and dichloromethane fraction (p = 0.000 <α = 0.05, where H0 3 is rejected). Further in the study it is also shown that there was significant differences in antioxidant activity between the three types of extract used (p = 0.000 <α = 0,05), variations of concentration (p = 0.000 <α = 0.05), and the interaction between types and variations in the concentration of the extract (p = 0.000 <α = 0.05, where H0 4 is rejected). Duncan's Multiple Range Test Showed that acid fraction, has the highest contribution to the significance of the antioxidant activities Followed by ethanol extract and dichloromethane fraction. Keywords: Vernonia amygdalina, antioxidant, DPPH INTRODUCTION Indonesia is rich in various kinds of flora, from 40 thousand species of flora that grows in the world, 30 thousand of them grow in Indonesia and around 26% have been cultivated and the remaining 74% are still. Those that has be cultivated more than 940 types are used as traditional medicine (Syukur and Hernani, 2002). Today, the world of medicine and health care concentrate on free radicals and antioxidants. This is because most diseases are initiated by the presence of excessive oxidation reactions in the body. This reaction causes the formation of free radicals and are very active that it can damage the structure and function of cells. However, the reactivity of free radicals can be inhibited by antioxidant systems that complement the body's immune system (Winarsi and Hery, 2007). Traditional medicine occupies a central place among rural communities in developing countries where the provision of health services are without an efficient public health care system (WHO, 2003). For many, traditional herbal medicines may be the only source of care

The main reason to explain this is that traditional medicine is often more accessible than the licensed drug although no record that proves the resilience of the whole plant extract may be due to a synergistic action of their constituents; Phytotherapy may produce fewer side effects than Chemotherapy (Willcox and Bodeker, 2000). African leaf has been widely used for drugs and eots of researches has been done on the effect of the plant as an antibacterial (Pinem et al., 2012), antimutagenik (Ginting, 2012), anticancer (Owoeye et al., 2010), antidiabetic (Atangwho et al. 2007; Nwanjo and Nwokoro, 2004) and analgesic (Njan et al., 2008). African leaf are said to be used in treating 25 common diseases in subSaharan Africa, such as fever, and various types of intestinal complaints, as well as parasitic diseases such as malaria caused. African leaf also helps to cleanse the body's vital organs such as the liver and kidneys. They are also used in the treatment of skin infections such as ringworm, rashes and eczema (Radwan and Salama, 2006). The results of the study Ejoh et al., (2007) and Ijeh et al., (2010) showed that African leaf

FMIPA/Biology/Universitas Advent Indonesia/Bandung

Page 1

Antioxidant, March 2016 contains many nutrients and chemicals, among others: 19.2% Protein, Fiber 19.2%, 68.4% carbohydrates, fat 4.7%, Ascorbic acid 166.5 mg / 100 g, Carotenoids 30 mg / 100 g, Calcium 0.97 g / 100 g, 7.5 mg iron / 100 g, Phosphorus, Potassium, Sulfur, Sodium, Manganese, Copper, Zinc, Magnesium and Selenium. Other chemical compounds are antioxidants such as: Saponin (Vernoniosida and steroid saponin), sesquiterpene lactones (Vernolida, Vernodalol, Vernolepin, Vernodalin, and Vernomygdin), Flavonoids, Koumarin, phenolic acids, Lignans, Xanton, Terpenes, peptides, and luteolin. Seeing some of the pharmacological effects of the African leaf and for the issue to be addressed in this study, this research entitled,”Antioxidant Activity of African Leaves (Vernonia amygdalina) extract using of 1,1-diphenyl-2picrylhydrazyl (DPPH)” is done.

secondary metabolites can be identified by performing screening test using the treatment and the provision of certain reagents by searching eight active compounds groups in plants such as phenolics, alkaloids, flavonoids, tannins, sesquiterpenes, monoterpenes, steroids and Triterpenoid, saponins and quinone.

RESEARCH METHODS Tools and materials The tools used in this research are: oven, tube separators, vortex, digital scales, a measuring cup, stir bar, vacuum rotatory evaporator, spectrophotometer Beoco S-26, the cup vaporizer, Erlenmeyer flask, flask, pipette, machine maceration. The materials used in this research is African leaves, HCl 2N, mayer reagents, reagent Dragendorf, FeCl3, Gelatin solution of 1%, Mg powder, Amil alcohol, ether, vanillin solution of 1 gr, concentrated H2SO4, 5% KOH.

Extract concentration Extraction and concentration procedure were performed in this study, by taking 3000 ml maserat that have been obtained through the process of maceration then evaporated using a rotatory vacuum evaporator, the solvent evaporates and the dissolved substances precipitate. The heating was done below the boiling point of the solvent, the compounds contained in the solvent is not damaged by high temperatures.

Making Simplisia The process of making simplicia was done through several stages. Starting with the gathering of raw material, Africa leaves as much as 1 kg. The leaves was washed with running water to clean of the dirt from the leaves, then drained. The leaves, were then, dried for 1 week using 25 watt incandescent lamp and placed in a closed place, cardboard box. This method is used so that the chemical constituents found in botanicals remain intact, particularly compounds that act as antioxidants such as flavonoids. Furthermore, dried African leaves were pulverized using a blender and then stored in a sealed container at room temperature and protected from exposure to sunlight. Active Compounds Group Screening Screening of active compounds was conducted to determine the content of active compound groups found in African leaves. The existence of

Maceration and Concentration Maserat Maceration process is carried out for 3 days. A total of 300 g simplisia of African leaves was soaked in 1100 ml 96% Ethanol solvent. During the soaking process stirring was done 2-3 times a day. This is to prevent saturation of the solution in order to obtain better results. Every day, for three days, Ethanol solvent is replaced. The filtrate obtained is collected and stored in containers that are protected from exposure to sunlight.

Making the Acid and Dichloromethane Fraction Acid fraction is made by weighing 1 g of ethanol extract and dissolving it in 50 ml dichloromethane fraction and is added with 15 ml of HCl 2N, the solution is then shaken until homogeneous. The solution was then allowed to stand for 30 minutes until there is a separation between the acid and dichloromethane. Acid layers are above, with a clear colors while the dichloromethane layer below with dark green color black. Acid layer is taken and separated from the layer of dichloromethane. Dichloromethane is poured back into the separator tube and is added with 15 ml of HCl 2N. The solution was allowed to stand for 30 minutes to separate the acid and dichloromethane. Just as what was done previously, the layer is above the acid with clear colors and layers of dichloromethane were under the dark green color black then taken acid. This was done for 3 times.


Page 2

Antioxidant, March 2016

Antioxidant Activity Test. Stable free redical 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) is used to test the antioxidant activities. DPPH will provide wave absorption at 515 nm. Variation of ethanol extract, acid and dichloromethane fraction were used: 10 ppm, 20 ppm, 50 ppm, 100 ppm, 200 ppm, 500 ppm and 1000 ppm. The procedure for obtaining the concentration variation is by weighing, each of the extract Ethanol, acid and dichloromethane fraction as much as 1 g. Then they were dissolved in 100 ml of 96% and was vortex to make it homogeneous. This solution is referred to as a stock solution. Further dilution was done starting from the concentration of 10 ppm to 1000 ppm. Dilution to determine the concentration variations can be seen in Table 6.1 below. Tabel 1 Dilution of Variation Concentration of Ethanol Extract, Acid and Dichloromethane Fraction Concentration (ppm)

10

20

50

100

200

500

1000

Stock Solution (mL) Ethanol 96% (mL)

0,5

1

2,5

5

10

25

50

49,5

49

47,5

45

47,5

25

0

After dilution is done, 4 ml of the various concentrations of ethanol extract, acid and dichloromethane fractions were filled into 5 tubes and each tube is mixed with 1 ml of DPPH, total number of tubes is 105 tubes. The solution was incubated for one hour away from sunlight. The controlled measured value of absorbance is at a wavelength of 515 nm. The difference in wavelength shows the antioxidant activity. The magnitude of the inhibition percentage is calculated using the following formula: (Abs. Blanko-Abs. Sample) (%) = --------------------------------- x100 (Abs. Blanko) Data analysis Data obtained were analyzed using Statistical Analysis Test, Linear Regression to determine the direction of the relationship between independent variables and the dependent variable to predict the value of the dependent variable when the independent variables increase or decrease, ANOVA (analysis of variants) to determine the significance of the difference in

average on the antioxidant activity of the extract concentration variations, and if the ANOVA obtained is significant, the Duncan's Multiple Range Test is used to know which concentration and extract/fraction and concentration that have the highest antioxidant activity. RESULTS AND DISCUSSION Group Test Result of active Chemical Compound of African leaves extract is shown in the table below. Table 2 Chemical Compound Grups Test Result No 1 2 3 4

Compounds Flavonoid Alkaloid Fenolat Tanin

Ya √ √

No

√ √

5

Monoterpen dan Seskuiterpen

√

6 7 8

Steroid dan Triterpenoid Kuinon Saponin

√ √

√

The result shows that African leaves contains flavonoids, alkaloids, phenolic, quinone, saponin, monoterpenes and sesquiterpenes, tannins, steroids and Triterpenoid. Results maceration and Fractionation It can be seen in the following table the Ethanol extract, acid and dichloromethane fraction of African leaves in terms of percent yield the percentage of products that were produce compared to the raw materials processed and obtained by the formula: % Acquisition Extract = (weight Extract) / (Heavy Crude) x 100 Table 3 Rendement Percentage of African Leaves in Ethanol Extract, Acid and Dichloromethane Fraction Extract Weight (gr) 525

Simplisia

1

Ethanol


Type

Exctraction/Fraction result Weight Types (gr) 27,57 Ethanol 0,46 Acid (HCl) Diclorometh 0,57 ane

Rendem ent 5,25% 46% 57%

Page 3

Antioxidant, March 2016 Based on the calculation formula written above, the yield of ethanol extract that has been obtained is 5.25%, while the yield on acid fraction was 46% and the yield of dichloromethane fraction was 57%. The yield is calculated after the extract is concentrated by evaporation. Antioxidant Activities of Ethanol Extract Descriptive Analysis The table below shows the descriptive analysis of the antioxidant activities of Ethanol extract Table 4 Descriptive Data of Ethanol Extract Treatment Grup

Ethanol Extract

Conc. (ppm) 10 20 50 100 200 500 1000

N 5 5 5 5 5 5 5

Average (%) 57,33 57,40 58,40 62,77 63,38 56,94 60,46

Stend. Error 0,77 1,17 1,56 1,58 2,06 1,96 0,91

St. Deviation 0,34 0,52 0,70 0,70 0,92 0,88 0,41

It was found that the highest rates Ethanol extract antioxidant activity at average percent inhibition is at the concentration of 200 ppm with a mean value of 63.38% and the lowest is at the concentration of 500 ppm with a mean value of 56.94%. It means that the higher the average value, the higher the percent inhibition of antioxidant activity. Linear regression Ethanol Extract Figure 1. Concentration and Antioxidant Activity Correlation Graphic of Ethanol Extract after Additional of DPPH. Antioxidant Activity Percentage Average 64 63 62

y = 0.0008x + 59.312 R² = 0.0112

61 60 59 58 57 56 0

500

1000

1500

The results of figure 1 above, it was found that the extract Ethanol has a positive regression correlation between the concentration of the extract and the mean percent inhibition of ethanol extract after a mixed solution of DPPH. Regression correlation value is Y = 0.0008 X + 59.312 with a correlation coefficient R ^ 2 =

0.0112. This suggests that the increased concentration of ethanol extract provides increased percent inhibition positively as much as 0.0112 (1.12%). Table 5 Linear Regression Analysis fo Ethanol Extract Model 1 SS DF MS F Sig. Regression Residual Total

32,30 248,69 281,02

1 33 34

32,30 7,53

4,286

0,046

The above table shows the significant results with p = 0.046, these results are less than the value α = 0.05 which indicates that there is a significant regression correlation between the concentration of ethanol leaf extract antioxidant dengan aktivitas Africa. So this means an increase in antioxidant activity along with increased concentration of ethanol extract, found significant. Analysis of Variance (ANOVA) Ethanol Extract Table 6 Statistical Analysis (Anova) of Various Ethanol Extract Concentration and Antioxidant Activity. Treatment Grup Between Ethanol Grup Extract Within Grup Total

SS

DF

MS

217,73

6

36,28

63,26 281,02

28 34

2,26

F

Sig

16,060

0,000

Ethanol extract after addition of DPPH solution shows the value of p = 0.000 is smaller than α = 0.05 so the hypothesis that "there is no difference in the antioxidant activity of the extract concentration variations Leaves Ethanol Africa using DPPH method", was rejected. This means that there are significant differences in antioxidant activity in various concentration of ethanol extract of leaves Africa using DPPH. Duncan's Multiple Range Test Table 7 Duncan’s Multiple Range Test for Ethanol Extract Concentration N Subset for alpha = 0,05 1 2 3 500 5 56,9400 10 5 57,3300 20 5 57,4000 50 5 58,4000 1000 5 60,4600 100 5 62,7700 200 5 63,3800 Sig. 0,171 1,000 0,526

From the above results are based on the results of ANOVA Duncan through the mean percent


Page 4

Antioxidant, March 2016 inhibition can be seen the antioxidant activity of the extract ethanol after a mixed solution of DPPH found that concentrations of 200 and 100 ppm indicates the concentration of the extract ethanol leaves Africa the highest in contributing to the significance of the results of analysis followed by a second group that is concentration of 1000 ppm, and a third group yaitukonsentrasi 50, 20, 10 and 500 ppm. Antioxidant activity of Fraction Acid Data Descriptive In Table 7 are the average of the highest antioxidant activity of acid fraction as average percent inhibition, as measured by the DPPH Spectrophotometer method Beoco S-26 after the addition of DPPH contained at a concentration of Treatment

Diklorometh ane

Concentrati on 10 20 50 100 200 500 1000

N 5 5 5 5 5 5 5

Mean (%) 72,71 63,39 56,24 54,66 53,91 62,65 44,26

Standard Error 4,25 1,98 13,69 1,26 1,08 2,85 4,38

Standar Deviation 1,90 0,88 6,12 0,56 0,48 1,27 1,96

500 ppm with a mean value of 89.32% and the lowest average at concentrations of 10 ppm with a mean value of 57.90%. Linear Regression Test Acid Fraction Picture 2 Concentration and Antioxidant Activity Correlation Graphic of Acid Fraction Ethanol Extract after Additional of DPPH. Antioxidant Activity Percentage Average

Table 8 Regression Test Fraction Acid Model Regression

SS 3580,45

DF 1

MS 3580,45

Residual

2277,21

33

69,06

Total

5857,66

34

F

Sig.

8,1 0

0,00

The above results show significant results with p = 0.000, these results are less than the value α = 0.05 which shows that there are significant regression correlation between the concentration of the antioxidant activity of leaf acid fraction Africa. So this means an increase in antioxidant activity due to the increase in the fraction of acid, found to be significant. 4.3 Analisis Varians (ANAVA) Fraksi Asam Tabel 4.3 Statistical Analysis (Anova) Various Acid Fraction and Antioxidant Activity Treatment Acid

Between Grup Within Grup Total

SS

DF

MS

5791,11

6

965,18

66,55 5857,66

28 34

2,37

F

Sig

406,06

0,00

Fraction acid after the addition of DPPH showed the value of p = 0.000 is smaller than α = 0.05. So the hypothesis which states that "there is no difference in the antioxidant activity of various concentration of acid fraction Leaves Africa using DPPH method", was rejected. This means that there are differences in the variation of the concentration of the antioxidant activity Daun acid fraction Africa using DPPH.

100

Duncan's Multiple Range Test

90 80

y = 0.0164x + 74.354 R² = 0.1853

70 60 50 0

200

400

600

800

1000

1200

The results of figure 4.1 above, shows that the fraction of the acid had a negative regression correlation between the concentration of the extract and the mean percent inhibition of acid fraction after a mixed solution of DPPH. Regression correlation value is Y = 0.0164 X + 74.354 with a correlation coefficient R ^ 2 = 0.1853. This suggests that the increased concentration of acid fraction providing increased percent inhibition negatively as 0.1853 (18.53%).

Table 7 Duncan’s Multiple Range Test of Acid Fraction Subset for alpha = 0,05 Concentration 10 20 1000 50 200 100 500 Sig.

N 5 5 5 5 5 5 5

1 57,9000 59,3400

2

3

84,1500 84,6000

0,151

0,648

87,4900 88,5100 89,3200 0,086

From the results of table 4.3 above can be seen the antioxidant activity of acid with a time of incubation for 1 hour after mixed DPPH solution is found that the concentration of 500.100 and 200 ppm indicates the concentration of the fraction of Asam leaves Africa the highest in contributing to the significance of the results of analysis, followed by a second group that is 50


Page 5

Antioxidant, March 2016 and 1000 ppm concentration, then a third group of 20 and 10 ppm. Antioxidant activity Faction dichloromethane

Treatment Between Dichloro Grup methane Within Grup Total

SS

DF

MS

2.431,77

6

405,29

957,12 3.388,89

28 34

34,18

F

Sig

11,857

0,00

Descriptive Data Table 5.1 Descriptive Data Faction dichloromethane In Table 5.1 are the average of the highest antioxidant activity dichloromethane fraction as average percent inhibition, as measured by the method Spectrophotometer Beoco S-26setelah addition of DPPH obtained at a concentration of 10 ppm with a mean value of 72.71% and the lowest average 1000 ppm with a mean value 44.26%.

From Table 5.3, it can be seen that the fraction of dichloromethane after addition of DPPH solution showed showed the value of p = 0.000 is smaller than α = 0.05, so the hypothesis that "there is no difference in the antioxidant activity of varying concentrations dichloromethane fraction Leaves Africa using DPPH" rejected. This means that there are differences in the variation of the concentration of the antioxidant activity dichloromethane extract fraction Leaves Africa using DPPH. Duncan's Multiple Range Test

Linear Regression Test Faction dichloromethane Figure 5.1 Correlation Graphs Concentration and Antioxidant Activity Faction dichloromethane after addition of solution of DPPH The results of Figure 5.1 above, shows that the fraction of the dichloromethane has a positive correlation between the concentration of the extract and the mean percent inhibition of dichloromethane fraction after a mixed solution of DPPH. Regression correlation value is Y = 0.0161 X + 62.597 with a correlation coefficient R ^ 2 = 0.428. This suggests that the increased concentration of dichloromethane fraction providing increased percent inhibition positively as much as 0.428 (42.8%). Table 5.2 Regression Test dichloromethane Fraction

The above results show significant results with p = 0.000, these results are less than the value α = 0.05 which shows that there are significant regression correlation between the concentration of the antioxidant activity of leaf dichloromethane fraction Africa. So this means that the increased antioxidant activity along with increased concentrations of dichloromethane fractions, found to be significant. Analysis of Variance (ANOVA)

Table 5.4 Fraction Duncan Multiple Range Test dichloromethane Concentration 1000 200 100 50 500 20 10

N 5 5 5 5 5 5 5

Sig.

1 44,2600

Subset for alpha = 0,05 2 3 53,9100 54,6600 56,2400

1,000

0,558

4

56,2400 62,6500 63,3900 0,077

72,7100 1,000

From the table above is based on the results of ANOVA Duncan through the mean percent inhibition can be seen the antioxidant activity of the fraction of dichloromethane after mixing a solution of DPPH showed the group the concentration of 10 ppm fraction of dichloromethane leaves Africa the highest in contributing to the significance of the analysis, followed by the second group, namely the Model Regression Residual Total

SS 1.419,55 1.969,33 3.388,89

DF 1 33 34

MS 1.419,55 59,67

F

Sig.

23,787

0,000

concentration of 20, 500 and 50 ppm, then the third group of 10 ppm, 100 ppm dan200 ppm and a third group that is a concentration of 1000 ppm. Comparison of Antioxidant Activity Descriptive Data Table 6.1 Comparison Data Percent Inhibition Extract has Highest Antioxidant Activity

Table 5.3 Test Results Analysis Varian (ANOVA) concentration variation dichloromethane Fraction and Antioxidant Activity.


Page 6


The above table shows that the highest values are those of the fraction of acid (HCl) as average percent inhibition, after adding DPPH is 20.50%, while the average value was lowest for the dichloromethane fraction after the added DPPH ie 20.50%. 6.2 Data Analysis in Statistics Table 6.2 Test Results Analysis Varian (ANOVA) Has the Highest Antioxidant Activity Total Square ( Type III)

Source

df

Middle Square

F

17677,07

20

883,85

Intercept

450679,32

1

450679,32

68,305 0,000

Extract

9236,46

2

4618,22

34828,899 0,000

Concentration

1197,74

6

199,62

356,901 0,000

Extract* Concentration

7242,88

12

603,57

15,427 0,000

12,94

46,645 0,000 95% Interval Kepercayaan untuk Perbedaan

1086,94

84

Total

469443,34

105

Corrected Total

18764,02

Extract (I) Etanol

Extract (J)

St. 104 Dev Average iatio Diff. (I-J) n

Asam Diklorometan

Asam

-19,23

Lower Upper Bound Bound

Sig.

0,86 0,000 -20,943 -17,523

1,26

0,86 0,145

-0,444

2,976

Etanol

19,23

0,86 0,000

17,523

20,943

Diklorometan

20,50

0,86 0,000

18,789

22,209

Diklorometan Etanol

-1,26

0,86 0,145

-2,976

0,444

Asam

-20,50

0,86 0,000 -22,209 -18,789

From this table (Table 6.2) can be obtained p = 0.000, this result is smaller than the value of α = 0.05. Thus, the hypothesis which states that "there is no difference in the antioxidant activity of the type and concentration variation of leaf extracts with DPPH Africa", was rejected. Thus, it can be concluded that there are significant differences (real) of the antioxidant activity of the extract Ethanol, acid fractions and fractions of dichloromethane. Therefore, Duncan's multiple range test can be done. Table 6.3 Duncan's Multiple Range Test Results in Group Analysis Extract has the Highest Antioxidant Activity. Subset Extract (Ethanol, Acid Dikloromethane)

N

1

Dikloromethane Ethanol

35 35

58,2600 59,5257

Acid

35 Sig.

2

78,7586 0,145

CONCLUSION From the analysis of variance leaf extract concentration Ethanol Africa after the addition of DPPH showed that variations in leaf extract concentration Ethanol Africa through DPPH test methods have antioxidant activity with a significant difference.

Sig.

Corrected Model

Error

antioxidant activity is highest in the group followed by acid fraction is the fraction of a second group and the third group ie Ethanol fraction of dichloromethane.

1,000

The table (Table 6.3) shows that the highest antioxidant activity of all groups of extracts with

From the analysis of variance fraction of acid concentration after the addition of DPPH Leaves Africa found that varying concentrations Acid Leaf extract fraction Africa through DPPH test methods have antioxidant activity with a significant difference. From the analysis of variance dichloromethane fraction concentration after the addition of DPPH Leaves Africa found that varying concentrations dichloromethane extract fraction African Leaf through DPPH test methods have antioxidant activity with a significant difference. From the analysis of variance comparison between the highest antioxidant activity of ethanol extract, fractions acid and dichloromethane fraction leaves Africa after the addition of DPPH was found that the comparison among the three types of the extract group had significant differences in antioxidant activity. BIBLIOGRAPHY 1. Adijuwana, M. Nur A. (1989). Teknik Spektroskopi in Biological Analysis. Bogor: Inter-University Center IPB. 2. Amirth, Pal, singh, (2002). A Trestie on Phytochemistry. Emedia Science Ltd. 3. Andlauer, W. and P. Furst (1998). Antioxidative Power of Phytochemicals with Special Reference to Cereals. in: Rajeshwar, Y., G. P. S. Kumar, M. Gupta, U. K. Mazumder. 2005. Studies on In Vitro Antioxidant Activities of Methanol Extract of Mucuna pruriens (Fabaceae) Seeds. European Bulletin of Drug Research, Vol 13, N ° 1. 4. Anshory, H., Suparmi., And Tumimy, A. S. (2006) Antioxidant activity Rambutan Fruit Leather (Nephalium lappaceum L.) against the arrest of DPPH Free Radicals, Scientific Journal of Pharmacy, Faculty of Pharmaceutical UII, 9-15, Yogyakarta.


Page 7


5.

6.

7.

8.

9.

10.

11.

12.

Atangwho I. J., Ebong P.E., Eyong M.U. Eteng M.U., Uboh F.E. Vernonia amygdalina Del. (2007): a potential prophylactic antidiabetic agent in lipids complication. Glob. J. Pure Appl. Sci.; 13: 103-106. Bidlack, W. R. and W. Wang. (2000). Designing Functional Foods to Enhance Health. Technomic Publishing Co., Inc., Lancaster, Basel. Boer, Y. (2000). Antioxidant Activity Test Skin Fruit Extract Kandis (Garcinia parvifolia Miq), Journal of Mathematics and Science 1, (1), 26-33. Christyaningsih, J. (2003). Effect of vitamin E and C supplementation on the activity of the enzyme super oxide dismutase (SOD) in erythrocytes of mice exposed to cigarette smoke. JIPTU. Poor. MOH RI Health Data Center, (1995), Principles of Consolidation and Development of Health Information System, Jakarta. MOH RI, (2000). Parameters General Standard Extracts Plant Medicine. Directorate General of Drug and Food Control. Traditional Drug Control Directorate. First printing. Things 9-10. MOH RI, (2007), Minister of Health of the Republic of Indonesia No. 381 / Director General of POM Indonesian Ministry of Health. (1995). Indonesian Pharmacopoeia. Edition IV. Jakarta: Ministry of Health of the Republic of Indonesia. P. 1083, 1084. Dewi, M. and Naufal, Z. (2010). "The extraction of antioxidants (lycopene) From Tomato Fruit Using Mixed Solvent, N Hexane, Acetone and Ethanol". Chemical Engineering Department, University of Diponegoro. Semarang. Ejoh R. A, Nkonga D. V, Inocent G, Moses M. C (2007). Nutritional components of some non-conventional leafy vegetables consumed in Cameroon. Sir. J. Nutr., 6: 712717. Elfita, Supriyatna, Bahti, H. H., Dachriyanus, (2006), "Chemical Ingredients Antioxidants Active Fraction Of Leaves Kandis Elephants

(Garcinia griffithii T. Anders)". Pharmacy. 4 (3), 138-143 Ginting, R. A. (2012). Crude Characterization and Screening of phytochemical and Test. Antimutagenik Leaf Extract Ethanol Africa (Vernonia amygdalina, Del.) In Mice. Proceedings of the National Seminar on Chemistry, 2013, University of North Sumatra. 13. Goldberg, G. (2003). Plants: Diet and Health. I Owa State Press, Blackwell Publishing Company, 2121 State Avenue, Ames, USA. 14. Handa, S. S., Khanuja, S. P. S., Longo, G., and Rakesh, D. D. (2008). Extraction Technologies for Medicinal and Aromatic Plants. ICS UNIDO. Trieste. p.21-22. 15. Harborne, J. B., (1987), Methods of Analyzing the Modern Way Guidance Phytochemicals Plants, translated by Padmawinata, K., and Sudiro, I., Publisher ITB, Bandung 10-21. P. Res. (2002). Essay. (2002). Vol. 16. Int. J. Biol. Chem. Bandung. Toxicol. University of Indonesia. (1997). (2008). p. 2 No. 1. Technol. Int. (2002). Jakarta.

(2007). Yogyakarta. (2003). 16. Google Translate for Business:Translator ToolkitWebsite TranslatorGlobal Market Finder

UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK DAUN AFRIKA (Vernonia amygdalina) DENGAN METODE 1,1-DIFENIL-2-PIKRILHIDRAZIL (DPPH)


Page 8

Antioxidant, March 2016 The Antioxidant Activity Extract of African’s Leaves (Vernonia amygdalina) with 1,1-Diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH) Method 𝐃𝐞𝐬𝐢 𝐍𝐚𝐭𝐚𝐥𝐢𝐚 𝐒𝐚𝐫𝐢𝟏 , 𝐉𝐨𝐬𝐡𝐮𝐚 𝐇. 𝐋. 𝐓𝐨𝐛𝐢𝐧𝐠 𝟐 , 𝐃𝐨𝐧𝐧 𝐑. 𝐑𝐢𝐜𝐤𝐲 𝟑 Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Pengetahuan Alam, Universitas Advent Indonesia (UNAI), Jl. Kolonel Masturi no. 288, Parongpong, Bandung Barat 40559, Indonesia ABSTRAK Studi ini dilakukan untuk menguji aktivitas antioksidan dari Daun Afrika (Vernonia amygdalina) dengan metode radikal bebas 1,1-Difenil-2Pikrilhidrazil (DPPH). Isolasi senyawa aktif Daun Afrika dilakukan dengan cara ekstraksi, maserasi dan fraksinasi. Dari pengujian fitokimia didapat senyawa: Flavonoid, Alkaloid, Kuinon, Saponin, Monoterpen dan Seskuiterpen. Ekstrak yang digunakan yaitu ekstrak Etanol, fraksi Asam, fraksi Diklorometan dengan variasi konsentrasi 10, 20, 50, 100, 200, 500, dan 1000 ppm. Analisis terhadap aktivitas bahan uji dilakukan dengan cara mengukur data absorbansi sampel (persen hambat) pada panjang gelombang 515 nm. Hasil penelitian ini menunjukan adanya perbedaan aktivitas antioksidan yang signifikan pada ekstrak Etanol (p = 0,000< α = 0,05, H0 1) ditolak), fraksi Asam (p = 0,000< α = 0,05, H0 2 ditolak)dan fraksi Diklorometan (p = 0,000< α = 0,05, H0 3 ditolak). Dari penelitian ini didapat juga perbedaan aktivitas antioksidan yang signifikan antara ketiga jenis ekstrak yang digunakan (p = 0,000< α = 0,05), variasi konsentrasi (p = 0,000 < α = 0,05) dan interaksi jenis dan variasi konsentrasi ekstrak (p = 0,000< α = 0,05, H0 4 ditolak). Uji Jarak Berganda Duncan menunjukan bahwa fraksi Asam memberi sumbangan terbesar terhadap kesignifikansian analisis yang diikuti oleh ekstrak Etanol dan fraksi Diklorometan. Kata Kunci: Vernonia amygdalina, Antioksidan, DPPH ABSTRACT This study was conducted to test the antioxidant activity of African’s leaves(Vernonia amygdalina) using free radical method of 1,1-Diphenyl-2picrylhydrazyl (DPPH). Isolation of active compound African’s leaves was carried out by extraction, maceration and fractionation. The phytochemical testing shows the existence of flavonoids, alkaloids, quinone, saponin, monoterpenes and sesquiterpenes. Extracts used are ethanol extract, acid fraction, dichloromethane fraction with concentration of variations of 10, 20, 50, 100, 200, 500, and 1000 ppm. Analysis of the activity of the test material was done by measuring the absorbance of the sample data (percent inhibition) at a wavelength of 515 nm. These results indicate the existence of significant differences in antioxidant activity in Ethanol extract (p = 0.000 <α = 0.05, 𝐻0 1 is rejected), acid fraction (p = 0.000 <α = 0.05, 𝐻0 2 is rejected) and dichloromethane fraction (p = 0.000 <α = 0.05, 𝐻0 3 is rejected). The result of this study also shows that there was significant differences in antioxidant activity between the three types of extract used (p = 0.000 <α = 0.05), variations concentration (p = 0.000 <α = 0.05) and the interaction between types and variations in the concentration of the extract ( p = 0.000 <α = 0.05, 𝐻0 4 is rejected). Duncan's Multiple Range Test showed that acid fraction, has the highest contribution to the significance of the antioxidant activities followed by ethanol extract and dichloromethane fraction. Keywords: Vernonia amygdalina, Antioxidant, DPPH PENDAHULUAN Indonesia kaya dengan berbagai jenis flora, dari 40 ribu jenis flora yang tumbuh di dunia, 30 ribu diantaranya tumbuh di Indonesia dan sekitarnya 26% telah dibudidayakan dan sisanya sekitar 74% masih tumbuh liar di hutan-hutan. Dari yang telah dibudidayakan lebih dari 940 jenis digunakan sebagai obat tradisional (Syukur dan Hernani, 2002). Dewasa ini, dunia kedokteran dan kesehatan banyak membahas tentang radikal bebas dan antioksidan. Hal ini terjadi karena sebagian besar penyakit diawali oleh adanya reaksi oksidasi yang berlebihan di dalam tubuh. Reaksi ini menyebabkan terbentuknya radikal bebas yang sangat aktif yang dapat merusak struktur serta fungsi sel. Namun, reaktivitas radikal bebas itu dapat dihambat oleh sistem antioksidan yang melengkapi sistem kekebalan tubuh (Winarsi dan Hery, 2007). Obat tradisional menempati tempat sentral di kalangan masyarakat pedesaan di negara-negara berkembang untuk penyediaan pelayanan kesehatan tanpa adanya sistem perawatan kesehatan umum yang efisien (WHO, 2003). Bagi banyak orang, obat-obatan herbal tradisional mungkin satu-satunya sumber perawatan yang tersedia. Alasan utama untuk menjelaskan hal ini adalah, obat tradisional sering lebih mudah diakses dibandingkan dengan obat berlisensi tidak ada catatan yang membuktikan ketahanan terhadap seluruh ekstrak tanaman mungkin karena tindakan sinergis dari konstituen mereka; fitoterapi mungkin


menghasilkan efek samping yang lebih sedikit dibandingkan kemoterapi (Willcox dan Bodeker, 2000). Daun Afrika telah banyak digunakan untuk obat-obatan dan telah banyak penelitian yang telah dilakukan untuk manfaat tumbuhan tersebut seperti antibakteri (Pinem dkk., 2012) antimutagenik (Ginting, 2012), antikanker (Owoeye dkk., 2010), antidiabetes (Atangwho dkk., 2007; Nwanjo dan Nwokoro, 2004) dan analgetik (Njan dkk., 2008). Daun Afrika digunakan dalam mengobati 25 penyakit umum di subSahara Afrika, seperti demam, dan berbagai jenis keluhan usus, serta penyakit parasit yang disebabkan seperti malaria. Daun Afrika juga membantu untuk membersihkan organ-organ vital tubuh seperti hati dan ginjal. Daun Afrika juga digunakan dalam pengobatan infeksi kulit seperti kurap, ruam dan eksim (Radwan dan Salama, 2006). Hasil penelitian Ejoh dkk., (2007) dan Ijeh dkk., (2010) menunjukan bahwa tanaman Daun Afrika banyak mengandung nutrisi dan senyawa kimia, antara lain: Protein 19,2%, Serat 19,2%, Karbohidrat 68,4%, Lemak 4,7%, asam Askorbat 166,5 mg/100 g, Karotenoid 30 mg/100 g, Kalsium 0,97 g/100 g, Besi 7,5 mg/100 g, Fosfor, Kalium, Sulfur, Natrium, Mangan, Tembaga, Zink, Magnesium dan Selenium. Senyawa kimia lain yang merupakan zat antioksidan yang terkandung dalam Daun Afrika antara lain: Saponin (Vernoniosida dan Steroid Saponin), Seskuiterpen Lakton (Vernolida,

Page 9

Antioxidant, March 2016 Vernodalol, Vernolepin, Vernodalin, dan Vernomygdin), Flavonoid, Koumarin, Asam Fenolat, Lignan, Xanton, Terpen, Peptida, dan Luteolin. Melihat beberapa efek farmakologi pada tanaman Daun Afrika, maka topik masalah yang akan diselesaikan pada penelitian ini adalah: Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Afrika (Vernonia amygdalina) dengan metode 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH).

METODE PENELITIAN 1. Alat dan Bahan Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah mesin penyerbukan, oven, tabung pemisah, vorteks, timbangan digital, gelas ukur, batang pengaduk, vacum rotatory evaporator, spektrofotometer Beoco S-26, cawan penguap, tabung Erlenmeyer, labu ukur, pipet tetes, mesin maserasi. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Daun Afrika, HCl 2 N, pereaksi mayer, pereaksi Dragendorf, FeCl3, larutan Gelatin 1%, serbuk Mg, Amil alkohol, Eter, Larutan vanilin 1 gr, H2SO4 pekat, KOH 5%.

bawah titik didih pelarut, senyawa yang terkandung dalam pelarut tidak rusak oleh suhu tinggi. 5.1. Pembuatan Fraksi Asam dan Fraksi Diklorometan Pembuatan fraksi Asam dilakukan dengan menimbang 1 g ekstrak etanol yang kemudian dilarutkan ke dalam 50 ml fraksi Diklorometan dan ditambahkan 15 ml HCl 2 N, larutan kemudian dikocok hingga homogen. Larutan kemudian didiamkan selama 30 menit hingga terjadi pemisahan antara Asam dan Diklorometan. Lapisan Asam berada di atas dengan warna jernih sedangkan lapisan Diklorometan berada di bawah dengan warna hijau tua kehitaman. Lapisan Asam diambil dan dipisahkan dari lapisan Diklorometan. Diklorometan dituangkan kembali ke dalam tabung pemisah dan ditambahkan 15 ml HCL 2 N. Larutan didiamkan selama 30 menit untuk memisahkan Asam dan Diklorometan. Sama seperti sebelumnya, lapisan Asam berada di atas dengan warna jernih dan lapisan Diklorometan berada di bawah dengan warna hijau tua kehitaman kemudian Asam diambil. Prosedur ini diulang sekali lagi untuk mendapatkan Asam ketiga kalinya.

2. Pembuatan Simplisia 6. Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH Proses pembuatan simplisia dilakukan melalui beberapa tahapan. Tahapan tersebut dimulai dengan mengumpulkan bahan baku berupa Daun Afrika sebanyak 1 kg. Daun Afrika dicuci dengan air mengalir untuk membersihkan kotoran yang melekat pada daun, kemudian ditiriskan. Selanjutnya, daun dikeringkan selama 1 minggu dengan menggunakan 2 buah lampu pijar 5 watt dan diletakan di tempat yang tertutup seperti kotak kardus. Cara ini digunakan agar kandungan kimia yang terdapat pada simplisia tetap terjaga, terutama senyawa yang bersifat sebagai antioksidan seperti Flavonoid. Selanjutnya Daun Afrika yang telah kering dijadikan serbuk dengan menggunakan blender kemudian disimpan dalam wadah tertutup pada suhu kamar dan terlindung dari paparan sinar matahari. 3. Penapisan Golongan Senyawa Aktif Penapisan senyawa aktif dilakukan untuk mengetahui kandungan golongan senyawa aktif yang terdapat dalam Daun Afrika. Keberadaan metabolit sekunder dapat diidentifikasi keberadaannya dengan melakukan uji penapisan dengan menggunakan perlakuan dan pemberian pereaksi-pereaksi tertentu dengan mencari delapan golongan senyawa aktif dalam tumbuhan seperti Fenolat, Alkaloid, Flavonoid, Tanin, Seskuiterpen, Monoterpen, Steroid dan Triterpenoid, Saponin dan Kuinon. 4. Maserasi dan Pemekatan Maserat Proses maserasi dilakukan selama 3 hari. Sebanyak 300 g simplisia Daun Afrika direndam ke dalam 1100 ml pelarut Etanol 96%. Selama proses perendaman dilakukan pengadukan sebanyak 2-3 kali sehari. Hal ini dilakukan untuk mencegah terjadinya kejenuhan pada larutan penyari sehingga diperoleh hasil yang lebih baik. Setiap harinya, untuk 3 hari, dilakukan penggantian pelarut Etanol. Filtrat yang didapat ditampung dan disimpan dalam wadah yang terlindung dari paparan sinar matahari. 5. Pemekatan Ekstrak Prosedur ekstraksi dan pemekatan ekstrak yang dilakukan dalam penelitian ini adalah dengan mengambil 3000 ml maserat yang telah diperoleh pada proses maserasi kemudian diuapkan dengan menggunakan vacum rotatory evaporator, sehingga pelarut akan menguap dan senyawa yang larut mengendap. Dengan pemanasan di


Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan menggunakan metode penangkapan radikal 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH). DPPH akan memberikan serapan pada gelombang 515 nm. Pada penelitian ini digunakan beberapa variasi konsentrasi ekstrak Etanol, fraksi Asam dan fraksi Diklorometan yaitu 10 ppm, 20 ppm, 50 ppm, 100 ppm, 200 ppm,500 ppm, dan 1000 ppm. Prosedur untuk mendapatkan variasi konsentrasi tersebut adalah dengan cara menimbang, dimana setiap ekstrak Etanol, fraksi Asam dan fraksi Diklorometan masing-masing ditimbang sebanyak 1 g. Kemudian masing-masing ekstrak dan fraksi dilarutkan ke dalam 100 ml Etanol 96% dan divorteks agar homogen. Larutan ini disebut sebagai larutan stock. Selanjutnya dilakukan pengenceran dimulai dari konsentrasi 10 ppm hingga 1000 ppm. Pengenceran untuk menentukan variasi konsentrasi tersebut dapat dilihat pada tabel 6.1 dibawah ini. Tabel 6.1 Pengenceran Variasi Konsentrasi Ekstrak Etanol, Fraksi Asam dan Fraksi Diklorometan Konsentrasi (ppm) Larutan stok (mL) Etanol 96% (mL)

10

20

50

100

200

500

1000

0,5

1

2,5

5

10

25

50

49,5

49

47,5

45

47,5

25

0

Setelah pengenceran dilakukan, masing-masing variasi konsentrasi dari ekstrak Etanol, fraksi Asam dan fraksi Diklorometan dibagi ke dalam 5 tabung dan setiap tabung dimasukan dengan 4 ml ekstrak dan dicampur dengan 1 ml DPPH sehingga jumlah seluruh tabung adalah 105. Setelah penambahan DPPH, larutan diinkubasi selama satu jam dan terlindung dari cahaya matahari. Kemudian diukur nilai absorbansinya pada panjang gelombang 515 nm yang merupakan panjang gelombang maksimum. Besarnya aktivitas antioksidan ditunjukan oleh besarnya persen hambat yang dihitung dengan menggunakan rumus berikut ini: (%)=

(𝐴𝑏𝑠. 𝐵𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜–𝐴𝑏𝑠. 𝑆𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙) x 𝐴𝑏𝑠. 𝐵𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜

100

Pengujian juga dilakukan pada masing-masing variasi konsentrasi ekstrak Etanol, fraksi Asam dan fraksi Diklorometan dengan waktu analisis 1 jam setelah penambahan DPPH dan dihitung nilai

Page 10

Antioxidant, March 2016 absorbansinya melalui Spektrofotometer pada panjang gelombang 515 nm. Kemudian blanko yang digunakan adalah 3 ml Etanol 96% ditambah 1 ml DPPH, kemudian divorteks dan diinkubasi selama satu jam lalu dihitung nilai absorbansinya kembali melalui Spektrofotometer pada panjang gelombang 515nm.

Tabel 3.1 Data Deskriptif Ekstrak Etanol Kelompok perlakuan

7. AnalisisData Ekstrak Etanol

Pada penelitian ini data yang akan diperoleh dari Spektrofotometer berupa nilai absorbansi dianalisis menggunakan Uji Analisis Statistik, dan Uji Regresi Linier untuk mengetahui arah hubungan antara variabel independen dengan variabel dependen dan untuk memprediksi nilai dari variabel dependen apabila nilai variabel independen mengalami kenaikan atau penurunan. ANAVA (Analisis Varian) digunakan untuk mengetahui signifikansi perbedaan rata-rata pada aktivitas antioksidan terhadap variasi konsentrasi ekstrak. Apabila pengujian ANAVA yang didapat adalah signifikan, maka dilanjutkan dengan Uji Jarak Berganda Duncan untuk dapat menentu kanjenis ekstrak dan konsentrasinya yang memiliki aktivitas antioksidan tertinggi.

Konsentrasi (ppm) 10 20 50 100 200 500 1000

N 5 5 5 5 5 5 5

Rerata (%) 57,33 57,40 58,40 62,77 63,38 56,94 60,46

Simpangan Baku 0,77 1,17 1,56 1,58 2,06 1,96 0,91

Simpangan Galat 0,34 0,52 0,70 0,70 0,92 0,88 0,41

Pada tabel 3.1 didapati bahwa rerata tertinggi aktivitas antioksidan ekstrak Etanol yang merupakan rerata persen hambat, terhadap DPPH yang diukur dengan metode Spektrofotometer Beoco S-26setelah penambahan DPPH didapat pada konsentrasi 200 ppm dengan nilai rerata 63,38% dan rerata terendah pada konsentrasi 500 ppm dengan nilai rerata 56,94%. Ini diartikan bahwa semakin tinggi nilai rerata persen hambat maka semakin tinggi aktivitas antioksidan.

HASIL DAN PEMBAHASAN

3.2 Uji regresi linier Ekstrak Etanol

1. Hasil Uji Golongan Senyawa Kimia Ekstrak Daun Afrika

Gambar 3.1 Grafik Korelasi Konsentrasi dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol setelah Penambahan Larutan DPPH

Tabel 1.1 Hasil Uji Golongan Senyawa Kimia No 1 2 3 4 5 6 7 8

Nama Senyawa Flavonoid Alkaloid Fenolat Tanin Monoterpen dan Seskuiterpen Steroid dan Triterpenoid Kuinon Saponin

Ada √ √

Rata-rata Persentase Aktivitas Antioksidan

Tidak Ada

64 63 62 61 60 59 58 57 56

√ √ √ √ √ √

Dari pengujian senyawa kimia yang telah dilakukan, maka diketahui bahwa tanaman Daun Afrika mengandung Flavonoid, Alkaloid, Kuinon, Saponin, Monoterpen dan Seskuiterpen. Akan tetapi pada tanaman Daun Afrika tidak terdapat senyawa Fenolat, Tanin, Steroid dan Triterpenoid.

0

Pada tabel berikut dapat dilihat ekstrak Etanol, fraksi Diklorometan dan fraksi Asam Daun Afrika dalam bentuk persen rendemen yaitu persentase produk yang kita hasilkan dibanding dengan bahan baku yang terolah dan didapat dengan rumus: Berat Ekstrak x Berat Simplisia

Tabel 2.1 Persen Rendemen Daun Afrika, Ekstrak Etanol, Fraksi Asam dan Fraksi Diklorometan

3. Aktivitas Antioksidan Ektrak Etanol

1000

Tabel 3.2 Uji Regresi Linier Ekstrak Etanol Model Jumlah Derajat Rerata Kuadrat Kebebasan Kuadrat Regresi 32,30 1 32,30 Sisa 248,69 33 7,53 Total 281,02 34

100

Berdasarkan penghitungan dengan rumus yang tertulis di atas, maka rendemen ekstrak Etanol yang telah didapatkan adalah 5,25%, sedangkan rendemen untuk fraksi Asam adalah 46% dan rendemen fraksi Diklorometan adalah 57%. Rendemen dihitung setelah ekstrak dipekatkan melalui proses evaporasi.

500

1500

Hasil dari gambar 4.1 di atas, didapati bahwa ekstrak Etanol memiliki korelasi regresi positif antara konsentrasi ekstrak dan rerata persen hambat ekstrak Etanol setelah dicampur larutan DPPH. Nilai korelasi regresi adalah Y = 0,0008 X + 59,312 dengan koefisien korelasi R2 = 0,0112. Ini menunjukan bahwa peningkatan konsentrasi ekstrak Etanol memberikan peningkatan persen hambat secara positif sebanyak 0,0112 (1,12%).

2. Hasil Maserasi dan Fraksinasi

% Perolehan Ekstrak =

y = 0.0008x + 59.312 R² = 0.0112

Bahan Ekstrak Berat (gram)

jenis

525

simplisia

1

Ekstrak Etanol

3.1 Data Deskriptif


Hasil Ekstraksi Fraksinasi Berat Jenis (gram) 27,57 0,46 0,57

F

Sig.

4,286

0,046

atau

Ekstrak Etanol Fraksi Asam (HCl) Fraksi Diklorometan

Rendemen 5,25% 46% 57%

Page 11

Antioxidant, March 2016 Tabel di atas menunjukan hasil yang signifikan dengan nilai p = 0,046, hasil ini lebih kecil dari nilai α = 0,05 yang menunjukan bahwa terdapat korelasi regresi yang signifikan antara konsentrasi denganaktivitas antioksidan ekstrak Etanol Daun Afrika. Maka hal ini diartikan peningkatan aktivitas antioksidan seiring dengan peningkatan konsentrasi ekstrak Etanol, didapati signifikan. 3.3

Analisis Varians (ANAVA) Ekstrak Etanol

Tabel 3.3 Hasil Uji Analisis Varian (ANAVA) Variasi Konsentrasi Ekstrak Etanol dan Aktivitas Antioksidan Kelompok Perlakuan

Ekstrak Etanol

Jumlah Kuadrat Antar kelompok Dalam kelompok Total

Derajat Kebebasan

Rerata Kuadrat

217,73

6

36,28

63,26 281,02

28 34

2,26

F

Sig

16,060

0,000

Tabel 4.1 Data Deskriptif Fraksi Asam

Kelompok Perlakuan

Fraksi Asam

Antar Kelompok Dalam Kelompok Total

Simpangan Baku

Jumlah Kuadrat

Derajat Kebebas an

Rerata Kuadrat

5.791,11

6

965,18

66,55 5.857,66

28 34

2,37

Rata-rata Persentase Aktivitas Antioksidan 100 90 80 70 y = 0.0164x + 74.354 R² = 0.1853 200

400

600

800

1000

1200

Hasil dari gambar 4.1 di atas,menunjukan bahwa fraksi Asam memiliki korelasi regresi negatif antara konsentrasi ekstrak dan rerata persen hambat fraksi Asam setelah dicampur larutan DPPH. Nilai korelasi regresi adalah Y = 0,0164 X + 74,354 dengan koefisien korelasi R2 = 0,1853. Ini menunjukan bahwa peningkatan konsentrasi fraksi Asam memberikan peningkatan persen hambat secara negatif sebanyak 0,1853 (18,53%).

4.1 Data Deskriptif

Rerata (%)

0,65 0,52 0,45 0,45 0,94 0,18 1,14

Gambar 4.1 Grafik Korelasi Konsentrasi dan Aktivitas Antioksidan Fraksi Asam setelah Penambahan Larutan DPPH

0

4. Aktivitas Antioksidan Fraksi Asam

N

1,46 1,16 0.99 1.00 2.11 0.40 2.56

50

Dari hasil di atas berdasarkan hasil uji ANAVA Duncan melalui rerata persen hambat dapat dilihat aktivitas antioksidan ekstrak Etanol setelah dicampur larutan DPPH didapat bahwa konsentrasi 200 dan 100 ppm menunjukan konsentrasi ekstrak Etanol Daun Afrika yang paling tinggi dalam menyumbangkan kepada signifikansi hasil Analisis diikuti oleh kelompok kedua yaitu konsentrasi 1000 ppm, dan kelompok ketiga yaitukonsentrasi 50, 20, 10 dan 500 ppm.

Konsentrasi

57,90 59,34 84,60 88,51 87,49 89,32 84,15

Uji Regresi Linier Fraksi Asam

60

Tabel 3.4 Uji Jarak Berganda Duncan Ekstrak Etanol Konsentrasi N Subset untuk alpha = 0,05 1 2 3 500 5 56,9400 10 5 57,3300 20 5 57,4000 50 5 58,4000 1000 5 60,4600 100 5 62,7700 200 5 63,3800 Sig. 0,171 1,000 0,526

5 5 5 5 5 5 5

Pada tabel 4.1 terdapat bahwa rerata tertinggi aktivitas antioksidan fraksi Asam yang merupakan rerata persen hambat, terhadap DPPH yang diukur dengan metode Spektrofotometer Beoco S-26 setelah penambahan DPPH terdapat pada konsentrasi 500 ppm dengan nilai rerata 89,32% dan rerata terendah pada konsentrasi 10 ppm dengan nilai rerata 57,90%. 4.2

Ekstrak Etanol setelah penambahan larutan DPPH menunjukan nilai p= 0,000 lebih kecil dari α= 0,05 sehingga hipotesis yang menyatakan “tidak terdapat perbedaan aktivitas antioksidan dari variasi konsentrasi ekstrak Etanol Daun Afrika dengan menggunakan metode DPPH”, ditolak. Hal ini berarti bahwa terdapat perbedaan yang signifikan pada aktivitas antioksidan dalam variasi konsentrasi ekstrak Etanol Daun Afrika dengan menggunakan metode DPPH. 3.4 Uji jarak Berganda Duncan

Kelompok Perlakuan

Fraksi Asam

10 20 50 100 200 500 1000

Simpangan Galat

F

Tabel 4.2 Uji Regresi Linier Fraksi Asam Model Jumlah Derajat Rerata Kuadrat Kebebasa Kuadrat n Regres 3.580,4 1 3.580,4 i 5 5 Sisa 2.277,2 33 69,06 1 Total 5.857,6 34 6

F

Sig.

8,10 4

0,00 0

Hasil di atas menunjukan hasil yang signifikan dengan nilai p = 0,000, hasil ini lebih kecil dari nilai α = 0,05 yang menunjukan bahwa terdapat korelasi regresi yang signifikan antara konsentrasi dengan aktivitas antioksidan fraksi Asam Daun Afrika. Maka hal ini diartikan peningkatan aktivitas antioksidan seiring dengan peningkatan fraksi Asam, didapati signifikan.

Sig

4.3 Analisis Varians (ANAVA) Fraksi Asam 406, 064

0,000


Page 12

Antioxidant, March 2016 Tabel 4.3 Hasil Uji Analisis Varian (ANAVA) Variasi Konsentrasi Fraksi Asam dan Aktivitas Antioksidan

Rata-rata Persentase Aktivitas Antioksidan

Fraksi Asam setelah penambahan DPPH menunjukan nilai p= 0,000 lebih kecil dari α=0,05. Sehingga hipotesis yang menyatakan bahwa “tidak terdapat perbedaan aktivitas antioksidan dari variasi konsentrasi fraksi Asam Daun Afrika dengan menggunakan metode DPPH”, ditolak. Hal ini berarti bahwa terdapat perbedaan aktivitas antioksidan dalam variasi konsentrasi fraksi Asam Daun Afrika dengan menggunakan metode DPPH.

80 75 70 65

4.3 Uji Jarak Berganda Duncan

55

Tabel 4.3 Uji Jarak Berganda Duncan Fraksi Asam Konsentrasi N Subset untuk alpha = 0,05

50

1 57,9000 59,3400

40

10 20 1000 50 200 100 500 Sig.

5 5 5 5 5 5 5

2

45

3

0 84,1500 84,6000 87,4900 88,5100 89,3200

0,151

0,648

0,086

5. Aktivitas Antioksidan Fraksi Diklorometan

Model

Fraksi Diklorometan

10 20 50 100 200 500 1000

5 5 5 5 5 5 5

Rerata (%) 72,71 63,39 56,24 54,66 53,91 62,65 44,26

Simpangan Baku 4,25 1,98 13,69 1,26 1,08 2,85 4,38

Jumlah Kuadrat

Regresi

1.419,55

Sisa

1.969,33

Total

600

800

1000

1200

Simpangan Galat 1,90 0,88 6,12 0,56 0,48 1,27 1,96

Pada tabel 5.1 terdapat bahwa rerata tertinggi aktivitas antioksidan fraksi Diklorometan yang merupakan rerata persen hambat, yang diukur dengan metode Spektrofotometer Beoco S-26setelah penambahan DPPH didapat pada konsentrasi 10 ppm dengan nilai rerata 72,71% dan rerata terendah pada konsentrasi 1000 ppm dengan nilai rerata 44,26%.

3.388,89

Derajat Kebebasan 1 33

Rerata Kuadrat

F

Sig.

23,787

0,000

1.419,55 59,67

34

Hasil di atas menunjukan hasil yang signifikan dengan nilai p = 0,000, hasil ini lebih kecil dari nilai α = 0,05 yang menunjukan bahwa terdapat korelasi regresi yang signifikan antara konsentrasi dengan aktivitas antioksidan fraksi Diklorometan Daun Afrika. Maka hal ini diartikan bahwa peningkatan aktivitas antioksidan seiring dengan peningkatan konsentrasi fraksi Diklorometan, didapati signifikan.

Tabel 5.1 Data Deskriptif Fraksi Diklorometan N

400

Tabel 5.2 Uji Regresi Linier Fraksi Diklorometan

5.1 Data Deskriptif

Konsentrasi

200

Hasil dari gambar 5.1 di atas, menunjukan bahwa fraksi Diklorometan memiliki korelasi positif antara konsentrasi ekstrak dan rerata persen hambat fraksi Diklorometan setelah dicampur larutan DPPH. Nilai korelasi regresi adalah Y = -0,0161 X + 62,597 dengan koefisien korelasi 𝑅2 = 0,428. Ini menunjukan bahwa peningkatan konsentrasi fraksi Diklorometan memberikan peningkatan persen hambat secara positif sebanyak 0,428 (42,8%).

Dari hasil tabel 4.3 di atas dapat dilihat aktivitas antioksidan Asam dengan waktu inkubasi selama 1 jam setelah dicampur larutan DPPH didapat bahwa konsentrasi 500,100 dan 200 ppm menunjukan konsentrasi fraksi Asam Daun Afrika tersebut yang paling tinggi dalam menyumbang kepada signifikansi hasil Analisis, diikuti oleh kelompok kedua yaitu konsentrasi 50 dan 1000 ppm, selanjutnya kelompok ketiga yaitu 20 dan 10 ppm.

Kelompok Perlakuan

y = -0.0161x + 62.597 R² = 0.428

60

5.3 Analisis Variansi (ANAVA) Tabel 5.3 Hasil Uji Analisis Varian (ANAVA) Variasi Konsentrasi Fraksi Diklorometan dan Aktivitas Antioksidan. Kelompok Perlakuan

Fraksi Diklor ometa n

5.2 Uji Regresi Linier Fraksi Diklorometan Gambar 5.1 Grafik Korelasi Konsentrasi dan Aktivitas Antioksidan Fraksi diklorometan setelah Penambahan Larutan DPPH


Antar Kelompo k Dalam Kelompo k Total

Jumlah Kuadrat

Deraja t Kebeb asan

Rerata Kuadrat

2.431,77

6

405,29

957,12 3.388,89

28 34

34,18

F

Sig

11,8 57

0,00 0

Dari tabel 5.3 dapat dilihat bahwa fraksi Diklorometan setelah penambahan larutan DPPH menunjukan menunjukan nilai p=0,000 lebih kecil dari α=0,05, sehingga hipotesis yang menyatakan “tidak terdapat perbedaan aktivitas antioksidan dari variasi konsentrasi fraksi Diklorometan Daun Afrika dengan menggunakan metode DPPH”, ditolak. Hal ini berarti bahwa terdapat perbedaan aktivitas antioksidan dalam variasi konsentrasi ekstrak fraksi Diklorometan Daun Afrika dengan menggunakan metode DPPH.

Page 13

Antioxidant, March 2016 5.4 Uji jarak Berganda Duncan Tabel 5.4 Uji Jarak Berganda Duncan Fraksi Diklorometan Konsentrasi N Subset untuk alpha = 0,05 1000 200 100 50 500 20 10

5 5 5 5 5 5 5

Sig.

1 44,2600

2 53,9100 54,6600 56,2400

1,000

0,558

3

4

56,2400 62,6500 63,3900 0,077

72,7100 1,000

Source Corrected Model Intercept

17.677,07 450.679,32

Kuadrat Tengah

F

20

883,85

1

450.679,32

Sig.

68,305 0,000

Ekstrak

9.236,46

2

Konsentrasi

1.197,74

6

199,62

356,901 0,000

Ekstrak* Konsentrasi Error

7.242,88

12

603,57

15,427 0,000

1.086,94

84

12,94

46,645 0,000

Total Dari tabel di atas berdasarkan hasil uji ANAVA Duncan melalui rerata persen hambat dapat dilihat aktivitas antioksidan fraksi Diklorometan setelah dicampur larutan DPPH menunjukkan kelompok konsentrasi 10 ppm fraksi Diklorometan Daun Afrika yang paling tinggi dalam menyumbangkan kepada signifikansi Analisis, diikuti oleh kelompok kedua yaitu konsentrasi 20, 500, dan 50 ppm, selanjutnya kelompok ketiga yaitu 10 ppm, 100 ppm dan200 ppm dan kelompok ketiga yaitu konsentrasi 1000 ppm.

Jumlah Kuadrat ( Type III) df

Corrected Total

6. Perbandingan Aktivitas Antioksidan

469.443,34 18.764,02

4.618,22 34.828,899 0,000

105 104

Dari tabel tersebut (tabel 6.2) dapat diperoleh nilai p = 0,000, hasil ini lebih kecil dari nilai α = 0,05. Dengan demikian, hipotesis yang menyatakan bahwa “tidak terdapat perbedaan aktivitas antioksidan dari jenis dan variasi konsentrasi ekstrak Daun Afrika dengan metode DPPH”, ditolak. Maka, dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan (nyata) dari aktivitas antioksidan antara ekstrak Etanol, fraksi Asam dan fraksi Diklorometan. Oleh karena itu uji jarak berganda Duncan dapat dilakukan.

6.1 Data Deskriptif Tabel 6.1 Data Persen Hambat Perbandingan Ekstrak yang Memiliki Aktivitas Antioksidan Tertinggi Tabel di atas menunjukan bahwa nilai tertinggi terdapat pada kelompok fraksi Asam (HCl) yang merupakan rerata persen hambat, setelah ditambah DPPH yaitu 20,50%, sedangkan nilai rerata terendah terdapat pada fraksi Diklorometan setelah di tambah DPPH yaitu

Simp (I) Ekstrak (J) Ekstrak Perbedaan anga (Etanol, Asam (Etanol, Asam Rerata (I- n Diklorometan) Diklorometan) J) Baku Sig. Etanol

Asam

Diklorometan

Lower Bound

Upper Bound

-19,23

0,860 0,000

-20,943

-17,523

1,26

0,860 0,145

-0,444

2,976

Etanol

19,23

0,860 0,000

17,523

20,943

Diklorometan

20,50

0,860 0,000

18,789

22,209

Etanol

-1,26

0,860 0,145

-2,976

0,444

0,860 0,000

-22,209

-18,789

Diklorometan Asam

95% Interval Kepercayaan untuk Perbedaan

Asam

-20,50

20,50%.

6.2 Analisis Data Secara Statistik Tabel 6.2 Hasil Uji Analisis Varian (ANAVA) yang Memiliki Aktivitas Antioksidan Tertinggi

Tabel 6.3 Hasil Uji Jarak Berganda Duncan pada Kelompok Ekstrak Analisis yang Memiliki Aktivitas Antioksidan Tertinggi. Subset Ekstrak (Etanol, Asam Diklorometan) Diklorometan Etanol Asam Sig.

N

1

35 35 35

58,2600 59,5257

2

78,7586 0,145

1,000

Tabel tersebut (tabel 6.3) menunjukan bahwa aktivitas antioksidan tertinggi dari semua kelompok ekstrak dengan aktivitas antioksidan tertinggi terdapat pada kelompok fraksi Asam diikuti oleh kelompok kedua yaitu fraksi Etanol dan kelompok ketiga yaitu fraksi Diklorometan. KESIMPULAN 1. Dari analisis varian konsentrasi ekstrak Etanol Daun Afrika setelah penambahan DPPH didapatkan bahwa variasi konsentrasi ekstrak Etanol Daun Afrika melalui metode uji DPPH memiliki aktivitas antioksidan dengan perbedaan yang signifikan. 2. Dari analisis varian konsentrasi fraksi Asam Daun Afrika setelah penambahan DPPH didapatkan bahwa variasi konsentrasi ekstrak fraksi Asam Daun Afrika melalui metode uji DPPH memiliki aktivitas antioksidan dengan perbedaan yang signifikan. 3. Dari analisis varian konsentrasi fraksi Diklorometan Daun Afrika setelah penambahan DPPH didapatkan bahwa variasi konsentrasi ekstrak fraksi Diklorometan Daun Afrika melalui metode uji DPPH memiliki aktivitas antioksidan dengan perbedaan yang signifikan. 4. Dari analisis varian perbandingan aktivitas antioksidan tertinggi antara ekstrak Etanol, fraksi Asam dan fraksi Diklorometan Daun Afrika setelah penambahan DPPH didapatkan bahwa perbandingan diantara ketiga jenis kelompok ekstrak tersebut memiliki perbedaan aktivitas antioksidan yang signifikan. DAFTAR PUSTAKA


Page 14


Adijuwana, Nur M. A. (1989). TeknikSpektroskopi dalam Analisis Biologi. Bogor: Pusat Antar Universitas IPB. Amirth, Pal, singh, (2002). A Trestie on Phytochemistry. Emedia Science Ltd. Andlauer, W. and P. Furst (1998). Antioxidative Power of Phytochemicals With Special Reference to Cereals. in: Rajeshwar, Y., G. P. S. Kumar, M. Gupta, U. K. Mazumder. 2005. Studies on in Vitro Antioxidant Activities of Methanol Extract of Mucuna pruriens (Fabaceae) Seeds. European Bulletin of Drug Research, Vol 13, N° 1. Anshory, H., Suparmi., dan Tumimy, A. S. (2006), Aktivitas Antioksidan Kulit Buah Rambutan (Nephalium lappaceum L.) terhadap Penangkapan Radikal Bebas DPPH, Jurnal Ilmiah Farmasi, Fakultas farmasi UII, 9-15, Yogyakarta. Atangwho I. J., Ebong P.E., Eyong M.U., Eteng M.U., Uboh F.E. Vernonia amygdalina Del. (2007): a potential prophylactic Antidiabetic agent in lipids complication. Glob. J. Pure Appl. Sci.;13:103–106. Bidlack, W. R., dan W. Wang. (2000). Designing Functional Foods to Enhance Health. Technomic Publishing Co, Inc, Lancaster, Basel. Boer, Y. (2000). Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kulit Buah Kandis (Garcinia parvifolia Miq), Jurnal Matematika dan IPA 1, (1), 2633. Christyaningsih, J. (2003). Pengaruh suplementasi vitamin E dan C terhadap aktivitas enzim super oxide dismutase (SOD) dalam eritrosit tikus yang terpapar asap rokok kretek. JIPTU. Malang. DepKes RI Pusat Data Kesehatan, (1995), Pokok-Pokok Pemantapan dan Pengembangan Sistem Informasi Kesehatan, Jakarta. DepKes RI, (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan. Direktorat Pengawasan Obat Tradisional. Cetakan pertama. Hal 910. DepKes RI, (2007), Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia No. 381/ Dirjen POM Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Hal. 1083, 1084. Dewi, M. dan Naufal, Z. (2010). “Ekstraksi Antioksidan ( Likopen ) Dari Buah Tomat Dengan Menggunakan Solven Campuran, N – Heksana, Aseton, dan Etanol”. Jurusan Teknik Kimia, Universitas Diponegoro. Semarang. Ejoh R. A, Nkonga D. V, Inocent G, Moses M. C (2007). Nutritional components of some non-conventional leafy vegetables consumed in Cameroon. Pak. J. Nutr., 6: 712-717. Elfita, Supriyatna., Bahti, H. H., Dachriyanus, (2006), ”Kandungan Kimia Fraksi Aktif Antioksidan Dari Daun Kandis Gajah (Garcinia griffithii T. Anders)”.Pharmacy. 4(3), 138-143 Ginting, R. A. (2012). Karakterisasi Simplisia dan Skrining Fitokimia serta Uji. Antimutagenik Ekstrak Etanol Daun Afrika (Vernonia amygdalina. Del.) pada Mencit. Prosiding Seminar Nasional Kimia 2013, Universitas Sumatera Utara. Goldberg, G. (2003). Plants: Diet and Health. I Owa State Press, Blackwell Publishing Company, 2121 State Avenue, Ames, USA. Handa, S. S., Khanuja, S. P. S., Longo, G., and Rakesh, D. D. (2008). Extraction Technologies for Medicinal and Aromatic Plants. ICS UNIDO. Trieste.p.21-22. Harborne, J. B., (1987), Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan, diterjemahkan oleh Padmawinata, K., dan Sudiro, I., Penerbit ITB, Bandung 10-21. Heinrich,M., Barnes, J., Gibbons, S., Williamson, E. (2009). Farmakognosi dan Fitoterapi. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran. Hal. 85, 105. Ibrahim N. D. G, Abdurahman E. M, Ibrahim G (2000), Histological studies of the effects of chronic feeding of Vernonia amygdalina. delleaves on rats. Nig. J. Surg. Res. 2: 68-74. Ibrahim, T. A., A. Lola, F.O. Adetuyiand B. Jude-Ojei (2009). Assessmentof the Antibacterial activity of Vernonia amygdalina and Occimum gratissimum leaves on selected food borne


pathogens. Journal of Environmental, Agricultural and Food Chemistry 8(11): 1212 – 1218. Ijeh II, Igwe K. K, Ejike CECC (2010). Effect of leaf aqueous extracts of Vernonia amygdalina Del. on contraction of mammary gland and uterus of guinea pig dams. J. Herbs Spices Med. Plants 16: in press. Johnson, I. T. (2001). Antioxidants and Antitumour Properties. in: Pokorny, J., N. Yanishlieva, M. Gordon. CRC Press, Cambridge England. Kristiana dan Hery (2008), ‘Gambaran Darah mencit (Mus musculus albinus) yang diberi Salep Ekstrak Etanol dan Fraksi Hexan Rimpnag Kunyit (Curcuma longa linn.) pada Proses Persembuhan Luka’, Skripsi, Fakultas Kedokteran Hewan IPB, Bogor. Kubo, I., N. Masuoka, P. Xiao., H. Haraguchi. (2002). Antioxidant Activity of Dodecyl Gallate. Di dalam: Radianti, M. A. 2005. Studi Tentang Pembuatan Minuman Fungsional Tomat-Kayu Manis. Skripsi. Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor. Linggawati. A., (2002), Pemanfaatan Tanin Limbah Kayu Industri Kayu Lapis untuk Modifikasi Resin Fenol Formaldehid, Jurnal Natur Indonesia 5(1), 84-94. Meskin, M. S., W. R. Bidlack, A. J. Davies, S. T. Omaye. (2002). Phytochemicals in Nutrition and Health. CRC Press, London-New York. Miller, H. E., F. Rigelholf, L. Marquart, A. Prakash, M. Kanter (2000). Antioxidant Content of Whole Grain Breakfast Cereals, Fruits and Vegetables. Journal of The American College of Nutrition. Vol. 19. No. 3. 312S-319S. Mukhopadhyay, M. (2000). Natural Ekstracts Using Supercritical Carbon Dioxide. CRC Press, London-New York. Njan A. A, Adza B., Agaba A. G., Byamgaba D, Diaz-Llera S, Bansberg D. R (2008). The analgesic and antiplasmodial activities and toxicology of Vernonia amygdalina. J. Med. Food. 11: 574581. Novia, Haerani Y., Riska Y. (2009). “Pemanfaatan Biji Karet Sebagai Semi Drying Oil dengan Metode Ekstraksi Menggunakan Pelarut n-Heksana”. Jurnal Teknik Kimia, No. 4, Vol. 16. Nwanjo H. U dan Nwokoro E. A (2004). Antidiabetic and biochemical effects of aqueous extract of Vernonia amygdalinaleaf in normoglycaemic and diabetic rats. J. Innov. Life Sci., 7: 6-10. Owoeye, O.; Yousuf, S.; Akhtar, M.N.; Qamar, K.; Dar, A.; Farombi, E.O.; Onwuka, S.K.; Choudhary, M.I. (2010), Another Anticancer Elemanolide from Vernonia amygdalina Del. Int. J. Biol. Chem. Sci., 4, 226-234. Panovska, T. K., Kulevanova, S., Stefova., (2005), In Vitro Antioxidant Activity of Some Teucrium Spesies (Lamiaceae), Acta Pharm, 55 hal 207-214. Pinem, D. A. D. P., Ginting, M., Zuhrah, C. F. (2012). Identifikasi Komponen Kimia dan Uji Aktivasi Antibakteri Minyak Atsiri Daun Bunga Tahi Ayam (Tagetes erecta L). Departemen Kimia FMIPA USU. Jurnal Saintia Kimia.Vol.1.No.1, 2012. Pokorny, J., Yanishlieva, N., and Gordon, M., (2001), Antioxidant in Food: Practical Application, CRC Press Cambridge, New York. Prihatman, K. (2001). Saponin untuk Pembasmi Hama Udang. Penelitian Perkebunan Gambung. Bandung. Radwan, M. A.dan Salama, A. K. Market basket survey for some heavy metals in Egyptian fruits and vegetables. Food Chem. Toxicol. (2006), 44, 1273–1278. Rahmawati, (2009). Kandungan Fenol Total Ekstrak Mengkudu. Universitas Indonesia. Rao, A. V. and R. Koratkar. (1997). Anticarcinogenic Effects of Saponin and Phytosterols, in Antinutrients and Phytochemicals in Food. in: Meskin, M. S., W. R. Bidlack, A. J. Davies, S. T. Omaye. 2002. Phytochemicals in Nutrition and Health. CRC Press, LondonNew York. Rohdiana, D. (2001). “Aktivitas Daya Tangkap Radikal Polifenol Dalam Daun Teh”. Majalah Indonesia. Jurnal Indonesia, 8,17-23.

Page 15

Antioxidant, March 2016 Sangi, M., M. R. J. Runtuwene, H. N. I. Sumbala dan V. M. A. Makang. (2008). Phytochemical Analysis of Medicine Plant in North Minahasa Region.Vol. 1: 47- 53. Sarker S. D., Z. Latif , & Gray A. I. (2006). Natural products isolation. In: Sarker S. D, Z. Latif , & Gray A. I, editors. Natural Products Isolation. 2nd ed. Totowa (New Jersey). Humana Press Inc. hal. 610, 18. Simanjuntak, P., T. Parwati, L. E. Lenny, S. Tamat, R. Murwani (2004). Isolasi dan Identifikasi Senyawa Antioksidan dari Ekstrak Benalu Teh, Scurrula oortiana (Korth) Danser (Loranthaceae). Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia ISSN 1693-1831, Vol. 2 No. 1. Sobukola O. P, Dairo O. U, Sanni L. O, Odunewu A. V, Fafiolu B. O (2007). Thin layer drying process of some leafy vegetables under open sun. Food Sci. Technol. Int. 13(1): 35-40. Syukur C dan Hernani. (2002). Budidaya Tanaman Obat Komersial. Penebar Swadaya. Jakarta.


Trilaksani, W., (2003), Antioksidan: Jenis, Sumber, Mekanisme Kerja dan Peran Terhadap Kesehatan, Institute Pertanian Bogor, Bogor, hal 1-12. WHO, (2003). Assessment and monitoring of antimalarial drug efficacy for the treatment of uncomplicated faciparum malaria. Geneva. Willcox dan M. L, G. Bodeker (2000). Plant-based malaria Control: research initiative on traditional antimalaria methods. Parasitology Today 16: 220 – 221. Winarsi dan Hery. (2007). Antioksidan Alami & Radikal Bebas. Yogyakarta. Penerbit Kanisius.Hal 11, 12. Zeuthen, P. and L. B. Sorensen. (2003). Food Preservation Techniques. CRC Press, Cambridge England.

Page 16

The Antioxidant Activity of African Leaves (Vernonia amygdalina) Extract using 1,1- Dipheny l-2-picrylhydrazyl (DPPH)

Recommend Documents