KORONGOK ANTIBIOTIKUM-ÉRZÉKENYSÉG VIZSGÁLATÁHOZ 50 KORONGOT TARTALMAZÓ PATRON ANTIMIKROBIÁLIS SZEREKKEL SZEMBENI ÉRZÉKENYSÉG VIZSGÁLATA
1- KLINIKAI JELENTŐSÉG A korongokat arra használjuk, hogy korongdiffúziós módszerrel, félkvantitatív módon értékeljük a gyorsan növő baktériumok és számos nehezen kezelhető species antimikrobiális szerekkel szembeni in vitro érzékenységét. A módszer a WHO(1) által publikált standard eljáráson alapul, amelyet a CLSI/NCCLS(2) és a CA-FSM(3) egyezményes szabványként átvett (és rendszeresen felülvizsgál). Az antibiotikum érzékenységi vizsgálatokat és kiértékelési módokat érintő változásokról az aktuális CLSI/NCCLS(2), CAFSM(3), és BSAC(4) kiadványokból tájékozódhatnak.
2- ALAPELV
Megadott koncentrációjú antimikrobiális szerrel impregnált korongokat helyezünk megfelelő közeg(A) felületére, amelyet előzőleg a vizsgálandó baktériumtörzs tiszta és friss tenyészetéből készített kalibrált inokulummal(A) oltottunk be. Inkubálás(A) után megvizsgáljuk a Petri-csészéket, s lemérjük a korongok körül mutatkozó gátlási zónát, és összehasonlítjuk a megfelelő antimikrobiális szerre megadott kritikus értékkel(A), hogy meghatározhassuk a klinikai érzékenységi kategóriát (rezisztens, mérsékelten érzékeny, érzékeny). A gátlási zóna átmérője arányos a vizsgált baktériumtörzs érzékenységével. (A) A CLSI/NCCLS (2) CA-FSM (3), és BSAC(4) aktuális ajánlásai szerint.
3- KISZERELÉS A Bio-Rad korongok 6,5 mm átmérőjűek, elsőrendű minőségű, pontos koncentrációjú mikroba-ellenes szerekkel impregnált szűrőpapírból készültek. A korongok egyértelműen azonosíthatók a korong mindkét oldalára nyomtatott 1-3 betűs kódjaik alapján (l. 1. táblázat). A Bio-Rad korongokat nedvszívó anyag kíséretében vízálló tartályba zárt, 50 korongot tartalmazó patronokban szállítjuk. 1. táblázat: Bio-Rad korongok antibiotikum érzékenység vizsgálatához
Amikacin Amoxicillin Amoxicillin + klavulánsav Ampicillin Ampicillin + szulbaktám Azithromycin Aztreonam Bacitracin Carbenicillin Cefaclor Cefalexin Cefamandol Cefazolin Cefepim Cefixim Cefoperazon Cefoperazone + Sulbactam Cefotaxim Cefotetan Cefoxitin Cefpirom Cefpodoxim Cefprozil Cefsulodin Ceftazidim Ceftibuten Ceftriaxon Cefuroxim Cephalothin Chloramphenicol
KORONG TARTALMA 30 µg 25 µg 20 / 10 µg 10 µg 10 / 10 µg 15 µg 30 µg 10 UI 100 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 5 µg 10 µg 75 µg 30 µg 75 + 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 10 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg
RÖVIDÍTÉS
KISZERELÉS
KÓDSZÁM
AN AMX AMC AM SAM AZM ATM B CB 100 CEC 30 CN MA CZ FEP CFM 5 CFM 10 CFP 75 CFP 30 SCF 105 CTX CTT FOX CPO CPD CPR CFS CAZ CTB 30 CRO CXM CF C
4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50
66148 66138 66178 66128 67018 67008 66928 66158 66198 67498 66208 66238 66258 66098 67588 66418 67618 66298 66734 66368 66428 66228 66468 66918 66488 66288 66308 67638 66188 66358 66218 66278 1
Ciprofloxacin Clarithromycin Clindamycin Colistin Doripenem Doxycyclin Ertapenem Erythromycin Flumequin Fosfomycin Fusidinsav Gentamicin Gentamicin (magas dózis) Imipenem Isepamicin Kanamycin Kanamycin (magas dózis) Latamoxef (Moxalactam) Levofloxacin Lincomycin Linezolid Mecillinam Meropenem Metronidazol Mezlocillin Minocyclin Moxifloxacin Mupirocin Nalidixsav Neomycin Netilmicin Nitrofurantoin Nitroxolin Norfloxacin Ofloxacin Oxacillin Oxolinisav Pefloxacin Penicillin Pipemidin sav Piperacillin Piperacillin + tazobaktám Polymixin Pristinamycin Quinupristin-Dalfopristin Rifampicin Sparfloxacin Spectinomycin Spiramycin Streptomycin Streptomycin (magas dózis) Szulfonamidok Teicoplanin Telithromycin Tetracyclin
KORONG TARTALMA 5 µg 15 µg 2 µg 10 µg 50 µg 10 µg 30 µg 10 µg 15 µg 30 µg 50 µg 200 µg 10 µg 10 µg 15 μg/10 UI 120 µg 500 µg 10 µg 30 µg 30 µg 1mg 30 µg 5 µg 15 µg 30 µg 10 µg 10 µg 4 µg 75 µg 30 µg 5 µg 5 µg 30 µg 30 UI 30 µg 300 µg 20 µg 10 µg 5 µg 5 µg 1 µg 5 µg 10 µg 5 μg 6 µg/10 IU 20 µg 100 µg 75 µg 100 / 10 µg 75 / 10 µg 300 UI 15 µg 15 µg 5 µg 30 µg 5 µg 100 µg 100 µg 10 µg 300 µg 500 µg 300 µg 200 µg 30 µg 15 µg 30 µg
RÖVIDÍTÉS
KISZERELÉS
KÓDSZÁM
CIP CLR CM CS 10 CS 50 DORI 10 DO ETP 10 E UB FOS 50 FOS 200 FA GM GM GEN 120 GEN 500 IPM ISP K KAN MOX LVX L LZD 30 MEC MEM MTR MZ MNO MXF 5 MUP NA N NET FT NI NOR 10 NOR 5 OFX OX1 OX OA PEF P PI PIP100 PIP 75 TZP 110 TZP 85 PB PT QD 15 RA 5 RA 30 SPX SPT SP S STR 300 STR 500 SSS 300 SSS 200 TEC TEL 15 TE
4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50
68648 67058 66328 67268 66348 67348 66388 67518 66448 68918 66458 67658 66518 66608 66548 67598 66578 66568 66838 66618 66628 66698 66858 66678 67388 66768 67048 68908 66708 66728 67098 67088 68618 66748 66758 68678 68778 66338 68238 68938 66888 66848 68628 68228 67218 68638 67228 67258 67238 66498 67248 67278 67528 66648 67308 66538 68798 67378 67418 67608 67428 67578 68408 68948 67538 67448 2
KORONG RÖVIDÍTÉS TARTALMA 75 µg Ticarcillin TIC 75 / 10 µg Ticarcillin + klavulánsav TCC 15 µg Tigecycline TGC 15 10 µg Tobramycin TM 1.25 / 23.75 µg Trimethoprim + Szulfamethoxazol SXT 5 µg Trimethoprim TMP 30 µg Vancomycin VA A korongok CLSI/NCCLS szerinti antibiotikum tartalmát félkövér betűkkel szedtük.
KISZERELÉS
KÓDSZÁM
4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50 4x50
67458 67468 67398 67488 68898 68888 68928
4- TÁROLÁS A szavatossági idő csak a sértetlen patronban, és a gyártó utasításai szerint tárolt korongokra érvényes. A szavatossági idő és a gyártási sorozat száma a csomagoláson olvasható (a patronon és a tartályán). • A korongokat tartalmazó patronokat tartályaikban kell tárolni +2-8°C között, száraz helyen. • Kinyitás előtt hagyni kell, hogy a tartály felvegye a szobahőmérsékletet (18-30°C). A korongok felhelyezése után a felhasználatlan patronokat tegyük vissza +2-8°C közötti hőmérsékletre. • Ne használjunk lejárt szavatosságú korongokat. Ne használjunk olyan korongokat, melyek patronját több mint 8 órán át szobahőmérsékleten (18-30°C) hagytuk, anélkül, hogy megbizonyosodnánk róla, hogy minősége megfelel-e még a kívánalmaknak(5). • Ha a patront korongfelhelyezés után a korongadagolóban hagyjuk, akkor azt +2-8°C között kell tárolni, száraz helyen, úgy, hogy benne legyen a nedvszívó anyag. A korongadagolóba helyezett felnyitott patronban található - és az ajánlásnak megfelelően nedvszívóval tárolt - korongok stabilitása szokványos körülmények között még 6 hétig igazoltan megmarad, kivéve a jelzéssel ellátott antibiotikum korongokat, melyek esetében a hetekben kifejezett stabilitás a jelzés belsejében van feltüntetve..
5- SZÜKSÉGES, DE NEM SZÁLLÍTOTT ANYAGOK • • • • • •
korongadagoló:
6-7 korong kódszám 50294 12-16 korong kódszám 50295 táptalaj (a CLSI/NCCLS(2), CA-SFM(3), ill. BSAC(4) aktuális előírásai szerint) reagensek baktériumtörzsek minőségellenőrzéshez 0,5 MacFarland egységnek megfelelő denzitású kontroll az antibiotikum érzékenység korongdiffúziós módszerrel történő vizsgálatához szükséges laboratóriumi eszközök.
6- KEZELÉSI ÉS MUNKAVÉDELMI ELŐÍRÁSOK
Tartsuk be az aktuális ajánlásokban foglalt utasításokat (CLSI/NCCLS(2), CA-FSM(3), BSAC(4)). Mindig tartsuk be a mikrobiológiai veszélyek elleni védelmet szolgáló lépéseket és biztonsági előírásokat. Felhasználás után sterilezzük a tenyészeteket és az összes elszennyeződött eszközt.
7- HASZNÁLATI ÚTMUTATÓ • •
Minták: a korongokat nem szabad közvetlenül a biológiai mintákból kiinduló vizsgálatokban felhasználni. Lásd: inokulum készítése tiszta, friss tenyészetekből, aktuális ajánlások (CLSI/NCCLS(2), CA-FSM(3), vagy BSAC(4)). Az antibiotikum érzékenységi vizsgálat és az eredményeinek kiértékelése során támaszkodjunk a CLSI/NCCLS (2), CAFSM(3), vagy BSAC(4) ajánlásaira: a CLSI/NCCLS (2), a CA-FSM (3), vagy BSAC(4) standard technikákat javasol az inokulum elkészítéséhez, a Petri-csészék beoltásához, a korongok kiválasztásához és elhelyezéséhez, az inkubálási hőmérséklethez és időhöz. A GLP ajánlásait is folyamatosan be kell tartani.
8- KIÉRTÉKELÉS • •
Pontosan mérjük le az észlelt gátlási zónák átmérőjét, s vessük össze az aktuális ajánlásokban (CLSI/NCCLS (2), CA-FSM , vagy BSAC(4)) feltüntetett kritikus átmérőkkel. Minden egyes mikroorganizmushoz rendeljünk hozzá a megfelelő klinikai kategóriát (mérsékelten érzékeny, érzékeny vagy rezisztens), a mért átmérő és a vizsgált antibiotikumhoz tartozó kritikus átmérő függvényében. (3)
9- TELJESÍTMÉNY / A TERMÉK MINŐSÉGELLENŐRZÉSE Az antibiotikum korongok aktivitását rendszeresen ellenőrizzük az alábbi törzsek segítségével: • Escherichia coli ATCC 25922 • Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 • Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 • Enterococcus faecalis ATCC 33186 • Enterococcus faecalis ATCC 29212 • Staphylococcus aureus ATCC 25923 • Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 • Haemophilus infuenzae ATCC 49247 • Clostridium perfringens ATCC 13124 • Clostridium sporogenes ATCC 19404
3
2. táblázat mutatja a korongdiffúziós módszer egyes referenciatörzsekre elfogadott gátlási átmérőit. Korong tartalma Amikacin Amoxicillin Amoxicillin + Clavulanic Acid Ampicillin Ampicillin + Sulbactam Azithromycin Aztreonam Bacitracin Carbenicilin Cefaclor Cefalexin Cefamandole Cefazolin Cefepime Cefixime Cefixime Cefoperazone Cefoperazone Cefoperazone + Sulbactam Cefotaxime Cefotetan Cefoxitin Cefpirome Cefpodoxime Cefprozil Cefsulodin Ceftazidime Ceftibuten Ceftriaxone Cefuroxime Chloramphenicol Ciprofloxacin Clarithromycin Clindamycin Colistin Colistin Doripenem Doxycycline Ertapenem Erythromycine Flumequine Fosfomycin Fosfomycin Fusidic acid Gentamicin Gentamicin Imipenem Isepamicin Kanamycin Levofloxacin Lincomycin Linezolid
30 µg 25 µg 20/10 µg 10 µg 10/10 µg 15 µg 30 µg 10 UI 100 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 10 µg 5 µg 30 µg 75 µg 75/30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 10 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 30 µg 5 µg 15 µg 2 µg 10 µg 50 µg 10 µg 30 µg 10 µg 15 µg 30 µg 50 µg 200 µg 10 µg 10 µg 10 UI 10 µg 30 µg 30 µg 5 µg 15 µg 30 µg
Standard CLSI Belső CLSI CLSI CLSI CLSI CLSI Belső CLSI CLSI Belső CLSI CLSI CLSI Belső CLSI Belső CLSI Belső CLSI CLSI CLSI Belső CLSI CLSI Belső CLSI CLSI CLSI CLSI CLSI CLSI CLSI CLSI CLSI CA-SFM CLSI CLSI CLSI CLSI Belső CA-SFM CLSI CA-SFM CLSI CA-SFM CLSI Belső CLSI CLSI CA-SFM CLSI
Minőségellenőrzés során elfogadott zónaátmérő határértékek (mm) E. coli S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae H. influenzae ATCC 25922 ATCC 25923 ATCC 27853 ATCC 49619 ATCC 49247 19-26 20-26 18-26 19-25 18-24
28-36
16-22 19-24
27-35 29-37 21-26
28-36
23-29 17-22
23-29 23-27 18-23 26-32 21-27 31-37 26-30 23-27 26-30 28-34
18-24 27-31 25-30 26-34 29-35 23-29
24-30
21-25 24-33
21-25 23-29
27-33
23-30
29-35 28-34 23-29 29-35 23-28 21-27
25-31 17-23 23-29 26-32 19-25 27-33 20-28 16-20
18-22
22-28 27-35 19-26 22-30 26-32 24-30
17-23
25-32 27-35 29-35 20-26 21-27 30-40
11-17 28-35 18-24 29-36
33-42 23-29
23-29
25-32 22-29
25-33
11-17 17-22 29-35 13-21
22-30 25-31 22-30 19-26 22-26 26-32 21-26 17-25 29-37
24-35 25-33 29-34 19-27 24-28 17-23 19-26 25-30 25-29 25-32
16-21 16-22 20-28 16-23 19-26
4
Korong tartalma Mecillinam Meropenem Mezlocillin Minocycline Moxalactam Moxifloxacin Mupirocin Nalidixic Acid Neomycin Netilmicin Nitrofurantoin Nitroxolin Norfloxacin Norfloxacin Ofloxacin Oxacillin Oxacillin Oxolinic Acid Pefloxacin Penicillin Pipemidic Acid Piperacillin Piperacillin Piperacillin + Tazobactam Piperacillin + Tazobactam Polymixin Pristinamycin Quinupristin-Dalfopristin Rifampicin Rifampicin Sparfloxacin Spectinomycin Spiramycin Streptomycin Sulfonamides Sulfonamides Teicoplanin Telithromycin Tetracycline Ticarcillin Ticarcillin + Clavulanic Acid Tigecycline Tobramycin Trimethoprim Trimethoprim + Sulfamethoxazole Vancomycin
10 µg 10 µg 75 µg 30 µg 30 µg 5 µg 5 µg 30 µg 30 UI 30 µg 300 µg 20 µg 5 µg 10 µg 5 µg 5 µg 1 µg 10 µg 5 µg 6 µg 20 µg 100 µg 75 µg 75/10 µg 100/10 µg 300 UI 15 µg 15 µg 5 µg 30 µg 5 µg 100 µg 100 µg 10 µg 300 µg 200 µg 30 µg 15 µg 30 µg 75 µg 75/10 µg 15 µg 10 µg 5 µg 1,25/23,75 µg 30 µg
Standard CLSI CLSI CLSI CLSI CLSI CLSI Belső CLSI Belső CLSI CLSI Belső Belső CLSI Belső CA-SFM CLSI Belső CA-SFM CLSI Belső CLSI Belső Belső CLSI CLSI CA-SFM CLSI CLSI CA-SFM CLSI Belső Belső CLSI CLSI Belső CLSI CLSI CLSI CLSI CLSI CLSI CLSI CLSI CLSI CLSI
Minőségellenőrzés során elfogadott zónaátmérő határértékek (mm) E. coli S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae H. influenzae ATCC 25922 ATCC 25923 ATCC 27853 ATCC 49619 ATCC 49247 24-30 28-34 29-37 27-33 23-29 19-25 19-25 25-30 28-35 18-24 17-25 28-35 28-35 17-25 18-26 22-28 17-23 18-27 22-30 22-31 17-23 20-25 18-22 20-26 27-34 13-23 17-24 28-35 17-28 22-29 25-32 21-28 14-20 27-34 18-24 22-30 29-35 26-29 26-37 22-30 24-30 25-33 24-33 22-29 24-31 24-33 24-30 27-36 25-33 13-19 27-32 21-28 19-24 15-21
30-38 19-25 12-20
26-34 34-39 27-33
21-29
18-26 14-22 24-34 17-27 15-21 27-33
18-25 24-30
24-30
24-30
29-37
20-28
20-27 18-26 21-28
20-25 19-29 19-26
19-25
23-29
24-32
17-23
21-27
23-29
17-21
Határértékek (belső standardok): • Gentamicin 120 μg: E. faecalis ATCC 33186 (16-23 mm) • Streptomycin 300 μg: E. faecalis ATCC 33186 (14-20 mm) • Gentamicin 500 μg: S. aureus ATCC 25923 (30-34 mm), E. faecalis ATCC 29212 (18-28 mm) • Kanamycin 1 mg: S. aureus ATCC 25923 (≥14 mm), E. faecalis ATCC 29212 (≤10 mm) • Streptomycin 500 μg: S. aureus ATCC 25923 (24-28 mm), E. faecalis ATCC 29212 (14-25 mm) • Metronidazol 4 μg: Clostridium perfringens ATCC 13124, Clostridium sporogenes ATCC 19404 ≥15 mm. • Cefoperazone + Sulbactam 75/30µg : E. coli ATCC 35218 (24-30 mm) 5
A HTM növekedésserkentő hatásának ellenőrzésére további kontrolltörzsnek javasolt a Haemophilus influenzae ATCC 10200. Annak ellenére, hogy bizonyos béta-laktám vegyületekre nincs megbízható korongdiffúziós értékelési kritérium a S. pneumoniae esetében, mégis kontrolltörzsként a Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 törzs javasolt minden Streptococcus species korongdiffúziós érzékenységi vizsgálatához. Spectinomycin korongok ellenőrzéséhez a Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 javasolt. Az elfogadható átmérő 23-29 mm (NCCLS). Az oxacillin korongok hatóanyag tartalmának lebomlása a legjobban a Staphylococcus aureus ATCC 25923 kontrolltörzzsel mérhető fel. Az elfogadható átmérő 18-24 mm.
10- A GYÁRTÓNÁL FOLYÓ MINŐSÉGELLENŐRZÉS Minden termékünk minőségellenőrző rendszer keretén belül készült, a nyersanyag átvételétől kezdve a termék forgalmazásáig. Minden egyes gyártási sorozat minőségét ellenőrizzük, és csak akkor hozzuk forgalomba, ha az megfelel az előre felállított kritériumoknak. Minden sorozat gyártási és minőségellenőrzési jegyzőkönyve megtalálható a Bio-Radnál.
11- AZ ALKALMAZÁS KORLÁTAI • • • •
A klinikai kategóriák (rezisztens, mérsékelten érzékeny, érzékeny) csak egy milliméternyi szórást mutatnak, ami szokványos hibahatárnak számít a laboratóriumi gyakorlatban. A 2. táblázatban fel nem tüntetett egyéb antimikrobás szereket is használhatunk. A velük végzett érzékenységi vizsgálatokat asszerint kell kiértékelni, hogy tapasztaltunk-e határozott gátlási zónát, vagy sem, és csak kvalitatívnak tekinthető az eredmény a kvantitatív zónaértékek hivatalos felállításáig. A zónaátmérőket fel kell jegyezni. A teszt megbízhatósága nemcsak a korongok aktivitásán múlik, hanem olyan tényezőkön is, mint például hogy megfelelő inokulumot és kontrolltörzset használtunk-e, megfelelő volt-e a táptalaj, és korábban ellenőriztük-e, illetve helyesen tároltuk-e. A leletet, mint minden egyéb laboratóriumi eredményt nem szabad egyetlen vizsgálat eredményére alapozni, hanem a klinikai adatok összességét, valamint a biokémiai, citológiai és immunológiai eredményeket egyaránt figyelembe kell venni.
12- HIVATKOZÁSOK 1. World Heath Organization Expert Committee on Biological Standardization. 1992. Technical report series 822. W-H.O., Geneva. 2. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2000. Approved standard M2-A7. Performance standards for antimicrobial susceptibilitity tests, 7th ed. NCCLS, Wayne, Pa. 3. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2002. NCCLS document M100-S12. Performance standards for antimicrobial susceptibilitity testind, 12th informational, Wayne, Pa. 4. Comité de l’antibiogramme. 2002. French Society of Microbiolgoy. 5. V. Loncle-Provot, E. Keller, M.O. Gourdin, M.L. Garrigues, Etude de la stabilité des disques antibiotiques dans les conditions d'utilisation en routine, 18th interdisciplinary meeting on anti-infectious chemotherapy, Paris, dec.3/4 1998. (1) WHO : World Health Organization (Egészségügyi Világszervezet) (2) CLSI/NCCLS : Clinical and Laboratory Standards Institute / National Committee for Clinical Laboratory Standards (Klinikai és Laboratóriumi Standardizációs Intézet / Nemzeti Klinikai Laboratóriumi Standardizációs Bizottság) (3) CA-SFM : Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie (Francia Mikrobiológiai Társaság Antibiogram Bizottsága) (4) BSAC: British Society for Antimicrobial Therapy (Brit Antimikrobiális Terápia Társaság)
Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
11/2009
6
