Immunhisztokémiai vizsgálatok hematoxylinnal festett keneteken
Polgár Zoltánné Semmelweis Egyetem I.sz.Patológiai és Kísérleti Rákkutató Intézet, Budapest
A gyakorlatban számtalan esetben fordul elő, hogy a speciális kiegészítő vizsgálatokat , mint az immuncitokémia, a fluorescens in situ hibridizáció kevés számú kenet lévén – a már hematoxylineozinnal megfestett keneteken kell elvégezni. A kenetek színtelenítésével járó nehézségeket és az immuncitokémiai módszerek esetleges változtatását vizsgáltuk meg a három leggyakrabban használt hematoxilin ( Mayer, Harris, Erlich ) tükrében, tekintettel a festékek összetételében lévő különbségekre.
Anyag és módszer: A vizsgálathoz igyekeztünk olyan szövetet választani, amely natív állapotban érkezik vizsgálatra,formalin fixálás nélkül. Így alkalmasnak találtuk a fagyasztásra küldött emlőszövetet. Keneteket készítettünk,fixáltuk methanolban és megfestettük a három féle Hematoxylinnal, majd a kiválasztott keneteken elvégeztük az immunhisztokémiai reakciókat . (ösztrogén,progeszteron,citokeratin7).
NÉZZÜK A HEMATOXYLINOK ÖSSZETÉTELÉT
MAYER.féle: Vizes oldat Hematoxylin, Deszt.víz Natrium jodát, Timsó Klorálhidrát Citromsav
HARRIS-féle:
ERLICH-féle:
Alkoholos oldat
Alkoholos oldat
Hematoxylin(alkoholos) Timsó(vizes) A kettő összeöntve, felforralva Higany(II) oxid
Hematoxylin(alkoholos) Timsó Glicerin Deszt.víz Ecetsav
Harris
Immunreakciók: sósavas alkoholos színtelenítéssel Mayer
ER
PGR
CK 7
Harris
Erlich
Az antigén feltárás nélkül, sósavas alkoholos színtelenítés után elvégzett immunhisztokémiai reakciók - a CK 7 nagyon gyenge reakcióját kivéve
nem voltak eredményesek. Technikai módosítások: 1. A sósavas alkoholos színtelenítés elhagyása 2. Antigén feltárás magas hővel - alacsony és magas pH –n.
Immunreakciók: Mayer
ER
PGR
CK 7
antigén feltárás magas hővel Harris
Erlich
Eredmények:
Van-e különbség ? 2 .- magas hővel történő antigén feltárás – Alacsony pH – CK 7 Magas pH – ER , PGR ER és PGR esetében:
Legjobb eredmény Gyenge
MAYER és a HARRIS ERLICH
hematoxylin utáni reakció volt. A CK 7 mindhárom esetben jó eredményt adott.
3 .-TRS magas nyomáson ( kukta): Csak a CK 7 adott jobb reakciót. Az ER és PGR nem.
TRS antigén feltárással magas nyomáson CK 7 Harris Mayer
Erlich
Mi az oka a különbségnek? - a festékoldat -alkoholtartalma Mayer vizes Harris és az Erlich alkoholos -savtartalma Mayerben és az Erlichben is van Harrisban nincs -timsó tartalma - mindegyikben van - a festés módja Mayer és Harris progresszív festési mód ( optimális ideig festünk) Erlich regresszív festési mód ( hosszú ideig festünk-túlfestjük a keneteket, majd sósavas alkohollal differenciálunk)
Szövettani metszeteken az ER és a PGR NEGATÍV Mayer
Harris ER
PGR
Alkalmazni tudjuk : aspirációs citológiai vizsgálatok megfestett kenetein: TTF 1 (TRS)
Szövettani feldolgozás HE
Lymphoma
Kissejtes carcinoma
Lágyrész tumorok esetében FISH vizsgálatok elvégzésére:
Syn.sc. t(x;18)
A FISH vizsgálatok metodikájban is kisebb változtatást kellett eszközölni a szokásos natív keneteken végzett reakciókhoz képest. Előkezelésként beiktattunk: -5 perces pepszines emésztést 37 fokon,
ami meghozta a kívánt eredményt.
Syn.sc. t(x;18)
Mixoid lyposarcoma FUS (16p11)
Jól differenciált lyposarcoma
MDM2 (12q15) MDM2 CHOP t(12q13)
Amplifikációs pr.
A tüdőcitológia területén: Pleuralis folyadék Adenocarcinoma TTF-1
HE
Kissejtes carcinoma
HE Chr A
Mellkasi folyadék
CK 7
Adenocarcinoma
HE
TTF-1
Felhasználhatók még molekuláris vizsgálatokra Pl: K-ras és EGFR génmutáció kimutatására: - a sejteket lekaparva a lemezről DNS izolálást végezhetünk - PCR vizsgálat génmutáció , ami a beteg további kezelését is meghatározza.
Összegezve tehát: jól megválasztva a hematoxylint és a különböző előkezeléseket, biztonsággal használhatjuk a HE festett keneteket további kiegészítő vizsgálatokra.
Köszönöm a segítséget: Prof. Dr.Sápi Zoltánnak Dr.Pápay Juditnak kolléganőimnek: Tamási Annának és Szilágyiné Paulusz Mónikának
KÖSZÖNÖM A FIGYELMET
