ÉLELMISZERJOGI KONFERENCIA október Balatonfüred, Hotel Silver Resort****superior. Copyright Dr. Szigeti Tamás

ÉLELMISZERJOGI KONFERENCIA 2015. október 15-16. Balatonfüred, Hotel Silver Resort****superior

Copyright © Dr. Szigeti Tamás

Balatonfüred, Hotel Silver Resort, 2015. 10. 15.

Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Balatonfüred, 2015. október 15. Food & Agro

Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata

Szigeti Tamás János WESSLING Hungary Kft.

Hotel Silver Resort, Balatonfüred, Zákonyi Ferenc u. 4. Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

WESSLING Hungary Kft. Budapest, Fóti út 56.


A WESSLING cégcsoport számokban

• 1983: cégalapítás, Altenberge, Németország • 1992: cégalapítás Budapesten, • 2015: Magyarország, 280 munkatárs, 2,9 milliárd Ft forgalom • 23 éve piacvezető pozíció • 10 országban • 18 laboratórium, 30 iroda • >1200 munkatárs • Teljes cégcsoportban: >70 millió € üzleti forgalom

Szakmai politikánk – Független laboratóriumok

„Életünk minősége” – szakértelmünk egy jobb életminőség szolgálatában Vállalati vezérlő elv: QSHE filozófia: Quality – Safety – Health – Environment Kifogástalan környezet, élelmiszer és gyógyszer minőség Doppingmentes sport - egészséges sportolók

Elemzés

Tanácsadás

Tervezés

1983 óta

Laboratóriumaink és irodáink földrajzi elhelyezkedése Németország: Altenberge Berlin Bochum Bréma Darmstadt Drezda Halle/Saale Hamburg Hannover Ingelheim Köln Mannheim München Münster Spremberg Stuttgart Walldorf

Franciaország: Lyon Párizs Olaszország: Bologna Lengyelország: Krakkó Posen Varsó Románia: Bukarest Marosvásár-hely Oroszország: Moszkva Svájc: Bern

Magyarországon: Budapest és Gödöllő (BIOMI)

Európán kívül: Kína (Shaghai)

Elemzés, tanácsadás, tervezés Környezeti vizsgálatok → Talajvizsgálat → Vízvizsgálat → Levegővizsgálat → Hulladékvizsgálat • Üzemi, telephelyi felmérések • Jártassági vizsgálatok szervezése (QualcoDuna)

Élelmiszer- és takarmányvizsgálatok → Analitikai vizsgálat → Mikrobiológiai vizsgálat → Molekuláris biológiai v. → Érzékszervi vizsgálat • Non-food termékek vizsg. • Csomagolóanyagok vizsg. • Gyógyszervizsgálatok • Doppinganalitika

Menedzsmentszolgáltatások, szaktanácsadás • Kutatás-fejlesztés • Oktatás, felnőttképzés • Társadalmi aktivitások • Együttműködés a médiával

Néhány fontosabb, akkreditált vizsgálati terület Gyógyszerészeti vizsgálatok

Csomagolóanyagok vizsgálata Környezetvédelmi vizsgálatok

Takarmányok vizsgálata

Zöldségfélék, gyümölcsök vizsgálata

Halászati termékek vizsgálata

Kozmetikai ipar termékeinek vizsgálata (non-food)

Hús- és tejipari vizsgálatok

Gabonafélék, műtrágyák vizsgálata


Allergia

http://www.niaid.nih.gov/topics/foodAllergy/Documents/foodallergy.pdf

Néhány másodperc etimológia (Tóthfalusi, 2005)

αλλεργεία = eltérő működés αλλε = másképp εργoν = cselekvés, ténykedés Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Allergének listája 1. 2. 3. 4. 5. 6.

Glutént tartalmazó gabona (búza, rozs, árpa, zab, tönköly, kamut) Rákfélék és azokból készült termékek Tojás és abból készült termékek Halak és azokból készült termékek (néhány kivétellel; halenyvek) Földimogyoró és abból készült termékek Szójabab és abból készült termékek, kivéve a finomított szójabab olaj és zsír stb. (kivételek: E és D vitamin-készítmények) 7. Tej és abból készült termékek beleértve a laktózt (néhány kivétel van) 8. Diófélék (mandula, mogyoró, dió, kesudió, pekándió, pisztácia, queenslandi dió) 9. Zeller és abból készült termékek 10. Mustár és abból készült termékek 11. Szezámmag és abból készült termékek 12. Kén-dioxid és szulfitok 13. Csillagfürt és abból készült termékek 14. Puhatestűek és abból készült termékek


Allergének 1/5

Glutént tartalmazó gabonák (búza, rozs, árpa, zab, tönköly, kamut)

Rákfélék és azokból készült termékek

Tojás és az abból készült termékek


Allergének 2/5

Halak és az azokból készült termékek néhány kivétellel (halenyvek)

Földimogyoró és az abból készült termékek

Szójabab és az abból készült termékek, (kivéve a finomított szójabab olaj és zsír, E és D vitaminok)


Allergének 3/5

Tej és abból készült termékek beleértve a laktózt (néhány kivétel van)

Diófélék, azaz mandula, mogyoró, dió, kesudió, pekándió, pisztácia, queenslandi dió

Zeller és abból készült termékek


Allergének 4/5

Mustár és az abból készült termékek

Szezámmag és abból készült termékek

Kén-dioxid: SO2


Allergének 5/5

Csillagfürt és az abból készült termékek

Puhatestűek és abból készült termékek


Analitika – Semper eadem… Mindig ugyanúgy…


Allergének listája 1. Glutént tartalmazó gabona (búza, rozs, árpa, zab, tönköly, kamut) Határérték: 20 mg/kg 2. Rákfélék és azokból készült termékek 3. Tojás és abból készült termékek 4. Halak és azokból készült termékek (néhány kivétellel; halenyvek) 5. Földimogyoró és abból készült termékek 6. Szójabab és abból készült termékek, kivéve a finomított szójabab olaj és zsír stb. (kivételek: E és D vitaminok) 7. Tej és abból készült termékek beleértve a laktózt (néhány kivétel van) 8. Diófélék (mandula, mogyoró, dió, kesudió, pekándió, pisztácia, queenslandi dió) 9. Zeller és abból készült termékek 10. Mustár és abból készült termékek 11. Szezámmag és abból készült termékek 12. Kén-dioxid és szulfitok Határérték: 10 mg/kg, illetve 10 mg/L 13. Csillagfürt és abból készült termékek 14. Puhatestűek és abból készült termékek Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Allergének vizsgálati lehetőségei 1/3 Allergének Glutén

Allergiát kiváltó anyagok Fehérjék (gliadin, glutenin)

Fehérje (parvalbumin) Rákfélék Hisztamin Tojás

Fehérjék (ovalbumin, ovomukoid, lizozim stb.) Fehérje (parvalbumin)

Halak Hisztamin Fehérjék (arachin és még >80 féle Földimogyoró egyéb fehérje)

Analízis lehetőségei Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS GC-MS, LC-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS GC-MS, LC-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS


Allergének vizsgálati lehetőségei 2/3 Allergének

Allergiát kiváltó anyagok Fehérjék (lektinek)

Szójabab Fehérjék (fito-ösztrogének) Tej

Fehérjék (β-laktoblobulin, egyéb globulinok és albuminok, kazein,)

Diófélék

Fehérjék (11S és 75 globulinok, leguminek stb.)

Zeller

Fehérjék (Api-g-1 → 159 aminosav, profilin)

Mustár

Fehérje (Sin-a-1)

Analízis lehetőségei Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS GC-MS, LC-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS


Allergének vizsgálati lehetőségei 3/3 Allergének

Allergiát kiváltó anyagok

Analízis lehetőségei Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS

Szezámmag

Fehérjék, olaj

Kéndioxid

SO2

Sektrofotometria, titrimetria

Csillagfürt

Fehérjék (34.5 kDa konglutin β → Lup1, 20 kDa konglutin α → Lup 2)

Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS

Puhatestűek

Hisztamin

GC-MS, LC-MS

Fehérjék

Immun assay, ELISA, SEC, Gél-ELFO, TLC, SPRS, RT-PCR, LC-MS, MALDI-TOF-MS

Puhatestűek

ELISA: Enzyme Linked Immune Sorbent Assay; SEC: Size Exclusion Chrom., ELFO: Electrophoresis, TLC: Thin Layer Chrom., SPRS: Surface Plasmon Resonance Spectroscopy, RT-PCR: Real Time Polymerase Chain Reaction, MALDI-TOF-MS: Matrix Aided Laser Desorption Ionisation - Time Of Flight Mass Spectroscopy Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Keresztszennyezések: Végzetes hal-fehérjék sütőolajban

Fatal food- induced anaphylaxis. Yunginger JW, Sweeney KG, Sturner WQ, Giannandrea LA, Teigland JD, Bray M, Benson PA, York JA, Biedrzycki L, Squillace DL, et al (1988) JAMA 260:1450-2 Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Keresztszennyezések: Garnélarák-fehérjék sütőolajban

Transfer of Shrimp Allergens to Other Foods Through Cooking Oil? S.B. Lehrer, L. Kim, T. Rice, J. Saidu, J. Bell, R. Martin., Journal of Allergy and Clinical Immunology Volume 119, Issue 1. Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Keresztszennyezések: Végzetes mogyoró nyomok

Anafilaxiás sokkot egyetlen morzsányi mogyoró is okozhat az arra rendkívül érzékeny egyéneknél!


Mérni kell, évről-évre nagyobb érzékenységgel…

Kimutatási határ

• Új adatok eddig nem ismert összetevőkről • Aggodalmak • Kockázatelemzés • Vizsgálati igények • Mérési bizonytalanság • Vizsgálati díjak

Évek Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Egy egyszerű mérési módszer


Kén-dioxid és szulfitok

S O

O


Szulfittartalom – MSZ EN 1988-1:1999 Desztillációval

A vizsgálat a szedőben összegyűjtött folyadék kénsav-tartalmának titrálásával végződik.

SO2 + H2O = H2SO3 H2SO3 + H2O2 = H2SO4 + H2O H2SO4 + 2NaOH = Na2SO4 + 2H2O Monier-Williams készülék Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Kevésbé egyszerű mérési módszerek…


Hisztamin – biogén amin halakból, sajtokból, borokból

Hisztamin


Tejcukor – laktóz (galaktóz + glükóz – diszacharid)

Laktóz


Tejcukor – laktóz elválasztása HPLC technikával

Kromatogram Laktóz

Kolonna Detektor Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Nagyméretű molekulák vizsgálata


Profilin-aktin sejt-vázfehérje komplex és a Bet-v-1

Profilin zellerből

Bet-v-1 nyírfából

Aktin Bet-v-1 allergén fehérje a fehér nyír (Betula verrucosa) pollenjéből → erős keresztreakciót ad a zeller Api-g-1 fehérjéjével → hasonló hozzá) Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Halak és rákok jellemző allergén fehérjéi

EF-kéz-motivumú fehérje – parvalbumin – halakból és rákokból Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Β-laktoglobulin a tej leg-allergizálóbb fehérjéje


Az α-gliadin láncának szerkezete 1/3 Immun-módosító hatás

CXCR3-IL-8 felszabadító hatás cukorbeteg egyéneknél

Citotoxikus hatás

Zonulinfelszabadító hatás Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Az α-gliadin láncának szerkezete 2/3 CXCR3 A CXCR3 – kemokin – protein a T-limfociták és az NK-sejtek (Natural Killer) aktivációja, során, illetve néhány epitetiális sejtben expresszálódik; Szabályozni képes a leukociták képződését és pusztulását; Elősegíti a Th1 sejtek érését, szerepet játszik a sebgyógyulásban is; a T-limfociták a fehérje antigének felismerésére specializálódott sejtek, amelyek a csontvelőt elhagyva a thymusban (csecsemőmirigyben) érnek be; A limfociták másik csoportja egyéb limfoid szövetekbe vándorolva B limfocitákká alakul; Minden B sejt egy bizonyos ellenanyag termelésére van programozva; A Th (T helper) sejtek általában a külső térből bekerülő fehérjék bomlásából képződő peptideket ismerik fel; A T sejtek összehangolják a szervezet immunreakcióit és közvetlenül is megtámadják a szervezet normálistól eltérő működésű sejtjeit. Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Az α-gliadin láncának szerkezete 3/3 ÉVIK 2015. 2. szám


48 vájulatos ELISA lemez (ELISA plate)


A vájulatokhoz kötött antitestek specifikusak

A polisztirol lemezhez antitesteket („Y”) kötnek, amelyek specifikusan képesek kötődni a vizsgálandó mintában keresett antigénhez. Pl. gliadinhoz, tejfehérjéhez, mogyoró-fehérjéhez stb.

Y


Szendvics típusú ELISA működési elve

Y

A minta antigén részecskéje

A mintához utólag kötődő antitest

A mintához adott szubsztrát megváltozott

U

A mintához adott szubsztrát

Az antitesthez kötődő reaktív molekula, pl. enzim

Y

A lemezhez kötött antitest

A polisztirolból készült ELISA lemez egyik vájulata


Glutén ”mentesség”

Gluténmentes: <20 mg/kg glutén Fontos: a mentesség fogalma nem jelent nulla gluténtartalmat:

Mentes  0 Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Codex Committee Measurement Analyses and Sampling


Analitika – Semper eadem… Mindig ugyanúgy…

Az analitikai munka egyik alapszabálya:

A vizsgálatokat mindig ugyanúgy, azonos körülmények között kell végezni Kérdés: Ez a feltétel általánosan teljesül, pl. a glutén kimutatására szolgáló, különböző gyártmányú ELISA kitek használata esetén? Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

A különböző ELISA kitek különböző helyen reagálhatnak

A különböző epitópokon zajló antigén-antitest reakciók (R5 és G12 módszerek) érzékenység tekintetében nem szükségszerűen azonosak. Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

Surface Plasmon Resonance Spectroscopy - SPRS

Egy új, érzékeny immunkémiai és optikai elven működő analitikai lehetőség:

SPRS: Surface Plasmon Resonance Spectroscopy Immunkémiai elve hasonló az ELISA-hoz.


Surface Plazmon Resonance Spectroscopy - SPRS

Prizma Elektromágnes es hullámok

Y Y Y Y Y Y Y

Y Fémlemez (arany)

Dielektrikum

Mintatér

Rögzített antitestek



Visszavert fénysugár

Beeső fénysugár

Y Y Y Y Y Y Y

Y





Y Y Y Y Y Y Y

Beeső fénysugár

Y


Új lehetőség a makomolekulák analitikai vizsgálatára


MALDI-TOF-MS

Matrix Aided LASER Desorption Ioniosation – Time Of Flight – Mass Spectrometry


A MALDI-TOF-MS saválló acél mintatartó lemeze


A MALDI-TOF-MS saválló acél mintatartó lemeze közelről


A MALDI-TOF-MS saválló acél mintatartó lemeze rajzon


A mátrix: α-Ciano-4-hidroxi-fahéjsav

Hullámhossz (nm) Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

A MALDI-TOF-MS lézer impulzus


A MALDI-TOF-MS lényegében egy igen pontos stopper


A MALDI-TOF-MS repülési csövének sematikus ábrája A technikával a nagymolekulájú vegyületek is jó hatásfokkal vizsgálhatók. Pl.:

Hormonok, Allergének, Hosszú szénláncú szénhidrogének, Fehérje-szénhidrát komplexek, Mikroorganizmusok fehérjéi.

t1 m1

t3 m3 t2 m2

Az eszköz főként jelenlét/hiány vizsgálatára alkalmas. Allergiát és intoleranciát okozó anyagok analitikai vizsgálata [dr. Szigeti Tamás]

t4 m4

Élelmiszervizsgálati közlemények 2014. 4. száma


A megújult Élelmiszervizsgálati közlemények számai

2014. március 31.

2014. június 30.

2015. március 31.

2014. október 1.

2015. június 30.

2014 december 31.

2015. szeptember 30.

www.eviko.hu

A megújult Élelmiszervizsgálati közlemények

 Nyomtatott  Elektronikus: www.eviko.hu  Magyar és angol nyelvű  A4 méretű  Évente 4 szám  március 31.  június 30.  október 1.  december 31.

Ahol megszabadulhatunk a pollenallergiától… Korčula

Köszönöm megtisztelő figyelmüket és türelmüket!


ÉLELMISZERJOGI KONFERENCIA október Balatonfüred, Hotel Silver Resort****superior. Copyright Dr. Szigeti Tamás

Recommend Documents