Federaal Agentschap
Agence fédérale
voor de Veiligheid
pour la Sécurité de la
van de Voedselketen
Chaîne alimentaire
FLVVM
LFSAGx
I-MET MIC 069b-076
BEPALING VAN HET AANTAL COLIFORMEN EN ESCHERICHIA COLI IN IJSBLOKJES MET RAPID E.COLI 2 AGAR (36°C) DÉNOMBREMENT DES COLIFORMES ET DES ESCHERICHIA COLI DANS LES GLAÇONS SUR RAPID’E. COLI 2 AGAR (36°C) Versie Datum van toepassing
03 2014-05-01
Version Date d’application
03 2014-05-01
Opgesteld door : Rédaction par :
E. Harnie sectieverantwoordelijke biologische analyses FLVVM; 2014-03-27
Nazicht door : Révision par :
A. Dubois, responsable qualité LFSAGx; 2014-04-23
Goedkeuring vrijgave door : Autorisation de publication par:
MC Wilem responsable de la section microbiologie LFSAGx ; 2014-04-23
Beheer & locatie geldende versie : Gestion et localisation de la version valide :
N:\LABO\QSE DOC\Microbiologie\I-MET QAM
Bestemmelingen : Destinataires :
Sectie biologische analyses: microbiologie Section Microbiologie
Trefwoorden : Mots clés
Coliformen en Escherichia coli, kolonietelling, Rapid E. coli 2 Agar Coliformes et des Escherichia coli, comptage des colonies , Rapid E. coli 2 Agar
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BEPALING VAN HET AANTAL COLIFORMEN EN ESCHERICHIA COLI IN IJSBLOKSJES MET RAPID E. COLI 2 AGAR (36°C) DENOMBREMENT DES COLIFORMES ET DES ESCHERICHIA COLI DANS LES GLAÇONS SUR RAPID’E.COLI 2 AGAR (36°C) OVERZICHT WIJZIGINGEN – APERCU DES REVISIONS (*)
Herziening door/datum Révision par/date* EH, 14/11/2013 EH,06/01/2014
Reden van herziening - Motif de la révision
Tekstdeel / draagwijdte van de herziening - Partie de texte / portée de la révision
Document original.
Aanpassen locatie Aanpassen prestatiekenmerken (fout) EH 04/03/2014 Aanpassen referenties formulieren EH 27/03/2014 Aanpassen locatie AD, Précisions. 23/04/2014 * Het verschil tussen de huidige datum en de laatste herziening mag niet meer dan 5 jaar bedragen.
voorblad 6. 13.3 Voorblad 7.
* L’écart entre la date actuelle et la date de la dernière révision ne peut pas dépasser 5 ans.
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BEPALING VAN HET AANTAL COLIFORMEN EN ESCHERICHIA COLI IN IJSBLOKSJES MET RAPID E. COLI 2 AGAR (36°C) DENOMBREMENT DES COLIFORMES ET DES ESCHERICHIA COLI DANS LES GLAÇONS SUR RAPID’E.COLI 2 AGAR (36°C) INHOUDSTABEL - TABLE DES MATIÈRES 1
DOEL – OBJECTIF ............................................................................................................ 4
2
TOEPASSINGSGEBIED – DOMAINE D’APPLICATION ................................................. 4
3 WETTELIJKE EN NORMATIEVE DOCUMENTEN – DOCUMENTS LÉGAUX ET NORMATIFS ............................................................................................................................. 4 4
DEFINITIES EN AFKORTINGEN – DEFINITIONS ET ABREVIATIONS ......................... 4
5
PRINCIPE – PRINCIPE ..................................................................................................... 5
6
PRESTATIEKENMERKEN – INDICATEURS DE PRESTATION ..................................... 5
7 VEILIGHEIDSVOORSCHRIFTEN EN BIJZONDERE MAATREGELEN – CONSIGNES DE SÉCURITÉ ET MESURES SPÉCIFIQUES ......................................................................... 5 8
CULTUURMEDIA – MILIEUX DE CULTURE ................................................................... 6
9
TOESTELLEN – EQUIPEMENT ........................................................................................ 6
10 WERKWIJZE – MÉTHODE DE TRAVAIL ......................................................................... 6 11 KWALITEITSCONTROLE – CONTRÔLE QUALITÉ ........................................................ 6 12 BEREKENING EN RAPPORTERING – CALCUL ET RAPPORTAGE ............................ 6 12.1 12.2
BEREKENINGSWIJZE VAN DE RESULTATEN – CALCUL DES RÉSULTATS .......................... 6 UITDRUKKINGSWIJZE VAN DE RESULTATEN – EXPRESSION DES RÉSULTATS .................. 6
13 VERWIJZING NAAR BIJHORENDE PROCEDURE, INSTRUCTIES, DOCUMENTEN, FORMULIEREN OF LIJSTEN – RÉFÉRENCE AUX PROCÉDURES, INSTRUCTIONS, DOCUMENTS, FORMULAIRES OU LISTES Y AFFÉRENTS ................................................. 7 13.1 13.2 13.3
PROCEDURES - PROCÉDURES ..................................................................................... 7 INSTRUCTIES - INSTRUCTIONS ..................................................................................... 7 FORMULIEREN - FORMULAIRES ................................................................................... 7
14 BIJLAGEN – ANNEXES .................................................................................................... 7
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BEPALING VAN HET AANTAL COLIFORMEN EN ESCHERICHIA COLI IN IJSBLOKSJES MET RAPID E. COLI 2 AGAR (36°C) DENOMBREMENT DES COLIFORMES ET DES ESCHERICHIA COLI DANS LES GLAÇONS SUR RAPID’E.COLI 2 AGAR (36°C)
1
Doel – Objectif
Dit werkvoorschrift beschrijft een methode voor de bepaling van het aantal coliformen en Escherichia coli bij 36°C met membraanfiltratie.
2
Toepassingsgebied – Domaine d’application
De methode is van toepassing op ijsblokjes.
3
Cette instruction décrit une méthode par filtration sur membrane pour le dénombrement des coliformes et des Escherichia coli par comptage des colonies à 36°C.
La méthode est applicable aux glaçons.
Wettelijke en normatieve documenten – Documents légaux et normatifs
Dit werkvoorschrift is conform het Afnor gevalideerde protocol RAPID E.coli 2 Agar (for water control) (BRD 07/20-03/11).
4
Cette instruction est conforme au protocole validé AFNOR RAPID’E. coli 2 Agar (for water control) (BRD 07/20-03/11).
Definities en afkortingen – Définitions et abréviations
Coliformen: bacteriën die in staat zijn om aëroob bij 36 °C op een selectief medium te groeien en in staat zijn om een β-D Galactosidase specifiek substraat af te breken.
Coliformes : bactéries pouvant former des colonies en aérobiose à 36°C sur un milieu sélectif et possédant un substrat spécifique de la β-D Galactosidase.
Escherichia coli: bacteriën die in staat zijn om aëroob bij 36 °C op een selectief medium te groeien en in staat zijn om naast een β-D Galactosidase specifiek substraat ook een β-D Glucuronidase specifiek substraat af te breken.
Escherichia coli : bactéries pouvant former des colonies en aérobiose à 36°C sur un milieu sélectif et possédant un substrat spécifique de la β-D Galactosidase et un substrat spécifique de la β-D Glucuronidase.
Bepaling van het aantal coliformen/E. coli: het aantal coliformen/E. coli uitgedrukt per x ml product, dat teruggevonden
Dénombrement des coliformes/E. coli : nombre de coliformes/E. coli par ml d’échantillon soumis à l’essai, lorsque
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les essais sont effectués conformément à cette instruction.
5
Principe – Principe
De bepaling van het aantal coliformen en E. coli bestaat uit volgende stappen: - Membraanfiltratie van een bepaalde hoeveelheid watermonster (poriëngrootte: 0.45 µm). - Membraanfilter op Rapid’E. coli 2 Agar brengen. - Incubatie van de platen bij 36 2°C gedurende 21±3h. - Telling van verdachte kolonies.
6
Le dénombrement des coliformes et E.coli nécessite les étapes suivantes : - Filtration d’un volume spécifié d’un échantillon d’eau à travers une membrane filtrante (taille des pores : 0,45 μm). - La membrane est placée sur Rapid’E. coli 2 Agar. - Incubation des boîtes à 36 2°C pendant 21 3h. - Dénombrement des colonies suspectes.
Prestatiekenmerken – Indicateurs de prestation
Herhaalbaarheid : Coliformen : < 0.25 cfu/100ml E. coli : < 0.28 cfu/100ml
Répétabilité : Coliformes : < 0,12 ufc/100ml. E. coli : < 0,22 ufc/100ml.
Intralab. reproduceerbaarheid : Coliformen : < 0.25 cfu/100ml E. coli : < 0.28 cfu/100ml
Reproductibilité intralaboratoire : Coliformes : < 0,16 ufc/100ml. E. coli : < 0,30 ufc/100ml.
Voor details omtrent de berekeningen van de prestatiekenmerken: zie validatiedossier
Pour les détails, voir le dossier de validation.
7 -
Veiligheidsvoorschriften en bijzondere maatregelen – Consignes de sécurité et mesures spécifiques
Al het gebruikte materiaal en geënte media moeten verzameld
-
Tout le matériel ayant servi à la manipulation, les cultures
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BEPALING VAN HET AANTAL COLIFORMEN EN ESCHERICHIA COLI IN IJSBLOKSJES MET RAPID E. COLI 2 AGAR (36°C) DENOMBREMENT DES COLIFORMES ET DES ESCHERICHIA COLI DANS LES GLAÇONS SUR RAPID’E.COLI 2 AGAR (36°C) -
worden in de gele containers voor selectieve ophaling. Werk steeds in de nabijheid van de vlam. -
8 -
Cultuurmedia – Milieux de culture
Rapid’E. coli 2 Agar
-
9 Algemene apparatuur van het labo. Filtratietoestel.
positives et les échantillons positifs sont placés dans les containers jaunes pour une collecte sélective. Les manipulations sont effectuées dans une enceinte de sécurité microbiologique sous une hotte à flux laminaire.
Rapid’E. coli 2 Agar.
Toestellen – Equipement Matériel courant de laboratoire. Appareillage de filtration.
10 Werkwijze – Méthode de travail Zie bijlage schema werkwijze.
Voir le schéma en annexe. 11
Zie LAB 24 P 005 Kwaliteitscontrole.
Kwaliteitscontrole – Contrôle qualité Voir instruction « Contrôles qualité internes ».
12 Berekening en rapportering – Calcul et rapportage 12.1 Berekeningswijze van de resultaten – Calcul des résultats Zie LAB 24 P 007 I 001 Berekening en uitdrukking van de Voir instruction « Comptage des colonies et expression des resultaten. résultats ». 12.2 Uitdrukkingswijze van de resultaten – Expression des résultats Het resultaat wordt uitgedrukt in cfu per gegeven volume Le résultat est exprimé en ufc dans un volume donné de proefmonster. l’échantillon.
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BEPALING VAN HET AANTAL COLIFORMEN EN ESCHERICHIA COLI IN IJSBLOKSJES MET RAPID E. COLI 2 AGAR (36°C) DENOMBREMENT DES COLIFORMES ET DES ESCHERICHIA COLI DANS LES GLAÇONS SUR RAPID’E.COLI 2 AGAR (36°C) 13 Verwijzing naar bijhorende procedure, instructies, documenten, formulieren of lijsten – Référence aux procédures, instructions, documents, formulaires ou listes y afférents -
-
-
13.1 Procedures - Procédures LAB 24 P 005 Kwaliteitscontrole 13.2 Instructies - Instructions LAB 24 P 007 Algemene handleiding Microbiologie - « Préparation des échantillons, de la suspension mère et LAB 24 P 007 I 002 Voorbereiding van monsters en des dilutions décimales suivantes en vue de l’examen aanmaken van verdunningen voor microbiologisch onderzoek microbiologique » (LAB-21-I-MIC-001) LAB 24 P 007 I 001 Berekening en uitdrukking van de - « Comptage des colonies et expression des résultats » resultaten (LAB-21-I-MET-MIC-002) - « Contrôles qualité internes» (LAB-21-I-QUAL-001-CQI). 13.3 Formulieren - Formulaires LAB 24 P 007 F 008 Werkblad wateranalyses (2) bepaling - « Cahier des prélèvements » (LAB-21-F-MIC-001). kiemen, Pseudomonas aeruginosa, intestinale enterococcen, - « Cahier des analyses » (LAB-21-F-MIC-48). coliformen en E. coli, sporen van sulfietreducerende - « Cahier des résultats » (LAB-21-F-MIC-002). anaëroben en Clostridium (wateranalyse) LAB 24 P 007 F 009 Werkblad (1) bepaling kiemen, Pseudomonas aeruginosa, intestinale enterococcen, coliformen en E. coli, sporen van sulfietreducerende anaëroben en Clostridium (wateranalyse)
14 Bijlagen – Annexes Schema werkwijze.
Schéma du mode opératoire.
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BEPALING VAN HET AANTAL COLIFORMEN EN ESCHERICHIA COLI IN IJSBLOKSJES MET RAPID E. COLI 2 AGAR (36°C) DENOMBREMENT DES COLIFORMES ET DES ESCHERICHIA COLI DANS LES GLAÇONS SUR RAPID’E.COLI 2 AGAR (36°C) Bijlage : Schema werkwijze – Bepaling van het aantal coliformen en Escherichia coli in ijsblokjes (36°C)
Filtreer een hoeveelheid water, afhankelijk van het soort water (poriëngrootte: 0.45 µm)
Rapid E. coli 2 agar Incubatie 21±3h; 36±2ºC
Telling van verdachte kolonies *
* Verdachte kolonies: groen (coliformen) – donkerblauw tot paars of grijsblauw (E. coli). Soms met halo.
Opmerking : Voor meer details in verband met de uitvoering zie LAB 24 P 007 Algemene handleiding microbiologie
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BEPALING VAN HET AANTAL COLIFORMEN EN ESCHERICHIA COLI IN IJSBLOKSJES MET RAPID E. COLI 2 AGAR (36°C) DENOMBREMENT DES COLIFORMES ET DES ESCHERICHIA COLI DANS LES GLAÇONS SUR RAPID’E.COLI 2 AGAR (36°C) Annexe : Schéma d’analyse – Dénombrement des coliformes et Escherichia coli dans les glaçons (36°C)
Filtration d’un volume d’eau approprié au type d’eau examiné (grandeur de pores : 0.45 µm)
Rapid E. coli 2 agar Incubation 21±3h; 36±2ºC
Dénombrement des colonies suspectes*
* Colonies suspectes : vertes (coliformes) – bleu foncé à violet ou gris bleu (E. coli). Parfois avec halo.
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