Novel prevention and treatment possibilities for otitis media through the comprehensive identification of antigenic proteins
Az otitis media megelőzésének és kezelésének új lehetőségei EU projekt:OMVac Bán Éva, Ablonczy Mária,Németh Krisztina SE. II.sz. Gyermekgyógyászati klinika Bakteriológiai Laboratórium, Fül-Orr-Gégészeti Osztály
OMVac Cél: A NT Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis vakcina-jelölt fehérje antigénjeinek screenelése, validálása, identifikálása ,valamint tiszta, rekombinans formában való előállítása. A fentieknek a S.pneumoniae fehérje antigénjeivel való kombinálása az otitis media megelőzésére szolgáló vakcinában. A fenti három baktérium fehérje antigénjeivel szembeni protektiv ellenanyagok jellemzése.
OMVac konzorcium
Koordinátor:Intercell AG Company : nemzetközi vakcina kutató és fejlesztő Intézet, Bécs és Livingston.Jelenlegi fő termékek: Japán-encephalitis vakcina III.fázis, hepatitis C vakcina II.fázis.
Agowa Company:nemzetközi molekulárgenetikai intézet, Berlin
Graz Egyetem, Biofizikai tanszék
Erasmus MC, Rotterdam. Ny-Európa legnagyobb oktató kórháza. 100 fős Mikrob.Laboratórium-30 kutató(részállás). C.jejuni és a Guillian-Barrè syndroma összefüggése (molekuláris mimikri), a S.aureus kolonizációját elősegítő faktorok kutatása, a Moraxella catarrhalis virulenciai faktorai. University Nijmegen, Medical Centre.Laboratory of Pediatric Infectious Diseases. A S.pneumoniae,M.catarrhalis, Coagulase-negativ Staphylococcus, N.meningitidis infekciók molekuláris epidemiológiája, molekuláris pathogenesise. A vakcina kolonizációt visszaszoritó hatását modelláló állatkisérletek.
OMVac konzorcium
SMI(Swedish Institute for Infectious Disease Control)-a légúti infekciók, enterális infekciók,nosocomiális infekciók, antibiotikum rezisztencia nemzeti referencia laboratóriuma.(Karolinska). Kutatási téma: elsősorban a légúti bakteriális infekciók. SE- II.sz Gyermekklinika . Bakteriológiai Laboratórium. Fül-Orr-Gégészeti Osztály. Témavezető: Bán Éva Résztvevők: Ablonczy Mária, Németh Krisztina
OMVac projekt
RD program. FP6(Framework 6 program) 100 jelentkező közül a legmagasabb pontszámmal értékelve 2,7 millió € összdíjazás, 126 000 € :SE. Időtartam:2006 október-2008 április 1.periódus 2008 április-2010 március 2.periódus Konzorcium meetingek: évente 2 -a résztvevő országokban. A konzorcium tagjai:mikrobiológusok,biokémikusok, orvosok.
A munkacsoport fő tevékenysége
AOM, rOM,OME, COM*-ből(0-14 év) származó , a három fő kórokozónak tartott törzsek gyüjtése (SE. II.sz. Gyermekklinika , Nijmegen Medical Center). SE: tympanocentesis,myringotomia. Nijmegen: OMEtympanostomiás tubus. SE: S.pyogenes is ! SE, Nijmegen: a klinikai adatok elemzése SE: akut és reconvalescens savó, középfülváladék. Nijmegen: savók a krónikus esetekből. Nijmegen: PCR, virológia
Protein antigének validálása, identifikálása az Intercell-ben kifejlesztett (AIP) biotechnológiai módszer szerint. A kiválasztott protein antigének molekulárbiológiai vizgálata.A clonalitás és az infekció/kolonizáció összefüggése. Sequenálás. * : AOM: akut otitis media,COM: krónikus otitis media, rOM: rekurrens otitis media, OME: otitis media with effusion
A munkacsoport fő tevékenysége
Állatkísérletek A kiválasztott antigénekkel szembeni immunválasz vizsgálata:IgG, IgA ELISA a teljes sejt extractumot használva, quantitativ és qualitativ immunoblot,opsonophagocytosis assay,serum baktericid assay, adhezios assay,a vasfelvétel gátlása, complement aktiválódás. Biofilm vizsgálatok.
Az otitis media megelőzésére szolgáló vakcina indokoltsága USA -- 24 millió otitis media évente,26%
recurrens. A gyermekháziorvosok idejük cc.30%-ban otitist kezelnek. Antibakteriális kezelést igényel-cc20-30%. De:metaanalizisek nem igazolták (evidencia A) az antibiotikumkezelés előnyeit.
Az otitis media megelőzésére szolgáló vakcina indokoltsága Az AOM-ban szerepet játszó legfontosabb baktériumok és azok %-os megoszlása kórokozó S.pneumoniae NT H.influenzae M.catarrhalis S.pyogenes
gyakoriság 50% 20-30% 10-15% 3%
spontán gyógyhajlam 10% 50% 70 % ?
Alloiococcus otitidis
Elsősorban OME-ban Gram-pozitív, igen nehezen tenyészthető zöldítő coccus.
OME-ban PCR-el 20-40%-ban kimutatható volt.
A PCR pozitivitás az otitis időbeli lefolyásával egyenes arányban nőtt.
Penicillin , ampicillin S vagy IS. Erythromycin rezisztens.
Pathológiai szerepe még további bizonyításra vár.
Az otitis media megelőzésére szolgáló vakcina indokoltsága
NT Haemophilus influenzae vakcina ezideig nem létezik. Moraxella catarrhalis vakcina ezidáig nem létezik. A 7 valens pneumococcus vakcina az AOM –t okozó S.pneumoniae törzsek cc. 70%-t fedi le. A konjugált pneumococcus- vakcinák OM előfodulását csökkentő hatása : Számos vizsgálat létezik: 6%-10%---38% -os hatékonyság. A PCV11-PD(Haemophilus -ból származó proteinnel konjugálva):52%-57%-os hatékonyság a pneumococcus vakcinaszerotípusok által okozott otitisekre vonatkozóan és 35%-os csökkenés a NTHI-ra vonatkozóan. Ugyanakkor az utóbbi évkben jelentősen megszaporodott azon pneumococcus- otitisek száma, amelyeket nem vakcina-szerotípusok illetőleg a többi otitis kórokozó okoz(„Replacement”)
Az otitis media megelőzésére szolgáló vakcina indokoltsága Régóta tudott: a természetes, korral összefüggő csökkenése az invazív pneumococcus infekcióknak nincs összefüggésben a poliszacharida antigének elleni ellenanyagok mennyiségével.
1.
2.
3.
fehérje alapú vakcinák vs. poliszacharida vakcinák: A fehérje (vs.poliszacharida) antigén T-dependens antigénként viselkedik, igy immunmemória kialakítására képes 2 éves kor alatt is !!!! Egyes poliszacharida szerotípusok eleve gyenge immunogenitásuak(ezen törzsek esetében a penicillin rezisztencia is gyakoribb ). A vakcina-jelölt fehérje antigén a világon előforduló pneumococcus törzsek legtöbbjében előfordul:közös –protein vakcina. A védettség nem szerotípus függő!!! . A „replacement” jelenség várhatóan elmarad.
Az otitis media megelőzésére szolgáló vakcina indokoltsága A fehérje alapú vakcinák vs. poliszacharida vakcinák: 4. A fehérje alapú vakcinák elterjedése várhatóan hatással lesz a pneumococcus kolonizációra is. 5.Rekombináns technikával készült vakcina, olcsó.
A pneumococcus felsőlégúti hordozása Fejlődő országokban-már pár hónapos korra:50-100% Fejlett országokban- 2 éves korra: cc.40% Felnőttek - cc. 6% Felnőttek, kisgyermek környezetében:18-29%
„replacement” A jelenkor: a Superbug” 19A szerotípus(nem szerepel a 7 valens vakcinákban, „replacement jelenség): nő az általa okozott invazív infekciók száma (pl.Massachusetts 2001-2006) Nagy százalékban béta-laktam rezisztensek, 15% ceftriaxon rezisztens).
Klinikai vizsgálatok University Nijmegen Medical Centre, Lab. and Dep. of Pediatric Infectious Diseases Klinikai vizsgálatok: A kor és az otitis formája közötti összefüggés: Kor AOM % 0-1 100 1-2 50 2-3 40 3-4 18 4-5 10 (a többi. rOM, OME, COM)
University Nijmegen Medical Centre, Lab. and Dep. of Pediatric Infectious Diseases Mikrobiológia: csak COM, OME-ból(tympanostomiás tubus) A culture negativitás az életkorral egyenes arányban nő. A kevert fertőzések aránya az életkorral egyenes arányban nő.
Virológia(PCR) Rhinovirus és a S.pneumoniae összefüggése. . rOM,COM –ban detektált virusok különböznek az AOM –ban detektáltaktól
University Nijmegen Medical Centre, Lab. and Dep. of Pediatric Infectious Diseases Állatkísérletek: A baktériumok 24-48 óra alatt eltűnnek a középfülből. Az infektív dózis és a detektálhatóság határa közel van egymáshoz.
SE.II.sz.Gyermekgyógyászati klinikán végzett vizsgálatok(mikrobiológia, klinikai adatok)
513 középfülváladék— 0-14 év között, kezeletlen, főleg AOM + OME, rOM,AOM+ sinusitis. 242-írásos beleegyezés( 242 acut és 135 reconvalescens savó, 192 középfülváladék további vizsgálatra). (70 -AOM + sinusitis)
SE II.sz.Gyermekgyógyászati klinikán végzett vizsgálatok
Mintavétel: Tympanocentesis Myringotomia Sinus punkció Középső orrkagyló alól, otoskóppal vezérelve
SE.II.sz.Gyermekgyógyászati klinika/ HEPI vizsgálat
HEPI 2000-2005(három periódus),0-14 év, kezeletlen AOM, 830 vizsgált minta. Mintavétel:vacutainer-es aspiráció a dobüregből
SE.II.sz.Gyermekgyógyászati klinika vs.HEPI vizsgálat tenyésztési eredményei HEPI I/II
HEPI III.
SE I
SE II
Pozitivitás %
45,2
56,1
44
69
S.pneumoniae
31,4
34,4
20,6
27,6
8
14,3
18
33,8
NT H.influenzae M.catarrhalis
1,6
1,1
0
1
S.pyogenes
3,7
1,6
5,3
6,7
6
6
Kevert
SE.II.sz. Gyermekgyógyászati klinikán végzett vizsgálatok eredményeinek discutálása
A 69 %-os pozitivitás(tenyésztés) a nemzetközi átlag felett van. A NT H.influenzae és a S.pyogenes előfordulása nő. A.M.catarrhalis rendkivül alacsony előfordulásának oka ? tenyésztés/vs PCR----- Erasmus MC: significans különbség a sensitivitásban(S.pneumoniae esetében gyakorlatilag nincs különbség)
A négy legfontosabb OM- patogén antibiotikum érzékenysége (SE. II.sz. Gyermekgyógyászati klinika S.pneumoniae/erythromycin, clindamycin Ery R% Clind R% I.per.
26
25
II.per. 33 ErmB dominancia
21
A négy legfontosabb OM- patogén antibiotikum érzékenysége (SE. II.sz. Gyermekgyógyászati klinika ) S.pneumoniae/penicillin .
IR %
HR%
I.per.
21
5
II.per.
22
1
A négy legfontosabb OM- patogén antibiotikum érzékenysége (SE. II.sz. Gyermekgyógyászati klinika ) NT H.influenzae /ampicillin ampicillin R % I.per.
6
II.per.
18
A négy legfontosabb OM- patogén antibiotikum érzékenysége (SE. II.sz. Gyermekgyógyászati klinika
M.catarrhalis---100%-ban béta-laktamáz termelők. S.pyogenes-----csak egyetlen ery/clind res. törzs! (vs. HEPI :8,9/4,5 %)
A S.pyogenes által okozott OM
Számuk világszerte nő. Általában egyoldali. Magas lázzal jár. Lokálisan agresszív A fertőzés korai szakaszában gyakran spontán perforáció. Masszív, sűrű genny. Mastoiditis gyakori.
Köszönetnyilvánítás: Dr. Daróczi Katalin és a Fül-Orr-Gégészeti Osztály dolgozói Karajosné Dunai Andrea asszisztensnő
KÖSZÖNÖM A FIGYELMET! www.omvac.org/home.htm
