Analitikai módszerek validálása

Analitikai módszerek validálása ( Dr. Bezur László egy. doc. BME ÁAKT)

Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) 3.4.2. Lítium-karbonát tartalmú tabletták hatóanyag tartalmának meghatározására szolgáló láng-OES módszer validálása. Validálási terv 3.4.2.1. A vizsgálat célja A 200mg, 300mg és 400mg lítium-karbonát tartalmú tabletták hatóanyag tartalmának lángOES módszerrel történ meghatározására szolgáló módszer validálása. A vizsgálati minták relatív százalékos hatóanyag tartalma 95% és 105% közé kell essen. A validálás során vizsgáljuk a: (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7)

Paraméter

Azonosság Specifikusság Linearitás, a kalibrációs függvény illeszkedésének jósága Mérési tartomány Pontosság Precizitás, ismételhet ség Precizitás, labor ismételhet ség.


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) 3.4.2.2. A módszer leírása 3.4.2.2.1. Atomabszorpciós készülék és mérési körülmények A láng-OES méréseket Varian Techtron AA6 típusú atomabszorpciós spektrofotométerrel végezzük leveg -acetilén lángban az 11. táblázatban megadott körülmények között. 11. táblázat Az atomabszorpciós készülék beállítása L-OES üzemmódban Üzemmód Hullámhossz, nm Spektrális sávszélesség Ég fej típus Ég fej beállítás Megfigyelési magasság Leveg áramlási sebesség Acetilén áramlási sebesség Er sítés állítás Mintabeviteli sebesség Integrálási id Ütköz gömb beállítás Cseppleválasztó Kalibrációs függvény

nm nm fok mm skr skr ml/min s

L-OES 670,8 nm 0,5 nm 60mm-es réség elforgatva 900 10 mm 5 1,7 automatikus 3 5 távoli állás van 2 fokú polinom


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) 3.4.2.2.2. Standardok, vizsgálati minták Reagens Minta Minta Minta

M1 M2 M3

Anyag/minta Lítium-karbonát, Li2CO3 reagens min ség, szárítva Lítium-karbonát tabletta 200 mg/tbl lítium-karbonát tartalommal, Lítium-karbonát tabletta 300 mg/tbl lítium-karbonát tartalommal, Lítium-karbonát tabletta 400 mg/tbl lítium-karbonát tartalommal,

3.4.2.2.3. Anyagok, vegyszerek Reagens víz, ioncserével ionmentesített víz Sósav 32% Reanal, alt 1+1 sósav oldat


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) 3.4.2.2.4. Kalibráló oldatok készítése A kalibráló oldatok készítéséhez szárított, reagens min ség lítium-karbonát referencia anyagot használunk. Az összes kalibráló oldatot közvetlen referencia anyag beméréssel készítjük el az 12. táblázatban dokumentált módon. 12. Táblázat Kalibráló oldatok lítium-karbonát tabletták L-OES elemzéséhez a

b

c

d

e

No

Tervezett koncentráció Li2CO3 mg/l 0 50 100 150 200 250

Terv. konc. Li mg/l 0.0 9.4 18.8 28.2 37.6 47.0

Oldattérfogat

Tervezett bemérés Li2CO3 g 0,0000 0,0250 0,0500 0,0750 0,1000 0,1250

1 2 3 4 5 6

ml 500 500 500 500 500 500

f

g

h

Tényleges Tényleges 1+1 HCl bemérés koncentráció Li2CO3 Li2CO3 g mg/l ml #,#### #.## 10 #,#### #.## 10 #,#### #.## 10 #,#### #.## 10 #,#### #.## 10 #,#### #.## 10


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol)

Letárázott 50 ml-es f z pohárba a táblázat (e) oszlopában megadott nominális tömegekhez közeli lítium-karbonát mennyiségeket mérünk be. A pontos tényleges tömegeket feljegyezzük. A bemért lítium-karbonát referencia anyagot 10 ml reagens vízben feloldjuk, majd tölcséren át 500 ml-es mér lombikba mossuk át. A lombikba adagolunk 10 ml 1+1 sósavoldatot, összerázzuk az oldatot, megvárjuk a széndioxid eltávozását, majd jelre töltjük. A kész oldatot 500ml-es száraz PE flakonban tároljuk. A tényleges bemérésb l számítjuk kalibráló oldatok tényleges lítium-karbonát koncentrációját (c = 2000 mreag) és ezt az adatot használjuk a kalibrálás során. A kalibráló oldatokból 50 ml PE flakonba kitöltött részleteket használunk a L-OES méréshez. A 200 mg/l koncentrációjú oldatot használjuk ellen rz oldatként.


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) 3.4.2.3. Azonosság vizsgálata A L-OES módszer alkalmas a hatóanyag lítium ionok egyértelm méréssel 670,8 nm-nél csak a lítium ad jelet.

azonosítására. L-OES

3.4.2.4. Szelektivitás vizsgálata A mintában a hatóanyag lítium-karbonát mellett formázó anyagok keményít , talkum, zselatin és cutina (mátrix) található. A minta-el készítés során a lítium-karbonátot teljesen feloldjuk, míg a mátrix komponensek közül a talkum egyáltalán nem a keményít , zselatin és cutina részben oldódhat. A módszer szelektivitásának ellen rzésekor modell vizsgálatokkal igazoljuk, hogy a mátrix nélkül és a mátrix jelenlétében kapott vizsgálati eredmények nem térnek el szignifikáns mértékben. A vizsgálathoz a megadott minta-el készítési módszerrel két szintetikus mintaoldatot S0 és S1 készítünk (13. táblázat). A formázó anyagkeverékhez bemérünk: 1,230 g keményít t, 0,1575 g talkumot, 0,0900 g zselatint és 0,00225 g cutinát. Az anyagokat mozsárban homogenizáljuk, majd ebb l mérjük be a számított tömeg formázó adalékot. Az S0 és S1 oldat elemzését háromszor ismételjük meg, hogy az elemzés szórásához is kapjunk adatokat.


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) 13. táblázat Szintetikus mintaoldatok készítése és elemzése szelektivitás vizsgálatához Kód

S0 S1 S0 S1 S0 S1

L-OES ismétlés

Li2CO3 bemérés

h h i i j j

g 0,1000 0,1000 0,1000 0,1000 0,1000 0,1000

Formázó anyagkeverék bemérés g 0,0000 0,0500 0,0000 0,0500 0,0000 0,0500

Térfogat ml 500 500 500 500 500 500

Tervezett konc. Li2CO3 mg/l 200 200 200 200 200 200



3.4.2.5. Linearitás, kalibrációs függvény illeszkedése, mérési tartomány A L-OES mérés során elvégezzük a kalibrációt, majd 3-3 ismétléssel mérjük az 5 db kalibrációs oldatot (0, 50, 100, 150, 200 és 250 mg). A mért intenzitás adatokat átvisszük Excel állományba. A mérési pontokat Origin programmal dolgozzuk fel: (i) ábrázolás, (ii) másodfokú polinom illesztése, (iii) reziduumok számítása, (iv) reziduumok ábrázolása a koncentráció függvényében, (v) az illesztést jellemz adatok rögzítése. Az illeszkedés jóságát F-próbával is ellen rizzük. A számításokat a feladatra kidolgozott Excel számolótáblával végezzük.



3.4.2.6. Mintavétel, mintaoldatok készítése ismétl képesség és reprodukálhatóság vizsgálatához. A minták L-OES elemzése 3.4.2.6.1. Mintavétel az átlag tablettatömeg meghatározása, a mintarészlet porítása és homogenizálása Egy 50 ml-es PP f z poharat analitikai mérlegen letárázunk. A vizsgálandó mintából véletlenszer en, csipesszel 20 db tablettát veszünk ki és helyezünk a f z pohárba. Meghatározzuk a 20 db tabletta összes tömegét, majd kiszámítjuk az átlag tabletta tömeget. A 20 db tablettát késes darálóban elporítjuk, homogenizáljuk, majd a porított mintát PE tasakba visszük át, melyet ellátunk a minta azonosítójával. A minta-el készítés menetét rlapon dokumentáljuk. Az így el készített, porított minta bemérésével készítjük a mintaoldatokat.


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) 3.4.2.6.2. A mintaoldat készítés menete 2 db roncsoló betétbe analitikai mérlegen 0,1500 g porított, homogenizált mintát mérünk be. A bemért mintához óvatosan, kis részletekben 10 ml 1+1 hígítású sósav oldatot adagolunk ügyelve a kihabzás elkerülésére. 500 ml-es mér lombikba tölcsért helyezünk, majd a feloldott mintát átmossuk a mér lombikba. A betétet gondosan többször átöblítjük, majd a lombikot reagens vízzel jelre töltjük, és gondosan összerázzuk. Sz r tölcsérbe közepes pórusméret analitikai sz r papírt helyezünk, majd száraz, 50ml-es PE flakonba sz rjük a mintát. A sz rlet els két 10 ml-es részletét elöntjük, majd kb. 50 ml sz rletet gy jtünk. Mivel a 200mg, 300mg és 400mg hatóanyag tartalmú minták egységnyi tömegre vonatkoztatott lítium-karbonát tartalma azonos a minta-el készítés mindhárom tabletta típusra azonosan történik és a kapott mintaoldat lítium-karbonát koncentrációja is azonos (200 mg/l lítium-karbonát, ha a hatóanyag tartalom 100%).


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) A módszerrel vizsgálandó három tabletta típusból 1-1 mintát (M1, M2 és M3 vizsgálunk). Az ismétl képesség vizsgálatához 3-3 ismételt el készítést (A, B és C) végzünk minden mintából. Az így kapott 9db mintaoldat L-OES elemzését kétszer ismételjük meg (h és i) azonos kalibráló oldatokkal. A L-OES mérésnél a KAL200 oldat visszamérésével csúszáskorrekciót végzünk, a mintákat 5-5 ismételt mintabevitellel elemezzük. A fent leírt minták el készítését a reprodukálhatóság vizsgálatához három különböz napon (E, K, M) megismételjük a három vizsgálati napon a kalibráló oldatok el készítését is megismételjük (KE, KK, KM). A minta-el készítés menetét a 14. táblázat mutatja be.


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) 14. táblázat. Mintael készítés ismétl képesség és reprodukálhatóság vizsgálatához M1, M2 és M3 lítium-karbonát tabletta mintákkal a Minta

b Vizsgálati nap

M1, M2, M3

E

M1, M2, M3

E

M1, M2, M3

K

M1, M2, M3

K

M1, M2, M3

M

M1, M2, M3

M

c Teljes mintael készítés A B C A B C

A B C A B C A B C A B C

d Kalibráló oldatok készítése

e L-OES elemzés ismétlése

KE

h

KE

i

KK

h

KK

i

KM

h

KM

i

f Mintabevitel ismétlése

g A vizsgálat célja

1,2,3,4,5, 1,2,3,4,5, 1,2,3,4,5, 1,2,3,4,5, 1,2,3,4,5, 1,2,3,4,5,

ismétl kép.

1,2,3,4,5, 1,2,3,4,5, 1,2,3,4,5, 1,2,3,4,5, 1,2,3,4,5, 1,2,3,4,5,

ismétl kép.

ismétl kép.

ismétl kép.

1,2,3,4,5, ismétl kép. 1,2,3,4,5, 1,2,3,4,5, ismétl kép. 1,2,3,4,5, 1,2,3,4,5, 1,2,3,4,5, reprodukálhatóság E, K és M napi ismétlésb l


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) 3.4.2.7. Mintaoldatok készítése pontosság vizsgálatához. A minták L-OES elemzése A visszanyerés vizsgálatot öt koncentrációnál 94 %, 95 %, 100 %, 105 % és 106 % százalékos relatív hatóanyag tartalomnál vizsgáljuk. A 94 % és 106 %-os szint az elfogadási határon kívül esik, a 95 % és105 %-os szint az elfogadási határ a 100 % az elméletileg várható érték. A pontosság vizsgálatához standard referencia minta nem áll rendelkezésre, ezért a gyógyszerkészítmények vizsgálatára ajánlott szintetikus referencia minták segítségével végezzük a vizsgálatot. A szintetikus referencia minták készítését két komponensb l végezzük: (i) a hatóanyag lítium-karbonátból és a formázó anyagokat tartalmazó keverékb l. A vizsgálati mintákat a 15. táblázatban dokumentált módon készítjük két-két ismételt el készítéssel (A és B) minden szintnél. A formázó anyagkeverékhez bemérünk: 1,230 g keményít t, 0,1575 g talkumot, 0,0900 g zselatint és 0,00225 g cutinát. Az anyagokat mozsárban homogenizáljuk, majd ebb l mérjük be a számított tömeg formázó adalékot.


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) 15. táblázat Szintetikus minták készítése pontosság vizsgálatához a Kód

94A 94B 95A 95B 100A 100B 105A 105B 106A 106B

b c Tervezett Valódi T% T% % 0,94 0,94 0,95 0,95 1,00 1,00 1,05 1,05 1,06 1,06

#,## #,## #,## #,## #,## #,## #,## #,## #,## #,##

d

e

V

mö összes

ml 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500

g 0,1410 0,1410 0,1425 0,1425 0,1500 0,1500 0,1575 0,1575 0,1590 0,1590

f Tervezett mhat Li2CO3 66,6% g 0,0940 0,0940 0,0950 0,0950 0,1000 0,1000 0,1050 0,1050 0,1060 0,1060

g Valódi mhat Li2CO3 g #,#### #,#### #,#### #,#### #,#### #,#### #,#### #,#### #,#### #,####

h

e

mform Formázó 33,3% g 0,0470 0,0470 0,0475 0,0475 0,0500 0,0500 0,0525 0,0525 0,0530 0,0530

HCl 1+1 ml 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) A 15. táblázatban megadott szintetikus minták el készítése a 3.4.1.1. szakaszban leírtak szerint, a tablettaminták el készítésével azonos módon történik, de külön mérjük be a hatóanyagot és a formázó adalékok keverékét. A hatóanyag bemérés a tervezett értéknek megfelel en történik, de a ténylegesen bemért értéket használjuk a számításokban. A 15. táblázatban megadott módszerrel el készített 10 db minta L-OES elemzését a KE kalibráló oldat felhasználásával végezzük egy napon. A L-OES méréssorozatot kétszer ismételjük meg (1 és 2). A szintetikus minták elemzésénél azonos mérési szekvenciát és feldolgozási módszert alkalmazunk, mint a minták elemzésénél. A csúszás korrekciót a K200 kalibráló oldattal végezzük, a mintákat 5-5 ismételt mintabevitellel mérjük.


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) 3.4.2.8. Az elemzési adatok feldolgozása 3.4.2.8.1. Szelektivitás vizsgálati adatok értékelése A L-OES mérések adatait feldolgozzuk, alkalmazzuk a csúszás korrekciót, meghatározzuk az S0 és S1 oldatok átlag lítium-karbonát koncentrációját és az öt ismételt mintabevitellel mindhárom ismételt méréssorozatban. Az S0 és S1 oldat koncentrációkat átlagoljuk, kiszámítjuk a szórásokat. Számítjuk az S0 és S1 oldatok mért átlagkoncentrációja abszolút értékének különbségét, ∆ [11], s a két mérés egyesített szórását [12], majd a statisztikai bizonytalanságot 95%-os konfidencia szinten [13]. ∆ = x A − xB , [11] ∆ az átlagkoncentrációk közötti eltérés abszolút értéke, x A , x B az átlagkoncentrációk.

ν A ⋅ s A2 + ν B ⋅ s B2 Sp = , ν A +ν B

[12]

ahol Sp az egyesített szórás, ν A ,ν B a szabadsági fokok száma (ν = n − 1 ), s A2 , s B2 a szórás négyzetek. n + nB U = t ⋅ Sp ⋅ A , [13] n A ⋅ nB ahol, U a statisztikai bizonytalanság, na , nb a párhuzamos mérések száma, t a student tényez . Értékeljük az eltérés nagyságát (relatív eltérés) és az eltérés szignifikáns voltát.



3.4.2.8.2. Linearitás, kalibrációs függvény illeszkedése, tartomány értékelése A megadott L-OES mérési körülményeket beállítjuk. A kalibráló oldatokkal elvégezzük a kalibrálást, majd mintamérési beállításnál 3-3 ismétléssel mérjük a kalibráló oldatokat


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) 3.4.2.8.3. Az ismétl képességi és reprodukálhatósági mérések értékelése Az mérési eredményeket a különböz hatóanyag tartalmú M1, M2 és M3 mintára külön-külön dogozzuk fel. A három ismételt el készítés (A, B, C) és a két ismételt L-OES elemzés (h, i) szolgáltat 6-6 független eredményt az adott mintára (tartalom w, mg lítium-karbonát és százalékos relatív hatóanyag-tartalom T %) az ismétl képességi szórás sism és RSDism számításához. Ily módon a három (M1, M2 és M3) mintára a három napon (E, K, M) kilenc sism adatot kapunk, amelyekb l egy összesített szórásadatot képezünk [14] és ezzel jellemezzük a módszer ismétl képességét.

ν 1 s12 + ν 2 s 22 ⋅ ⋅ ⋅ +ν k s k2 sp = , ν 1 + ν 2 + ⋅ ⋅ ⋅ν k ahol, sp s1, s2, sk ν1, ν2, νk

: :

[14]

az összevont szórás az egyedi szórások szabadsági fok (n-1)

A három (M1, M2 és M3) mintára a három napon (E, K, M) kapott T%, adatokból mintánként T%, srepr és RSDrepr adatot számítunk, majd egy összesített szórás adatot is számítunk az [12] képlettel. Az ismétl képességi és reprodukálhatósági mérések adatait grafikusan is feldolgozzuk.


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) 3.4.2.8.4. A pontosság mérések értékelése A pontosság vizsgálata során az öt T% szintnél kapott 4-4 adatsorból (A1, A2, B1, B2) visszanyerés adatokat számítunk. A számítás során a tényleges hatóanyag-bemérésre vonatkoztatjuk a méréssel kapott értékeket, számítjuk az egyes szintekhez tartozó átlagos visszanyerést és az összes visszanyerési adat (n=20) átlagát. A visszanyerési adatokat grafikusan is feldolgozzuk. Vizsgáljuk a mért hatóanyag mennyiséget a valódi hatóanyagtartalom függvényében és valódi hatóanyag tartalom és a visszanyerés kapcsolatát.


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel Validálási terv (Validálási protokol) 3.4.2.9. A módszerrel szemben támasztott követelmények Paraméter

(1) (2) (3)

Azonosság Specifikusság Linearitás, a kalibrációs függvény illeszkedésének jósága

(4) (5) (6) (7)

Mérési tartomány Pontosság Precizitás, ismételhet ség Precizitás, labor ismételhet ség

Követelmény 670,8 nm ad jelet L-OES ∆<1%,∆0.97, F-próba F 99% sism< 1% srepr< 1%


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel A módszer leírása

3.4. 200mg, 300mg és 400mg lítium-karbonát tartalmú tabletták hatóanyag tartalmának meghatározása láng-OES módszerrel. 3.4.1. Módszer 200mg, 300mg és 400mg lítium-karbonát tartalmú tabletták hatóanyag tartalmának meghatározására láng-OES módszerrel A módszer alkalmazási köre Módszer 200mg, 300mg és 400mg lítium-karbonát tartalmú tabletták hatóanyag tartalmának láng-OES módszerrel történ meghatározására szolgál. A módszer elve Meghatározzuk a vizsgált tabletta minta átlag tabletta tömegét, majd a részmintát porítjuk, homogenizáljuk. A homogenizált, analitikai mintából 2-2 mintaoldatot készítünk sósav adalékkal. A mintaoldatok koncentrációját L-OES módszerrel határozzuk meg a lítium 670,8 nm-es vonalán, leveg acetilén lángban. A kalibrálást sósavas lítium-karbonát standard oldatokkal végezzük.



Eszközök anyagok 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14.

Varian Techtron AA6 atomabszorpciós készülék Sartorius B 120S elektronikus analitikai mérleg, 0,1 mg méréshatár Berghof BRT 841 6 helyes f t blokk h mérsékletszabályozóval PE tároló flakonok 500, 50 ml-es Ø35 mm 35 ml térfogatú, üveg roncsolóbetét Hiteles, A-jel mér lombikok 500ml Reagens víz, ioncserével ionmentesített víz Sósav 32% Reanal, alt Lítium-karbonát Li2CO3 1+1 sósav oldat Keményít Talkum Zselatin Cutina



3.4.1.1. Mintael készítés Li tabletta lítium-karbonát tartalmának meghatározásához A f komponens (Li) meghatározására szolgáló módszer kidolgozásának az alábbi f lépései vannak: (1) minta-el készítési módszer kidolgozása, (2) a láng-AAS, láng-OES módszer koncentráció tartományainak vizsgálata, beállítása, (3) kalibráló és kiértékel függvények vizsgálata, (4) kalibrációs oldatok készítésének tervezése. Mintavétel az átlag tablettatömeg meghatározása, a mintarészlet porítása és homogenizálása Egy 50 ml-es PP f z poharat analitikai mérlegen letárázunk. A vizsgálandó mintából véletlenszer en, csipesszel 20 db tablettát veszünk ki és helyezünk a f z pohárba. Meghatározzuk a 20 db tabletta összes tömegét, majd kiszámítjuk az átlag tabletta tömeget. A 20 db tablettát késes darálóban elporítjuk, homogenizáljuk, majd a porított mintát PE tasakba visszük át, melyet ellátunk a minta azonosítójával. A minta-el készítés menetét rlapon dokumentáljuk. Az így el készített, porított minta bemérésével készítjük a mintaoldatokat.



Mintaoldat készítése 2 db roncsoló betétbe analitikai mérlegen 0,1500 g porított, homogenizált mintát mérünk be. A bemért mintához óvatosan, kis részletekben 10 ml 1+1 hígítású sósav oldatot adagolunk ügyelve a kihabzás elkerülésére. 500 ml-es mér lombikba tölcsért helyezünk, majd a feloldott mintát átmossuk a mér lombikba. A betétet gondosan többször átöblítjük, majd a lombikot reagens vízzel jelre töltjük és gondosan összerázzuk. Mivel a tabletta segédanyagai nem, vagy csak részlegesen oldódnak a kapott oldat opálos és finomeloszlású lebeg anyagot tartalmaz, ezért a L-OES méréshez kb. 50 ml sz rt mintaoldatot kell készíteni. Sz r tölcsérbe közepes pórusméret analitikai sz r papírt helyezünk, majd száraz, 50ml-es PE flakonba sz rjük a mintát. A sz rlet els két 10 ml-es részletét elöntjük, majd kb. 50 ml sz rletet gy jtünk. Mivel a 200mg, 300mg és 400mg hatóanyag tartalmú minták egységnyi tömegre vonatkoztatott lítium-karbonát tartalma azonos a minta-el készítés mindhárom tabletta típusra azonosan történik és a kapott mintaoldat lítium-karbonát koncentrációja is azonos (200 mg/l lítium-karbonát, ha a hatóanyag tartalom 100%).



3.4.1.2. Kalibráló oldatok készítése A kalibráló oldatok készítéséhez szárított, reagens min ség lítium-karbonát referencia anyagot használunk. 40 mm átmér j csiszolatos, üveg szárítóedényt megtöltünk lítiumkarbonát referencia anyaggal. Nyitott edényben, szárítószekrényben 1200C-on 3 órán át szárítjuk, majd lefedve leh tjük. A nagyobb pontosság eléréséért az összes kalibráló oldatot közvetlen referencia anyag beméréssel készítjük el a 7. táblázatban dokumentált módon.



7. táblázat Kalibráló oldatok lítium-karbonát tabletták L-OES elemzéséhez a

b

c

d

e

No

Tervezett koncentráció Li2CO3 mg/l 0 50 100 150 200 250

Terv. konc. Li mg/l 0.0 9.4 18.8 28.2 37.6 47.0

Oldattérfogat

Tervezett bemérés Li2CO3 g 0,0000 0,0250 0,0500 0,0750 0,1000 0,1250

1 2 3 4 5 6

ml 500 500 500 500 500 500

f

g

h

Tényleges Tényleges 1+1 HCl bemérés koncentráció Li2CO3 Li2CO3 g mg/l ml #,#### #.## 10 #,#### #.## 10 #,#### #.## 10 #,#### #.## 10 #,#### #.## 10 #,#### #.## 10



Letárázott 50 ml-es f z pohárba a táblázat (e) oszlopában megadott nominális tömegekhez közeli lítium-karbonát mennyiségeket mérünk be. A pontos tényleges tömegeket feljegyezzük. A bemért lítium-karbonát referencia anyagot 10 ml reagens vízben feloldjuk, majd tölcséren át 500 ml-es mér lombikba mossuk át. A lombikba adagolunk 10 ml 1+1 sósavoldatot, összerázzuk az oldatot, megvárjuk a széndioxid eltávozását, majd jelre töltjük. A kész oldatot 500ml-es száraz PE flakonban tároljuk. A tényleges bemérésb l számítjuk kalibráló oldatok tényleges lítium-karbonát koncentrációját ( c=2000mreag) és ezt az adatot használjuk a kalibrálás során. A kalibráló oldatokból 50 ml PE flakonba kitöltött részleteket használunk a L-OES méréshez. A 200 mg/l koncentrációjú oldatot használjuk ellen rz oldatként.


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel A módszer leírása 3.4.1.3. Mintaelemzés L-OES módszerrel A láng-OES méréseket Varian Techtron AA6 típusú atomabszorpciós spektrofotométerrel végezzük leveg -acetilén lángban a 8. táblázatban megadott körülmények között. 8. táblázat Az atomabszorpciós készülék beállítása L-OES üzemmódban Üzemmód Hullámhossz, nm Spektrális sávszélesség Ég fej típus Ég fej beállítás Megfigyelési magasság Leveg áramlási sebesség Acetilén áramlási sebesség Er sítés állítás Mintabeviteli sebesség Integrálási id Ütköz gömb beállítás Cseppleválasztó Kalibrációs függvény

nm nm fok mm skr skr ml/min s

L-OES 670,8 nm 0,5 nm 60mm-es réség elforgatva 900 10 mm 5 1,7 automatikus 3 5 távoli állás van 2 fokú polinom


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel A módszer leírása A készüléket a táblázatban megadott módon beállítjuk, a lángot begyújtjuk, reagens vizet porlasztunk és 10 percig el melegítjük a készüléket. Porlasztjuk a 250 mg/l kalibráló oldatot és elvégezzük a hullámhossz finombeállítását és az er sítés beállítását az AUTO ZERO funkció használatával (az AUTO ZERO funkció OES üzemmódban a végkitérés beállítását szolgálja az er sítés állításával). Reagens vizet porlasztunk és elindítjuk a mér programot, majd a kalibrálás ciklust. A kalibrálási ciklusban sorra mérjük a kalibráló oldatokat (0, 50, 100, 150, 200, 250 mg/l lítiumkarbonát), majd a mérési pontokra kalibrációs függvényt illesztünk (2 fokú polinom). A kalibrációs adatokat tároljuk és kinyomtatjuk. Elindítjuk a mintaelemzési ciklust, majd az alábbiakban megadott szekvenciával elemezzük a mintaoldatokat: KAL200, KAL200, M1a, M1a, M1a, M1b, M1b, M1b, KAL200, KAL200, M2a, M2a, M2a, M2b, M2b, M2b, KAL200, KAL200, Mia, Mia, Mia, Mib, Mib, Mib, KAL200, KAL200. Azaz a 200 mg/l kalibráló oldatot két ismétléssel, az adott minta ismétléssel el készített oldatait (a és b) 3-3 ismétléssel mérjük. Ezt ismételten a kalibráló oldat mérése követi. A kalibráló oldatokkal mért adatokat kalibráció kismérték id beli csúszásának korrigálására használjuk fel. Ha a minták mérését befejeztük kilépünk a mér programból, elmentjük a mérési adatokat.



A L-OES mérés adatainak feldolgozása A L-OES mérés adatait a program egy strukturált szöveg formátumú adat állományban menti, ami beolvasható Excelbe és xls állománnyá alakítható. Az adatfeldolgozás els lépéseként az AAS készülék számítógépével elmentett adatállományt xls állománnyá alakítjuk. Az adatokat átmásoljuk egy üres Excel táblába és a felesleges oszlopok elhagyásával úgy rendezzük, hogy a minta azonosító és az oldatkoncentráció oszlop, cold maradjon meg. Ellen rizzük a szekvencia helyességét: KAL200, KAL200, M1a, M1a, M1a, M1b, M1b, M1b, KAL200, KAL200, M2a, M2a, M2a, M2b, M2b, M2b, KAL200, KAL200, Mia, Mia, Mia, Mib, Mib, Mib, KAL200, KAL200, ha szükséges javításokat végzünk (pl. felesleges ismétlések elhagyása). Ezt követ en elvégezzük az eredmények feldolgozását egy el re elkészített Excel számolótábla segítségével. A számítás három fázisban történik: (i) csúszás ellen rzése, korrekciós faktorok számítása, korrigált koncentráció adatok számítása, (ii) a minta-el készítési adatok bevitele és a tartalom% adatok számítása, (iii) az egy mintára kapott hat tartalom% adat átlagolása, szórás és RSD számítása.



Az els fázis menetét a 9. táblázat szemlélteti. A L-OES módszerrel kapott, rendezett adatokat bemásoljuk az a1-b18 mez be. A c1 mez be beírjuk az ellen rz kalibráló oldat valódi koncentrációját (itt: 200,0 mg/l), ami átmásolódik a teljes c-oszlopba. Ezt követ en megtörténik a faktorok számítása a f = cval / ckal,mért hányadossal a d-oszlop megfelel mez iben (d1, d2, d9, d10, d17, d18), majd az egy mintára vonatkoztatott átlag faktor számítása és d1, d2, d9, d10- b l e5-ben fátl=1,008 és d9, d10, d17, d18-b l e13-ban fátl=1,006 számítása és az átlagfaktorokkal az f-oszlop feltöltése. A b-oszlop oldat koncentrációból korrigált koncentráció számítása ckor = fátl * cold a g-oszlopban.


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel A módszer leírása A tabletta lítium-karbonát tartalmát a [9] összefüggéssel, majd a tabletta százalékos, relatív hatóanyagtartalmát a [10] képlettel számítjuk a 10.táblázatban.

w=

ahol, w cold,kor V m20 mtbl m

: : : : : :

cold ,kor ⋅ V ⋅ m

: : :

20

,

[9]

a tabletta lítium-karbonát tartalma, mg korrigált oldatkoncentráció, lítium-karbonát, mg/l oldattérfogat, l 20 db tabletta összes tömege egy tabletta átlagtömege, g bemérés, g

T= ahol T w wnom

m20

w ⋅ 100 , wnom

a tabletta százalékos, relatív hatóanyagtartalma, % a tabletta lítium-karbonát tartalma, mg a tabletta nominális lítium-karbonát tartalma, mg

[10]


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel A módszer leírása 9. táblázat Adatbevitel, csúszás ellen rzése, korrekciós faktorok számítása, korrigált koncentráció adatok számítása sor

a minta

1 Kal200 2i 3 M1a 4i 5i 6 M1b 7i 8i 9 Kal200 10 i 11 M2a 12 i 13 i 14 M2b 15 i 16 i 17 Kal200 18 i 19 M3a 20 i 21 i 22 M3b 23 i 24 i 25 Kal200 26 i

b c cold ckal mg/l mg/l 198.4 200.0 197.6 200.0 195.2 200.0 195.0 200.0 195.8 200.0 196.7 200.0 196.5 200.0 195.8 200.0 198.2 200.0 199.5 200.0 195.3 200.0 196.7 200.0 195.8 200.0 196.8 200.0 197.5 200.0 197.7 200.0 198.5 200.0 199.3 200.0 198.3 200.0 197.7 200.0 197.6 200.0 195.6 200.0 195.3 200.0 195.5 200.0 199.7 200.0 199.0 200.0

d f

e fátl

f fátl

g cold,kor mg/l

1.008 1.012 1.008 1.008 1.008 1.008 1.008 1.008 1.008

196.7 196.6 197.4 198.3 198.0 197.4

1.006 1.006 1.006 1.006 1.006 1.006 1.006

196.3 197.9 196.9 197.9 198.6 198.8

1.004 1.004 1.004 1.004 1.004 1.004 1.004

199.2 198.6 198.5 196.5 196.2 196.4

1.009 1.002

1.007 1.004

1.001 1.005


Lítium tabletták hatóanyagtartamának meghatározása L-OES módszerrel A módszer leírása 10. táblázat Tabletta relatív hatóanyagtartalmának számítása Excel számolótáblával g sor c(kor) mg/l 1 2 3 196.7 4 196.6 5 197.4 6 198.3 7 198.0 8 197.4 9 10 11 196.3 12 197.9 13 196.9 14 197.9 15 198.6 16 198.8 17 18 19 199.2 20 198.6 21 198.5 22 196.5 23 196.2 24 196.4 25 26

h m(20) g

i j m(1) m(a, b) g g

k V l

l m w(tbl) w(nom) mg/tbl mg/tbl

n T %

o p T(átl) s, RSD % %

5.9723 0.2986 0.2986 0.2986 0.2986 0.2986 0.2986

0.1507 0.1507 0.1507 0.1504 0.1504 0.1504

0.500 0.500 0.500 0.500 0.500 0.500

194.9 194.7 195.5 196.8 196.6 195.9

200 200 200 200 200 200

97.45 97.9 97.37 97.77 98.41 98.30 97.97

0.43 0.44

5.9926 0.2996 0.2996 0.2996 0.2996 0.2996 0.2996

0.1503 0.1503 0.1503 0.1508 0.1508 0.1508

0.500 0.500 0.500 0.500 0.500 0.500

195.7 197.2 196.3 196.6 197.3 197.5

200 200 200 200 200 200

97.86 98.4 98.61 98.14 98.30 98.67 98.77

0.35 0.36

6.0019 0.3001 0.3001 0.3001 0.3001 0.3001 0.3001

0.1509 0.1509 0.1509 0.1517 0.1517 0.1517

0.500 0.500 0.500 0.500 0.500 0.500

198.0 197.4 197.4 194.4 194.0 194.2

200 200 200 200 200 200

99.02 98.0 98.71 98.69 97.18 97.02 97.12

0.94 0.96



A 10. táblázat h-oszlopának jelölt mez ibe beírjuk a m20, adatokat. A i-oszlopban megtörténik az átlag tablettatömeg számítása és az adattal feltöltjük az i-oszlopot. A j-oszlop jelölt mez ibe beírjuk az adott minta a és b ismétlésének bemérés adatait ma , mb és további 22 mez be betöltjük az adatokat. Az m-oszlop jelölt mez ibe beírjuk a tabletta nominális hatóanyagtartalmát, 200mg/tbl, 300mg/tbl vagy 400mg/tbl, majd ezekkel az adatokkal további öt mez t feltöltünk. Ezzel befejez dött az adatok bevitele és az n-oszlopban megtörténik az egyes minták a és b részmintáinak 3-3 ismételt L-OES méréssel kapott százalékos, relatív hatóanyag tartalmának, T számítása (6 adat). A o-oszlopban a hat adatot átlagoljuk Tátl ez a készítmény jellemzésére használt adat. A p-oszlopban a hat adatból számított szórást és relatív szórást adjuk meg. VÉGE

Analitikai módszerek validálása

Recommend Documents