10

CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E)

Ref. 2007

CAPILLARYS 2

2014/10

CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) ZA VYUŽITÍ PŘÍSTROJE CAPILLARYS 2

CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) - 2014/10

ZAMÝŠLENÝ ÚČEL

Sada CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) je navržena pro oddělení normálních hemoglobinů (A, F a A2) a pro detekci většiny variant hemoglobinu (zejména S, C, E nebo D) elektroforézou se systémem CAPILLARYS 2 v alkalickém tlumivém roztoku (pH 9,4). CAPILLARYS 2 provádí všechny sekvence automaticky pro získání kompletního profilu hemoglobinu pro kvalitativní nebo kvantitativní analýzu hemoglobinů. Zkouška se provádí se sedimentovanými, odstředěnými nebo propranými červenými krvinkami. Proprané červené krvinky nejsou pro provedení analýzy nezbytné. Pro diagnostické použití in vitro.

PRINCIP TESTU

Hemoglobin je komplexní molekula složená ze dvou párů polypeptidových řetězců. Každý řetězec je připojen k hem-chelátovému komplexu protoporfyrinu s dvojmocným Fe. Hem je u všech hemoglobinů stejný. Typ hemoglobinu je určen proteinovou částí, zvanou globin. Polypeptidové řetězce alfa, beta, gama a delta tvoří normální lidské hemoglobiny : • hemoglobin A ..................................... = α 2 β 2 • hemoglobin A2 ................................... = α 2 δ 2 • fetální hemoglobin F .......................... = α 2 γ 2 Alfa řetězec je totožný u všech těchto tří hemoglobinů. Prostorová struktura hemoglobinu a ostatní molekulové vlastnosti (jako u všech ostatních bílkovin) závisí na prostorovém uspořádání a sekvenci aminokyselin, které tyto řetězce tvoří. Substituce aminokyselin mutací je zodpovědná za tvoření variant hemoglobinu, které mají různý povrchový náboj a následně rozdílnou pohyblivost v elektroforetickém poli, jež rovněž závisí na pH a iontové síle tlumivého roztoku. Výsledné kvalitativní (nebo strukturální) abnormality se nazývají hemoglobinopatie (9, 10, 13). Snížená syntéza jednoho z hemoglobinových řetězců vede ke kvantitativním (nebo regulačním) abnormalitám zvaným talasemie.

Elektroforéza hemoglobinu je zavedená technika běžně používaná v klinických laboratořích pro vyšetření vzorků pro zjištění hemoglobinových abnormalit (1, 2, 3, 4, 12). Systém CAPILLARYS 2 byl vyvinut ke kompletní automatizaci s rychlým dělením a přijatelným rozlišením. Tuto techniku lze z mnoha hledisek zařadit mezi klasickou zónovou elektroforézu a kapalinovou chromatografii (8, 11). Systém CAPILLARYS 2 používá princip kapilární elektroforézy ve volném roztoku. Elektricky nabité molekuly jsou děleny podle elektroforetické pohyblivosti v alkalickém tlumivém roztoku o určitém pH. Dělení je rovněž závislé na pH elektrolytu a elektroosmotickém toku (5). Systém CAPILLARYS 2 má 7 kapiláry v paralelním zapojení, což umožňuje 7 paralelní analýzy pro kvantifikaci hemoglobinu. Ředění vzorku hemolyzačním roztokem je připraveno a nastříknuto aspirací na anodovém konci kapiláry. Potom následuje vysokonapěťové dělení bílkovin a přímá detekce hemoglobinů při 415 nm na katodovém konci kapiláry. Před každou analýzou jsou kapiláry promývány promývacím roztokem a promytím tlumivém roztokem připraveny k další analýze. Hemogobiny jsou rozdělené v křemenných kapilárách a jsou přímo detekovány a specificky detekovány při absorbanci vlnové délky 415 nm, která je pro ně specifická. Výsledné elektroforeogramy jsou vizuálně vyhodnocovány z hlediska abnormalit. Přímá detekce poskytuje přesnou kvantifikaci individuální hemoglobinové frakce se zvláštním zájmem např. o hemoglobin A2 při diagnostikování ß-talasemie. Vysoké rozlišení této metody by mělo navíc umožnit identifikaci variant hemoglobinu, zejména oddělení hemoglobinů S od D a E od C. Kvantifikace hemoglobinu A2 se může také provádět za přítomnosti hemoglobinu E. Použitím tlumivého roztoku s alkalickým pH se detekují normální a abnormální hemoglobiny (nebo varianty) v následujícím pořadí od katody k anodě : δA’2 (varianta A2), C, A2/O-Arab, E, S, D, G-Filadelfie, F, A, Hope, Bart, J, N-Baltimore a H. Nezobrazení karbonanhydrázy na záznamech z elektroforézy hemoglobinů umožní identifikovat variantu A2 v této migrační zóně.

REAGENCIE A MATERIÁL V CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) KITU

POTŘEBNÉ REAGENTY NEOBSAŽENÉ V BALENÍ VAROVÁNÍ : Viz bezpečnostní listy.

1. KONTROLNÍ ROZTOK NORMAL Hb A2 CONTROL Složení

Kontrolní roztok Normal Hb A2 Control (SEBIA, kat. č. 4778) se získává ze zásobních normálních lidských krevních vzorků. Roztok je ve stabilizované lyofilní formě.

Zamýšlený účel

Kontrolní roztok Normal Hb A2 Control je zamýšlený jako migrační kontrola před spuštěním nové sekvence analýzy po 10 po sobě jdoucích stojanů se vzorky a na konci sekvence analýzy a pro kontrolu jakosti kvantifikace lidského hemoglobinu A2 elektroforézou se systémem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) prováděných s přístrojem CAPILLARYS 2. Nařeďte každou lahvičku s roztokem Normal Hb A2 Control přesným objemem destilované nebo deionizované vody, jak je uvedeno v příbalovém letáku roztoku Normal Hb A2 Control. Nechte 30 minut stát a lehce zamíchejte (dbejte, ať nedojde k tvorbě pěny). - 691 -

SEBIA NÁVOD -

Czech


Migrační kontrola: Roztok Normal Hb A2 Control lze používat následovně: - Naneste naředěný roztok Normal Hb A2 Control do mikrozkumavky. - Uřízněte víčko mikrozkumavky. - Umístněte mikrozkumavku, uloženou v nové hemolyzační zkumavce, která slouží jako podpora (a je označená štítkem se stejným čárovým kódem jako roztok Normal Hb A2 Control), do pozice č. 1 na vzorkovacím stojanu č. 0 systému CAPILLARYS 2 určeného pro kontrolní krevní vzorek obsahující nový zelený ředicí segment. - Nalijte 4 mL hemolyzačního roztoku CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) do hemolyzační zkumavky tak, aby nevznikaly vzduchové bubliny a umístěte ji do pozice č. 8 na vzorkovacím stojanu č. 0. DŮLEŽITÉ: Dříve, než vložíte zkumavku na vzorkovací stojan, ověřte, že se nevytvořila žádná pěna. - Spusťte analýzu: Zasuňte vzorkovací stojan č. 0 do systému CAPILLARYS 2, v okně, které se zobrazí na obrazovce, vyberte "Automatic dilution" a potvrďte. - Po změně lahvičky s tlumicím roztokem pro analýzu (i v případě, že je číslo šarže identické) nebo změně techniky, po sekvenci čištění kapilár pomocí CAPICLEAN, po aktualizaci softwaru nebo po aktivaci kapilár proveďte druhou řadu analýz s kontrolním roztokem tak, že do systému okamžitě zasunete stejný vzorkovací stojan č. 0 se stejným ředicím segmentem obsahujícím roztok Normal Hb A2 Control naředěným během první série a prázdnou hemolyzační zkumavku označenou čárovým kódem Normal Hb A2 Control do pozice č. 1. V okně "Hb A2 Normal Control", které se zobrazí na obrazovce, vyberte "Manual dilution" a potvrďte. Výsledky jsou potom automaticky vyhodnoceny softwarem pro analýzu dat. DŮLEŽITÉ: Frakce hemoglobinu A v roztoku Normal Hb A2 Control musí vykazovat minimální optickou hustotu (optical density, OD) 0,10. Při nižší hodnotě nedojde ke správnému opětovnému vycentrování záznamu z elektroforézy. Při analýze vzorků může být identifikace frakcí hemoglobinu Hb A, Hb F, Hb A2 a Hb C a rovněž určení migrační zóny pro ostatní varianty nemožná nebo špatná (viz odstavec VÝSLEDKY ANALÝZY). DŮLEŽITÉ: Pro nejlepší použití roztoku Normal Hb A2 Control je nutné použít jeden štítek s čárovým kódem pro identifikaci hemolyzační zkumavky, jež drží mikrozkumavku obsahující roztok Hb A2 Control (před použitím odřízněte víčko mikrozkumavky).

POZNÁMKY : Pro první použití analytického programu "HEMOGLOBIN(E)" s přístrojem CAPILLARYS 2 nebo po dlouhém odstavení (více než 1 týden) se doporučuje provést 3 po sobě jdoucí řady analýz s roztokem Normal Hb A2 Control. Po instalaci zařízení CAPILLARYS 2, během první sekvence analýzy vzorku krve, se objeví červený varovný signál, pokud není v jednom vzorku přítomný hemoglobin A (a není možné znovu vycentrovat záznam z elektroforézy, viz odstavec "Analýzy výsledku"). Pak se doporučuje analyzovat vzorek krve s hemoglobinem A na dotyčné kapiláře a opět analyzovat vzorek bez hemoglobinu A umístěním do pozice odpovídající kapiláře, která již detekovala hemoglobin A.

Kontrola kvality: Roztok Normal Hb A2 Control lze používat jako normální lidskou krev. Po přípravě použijte přímo roztok Normal Hb A2 Control jako vzorek krve pro analýzu nebo jako migrační kontrolu (se vzorkovacím stojanem č. 0, viz předchozí odstavec). Automaticky se naředí hemolyzačním roztokem. Doporučuje se zařadit jednu analýzu roztoku Normal Hb A2 Control. Získané hodnoty musí být v rozsahu poskytnutém pro každou šarži roztoku Hb A2 Control. DŮLEŽITÉ: Pro nejlepší použití roztoku Normal Hb A2 Control ve vzorkovacím stojanu je nutné použít jeden štítek s čárovým kódem pro identifikaci hemolyzační zkumavky, jež drží mikrozkumavku obsahující roztok Hb A2 Control (před použitím odřízněte víčko mikrozkumavky).

Skladování, stabilita a známky znehodnocení roztoku

Viz příbalový leták pro roztok Normal Hb A2 Control.

Žádná zkušební metoda nemůže poskytnout absolutní důkaz o nepřítomnosti HIV, hepatitidy B nebo C a dalších infekčních činitelů. S roztokem Normal Hb A2 Control je nutné zacházet jako s nebezpečným biologickým materiálem. Tato kontrola je negativní na základě zkoušky schválené FDA nebo ekvivalentním regulatorním orgánem EU : - proti povrchovému antigenu hepatitidy B ; - na protilátky k HCV ; - na protilátky k HIV1 a HIV2.

2. DESTILOVANÁ NEBO DEIONIZOVANÁ VODA Použití

K vyplachování kapilár v automatickém systému CAPILLARYS 2, SEBIA, pro elektroforézu. Je doporučeno používat filtrovanou, destilovanou nebo deionizovanou vodu (na filtr o porozitě ≤ 0.45 μm) a s odporem vyšším než 10 megaohmů x cm. Vodu je nutno denně měnit, aby nedošlo k mikrobiální kontaminaci. Pro optimální provoz přidejte 35 µL/dL roztoku CLEAN PROTECT (SEBIA, kat. č. 2059, 1 lahvička obsahuje 5 mL). DŮLEŽITÉ : Před naplněním se doporučuje vyplachovací nádobu vymýt větším množstvím destilované nebo deionizované vody.

3. CAPICLEAN Složení

Lahvička koncentrovaného roztoku CAPICLEAN (SEBIA, kat. č. 2058, 25 mL) obsahuje : proteolytické enzymy, povrchově aktivní láky a přídavné látky, nezbytné pro optimální provedení, v neškodných koncentracích.

Použití

K čištění vzorkovací sondy v automatickém systému CAPILLARYS 2, SEBIA, pro kapilární elektroforézu, během čisticí sekvence CAPICLEAN. DŮLEŽITÉ : - Je-li během týdne analyzováno méně než 500 vzorků, spusťte alespoň jednou týdně sekvenci čištění CAPICLEAN. - Jestliže je během jednoho dne analyzováno méně než 500 vzorků, ale během týdne je analyzováno více než 500 vzorků, spusťte čistící sekvenci CAPICLEAN po každých 500 analýzách. - Je-li během dne analyzováno více než 500 vzorků, spusťte sekvenci čištění CAPICLEAN jednou denně. Viz návody - CAPICLEAN, SEBIA. DŮLEŽITÉ : Nepoužívejte opakovaně diluční segmenty po vyčištění vzorkovací sondy.


Roztok CAPICLEAN skladujte v chladničce (2 - 8 °C). Stabilní do data expirace vyznačeného na štítku lahvičky. NEMRAZIT. V lahvičce roztoku CAPICLEAN může být vidět sraženina nebo částice spojené v suspenzi (vločky) bez nežádoucích účinků na jeho použitelnost. Nerozpouštějte tuto sraženinu ani částice. Doporučuje se shromáždit pouze supernatant. - 692 -


4. ROZTOK CHLORNANU SODNÉHO (k čištění vzorkovací sondy) Příprava

Připravte roztok chlornanu sodného (2 až 3 % chlorid) naředěním 250 mL 9,6 % roztoku chloridu (koncentrovaného) do 1 litru studené destilované nebo deionizované vody.

Použití

K čištění vzorkové pipety v CAPILLARYS 2u (týdenní údržba k odstranění adsorbovaných proteinů z pipety). Viz návody na CAPILLARYS 2, SEBIA. • • • •

Vezměte stojánek na vzorky určený k údržbě (č. 100). Na pozici 1 stojánku umístěte zkumavku obsahující 2 mL předem připraveného zředěného chlorovaného roztoku. Stojánek č. 100 k údržbě zasuňte do systému CAPILLARYS 2. V okénku "MAINTENANCE", které se objeví na obrazovce, zvolte "Launch the probe cleaning with chlorinated sodium hypochlorite solution" a potvrďte.


Pracovní chlorovaný roztok skladujte v uzavřené nádobě při pokojové teplotě. Roztok je stabilní 3 měsíce. Roztok neskladujte na slunečním světle, blízko tepelného nebo zápalného zdroje, kyselin a amoniaku.

5. PROMÝVACÍ ROZTOK CAPILLARYS / MINICAP Příprava

Každá lahvička promývacího roztoku CAPILLARYS / MINICAP (SEBIA, kat č. 2052, 2 lahvičky, 75 mL) může být zředěna destilovanou nebo deionizovanou vodou na 750 mL. Po zředění vznikne promývací roztok obsahující zásaditý roztok pH ≈ 12.

Použití

Pro promývání kapilár systému CAPILLARYS 2. DŮLEŽITÉ : Před naplněním nádoby na promývací se roztok se doporučuje vymýt otvor nádoby a zkumavku větším množstvím destilované nebo deionizované vody, aby se zabránilo srážení solí.


Zásobní i pracovní roztok skladujte při pokojové teplotě nebo v chladničce v uzavřených nádobách. Zásobní promývací roztok je stabilní do data expirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky promývacího roztoku. Pracovní promývací roztok je stabilní 3 měsíců. Pracovní promývací roztok zneškodněte, pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku mikrobiální kontaminace.

6. FYZIOLOGICKÝ ROZTOK Příprava

Připravte roztok 0,15 M (0,9 g/dL) NaCl, v destilované nebo deionizované vodě.

Použití

Je-li to nutné, properte červené krvinky před skladováním při - 70 / - 80 °C.


Fyziologický roztok skladujte při pokojové teplotě nebo v chladničce. Zneškodněte po třech měsících nebo pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku bakteriální kontaminace. Pro skladování po delší dobu přidejte azid sodný, 0,1 g/dL.

POZNÁMKY : Zkoušky provedené pro ověření reagentů prokázaly, že pro různé roztoky a použití přizpůsobeného vybavení pro rekonstituci objemu, nemají odchylky objemu ± 5 % z konečného objemu vliv na výsledek analýzy. Destilovaná nebo deionizovaná voda použitá pro rekonstituci roztoků musí být bez přítomnosti bakteriální proliferace a plísní (použijte filtr ≤ 0.45 µm) a musí mít odpor vyšší než 10 megaohmů na cm.

POTŘEBNÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ

1. CAPILLARYS 2 System SEBIA, PN 1222. 2. Stojánky na vzorky dodávané se systémem CAPILLARYS 2. 3. Kontejner Kit dodávaný se systémem CAPILLARYS 2 : Kontejnery na vyplachovací roztok (na destilovanou nebo deionizovanou vodu), mycí roztok a odpad.

VZORKY PRO ANALÝZU

Odběr a skladování vzorků

Pro analýzu se doporučují vzorky čerstvé nesražené krve. Lze použít běžné antikoagulanty s obsahem EDTA, citrátu nebo heparinu - nepoužívejte přípravky s obsahem jodoacetátu. Odběr krve musí být v souladu se zavedenými postupy používanými pro testování v klinických laboratořích. Vzorky je možno skladovat chlazené mezi 2 až 8 °C po dobu sedmi dní. Pro delší skladování mohou být vzorky zmražené na - 70 / - 80 °C do 8 hodin po odběru po proprání červených krvinek podle následujícího postupu : Centrifugujte krev s antikoagulačním činidlem pro získání červených krvinek, odlijte plasmu, červené krvinky (RBC) properte 2krát 10násobkem fyziologického roztoku (centrifugujte po každém proprání) ; odlijte přebytečné množství fyziologického roztoku z povrchu červených krvinek a před zmražením je promíchejte na vortexovém míchadle. Vzorky zmražené krve jsou stálé maximálně 3 měsíce při - 70 / - 80 °C. DŮLEŽITÉ : Nejlepší je skladovat vzorky krve při - 70 / - 80 °C. Neskladujte je při - 20 °C (viz BIBLIOGRAFIE, J. Bardakdjian-Michau et al, 2003).

POZNÁMKA : Vzorky by neměly být skladovány při pokojové teplotě!

- 693 -


U vzorků skladovaných při 2 až 8 °C může docházet k postupnému rozkladu hemoglobinů (Hb). Když je vzorek krve skladován déle než 7 dní při 2 - 8 °C : • slabé frakce, odpovídající methemoglobinu, se objeví v migrační zóně Hb S, • pokud je přítomný Hb C, frakce odpovídající rozloženému Hb C se objeví blíže k anodě než Hb A2, se kterým neinterferuje (zóna Z(E), viz tabulku v odstavci "Vyhodnocení"), • pokud je přítomný Hb O-Arab, frakce odpovídající rozloženému Hb O-Arab se objeví v migrační zóně Hb S (zóna Z(S), viz tabulku v odstavci "Vyhodnocení"), • pokud je přítomný Hb E, frakce odpovídající rozloženému Hb E se objeví v zóně Z(D) (viz tabulku v odstavci "Vyhodnocení"), • pokud je přítomný Hb S, frakce odpovídající rozloženému Hb S se objeví v migrační zóně Hb F (zóna Z(F), viz tabulku v odstavci "Vyhodnocení"), • pokud je přítomný Hb A, frakce odpovídající rozloženému Hb A ("frakce stárnutí" Hb A) se objeví blíže anodě (zóna Z11, viz tabulku v odstavci "Vyhodnocení"), • pokud je přítomný Hb F (ve vzorcích krve novorozenců), frakce se objeví v migrační zóně Hb A (zóna Z(A), viz tabulku v odstavci "Vyhodnocení") během rozkladu vzorku. Pokud je skladován více než 10 dní, jsou pozorovatelné viskózní agregáty v červených krvinkách, je nezbytné je před analýzou odstranit.

Příprava vzorků

• Nechte červené krvinky sedimentovat několik hodin při 2 – 8 °C nebo centrifugujte vzorek plné krve pro získání červených krvinek. • Opatrně odlijte co největší objem plasmy (u vzorků odebraných do heparinu odlijte viskózní agregáty z prostoru mezi plasmou a červenými krvinkami). • Míchejte (na vortexu) po dobu 5 sekund. DŮLEŽITÉ : Nepoužívejte vzorky krve, které obsahují více než 3 mm zbytkové plasmy nad červenými krvinkami ; když jsou ve zkumavce více než 3 mm plasmy, může být analýza ovlivněna.

Zvláštní případy: Analýza vzorků bez jakéhokoli Hb A nebo Hb A2 (tyto vzorky jsou perfektně kvantifikovány, ale neidentifikovány zónami). Pro identifikaci frakcí hemoglobinu ve vzorku bez jakéhokoli hemoglobinu A nebo A2 se doporučuje připravit tento vzorek podle jednoho z následujících dvou postupů: Automatické ředění: - V mikrozkumavce smíchejte jeden díl (80 µL) červených krvinek analyzovaného vzorku s jedním dílem (80 µL) roztoku Normal Hb A2 Control. - Míchejte (na vortexu) po dobu 5 sekund. - Uřízněte víčko mikrozkumavky. - Dejte mikrozkumavku do nové hemolyzační zkumavky, která se používá jako podpora, do stojanu na vzorky systému CAPILLARYS 2. - Proveďte analýzu tohoto vzorku standardním postupem jako s běžným vzorkem krve. Minimální ředění: - Naneste přímo do jamek nový zelený ředicí segment, 9 µL připraveného roztoku Normal Hb A2 Control s 9 µL vzorku krve k analýze a 90 µL hemolyzačního roztoku CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E). - Promíchejte opakovaným pipetováním. - Tento ředicí segment dejte na vzorkovací stojan č. 0 přístroje CAPILLARYS 2. - Zasuňte vzorkovací stojan do systému CAPILLARYS 2, v okně, které se zobrazí na obrazovce, vyberte "Sample" s "manual dilution" a potvrďte. Výsledky jsou potom automaticky vyhodnoceny softwarem pro analýzu dat.

DŮLEŽITÉ : Pro vzorek bez jakéhokoli Hb A nebo Hb A2, připraveného podle tohoto postupu, umožní výsledek získaný ze smíchaného vzorku pravděpodobnou identifikaci variant v důsledku umístění frakcí hemoglobinů v odpovídajících identifikačních zónách. Neoznamujte poměrnou kvantifikaci z výsledků smíšeného vzorku. Poměrná kvantifikace hemoglobinů by měla provedena za použití počátečního, nesmíšeného vzorku (bez jakéhokoli ředění kontrolní krve).

Vzorky, které není vhodné používat

• Nepoužívejte celý vzorek krve nebo nesedimentované vzorky krve. • Vyvarujte se starých, nevhodně skladovaných vzorků krve ; automatická hemolýza vzorků se může porušit viskózními agregáty v červených krvinkách. Pak mohou produkty rozkladu (jako artefakty) ovlivnit záznam z elektroforézy.

POZNÁMKA : Odběrové zkumavky a centrifugační parametry pro biologické vzorky jsou popsány v dostupné dokumentaci k předanalytické fázi pro biomedicínskou analýzu (údaje poskytnuté výrobci for zkumavek, návody a doporučení k odběru biologických vzorků…). Nejsou-li v návodu k použití pro typ zkumavek, které mají být použity, nebo k centrifugaci uvedeny žádné pokyny, postupujte podle této dokumentace a v případě rozměrů zkumavek, které mají být použity, postupujte podle dokumentu SEBIA "Charakteristiky zkumavek používaných podle přístroje". Předanalytická fáze musí být provedena podle stavu poznání, různých doporučení, mimo jiné doporučení výrobců zkumavek a platných předpisů.

POSTUP

Systém CAPILLARYS 2 je a multiparametrové zařízení k analýze hemoglobinů v paralelních kapilárách. Metoda využívá 7 z celkových 8 kapilár přístroje. Pořadí automatizovaných kroků je následující : • Načtení barkódů zkumavek se vzorky (až 7 zkumavek) a stojánků na vzorky ; • Hemolýza a naředění z primárních zkumavek (bez plazmy) do dilučních segmentů ; • Promytí kapilár ; • Injektáž of hemolyzovaných vzorků ; • Rozdělení hemoglobinu a přímá detekce separovaných hemoglobinů v kapilárách. - 694 -

Manuální kroky zahrnují : • Umístění otevřených zkumavek se vzorky do stojánků na pozice 1 až 7 ; • Umístění zkumavky s hemolyzačním roztokem do stojánku na pozici 8 ; • Umístění nových dilučních segmentů do stojánků ; • Umístění stojánků do CAPILLARYS 2u ; • Nastavení parametrů přístroje k provedení analýzy ; • Vyjmutí stojánků na vzorky po provedení analýzy.


PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K POUŽITÍ.

I. PŘÍPRAVA ANALÝZY CAPILLARYS 2

1. Zapněte přístroj a počítač. 2. Nastavte software, stiskněte enter a přístroj automaticky startuje. 3. CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) kite používá ve spojení s analytickým programem "HEMOGLOBIN(E)" CAPILLARYS 2u.Ke zvolení analytického programu "HEMOGLOBIN(E)" a umístění lahvičky s pufrem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) v přístroji, pročtěte pečlivě manuál k obsluze přístroje. 4. Stojánek má 8 pozic na zkumavky se vzorky. Vložte do každého stojánku 7 otevřených zkumavek se vzorkem ; čárový kód každé zkumavky usí být viditelný v průhledech stojánku. DŮLEŽITÉ : Pokud počet analyzovaných zkumavek je menší než 7, doplňte stojánek zkumavkami s destilovanou nebo deionizovanou vodou. 5. Vložte zkumavku se 4 mL hemolyzačního činidla CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) (bez vzduchových bublin do pozice č. 8 na stojánku. DŮLEŽITÉ : Před umístěním zkumavky do stojánku se ujistěte o nepřítomnosti jakékoli pěny.

6. Umístěte na každý stojan na vzorky nový diluční segment. Stojan na vzorky bude vysunut, pokud segment chybí. 7. Zasuňte kompletní nosič(e) do CAPILLARYS 2u otvorem ve středu přístroje. Až 13 stojánků může být bez přerušení a jeden po druhém vloženo do systému. Doporučuje se použít stojnek s č. 0 k místění kontrolního vzorku. 8. Vyjměte analyzované stojánky se vzorky z desky na levé straně přístroje. 9. Použité diluční segmenty sejměte se stojánu na vzorky aodstraňte je. POzOR : S dilučními segmenty s biologickými vzorky msí být manipulováno opatrně.

ŘEDĚNÍ - MIGRACE - POPIS AUTOMATIZOVANÝCH KROKŮ

1. Načtení čárových kódů zkumavek a stojánkůj. 2. Ředění vzorků v hemolyzačním roztoku a propláchnutí diluční jehly po každém vzorku. 3. Promytí kapilár. 4. Injektáž naředěných vzorků do kapilár. 5. Provedení migrace za konstantního napětípo dobu asi 8 minut a kontrola teploty pomocí Peltierova efektu. 6. Přímá detekce hemoglobinů skenováním při 415 nm a znázornění elektrophoretického profilu na obrazovce systému. POZN : Tytoautomatizované kroky jsou popsánypro 1.stojánek se vzorky. Výsledky elektroforezy se objeví po 20 minutách od počátku analýzy. První 2 kroky - čtení čárového kódu aředění vzorku - jsou prováděny vždy během analýzy předchozího stojánku se vzorky.

II. ANALÝZA VÝSLEDKU

Na konci analýzy se automaticky provede poměrná kvantifikace jednotlivých frakcí hemoglobinu a mohou se analyzovat profily ; frakce hemoglobinů Hb A, Hb F, Hb A2 a Hb C jsou identifikovány automaticky ; frakce Hb A je vycentrována uprostřed okna revize. Výsledné elektroforeogramy jsou vizuálně vyhodnocovány z hlediska abnormalit. Možné pozice různých variant hemoglobinů (identifikovaných v zónách nazvaných Z1 až Z15) se zobrazí na obrazovce systému a ukáží se na lístku s výsledky. Tabulka v odstavci "Vyhodnocení" ukazuje známé varianty, které mohou být přítomné v každé odpovídající zóně. Když software identifikuje frakci hemoglobinu v určené zóně, jméno této zóny se zarámečkuje.

Záznamy se automaticky upraví s ohledem na usnadnění interpretace frakce Hb A : - když nejsou na záznamu z elektroforézy detekovány frakce Hb A a/nebo Hb A2, zobrazí se žlutý výstražný signál, pro nastavení se použije pozice frakce Hb A ze dvou předchozích záznamů získaných na téže kapiláře, pak není frakce identifikována (kromě detekce Hb C : v tomto případě jsou frakce Hb A2 a Hb C identifikovány) ; - když je na záznamu elektroforézy detekován Hb F a není detekován Hb A, nezobrazí se žlutý výstražný signál a pro nastavení se použije pozice frakce Hb F - frakce Hb F, Hb A a/nebo Hb A2 jsou identifikovány. - když není možné toto nastavení provést, zobrazí se červený výstražný signál a frakce Hb F a Hb A2 identifikovány nejsou (kontaktujte společnost SEBIA) ; - když je optická hustota (OD) v elektroforetickém záznamu kontroly migrace nedostatečná (záznam pomocí roztoku Normal Hb A2 Control, označený štítkem s čárovým kódem na vzorkovém stojanu č. 0), zobrazí se varovná správa s cílem zvážit nebo odstranit tuto analýzu při určování pozice frakce Hb A. Potom se objeví fialový varovný signál v revizním okénku a frakce Hb A a Hb A2 nejsou určeny. Ve všech případech se ani na obrazovce systému ani na výtisku z tiskárny neobjeví žádné migrační zóny (Z1 až Z15). Na záznamu elektroforézy se křivky frakcí Hb A2 a Hb C vypočítají a překreslí upravené hodnoty s úpravou (přizpůsobené) jsou navrstveny přes původní křivku. Tato obrazovka umožní kvantifikaci frakce Hb A2, pokud je ve vzorku přítomný Hb C. VAROVÁNÍ : V některých případech (homozygotního) hemoglobinu C nebo při výskytu technického problému nemusí hemoglobiny A2 a C vyhovovat ; množství těchto frakcí je potom podhodnoceno. Doporučuje se kvantifikovat frakci Hb A2 jinou technikou. PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K POUŽITÍ.

III. UKONČENÍ SÉRIE ANALÝZ

Po ukončení každé sekvence analýzy musí operátor zahájit postup "stand by" (přepnutí do pohotovostního režimu) nebo "shut down" (vypnutí) systému CAPILLARYS 2, aby se kapiláry uložily v optimálních podmínkách.

IV. PLNĚNÍ REAGENČNÍCH NÁDOB

CAPILLARYS 2 automaticky kontroluje přítomnost činidel. DŮLEŽITÉ : Dodržujte pokyny pro výměnu reagenčních nádob s ohledem na barevný kód pro lahvičky a spojovací části. - 695 -

V případě nezbytného provedení jednoho z následujících úkonů bude zobrazena zpráva : • vložte novou lahvičku s tlumivým roztokem a/nebo ; • naplňte nádobu pracovním promývacím roztokem a/nebo ; • naplňte nádobu filtrovanou destilovanou nebo deionizovanou vodou k vyplachování kapilár a/nebo ; • vyprázdněte kontejner s odpadem.


VAROVÁNÍ : Nepoužívejte standardně prodávanou deionizovanou vodu, jako např. na žehlení (nebezpečí poškození důležitých kapilár). Používejte výhradně ultračistou vodu, jako je např. voda pro čistoty pro nástřik. DŮLEŽITÉ : Před naplněním se doporučuje vyplachovací nádobu vymýt větším množstvím destilované nebo deionizované vody. PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K POUŽITÍ.

KONTROLA KVALITY

Po výměně čísla šarže analyzačního tlumivého roztoku nebo změně techniky, po sekvenci čištění kapiláry roztokem CAPICLEAN a před spuštěním nové sekvence analýzy, je nezbytné spustit dvě sekvence analýz s roztokem Normal Hb A2 Control, SEBIA, kat. č. 4778 (viz odstavec POTŘEBNÁ ČINIDLA NEOBSAŽENÁ V BALENÍ). Rovněž se doporučuje začlenit do každé analýzy vzorků zkušební kontrolní krev (např. vzorek krve obsahující hemoglobiny A, F, C a S, např. roztok Hb AFSC Control, SEBIA, kat. č. 4792, nebo normální vzorek krve, roztok Normal Hb A2 Control, SEBIA, kat. č. 4778 nebo roztok Pathological Hb A2 Control, SEBIA, kat. č. 4779).

VÝSLEDKY Hodnoty

Přímá detekce při 415 nm v kapilárách dává relativní koncentrace (procentuální hodnoty) pro jednotlivé zóny hemoglobinů. Normální hodnoty pro jednotlivé hlavní elektroforetické zóny hemoglobinu v systému CAPILLARYS 2 byly stanoveny ze zdravé populace 113 dospělých osob (mužů i žen) s normálními hodnotami hemoglobinů stanovených technikou HPLC : hemoglobin A : v intervalu mezi 96,7 a 97,8 % hemoglobin F : ≤ 0.5 % (*) hemoglobin A2 : v intervalu mezi 2,2 a 3,2 % (*) Viz Interference a omezení.

Doporučuje se, aby každá laboratoř stanovila své vlastní prahové hodnoty.

POZNÁMKA : Normální hodnoty byly stanoveny použitím standardních parametrů softwaru (vyhlazení 0 a automatické kvantifikace frakcí hemoglobinu programem analýzy HEMOGLOBIN(E)). VAROVÁNÍ : Normální (referenční) hodnoty se musí použít pouze, pokud varianty hemoglobinu chybí.

Vyhodnocení

Viz ZÁZNAMY Z ELEKTROFORÉZY, obrázky 1 – 15.

Různé migrační zóny variant hemoglobinů (nazvaných Z1 až Z15) se zobrazí na obrazovce systému a ukáží se na lístku s výsledky. Přejížděním kurzoru myši přes jméno zóny se zobrazí informace o ikoně obsahující možné varianty hemoglobinu, které by mohly být v této zóně vidět. Maximální pozice určuje migrační zónu každé frakce. Viz tabulku ukazující možné varianty umístění v každé zóně.

1. Abnormality kvalitativního stanovení : hemoglobinopatie

Většina hemoglobinopatií vzniká v důsledku mutační substituce jedné aminokyseliny v jednom ze čtyř typů polypeptidových řetězců (1, 2, 4, 9, 12). Klinický význam takových změn závisí na ovlivněném typu a pořadí aminokyselin (13). U klinicky významných onemocnění jsou ovlivněny řetězce alfa nebo beta. Bylo popsáno více než 1400 variant hemoglobinů u dospělých jedinců (6, 14). První studované a nejčastěji se vyskytující abnormální hemoglobiny mají změněný celkový elektrický náboj, což umožňuje snadnou detekci elektroforézou. Existuje pět hlavních abnormálních hemoglobinů, které si zaslouží zvláštní klinický zájem : S, C, E, O-Arab a D. Sada CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) je určena k identifikaci hemoglobinopatií a talasemií.

Hemoglobin S Hemoglobin S se vyskytuje nejčastěji. Důvodem je vyměnění jedné kyseliny glutamové (kyselá aminokyselina č. 6) ß-řetězcem valinu (neutrální aminokyselina) : při srovnání s Hb A má vyšší isoelektrický bod a při analýze pH je jeho celkový negativní náboj nižší. Jeho elektroforetická pohyblivost v kapiláře je proto zvýšená a tento hemoglobin je rychlejší než frakce A. Při metodě v alkalickém tlumivém roztoku CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) se hemoglobin S pohybuje mezi frakcemi A a A2 a vedle Hb A2.

Hemoglobin C Jedna kyselina glutamová ß-řetězce je nahrazen lysinem (alkalická aminokyselina č. 6) : má silně sníženou pohyblivost. Při srovnání s Hb A má vyšší isoelektrický bod a při analýze pH je jeho celkový negativní náboj nižší. Jeho elektroforetická pohyblivost v kapiláře je proto zvýšená a tento hemoglobin je rychlejší než frakce A, která umožní jeho oddělení. Hemoglobiny C, E a O-Arab nejsou na záznamu z elektroforézy překryty a snadno se identifikují. Hemoglobin E Jedna kyselina glutamová ß-řetězce (č. 26) je nahrazena lysinem. Při metodě CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) se hemoglobin E pohybuje směrem k anodě za hemoglobin A2 a je od něj zcela oddělen. Pak, pokud je přítomný hemoglobin E, může se frakce A2 měřit pro stanovení ß-talasemie. - 696 -


Hemoglobin O-Arab Jedna kyselina glutamová ß-řetězce (č. 121) je nahrazena lysinem. Při metodě CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) se hemoglobin O-Arab pohybuje přesně jako hemoglobin A2. V takovém případě není možné kvantifikovat hemoglobin A2. Pokud je této frakce > 9 %, je třeba zvážit možnost příromnosti hemoglobinu O-Arab. Všimněte si, že Hb O-Arab se pohybuje odděleně od hemoglobinů C a E. Hemoglobin D (Los Angeles) Jedna kyselina glutamová ß-řetězce (č. 121) je nahrazena glutaminem. Při metodě CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) se hemoglobin D (zvaný D-Punjab, D-Los Angeles, D-Chicago nebo D-Portugal) pohybuje za hemoglobinem S, tato vlastnost umožňuje odlišit hemoglobiny S a D.

2. Kvantitativní abnormality : talasemie

Talasemie představují docela různorodou skupinu genetických poruch, charakterizovaných snížením tvorby jednoho typu polypeptidových řetězců. Molekulový mechanismus tohoto snížení již byl úplně popsán. Existují dva typy syndromů talasemie :

Alfa-talasemie Jsou charakterizovány snížením syntézy a-řetězců a následně ovlivňují syntézu všech normálních hemoglobinů. Nadměrná syntéza ß- a g-řetězců ve vztahu k a-řetězcům tvoří tetramery bez jakýchkoli a-řetězců : • hemoglobin Bart = γ 4, • hemoglobin H = ß 4. Hemoglobin H má nízký isoelektrický bod, při metodě CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) se pohybuje blíž k anodě než hemoglobin A (a může se objevit v jedné nebo více frakcích). Beta-talasemie Jsou charakterizovány snížením syntézy ß-řetězců. Je ovlivněna pouze syntéza hemoglobinu A. Proto se zvýší procentuální výskyt hemoglobinu F a A2 vzhledem k hemoglobinu A. Při metodě CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) umožní hodnoty získané pro různé normální frakce hemoglobinu detekovat beta-talasemie.

3. Zvláštní případy

• Pokud není hemoglobin A ve vzorku, může být pozorována frakce v jeho migrační zóně. Tato frakce může být acetylovaný hemoglobin F, který představuje okolo 15 až 25 % hemoglobinu F. Systém CAPILLARYS 2 může identifikovat tento acetylovaný hemoglobin odděleně od hemoglobinu A bez jakékoli pochybnosti. • Pokud se malá frakce (asi 0,5 až 3 %) pohybuje mezi hemoglobiny F a δA’2 (varianta A2), je podezření na variantu hemoglobinu A2. Procentuální hodnoty normálního hemoglobinu A2 a varianty jsou pro heterozygotní pacienty přibližně stejné. • Pokud se stanoví varianta hemoglobinu A2 (δA’2 nebo jakákoli jiná varanta A2), doporučuje se přidat její procentuální hodnotu k hemoglobinu A2 pro lepší diagnostikování beta-talasemie. • Některé varianty hemoglobinu (např. Hb Camperdown nebo Hb Okayama) se pohybují blízko u Hb A a nemohou být odděleny od tohoto hemoglobinu. • Některé varianty hemoglobinu (např. Hb Porto-Alegre nebo rozložený Hb S) se pohybují blízko u Hb F a nemohou být od něj odděleny. • Slabé frakce hemoglobinu, které se pohybují v zóně Z12 se občas kvantifikují nepřesně (např. příliš asymetrický Hb Bart). Je proto nezbytné smazat automatickou kvantifikaci a potom je kvantifikujte manuálně. • Pokud se analyzují vzorky krve novorozenců, Hb A ze vzorků, které obsahující Hb F ve vyšších koncentracích, se může porušit, zvláště z důvodu přítomnosti rozloženého Hb F ve své migrační zóně. Procentuální hodnota Hb A, kterou ukáže software, může být nadhodnocena. Pokud jsou ve vzorcích krve navíc přítomny varianty hemoglobinu (> 4 %, např. Hb S, Hb C, Hb E nebo Hb D-Punjab), které obsahují vysoké hladiny Hb F (> 60 %), je nutné provést doplňkové analýzy, aby se potvrdila přítomnost Hb A. • Pro novorozence do věku 6 – 9 měsíců se doporučuje analyzovat různé vzorky krve (např. nabírané měsíčně), aby se ověřila koncentrace Hb F. To umožní ověřit snížení koncentrace Hb F a možnost přítomnosti variant. V případě nejistoty se doporučuje potvrzení provedením dodatečných studií a analyzováním vzorků krve rodičů. • Příklady zvýšeného hemoglobinu F (Hb F) (kromě novorozenců) : - těhotenství, - pacienti se srpkovitou nemocí, starší 2 let, s léčbou Hydrea® (hydroxyurea) a/nebo po transfuzi a/nebo přirozeně tvořící Hb F zvýšenou kompenzací, - pacienti starší 2 let, s HPFH (vrozené přetrvání fetálního hemoglobinu obsahujícího 20 až 40 % Hb F u heterozygotních pacientů), - pacienti starší 2 let, s leukémií (jakéhokoli typu), dědičnou hemolytickou anémií, diabetem, onemocněním štítné žlázy, hyperaktivitou kostní dřeně, mnohočetným myelomem, rakovinou s metastázemi. Pro podrobnější informace navštivte : http://www.answers.com/topic/fetal-hemoglobin-test • Pokud se analyzují vzorky krve pacientů se srpkovitou nemocí po transfuzi, s nízkou hladinou Hb A (< 10 %), frakce Hb S se může objevit posunutá ze zóny Z(S) do zóny Z(D). Je nezbytné analyzovat hematologický stav a provést doplňkové studie, aby se potvrdila přítomnost Hb S. • Při analýze krevních vzorků od pacientů se srpkovitou anémií před transfúzí je možné pozorovat variaci frakce Hb S pro analýze některých pacientů v důsledku nehomogenity tohoto typu vzorku. Proto se před analýzou těchto typů krevních vzorků doporučuje provést homogenizaci.

Interference a omezení

• Viz VZORKY PRO ANALÝZU. • Nepoužívejte celý vzorek krve nebo nesedimentované vzorky krve. • Nepoužívejte staré, nesprávně skladované vzorky krve, produkty rozkladu (nebo artefakty) po 7 denním skladování mohou ovlivnit záznam z elektroforézy. • Po 10 denním skladování se mohou objevit viskózní agregáty vytvořené z červených krvinek, které se musí před analýzou odstranit. • Pokud je zjištěn abnormální hemoglobin, je nutné použít jiný způsob identifikace (např. elektroforézu globinových řetězců) nebo odeslat vzorky krve do specializované laboratoře. DŮLEŽITÉ : Pro doplnění výsledků je rovněž nutné analyzovat hematologický stav pacienta.

• Migrace variant hemoglobinu v blízkosti Hb A zahrnuje podhodnocení frakce Hb A a jeho variant a následné nadhodnocení frakce Hb A2. Pro přesnou kvantifikaci Hb A2 je nezbytné smazat oddělenou integraci obou variant a Hb A a kvantifikovat tyto frakce dohromady. - 697 -


• Někteří homozygotní pacienti "S" přijímají léčbu "Hydrea"® (hydroxyurea), která může vyvolat syntézu fetálního hemoglobinu. Při metodě CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) se pohyblivost léčbou vyvolaného hemoglobinu F neliší od fyziologického hemoglobinu F. • Vzhledem k omezené rozlišovací schopnosti a citlivosti zónové elektroforézy je možné, že některé varianty hemoglobinu nebudou touto metodou detekovány. • Postup CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) prováděný s přístrojem CAPILLARYS 2 nebyl posuzován u novorozenecké populace (věkový rozsah narození až 28 dní). Běžné faktory rušení postupu CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) prováděného na přístroji CAPILLARYS 2 (triglyceridy a bilirubin) byly hodnoceny ve studiích založených na směrnici Institutu pro klinické laboratorní standardy (Clinical Laboratory Standards Institute, CLSI - USA) číslo EP7-A2 Interference Testing in Clinical Chemistry [Rušení zkoušení v klinické chemii]. Výsledky jsou shrnuty níže : - Žádné kvalitativní nebo kvantitativní rušení postupu CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) prováděného s přístrojem CAPILLARYS 2 nebylo zjištěno, pokud je koncentrace bilirubinu rovná nebo menší než 17,9 g/L, neboli 306 µmol/L. - Žádné kvalitativní nebo kvantitativní rušení postupu CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) prováděného s přístrojem CAPILLARYS 2 nebylo zjištěno, pokud je koncentrace triglyceridů rovná nebo menší než 22,34 g/L.

Odstraňování závad a řešení problémů

Pokud při dodržení veškerých instrukcí pro přípravu, skladování a provedení testu uvedených v příbalovém letáku testy nevycházejí, kontaktujte technickou podporu společnosti SEBIA. Bezpečnostní datové listy sady reagentů a informace o čištění a likvidaci odpadů, označování a bezpečnostní pravidla používaná společností SEBIA a obaly pro přepravu biologických vzorků a čištění přístrojů jsou k dispozici na DVD s "NÁVODY A BEZPEČNOSTNÍMI DATOVÝMI LISTY".

ÚDAJE O VÝKONU Přesnost

Přesnost postupu CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) prováděného přístrojem CAPILLARYS 2 byla ověřena podle směrnice Institutu pro klinické laboratorní standardy (Clinical Laboratory Standards Institute, CLSI - USA) číslo EP5-A2 Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurements Methods [Posouzení přesnosti metod kvantitativního měření]. Průměry, standardní odchylky a koeficienty variace (CV %) (n = 80) byly spočteny pro procenta (%) frakcí hemoglobinu pro každý vzorek statistickými nástroji doporučenými CLSI. Výsledky získané postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) vykazují velmi dobrou reprodukovatelnost kvantitativní analýzy pro každou složku hemoglobinu.Všechny elektroforegramy byly také interpretovány vizuálně. Níže uvedené výsledky byly stanoveny použitím standardních parametrů softwaru CAPILLARYS (vyhlazení 0 a automatická kvantifikace frakcí hemoglobinu programem analýzy HEMOGLOBIN(E)).

Reprodukovatelnost mezi kapilárami na stejném přístroji

Bylo analyzováno (7) různých krevních vzorků postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na všech kapilárách stejného přístroje CAPILLARYS 2 a s 1 šarží ze sady CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E).Analyzované vzorky krve zahrnovaly 2 vzorky s normální hladinou Hb A2 (č.1 a 5), 2 vzorky se zvýšenou hladinou Hb A2 (č.2 a 6), 1 vzorek s nízkou hladinou Hb A2 (č.3), 1 patologický vzorek s Hb F a Hb S (č.4), 1 vzorek se zvýšenou hladinou Hb F (č.7).V této studii byl každý vzorek krve analyzován na všech kapilárách stejného přístroje, zahrnujících 40 analýz během 20 pracovních dní (ve 2 různé denní doby).V každé analýze byly vzorky analyzovány duplicitně. Výsledky pro procenta Hb A, Hb A2, Hb F a Hb S jsou sumarizovány v následujících tabulkách. Průměr Hb A %

Reprodukovatelnost v rámci analýzy (CV %) Reprodukovatelnost mezi analýzami (CV %) Reprodukovatelnost mezi dny (CV %) Celkem (CV %)

Průměr Hb A2 %


Č. vzorku 1 Č. vzorku 2 Č. vzorku 3 Č. vzorku 4 Č. vzorku 5 Č. vzorku 6 Č. vzorku 7 97.5

96.1

98.2

49.0

97.3

93.5

33.7

0.0

0.0

0.0

0.1

0.0

0.1

1.1

0.0 0.0 0.0

0.0 0.0 0.1

0.0 0.0 0.1

0.2 0.1 0.2

0.0 0.0 0.1

0.1 0.1 0.1

0.5 2.0 2.3

Č. vzorku 1 Č. vzorku 2 Č. vzorku 3 Č. vzorku 4 Č. vzorku 5 Č. vzorku 6 Č. vzorku 7 2.5

3.9

1.8

2.8

2.7

6.5

/

1.0

0.3

1.5

0.0

1.6

0.7

/

1.5 0.0 1.8

1.0 0.6 1.3 - 698 -

2.3 0.0 2.7

1.5 0.4 1.6

1.7 1.3 2.7

0.9 0.8 1.5

/ / /


Průměr Hb F %


Průměr Hb S %


Č. vzorku 1 Č. vzorku 2 Č. vzorku 3 Č. vzorku 4 Č. vzorku 5 Č. vzorku 6 Č. vzorku 7 /

/

/

12.0

/

/

65.8

/

/

/

0.0

/

/

0.6

/ / /

/

/

/

/

/

/

0.5 0.4 0.6

/ / /

/ / /

0.2 1.0 1.1

Č. vzorku 1 Č. vzorku 2 Č. vzorku 3 Č. vzorku 4 Č. vzorku 5 Č. vzorku 6 Č. vzorku 7 /

/

/

36.2

/

/

/

/

/

/

0.1

/

/

/

/ / /

/

/

/

/

/

/

0.2 0.2 0.3

/ / /

/ / /

/ / /

Žádné z opakování navíc nevykázalo falešně pozitivní nebo falešně negativní hodnoty.

Reprodukovatelnost mezi šaržemi a přístroji

Byla provedena studie reprodukovatelnosti pomocí 7 různých krevních vzorků testovaných na 3 přístrojích CAPILLARYS 2 se 3 šaržemi souprav CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E). Analyzované vzorky krve zahrnovaly 2 vzorky s normální hladinou Hb A2 (č.1 a 5), 2 vzorky se zvýšenou hladinou Hb A2 (č.2 a 6), 1 vzorek s nízkou hladinou Hb A2 (č.3), 1 patologický vzorek s Hb F a Hb S (č.4), 1 vzorek se zvýšenou hladinou Hb F (č.7). V této studii byl každý vzorek krve analyzován na všech kapilárách 3 přístrojů CAPILLARYS 2, zahrnujících 60 analýz během 27 pracovních dní (ve 2 různé denní doby). V každé analýze byly vzorky analyzovány duplicitně. Následující tabulka sumarizuje celkový rozsah CV % pro jednotlivé testované frakce hemoglobinu Hb A, Hb A2, Hb F a Hb S. Hemoglobin

Celkový rozsah CV %

Hb A

0.0 – 3.1

Hb A2

0.0 – 3.7

Hb F

0.3 – 1.5

Hb S

0.3 – 0.6

Linearita

Linearita postupu CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) prováděného přístrojem CAPILLARYS byla ověřena podle směrnice Institutu pro klinické laboratorní standardy (Clinical Laboratory Standards Institute, CLSI - USA) číslo EP6-A "Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurements Procedures: A statistical Approach" [Posouzení linearity metod kvantitativního měření: Statistický přístup]. Výsledky pro procenta (%) frakcí hemoglobinů pro každý vzorek byly analyzovány statistickými nástroji doporučenými CLSI.

Linearita Hb A2

Jeden vzorek krve obohacené o Hb A2 (obsahující 13,2 g/dL celkového hemoglobinu s 9,9 % Hb A2) byl smíchán se vzorkem krve ochuzené o Hb A2 (obsahující 13,4 g/dL celkového hemoglobinu s 0,0 % Hb A2) v různých poměrech a ředění byla analyzována elektroforézou postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS 2. Postup CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS 2 vykázal dobrou linearitu pro Hb A a Hb A2 v celém studovaném rozsahu s maximem 1,3 g/dL pro Hb A2 (mezi 0,0 a 9,9 % Hb A2).

Linearita Hb F

Jeden vzorek pupečníkové krve (obsahující 16,8 g/dL celkového hemoglobinu s 87,8 % Hb F) byl smíchán se vzorkem normální krve (obsahující 10,8 g/dL celkového hemoglobinu s 0,0 % Hb F) v různých poměrech a ředění byla analyzována elektroforézou postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS 2. Postup CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS 2 vykázal dobrou linearitu pro Hb A a Hb F v celém studovaném rozsahu s maximem 1,47 g/dL pro Hb F (mezi 0,0 a 87,8 % Hb F).

Linearita Hb S

Jeden vzorek krve s Hb S (obsahující 8,9 g/dL celkového hemoglobinu s 71,3 % Hb S a 0,0 % Hb A) byl smíchán se vzorkem normální krve (obsahující 14,4 g/dL celkového hemoglobinu s 0,0 % Hb S a 97,4 % Hb A) v různých poměrech a ředění byl analyzována elektroforézou postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS 2. Postup CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS 2 vykázal dobrou linearitu pro Hb S v celém studovaném rozsahu s maximem okolo 6,3 g/dL pro Hb S v analyzovaném vzorku (mezi 0,0 a 71,3 Hb S) a dobrou linearitu pro Hb A v celém studovaném rozsahu s maximem okolo 14,0 g/dL pro Hb A v analyzovaném vzorku (mezi 0,0 a 97,4 % Hb A).

Linearita Hb C

Jeden vzorek s Hb C (obsahující 27,8 g/dL celkového hemoglobinu s 30,0 % Hb C) byl smíchán se vzorkem normální krve (obsahující 25,4 g/dL celkového hemoglobinu s 0,0 % Hb C) v různých poměrech a ředění byla analyzována elektroforézou postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS 2. Postup CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS 2 vykázal dobrou linearitu pro Hb C v celém studovaném rozsahu s maximem okolo 8,3 g/dL pro Hb S v analyzovaném vzorku (mezi 0,0 a 30,0 % Hb C). - 699 -


Linearita Hb D

Jeden vzorek s Hb D (obsahující 24,6 g/dL celkového hemoglobinu s 39,4 % Hb D) byl smíchán se vzorkem normální krve (obsahující 30,5 g/dL celkového hemoglobinu s 0,0 % Hb D) v různých poměrech a ředění byla analyzována elektroforézou postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS 2. Postup CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS 2 vykázal dobrou linearitu pro Hb D v celém studovaném rozsahu s maximem okolo 9,7 g/dL pro Hb D v analyzovaném vzorku (mezi 0,0 a 39,4 % Hb D).

Linearita Hb E

Jeden vzorek s Hb E (obsahující 10,8 g/dL celkového hemoglobinu s 95,4 % Hb E) byl smíchán se vzorkem normální krve (obsahující 12,3 g/dL celkového hemoglobinu s 0,0 % Hb E) v různých poměrech a ředění byla analyzována elektroforézou postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS 2. Postup CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS 2 vykázal dobrou linearitu pro Hb E v celém studovaném rozsahu s maximem okolo 10,3 g/dL pro Hb E v analyzovaném vzorku (mezi 0,0 a 95,4 % Hb E).

Přesnost – vnitřní korelace

Studie vnitřní korelace postupu CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) prováděného přístrojem CAPILLARYS 2 byla ověřena podle směrnice Institutu pro klinické laboratorní standardy (Clinical Laboratory Standards Institute, CLSI - USA) číslo EP09-A2 "Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline – Second Edition (Interim Revision)" [Metoda srovnání a odhad zkreslení pomocí vzorků pacientů; schválené směrnice - druhá edice (předběžná revize).] Výsledky pro procenta (%) frakcí hemoglobinů pro každý vzorek byly analyzovány statistickými nástroji doporučenými CLSI.

POZNÁMKA : Výsledky prezentované níže byly získány z 1 studie interní přesnosti, která byla provedena v zařízení společnosti SEBIA. Analyzované vzorky krve a jejich diagnostické posouzení byly poskytnuty 11 nemocničními laboratořemi ve Francii a USA. Diagnóza byla založena na rutinním metodě HPLC.

Úroveň frakcí hemoglobinu byla měřena u 56 vzorků krve, včetně 20 vzorků s variantami hemoglobinu, např. hemoglobiny S, C, D a E, které byly analyzovány elektrforetickou separací postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) přístrojem CAPILLARYS 2 a komerčně dostupným systémem HPLC pro analýzu hemoglobinů. Naměřené hodnoty frakcí hemoglobinu z obou postupů byly analyzovány lineární regresí. Výsledky lineární regresní analýzy pro Hb A, Hb A2, Hb F a Hb S jsou uvedeny v tabulce níže (y = postup CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) s přístrojem CAPILLARYS 2) : Frakce Hb

Počet vzorků

Korelační součinitel

Úsek na ose y

Sklon

Hb A

56

0.995

- 11.24

1.32

Hb S

8

0.997

- 0.39

1.07

Hb A2

44

Hb F

56

0.977 1.000

- 0.07 - 0.35

1.13 0.93

Rozsah hodnot Hb % CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) s přístrojem CAPILLARYS 2 20.9 – 98.1 0.1 – 6.2

0.0 – 79.0 6.5 – 40.9

Tato studie prokázala perfektní korelaci mezi 2 analýzami pro detekci abnormálních hemoglobinů s citlivostí 100,0 % a specificitou 100,0 % postupu CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) ve srovnání s referenčním postupem, vypočítanou pomocí doporučené metody (Wendling, 1986). Ve skutečnosti, všechny abnormální hemoglobiny (S, C, D, E a další) detekované postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS byly v souladu se srovnávacím systémem HPLC.Nebyly pozorovány žádné případy falešně pozitivní, jako např. detekce abnormálního hemoglobinu nenalézající se ve vzorku.

Přesnost – vnější korelace

POZNÁMKA : Výsledky prezentované níže byly získány z 2 externích studií přesnosti, které byla provedeny ve 2 nemocničních laboratořích umístěných v USA. Diagnóza byla založena na rutinním metodě HPLC.

Ve studii č. 1 byly úrovně frakcí hemoglobinu měřeny u 123 vzorků krve, včetně 33 vzorků s variantami hemoglobinu, např. hemoglobiny S, C a E, které byly analyzovány elektroforetickou separací postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) přístrojem CAPILLARYS 2 a komerčně dostupným systémem HPLC pro analýzu hemoglobinů. Naměřené hodnoty frakcí hemoglobinu z obou postupů byly analyzovány lineární regresí. Výsledky lineární regresní analýzy pro Hb A, Hb A2, Hb F a Hb S jsou uvedeny v tabulce níže (y = postup CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) s přístrojem CAPILLARYS 2) : Frakce Hb Hb A

Hb A2 Hb F

Hb S

Hb C

Počet vzorků


Úsek na ose y

Sklon

93

0.983

- 0.21

1.12

121 103 26 5

0.999

- 1.72

0.995

- 0.62

0.988

1.57

0.999

- 0.42

1.14 0.99 0.99 0.99


0.0 – 90.0

14.7 – 54.9 10.0 – 43.7

Tato studie prokázala perfektní korelaci mezi 2 analýzami pro detekci abnormálních hemoglobinů s citlivostí 100,0 % a specificitou 100,0 % postupu CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) ve srovnání s referenčním postupem, vypočítanou pomocí doporučené metody (Wendling, 1986). Ve skutečnosti byly všechny abnormální hemoglobiny (S, C, E a další) detekované postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS 2 v souladu se srovnávacím systémem HPLC. Nebyly pozorovány žádné případy falešně pozitivní, jako např. detekce abnormálního hemoglobinu nenalézající se ve vzorku. - 700 -

CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) - 2014/10 Ve studii č. 2 byly úrovně frakcí hemoglobinu měřeny u 183 vzorků krve, včetně 83 vzorků s variantami hemoglobinu, např. hemoglobiny S, C a D, které byly analyzovány elektroforetickou separací postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) přístrojem CAPILLARYS 2 a komerčně dostupným systémem HPLC pro analýzu hemoglobinů. Naměřené hodnoty frakcí hemoglobinu z obou postupů byly analyzovány lineární regresí.Výsledky lineární regresní analýzy pro Hb A, Hb A2, Hb F, Hb S a Hb D jsou uvedeny v tabulce níže (y = postup CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) s přístrojem CAPILLARYS 2) : Frakce Hb Hb A

Hb A2 Hb F

Hb S

Hb C Hb D

Počet vzorků


Úsek na ose y

Sklon

113

0.925

- 0.14

1.02

180 181 67 13 3

0.991

- 1.75

0.991

0.13

0.994

2.49

0.985

1.29

0.984

0.72

1.13 1.06 0.97 0.92 1.07


0.0 – 98.0 7.4 – 93.6

12.8 – 45.3 34.5 – 41.1

Tato studie prokázala perfektní korelaci mezi 2 analýzami pro detekci abnormálních hemoglobinů s citlivostí 100,0 % a specificitou 100,0 % postupu CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) ve srovnání s referenčním postupem, vypočítanou pomocí doporučené metody (Wendling, 1986). Ve skutečnosti byly všechny abnormální hemoglobiny (S, C, E a další) detekované postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) na přístroji CAPILLARYS 2 v souladu se srovnávacím systémem HPLC.Nebyly pozorovány žádné případy falešně pozitivní, jako např. detekce abnormálního hemoglobinu nenalézající se ve vzorku.

- 701 -

BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY 1.

2. 3. 4. 5. 6. 7.

8.

9. 10. 11. 12. 13.

14. 15. 16. 17. 18. 19. 20.

21. 22.

23.

24. 25.

26.

27. 28.

29.

30.

31. 32.

33.

34.

35.

36.

37.


J. Bardakdjian-Michau, J.-L. Dhondt, R. Ducrocq, F. Galactéros, A. Guyard, F.-X. Huchet, A. Lahary, D. Lena-Russo, P. Maboudou, M.-L. North, C. Prehu, A.-M. Soummer, M. Verschelde, H. Wajcman (2003) Bonnes pratiques de l’étude de l’hémoglobine. Ann. Biol. Clin., 61, 401-409. V.F. Fairbanks, ed. (1980) Hemoglobinopathies and thalassemia: Laboratory methods and case studies. Brian C. Decker, New York. F. Galacteros (1986) Thalassémie, drépanocytose et autres hémoglobinopathies. Techniques et Biologie, 3, 174-178. JM Hempe, JN Granger and RD Craver (1997) Capillary isoelectric focusing of hemoglobin variants. Electrophoresis, 18, 1785-1795. T.H.J. Huisman and J.H.P. Jonxis (1977) The hemoglobinopathies: techniques of identification. Marcel Dekker, New York. Jellum E et al. Diagnostic applications of chromatography and capillary electrophoresis. J. Chromatogr. B, 689, 155-164 (1997). Joutovsky A, Hadzi-Nesic J and Nardi MA (2004) HPLC retention time as a diagnostic tool for hemoglobin variants and hemoglobinopathies : a study of 60 000 samples in a clinical diagnostic laboratories. Clin. Chem., 50, 10, 1736-1747. J.S. Krauss, P.A. Drew, M.H. Jonah, M. Trinh, S. Shell, L. Black and C.R. Baisden (1986) Densitometry and microchromatography compared for determination of the hemoglobin C and A2 proportions in hemoglobin C and hemoglobin SC disease and in hemoglobin C trait. Clin. Chem. 32, 5, 860-863. Landers JP. Clinical Capillary Electrophoresis. Clin. Chem., 41, 495-509 (1995). C. Livingstone (1986) The hemoglobinopathies. Edit. London.M. Maier-Redelsberger, R. Girot (1989) Diagnostic biologique des maladies de l’hémoglobine. Feuillets de biologie, 170. Oda RP et al. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis, 18, 17151723 (1997). R.G. Schneider (1978) Methods for detection of hemoglobin variants and hemoglobinopathies in the routine clinical laboratory. CRC Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 9, 243-271. L. Vovan, D. Lara-Russo, A. Orsini (1985) Diagnostic biologique des hémoglobinoses. Ann. Pédiat. 32, 9, 780-789. http://globin.cse.psu.edu/hbvar/menu.html : Hbvar : A Database of Human Hemoglobin Variants and Thalassemias. http://www.isns-neoscreening.org/agenda.htm. F Boemer, O Ketelslegers, JM Minon, V Bours, R Schoops (2008) Newborn screening for sickle cell disease using tandem mass spectrometry. Clin. Chem., 54, 12, 2036-2041. Lubin BH, Witkowska HE, Kleman K (1991) Laboratory diagnosis of hemoglobinopathies. Clin. Biochem., 24, 363-374. B Gulbis, B Fontaine, F Vertongen, F Cotton (2003) The place of capillary electrophoresis techniques in screening for haemoglobinopathies. Ann. Clin. Biochem., 40, 659-662. Aguilar-Martinez P et al (2010) Arbres décisionnels pour le diagnostic et la caractérisation moléculaire des hémoglobinopathies. Ann. Biol. Clin., 68 (4) : 455-464. Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité. Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93-97. L. Guis, A. Chaumier, V. Le Gall, S. Havrez (Février 2013) Intégration du Capillarys 2 Flex Piercing (Sebia) dans un laboratoire de biologie médicale spécialisée. Revue Francophone des Laboratoires, 449, 47 – 56. I. Agouti, F. Merono, N. Bonello-Palot, C. Badens (2013) Analytical evaluation of the Capillarys 2 Flex piercing for routine haemoglobinopathies diagnosis. Int. Jnl. Lab. Hem. 35, 217 – 221. S. Altinier, M. Varagnolo, M. Zaninotto, M. Plebani. (2012) Identification and quantification of hemoglobins in whole blood: the analytical and organizational aspects of Capillarys 2 Flex Piercing compared with agarose electrophoresis and HPLC methods. Clin. Chem. Lab. Med. DOI 10.1515/cclm-2012-0061. M. Angastiniotis, J.L. Vives Corrons, E.S. Soteriades, A. Eleftheriou (2013) The Impact of Migrations on the Health Services for Rare Diseases in Europe: The Example of Haemoglobin Disorders. The Scientific World Journal Volume 2013, Article ID 727905, 10 pages. Nicole Borbely, Lorraine Phelan, Richard Szydlo, et al. (2012) Capillary zone electrophoresis for haemoglobinopathy diagnosis. J. Clin. Pathol., doi: 10.1136/jclinpath-2012-200946. F. Cotton et al. (2009) Evaluation of an automated capillary electrophoresis system in the screening for hemoglobinopathies. Clin. Lab., 55 : 217 – 221. D. Greene, A.L. Pyle, J.S. Chang, C. Hoke, T. Lorey (2012) Comparison of Sebia Capillarys Flex capillary electrophoresis with the BioRad Variant II high pressure liquid chromatography in the evaluation of hemoglobinopathies. Clin. Chim. Acta 413, 1232 – 1238. T. Higgins, M. Mack, A. Khajuria (2009) Comparison of two methods for the quantification and identification of hemoglobin variants. Clin. Biochem., 42, 701 – 705. D.F. Keren et al (2008) Comparison of Sebia Capillarys capillary electrophoresis with the Primus High-Pressure Liquid Chromatography in the evaluation of hemoglobinopathies. Am. J. Clin. Pathol., 130 : 824 – 831. D.F. Keren et al (2012) Expression of hemoglobin variant migration by capillary electrophoresis relative to Hemoglobin A2 improves precision. Am. J. Clin. Pathol.,137 : 660 – 664. Can Liao, Jian-Ying Zhou, Xing-Mei Xie, Jian Li, Ru Li, and Dong-Zhi Li (2010). Detection of Hb constant spring by a capillary electrophoresis method. Hemoglobin, 34 (2) : 175 – 178. D.M. Mais et al (2009) The range of hemoglobin A2 in hemoglobin E heterozygotes as determined by capillary electrophoresis. Am. J. Clin. Pathol.,132 : 34 – 38. T. Munkongdee et al (2010) Quantitative analysis of Hb Bart’s in cord blood by capillary electrophoresis system. Ann. Hematol. DOI 10.1007/s00277-010-1137-4. R. Paleari, B. Gulbis, F. Cotton, A. Mosca (2012) Interlaboratory comparison of current high-performance methods for HbA2. Int. Jnl. Lab. Hem. 34, 362 – 368. S. Sangkitporn et al (2011) Multicenter validation of fully automated capillary electrophoresis method for diagnosis of thalassemias and hemoglobinopathies in Thailand. Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health 42 (5), 1224 – 1232. F. Wolff, F. Cotton, B. Gulbis (2012) Screening for haemoglobinopathies on cord blood : laboratory and clinical experience. J. Med. Screen., 19, 3, 116 - 122.

- 1060 -

CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) : Zone

Z1

Z(C)

Z(A2)

Z(E)

TABLEAU / TABLE


VARIANTS POTENTIELS PRÉSENTS DANS CHAQUE ZONE POTENTIAL VARIANTS LOCATED IN EACH ZONE

Hémoglobines / Hemoglobins (Hb)

Hb Santa Ana (pic mineur), Hb Mizuho (pic mineur), Hb delta A'2, Hb S-Oman, Hb T-Cambodia, Hb Poissy (pic mineur), variant de Hb A2 "Savaria", variant de Hb A2 "Chad", variant de Hb A2 "Arya", variant de Hb A2 "Hasharon", variant de Hb A2 "Fort de France", variant de Hb A2 "Ottawa", variant de Hb A2 "Shimonoseki", variant de Hb A2 "Russ" (alpha 1), variant de Hb A2 "Matsue-Oki", variant de Hb A2 "Reims", variant de Hb A2 "Mizushi", variant de Hb A2 "Stanleyville-II", variant de Hb A2 "O-Indonesia", variant de Hb A2 "San Antonio", variant de Hb A2 "G-Audhali", variant de Hb A2 "Handsworth", variant de Hb A2 "G-Philadelphia", variant de Hb A2 "Memphis", variant de Hb A2 "Q-Iran", variant de Hb A2 "G-Waimanalo", variant de Hb A2 "Russ" (alpha 2), variant de Hb A2 "Ube-4", variant de Hb A2 "Q-India", variant de Hb A2 "Watts", variant de Hb A2 "Spanish Town", variant de Hb A2 "Montgomery", variant de Hb A2 "G-Norfolk" (alpha 1), variant de Hb A2 "Inkster", variant de Hb A2 "G-Pest", variant de Hb A2 "Winnipeg", variant de Hb A2 "Queens", variant de Hb A2 "Etobicoke", variant de Hb A2 "Chapel Hill", variant de Hb A2 "Park Ridge", variant de Hb A2 "Q-Thailand", variant de Hb A2 "Delfzicht" Hb Santa Ana (minor peak), Hb Mizuho (minor peak), Hb delta A'2, Hb S-Oman, Hb T-Cambodia, Hb Poissy (minor peak), "Savaria" Hb A2 variant, "Chad" Hb A2 variant, "Arya" Hb A2 variant, "Hasharon" Hb A2 variant, "Fort de France" Hb A2 variant, "Ottawa" Hb A2 variant, "Shimonoseki" Hb A2 variant, "Russ" Hb A2 variant (alpha 1), "Matsue-Oki" Hb A2 variant, "Reims" Hb A2 variant, "Mizushi" Hb A2 variant, "Stanleyville-II" Hb A2 variant, "O-Indonesia" Hb A2 variant, "San Antonio" Hb A2 variant, "G-Audhali" Hb A2 variant, "Handsworth" Hb A2 variant, "G-Philadelphia" Hb A2 variant, "Memphis" Hb A2 variant, "Q-Iran" Hb A2 variant, "G-Waimanalo" Hb A2 variant, "Russ" Hb A2 variant (alpha 2), "Ube-4" Hb A2 variant, "Q-India" Hb A2 variant, "Watts" Hb A2 variant, "Spanish Town" Hb A2 variant, "Montgomery" Hb A2 variant, "G-Norfolk" Hb A2 variant (alpha 1), "Inkster" Hb A2 variant, "G-Pest" Hb A2 variant, "Winnipeg" Hb A2 variant, "Queens" Hb A2 variant, "Etobicoke" Hb A2 variant, "Chapel Hill" Hb A2 variant, "Park Ridge" Hb A2 variant, "Q-Thailand" Hb A2 variant, "Delfzicht" Hb A2 variant Hb C-Ziguinchor, Hb F-Hull, Hb F-Texas-I, Hb Constant Spring, Hb C, Hb C-Harlem (C-Georgetown), variant de Hb A2 "Les Lilas", variant de Hb A2 "Boumerdes", variant de Hb A2 "Dunn", variant de Hb A2 "Bassett", variant de Hb A2 "Tarrant", variant de Hb A2 "Sassari", variant de Hb A2 "St. Luke's", variant de Hb A2 "Verdun", variant de Hb A2 "Manitoba-I", variant de Hb A2 "Setif", variant de Hb A2 "Sunshine Seth", variant de Hb A2 "Titusville", variant de Hb A2 "Swan River", variant de Hb A2 "Manitoba-II", variant de Hb A2 "Val de Marne" Hb C-Ziguinchor, Hb F-Hull, Hb F-Texas-I, Hb Constant Spring, Hb C, Hb C-Harlem (C-Georgetown), "Les Lilas" Hb A2 variant, "Boumerdes" Hb A2 variant, "Dunn" Hb A2 variant, "Bassett" Hb A2 variant, "Tarrant" Hb A2 variant, "Sassari" Hb A2 variant, "St. Luke's" Hb A2 variant, "Verdun" Hb A2 variant, "Manitoba-I" Hb A2 variant, "Setif" Hb A2 variant, "Sunshine Seth" Hb A2 variant, "Titusville" Hb A2 variant, "Swan River" Hb A2 variant, "Manitoba-II" Hb A2 variant, "Val de Marne" Hb A2 variant

Hb A2, Hb Chad (E-Keelung), Hb Hong Kong (cas anti-Lepore), Hb O-Tibesti, Hb O-Arab, Hb E-Saskatoon, variant de Hb A2 "Charolles", variant de Hb A2 "Roubaix", variant de Hb A2 "Dallas" *, variant de Hb A2 "Aztec" *, variant de Hb A2 "Boghé" *, variant de Hb A2 "Bonn" *, variant de Hb A2 "Brugg" *, variant de Hb A2 "Buffalo" *, variant de Hb A2 "Chicago" *, variant de Hb A2 "Columbia Missouri" *, variant de Hb A2 "Conakry" *, variant de Hb A2 "Fontainebleau" *, variant de Hb A2 "Frankfurt" *, variant de Hb A2 "Godavari" *, variant de Hb A2 "Gouda" *, variant de Hb A2 "Groene Hart" *, variant de Hb A2 "Hekinan" *, variant de Hb A2 "Kosovo"*, variant de Hb A2 "Le Lamentin" *, variant de Hb A2 "Le Lamentin 2" *, variant de Hb A2 "Lisbon" *, variant de Hb A2 "Lyon-Bron" *, variant de Hb A2 "M-Boston" *, variant de Hb A2 "Milledgeville" *, variant de Hb A2 "Mosella" *, variant de Hb A2 "Noko" *, variant de Hb A2 "Owari" *, variant de Hb A2 "Ozieri" *, variant de Hb A2 "Riccarton" *, variant de Hb A2 "Rouen" *, variant de Hb A2 "Saclay" *, variant de Hb A2 "Taybe" *, variant de Hb A2 "Toulon" *, variant de Hb A2 "Twin Peaks" *, variant de Hb A2 "Verona" *, variant de Hb A2 "Westmead" *, variant de Hb A2 "Zoetermeer" *, variant de Hb A2 "Melusine" *, variant de Hb A2 "Jura", variant de Hb A2 "Nouakchott"

Hb A2, Hb Chad (E-Keelung), Hb Hong Kong (anti-Lepore case), Hb O-Tibesti, Hb O-Arab, Hb E-Saskatoon, "Charolles" Hb A2 variant, "Roubaix" Hb A2 variant, "Dallas" Hb A2 variant *, "Aztec" Hb A2 variant *, "Boghé" Hb A2 variant *, "Bonn" Hb A2 variant *, "Brugg" Hb A2 variant *, "Buffalo" Hb A2 variant *, "Chicago" Hb A2 variant *, "Columbia Missouri" Hb A2 variant *, "Conakry" Hb A2 variant *, "Fontainebleau" Hb A2 variant *, "Frankfurt" Hb A2 variant *, "Godavari" Hb A2 variant *, "Gouda" Hb A2 variant *, "Groene Hart" Hb A2 variant *, "Hekinan" Hb A2 variant *, "Kosovo" Hb A2 variant *, "Le Lamentin" Hb A2 variant *, "Le Lamentin 2" Hb A2 variant *, "Lisbon" Hb A2 variant *, "Lyon-Bron" Hb A2 variant *, "M-Boston" Hb A2 variant *, "Milledgeville" Hb A2 variant *, "Mosella" Hb A2 variant *, "Noko" Hb A2 variant *, "Owari" Hb A2 variant *, "Ozieri" Hb A2 variant *, "Riccarton" Hb A2 variant *, "Rouen" Hb A2 variant *, "Saclay" Hb A2 variant *, "Taybe" Hb A2 variant *, "Toulon" Hb A2 variant *, "Twin Peaks" Hb A2 variant *, "Verona" Hb A2 variant *, "Westmead" Hb A2 variant *, "Zoetermeer" Hb A2 variant *, "Melusine" Hb A2 variant *, "Jura" Hb A2 variant, "Nouakchott" Hb A2 variant Hb Seal Rock, Hb Köln (Ube-1), Hb Buenos Aires (pic mineur), Hb E, Hb M-Saskatoon (pic mineur), Hb G-Siriraj, Hb A2-Babinga, Hb F-Moyen Orient, Hb Agenogi, Hb Sabine, Hb Santa Ana, Hb Savaria, Hb Djelfa (pic 3), variant de Hb A2 "M-Iwate", variant de Hb A2 "Saint Claude", variant de Hb A2 "Jackson" (alpha 2), variant de Hb A2 "Wayne" (pic 1), Hb C dégradée

Hb Seal Rock, Hb Köln (Ube-1), Hb Buenos Aires (minor peak), Hb E, Hb M-Saskatoon (minor peak), Hb G-Siriraj, Hb A2-Babinga, Hb F-Moyen Orient, Hb Agenogi, Hb Sabine, Hb Santa Ana, Hb Savaria, Hb Djelfa (peak 3), "M-Iwate" Hb A2 variant, "Saint Claude" Hb A2 variant, "Jackson" Hb A2 variant (alpha 2), "Wayne" Hb A2 variant (peak 1), denatured Hb C

- 1061 -


Z(S)

Z(D)

Z(F)

Z8

TABLEAU / TABLE




Hb Arya, Hb Kenya (HPFH-7), Hb Hasharon (Sinai), Hb Dhofar (Yukuhashi), Hb Shimonoseki (Hikoshima), Hb O-Indonesia (Buginese-X), Hb Machida, Hb Vexin, Hb Corbeil, Hb Ottawa (Siam), Hb Fort de France, Hb S, Hb Montgomery, Hb G-Copenhagen, Hb S-Antilles, Hb Handsworth, Hb Poissy, Hb Hamadan, Hb Belfast, Hb Russ (alpha 1), Hb Russ (alpha 2), Hb Evanston, Hb Stanleyville-II, Hb Cocody, Hb Reims, variant de Hb A2 "Tokoname", variant de Hb A2 "Pisa", variant de Hb A2 "Lombard", variant de Hb A2 "Tatras", variant de Hb A2 "J-Cape Town" (alpha 2), variant de Hb A2 "Thionville", variant de Hb A2 "Cemenelum", variant de Hb A2 "J-Cape Town" (alpha 1), variant de Hb A2 "Nikaia", variant de Hb A2 "Hopkins-II" (alpha 1), variant de Hb A2 "Jackson" (alpha 1), variant de Hb A2 "Hopkins-II" (alpha 2), variant de Hb A2 "Singapore", Hb O-Arab dégradée

Hb Arya, Hb Kenya (HPFH-7), Hb Hasharon (Sinai), Hb Dhofar (Yukuhashi), Hb Shimonoseki (Hikoshima), Hb O-Indonesia (Buginese-X), Hb Machida, Hb Vexin, Hb Corbeil, Hb Ottawa (Siam), Hb Fort de France, Hb S, Hb Montgomery, Hb G-Copenhagen, Hb S-Antilles, Hb Handsworth, Hb Poissy, Hb Hamadan, Hb Belfast, Hb Russ (alpha 1), Hb Russ (alpha 2), Hb Evanston, Hb Stanleyville-II, Hb Cocody, Hb Reims, "Tokoname" Hb A2 variant, "Pisa" Hb A2 variant, "Lombard" Hb A2 variant, "Tatras" Hb A2 variant, "J-Cape Town" Hb A2 variant (alpha 2), "Thionville" Hb A2 variant, "Cemenelum" Hb A2 variant, "J-Cape Town" Hb A2 variant (alpha 1), "Nikaia" Hb A2 variant, "Hopkins-II" Hb A2 variant (alpha 1), "Jackson" Hb A2 variant (alpha 1), "Hopkins-II" Hb A2 variant (alpha 2), "Singapore" Hb A2 variant, denatured Hb O-Arab

Hb Memphis, Hb G-Audhali, Hb G-Szuhu (Gifu), Hb Leiden, Hb Beograd (D-Camperdown), Hb Muravera, Hb D-Bushman, Hb MatsueOki, Hb D-Punjab (D-Los Angeles), Hb Osu Christiansborg, Hb Watts, Hb A2-Coburg, Hb G-Waimanalo (Aida), Hb Muskegon, Hb D-Ibadan, Hb Buenos Aires (pic mineur), Hb Q-India, Hb Lepore-BW, Hb Q-Iran, Hb Summer Hill, Hb G-Philadelphia, Hb D-Ouled Rabah, Hb Yaizu, Hb Kenitra, Hb San Antonio, Hb Ferrara, Hb Lepore-Hollandia, Hb Quin-Hai, Hb Fort Worth, Hb Mizushi, Hb LeporeBaltimore, Hb Djelfa (pic 2), Hb Spanish Town, Hb Korle-Bu (G-Accra), Hb Köln (Ube-1), Hb G-Norfolk (alpha 1), Hb Maputo, Hb Etobicoke, Hb D-Iran, Hb G-Taipei, Hb Caribbean, Hb Ube-4, Hb St. Luke's, Hb G-Coushatta (G-Saskatoon), Hb Winnipeg, Hb Inkster, Hb Zürich, Hb G-Pest, Hb P-Galveston, Hb Queens (Ogi), Hb Aubenas, Hb Setif, Hb P-Nilotic, Hb Sunshine Seth, Hb Titusville, variant de Hb A2 "J-Sardegna", variant de Hb A2 "Suresnes", variant de Hb A2 "J-Meerut" (alpha 2), variant de Hb A2 "J-Broussais" (alpha 2), variant de Hb A2 "J-Rajappen", variant de Hb A2 "J-Anatolia", variant de Hb A2 "J-Oxford", variant de Hb A2 "J-Meerut" (alpha 1), variant de Hb A2 "Ube-2", variant de Hb A2 "J-Broussais" (alpha 1), variant de Hb A2 "J-Abidjan", variant de Hb A2 "J-Toronto", variant de Hb A2 "Mexico" (alpha 1), variant de Hb A2 "Mexico" (alpha 2), variant de Hb A2 "Thailand", variant de Hb A2 "J-Tongariki", variant de Hb A2 "Neuilly-sur-Marne", variant de Hb A2 "J-Wenchang-Wuming", variant de Hb A2 "J-Paris-I" (alpha 2), variant de Hb A2 "J-Habana", variant de Hb A2 "J-Paris-I" (alpha 1), variant de Hb A2 "Wayne" (pic 2), Hb E dégradée

Hb Memphis, Hb G-Audhali, Hb G-Szuhu (Gifu), Hb Leiden, Hb Beograd (D-Camperdown), Hb Muravera, Hb D-Bushman, Hb MatsueOki, Hb D-Punjab (D-Los Angeles), Hb Osu Christiansborg, Hb Watts, Hb A2-Coburg, Hb G-Waimanalo (Aida), Hb Muskegon, Hb D-Ibadan, Hb Buenos Aires (minor peak), Hb Q-India, Hb Lepore-BW, Hb Q-Iran, Hb Summer Hill, Hb G-Philadelphia, Hb D-Ouled Rabah, Hb Yaizu, Hb Kenitra, Hb San Antonio, Hb Ferrara, Hb Lepore-Hollandia, Hb Quin-Hai, Hb Fort Worth, Hb Mizushi, Hb LeporeBaltimore, Hb Djelfa (peak 2), Hb Spanish Town, Hb Korle-Bu (G-Accra), Hb Köln (Ube-1), Hb G-Norfolk (alpha 1), Hb Maputo, Hb Etobicoke, Hb D-Iran, Hb G-Taipei, Hb Caribbean, Hb Ube-4, Hb St. Luke's, Hb G-Coushatta (G-Saskatoon), Hb Winnipeg, Hb Inkster, Hb Zürich, Hb G-Pest, Hb P-Galveston, Hb Queens (Ogi), Hb Aubenas, Hb Setif, Hb P-Nilotic, Hb Sunshine Seth, Hb Titusville, "J-Sardegna" Hb A2 variant, "Suresnes" Hb A2 variant, "J-Meerut" Hb A2 variant (alpha 2), "J-Broussais" Hb A2 variant (alpha 2), "J-Rajappen" Hb A2 variant, "J-Anatolia" Hb A2 variant, "J-Oxford" Hb A2 variant, "J-Meerut" Hb A2 variant (alpha 1), "Ube-2" Hb A2 variant, "J-Broussais" Hb A2 variant (alpha 1), "J-Abidjan" Hb A2 variant, "J-Toronto" Hb A2 variant, "Mexico" Hb A2 variant (alpha 1), "Mexico" Hb A2 variant (alpha 2), "Thailand" Hb A2 variant, "J-Tongariki" Hb A2 variant, "Neuilly-sur-Marne" Hb A2 variant, "J-Wenchang-Wuming" Hb A2 variant, "J-Paris-I" Hb A2 variant (alpha 2), "J-Habana" Hb A2 variant, "J-Paris-I" Hb A2 variant (alpha 1), "Wayne" Hb A2 variant (peak 2), denatured Hb E

Hb F, Hb Willamette, Hb Hoshida, Hb Languidic, Hb Sunnybrook, Hb Park Ridge, Hb Delfzicht, Hb Alabama, Hb Chapel Hill, Hb Bunbury, Hb Tak, Hb Q-Thailand (G-Taichung), Hb Sabine, Hb Bassett, Hb Les Lilas, Hb Rampa, Hb G-Georgia, Hb Barcelona, Hb G-San José, Hb Denmark Hill, Hb Pôrto Alegre, Hb Geldrop Santa Anna, Hb Ta-Li, Hb Richmond, Hb Abruzzo, Hb Verdun, Hb Boumerdes, Hb Swan River, Hb Burke, Hb Tarrant, Hb Dunn, Hb Manitoba-I, Hb Manitoba-II, Hb Sassari, Hb Hazebrouck, Hb Port Phillip, variant de Hb A2 "J-Rovigo", Hb S dégradée, Hb D-Punjab dégradée

Hb F, Hb Willamette, Hb Hoshida, Hb Languidic, Hb Sunnybrook, Hb Park Ridge, Hb Delfzicht, Hb Alabama, Hb Chapel Hill, Hb Bunbury, Hb Tak, Hb Q-Thailand (G-Taichung), Hb Sabine, Hb Bassett, Hb Les Lilas, Hb Rampa, Hb G-Georgia, Hb Barcelona, Hb G-San José, Hb Denmark Hill, Hb Pôrto Alegre, Hb Geldrop Santa Anna, Hb Ta-Li, Hb Richmond, Hb Abruzzo, Hb Verdun, Hb Boumerdes, Hb Swan River, Hb Burke, Hb Tarrant, Hb Dunn, Hb Manitoba-I, Hb Manitoba-II, Hb Sassari, Hb Hazebrouck, Hb Port Phillip, "J-Rovigo" Hb A2 variant, denatured Hb S, denatured Hb D-Punjab Hb F acétylée, Hb Lansing, Hb Hinsdale, Hb Roanne, Hb Yakima, Hb Ypsilanti (Ypsi - pic 1), Hb Saint Mandé, Hb Alberta, Hb Bruxelles, Hb Val de Marne (Footscray), Hb Kempsey, Hb Shelby (Leslie), Hb Atlanta, Hb Chemilly, Hb S-Clichy, Hb Sarrebourg, Hb Charolles, Hb Ypsilanti (Ypsi - pic 2), Hb Rainier, Hb Athens-GA (Waco), Hb Debrousse, Hb Köln (Ube-1), Hb Aubagne Acetylated Hb F, Hb Lansing, Hb Hinsdale, Hb Roanne, Hb Yakima, Hb Ypsilanti (Ypsi - peak 1), Hb Saint Mandé, Hb Alberta, Hb Bruxelles, Hb Val de Marne (Footscray), Hb Kempsey, Hb Shelby (Leslie), Hb Atlanta, Hb Chemilly, Hb S-Clichy, Hb Sarrebourg, Hb Charolles, Hb Ypsilanti (Ypsi - peak 2), Hb Rainier, Hb Athens-GA (Waco), Hb Debrousse, Hb Köln (Ube-1), Hb Aubagne

- 1062 -



Z(A)

Z10

Z11

Z12

TABLEAU / TABLE



Hb A, Hb Presbyterian, Hb Roubaix (Poland), Hb Silver Springs *, Hb El Escorial *, Hb Dallas *, Hb Olympia *, Hb Phnom Penh *, Hb La Coruna *, Hb Uzes *, Hb Bougardirey-Mali *, Hb Saint Nazaire *, Hb Alzette *, Hb Antibes-Juan-Les-Pins *, Hb Arta (pic majeur) *, Hb Austin *, Hb Aztec *, Hb Beirut *, Hb Bethesda *, Hb Boghé *, Hb Bonn *, Hb Brem-sur-Mer *, Hb Brest *, Hb Brigham *, Hb Brisbane (Great Lakes) *, Hb Brugg *, Hb Buenos Aires (Bryn Mawr - pic majeur) *, Hb Buffalo (Reeuwijk) *, Hb Bushwick *, Hb Chicago *, Hb City of Hope *, Hb Coimbra (Ingelheim) *, Hb Columbia Missouri *, Hb Conakry *, Hb Djelfa (pic 1) *, Hb Fontainebleau *, Hb Frankfurt *, Hb Fukuoka *, Hb Godavari *, Hb Gorwihl (Hinchingbrooke) *, Hb Gouda *, Hb Grange Blanche *, Hb Groene Hart (Bernalda) *, Hb Hamilton *, Hb Heathrow *, Hb Hekinan *, Hb Iraq-Halabja *, Hb Kosovo *, Hb La Desirade *, Hb Le Lamentin *, Hb Le Lamentin 2 *, Hb Linköping (Meilahti) *, Hb Lisbon *, Hb Little Rock *, Hb Lulu Island *, Hb Lyon-Bron *, Hb M-Boston (M-Osaka) *, Hb M-Saskatoon (pic majeur) *, Hb McKees Rocks *, Hb Malmö *, Hb Marseille (Long Island) *, Hb Milledgeville *, Hb Minneapolis Laos *, Hb Mizuho *, Hb Mosella *, Hb Noko *, Hb Okayama *, Hb Owari *, Hb Ozieri *, Hb Perth (Abraham Lincoln) *, Hb Potomac *, Hb Puttelange *, Hb Raleigh *, Hb Ravenscourt Park *, Hb Regina *, Hb Rhode Island (Southwark) *, Hb Riccarton *, Hb Rouen (Ethiopia) *, Hb Saclay *, Hb St Joseph's *, Hb San Diego *, Hb Santa Juana (Serres) *, Hb Savannah *, Hb Sydney *, Hb Taybe *, Hb Templeuve *, Hb Toulon *, Hb Twin Peaks *, Hb Ty Gard *, Hb Valletta *, Hb Verona *, Hb Villejuif *, Hb Villeparisis *, Hb Volga (Drenthe) *, Hb Westmead *, Hb Wood *, Hb Yaounde (Mataro) *, Hb Zoetermeer *, Hb M-Milwaukee-I *, Hb Melusine *, Hb Pitie-Salpetriere *, Hb Syracuse *, Hb Hounslow, Hb Fort Dodge, Hb Old Dominion (OD/BuT), Hb Camperdown, Hb Duarte, Hb Jura (Bamako) Hb A, Hb Presbyterian, Hb Roubaix (Poland), Hb Silver Springs *, Hb El Escorial *, Hb Dallas *, Hb Olympia *, Hb Phnom Penh *, Hb La Coruna *, Hb Uzes *, Hb Bougardirey-Mali *, Hb Saint Nazaire *, Hb Alzette *, Hb Antibes-Juan-Les-Pins *, Hb Arta (main peak) *, Hb Austin *, Hb Aztec *, Hb Beirut *, Hb Bethesda *, Hb Boghé *, Hb Bonn *, Hb Brem-sur-Mer *, Hb Brest *, Hb Brigham *, Hb Brisbane (Great Lakes) *, Hb Brugg *, Hb Buenos Aires (Bryn Mawr, major peak) *, Hb Buffalo (Reeuwijk) *, Hb Bushwick *, Hb Chicago *, Hb City of Hope *, Hb Coimbra (Ingelheim) *, Hb Columbia Missouri *, Hb Conakry *, Hb Djelfa (peak 1) *, Hb Fontainebleau *, Hb Frankfurt *, Hb Fukuoka *, Hb Godavari *, Hb Gorwihl (Hinchingbrooke) *, Hb Gouda *, Hb Grange Blanche *, Hb Groene Hart (Bernalda) *, Hb Hamilton *, Hb Heathrow *, Hb Hekinan *, Hb Iraq-Halabja *, Hb Kosovo *, Hb La Desirade *, Hb Le Lamentin *, Hb Le Lamentin 2 *, Hb Linköping (Meilahti) *, Hb Lisbon *, Hb Little Rock *, Hb Lulu Island *, Hb Lyon-Bron *, Hb M-Boston (M-Osaka) *, Hb M-Saskatoon (main peak) *, Hb McKees Rocks *, Hb Malmö *, Hb Marseille (Long Island) *, Hb Milledgeville *, Hb Minneapolis Laos *, Hb Mizuho *, Hb Mosella *, Hb Noko *, Hb Okayama *, Hb Owari *, Hb Ozieri *, Hb Perth (Abraham Lincoln) *, Hb Potomac *, Hb Puttelange *, Hb Raleigh *, Hb Ravenscourt Park *, Hb Regina *, Hb Rhode Island (Southwark) *, Hb Riccarton *, Hb Rouen (Ethiopia) *, Hb Saclay *, Hb St Joseph's *, Hb San Diego *, Hb Santa Juana (Serres) *, Hb Savannah *, Hb Sydney *, Hb Taybe *, Hb Templeuve *, Hb Toulon *, Hb Twin Peaks *, Hb Ty Gard *, Hb Valletta *, Hb Verona *, Hb Villejuif *, Hb Villeparisis *, Hb Volga (Drenthe) *, Hb Westmead *, Hb Wood *, Hb Yaounde (Mataro) *, Hb Zoetermeer *, Hb M-Milwaukee-I *, Hb Melusine *, Hb Pitie-Salpetriere *, Hb Syracuse *, Hb Hounslow, Hb Fort Dodge, Hb Old Dominion (OD/BuT), Hb Camperdown, Hb Duarte, Hb Jura (Bamako) Hb Créteil, Hb Nouakchott, Hb Wayne (pic 1), Hb M-Iwate (M-Kankakee), Hb Camden (Tokuchi), Hb Hope

Hb Créteil, Hb Nouakchott, Hb Wayne (peak 1), Hb M-Iwate (M-Kankakee), Hb Camden (Tokuchi), Hb Hope

Hb A dégradée, Hb Vaasa, Hb Tacoma, Hb Providence (pic X-Asn), Hb Shepherds Bush, Hb Cook, Hb Corsica, Hb Pisa, Hb K-Woolwich, Hb Lombard, Hb J-Guantanamo, Hb Andrew Minneapolis, Hb J-Cape Town (alpha 1), Hb Kaohsiung (New York), Hb Fannin-Lubbock I, Hb Saint Claude, Hb Thionville, Hb Jackson (alpha 2), Hb J-Cape Town (alpha 2), Hb Strasbourg, Hb Osler (Fort Gordon), Hb Pierre-Bénite, Hb J-Auckland, Hb Nancy, Hb Himeji, Hb Singapore, Hb Jackson (alpha 1), Hb Tatras, variant de Hb A2 "I (I-Texas)"

Denatured Hb A, Hb Vaasa, Hb Tacoma, Hb Providence (X-Asn peak), Hb Shepherds Bush, Hb Cook, Hb Corsica, Hb Pisa, Hb K-Woolwich, Hb Lombard, Hb J-Guantanamo, Hb Andrew Minneapolis, Hb J-Cape Town (alpha 1), Hb Kaohsiung (New York), Hb Fannin-Lubbock I, Hb Saint Claude, Hb Thionville, Hb Jackson (alpha 2), Hb J-Cape Town (alpha 2), Hb Strasbourg, Hb Osler (Fort Gordon), Hb Pierre-Bénite, Hb J-Auckland, Hb Nancy, Hb Himeji, Hb Singapore, Hb Jackson (alpha 1), Hb Tatras, "I (I-Texas)" Hb A2 variant

Hb Bart, Hb Nikaia, Hb Cemenelum, Hb Tokoname, Hb J-Cubujuqui, Hb Wayne (pic 2), Hb Hopkins-II (alpha 1), Hb J-Calabria (J-Bari), Hb J-Camagüey, Hb J-Tongariki, Hb J-Meerut (J-Birmingham - alpha 1), Hb Hopkins-II (alpha 2), Hb Zaïre, Hb J-Meerut (J-Birmingham - alpha 2), Hb Trollhättan, Hb Pyrgos (Mizunami), Hb Providence (pic X-Asp), Hb Suresnes, Hb J-Broussais (Tagawa-I alpha 2), Hb Grady (Dakar - alpha 2), Hb Grady (Dakar - alpha 1), Hb Hikari, Hb J-Rajappen, Hb J-Anatolia, Hb J-Broussais (TagawaI - alpha 1), Hb J-Chicago, Hb J-Sardegna, Hb J-Cordoba, Hb J-Toronto, Hb J-Oxford (I-Interlaken), Hb J-Meinung (J-Bangkok), Hb Ube-2, Hb Hofu, Hb J-Cambridge (Rambam), Hb J-Abidjan, Hb Ulm, Hb J-Iran, Hb Riyadh (Karatsu), Hb Mexico (J-Paris-II alpha 2), Hb Neuilly-sur-Marne, Hb Pontoise (J-Pontoise), Hb Ankara, Hb Mexico (J-Paris-II - alpha 1), Hb J-Paris-I (J-Aljezur alpha 1), Hb Thailand, Hb J-Habana, Hb J-Baltimore (N-New Haven), Hb J-Wenchang-Wuming, Hb J-Paris-I (J-Aljezur - alpha 2), Hb K-Ibadan Hb Bart, Hb Nikaia, Hb Cemenelum, Hb Tokoname, Hb J-Cubujuqui, Hb Wayne (peak 2), Hb Hopkins-II (alpha 1), Hb J-Calabria (J-Bari), Hb J-Camagüey, Hb J-Tongariki, Hb J-Meerut (J-Birmingham - alpha 1), Hb Hopkins-II (alpha 2), Hb Zaïre, Hb J-Meerut (J-Birmingham - alpha 2), Hb Trollhättan, Hb Pyrgos (Mizunami), Hb Providence (X-Asp peak), Hb Suresnes, Hb J-Broussais (Tagawa-I - alpha 2), Hb Grady (Dakar - alpha 2), Hb Grady (Dakar - alpha 1), Hb Hikari, Hb J-Rajappen, Hb J-Anatolia, Hb J-Broussais (Tagawa-I - alpha 1), Hb J-Chicago, Hb J-Sardegna, Hb J-Cordoba, Hb J-Toronto, Hb J-Oxford (I-Interlaken), Hb J-Meinung (J-Bangkok), Hb Ube-2, Hb Hofu, Hb J-Cambridge (Rambam), Hb J-Abidjan, Hb Ulm, Hb J-Iran, Hb Riyadh (Karatsu), Hb Mexico (J-Paris-II - alpha 2), Hb Neuilly-sur-Marne, Hb Pontoise (J-Pontoise), Hb Ankara, Hb Mexico (J-Paris-II - alpha 1), Hb J-Paris-I (J-Aljezur - alpha 1), Hb Thailand, Hb J-Habana, Hb J-Baltimore (N-New Haven), Hb J-Wenchang-Wuming, Hb J-Paris-I (J-Aljezur - alpha 2), Hb K-Ibadan - 1063 -

CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) : Zone Z13 Z14 Z15

TABLEAU / TABLE




Hb J-Europa, Hb N-Baltimore (Hopkins-I), Hb J-Rovigo, Hb Arta (pic mineur), Hb J-Norfolk (Kagoshima), Hb J-Kaohsiung (J-Honolulu)

Hb J-Europa, Hb N-Baltimore (Hopkins-I), Hb J-Rovigo, Hb Arta (minor peak), Hb J-Norfolk (Kagoshima), Hb J-Kaohsiung (J-Honolulu) Hb N-Seattle Hb N-Seattle

Hb H, Hb I-Toulouse, Hb Sudbury, Hb Kurosaki (alpha 1), Poly A (A->G); AATAAA->AATAAG of the alpha2 gene alpha-Thal-2, Hb Kurosaki (alpha 2), Hb F-Emirates, Hb N-Timone, Hb I (I-Texas, I-Philadelphia), Hb Shaare Zedek

Hb H, Hb I-Toulouse, Hb Sudbury, Hb Kurosaki (alpha 1), Poly A (A->G); AATAAA->AATAAG of the alpha2 gene alpha-Thal-2, Hb Kurosaki (alpha 2), Hb F-Emirates, Hb N-Timone, Hb I (I-Texas, I-Philadelphia), Hb Shaare Zedek

* Pic non visible / Hidden peak

- 1064 -


SCHÉMAS / FIGURES

CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 2

Figure 1

Z15

Z14 Z13

Z12

Z11 Z10 Z9

Hb A

Z8

Z7

Z6 Z5 Z4

Z3 Z2

Z15

Z1

Z14 Z13

Z12

Z11 Z10 Z9

Hb A

Z8

Z7

Z6 Z5 Z4

Z1

Hb A2

Hb A2

Sang bêta-thalassémique Blood sample with beta-thalassemia

Sang normal Normal blood sample

Figure 4

Figure 3

Z15

Z3 Z2

Z14 Z13

Z12

Z11 Z10 Z9

Hb A

Z8

Z7

Z6 Z5 Z4

Z3 Z2

Z15

Z1

Hb C

Hb A2

Sang avec variant Hb C Blood sample with Hb C variant

Z14 Z13

Z12

Z11 Z10 Z9

Hb A

Z8

Z7

Z6 Z5 Z4

Hb S

Hb F

Sang avec variant hétérozygote Hb S Blood sample with Hb S heterozygote variant

- 1065 -

Z3 Z2

Hb A2

Z1


SCHÉMAS / FIGURES


Figure 5

Z15

Z14 Z13

Z12

Z11 Z10 Z9

Z8

Z7

Hb F

Z6 Z5 Z4

Z3 Z2

Z15

Z1

Z14 Z13

Z12

Hb A

Z8

Z7

Hb F

Z6 Z5 Z4

Z3 Z2

Z1

Hb A

Hb Bart's

Hb A2

Sang de bébé avec Hb Bart's Baby blood sample with Hb Bart's

Sang de bébé (agé de 3 semaines) Baby blood sample (3 weeks old)

Figure 8

Figure 7

Z15

Z11 Z10 Z9

Z14 Z13

Z12

Z11 Z10 Z9

Hb A

Z8

Z7

Z6 Z5 Z4

Z3 Z2

Z15

Z1

Z14 Z13

Z12

Z11 Z10 Z9

Hb A

Z8

Z7

Z6 Z5 Z4

Z3 Z2

Hb F

Hb A2

Sang avec Hb F (jeune enfant) Blood sample with Hb F (young child)

Hb H

Sang avec Hb H Blood sample with Hb H

- 1066 -

Hb A2

Z1


SCHÉMAS / FIGURES


Figure 9

Z15

Z14 Z13

Z12

Z11 Z10 Z9

Hb A

Z8

Z7

Z6 Z5 Z4

Z3 Z2

Hb D-Punjab

Z15

Z1

Z14 Z13

Z12

Z11 Z10 Z9

Hb A

Z8

Z7

Z6 Z5 Z4

Hb A2

Z3 Z2

Hb A2

Z1

Hb delta A'2

Sang avec variant delta Hb A'2 Blood sample with delta Hb A'2 variant

Sang avec variant Hb D-Punjab Blood sample with Hb D-Punjab variant

Figure 12

Figure 11

Hb C

Hb E Hb S

Hb F

Hb A2

Sang avec variant homozygote Hb E et fraction Hb F élevée Blood sample with homozygote Hb E variant and elevated Hb F

Hb F

Hb A2

Sang avec variants hétérozygotes Hb S et Hb C Blood sample with Hb S & Hb C heterozygote variants

- 1067 -


SCHÉMAS / FIGURES

CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E) PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS

Figure 13

Figure 14 Z15

Hb S

Hb F

Z12

Z11 Z10 Z9

Hb A

Z8

Z7

Hb A2

Z6 Z5 Z4

Hb Lepore

Hb F

Z11 Z10 Z9

Hb A dégradée degradated

Z8

Z7

Z6 Z5 Z4

Z3 Z2

Z1

Z3 Z2

Hb F

Hb A2

Sang avec Hb A dégradée (Hb A3) et Hb F faible Blood sample with degradated Hb A (Hb A3) and faint Hb F

Figure 15

Z14 Z13

Z12

Hb A

Sang avec variant homozygote Hb S (et Hb F) Blood sample with Hb S homozygote variant (and Hb F)

Z15

Z14 Z13

Z1

Hb A2

Sang avec variant Hb Lepore Bood sample with Hb Lepo re variant

- 1068 -

10

Recommend Documents