Tobramycinum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.2- 1
01/2008:0645 javított 6.2
TOBRAMYCINUM Tobramicin
C18H37N5O9 [32986-56-4]
Mr 467,5
DEFINÍCIÓ 4-O-(3-Amino-3-dezoxi-α-D-glükopiranozil)-6-O-(2,6-diamino-2,3,6-tridezoxi-αD-ribo-hexopiranozil)-2-dezoxi-L-sztreptamin. Az anyagot a Streptomyces tenebrarius termeli, illetve más módon is előállítható. Tartalom: 97,0–102,0% (vízmentes anyagra). ELŐÁLLÍTÁS Előállítására olyan eljárást alkalmaznak, amely kiküszöböli vagy minimálisra csökkenti vérnyomáscsökkentö anyagok jelenlétét. SAJÁTSÁGOK Küllem: fehér vagy csaknem fehér por.
Tobramycinum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.2- 2
Oldékonyság: vízben bőségesen oldódik; etanolban (96%) alig oldódik. AZONOSÍTÁS Első azonosítás: A. Második azonosítás: B, C. A. Mágneses magrezonancia spektrometria (2.2.33). Mintakészítés: R deutérium-oxiddal készült 100 g/l töménységű oldat. Összehasonlítás: CRS tobramicin R deutérium-oxiddal készült, 100 g/l töménységű oldatával. B. Vékonyréteg-kromatográfia (2.2.27). Vizsgálati oldat. 20 mg vizsgálandó anyagot R vízzel 5 ml-re oldunk. Összehasonlító oldat (a). 20 mg CRS tobramicint R vízzel 5 ml-re oldunk. Összehasonlító oldat (b). 4 mg CRS neomicin-szulfátot és 4 mg CRS kanamicin-monoszulfátot 1 ml a) összehasonlító oldatban oldunk. Lemez: R VRK szilikagél lemez. Kifejlesztőszer: R diklórmetán – R tömény ammónia–oldat – R metanol (17+33+50 V/V). Felvitel: 5 µl. Kifejlesztés: a lemezmagasság kétharmadáig. Szárítás: meleg levegőáramban. Előhívás: a lemezt R 1,3-dihidroxinaftalin R etanollal (96%) készült 2 g/l töménységű oldatának és R tömény kénsav 460 g/l töménységű oldatának egyenlő térfogatarányú elegyével bepermetezzük, majd 105 °C-on 5–10 percig melegítjük. Rendszeralkalmasság: a b) összehasonlító oldat kromatogramján három nagyobb, egymástól jól elkülönülő folt látható. Értékelés: a vizsgálati oldat kromatogramjának főfoltja – helyét, színét és méretét tekintve – egyezzék meg az a) összehasonlító oldat kromatogramján látható főfolttal. C. Kb. 5 mg anyagot 5 ml R vízben oldunk. Az oldathoz R ninhidrin R etanollal (96%) készült 1 g/l töménységű oldatának 5 ml-ét elegyítjük. A vízfürdőn 3 percig melegített elegy ibolyáskékre színeződik.
Tobramycinum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.2- 3
VIZSGÁLATOK pH (2.2.3): 9,0–11,0. A vizsgálathoz 1,0 g anyagot 10 ml R szén-dioxid-mentes vízben oldunk. Fajlagos optikai forgatóképesség (2.2.7): +138 és +148 között (vízmentes anyagra). A vizsgálathoz 1,00 g anyagot R vízzel 25,0 ml-re oldunk. Rokon vegyületek. Folyadékkromatográfia (2.2.29). Vizsgálati oldat (a). 25,0 mg vizsgálandó anyagot a mozgófázissal 25,0 ml-re oldunk. Vizsgálati oldat (b). Az a) vizsgálati oldat 10,0 ml-ét a mozgófázissal 100,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (a). 25,0 mg CRS tobramicint a mozgófázissal 100,0 ml-re oldunk. Összehasonlító oldat (b). Az a) összehasonlító oldat 1,0 ml-ét a mozgófázissal 100,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (c). Az a) összehasonlító oldat 1,0 ml-ét a mozgófázissal 50,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (d). 10,0 mg CRS kanamicin-B-szulfátot a mozgófázis 20,0 ml-ében oldunk. Az oldat 1,0 ml-éhez az a) összehasonlító oldat 2,0 ml-ét elegyítjük és az oldatot a mozgófázissal 10,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (e). Az a) összehasonlító oldat 10,0 ml-ét a mozgófázissal 25,0 ml-re hígítjuk. Oszlop: −
méretei: l = 0,25 m, Ø= 4,6 mm,
−
állófázis: 100 nm pórusméretű R sztirol–divinilbenzol-kopolimer (8 µm),
−
hőmérséklet: 55 °C.
Mozgófázis: R szén-dioxid-mentes vízzel készített, literenként 52 g R vízmentes nátrium-szulfátot, 1,5 g R nátrium-oktánszulfonátot, 3 ml, R butil-hidroxitoluollal stabilizált R tetrahidrofuránt és 50 ml, előzetesen R hígított foszforsavval pH 3,0-re beállított R 0,2 M kálium-dihidrogén-foszfát–oldatot tartalmazó elegy. Az elegyet gázmentesítjük. Áramlási sebesség: 1,0 ml/ perc.
Tobramycinum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.2- 4
Elúció utáni oldat: R karbonátmentes nátrium-hidroxid–oldatot R szén-dioxidmentes vízzel 1:25 arányban hígítunk. A hígított oldatot – 375 µl térfogatú polimer elegyítőspirált alkalmazva – pulzálásmentesen az oszlopot elhagyó folyadékhoz adjuk. Áramlási sebesség: 0,3 ml/perc. Detektálás: arany indikátorelektródból, ezüst/ezüstklorid összehasonlító elektródból és a detektor cellafalát is képező rozsdamentes acél segédelektródból álló pulzáló amperometriás – vagy azzal egyenértékű – detektor. Az alkalmazott potenciálprogram: +0,05 V mérő, +0,75 V oxidációs és –0,15 V redukciós potenciál; az alkalmazott műszernek megfelelő pulzus-időtartamot használunk. A detektor hőmérsékletét 35 °C-ra állítjuk be. Megjegyzés: a sókicsapódás problémája megelőzhető, ha az elektrokémiai cellát egy éjszakán át R vízzel mossuk. Injektálás: 20 µl. 4–8 °C-ra lehűtött injektort alkalmazunk. Az a) vizsgálati oldatot, valamint a b), a c) és a d) összehasonlító oldatot injektáljuk. Kromatografálási idő: a tobramicin retenciós idejének másfélszerese. Relatív retenció a tobramicinre (retenciós ideje kb. 18 perc) vonatkoztatva: Cszennyező kb. 0,35; B-szennyező kb. 0,40; A-szennyező kb. 0,70. Rendszeralkalmasság: −
csúcsfelbontás: legalább 3,0, az A-szennyező és a tobramicin között, a d) összehasonlító oldat kromatogramján. Szükség esetén módosítjuk a mozgófázis nátrium-oktánszulfonát-koncentrációját;
−
jel/zaj viszony: legalább 10, a b) összehasonlító oldat kromatogramján látható főcsúcsra vonatkozóan.
Követelmények: −
szennyezők egyenként: csúcsterületük nem lehet nagyobb, mint a c) összehasonlító oldat kromatogramján látható főcsúcs területének kétszerese (1,0%); legfeljebb egy ilyen csúcs területe lehet nagyobb, mint a c) összehasonlító oldat kromatogramján látható főcsúcs területe (0,5%),
−
szennyezők összesen: csúcsterületük összege nem lehet nagyobb, mint a c) összehasonlító oldat kromatogramján látható főcsúcs területének háromszorosa (1,5%),
−
elhanyagolási határ: a főcsúcs területe, a b) összehasonlító oldat kromatogramján (0,25%).
Izobutil-alkohol (2.4.24, B-rendszer): legfeljebb 1,0 %m/m.
Tobramycinum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.2- 5
Víztartalom (2.5.12): legfeljebb 8,0%. Az anyag 0,30 g-ját vizsgáljuk. Szulfáthamu (2.4.14): legfeljebb 0,3%. Az anyag 1,0 g-ját vizsgáljuk. Bakteriális endotoxinok (2.6.14): kevesebb, mint 2,0 NE/mg. A parenterális gyógyszerkészítmények előállítására szánt anyag – abban az esetben, ha a készítmény előállítása során nem alkalmaznak a bakteriális endotoxinok eltávolítására alkalmas eljárást – feleljen meg e vizsgálat követelményének is. TARTALMI MEGHATÁROZÁS Folyadékkromatográfia (2.2.29), a „Rokon vegyületek” vizsgálatban előírtak szerint, a következő módosításokkal. Injektálás: b) vizsgálati oldat és e) összehasonlító oldat. Kiszámítjuk az anyag százalékos tobramicin tartalmát. ELTARTÁS Ha az anyag steril, úgy steril, légmentesen záró, garanciazáras tartályban. SZENNYEZŐK
A. 4-O-(3-amino-3-dezoxi-α-D-glükopiranozil)-6-O-(2,6-diamino-2,6-didezoxi-αD-glükopiranozil)-2-dezoxi-L-sztreptamin (kanamicin B),
Tobramycinum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.2- 6
B. R = H: 4-O-(2,6-diamino-2,3,6-tridezoxi-α-D-ribo-hexopiranozil)-D-2-dezoxisztreptamin (nebramin), C. R = OH: 4-O-(2,6-diamino-2,6-didezoxi-α-D-glükopiranozil)-2-dezoxi-Dsztreptamin (neamin).
