SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS

SEMMELWEIS EGYETEM Orvosi Biokémiai Intézet 1094 Budapest, Tűzoltó u. 37-47.

SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS

Koleszterin és triglicerid meghatározás című gyakorlat előkészítése

Készítette: 2009.02.24. Dr. Léránt István adjunktus Jóváhagyta:

Dr. Kolev Kraszimir tanulmányi felelős

Dátum

Dr. Kolev Kraszimir minőségirányítási vezető

Nyilvántartott példány:

01

Változat száma:

2009.02.24.

Érvénybelépés időpontja:

2009.02.24.

Dátum

Oldalak száma:

6

Mellékletek száma:

0

2009.02.24.

MIR szempontból ellenőrizte:

A dokumentáció SE-OBI-OKT-MUkódja: 08

Dátum

Munkapéldány:

A példány sorszáma:

Ezen Szabványműveleti előírás a Semmelweis Egyetem szellemi tulajdona. Továbbadása, sokszorosítása írásos engedélyhez kötött. A Munkautasításban szereplő információt csak a minőség- és környezetirányítási rendszer működtetéséhez lehet felhasználni.

SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS Koleszterin és triglicerid meghatározás

MÓDOSÍTÁSOK JEGYZÉKE Módosította Dátum/Aláírás

Módosított oldalszám

A dokumentum kódja: SE-OBI-OKT-MU-08 Érvénybelépés időpontja: 2009.02.24.

Jóváhagyta Dátum/Aláírás

Ellenőrizte Dátum/Aláírás

Kibocsátás időpontja

Oldal:2/6 Verziószám:01


TARTALOMJEGYZÉK A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS CÉLJA .............................................................................................................. 4 A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS ÉRVÉNYESÉGI TERÜLETE ....................................................................... 4 ILLETÉKESÉG ÉS FELELŐSSÉG MEGHATÁROZÁSA .......................................................................................... 4 A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS LEÍRÁSA.......................................................................................................... 4




A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS CÉLJA Összefoglalja a rutinszerűen alkalmazott technológiai eljárás részleteit. A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS ÉRVÉNYESÉGI TERÜLETE Orvosi Biokémiai Intézet oktatási előkészítő laboratóriuma. ILLETÉKESÉG ÉS FELELŐSSÉG MEGHATÁROZÁSA

A dokumentum kidolgozásáért felelős: Tanulmányi felelős A dokumentum alkalmazásáért felelős: Vezető laborasszisztens A dokumentumban foglaltak végrehajtásáért felelős: Beosztott laborasszisztensek. A dokumentumban szabályozott tevékenység rendszer felülvizsgálat alkalmával történő felülvizsgálatáért felelős: A Minőségirányítási vezető A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS LEÍRÁSA Össz-koleszterin, HDL-koleszterin és szérum-triglicerid szint meghatározása 1. Oldatok készítése: 1.1. Összkoleszterin mérés – Diagnosticum Zrt. 1.1.1. Reagens (R1) PIPES puffer pH 6,9 90 mmól/l, fenol 26 mmól/l 1.1.2. Reagens (R2) koleszterin-oxidáz 300 E/ml, koleszterin-észteráz 300 E/ml peroxidáz 1250 E/ml, 4-aminoantipirin 0,4 mmól/l 1.1.3. Reagens (R3) standard: A standard pontos koncentráció értékét a kiszállított reagens címkéjén lehet leolvasni 1.1.4. A koleszterin-munkareagens elkészítése: 1 ampulla R2-es reagenst a mindenkori szállítmány leírásában szereplő mennyiségű R1-es jelű pufferben (reagensben) oldva A dokumentum kódja: SE-OBI-OKT-MU-08 Érvénybelépés időpontja: 2009.02.24.


SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS Koleszterin és triglicerid meghatározás A reagenseket fénymentes helyen 2-8 oC-on kell tárolni, felbontás nélkül a reagens a címkén jelzett időpontig használható fel, felbontás után a puffer 60 napig, a standard 30 napig használható. Az elkészített munka-reagens stabilitása 14 nap 20-25 oC-on, illetve 30 nap 2-8 oC-on. Amennyiben a munka-reangens 492 nm-en mért fényelnyelése meghaladja a 0,1 értéket, a munka-reagenst nem használhatjuk fel mérésekre. 1.2. HDL-koleszterin mérés – Diagnosticum Rt 1.2.1. 1. Reagens (R1) Kicsapó reagens: 14 mmól/l foszfowolfrámsav, magnézium-klorid 2 mmól/l 1.2.2. 2. Reanges (R2) Standard HDL-koleszterin oldat 1,3 mmól/l (0,5 g/l) Az R1-es reagens felhasználásra kész. A koleszterin reagens elkészítésére, stabilitására az összkoleszterin meghatározásnál leírt adatok a mérvadóak. 1.3. Szérum triglicerid koncentrációjának meghatározása 1.3.1. 1. Reagens (R1) PIPES puffer pH 7,2 50 mmól/l, p-klórfenol 2 mmól/l 1.3.2. 2. Reagens (R2) lipoprotein-lipáz 150000 E/l, glicerin-kináz 800 E/l, glicerin-3Poxidáz 3000 E/l, peroxidáz 400 E/l, 4-aminoantipirin 0,7 mmól/l, ATP 0,3 mmól/l 1.3.3. 3. Reagens (R3) standard 2.28 mmól/l (2 g/l) 1.3.4. A munkareagens elkészítése: 1 ampulla R2-es reagenst a mindenkor szállított reagens leírásában szereplő mennyiségű R1-es jelű pufferben (reagensben) oldva A reagenseket fénymentes helyen 2-8 oC-on kell tárolni, felbontás nélkül a por és a puffer a címkén jelzett időpontig használható fel, felbontás után a puffer 60 napig, míg a standard a reagens-leírásban jelzett időpontig használható fel. Az elkészített munka-reagens stabilitása 7 nap 20-25 oC-on, illetve 28 nap 2-8 oC-on. Amennyiben a munka-reagens 492 nm-en mért fényelnyelése meghaladja a 0,1 értéket, a munka-reagenst nem használhatjuk fel mérésekre. 1.4. Normál és patológiás szérum minta (Diagnosticum Zrt.) A megvásárolt egységcsomagtól függő adag oldható fel: a normál szérum 6 ml desztillált vízben, a patológiás szérum 5 ml desztillált vízben 2. Bekészített anyagok, eszközök termenként. Fotométer, centrifuga, 3 darab szűkített műanyag küvetta, spriccflaska, automata pipetták, pipetta-hegyek, főzőpoharak, papírvatta,. Eppendorf-csövek, üvegcsövek, 37 oC-os vízfürdő, üvegre-író alkoholos tollak, egyéni védőfelszerelés (köpeny) 25 ml-es Erlenmeyer-lombikba 20 ml koleszterin reagens 25 ml-es Erlenmeyer-lombikba 10 ml szérum-triglicerid reagens Műanyag csőben, jegelve 250 l kicsapó reagens Műanyag csőben, jegelve 1,0 ml normál szérum minta Műanyag csőben, jegelve 1,0 ml patológiás szérum minta Műanyag csőben, jegelve 100 l össz-koleszterin standard oldat (R3 reagens oldat, lásd 1.1.3) Műanyag csőben, jegelve 100 l HDL-koleszterin standard oldat (R2 reagens oldat, lásd 1.2.2) Műanyag csőben, jegelve 100 l triglicerid standard oldat (R3 reagens oldat, lásd 1.3.3) 3. Mérési módszer A dokumentum kódja: SE-OBI-OKT-MU-08 Érvénybelépés időpontja: 2009.02.24.


SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS Koleszterin és triglicerid meghatározás 3.1. A lipoprotein frakciók elválasztása: 500 l normál / 500 l patológiás szérumot 50 – 50 l kicsapó reagenssel ([R1] HDL-koleszterin mérés) keverünk össze és 10 perc 20 oC-on végzett inkubációt követően 4.000*g-n 20 percig tartó centrifugálást követően a kinyert felülúszót használjuk fel HDL-koleszterin mérésre. 3.2. Össz-koleszterin koncentráció meghatározása: 20 l desztillált vizet, 20 l összkoleszterin standardot (Reagens [R3]), 20 l normál és 20 l patológiás szérumot 1-1 ml koleszterin-reagenssel inkubálunk 5 percen át 37 oC-on majd a mintákat 505 nanométer hullámhosszon fotometráljuk. 3.3. A HDL-koleszterin koncentráció meghatározása: 20 l desztillált vizet, 20 l HDLkoleszterin standardot (HDL-reagens [R2]), 20 l normál és 20 l patológiás (a 3.1 alatt leírt módon nyert) felülúszót 1-1 ml koleszterin-reagenssel inkubálunk 5 percen át 37 oC-on majd a mintákat 505 nanométer hullámhosszon fotometráljuk. 3.4. Szérum-triglicerid koncentráció meghatározása: 20 l desztillált vizet, 20 l triglicerid standardot (Szérum-triglicerid reagens [R3]), 20 l normál és 20 l patológiás szérumot 1-1 ml koleszterin-reagenssel inkubálunk 5 percen át 37 oC-on majd a mintákat 505 nanométer hullámhosszon fotometráljuk. A mérési elv, az oldatok összetétele nem, viszont a 3.1, 3.2, 3.3, és a 3.4 pontban leírt bemérési térfogatok változhatnak az egyes szállítmányoknál. Minden esetben a szállító cég minőségi bizonyítványa az irányadó a bemérések vonatkozásában. Egy-pontos kalibrációs módszer segítségével számíthatjuk ki a vizsgált minták össz-koleszterin, HDL-koleszterin és triglicerid koncentrációját mmól/l-ben vagy mg/ml-ben. Az egyes minták LDLkoleszterin tartalmát a William Friedewald féle egyenlet segítségével számítjuk ki a már meghatározott össz-, HDL-koleszterin és szérum-triglicerid értékekből.



SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS

Recommend Documents