SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS

SEMMELWEIS EGYETEM Orvosi Biokémiai Intézet 1094 Budapest, Tűzoltó u. 37-47.

SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS

A mikroszomális drogmetabolizmus vizsgálata

Készítette: 2009.02.04. Dr. Komorowicz Erzsébet adjunktus Jóváhagyta:

Dr. Kolev Kraszimir tanulmányi felelős MIR szempontból ellenőrizte:

Dátum

Nyilvántartott példány:

01

Változat száma:

2009.02.04.

Érvénybelépés időpontja:

2009.02.04.

Dátum

Oldalak száma:

6

Mellékletek száma:

0

2009.02.04.

Dr. Kolev Kraszimir minőségirányítási vezető

A dokumentáció SE-OBI-OKT-MUkódja: 05

Dátum

Munkapéldány:

A példány sorszáma:

Ezen Szabványműveleti előírás a Semmelweis Egyetem szellemi tulajdona. Továbbadása, sokszorosítása írásos engedélyhez kötött. A Munkautasításban szereplő információt csak a minőség- és környezetirányítási rendszer működtetéséhez lehet felhasználni.

SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS A mikroszomális drogmetabolizmus vizsgálata

MÓDOSÍTÁSOK JEGYZÉKE Módosította Dátum/Aláírás

Módosított oldalszám

A dokumentum kódja: SE-OBI-OKT-MU-05 Érvénybelépés időpontja: 2009.02.04.

Jóváhagyta Dátum/Aláírás

Ellenőrizte Dátum/Aláírás

Kibocsátás időpontja

Oldal:2/6 Verziószám:01


TARTALOMJEGYZÉK A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS CÉLJA .............................................................................................................. 4 A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS ÉRVÉNYESÉGI TERÜLETE ....................................................................... 4 ILLETÉKESÉG ÉS FELELŐSSÉG MEGHATÁROZÁSA .......................................................................................... 4 A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS LEÍRÁSA.......................................................................................................... 4




A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS CÉLJA Összefoglalja a rutinszerűen alkalmazott technológiai eljárás részleteit. A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS ÉRVÉNYESÉGI TERÜLETE Orvosi Biokémiai Intézet oktatási előkészítő laboratóriuma. ILLETÉKESÉG ÉS FELELŐSSÉG MEGHATÁROZÁSA

A dokumentum kidolgozásáért felelős: Tanulmányi felelős A dokumentum alkalmazásáért felelős: Vezető laborasszisztens A dokumentumban foglaltak végrehajtásáért felelős: Beosztott laborasszisztensek. A dokumentumban szabályozott tevékenység rendszer felülvizsgálat alkalmával történő felülvizsgálatáért felelős: A Minőségirányítási vezető A SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS LEÍRÁSA Szükséges oldatok: 1, 500 ml 1.5 M káliumfoszfát puffer, mely készül 400 ml 1.5 M K2HPO4 (105 gr/ 400 ml deszt.víz) és 100 ml 1.5 M KH2PO4 (20.5 gr/ 100 ml deszt.víz) összekeverésével pH 7.6 érték beállításával. Ebből a törzsoldatból deszt. vizes higítással az alábbi pufferek készülnek: 1.a, patkány máj posztmitokondriális frakció preparálásához 0.15 M káliumfoszfát puffer, 2 X 1 l 1.b, további oldatkészítéshez 2 l 0.05 M káliumfoszfát puffer 1.c, hallgatói laborba bekészítéshez 2 X 1.5 l 0.05 M káliumfoszfát puffer 2, 3 l 0.2 %-os fenobarbitál oldat a patkányok itatásához 3, 200 ml 0.1 M amidazophen az 1.b. pufferban beoldva, napi adagokban fagyasztva tárolva 4, „2 X MIX” oldat: - 2 l 1.b. pufferhoz adunk 10 mM glukóz-6-foszfát-Na sót, és 20 mM MgCl2-t, ez az oldat 1 hétig eltartható a hűtőszekrényben A dokumentum kódja: SE-OBI-OKT-MU-05 Érvénybelépés időpontja: 2009.02.04.


SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS A mikroszomális drogmetabolizmus vizsgálata - minden reggel a kivett napi mennyiséghez hozzáadunk 1 mM NADP-t, így elkészül az aznapi szobahőn tárolható „2 X MIX” oldat 5, 600 ml 40 % triklórecetsav 6, 1 l 1.32 mM formaldehid 7, NASH reagens: - 900 gr ammóniumacetát, 18 ml cc. ecetsav 6 l deszt. vízben, ez 1 hétig eltartható - minden reggel frissen adjuk hozzá a napi mennyiséghez az acetilacetont: literenként 2 ml-t, így elkészül az aznapi NASH reagens 8, pmf K és pmf I oldatok: kontroll (K) ill. indukált (I) patkány májból preparált posztmitokondriális frakciók (pmf), ezek elkészítése az alábbiak szerint történik: Posztmitokondriális frakció preparálása patkány májból: 10 db 200 gr-os hím patkány alkotja a kontroll csoportot (K), és 15 db az indukált (I) csoportot, az I csoportban a patkányokat 4 napig 0.2 %-os fenobarbitál oldattal itatjuk. A patkányok májából aprítást követően 25 %-os (K) ill. 35 %-os (I) homogenátot állítunk elő az 1.a pufferban, és Janetzky K 26 centrifugában ülepítjük (4 C, 6000 rpm, 35 perc). A kapott felülúszót (pmf K ill. pmf I oldatok) napi adagokra (kb. 30-40 ml) szétosztva, -20 C -on tároljuk felhasználásig. Bekészítés a hallgatói laboratóriumokba, termenként: - 4 üveg 1.c. puffer - 4 üveg 40 %-os triklórecetsav - 1 üveg 1.32 mM formaldehid oldat - 2 X 15 ml „2 X MIX” oldat, Erlenmayer lombikban - 2 X 50 ml NASH reagens, Erlenmayer lombikban - Pohárban jegelve: o 2 X 1.5 ml amidazophen o 2 X 1.5 ml pmf K o 2 X 1.5 ml pmf I - 8 db (4 X 2) 25 ml-es Erlenmayer lombik - kb. 50 db Eppendorf cső, hozzávaló állvánnyal - 4 kémcsőállvány - vortex - 1 doboz „hosszú” kémcső a NASH reakcióhoz - asztali centrifuga beállítása 10 000 rpm 6 perc - vízfürdő bekapcsolva, beállítva 37 C -ra - A NASH reakcióhoz Bunsen-égő, gyufa, hamutartó, fazék, benne kerek állvány kémcsöveknek és egy hőmérő a 60 C beállításához - Fotométereken hullámhossz beállítása 412 nm-re, mellettük 4 db küvetta/ fotométer, spriccflaska deszt.víz - Pipettahegyek: 5ml, 1ml, 200 l méret - Miliméterpapír Gyakorlatok előtt a kosárban: -

4 db 1-5 ml pipetta 4 db 200-1000 l pipetta



SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS A mikroszomális drogmetabolizmus vizsgálata -

1 db 20-200 l pipetta 4 stopper filctoll formaldehid meghatározáshoz kalibrációs görbe papír a jegyzethez képest történő esetleges változtatásokról



SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS

Recommend Documents