SZABADALMI ÉS SZERZŐI JOGI DOKUMENTÁCIÓ
KIVONAT
Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonatok és az ezekből vagy ezekben található hatóanyagokból készült oldatok, infúziós oldatok, injekciók, tabletták, szirupok és egyéb gyógyszerformák alkalmazása rosszindulatú daganatsejt kultúrák in vitro gátlására és rosszindulatú daganatos betegségek kezelésére A Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonatok rosszindulatú daganatsejt kultúrákon in vitro gátló hatást fejtenek ki. A rosszindulatú elfajulások létrejöttében oki szerepe lehet a sejtek meghibásodott működésű mitokondriumainak és a bejelentés tárgyát képező anyagok ezen meghibásodott működésű mitokondriumok gátlása révén fejthetik ki daganatellenes hatásukat, amit a bejelentéshez mellékletként csatolt, „A rák mitokondriális elmélete” című dokumentáció elméleti részében részleteznek. Bejelentők említett tanulmányunkban így felvázolják egy nyolcadik, az antimitochondrialis tumortherapiás target bevezetésének lehetőségét a tumortherapiába, mely szerint az antitumoralis chemotherapia az antimitochondrialis szerek tekintetében a következő 3 elvet követné: ezen szerek 1. nem tumorspecifikusak, 2. nem gazdasejtspecifikusak, 3. mitochondrialis primitív expresszió inhibíció specifikusak, és ez kiegészülhetne egy negyedik elvvel is: 4. kevéssé toxikusak az egészséges gazdasejtre nézve.
Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonatok és az ezekből vagy ezekben található hatóanyagokból készült oldatok, infúziós oldatok, injekciók, tabletták, szirupok és egyéb gyógyszerformák alkalmazása rosszindulatú daganatsejt kultúrák in vitro gátlására és rosszindulatú daganatos betegségek kezelésére
A szabadalom tárgya a Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonatok és az ezekből vagy ezekben található hatóanyagokból készült infúziós oldatok, injekciók, tabletták, szirupok, oldatok és egyéb gyógyszerformák felhasználása rosszindulatú daganatsejt kultúrák in vitro gátlására és rosszindulatú daganatos betegségek kezelésére. A TUDOMÁNY JELENLEGI ÁLLÁSA A tudomány jelenlegi állása szerint a rosszindulatú daganatsejtek gátlására és rosszindulatú daganatos betegségek gyógyszeres kezelésére (a sugárterápián és az alternatív gyógymódokon kívül) a következő lehetőségek adottak: A daganatellenes gyógyszerek osztályozása*: 1.
Kis terápiás indexű (citotoxikus) daganatellenes gyógyszerek 1.1. Nukleotid bioszintézis gátlók - antimetabolitok (5-fluoruracil, methotrexat, citozin-arabinozid, gemcitabin, capecitabin stb.) 1.2. DNS támadási pontú hatóanyagok (alkilezők, platina vegyületek, nitrozoureák, temozolomid, dacarbazin, actinomycin D, bleomycin) 1.3. Topoizomeráz gátlók (irinotecan, etoposid, antraciklinek) 1.4. Mitotikus orsóra hatók (vinca alkaloidok, taxánok, estramustin)
2. Nagy terápiás indexű (citosztatikus) daganatellenes gyógyszerek 2. 1. Jelátviteli mechanizmust módosítók 2.1.1.Sejtfelszíni receptorok gátlása (EGF-R család tirozinkináz gátlói trastuzumab: gefitinib, erlotinib) 2.1.2.Intracelluláris tirozin-kinőz gátlók (imatinib) 2.1.3.Szerin-treonin-kináz gátlók (flavopiridol) 2.2. Proteoszoma és HSP-gátlók (bortezomib, geldanamycin) 2.3. Kromatin működést módosítók (isotretinoin) 2.4. Fehérjeszintézis szabályozást gátlók (asparaginase, rapamycin) 2.5.Egyéb mechanizmus szerint ható citosztatikumok (Celecoxib) 3. Hormonszármazékok 3. 1. Antiandrogének (flutamid)
3. 2. Antiösztrogének (tamoxifen, toremifen) 3 3. Aromatázgátlók (exemestan, letrozol) 3 4. LH-RH vegyületek (goserelin, buserelin, triptorelin) 3. 5. Szomatosztatin származékok (octreotid) 4. Citokinek (interferonok, interleukinek) 5. Neovascularizációt gátló hatóanyagok (endostatin, angiostatin, bevacizumab) 6. Antimetasztatikus gyógyszerek (biszfoszfonátok, marimastat) 7. Egyebek (kemoprotektív modulátorok, vakcinák) (*Forrás: Onkofarmakológia. Szerk. Jeney András, Kralovánszky Judit, Medicina Könyvkiadó, Budapest, 2005.).
A felsorolt gyógyszerek közismerten mind igen sok mellékhatással rendelkeznek és ezért alkalmazásuknak a beteg szervezet tűrőképessége szab határt, ami miatt a rosszindulatú daganatos betegségek gyógyszeres kezelési lehetősége behatárolt és sokszor nem elég hatékony. Ismert, hogy világszerte intenzív kutatások irányulnak arra, hogy olyan gyógyszereket fejlesszenek ki, amelyek kevéssé toxikusak és a terápiás és a toxikus küszöbük közti különbség nagyobb, mint a jelenleg alkalmazott szerek esetén. Jelen találmány bejelentői is ezirányban folytatott kutatómunkájuk során fedezték fel azt, hogy a Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonatok (valamint valószínűleg a Streptococcus sp. bacterialis toxinok is, eddigi előzetes vizsgálati eredményeink szerint) alkalmasak rosszindulatú daganatsejtek in vitro gátlására és emiatt rosszindulatú daganatos betegségek kezelésére történő felhasználására is alkalmasak lehetnek. Jelen találmány bejelentői a bejelentéshez mellékletként csatolják „ A rák mitokondriális elmélete” című dokumentációt, amelynek elméleti részében kifejtik, hogy a daganatellenes gyógyszerek osztályozása eredményeik alapján kiegészülhet egy nyolcadik csoporttal: „8. Mutans mitochondriumok megváltozott anyagcseréjét blokkoló szerek” Említett tanulmányunkban bejelentők felvázolták egy nyolcadik, az antimitochondrialis tumortherapiás target bevezetésének lehetőségét, mely szerint az antitumoralis chemotherapia az antimitochondrialis szerek tekintetében a következő 3 elvet követné:
Az antimitochondrialis szerek: -nem tumorspecifikusak -nem gazdasejtspecifikusak -mitochondrialis primitív expresszió specifikusak Reményeink szerint ez kiegészülhet egy negyedik elvvel is: -kevéssé toxikusak az egészséges gazdasejtre nézve. Találmányunk tehát Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonatok és az ezekből vagy ezekben található hatóanyagokból készült infúziós oldatok, injekciók, tabletták, szirupok, oldatok és egyéb gyógyszerformák alkalmazása rosszindulatú daganatsejt kultúrák in vitro gátlására és rosszindulatú daganatos betegségek kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmények előállítására. PÉLDÁK A csatolt dokumentáció egyes részeinek idézése: Ezen a helyen hivatkozunk a mellékelt dokumentáció, „A rák mitokondriális elmélete” második része, a „Kísérletes rész” fejezeteiben taglaltakra. Ábrák: 1. ábra: SP2, malignus sejtkultúra 2. ábra: SP2, malignus sejtkultúra 3. ábra.: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt 4. ábra: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt 5. ábra: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt 6. ábra: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt 7. ábra: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt 8. ábra: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt 9. ábra: PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete mikroszkópos berendezése 10. ábra: HT 1080 Human fibrosarcoma, malignus sejtkultúra 11. ábra: HT 1080 Human fibrosarcoma, malignus sejtkultúra 12. ábra: HT 1080 Human fibrosarcoma, malignus sejtkultúra 13. ábra: ND-C (Mouse neuroblastoma x Rat neurone hybrid) malignus sejtkultúra 14. ábra: ND-C (Mouse neuroblastoma x Rat neurone hybrid) malignus sejtkultúra 15. ábra: ND-C (Mouse neuroblastoma x Rat neurone hybrid) malignus sejtkultúra
1. ábra Sejtvonal: SP2, malignus sejtkultúra. Eljárás: 10 g Castanea sativa Mill. növényi szárazanyag 100 ml aq. dest.-ban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve, 15 ml kultúrához 0,250 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban 8,2 + 0,02 mg/ml, a kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 2,05 mg a 15 ml-hez, vagyis 136 mikrogramm/ml a kultúrában. Kontroll: 0,250 ml aq. dest. a 15 ml kontrollkultúrához. Hozzáadva 2008. 02. 07. 13:00. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE OEC ÁOK. Leolvasva 2008. 02. 08. 13:00. A kultúra jól szaporodott, él. PTE OEC ÁOK Immunológiai Intézete laboratóriumában szerzők mikroszkópos kamerájával készült felvétel. 2. ábra: Sejtvonal: SP2, malignus sejtkultúra. Eljárás: 10 g Castanea sativa Mill. növényi szárazanyag 100 ml aq. dest.-ban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve, 15 ml kultúrához 0,250 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban 8,2 + 0,02 mg/ml, a kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 2,05 mg a 15 ml-hez, vagyis 136 mikrogramm/ml a kultúrában. Castanea sativa Mill. extractumból 2,05 mg a 15 ml sejtkultúrához adva, vagyis 136 mikrogramm/ml a kultúrában. Leolvasva 2008. 02. 08. 13:00. A kultúra nagyrésze elpusztult, a sejtek degenerálódtak. PTE OEC ÁOK Immunológiai Intézete laboratóriumában szerzők mikroszkópos kamerájával készült felvétel. 3. ábra: Sejtvonal: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt. Nem malignus sejtkultúra. Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonat . Élő sejtkultúra két sorba osztva, egyenként 1 ml. Eljárás: 5 g növényi szárazanyag nagyon finomra porítva, 50 ml 0,9% NaClban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve minden 1,0 ml kultúrához 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban szárazanyag 42,7 + 0,02 mg/1041,5mg oldatban. A kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 8,54 mg – 4,27 mg – 2,135mg – 1,067mg – 533 mikrogramm sorozat az 1ml kultúrához. Kontroll: 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml 0,9% NaCl sorozat az 1 ml kontrollkultúrához. Hozzáadva 2008. 02. 12. 13:00. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE OEC ÁOK. Leolvasva 2008. 02. 13:00. L929 kontroll kultúra, PTE OEC ÁOK Immunológiai Intézete laboratóriumában szerzők mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
4. ábra, sejttenyészet: Sejtvonal: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt. Nem malignus sejtkultúra. Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonat . Élő sejtkultúra két sorba osztva, egyenként 1 ml. Eljárás: 5 g növényi szárazanyag nagyon finomra porítva, 50 ml 0,9% NaClban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve minden 1,0 ml kultúrához 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban szárazanyag 42,7 + 0,02 mg/1041,5mg oldatban. A kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 8,54 mg – 4,27 mg – 2,135mg – 1,067mg – 533 mikrogramm sorozat az 1ml kultúrához. Kontroll: 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml 0,9% NaCl sorozat az 1 ml kontrollkultúrához. Hozzáadva 2008. 02. 12. 13:00. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE OEC ÁOK. Leolvasva 2008. 02. 13:00. Sejttenyészet, L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt 5. ábra: Sejtvonal: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt. Nem malignus sejtkultúra. Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonat . Élő sejtkultúra két sorba osztva, egyenként 1 ml. Eljárás: 5 g növényi szárazanyag nagyon finomra porítva, 50 ml 0,9% NaClban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve minden 1,0 ml kultúrához 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban szárazanyag 42,7 + 0,02 mg/1041,5mg oldatban. A kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 8,54 mg – 4,27 mg – 2,135mg – 1,067mg – 533 mikrogramm sorozat az 1ml kultúrához. Kontroll: 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml 0,9% NaCl sorozat az 1 ml kontrollkultúrához. Hozzáadva 2008. 02. 12. 13:00. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE OEC ÁOK. Leolvasva 2008. 02. 13:00. 4,27 mg Castanea sativa Mill. extractum 1ml kultúrához. Sejtpusztulás. PTE OEC ÁOK Immunológiai Intézete laboratóriumában szerzők mikroszkópos kamerájával készült felvétel. 6. ábra: Sejtvonal: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt. Nem malignus sejtkultúra. Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonat . Élő sejtkultúra két sorba osztva, egyenként 1 ml. Eljárás: 5 g növényi szárazanyag nagyon finomra porítva, 50 ml 0,9% NaClban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve minden 1,0 ml kultúrához 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban szárazanyag 42,7 + 0,02 mg/1041,5mg oldatban. A kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 8,54 mg – 4,27 mg – 2,135mg – 1,067mg – 533 mikrogramm sorozat az 1ml kultúrához. Kontroll: 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml 0,9% NaCl sorozat az 1 ml kontrollkultúrához. Hozzáadva 2008. 02. 12. 13:00. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE OEC ÁOK. Leolvasva 2008. 02. 13:00.
2,135mg Castanea sativa Mill. extractum 1ml kultúrához. Túlélő sejtek, de gátoltak. PTE OEC ÁOK Immunológiai Intézete laboratóriumában szerzők mikroszkópos kamerájával készült felvétel. 7. ábra: Sejtvonal: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt. Nem malignus sejtkultúra. Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonat . Élő sejtkultúra két sorba osztva, egyenként 1 ml. Eljárás: 5 g növényi szárazanyag nagyon finomra porítva, 50 ml 0,9% NaClban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve minden 1,0 ml kultúrához 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban szárazanyag 42,7 + 0,02 mg/1041,5mg oldatban. A kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 8,54 mg – 4,27 mg – 2,135mg – 1,067mg – 533 mikrogramm sorozat az 1ml kultúrához. Kontroll: 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml 0,9% NaCl sorozat az 1 ml kontrollkultúrához. Hozzáadva 2008. 02. 12. 13:00. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE OEC ÁOK. Leolvasva 2008. 02. 13:00. 1,067mg Castanea sativa Mill. extractum 1ml kultúrához. Túlélő sejtek. PTE OEC ÁOK Immunológiai Intézete laboratóriumában szerzők mikroszkópos kamerájával készült felvétel. 8. ábra: Sejtvonal: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt. Nem malignus sejtkultúra. Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonat . Élő sejtkultúra két sorba osztva, egyenként 1 ml. Eljárás: 5 g növényi szárazanyag nagyon finomra porítva, 50 ml 0,9% NaClban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve minden 1,0 ml kultúrához 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban szárazanyag 42,7 + 0,02 mg/1041,5mg oldatban. A kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 8,54 mg – 4,27 mg – 2,135mg – 1,067mg – 533 mikrogramm sorozat az 1ml kultúrához. Kontroll: 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml 0,9% NaCl sorozat az 1 ml kontrollkultúrához. Hozzáadva 2008. 02. 12. 13:00. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE OEC ÁOK. Leolvasva 2008. 02. 13:00. 533 mikrogramm Castanea sativa Mill. extractum 1ml kultúrához. Túlélő nem malignus sejtek, szemben a malignus SP 2 kultúrát megölő 136 mikroramm/ml anyaggal, négyszeres különbség. PTE OEC ÁOK Immunológiai Intézete laboratóriumában szerzők mikroszkópos kamerájával készült felvétel. 9. ábra: PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete mikroszkópos berendezése.
10. ábra: Sejtvonal: HT 1080 Human fibrosarcoma, malignus sejtkultúra. HT 1080 kultúra, kontroll, élő kultúra. PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete laboratóriumában az intézet mikroszkópos kamerájával készült felvétel. 11. ábra: Sejtvonal: HT 1080 Human fibrosarcoma, malignus sejtkultúra. HT 1080 kultúra + 800 mcg Castanea sativa Mill. extractum, massiv sejtelhalás. PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete laboratóriumában az intézet mikroszkópos kamerájával készült felvétel. 12.ábra: Sejtvonal: HT 1080 Human fibrosarcoma, malignus sejtkultúra. HT 1080 kultúra + 800 mcg Castanea sativa Mill. extractum – nagyított részlet, sejtelhalás, degeneratio. PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete laboratóriumában az intézet mikroszkópos kamerájával készült felvétel. 13. ábra: Sejtvonal: ND-C (Mouse neuroblastoma x Rat neurone hybrid) malignus sejtkultúra. ND-C kultúra + 50 mcg Castanea sativa Mill. extractum, részben túlélő sejtek. PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete laboratóriumában az intézet mikroszkópos kamerájával készült felvétel. 14. ábra: Sejtvonal: ND-C (Mouse neuroblastoma x Rat neurone hybrid) malignus sejtkultúra. ND-C kultúra + 400 mcg Castanea sativa Mill. extractum, sejtelhalás. PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete laboratóriumában az intézet mikroszkópos kamerájával készült felvétel. 15. ábra: Sejtvonal: ND-C (Mouse neuroblastoma x Rat neurone hybrid) malignus sejtkultúra. ND-C kultúra + 400 mcg Castanea sativa Mill. extractum – nagyított részlet, sejtelhalás, sejtdegeneratio. PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete laboratóriumában az intézet mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
A Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonatok és az ezekből vagy ezekben található hatóanyagokból készült infúziós oldatok, injekciók, tabletták, szirupok, oldatok és egyéb gyógyszerformák felhasználása rosszindulatú daganatos betegségek kezelésére azzal az előnnyel járhat, hogy az eddig használtaknál kevésbé toxikus és erősebb antitumoralis hatású gyógyszerek jelenhetnek meg a tumortherapiában, ami a rosszindulatú daganatos betegségben szenvedők nagyobb hányadának a gyógyulásával járhatna, a rosszindulatú daganatos betegségek kezelése ilyen szerekkel kevésbé viselné meg a betegeket és ezáltal csökkenteni lehetne a rosszindulatú daganatos betegségek halálozási rátáját. IGÉNYPONTOK A Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonatok és az ezekből vagy ezekben található hatóanyagokból készült infúziós oldatok, injekciók, tabletták, szirupok, oldatok és egyéb gyógyszerformák alkalmazása rosszindulatú daganatsejt kultúrák in vitro gátlására és rosszindulatú daganatos betegségek kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmények előállítására.
The use of the extracts and the drug forms (infusions, solutions, injections, tablets and other drug forms) obtained from Castanea sativa (and subsp.) or obtained from the comonents of the extracts extracts of the Castanea sativa (and subsp.) in the in vitro inhibition of the malignant cell line cultures and in the preparation of the drugs used for the threatment of malignat tumors. A Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonatok rosszindulatú daganatsejt kultúrákon in vitro gátló hatást fejtenek ki. A rosszindulatú elfajulások létrejöttében oki szerepe lehet a sejtek meghibásodott működésű mitokondriumainak és a bejelentés tárgyát képező anyagok ezen meghibásodott működésű mitokondriumok gátlása révén fejthetik ki daganatellenes hatásukat, amit a bejelentéshez mellékletként csatolt, „A rák mitokondriális elmélete” című dokumentáció elméleti részében részleteznek. Bejelentők említett tanulmányunkban így felvázolják egy nyolcadik, az antimitochondrialis tumortherapiás target bevezetésének lehetőségét a tumortherapiába, mely szerint az antitumoralis chemotherapia az antimitochondrialis szerek tekintetében a következő 3 elvet követné: ezen szerek 1. nem tumorspecifikusak, 2. nem gazdasejtspecifikusak, 3. mitochondrialis primitív expresszió inhibíció specifikusak, és ez kiegészülhetne egy negyedik elvvel is: 4. kevéssé toxikusak az egészséges gazdasejtre nézve.
1. ábra:
Sejtvonal: SP2, malignus sejtkultúra. Eljárás: 10 g Castanea sativa Mill. növényi szárazanyag 100 ml aq. dest.-ban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve, 15 ml kultúrához 0,250 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban 8,2 + 0,02 mg/ml, a kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 2,05 mg a 15 ml-hez, vagyis 136 mikrogramm/ml a kultúrában. Kontroll: 0,250 ml aq. dest. a 15 ml kontrollkultúrához. Hozzáadva 2008. 02. 07. 13:00. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE OEC ÁOK. Leolvasva 2008. 02. 08. 13:00. A kultúra jól szaporodott, él. PTE OEC ÁOK Immunológiai Intézete laboratóriumában szerzők mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
2. ábra:
Sejtvonal: SP2, malignus sejtkultúra. Eljárás: 10 g Castanea sativa Mill. növényi szárazanyag 100 ml aq. dest.-ban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve, 15 ml kultúrához 0,250 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban 8,2 + 0,02 mg/ml, a kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 2,05 mg a 15 ml-hez, vagyis 136 mikrogramm/ml a kultúrában. Castanea sativa Mill. extractumból 2,05 mg a 15 ml sejtkultúrához adva, vagyis 136 mikrogramm/ml a kultúrában. Leolvasva 2008. 02. 08. 13:00. A kultúra nagyrésze elpusztult, a sejtek degenerálódtak. PTE OEC ÁOK Immunológiai Intézete laboratóriumában szerzők mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
3. ábra:
Sejtvonal: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt. Nem malignus sejtkultúra. Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonat . Élő sejtkultúra két sorba osztva, egyenként 1 ml. Eljárás: 5 g növényi szárazanyag nagyon finomra porítva, 50 ml 0,9% NaClban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve minden 1,0 ml kultúrához 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban szárazanyag 42,7 + 0,02 mg/1041,5mg oldatban. A kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 8,54 mg – 4,27 mg – 2,135mg – 1,067mg – 533 mikrogramm sorozat az 1ml kultúrához. Kontroll: 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml 0,9% NaCl sorozat az 1 ml kontrollkultúrához. Hozzáadva 2008. 02. 12. 13:00. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE OEC ÁOK. Leolvasva 2008. 02. 13:00. L929 kontroll kultúra, PTE OEC ÁOK Immunológiai Intézete laboratóriumában szerzők mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
4. ábra, sejttenyészet:
Sejtvonal: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt. Nem malignus sejtkultúra. Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonat . Élő sejtkultúra két sorba osztva, egyenként 1 ml. Eljárás: 5 g növényi szárazanyag nagyon finomra porítva, 50 ml 0,9% NaClban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve minden 1,0 ml kultúrához 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban szárazanyag 42,7 + 0,02 mg/1041,5mg oldatban. A kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 8,54 mg – 4,27 mg – 2,135mg – 1,067mg – 533 mikrogramm sorozat az 1ml kultúrához. Kontroll: 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml 0,9% NaCl sorozat az 1 ml kontrollkultúrához. Hozzáadva 2008. 02. 12. 13:00. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE OEC ÁOK. Leolvasva 2008. 02. 13:00. Sejttenyészet, L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt
5. ábra:
Sejtvonal: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt. Nem malignus sejtkultúra. Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonat . Élő sejtkultúra két sorba osztva, egyenként 1 ml. Eljárás: 5 g növényi szárazanyag nagyon finomra porítva, 50 ml 0,9% NaClban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve minden 1,0 ml kultúrához 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban szárazanyag 42,7 + 0,02 mg/1041,5mg oldatban. A kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 8,54 mg – 4,27 mg – 2,135mg – 1,067mg – 533 mikrogramm sorozat az 1ml kultúrához. Kontroll: 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml 0,9% NaCl sorozat az 1 ml kontrollkultúrához. Hozzáadva 2008. 02. 12. 13:00. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE OEC ÁOK. Leolvasva 2008. 02. 13:00. 4,27 mg Castanea sativa Mill. extractum 1ml kultúrához. Sejtpusztulás. PTE OEC ÁOK Immunológiai Intézete laboratóriumában szerzők mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
6. ábra:
Sejtvonal: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt. Nem malignus sejtkultúra. Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonat . Élő sejtkultúra két sorba osztva, egyenként 1 ml. Eljárás: 5 g növényi szárazanyag nagyon finomra porítva, 50 ml 0,9% NaClban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve minden 1,0 ml kultúrához 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban szárazanyag 42,7 + 0,02 mg/1041,5mg oldatban. A kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 8,54 mg – 4,27 mg – 2,135mg – 1,067mg – 533 mikrogramm sorozat az 1ml kultúrához. Kontroll: 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml 0,9% NaCl sorozat az 1 ml kontrollkultúrához. Hozzáadva 2008. 02. 12. 13:00. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE OEC ÁOK. Leolvasva 2008. 02. 13:00. 2,135mg Castanea sativa Mill. extractum 1ml kultúrához. Túlélő sejtek, de gátoltak. PTE OEC ÁOK Immunológiai Intézete laboratóriumában szerzők mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
7. ábra:
Sejtvonal: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt. Nem malignus sejtkultúra. Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonat . Élő sejtkultúra két sorba osztva, egyenként 1 ml. Eljárás: 5 g növényi szárazanyag nagyon finomra porítva, 50 ml 0,9% NaClban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve minden 1,0 ml kultúrához 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban szárazanyag 42,7 + 0,02 mg/1041,5mg oldatban. A kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 8,54 mg – 4,27 mg – 2,135mg – 1,067mg – 533 mikrogramm sorozat az 1ml kultúrához. Kontroll: 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml 0,9% NaCl sorozat az 1 ml kontrollkultúrához. Hozzáadva 2008. 02. 12. 13:00. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE OEC ÁOK. Leolvasva 2008. 02. 13:00. 1,067mg Castanea sativa Mill. extractum 1ml kultúrához. Túlélő sejtek. PTE OEC ÁOK Immunológiai Intézete laboratóriumában szerzők mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
8. ábra:
Sejtvonal: L929, nem malignus sejtkultúra, egér fibroblaszt. Nem malignus sejtkultúra. Castanea sativa Mill. (szelídgesztenye) kivonat . Élő sejtkultúra két sorba osztva, egyenként 1 ml. Eljárás: 5 g növényi szárazanyag nagyon finomra porítva, 50 ml 0,9% NaClban 5 perc alatt felforralva, 60 sec-ig főzve, 5 perc hűtés után dekantálva, centrifugálva, 0,2-es szűrőn sterilre szűrve minden 1,0 ml kultúrához 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml szűrlet hozzáadva. Szárazanyagtartalom: a hozzáadott anyagban szárazanyag 42,7 + 0,02 mg/1041,5mg oldatban. A kultúrához hozzáadott szárazanyagtartalom 8,54 mg – 4,27 mg – 2,135mg – 1,067mg – 533 mikrogramm sorozat az 1ml kultúrához. Kontroll: 0,200 – 0,100 – 0,050 – 0,025 – 0,0125 ml 0,9% NaCl sorozat az 1 ml kontrollkultúrához. Hozzáadva 2008. 02. 12. 13:00. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE OEC ÁOK. Leolvasva 2008. 02. 13:00. 533 mikrogramm Castanea sativa Mill. extractum 1ml kultúrához. Túlélő nem malignus sejtek, szemben a malignus SP 2 kultúrát megölő 136 mikroramm/ml anyaggal, négyszeres különbség. PTE OEC ÁOK Immunológiai Intézete laboratóriumában szerzők mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
9. ábra:
PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete mikroszkópos berendezése.
10. ábra:
Sejtvonal: HT 1080 Human fibrosarcoma, malignus sejtkultúra. HT 1080 kultúra, kontroll, élő kultúra. PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete laboratóriumában az intézet mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
11. ábra:
Sejtvonal: HT 1080 Human fibrosarcoma, malignus sejtkultúra. HT 1080 kultúra + 800 mcg Castanea sativa Mill. extractum, massiv sejtelhalás. PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete laboratóriumában az intézet mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
12.ábra:
Sejtvonal: HT 1080 Human fibrosarcoma, malignus sejtkultúra. HT 1080 kultúra + 800 mcg Castanea sativa Mill. extractum – nagyított részlet, sejtelhalás, degeneratio. PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete laboratóriumában az intézet mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
13. ábra:
Sejtvonal: ND-C (Mouse neuroblastoma x Rat neurone hybrid) malignus sejtkultúra. ND-C kultúra + 50 mcg Castanea sativa Mill. extractum, részben túlélő sejtek. PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete laboratóriumában az intézet mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
14. ábra:
Sejtvonal: ND-C (Mouse neuroblastoma x Rat neurone hybrid) malignus sejtkultúra. ND-C kultúra + 400 mcg Castanea sativa Mill. extractum, sejtelhalás. PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete laboratóriumában az intézet mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
15. ábra:
Sejtvonal: ND-C (Mouse neuroblastoma x Rat neurone hybrid) malignus sejtkultúra. ND-C kultúra + 400 mcg Castanea sativa Mill. extractum – nagyított részlet, sejtelhalás, sejtdegeneratio. PTE OEC ÁOK Pharmacologiai Intézete laboratóriumában az intézet mikroszkópos kamerájával készült felvétel.
