SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI DALAM FRAKSI ETANOL DAUN SIRIH HIJAU (Piper betle L.) DARI DAERAH DENGAN ZONA IKLIM PANAS (0-700 MDPL) DI BALI TERHADAP Candida albicans ATCC 10231 DENGAN MENGGUNAKAN METODE KLT-BIOAUTOGRAFI
Skripsi
I GUSTI AYU NYOMAN SUASTINI 1208505061
JURUSAN FARMASI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS UDAYANA 2016
i
ii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena atas berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Skrining Golongan Senyawa Bioaktif Antifungi Dalam Fraksi Etanol Daun Sirih Hijau (Piper Betle L.) Dari Daerah Dengan Zona Iklim Panas (0-700 mdpl) Di Bali Terhadap Candida albicans ATCC 10231 Dengan Menggunakan Metode KLT-Bioautografi” tepat pada waktunya. Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada: 1.
N. L. P. Vidya Paramita, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen pembimbing I yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat, bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.
2.
A. A. Gede Rai Yadnya Putra, S.Farm., M.Si., Apt., selaku dosen pembimbing II yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat, bimbingan dan saran dalam penyusunan skripsi ini.
3.
Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M.Si., selaku Dekan Fakultas MIPA Universitas Udayana.
4.
Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua Jurusan Farmasi Fakultas MIPA Universitas Udayana.
iii
5.
Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis selama penyusunan skripsi ini. Ibu Nova Armita, Mbok Dwik, Kak Anggi dan Kak Pasek yang telah memberikan bantuan dan dukungan kepada penulis selama penelitian di Laboratorium.
6.
Orang tua yang sangat penulis cintai dan hormati, I Gusti Putu Tagel dan Jro Nyoman Asmini yang telah memberi dukungan dalam penyusunan skripsi ini.
7.
Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi Udayana angkatan 2012 “Dioscuri Hygeia” dan Bahan Alam 2012 yang penulis cintai, khususnya Tim seperjuangan Piper betle Acne dan Albicans yaitu Budi, Cahyani, Sulys, Dewi, Putri, Pebri, Dein, Inggrid dan Lina. Terimakasih atas kebersamaannya selama di Laboratorium.
8.
Seluruh rekan mahasiswa KKN XII Desa Gulingan yang senantiasa memberikan semangat dan dukungan kepada penulis.
9.
Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu. Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna.
Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat membangun sehingga di kedepannya dapat menjadi lebih baik. Penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang membutuhkan. Bukit Jimbaran, Mei 2016
Penulis
iv
DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL ........................................................................................... i LEMBAR PENGESAHAN ................................................................................ ii KATA PENGANTAR ........................................................................................ iii DAFTAR ISI ........................................................................................................ v DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH ......................................................... ix DAFTAR TABEL ............................................................................................... xi DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xii DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xiii ABSTRAK ......................................................................................................... xv BAB I. PENDAHULUAN .................................................................................... 1 1.1 Latar Belakang ......................................................................................... 1 1.2 Rumusan Masalah .................................................................................... 5 1.3 Tujuan Penelitian ..................................................................................... 5 1.4 Manfaat Penelitian ................................................................................... 5 BAB II TINJAUAN PUSTAKA........................................................................... 6 2.1 Tanaman Sirih (Piper betle L.) ................................................................ 6 2.1.1 Klasifikasi Tanaman ...................................................................... 6 2.1.2 Deskripsi Tanaman ........................................................................ 7
v
2.1.3 Kandungan Kimia dan Bioaktivitas Antifungi Tanaman Sirih Hijau ............................................................................................. 7 2.2 Candida albicans ..................................................................................... 8 2.2.1 Taksonomi C. albicans .................................................................. 8 2.2.2 Morfologi dan Karakteristik Umum C. albicans ........................... 9 2.2.3 Patogenitas Candida albicans ...................................................... 10 2.3 Kandidiasis ............................................................................................. 11 2.4 Iklim ....................................................................................................... 11 2.5 Ekstraksi ................................................................................................. 12 2.6 KLT Bioautografi ................................................................................... 13 2.6.1 KLT Bioautografi Kontak ............................................................ 14 2.6 Metode Deteksi Bercak KLT ................................................................. 14 BAB III METODE PENELITIAN...................................................................... 17 3.1 Rancangan Penelitian ............................................................................. 17 3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian ................................................................. 17 3.3 Obyek Penelitian .................................................................................... 18 3.4 Bahan Penelitian .................................................................................... 18 3.4.1 Bahan Ekstraksi ........................................................................... 18 3.4.2 Bahan KLT Bioautografi Kontak................................................. 18 3.5 Alat Penelitian ........................................................................................ 19
vi
3.6 Batasan Operasional ............................................................................... 19 3.7 Prosedur Penelitian ................................................................................ 20 3.7.1 Determinasi Tanaman .................................................................. 20 3.7.2 Preparasi Sampel .......................................................................... 20 3.7.3 Penetapan Susut Pengeringan Serbuk Simplisia .......................... 20 3.7.4 Pembuatan Fraksi Etanol ............................................................. 21 3.7.5 Penetapan Susut Pengeringan Fraksi Etanol ............................... 21 3.7.6 Skrining Golongan Senyawa Bioaktif Antifungi Fraksi Etanol dengan Metode KLT Bioautografi ............................................. 22 A. Penyegaran Jamur C.. albicans............................................... 22 B. Pembuatan Suspensi Jamur C. albicans ................................. 22 C. Optimasi Fase Gerak untuk Pemisahan Fraksi etanol Daun Sirih Hijau dengan Metode KLT (Kromatografi Lapis Tipis) ....... 22 D. Optimasi Konsentrasi Penotolan Fraksi Etanol Daun Sirih Hijau ....................................................................................... 23 E. Analisis Kualitatif Kandungan Kimia Fraksi Etanol Daun Sirih Hijau dan Uji Antifungi secara KLT Bioautografi Kontak .... 23 3.8 Analisis Data .......................................................................................... 25 3.9 Skema Kerja Penelitian .......................................................................... 26
vii
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 27 4.1 Determinasi Tanaman ............................................................................ 27 4.2 Preparasi Sampel .................................................................................... 28 4.3 Penetapan Susut Pengeringan Serbuk dan Fraksi Etanol P. betle.......... 29 4.4 Pembuatan Fraksi Etanol Daun Sirih Hijau (P. betle) ........................... 31 4.5 Skrining Golongan Senyawa Bioaktif Antifungi Fraksi Etanol Daun Sirih Hijau ............................................................................................. 34 4.5.1 Optimasi Fase Gerak dan Konsentrasi Penotolan Fraksi Etanol . 34 4.5.2 Uji KLT Bioautografi Kontak dan Analisis Kualitatif Kandungan Kimia Fraksi Etanol Daun Sirih Hijau ........................................ 37 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 46 5.1 Kesimpulan ............................................................................................ 46 5.2 Saran ...................................................................................................... 46 DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 47 LAMPIRAN ........................................................................................................ 55
viii
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH
Aerob
:
Suatu proses biologi yang memerlukan oksigen (oksigen terlarut).
Autoklaf
:
Pemanas tertutup yang digunakan untuk mensterilisasi suatu benda menggunakan uap bersuhu dan bertekanan tinggi (121oC, 15 psi) selama kurang lebih 15 menit.
C. albicans
:
Candida albicans
Dimorfik
:
Jamur yang memiliki dua bentuk, yaitu bentuk kapang dan bentuk khamir.
Ekstrak
:
Sediaan kering, kental, atau cair dibuat dengan menyari simplisia nabati atau hewani menurut cara yang cocok, diluar pengaruh cahaya matahari langsung.
Eluen
:
Pelarut yang dipakai dalam proses migrasi/pergerakan dalam membawa komponen-komponen zat sampel atau fasa yang bergerak melalui fasa diam dan membawa komponen-komponen senyawa yang akan dipisahkan.
Filtrat
:
Hasil penyaringan.
Gastric ulcer
:
Luka terbuka pada lapisan lambung.
Host
:
Makhluk hidup sebagai tempat hidup parasit.
Inkubasi
:
Proses pemeliharaan kultur mikroba dalam suhu tertentu selama jangka waktu tertentu untuk memantau pertumbuhan mikroba.
KLT
:
Kromatografi Lapis Tipis
ix
Komensal
:
Makhluk hidup kecil bersel satu yang hidup bersama organisme lain, tetapi tidak bersifat merugikan dan mungkin juga bisa menguntungkan.
Multiplikasi
:
Tindakan atau proses memperbanyak.
P. betle
:
Piper betle
Saprofit
:
Organisme yang hidup mendapatkan bahan organik dari organisme yang telah mati atau membusuk.
SDA
:
Media Saboraud Dextrose Agar
Simplisia
:
Bahan alam yang digunakan sebagai obat yang belum mengalami pengolahan apapun juga, kecuali dinyatakan lain, berupa bahan yang dikeringkan.
Sterilisasi
:
Proses
penghilangan
semua
jenis
organisme
hidup,dalam hal ini adalah mikroorganisme (protozoa, fungi, bakteri, mycoplasma, virus) yang terdapat dalam suatu benda. Streak for single colony :
Metode untuk memisahkan mikroorganisme menjadi koloni tunggal dengan cara menggoreskan isolat pada media agar.
Vulvovaginitis
:
Peradangan atau infeksi pada vulva (organ kelamin bagian luar wanita) dan vagina.
x
DAFTAR TABEL Halaman Tabel 2.1. Pereaksi Semprot untuk Masing-Masing Golongan Senyawa ........... 16 Tabel 4.1. Optimasi Sistem Fase Gerak ............................................................. 34 Tabel 4.2. Hasil Uji Skrining Golongan Senyawa Bioaktif Antifungi Fraksi Etanol ................................................................................................ 44
xi
DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 2.1. Tanaman Sirih Hijau (P. betle) ........................................................ 6 Gambar 3.1. Skema Kerja Penelitian ................................................................. 26 Gambar 4.4. Senyawa Golongan Monosiklik Monoterpenoid dengan Gugus Fenol dalam Daun Sirih Hijau ....................................................... 41 Gambar 4.5. Struktur Inti Katekol ..................................................................... 42
xii
DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Perhitungan Pembuatan Fase Gerak (Eluen) ................................. 55 Lampiran 2. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah H ........................ 57 Lampiran 3. Hasil Klasifikasi Tanaman Daun Sirih Hijau Daerah H ................ 58 Lampiran 4. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah A ........................ 59 Lampiran 5. Hasil Klasifikasi Tanaman Daun Sirih Hijau Daerah A ................. 60 Lampiran 6. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah C ........................ 61 Lampiran 7. Hasil Klasifikasi Tanaman Daun Sirih Hijau Daerah C ................. 62 Lampiran 8. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah B ........................ 63 Lampiran 9. Hasil Klasifikasi Tanaman Daun Sirih Hijau Daerah B ................. 64 Lampiran 10. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah G ...................... 65 Lampiran 11. Hasil Klasifikasi Tanaman Daun Sirih Hijau Daerah G ............... 66 Lampiran 12. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah E ....................... 67 Lampiran 13. Hasil Klasifikasi Tanaman Daun Sirih Hijau Daerah E ............... 68 Lampiran 14. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah F ....................... 69 Lampiran 15. Hasil Klasifikasi Tanaman Daun Sirih Hijau Daerah F ............... 70 Lampiran 16. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah D ...................... 71 Lampiran 17. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah D ...................... 72
xiii
ABSTRAK Daun sirih hijau dimanfaatkan untuk mengobati keputihan (kandidiasis vaginitis). Infeksi kandidiasis vaginitis oleh C. albicans terjadi pada sekitar 90% wanita di Indonesia. Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa fraksi etanol P. betle memberikan daya hambat sebesar 7,2 mm terhadap C. albicans dan diketahui mengandung metabolit sekunder seperti flavonoid, fenol dan terpenoid yang bersifat sebagai antifungi. Kondisi iklim mempengaruhi produksi metabolit sekunder, semakin panas kondisi iklim akan meningkatkan produksi senyawa flavonoid, fenol dan terpenoid. Penelitian ini bersifat eksploratif laboratoris yang bertujuan untuk mengetahui profil golongan senyawa bioaktif antifungi C. albicans dari fraksi etanol P. betle yang tumbuh di beberapa daerah dengan zona iklim panas (0-700 mdpl) di Bali. Metode yang digunakan yaitu KLT bioautografi kontak dengan fase diam silika gel GF254, fase gerak n-heksana:etil asetat (7,2:2,9v/v) hasil optimasi dan konsentrasi fraksi etanol 37,5 mg/mL (20µL) hasil optimasi. Analisis data secara deskriptif dengan membandingkan nilai hRf hasil KLT bioautografi dengan nilai hRf hasil identifikasi pereaksi. Hasil dalam penelitian ini menunjukkan bahwa enam dari delapan daerah fraksi etanol memberikan zona jernih pada hRf 45 dan satu daerah dengan hRf 42 yang teridentifikasi sebagai golongan senyawa fenol. Fraksi etanol daerah G tidak menunjukkan adanya zona jernih, namun terdapat bercak pada kromatogram yang teridentifikasi sebagai golongan senyawa fenol dengan nilai hRf yang sama dengan daerah lainnya. Kesimpulan dari penelitian ini yaitu profil golongan senyawa bioaktif antifungi fraksi etanol adalah golongan senyawa fenol dengan nilai hRf 45 kecuali daerah A hRf 42. Perbedaan tempat tumbuh P. betle diduga mempengaruhi jumlah kandungan senyawa aktif antifungi dalam tanaman. Kata Kunci: Sirih Hijau, Fraksi Etanol, Bioautografi Kontak, C. albicans, Iklim Panas
xiv
ABSTRACT Piper betle leaf has been used as a healing of candidiasis vaginitis. Infection of candidiasis vaginitis by C. albicans occurs in approximately 90% of women in Indonesia. A previous study reported that ethanolic fraction of P. betle leaf gives the inhibition zone of 7,2 mm against C. albicans and it is known contain secondary metabolites such as flavonoids, phenols and terpenoids as antifungal properties. The climatic conditions affect the production of secondary metabolites. Higher temperatures is known increasing the production of flavonoids, phenols and terpenoids. This study is explorative laboratory research which aims to determine the class of antifungal bioactive compounds profile againts C. albicans from ethanolic fraction P. betle leaf that grows in some areas with a high temperature climate zones (0-700 masl) in Bali. TLC contact bioautography is used as research method and silica gel GF254 was used as stationary phase. The optimization condition found that the composition of mobile phase choosen was n-hexane:ethyl acetate (7,2:2,9 v/v). The concentration of ethanolic fraction with the mobile phase resulted 37,5 mg/mL (20 µL). The data were analyzed descriptively by comparing the hRf value of bioautography to the hRf value of identification by reagents. The results of this study indicate that the six out of eight regions ethanolic fraction gives a clear zone on hRf 45 and one region with hRf 42 were identified as the phenolic compound. Ethanolic fraction of G region didn’t show any clear zone, but there are spots on the chromatogram were identified as a class of phenolic compounds with hRf value same to other regions. This study found that the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf value 45, except for A region hRf value is 42. The difference grown area of P. betle is expected to affect the amount of active antifungal compound in plants. Key word: P. betle, Ethanolic Fraction, Contact Bioautography, C. albicans, high temperature climate
xv
